CN117964628A - 作为cdk9抑制剂的大环类化合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本公开提供了式(I)化合物、其药物组合物及其在治疗和/或预防与CDK9激酶活性相关的疾病或病症中的应用。

Description

作为CDK9抑制剂的大环类化合物及其应用
技术领域
本申请涉及可用于抑制CDK9激酶活性的化合物,以及这些化合物在治疗和/或预防与CDK9激酶活性失调相关的疾病或病症中的应用。
背景技术
蛋白激酶(Protein kinase)是广泛存在于细胞内和细胞表面的酶蛋白，至目前为止被发现和鉴定的蛋白激酶有将近600种，它们属于一个结构相关的蛋白家族，其已知成员与几乎所有细胞信号传导活动均有关。蛋白激酶的催化功能是将ATP分子中的γ-磷酸基团转移至靶蛋白特定的苏氨酸、丝氨酸或酪氨酸基团，使靶蛋白构象发生变化，导致靶蛋白功能由静止转变到活化状态。按照蛋白激酶的靶点氨基酸的特异性，蛋白激酶被分为两大类：丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶和酪氨酸蛋白激酶。
蛋白激酶参与的信号传导和调节在细胞和器官的正常功能中起着极为重要的作用，包括细胞生长、分化、增殖、血管生成、细胞凋亡、细胞骨架排列、代谢反应的调节、膜转运和细胞运动等。除此之外，蛋白激酶的非催化功能也起着不可缺少的作用，包括别构效应、亚细胞靶向、蛋白质复合物支架、蛋白质竞争相互作用和DNA结合。但在另一方面，如发生基因突变或蛋白激酶过度表达时，失调的蛋白激酶会导致多种病理改变，包括癌症、炎症、自身免疫性疾病、心血管***和神经***疾病。因此，蛋白激酶已经成为当今药物开发中最重要靶点之一，而近年来蛋白激酶抑制剂在临床治疗上取得的成功进一步证明了这一策略的可行性，并揭示了以蛋白激酶作为治疗靶点的良好前景。
细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)归属于丝氨酸/苏氨酸激酶，是一族调节细胞周期和基因转录的蛋白激酶。在不同的细胞周期阶段，CDK磷酸化特定的细胞周期蛋白以调控细胞活动。CDK失调对正常的细胞状态产生显著影响，并且经常被确定为致癌因素。CDK9是最重要的CDK之一，它可与四种细胞周期蛋白合作，包括细胞周期蛋白T1、细胞周期蛋白K、细胞周期蛋白T2a或T2b。CDK9与细胞周期蛋白结合，形成正转录延伸因子b(P-TEFb)的异源二聚体。P-TEFb磷酸化RNA聚合酶II的C端结构域(CTD)，使转录从起始位点延伸，是转录延伸的核心分子。CDK9激酶活性失调会导致多种疾病发生，包括高度增殖性疾病(例如癌症)、病毒性传染病或心血管疾病。CDK9抑制剂可抑制转录过程。由于多种癌症中转录过程发生失调，因此CDK9抑制剂则可用于癌症治疗，包括实体肿瘤和血液***恶性肿瘤，比如急性髓系白血病(AML)、乳腺癌、***癌、肝细胞癌、胰腺癌等实体瘤。
鉴于CDK9在疾病中的关键作用，下调CDK9为开发针对癌症和其他疾病的靶向治疗提供了极好的机会。虽然目前已经报道了许多小分子CDK抑制剂，但它们中的大多数缺乏对特定CDK的选择性，因而在临床上表现出低疗效和高不良事件率。因此，开发具有CDK9特异性靶向抑制剂，对于人类疾病治疗至关重要。
发明内容
本发明人经过长期研究，意外发现一类具有显著的CDK9活性抑制作用的化合物，其显示出高效的、高选择性的CDK9激酶抑制作用，可用于治疗或预防与CDK9活性相关的疾病。
特别地，本发明提供了可作为CDK9激酶活性抑制剂的式(I)化合物：
或其内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其可药用盐，其中，
X选自H、C1-C3烷基、卤素、CF3、氨基甲酰基、氰基和C1-C3烷氧基羰基；
L选自单键(即直接共价键连接)、C6-C10芳基、5-12元杂芳基、C3-C8环烷基和3-8元杂环基，其中所述C6-C10芳基、5-12元杂芳基、C3-C8环烷基和3-8元杂环基任选进一步被一个或多个R1取代；
环A选自C6-C10芳基、5-12元杂芳基、C3-C8环烷基和3-8元杂环基，其中所述C6-C10芳基、5-12元杂芳基、C3-C8环烷基和3-8元杂环基任选进一步被一个或多个R2取代；
Y选自单键和-CH2NR3-，其中R3选自H、C1-C3烷基、C1-C3烷基酰基和Boc；
其中L和Y中至少有一个选自单键；
Q选自C4-C5亚烷基和C4-C5亚烯基，其中上述基团中的1个-CH2-单元任选地被O原子、S原子或-NR3-所替代；优选的，Q选自:
R1和R2各自独立地选自氢、卤素、氨基、C1-C3烷基氨基、氰基、氧代基、羟基、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、3-8元杂环基和C1-C3烷基取代的3-8元杂环基。
在一个优选的实施方案中，根据本发明所述的式(I)化合物或其内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其可药用盐，其为式(II)化合物或其内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其可药用盐：
其中，
X、Q、R2和R3具有前面所述的定义。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的式(I)化合物或其内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其可药用盐，其为式(III)化合物或其内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其可药用盐：
其中，
X、Q、A和R1具有前面所述的定义。
在另一个优选的实施方案中，对本发明所述的式(III)而言，其中环A选自苯环和吡唑环。
本发明的典型化合物，包括但不限于以下化合物：
或其内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其可药用盐。
本发明进一步提供一种根据本发明所述的式(I)、(II)和(III)化合物或其内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其可药用盐的制备方法，其包括以下步骤：
通用性合成路线1
其中X、R3、A如前所定义,n、m为1或2。
化合物A与化合物B1发生亲核取代反应得到化合物C1；化合物C1与化合物D1在钯催化下发生Buchwald-Hartwig偶联反应得到化合物E1；化合物E1在Grubbs催化剂存在下发生分子内RCM烯烃复分解反应并合环得到目标化合物F1；化合物F1中双键经氢化还原生成目标化合物G1。
通用性合成路线2
其中X、Q、R2、R3如前所定义。
化合物A与化合物B2发生亲核取代反应得到化合物C2；化合物C2在还原剂下将硝基还原成氨基得到化合物D2；化合物D2在钯催化下发生分子内C-N偶联反应并合环得到目标化合物E2。
通用性合成路线3
其中X、R1、R3和A如前面所定义,n、m为1或2。
化合物A与化合物B3发生Suzuki偶联反应得到化合物C3：化合物C3与化合物D3在钯催化下发生Buchwald-Hartwig偶联反应得到化合物E3；化合物E3在Grubbs催化剂存在下发生分子内RCM烯烃复分解反应并合环得到目标化合物F3；化合物F3经氢化还原生成单键得到目标化合物G3。
通用性合成路线4
其中X、R1、Q和A如前面所定义。
化合物A与化合物B4发生Suzuki偶联反应得到化合物C4；化合物C4在还原剂下将硝基还原成氨基得到化合物D4；化合物D4发生分子内C-N偶联反应并合环得到目标化合物E4。
发明的术语说明
除非有相反陈述，否则在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
在本发明中，当提及具有特定结构式的“化合物”时，一般地还可涵盖其可药用盐、立体异构体、非对映异构体、对映异构体、外消旋混合物和同位素衍生物。
本领域技术人员公知，除了化合物的盐外，溶剂合物、水合物是化合物的替代性存在形式，它们都可以在一定条件下转化为所述化合物，因此，当在本发明中当提到一种化合物时，一般地还包括它的溶剂合物和水合物。
本发明所述的“可药用盐”是指本发明化合物的盐，在合理的医学判断范围内，其适用于接触人和哺乳动物的组织，而没有不适当的毒性、刺激性、过敏反应等，且具有应有的生物活性，称得上合理的受益/风险比。可以在本发明化合物的最终分离和纯化期间原位制备所述盐，或单独通过将游离碱或游离酸与合适的试剂反应制备所述盐。例如，游离碱可以与合适的酸反应。可药用的酸加成盐的示例是氨基(胺基)与无机酸(例如，盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸)或有机酸(例如，醋酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸)形成的盐，或通过使用现有技术中的其他方法如离子交换形成的盐。本发明的可药用盐可通过常规方法制备，例如通过将本发明的化合物溶解于与水可混溶的有机溶剂(例如甲醇、乙醇、丙酮和乙腈)，向其中添加过量的有机酸或无机酸水溶液，以使得盐从所得混合物中沉淀，从中除去溶剂和剩余的游离酸，然后分离所沉淀的盐。其他可药用盐包括海藻酸钠、抗坏血酸盐、苯磺酸盐、己二酸盐、樟脑磺酸盐、天门冬氨酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、柠檬酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡萄糖酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯丙酸盐、磷酸盐、苦味盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一酸盐、戊酸盐等。
在说明书和权利要求书中，给定化学式或名称应涵盖所有立体和光学异构体及其中存在上述异构体的外消旋物。除非另外指明，否则所有手性(对映异构体和非对映异构体)和外消旋形式均在本发明范围内。所述化合物中还可存在C＝C双键、C＝N双键、环***等的许多几何异构体，且所有上述稳定异构体均涵盖于本发明内。本发明描述了本发明化合物的顺式-和反式-(或E-和Z-)几何异构体，且其可分离成异构体的混合物或分开的异构体形式。
本发明化合物可以光学活性或外消旋形式加以分离。用于制备本发明化合物和其中制备的中间体的所有方法均视为本发明的部分。在制备对映异构体或非对映异构体产物时，其可通过常规方法(例如通过色谱或分级结晶)进行分离。应当理解的是，可存在的所有互变异构体形式均包括在本发明内。本发明中使用的化合物当作为现有技术已知化合物时可以通过商购获得。
术语“烷基”是指包括具有指定碳原子数的支链和直链饱和脂族烃基团。本发明中的烷基优选C1-C12烷基、C1-C10烷基、C1-C8烷基，更优选C1-C6烷基，特别优选C1-C4烷基，尤其是C1-C3烷基。例如，“C1-C6烷基”表示具有1个至6个碳原子的烷基。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基(例如正丙基和异丙基)、丁基(例如正丁基、异丁基、叔丁基)和戊基(例如正戊基、异戊基、新戊基)。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。对于本发明中的C1-C12烷基而言，其中的1、2、3或4个-CH2-单元可以任选地被O原子、S原子或-NH-所替代。
术语“烷氧基”是指-O-(烷基)或-O-(非取代的环烷基)。例如，“C1-C6烷氧基”是指包括C1、C2、C3、C4、C5、C6烷氧基。优选的烷氧基为C1-C10烷氧基、C1-C8烷氧基，更优选C1-C6烷氧基，特别优选C1-C4烷氧基，尤其是C1-C3烷氧基。烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基(例如正丙氧基和异丙氧基)、叔丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基和环己氧基。烷氧基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。类似地，“烷硫基”表示具有指定数量碳原子的经硫桥连接的如上文所定义的烷基；例如甲基-S-和乙基-S-。同样，优选的烷硫基为C1-C10烷硫基、C1-C8烷硫基，更优选C1-C6烷硫基，特别优选C1-C4烷硫基，尤其是C1-C3烷硫基。
术语“卤代”或“卤素”包括氟、氯、溴和碘。本发明中，一个或更多个卤素可以各自独立地选自氟、氯、溴和碘。
术语“卤代烷基”是指包括具有指定碳原子数且取代有一个或多个卤素的支链和直链饱和脂族烃基团。卤代烷基的实例包括但不限于氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基、五氯乙基、2,2,2-三氟乙基、七氟丙基和七氯丙基。优选的卤代烷基包括卤代(C1-C6烷基)和卤代(C1-C4烷基)。
术语“氧代基”或“羰基”是指由碳和氧两种原子通过双键连接而成的有机官能团(C＝O或C(O))。
术语“苄基”指-CH2-苯基或“Bn”。
术语“羟基”指-OH基团。
术语“氨基”指-NH2。
术语“氰基”指-CN。
术语“硝基”指-NO2。
术语“羧基”指-C(O)OH。
术语“巯基”指-SH。
术语“酯基”或“羧酸酯基”指-C(O)O-(烷基)或-C(O)O(环烷基)，其中烷基和环烷基如上所定义。
术语“酰基”指含有-C(O)R基团的化合物，其中R为烷基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基。
术语“环烷基”是指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包含3至20个碳原子，本发明的环烷基优选C3-C8环烷基或C3-C6环烷基。单环环烷基包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基和环辛基，多环环烷基包括但不限于螺环、稠环和桥环的环烷基，例如降莰烷基。
所述环烷基环可以稠合于芳基、杂芳基或杂环基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，其非限制性实施例包括但不限于：
环烷基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、羟基烷基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、芳基氧基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。
术语“杂环基”是指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包含3至20个环原子，其中一个或多个环原子为选自N、O和S的杂原子(N和S杂原子可任选地被氧化)，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。优选包含3至12个环原子，其中1至4个是杂原子；最优选包含3至8个环原子，其中1至3个是杂原子；最优选包含5至7个环原子，其中1至2或1至3个是杂原子。单环杂环基的实例包括但不限于四氢呋喃基、四氢噻吩基、二氢咪唑基、二氢呋喃基、二氢吡唑基、二氢吡咯基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基和四氢吡喃基，多环杂环基包括但不限于螺环、稠环和桥环的杂环基。
所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基，其非限制性实施例包括但不限于：
杂环基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、羟基烷基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、芳基氧基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。
术语“芳基”是指具有共轭π电子体系的总计6至14个环原子、优选6至10个碳原子的单环、二环或三环的环***，其中所述***中的至少一个环为芳族的且其中所述***中的每个环含有3至7个环原子。在本发明的某些实施方案中，“芳基”是指芳族环***，其包括但不限于苯基、萘基、联苯基、茚满基、1-萘基、2-萘基和四氢萘基。本发明的芳基优选C6-C10芳基。芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、羟基烷基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、芳基氧基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
术语“杂芳基”是指稳定的3元、4元、5元、6元、或7元芳香单环或7元、8元、9元、10元、11元或12元的芳香二环或芳香多环杂环，其为完全不饱和或部分不饱和的，且其含有碳原子和1个、2个、3个或4个独立地选自N、O和S的杂原子(N和S杂原子可任选地被氧化)。氮原子为取代的或未取代的(即N或NR，其中R为H或如果被定义，则为另一取代基)。杂环可在得到稳定结构的任何杂原子或碳原子处连接至其侧基。如果所得化合物是稳定的，则本发明所述的杂环基可在碳或氮原子上被取代。杂环中的氮可任选地被季铵化。优选地，当杂环中S和O原子的总数超过1时，则这些杂原子彼此不相邻。优选地，杂环中S和O原子的总数不大于1。当使用术语“杂环”时，其意欲包括杂芳基。杂芳基的实施例包括但不限于吖啶基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、噁唑基、噻唑基、苯并***基、苯并四唑基、苯并异噁唑基、苯并异噻唑基、吲哚基、吲嗪基、吲唑基、嘧啶基、吩嗪基、哌嗪基、哌啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡咯基和喹啉基。术语“杂芳基”还可以包括由上述所定义的“芳基”、“杂环基”或“环烷基”与单环“杂芳基”所形成的联芳基结构，例如但不限于“-苯基联吡啶基-”、“-苯基联嘧啶基-”、“-吡啶基联萘基-”、“-嘧啶基联萘基-”和“-吡啶基联嘧啶基-”，其中本发明还包括含有例如上述杂环的螺环、稠环和桥环化合物。
本发明所述的“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。
本发明所述的“取代”或“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1至3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代，条件是维持正常化合价且所述取代得到稳定的化合物。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
“药物组合物”表示混合物，其含有一种或多种本发明所述化合物或其或其内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其可药用盐，以及任选的其他组分例如生理学/可药用的载体和/或赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
具体实施方式
为更好地阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合非限制性实施例来进一步说明本发明。本发明的实施例，包括实施例中提供的描述，旨在说明本发明的实施方式，其并非旨在限制任何权利要求的范围。根据本发明，本领域技术人员将理解，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以对所公开的具体实施方案进行许多改变并仍然能获得相同或相似的结果。
除非另有说明，所有材料/试剂均从商业供应商处获得，无需进一步纯化即可使用。下述实施例的化合物结构是通过核磁共振(NMR)和/或质谱(MS)来表征和确定的。
1H NMR波谱通过Bruker Avance 400MHz波谱仪上在室温下记录，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3)，氘代甲醇(CD3OD)或氘水(D2O)。化学位移值(δ)以ppm为单位，用四甲基硅烷(TMS)或残留溶剂峰作为内标，耦合常数(J)以赫兹(Hz)为单位，1H NMR谱图中峰型的多重性缩写如下：s(单峰)、d(双重峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、qn(五重峰)、m(多重峰)、br(宽峰)。
液相色谱质谱联用(LC-MS)使用的仪器是Shimadzu LCMS-2020，制备型高效液相色谱(Prep-HPLC)使用的仪器是Bonna-Agela FLEXA FL-H100G。薄层色谱(TLC)所使用的薄层层析硅胶板型号是烟台黄海HSGF254薄层层析硅胶板，反应监测所用的规格为2.5×8cm，其涂层厚度为0.2±0.03mm，分离纯化所用的规格为20×20cm，其涂层厚度为0.4–0.5mm。硅胶柱层析色谱法使用的是青岛海洋硅胶100–200目或200–300目硅胶为载体。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。
实施例1：化合物1，化合物2的合成路线
第一步：化合物1-B 2-(3-硝基苯基)乙-1-胺
向含有化合物1-A 2-(3-硝基苯基)乙腈(2.0g,12.33mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中加入硼烷-四氢呋喃溶液(24.6mL,1M)。反应液在70℃下搅拌反应3小时。TLC监测反应完全。向反应液中加入甲醇(30mL)，70℃下搅拌反应1小时。减压浓缩反应液得到黄色油状粗品化合物1-B 2-(3-硝基苯基)乙-1-胺(2.05g),所得粗品未经进一步纯化直接用于下一步。
第二步：化合物1-C(3-硝基苯乙基)氨基甲酸叔丁酯
向含有化合物1-B 2-(3-硝基苯基)乙-1-胺(2.05g,12.34mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液中加入三乙胺(2.50g,24.67mmol)，二碳酸二叔丁酯(2.96g,13.57mmol)。反应液在20℃下搅拌反应12小时。TLC监测反应完全。反应液加水稀释，二氯甲烷(50mLx2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经硅胶柱层析(用含20％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)分离纯化得到黄色油状物化合物1-C(3-硝基苯乙基)氨基甲酸叔丁酯(2.54g)。
LC_MS:(ES+):m/z 279.1[M+H]+.
第三步：化合物1-E叔丁基烯丙基(3-硝基苯乙基)氨基甲酸酯
0℃下向含有化合物1-C(3-硝基苯乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.0g，3.76mmol)的DMF(30mL)溶液中加入氢化钠(180.2mg,4.51mmol,质量分数60％)，搅拌反应30分钟后加入化合物1-D 3-溴丙-1-烯(499.7mg，4.13mmol),反应液在20℃下搅拌反应12小时。LCMS监测反应完全。反应液倒入到饱和氯化铵溶液(30mL)中，乙酸乙酯(30mLx2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经硅胶柱层析(用含10％-20％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)分离纯化得到黄色油状物化合物1-E叔丁基烯丙基(3-硝基苯乙基)氨基甲酸酯(828mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 307.1[M+H]+.
第四步：化合物1-F叔丁基烯丙基(3-氨基苯乙基)氨基甲酸酯
向含有化合物1-E叔丁基烯丙基(3-硝基苯乙基)氨基甲酸酯(828mg，2.70mmol)的乙醇(10mL)/水(2mL)溶液中加入铁粉(755mg,13.51mmol)，氯化铵(723mg,13.51mmol)。反应液在80℃下搅拌反应12小时。TLC监测反应完全。反应液过滤，浓缩，加水(20mL)稀释，乙酸乙酯(20mLx2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得粗品经硅胶柱层析(用含20％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)分离纯化得到黄色油状物化合物1-F叔丁基烯丙基(3-氨基苯乙基)氨基甲酸酯(710mg)。
第五步：化合物1-I N-烯丙基-2,5-二氯嘧啶-4-胺
向含有化合物1-G 2,4,5-三氯嘧啶(1.0g，5.45mmol)和化合物1-H丙-2-烯-1-胺盐酸盐(535.6mg,5.72mmol)的乙腈(20mL)溶液中加入碳酸钾(2.26g,16.36mmol)。反应液在80℃下搅拌反应3小时。TLC监测反应完全。反应液加水(30mL)稀释，乙酸乙酯(30mLx2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。剩余物经硅胶柱层析(用含10％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)分离纯化得到白色固体化合物1-I N-烯丙基-2,5-二氯嘧啶-4-胺(1.129g)。
LC_MS:(ES+):m/z 204.0[M+H]+.
第六步：化合物1-J叔丁基烯丙基(3-((4-(烯丙基氨基)-5-氯嘧啶-2-基)氨基)苯乙基)氨基甲酸酯
向含有化合物1-I N-烯丙基-2,5-二氯嘧啶-4-胺(500mg，2.45mmol)和化合物1-F叔丁基烯丙基(3-氨基苯乙基)氨基甲酸酯(677.2mg,2.45mmol)的1,4-二氧六环(15mL)溶液中加入碳酸铯(2.40g,7.35mmol)和BrettPhos-Pd-G3(111mg,122.5umol)。反应液在100℃氮气氛围下搅拌反应12小时。TLC监测反应完全。反应液过滤，加水(30mL)稀释，乙酸乙酯(30mLx2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。剩余物经硅胶柱层析(用含25％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)分离纯化得到黄色油状物化合物1-J叔丁基烯丙基(3-((4-(烯丙基氨基)-5-氯嘧啶-2-基)氨基)苯乙基)氨基甲酸酯(830mg)。LC_MS:(ES+):m/z 444.2[M+H]+.
第七步：化合物1叔丁基(Z)-15-氯-2,6,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-8-烯-6-羧酸盐
向含有化合物1-J叔丁基烯丙基(3-((4-(烯丙基氨基)-5-氯嘧啶-2-基)氨基)苯乙基)氨基甲酸酯(500mg,1.13mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液中加入Grubb＇s(143.9mg,169.5mmol)和TsOH·H2O(224.9mg,1.18mmol)。反应液在45℃下搅拌反应12小时。TLC监测反应完全。反应液加入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)，收集有机层，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。剩余物经硅胶柱层析(用含30％-50％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)分离纯化得到棕色固体化合物1叔丁基(Z)-15-氯-2,6,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-8-烯-6-羧酸盐(490mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 416.2[M+H]+.
第八步：化合物2(Z)-15-氯-2,6,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-8-烯
将含有化合物1叔丁基(Z)-15-氯-2,6,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-8-烯-6-羧酸盐(10mg，24.0umol)的氯化氢/1,4-二氧六环溶液(1mL)在25℃下搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。反应液减压浓缩得到棕色固体化合物2(Z)-15-氯-2,6,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-8-烯(5.7mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 316.1[M+H]+.
实施例2：化合物3，化合物4的合成路线
第一步：化合物3丁基-15-氯-2,6,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1.3)-苯环十一烷-6-羧酸盐
向含有化合物1叔丁基(Z)-15-氯-2,6,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-8-烯-6-羧酸盐(100mg，24.04umol)的甲醇溶液中加入钯/炭(50mg)。反应液在20℃氢气球氛围下搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。反应液通过硅藻土过滤，剩余物经Pre-TLC(用含50％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)分离纯化得到棕色固体化合物3叔丁基-15-氯-2,6,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1.3)-苯环十一烷-6-羧酸盐(26.1mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 418.2[M+H]+.
第二步：化合物4 15-氯-2,6,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1.3)-苯环十一烷
将含有化合物3叔丁基-15-氯-2,6,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1.3)-苯环十一烷-6-羧酸盐(20mg，47.9umol)的氯化氢/1,4-二氧六环溶液(1mL)在25℃下搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。反应液减压浓缩得到棕色固体化合物4 15-氯-2,6,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1.3)-苯环十一烷(10.5mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 318.1[M+H]+.
实施例3：化合物5的合成路线
第一步：化合物5-C 1-(3-硝基苯基)胍
向含有化合物5-A 3-硝基苯胺(10g,72.4mmol)的乙醇(50mL)溶液中加入化合物5-B氰胺(3.50g,83.26mmol)和70％的硝酸(6.52g,72.40mmol)。反应液在80℃氮气氛围下搅拌反应12小时。LCMS监测反应完全。反应液浓缩，剩余物用乙醇/甲基叔丁基醚＝1:1(50mL)打浆，过滤，收集滤饼得到黄色固体化合物5-C1-(3-硝基苯基)胍(6.33g)，所得粗品未经进一步纯化直接用于下一步。
LC_MS:(ES+):m/z 181.0[M+H]+.
第二步：化合物5-E(E)-N'-(5-((E)-3-(二甲氨基)丙烯酰基)-4-甲基噻唑-2-基)-N,N-二甲基甲酰亚胺
将含有化合物5-D 1-(2-氨基-4-甲基噻唑-5-基)乙烷-1-酮(5.0g，32.01mmol)的1,1-二甲氧基-N,N-二甲基甲胺溶液(30mL)在120℃下搅拌反应12小时。LCMS监测反应完全。剩余物用乙酸乙酯/石油醚＝2:1(50mL)打浆，过滤，收集滤饼得到橘色固体化合物5-E(E)-N'-(5-((E)-3-(二甲氨基)丙烯酰基)-4-甲基噻唑-2-基)-N,N-二甲基甲酰亚胺(4.47g)，所得粗品未经进一步纯化直接用于下一步。LC_MS:(ES+):m/z 267.1[M+H]+.
第三步：化合物5-F(E)-N'-(5-((Z)-3-(二甲氨基)-2-氟丙烯酰基)-4-甲基噻唑-2-基)-N,N-二甲基甲酰亚胺
0℃下向含有化合物5-E(E)-N'-(5-((E)-3-(二甲氨基)丙烯酰基)-4-甲基噻唑-2-基)-N,N-二甲基甲酰亚胺(4.47g，16.782mmol)的甲醇溶液(50mL)中加入1-氯甲基-4-氟-1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷二(四氟硼酸)盐(8.92g，25.173mmol),反应液在0℃下搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。反应液过滤浓缩，剩余物经硅胶柱层析(用含6.6％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)分离纯化得到黄色油状物粗品化合物5-F(E)-N'-(5-((Z)-3-(二甲氨基)-2-氟丙烯酰基)-4-甲基噻唑-2-基)-N,N-二甲基甲酰亚胺(3.9g)。
LC_MS:(ES+):m/z 285.1[M+H]+.
第四步：化合物5-H 5-(5-氟-2-((3-硝基苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-胺
向含有化合物5-F(E)-N'-(5-((Z)-3-(二甲氨基)-2-氟丙烯酰基)-4-甲基噻唑-2-基)-N,N-二甲基甲酰亚胺(3.9g，13.72mmol)和化合物5-C 1-(3-硝基苯基)胍(4.94g，27.43mmol)的乙二醇单甲醚(50mL)溶液中加入氢氧化钠(549mg,13.72mmol)。反应液在125℃下搅拌反应12小时。LCMS监测反应完全。反应液浓缩，加水(50mL)稀释，乙酸乙酯(50mLx2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。剩余物经硅胶柱层析(用含50％-66％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)分离纯化得到黄色固体化合物5-G 5-(5-氟-2-((3-硝基苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-胺(1.12g)。
LC_MS:(ES+):m/z 347.0[M+H]+.
第五步：化合物5-H(5-(5-氟-2-((3-硝基苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯
向含有化合物5-G 5-(5-氟-2-((3-硝基苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-胺(1.12g，3.23mmol)和二碳酸二叔丁酯(776.4mg，3.56mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中加入三乙胺(981.7mg,9.7mmol)和4-二甲氨基吡啶(39.5mg,323.38umol)。反应液在20℃下搅拌反应12小时。LCMS监测反应完全。反应液浓缩，剩余物经硅胶柱层析(用含50％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)分离纯化得到黄色固体化合物5-H(5-(5-氟-2-((3-硝基苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1.275g)。
LC_MS:(ES+):m/z 447.1[M+H]+.
第六步：化合物5-I(5-(2-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)苯基)氨基)-5-氟嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯
向含有化合物5-H(5-(5-氟-2-((3-硝基苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1.275g，2.86mmol)的甲醇(15mL)/四氢呋喃(15mL)溶液中加入二碳酸二叔丁酯(623.3mg，2.86mmol)和钯/炭(150mg)。反应液在20℃氢气球氛围下搅拌反应120小时。LCMS监测反应完全。反应液经硅藻土过滤，浓缩滤液，剩余物经硅胶柱层析(用含30％-50％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)分离纯化得到黄色固体化合物5-I(5-(2-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)苯基)氨基)-5-氟嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯(500mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 517.2[M+H]+.
第七步：化合物5-K二-叔丁基25-氟-14-甲基-8-氧杂-3,5,11-三氮杂-1(5,2)-噻唑-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯环十一烷-5,11-二羧酸盐
向含有化合物5-I(5-(2-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)苯基)氨基)-5-氟嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)氨基甲酸叔丁酯(20mg，38.72umol)的乙腈(5mL)溶液中加入叔丁醇钠(7.4mg，77.43umol)和化合物5-J 1-溴-2-(2-溴乙氧基)乙烷(9.0mg，38.72umol)。反应液在60℃下搅拌反应12小时。LCMS监测反应完全。反应液加水(10mL)稀释，乙酸乙酯(10mLx2)萃取，合并有机层，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。剩余物经Pre-TLC(用含33％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)分离纯化得到黄色固体化合物5-K二-叔丁基25-氟-14-甲基-8-氧杂-3,5,11-三氮杂-1(5,2)-噻唑-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯环十一烷-5,11-二羧酸盐(3mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 587.2[M+H]+.
第八步：化合物5 25-氟-14-甲基-8-氧杂-3,5,11-三氮杂-1(5,2)-噻唑-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯环十一烷
将含有化合物5-K二-叔丁基25-氟-14-甲基-8-氧杂-3,5,11-三氮杂-1(5,2)-噻唑-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯环十一烷-5,11-二羧酸盐(3mg，5.11umol)的氯化氢/1,4-二氧六环溶液(2mL)在25℃下搅拌反应1小时。LCMS监测反应完全。反应液减压浓缩，用氨水调节pH值至7，剩余物经Pre-TLC(用含10％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)分离纯化得到黄色固体化合物5 25-氟-14-甲基-8-氧杂-3,5,11-三氮杂-1(5,2)-噻唑-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯环十一烷(0.3mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 387.1[M+H]+.
实施例4：化合物6的合成路线
第一步：化合物6-A氮1-(4-(2-氨基-4-甲基噻唑-5-基)-5-氟嘧啶-2-基)苯-1,3-二胺二盐酸盐
向含有化合物5-I(20mg,0.0387mmol)的甲醇(1mL)溶液中加入盐酸/二氧六环(1ml)溶液，反应液在45℃下搅拌反应12小时。TLC监测反应完全。反应液浓缩，得到黄色固体化合物6-A氮1-(4-(2-氨基-4-甲基噻唑-5-基)-5-氟嘧啶-2-基)苯-1,3-二胺二盐酸盐(19mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 317.1[M+Na]+
第二步：化合物6-C氮1-烯丙基-氮3-(4-(2-(烯丙氨基)-4-甲基噻唑-5-基)-5-氟嘧啶-2-基)苯-1,3-二胺
0℃下向含有化合物6-A氮1-(4-(2-氨基-4-甲基噻唑-5-基)-5-氟嘧啶-2-基)苯-1,3-二胺二盐酸盐(19mg,0.0488mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5ml)溶液中加入氢化钠(3.9mg,0.0976mmol),缓慢滴加化合物6-B 3-溴丙-1-烯(71.8mg,0.0976mmol)。反应液在0℃下搅拌反应5小时。TLC监测反应完全。反应液倒入饱和氯化铵溶液，乙酸乙酯萃取。合并有机层，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。剩余物经Pre-TLC(用含4.76％甲醇的二氯甲烷洗脱)分离纯化得到黄色固体化合物6-C氮1-烯丙基-氮3-(4-(2-(烯丙氨基)-4-甲基噻唑-5-基)-5-氟嘧啶-2-基)苯-1,3-二胺(8mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 397.1[M+Na]+
第三步：化合物6(Z)-25-氟-14-甲基-3,5,10-三氮杂-1(5,2)-噻唑啉-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯环癸烷-7-烯
向含有化合物6-C氮1-烯丙基-氮3-(4-(2-(烯丙氨基)-4-甲基噻唑-5-基)-5-氟嘧啶-2-基)苯-1,3-二胺(8mg,0.0201mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液中加入对甲苯磺酸-水合物(4.01mg,0.0211mmol)和Grubb's(5.13mg,0.006mmol)。反应液在42℃氮气氛围下搅拌反应12小时。TLC监测反应完全。反应液加水稀释，二氯甲烷萃取。合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩。剩余物经Pre-TLC(用含4.76％甲醇的二氯甲烷洗脱)分离纯化得到褐色固体化合物6(Z)-25-氟-14-甲基-3,5,10-三氮杂-1(5,2)-噻唑啉-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯环癸烷-7-烯(1.3mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 369.1[M+Na]+
实施例5：化合物7，化合物8，化合物9的合成路线
第一步：化合物9-C丁-3-烯-1-基(3-硝基苄基)氨基甲酸叔丁酯
0℃下向含有化合物9-B丁-3-烯-1-基氨基甲酸叔丁酯(666mg,3.9mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中加入氢化钠(60％含量在煤油，233.6mg,5.8mmol)。反应液升至室温，搅拌反应30分钟，然后冷至0℃，逐滴加入化合物9-A 1-(溴甲基)-3-硝基苯(925mg,4.3mmol)。反应液在室温氮气氛围下搅拌反应12小时。TLC监测反应完全。反应液分配于乙酸乙酯(30mL)和水(50mL)中。收集有机层，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经硅胶柱层析(用含20％乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱)分离纯化得到棕色油状物化合物9-C丁-3-烯-1-基(3-硝基苄基)氨基甲酸叔丁酯(900mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ1.44-1.51(m,9H),2.23-2.28(m,2H),3.26-3.34(m,2H),5.29(m,2H),5.02-5.07(m,2H),5.71-5.79(m,1H),7.48-7.59(m,2H),8.10-8.13(m,2H).
第二步：化合物9-D 3-氨基苄基(丁-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯
将含有化合物9-C丁-3-烯-1-基(3-硝基苄基)氨基甲酸叔丁酯(900mg，2.94mmol)，铁粉(1.6g,29.4mmol)，氯化铵(786.5mg,14.7mmol)的乙醇(40mL)/水(4mL)溶液回流反应3小时。TLC监测反应完全。过滤移除铁粉，滤饼用乙醇(2mLx2)洗涤。合并滤液，减压浓缩，剩余物经硅胶柱层析(用含20％乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱)分离纯化得到黄色油状物化合物9-D 3-氨基苄基(丁-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(460mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 221.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ1.45-1.49(m,9H),2.22-2.28(m,2H),3.27-3.18(m,2H),3.66(s,2H),4.35(s,2H),4.98-5.05(m,2H),5.73-5.77(m,1H),6.51-6.62(m,3H),7.09(t,J＝7.8Hz,1H).
第三步：化合物9-E 3-((4-(烯丙基氨基)-5-氯嘧啶-2-基)氨基)苄基(丁-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯
此步的合成参照实施例1化合物2第六步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 444.6[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ1.45-1.50(m,9H),2.20-2.26(m,2H),3.20-3.29(m,2H),4.13-4.17(m,2H),4.43(s,2H),4.98-5.05(m,2H),5.19-5.36(m,3H),5.74(s,1H),5.94-6.04(m,1H),6.88-6.94(m,2H),7.23-7.27(m,1H),7.40(s,1H),7.53(s,1H),7.91(s,1H).
第四步：化合物9-F叔丁基(Z)-15-氯-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-8-烯-5-羧酸盐
/>
此步的合成参照实施例1化合物2第七步的合成过程1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.23-1.41(m,9H),2.16-2.32(m,2H),3.02-3.22(m,2H),3.88-4.00(m,1H),4.18-4.24(m,1H),4.34-4.40(m,2H),5.38-5.43(m,1H),5.58-5.76(m,1H),6.74-6.88(m,1H),6.99-7.04(m,1H),7.14-7.22(m,1H),7.46-7.58(m,1H),7.93(s,1H),8.19-8.33(m,1H),9.18-9.29(m,1H).
第五步：化合物7叔丁基15-氯-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-5-羧酸盐
此步的合成参照实施例2化合物4第一步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 418.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ0.77-1.10(m,9H),1.61-1.72(m,6H),3.12-3.26(m,2H),3.52-3.60(m,2H),4.39-4.45(m,2H),5.03-5.54(m,1H),6.78-6.81(m,1H),7.05-7.13(m,2H),7.24-7.28(m,1H),7.87-7.89(m,1H),7.28(s,1H).
第六步：化合物8 15-氯-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷
将含有化合物7叔丁基15-氯-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-5-羧酸盐(50mg,0.12mmol)和三氟乙酸(1mL)的二氯甲烷(1mL)溶液在0℃氮气氛围下搅拌反应3小时。TLC监测反应完全。反应液用饱和碳酸钠调节pH＝7-8，然后用二氯甲烷(10mLx2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经Pre-TLC(用含10％甲醇的二氯甲烷洗脱)分离纯化得到白色固体化合物8 15-氯-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷(35mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 318.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.50-1.57(m,4H),1.78(s,2H),2.70-2.74(m,2H),3.39-3.48(m,3H),4.01(s,2H),6.99(d,J＝7.6Hz,1H),7.12-7.14(m,1H),7.27(t,J＝7.8Hz,1H),7.38(t,J＝5.8Hz,1H),7.92(s,1H),8.37(s,1H),9.33(s,1H).
第七步：化合物9-H叔丁基(2-(15-氯-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-5-基)-2-氧乙基)氨基甲酸酯
0℃下向含有化合物8 15-氯-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷(50mg，0.1mmol)，化合物9-G 2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酸(21mg,0.12mmol)和N,N-二异丙基乙胺(61.9mg,0.48mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液中加入N,N,N,N-四甲基-O-(7-氮杂苯并***-1-基)六氟磷酸脲(91.3mg,0.24mmol)，反应液在室温下搅拌反应2小时。TLC监测反应完全。反应液加水(20mL)稀释，乙酸乙酯(20mL x 2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经Pre-TLC(用含3％甲醇的二氯甲烷洗脱)分离纯化得到灰白色固体化合物9-H叔丁基(2-(15-氯-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-5-基)-2-氧乙基)氨基甲酸酯(30mg)。
第八步：化合物9 2-氨基-1-(15-氯-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-5-基)乙烷-1-酮
将含有化合物9-H叔丁基(2-(15-氯-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-5-基)-2-氧乙基)氨基甲酸酯(30mg，0.06mmol)和三氟乙酸(1mL)的二氯甲烷(1mL)溶液在0℃下搅拌反应2小时。TLC监测反应完全。反应液用饱和碳酸钠调节pH＝7-8，然后用二氯甲烷(10mLx 2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经Pre-TLC(用含10％甲醇的二氯甲烷洗脱)和HPLC分离纯化得到灰白色固体化合物9 2-氨基-1-(15-氯-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-5-基)乙烷-1-酮(22.1mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 375.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ0.74-0.85(m,4H),1.54-1.73(m,4H),3.09-3.17(m,2H),3.34-3.48(m,4H),4.36-4.52(m,2H),6.83-6.94(m,1H),7.03-7.08(m,1H),7.16-7.24(m,1H),7.34-7.40(m,1H),7.91(s,1H),8.35-8.48(m,1H),9.32-9.40(m,1H).
实施例6：化合物10的合成路线
化合物10 15-氯-5-甲基-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷
向含有化合物8 15-氯-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷(8mg,0.0252mmol)、甲醛(3.78mg,0.126mmol)的甲醇(1ml)溶液中加入一滴醋酸溶液。反应液在室温下搅拌反应30分钟，加入氰基硼氢化钠(2.51mg,004mmol)。反应混合物在室温下继续搅拌反应14小时。TLC监测反应完全。反应液浓缩。剩余物经制备-TLC(用含9.09％甲醇的二氯甲烷洗脱)分离纯化得到棕色固体化合物10 15-氯-5-甲基-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷(5.1mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 332.2[M+Na]+
实施例7：化合物11的合成路线
第一步：化合物11-B叔丁基(R)-2-(15-氯-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-5-羰基)吡咯烷-1-羧酸盐
此步的合成参照实施例5化合物9第七步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 515.3[M+H]+.
第二步：化合物11(R)-15-氯-5-脯氨酰-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷
此步的合成参照实施例5化合物9第八步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 415.4[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.41-1.54(m,4H),1.66-1.82(m,4H),1.95-2.15(m,2H),2.83-3.02(m,2H),3.10-3.19(m,2H),3.38-3.56(m,4H),4.34-4.43(m,1H),4.61-4.72(m,1H),6.83-6.96(m,1H),7.04-7.11(m,1H),7.18-7.23(m,1H),7.36-7.39(m,1H),7.90-7.96(m,1H),8.39-8.44(m,1H),9.34(s,1H).
实施例8：化合物12的合成路线
第一步：化合物12-C N-烯丙基-3-硝基苯胺
将含有化合物12-A 3-硝基苯胺(1g,7.2mmol)，化合物12-B 3-溴丙烯(1.3g,10.8mmol)和碳酸钠(768mg,7.2mmol)的乙醇(4mL)-水(1mL)溶液回流反应4小时。TLC监测反应完全。反应液冷至室温，分配于水(20mL)和乙酸乙酯(20mL)中。收集有机层，水层用乙酸乙酯(20mL x 2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经硅胶柱层析(用含1％乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱)分离纯化得到黄色固体化合物12-C N-烯丙基-3-硝基苯胺(660mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 179.00[M+H]+
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ3.82-3.86(m,2H),4.16(s,1H),5.20-5.33(m,2H),5.89-5.97(m,1H),6.86-6.89(m,1H),7.27(t,J＝8.0Hz,1H),7.40(t,J＝2.0Hz,1H),7.51-7.54(m,1H).
第二步：化合物12-D叔丁基烯丙基(3-硝基苯基)氨基甲酸酯
将含有化合物12-C N-烯丙基-3-硝基苯胺(600mg,3.4mmol)，三乙胺(477mg,4.7mmol)，4-二甲氨基吡啶(40mg,0.3mmol)和二碳酸二叔丁酯(1.1g,5.1mmol)的无水四氢呋喃(10mL)溶液在60℃下搅拌反应8小时。TLC监测反应完全。反应液加水(20mL)淬灭，乙酸乙酯(10mL x 2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经硅胶柱层析(用含3.3％乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱)分离纯化得到黄色固体化合物12-D叔丁基烯丙基(3-硝基苯基)氨基甲酸酯(800mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ1.48(s,9H),4.29-4.30(m,2H),5.16-5.22(m,2H),5.87-5.97(m,2H),7.47(t,J＝8.0Hz,1H),7.61(d,J＝7.6Hz,1H),8.01-8.03(m,1H),8.16(t,J＝2.0Hz,1H).
第三步：化合物12-E叔丁基烯丙基(3-氨基苯基)氨基甲酸酯
此步的合成参照实施例1化合物2第四步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 193.30[M+H-56]+
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ1.45(s,9H),4.16-4.18(m,2H),5.11-5.18(m,2H),5.87-5.94(m,1H),6.49-6.52(m,1H),6.58-6.62(m,2H),7.08(t,J＝8.0Hz,1H).
第四步：化合物12-G(3-溴-4-甲基苯基)氨基甲酸叔丁酯
将含有化合物12-F 3-溴-4-甲基苯胺(5g,27mmol)，三乙胺(3.03g,30mmol)，4-二甲氨基吡啶(329mg,2.7mmol)和二碳酸二叔丁酯(5.9g,27mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液在室温下搅拌反应过夜。TLC监测反应完全。反应液分配于二氯甲烷(40mL)和水(40mL)中。收集有机层，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经硅胶柱层析(用含1.4％乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱)分离纯化得到白色固体化合物12-G(3-溴-4-甲基苯基)氨基甲酸叔丁酯(5.3g)。LC_MS:(ES+):m/z 229.85[M+H-56]+
第五步：化合物12-H叔丁基烯丙基(3-溴-4-甲基苯基)氨基甲酸酯
0℃下向含有化合物12-G(3-溴-4-甲基苯基)氨基甲酸叔丁酯(1g,3.5mmol)的四氢呋喃(5ml)溶液中加入氢化钠(60％质量分数在煤油中,280mg,7.0mmol)。反应液升至室温，搅拌反应30分钟，然后冷至0℃，逐滴加入化合物12-B 3-溴丙烯(635mg,5.3mmol)。反应液在室温氮气氛围下搅拌反应14小时。TLC监测反应完全。反应液分配于乙酸乙酯(30mL)和冰水(20mL)中。收集有机层，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经硅胶柱层析(用含1％乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱)分离纯化得到淡黄色油状物化合物12-H叔丁基烯丙基(3-溴-4-甲基苯基)氨基甲酸酯(874mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 269.85[M+H-56]+
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ1.44(s,9H),2.36(s,3H),4.17-1.49(m,2H),5.12-5.16(m,2H),5.83-5.92(m,1H),7.06-7.08(m,1H),7.14-7.16(m,1H),7.41-7.42(m,1H).
第六步：化合物12-I叔丁基烯丙基(4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)苯基)氨基甲酸酯
在室温氮气氛围下向含有化合物12-H叔丁基烯丙基(3-溴-4-甲基苯基)氨基甲酸酯(774mg,2.38mmol)，双联频哪醇基二硼(907mg,3.57mmol)，乙酸钾(467mg,4.76mmol)的1,4-二氧六环(5mL)溶液中加入PdCl2(dppf)(174mg,0.24mmol)，反应液氮气置换三次，90℃下搅拌反应5小时。TLC监测反应完全。反应液过滤，减压浓缩滤液，所得粗品经硅胶柱层析分离纯化(用含2.5％乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱)分离纯化得到淡黄色油状物化合物12-I叔丁基烯丙基(4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)苯基)氨基甲酸酯(745mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 318.00[M+H-56]+
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ1.33(s,12H),1.43(s,9H),2.50(s,3H),4.20(d,J＝3.2Hz,2H),5.09-5.16(m,2H),5.85-5.94(m,1H),7.08-7.16(m,2H),7.57(d,J＝2.4Hz,1H).
第七步：化合物12-K叔丁基烯丙基(3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-4-甲基苯基)氨基甲酸酯
室温氮气氛围下在密封管中向含有化合物12-I叔丁基烯丙基(4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)苯基)氨基甲酸酯(745mg,2.0mmol)，化合物12-J 2,4,5-三氯嘧啶(727mg,4.0mmol)，碳酸钠(2N,2mL,4.0mmol)的乙腈悬浮液中加入四(三苯基膦)钯(231mg,0.2mmol)，反应液氮气置换三次，70℃下搅拌反应两天。TLC监测反应完全。反应液分配于乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)中。收集有机层，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经硅胶柱层析(用含2％乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱)分离纯化得到淡黄色固体化合物12-K叔丁基烯丙基(3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-4-甲基苯基)氨基甲酸酯(347mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 337.9[M+H-56]+
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ1.44(s,9H),2.19(s,3H),4.22(d,J＝6.8Hz,2H),5.12-5.17(m,2H),5.87-5.94(m,1H),7.15(s,1H),7.25(s,2H),8.68(s,1H).
第八步：化合物12-M叔丁基烯丙基(3-(2-((3-(烯丙基(叔丁氧基羰基)氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)-4-甲基苯基)氨基甲酸酯
此步的合成参照实施例1化合物2第六步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 606.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ1.43(m,18H),2.22(s,3H),4.20-4.24(m,4H),5.06-5.18(m,4H),5.83-5.96(m,2H),6.93(d,J＝8.0Hz,1H),7.14(s,1H),7.22-7.24(m,3H),7.37-7.40(m,1H),7.59(t,J＝2.0Hz,1H),8.44(s,1H).
第九步：化合物12-N二叔丁基(Z)-25-氯-16-甲基-3,5,10-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(1,3)-二苯环癸烷-7-烯-5,10-二羧酸盐
此步的合成参照实施例1化合物2第七步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 578.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.30(s,9H),1.39(s,9H),2.22(s,3H),3.79-3.84(m,1H),4.04-4.25(m,2H),4.41-4.45(m,1H),5.59-5.60(m,2H),6.81(d,J＝7.6Hz,1H),7.03-7.06(m,1H),7.21(t,J＝8.4Hz,2H),7.28(d,J＝8.4Hz,1H),7.44-7.46(m,1H),8.21-8.22(m,1H),8.63(s,1H),10.08(s,1H).
第十步：化合物12(Z)-25-氯-16-甲基-3,5,10-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(1,3)-二苯环癸烷-7-烯
此步的合成参照实施例5化合物8第六步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 378.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ2.25(s,3H),3.68-3.91(m,4H),4.10(s,2H),5.58(d,J＝2.4Hz,2H),6.23-6.32(m,2H),6.65-6.72(m,2),7.00-7.05(m,2H),7.17(s,1H),7.86(t,J＝2.0Hz,1H),8.34(s,1H).
实施例9：化合物13，化合物14，化合物15，化合物16的合成路线
第一步：化合物16-C 4-(烯丙氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸乙酯
-10℃下向含有化合物16-A 2,4-二氯嘧啶-5-羧酸乙酯(1g,4.53mmol)和碳酸钾(1.3g,9.42mmol)的乙腈(8mL)溶液中加入化合物16-B烯丙基胺盐酸盐(790mg,4.3mmol)。反应液在室温下搅拌反应5小时。TLC监测反应完全。反应液分配于乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)中。收集有机层，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经硅胶柱层析(用含5％乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱)分离纯化得到白色固体化合物16-C 4-(烯丙氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸乙酯(860mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 241.9[M+H]+
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ1.38-1.41(t,J＝7.2Hz,3H),4.18-4.20(t,J＝5.6Hz,2H),4.34-4.39(q,J＝6.8Hz,2H),5.20-5.29(m,2H),5.90-5.99(m,1H),8.48(brs,1H),8.68(s,1H).
第二步：化合物16-D 4-(烯丙氨基)-2-((3-((丁-3-烯-1-基(叔丁氧羰基)氨基)甲基)苯基)氨基)嘧啶-5-羧酸盐
此步的合成参照实施例1化合物2第六步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 482.7[M+H]+
第三步：化合物16-E 5-(叔丁基)15-乙基(Z)-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-8-烯-15,5-二羧酸盐
此步的合成参照实施例1化合物2第七步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 454.4[M+H]+
第四步：化合物13 5-(叔丁基)15-乙基-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-15,5-二羧酸盐
此步的合成参照实施例2化合物4第一步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 456.4[M+H]+
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ1.35-1.39(t,J＝7.2Hz,3H),1.47-1.54(m,9H),1.64-1.70(m,4H),1.80-2.09(m,2H),3.12-3.26(m,2H),3.55-3.58(m,2H),4.28-4.33(q,J＝6.8Hz,2H),4.40-4.46(d,J＝25.2Hz,2H),6.84-6.86(d,J＝8.4Hz,1H),7.10-7.31(m,1H),7.29-7.31(m,1H),7.52-7.55(m,1H),8.37-8.39(d,J＝7.6Hz,1H),8.55-8.56(m,1H),8.62(brs,1H).
第五步：化合物16-F 5-(叔丁氧羰基)-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-15-羧酸
将含有化合物13 5-(叔丁基)15-乙基-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-15,5-二羧酸盐(220mg,0.48mmol)和氢氧化锂一水合物(41mg,0.98mmol)的四氢呋喃(6mL)-水(1.5mL)-甲醇(1.5mL)溶液在70℃下搅拌反应13小时。TLC监测反应完全。反应液冷至室温，加入柠檬酸调节pH＝6，乙酸乙酯(20mLx3)萃取。合并有机层，饱和食盐水(40mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品化合物16-F 5-(叔丁氧羰基)-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-15-羧酸(200mg)，所得粗品未经进一步纯化，直接用于下一步。
LC_MS:(ES+):m/z 428.4[M+H]+.
第六步：化合物14叔丁基15-氨基甲酰基-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-5-羧酸盐
0℃下向含有化合物16-F 5-(叔丁氧羰基)-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-15-羧酸(200mg,0.47mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中加入1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(102mg,0.53mmol)，N-羟基苯并***(72mg,0.53mmol),搅拌反应45分钟。然后在0℃下向反应液中加入氨水(1mL)。反应液在40℃下搅拌反应两天。TLC监测反应完全。反应液冷至室温，分配于饱和碳酸钠水溶液(20mL)和乙酸乙酯(10ml)中。收集有机层，水层用乙酸乙酯(10mL x 2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经Pre-TLC(用含5％甲醇的二氯甲烷洗脱)分离纯化得到白色固体化合物14叔丁基15-氨基甲酰基-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-5-羧酸盐(65mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 427.4[M+H]+
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ1.47-1.54(d,J＝28.8Hz,9H),1.63-1.72(m,4H),1.76(brs,2H),3.11-3.25(m,2H),3.49-3.57(m,2H),4.40-4.46(d,J＝24.8Hz,2H),5.62(brs,2H),6.82-6.84(d,J＝8.0Hz,1H),7.10-7.18(m,1H),7.28-7.30(m,1H),7.45(brs,1H),8.26(s,1H),8.36-8.39(d,J＝11.6Hz,1H),9.11-9.13(m,1H).
第七步：化合物16-G叔丁基15-氰基-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-5-羧酸盐
-50℃氮气氛围下向含有化合物14叔丁基15-氨基甲酰基-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-5-羧酸盐(37mg,0.087mmol)和三乙胺(111mg,1.09mmol)的无水四氢呋喃(15mL)溶液中加入三氟乙酸酐(201mg,0.96mmol)。反应液在-50℃下搅拌反应20分钟，然后升至0℃搅拌反应2小时。TLC监测反应完全。反应液分配于乙酸乙酯(20mL)和饱和碳酸钠水溶液(20mL)中。收集有机层，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经Pre-TLC(用含7.5％甲醇的二氯甲烷洗脱)得到白色固体化合物16-G叔丁基15-氰基-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-5-羧酸盐(30mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 409.4[M+H]+
第八步：化合物15 2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-15-腈
此步的合成参照实施例5化合物8第六步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 309.0[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.46(brs,2H),1.61(brs,4H),2.55-2.59(t,J＝7.6Hz,2H),3.40-3.43(m,2H),3.83(s,2H),6.69(brs,1H),6.96-6.98(d,J＝7.6Hz,1H),7.10-7.12(d,J＝8.0Hz,1H),7.23-7.27(d,J＝7.6Hz,1H),7.86-7.89(m,1H),8.32-8.34(m,2H),9.86(s,1H).
第九步：化合物16 2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-15-甲酰胺
此步的合成参照实施例5化合物8第六步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 327.2[M+H]+
实施例10：化合物17，化合物18的合成路线
第一步：化合物18-C 4-(丁-3-烯-1-酰氧基)-2,5-二氯嘧啶
0℃下向含有化合物18-B丁-3-烯-1-醇(787mg,10.9mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中加入氢化钠(60％质量分数在煤油中,481mg,12.0mmol)。反应液升至室温，搅拌反应1小时，然后冷至0℃，加入化合物18-A 2,4,5-三氯嘧啶(2g,10.9mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液。反应液在室温氮气氛围下搅拌反应15小时。TLC监测反应完全。反应液分配于乙酸乙酯(50mL)和冰水(50mL)中。收集有机层，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经硅胶柱层析(用干0.3％乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱)得到无色油状物化合物18-C 4-(丁-3-烯-1-酰氧基)-2,5-二氯嘧啶(1.35g)。
LC_MS:(ES+):m/z 218.8[M+H]+
第二步：化合物18-D叔丁基烯丙基(3-((4-(丁-3-烯-1-酰氧基)-5-氯嘧啶-2-基)氨基)苯基)氨基甲酸酯
此步的合成参照实施例1化合物2第六步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 445.0[M+H]+
第三步：化合物17叔丁基(Z)-15-氯-11-氧杂-2,5-二氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-7-烯-5-羧酸酯
此步的合成参照实施例1化合物2第七步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 417.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.41-1.48(m,9H),2.66-2.67(m,2H),3.70-3.81(m,2H),4.17-4.30(m,2H),4.50-4.67(m,2H),5.38-5.85(m,2H),6.96-7.32(m,3H),8.15-8.39(m,2H),9.81-10.00(m,1H)).
第四步：化合物18-E 15-氯-11-氧杂-2,5-二氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-5-羧酸叔丁酯
此步的合成参照实施例2化合物4第一步的合成过程
第五步：化合物18 15-氯-11-氧杂-2,5-二氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷
此步的合成参照实施例5化合物8第六步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 319.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.49-1.60(m,4H),1.80-1.85(m,2H),2.56(t,J＝7.2Hz,2H),3.82(s,2H),4.54(t,J＝8.4Hz,2H),6.91(d,J＝7.6Hz,1H),7.06(d,J＝8.0Hz,1H),7.23(t,J＝7.6Hz,1H),8.24(s,1H),8.30(s,1H),9.78(s,1H).
实施例11：化合物19的合成路线
第一步：化合物19-C N-(丁-3-烯-1-基)-2,5-二氯嘧啶-4-胺
此步的合成参照实施例1化合物2第五步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 217.8[M+H]+
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ2.39-2.44(q,J＝6.8Hz,2H),3.58-3.62(q,J＝6.2Hz,2H),5.15(s,1H),5.18-5.19(d,J＝6.8Hz,1H),5.56(brs,1H),5.77-5.87(m,1H),8.01(s,1H).
第二步：化合物19-F 1-((烯丙氧基)甲基)-3-硝基苯
将含有化合物19-D(3-硝基苯基)甲醇(1g,6.5mmol)，氢氧化钾(733mg,13.1mmol)，四丁基硫酸氢铵(111mg,0.32mmol)的化合物19-E烯丙基溴(4mL)溶液在室温下搅拌反应12小时。TLC监测反应完全。反应液加水(20mL)淬灭，二氯甲烷(20mLx3)萃取。合并有机层，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经硅胶柱层析(用含15％乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱)分离纯化得到淡黄色油状物化合物19-F 1-((烯丙氧基)甲基)-3-硝基苯(1.1g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ4.09(d,J＝5.6Hz,2H),4.61(s,2H),5.24-5.36(m,2H),5.92-6.02(m,1H),7.53(t,J＝7.8Hz,1H),7.69(d,J＝7.6Hz,1H),8.15(d,J＝8.4Hz,1H),8.23(s,1H).
第三步：化合物19-G 3-((烯丙氧基)甲基)苯胺
0℃下向含有化合物19-F 1-((烯丙氧基)甲基)-3-硝基苯(500mg,2.59mmol)的甲醇(5mL)-二氯甲烷(5mL)溶液中加入二水氯化亚锡(2.34g,10.35mmol)。反应混合物缓慢升至室温，搅拌反应12小时。TLC监测反应完全。反应混合物浓缩，剩余物分配于二氯甲烷(10mL)和碳酸钠水溶液(2N,20mL)中。混合物经滤纸过滤，母液中分离出有机层，水层用二氯甲烷(10mLx3)萃取。合并有机层，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩所得粗品经硅胶柱层析(用含33-50％乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱)分离纯化得到无色油状物化合物19-G 3-((烯丙氧基)甲基)苯胺(355mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 164.0[M+H]+
第四步：化合物19-H N2-(3-((烯丙氧基)甲基)苯基)-N4-(丁-3-烯-1-基)-5-氯嘧啶-2,4-二胺
此步的合成参照实施例1化合物2第六步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 345.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ2.40-2.45(m,2H),3.57-3.61(m,2H),4.04(d,J＝5.6Hz,2H),4.52(s,2H),5.13-5.22(m,3H),5.29-5.34(m,2H),5.79-6.01(m,2H),6.97(t,J＝7.6Hz,2H),7.28(t,J＝7.2Hz,1H),7.53(d,J＝8.0Hz,1H),7.62(s,1H),7.89(s,1H).
第五步：化合物19-I(E)-15-氯-5-氧杂-2,11-二氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-7-烯
此步的合成参照实施例1化合物2第七步的合成过程
第六步：化合物19 15-氯-5-氧杂-2,11-二氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷
此步的合成参照实施例2化合物4第一步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 319.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.45-1.51(m,2H),1.58-1.65(m,2H),1.74-1.82(m,2H),3.30-3.33(m,2H),3.54(t,J＝5.8Hz,2H),4.47(s,2H),6.72(d,J＝7.2Hz,1H),6.98(d,J＝8.4Hz,1H),7.14(t,J＝7.6Hz,1H),7.36(t,J＝6.0Hz,1H),7.90(s,1H),8.49(s,1H),9.23(s,1H).
实施例12：化合物20，化合物21的合成路线
第一步：化合物21-C 2-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-硝基苯甲醛
将含有化合物21-A 2-氟-5-硝基苯甲醛(5g,29.6mmol)，碳酸钾(6.12g,44.3mmol)和化合物21-B N-甲基哌嗪(2.96g,29.6mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(100mL)溶液在50℃下搅拌反应15小时。TLC监测反应完全。反应液加水(600mL)淬灭，经滤纸过滤，滤饼用水(300mL x 2)洗涤。收集滤饼，干燥得到黄色固体化合物21-C 2-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-硝基苯甲醛(7g)。
LC_MS:(ES+):m/z 250.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ2.40(s,3H),2.64-2.66(t,J＝4.8Hz,4H),3.33-3.36(t,J＝4.8Hz,4H),7.09-7.11(d,J＝9.2Hz,1H),8.29-8.32(m,1H),8.62-8.63(d,J＝2.8Hz,1H),10.10(s,1H).
第二步：化合物21-D(2-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-硝基苯基)甲醇
0℃下将含有化合物21-C 2-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-硝基苯甲醛(5g,20.0mmol)的无水四氢呋喃(30mL)溶液中加入硼氢化钠(763mg,20.0mmol)。反应液在0℃下搅拌反应2小时。TLC监测反应完全。反应液加水(30mL)稀释，二氯甲烷(3×20mL)萃取。合并有机层，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经硅胶柱层析(用含5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)分离纯化得到黄色固体化合物21-D(2-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-硝基苯基)甲醇(1.3g)。
LC_MS:(ES+):m/z 252.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD):δ2.40(s,3H),2.67(brs,4H),3.10-3.12(t,J＝4.8Hz,4H),4.70(s,2H),7.20-7.22(d,J＝8.8Hz,1H),8.12-8.15(dd,J＝2.8Hz,1H),8.41-8.42(d,J＝3.2Hz,1H).
第三步：化合物21-F 1-(2-((烯丙氧基)甲基)-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪
0℃下向含有化合物21-D(2-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-硝基苯基)甲醇(228mg,0.91mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中加入氢化钠(60％质量分数在煤油中,40mg,1.0mmol)。反应液升至室温，搅拌反应30分钟，然后冷至0℃，逐滴加入化合物21-E 3-溴丙烯(130mg,1.07mmol)。反应液在室温氮气氛围下搅拌反应15小时。TLC监测反应完全。反应液分配于乙酸乙酯(30mL)和冰水(50mL)中。收集有机层，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经硅胶柱层析(用含5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)分离纯化得到黄色固体化合物21-F 1-(2-((烯丙氧基)甲基)-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(242mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 292.2[M+H]+
第四步：化合物21-G 3-((烯丙氧基)甲基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺
此步的合成参照实施例11化合物19第三步的合成过程1H NMR(400MHz,CDCl3):δ2.38(s,3H),2.59(brs,4H),2.88-2.90(t,J＝4.4Hz,4H),3.49(brs,2H),4.05-4.06(d,J＝5.6Hz,2H),5.55(s,2H),5.19-5.22(d,J＝10.4Hz,1H),5.30-5.34(m,1H),5.92-6.02(m,1H),6.59-6.61(dd,J＝2.4Hz,1H),6.81-6.82(d,J＝2.4Hz,1H),6.96-6.98(d,J＝8.4Hz,1H).
第五步：化合物21-H N2-(3-((烯丙氧基)甲基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N4-(丁-3-烯-1-基)-5-氯嘧啶-2,4-二胺
此步的合成参照实施例1化合物2第六步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 443.1[M+H]+.
第六步：化合物20(E)-15-氯-34-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-氧杂-2,11-二氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一环-7-烯
此步的合成参照实施例1化合物2第七步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 415.3[M+H]+
第七步：化合物21 15-氯-34-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-氧杂-2,11-二氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一环
此步的合成参照实施例2化合物21第一步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 417.1[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.47-1.53(m,2H),1.62-1.63(m,2H),1.77-1.83(m,2H),2.22(s,3H),2.44-2.47(m,4H),2.75-2.77(t,J＝8.4Hz,4H),3.31(s,2H),3.58-3.60(t,J＝5.6Hz,2H),4.51(s,2H),6.95-7.00(m,2H),7.28-7.31(t,J＝6.0Hz,1H),7.86(s,1H),8.53(s,1H),9.10(s,1H).
实施例13：化合物22的合成路线
第一步：化合物22-A二叔丁基25-氯-16-甲基-3,5,10-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(1,3)-二苯环癸烷-5,10-二羧酸盐
此步的合成参照实施例2化合物4第一步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 580.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.16(s,9H),1.38(s,12H),1.53-1.58(m,1H),2.23(s,3H),3.51-3.81(m,4H),6.75-6.78(m,1H),7.05-7.08(m,1H),7.19-7.26(m,3H),7.33-7.35(m,1H),8.34(s,1H),8.64(s,1H),10.09(s,1H).
第二步：化合物22 25-氯-16-甲基-3,5,10-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(1,3)-二苯环癸烷
此步的合成参照实施例5化合物8第六步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 380.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ1.48-1.78(m,6H),2.23(s,3H),3.17(t,J＝7.2Hz,2H),3.28-3.34(m,2H),6.27-6.35(m,2H),6.69-6.72(m,1H),6.85(d,J＝2.8Hz,1H),7.02-7.06(m,2H),7.15(s,1H),8.05(t,J＝2.0Hz,1H),8.36(s,1H).
实施例14：化合物23，化合物24的合成路线
第一步：化合物23叔丁基2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-5-羧酸盐
向含有化合物9-F叔丁基(Z)-15-氯-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-8-烯-5-羧酸盐(50mg，130.38umol)的甲醇溶液中加入钯/炭(50mg)。反应液在20℃氢气球氛围下搅拌反应12小时。LCMS监测反应完全。反应液通过硅藻土过滤，剩余物经Pre-TLC(用含50％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)分离纯化得到棕色固体化合物23叔丁基2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-5-羧酸盐(25.0mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 384.2[M+H]+.
第二步：化合物24 2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷
将含有化合物23叔丁基2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-5-羧酸盐(15mg，52.9umol)的氯化氢/1,4-二氧六环溶液(1mL)在25℃下搅拌反应2小时。LCMS监测反应完全。反应液减压浓缩得到棕色固体化合物24 2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷(11.0mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 284.2[M+H]+.
实施例15：化合物25的合成路线
第一步：化合物25-B N-烯丙基-2,5-二氯-N-甲基嘧啶-4-胺
将化合物25-A(150mg,0.74mmol)溶解在四氢呋喃(25mL)溶液中,冰浴条件下分批加入氢化钠(31mg,0.77mmol,60％质量分数在煤油中)。继续在冰浴条件下搅拌20分钟，然后滴加碘甲烷(228mg,0.1mL,1.60mmol),维持冰水浴继续搅拌3个小时。TLC点板检测原料消失，反应液缓慢用饱和氯化铵溶液淬灭。乙酸乙酯(25mLx2)萃取，合并有机层，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗产品经硅胶柱层析(用含0％-15％乙酸乙酯的石油醚洗脱)分离纯化得到黄色油状物化合物25-B N-烯丙基-2,5-二氯-N-甲基嘧啶-4-胺(130mg)。LC_MS:(ES+):m/z 217.9[M+H]+
第二步：化合物25-C叔丁基(3-((4-(烯丙基(甲基)氨基)-5-氯嘧啶-2-基)氨基)苯甲基)(丁-3-烯-1-基)氨基甲酸酯
向含有化合物25-C N-烯丙基-2,5-二氯-N-甲基嘧啶-4-胺(130mg,0.60mmol)和化合物9-D(166mg,0.6mmol)的二氧六环(2.5mL)溶液中加入[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(44mg,0.06mmol)和碳酸铯(587mg，1.8mmol)。反应液在110℃氮气氛围下搅拌反应4.5小时。LCMS监测反应完全。减压旋蒸除去反应溶剂，然后加入水(20mL)，乙酸乙酯(20mLx2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗产物经硅胶柱层析(用含10％-20％乙酸乙酯的石油醚洗脱)分离纯化得到无色油状物化合物25-C叔丁基(3-((4-(烯丙基(甲基)氨基)-5-氯嘧啶-2-基)氨基)苯甲基)(丁-3-烯-1-基)氨基甲酸酯(65mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 458.1[M+H]+
第三步：化合物25-D叔-丁基(3-((4-(烯丙基(甲基)氨基)-5-氯嘧啶-2-基)(叔丁氧基羰基)氨基)苯甲基)(丁-3-烯-1-基)氨基甲酸酯
向含有化合物25-C叔丁基(3-((4-(烯丙基(甲基)氨基)-5-氯嘧啶-2-基)氨基)苯甲基)(丁-3-烯-1-基)氨基甲酸酯(152mg,0.33mmol),三乙胺(42mg,0.42mmol)和4-二甲氨基吡啶(8mg,0.07mmol)的二氯甲烷(3.0mL)溶液中加入二碳酸二叔丁酯(91mg,0.42mmol)。反应液在25℃条件下搅拌反应4小时。TLC监测反应完全。将反应溶剂旋蒸浓缩。剩余物经硅胶柱层析(用含0％-15％乙酸乙酯的石油醚洗脱)分离纯化得到浅黄色油状物化合物25-D叔丁基(3-((4-(烯丙基(甲基)氨基)-5-氯嘧啶-2-基)(叔丁氧基羰基)氨基)苯甲基)(丁-3-烯-1-基)氨基甲酸酯(146mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 558.2[M+H]+
第四步：化合物25-E二叔丁基(Z)-15-氯-11-甲基-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-8-烯-2,5-二羧酸酯
向含有化合物25-D叔丁基(3-((4-(烯丙基(甲基)氨基)-5-氯嘧啶-2-基)(叔丁氧基羰基)氨基)苯甲基)(丁-3-烯-1-基)氨基甲酸酯(146mg,0.26mmol)的二氯甲烷(75mL)溶液中加入Grubbs二代催化剂(33mg,0.04mmol)。反应液在45℃氮气氛围下搅拌反应1.0小时。TLC监测反应完全。反应液浓缩。剩余物经硅胶柱层析(用含0％-25％乙酸乙酯的石油醚洗脱)分离纯化得到棕褐色固体化合物25-E二叔丁基(Z)-15-氯-11-甲基-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-8-烯-2,5-二羧酸酯(124mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 530.2[M+H]+
第五步：化合物25-F二叔丁基15-氯-11-甲基-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-2,5-二羧酸酯
在氮气氛围下向化合物25-E二叔丁基(Z)-15-氯-11-甲基-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-8-烯-2,5-二羧酸酯(124mg,0.23mmol)的甲醇(25mL)溶液中加入二氧化铂(20mg,0.09mmol)和醋酸(50mg)。反应体系用氢气置换三次，在25℃氢气球氛围下搅拌反应1.0小时。TLC监测反应完全。将大部分反应溶剂旋蒸掉，浓缩的反应液用饱和碳酸氢钠调节pH＝7-8,加水稀释(30mL)，乙酸乙酯(25mL x 2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。剩余物经硅胶柱层析(用含0％-25％乙酸乙酯的石油醚洗脱)分离纯化得到白色固体化合物25-F二叔丁基15-氯-11-甲基-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-2,5-二羧酸酯(43mg)。
LC_MS:(ES+):532.3[M+H]+
第六步：化合物25 15-氯-11-甲基-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷
向含有化合物25-F二叔丁基15-氯-11-甲基-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-2,5-二羧酸酯(43mg,0.08mmol)的二氯甲烷(1mL)溶液中加入三氟醋酸(1.0mL)。反应液在25℃搅拌反应1.5小时。LCMS监测反应完全。反应液减压浓缩然后高真空干燥。剩余物加入甲醇(1mL)，搅拌条件下用饱和碳酸氢钠调节pH＝7-8，悬浊物过滤，水洗滤饼(5mL)，滤饼在油泵条件下高真空干燥。得到白色固体化合物25 15-氯-11-甲基-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷(25.2mg)。
LC_MS:(ES+):332.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.31(s,1H),8.11(s,1H),7.97(s,1H),7.24(t,J＝0.8Hz,1H),7.06(d,J＝0.8Hz,1H),6.94(d,J＝0.8Hz,1H),3.88(s,2H),3.57-3.52(m,2H),3.27(s,3H),2.58(t,J＝0.8Hz,2H),1.70-1.59(m,4H),1.53-1.42(m,2H).
实施例16：化合物26的合成路线:
第一步：化合物26-C 2,5-二氯-4-(2-甲基-5-硝基苯基)嘧啶
此步的合成参照实施例8化合物12第七步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 285.0[M+H]+.
第二步：化合物26-E(3-((5-氯-4-(2-甲基-5-硝基苯基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯
此步的合成参照实施例1化合物2第六步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 456.1[M+H]+.
第三步：化合物26-F(3-((4-(5-氨基-2-甲基苯基)-5-氯嘧啶-2-基)氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯
此步的合成参照实施例1化合物2第四步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 426.2[M+H]+.
第四步：化合物26-G(3-(2-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)-4-甲基苯基)氨基甲酸叔丁酯
向含有化合物26-F(3-((4-(5-氨基-2-甲基苯基)-5-氯嘧啶-2-基)氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(700mg,1.643mmol)的乙醇(5mL)溶液中加入二碳酸二叔丁酯(430.43mg,1.972mmol)，反应液在室温下搅拌反应14小时。TLC监测反应完全。反应液浓缩，所得剩余物经硅胶柱层析(用含0％-25％乙酸乙酯的石油醚洗脱)分离纯化得到黄色固体化合物26-G(3-(2-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)-4-甲基苯基)氨基甲酸叔丁酯(710mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 527.3[M+H]+.
第五步:化合物26-I二叔丁基-25-氯-16-甲基-8-氧杂-3,5,11-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(1,3)-二苯环十一烷-5,11-二羧酸酯
向含有化合物26-G(3-(2-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)苯基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)-4-甲基苯基)氨基甲酸叔丁酯(100mg)和叔丁醇钠(36.52mg,0.38mmol)的乙腈(10mL)溶液中加入化合物26-H 1-溴-2-(2-溴乙氧基)乙烷(44.06mg,0.19mmol)，反应液在60℃下搅拌反应8小时。TLC监测反应完全。反应液加水(10mL)淬灭，二氯甲烷(10mLx2)萃取。合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩。剩余物经Pre-TLC(用含25％乙酸乙酯的石油醚洗脱)分离纯化得到白色固体化合物26-I二叔丁基-25-氯-16-甲基-8-氧杂-3,5,11-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(1,3)-二苯环十一烷-5,11-二羧酸酯(5mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 618.3[M+Na]+.
第六步：化合物26 25-氯-16-甲基-8-氧杂-3,5,11-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(1,3)-二苯环十一烷
向含有化合物26-I二叔丁基-25-氯-16-甲基-8-氧杂-3,5,11-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(1,3)-二苯环十一烷-5,11-二羧酸酯(5mg,0.0084mmol)的甲醇(0.5mL)溶液中加入盐酸/二氧六环(0.5mL)溶液。反应液在室温下搅拌反应5小时。TLC监测反应完全。反应液浓缩，得到黄色固体化合物26 25-氯-16-甲基-8-氧杂-3,5,11-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(1,3)-二苯环十一烷(5mg,盐酸盐)。
LC_MS:(ES+):m/z 396.1[M+H]+.
实施例17：化合物27的合成路线:
第一步：化合物27-B 1-(丁-3-烯-1-基)-4-硝基-1氢-吡唑
室温下将4-溴丁-1-烯(1.31g,9.73mmol)缓慢滴加到化合物27-A(1.0g，8.84mmol)与碳酸钾(3.05g，22.1mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)混合溶液中,然后室温下继续搅拌12个小时。TLC点板检测原料消失，反应液搅拌下加入水(50mL),乙酸乙酯(30mLx 2)萃取，合并有机层，饱和食盐水(30mL x 2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗产品高真空干燥得白色固体化合物27-B 1-(丁-3-烯-1-基)-4-硝基-1氢-吡唑(1.45g)。
第二步：化合物27-C 1-(丁-3-烯-1-基)-1氢-吡唑-4-胺
向含有水(5mL)，氯化铵(3.71g，69.36mmol)和化合物27-B(1.45g,8.67mmol)的乙醇(20mL)溶液中在搅拌下加入铁粉(2.42g,43.37mmol)。反应液在110℃氮气氛围下搅拌反应4.5小时。LCMS监测反应完全。减压旋蒸反应溶剂，然后加入水(30mL)与乙酸乙酯(30mL)，分离出有机相，水相用乙酸乙酯(30mL x 2)萃取。合并有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗产物经硅胶柱层析(用含2.5％-3.3％甲醇的二氯甲烷)洗脱得到棕褐色油状物化合物27-C 1-(丁-3-烯-1-基)-1氢-吡唑-4-胺(370mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.17(s,1H),7.02(s,1H),5.82-5.72(m,1H),5.13-5.04(m,2H),4.07(t,J＝8.0Hz,2H),2.89(brs,2H),2.63-2.55(m,2H).
第三步：化合物27-D叔丁基烯丙基(3-(2-((1-(丁-3-烯-1-基)-1氢-吡唑-4-基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)-4-甲基苯基)氨基甲酸酯
向含有化合物12-K(170mg,0.43mmol)，S-phos(37mg，0.09mmol)和化合物27-C(1.45g,0.09mmol)的1,4-二氧六环(3.5mL)溶液中加入Pd2(dba)3(37mg,0.04mmol)与碳酸铯(280mg,0.81mmol)。反应液在搅拌状态下用氮气置换三次，然后110℃氮气氛围下搅拌反应5小时。LCMS监测反应完全。减压旋蒸反应溶剂，然后加入水(30mL)与乙酸乙酯(30mL)，分离出有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗产物经硅胶板(用含30％乙酸乙酯的石油醚)分离纯化洗脱得到黄色油状物化合物27-D叔丁基烯丙基(3-(2-((1-(丁-3-烯-1-基)-1氢-吡唑-4-基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)-4-甲基苯基)氨基甲酸酯(150mg)。
LC-MS:(ES+):m/z 495.3[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.43(s,1H),7.83(s,1H),7.50(s,1H),7.26-7.12(m,4H),6.00-5.88(m,1H),5.83-5.73(m,1H),5.20-5.04(m,4H),4.25(dt,J＝3.0,4.0Hz,2H),4.17-4.13(m,2H),2.62(q,J＝8.0Hz,2H),2.23(s,3H),1.45(s,9H).
第四步：化合物27-E叔丁基烯丙基(3-(2-((1-(丁-3-烯-1-基)-1氢-吡唑-4-基)(叔丁氧基羰基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)-4-甲基苯基)氨基甲酸酯
此步的合成参照实施例15化合物25第三步的合成过程
LC-MS:(ES+):m/z 595.3[M+H]+.
第五步：化合物27-F二叔丁基(44E,7Z)-25-氯-16-甲基-41氢-3,10--二氮杂-2(4,2)-嘧啶-4(4,1)-吡唑-1(1,3)-苯环十烷-7-烯-3,10-二羧酸酯
此步的合成参照实施例15化合物25第四步的合成过程
LC-MS:(ES+):m/z 567.2[M+H]+.
第六步：化合物27(44E,7Z)-25-氯-16-甲基-41氢-3,10-二氮杂-2(4,2)-嘧啶-4(4,1)-吡唑-1(1,3)-苯环十烷-7-烯
此步的合成参照实施例15化合物25第六步的合成过程
LC-MS:(ES+):367.1[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.80(s,1H),8.47(s,1H),8.18(s,1H),7.26(s,1H),6.99(d,J＝8.0Hz,1H),6.74(dd,J＝4.0,8.0Hz,1H),6.52(s,1H),6.08(brs,1H),4.23-4.18(m,1H),4.11-4.00(m,1H),3.70-3.50(m,2H),2.50-2.25(m,2H),2.18(s,3H).
实施例18：化合物28的合成路线:
第一步：化合物28-A二叔丁基(E)-25-氯-16-甲基-41氢-3,10-二氮杂-2(4,2)-嘧啶-4(4,1)-吡唑-1(1,3)-苯并环十烷-3,10-二羧酸酯
此步的合成参照实施例15化合物25第五步的合成过程
LC-MS:(ES+):m/z 569.3[M+H]+.
第二步：化合物28(E)-25-氯-16-甲基-41氢-3,10-二氮杂-2(4,2)-二氮杂-2(4,2)-嘧啶-4(4,1)-吡唑-1(1,3)-苯环十烷
此步的合成参照实施例15化合物25第六步的合成过程
LC-MS:(ES+):m/z 369.1[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.81(s,1H),8.48(s,1H),8.20(s,1H),7.32(s,1H),6.98(d,J＝8.0Hz,1H),6.67(dd,J＝4.0,8.0Hz,1H),6.56(d,J＝4.0Hz,1H),5.95-5.85(m,1H),4.11-4.06(m,2H),3.11-2.93(m,2H),2.17(s,3H),2.00-1.75(m,2H),1.55-1.49(m,1H),1.25-1.10(m,2H),1.05-0.95(m,1H).
实施例19：化合物29的合成路线:
第一步：化合物29-B叔丁基烯丙基(3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-4-甲基苯基)氨基甲酸酯
室温下将化合物12-I(0.50g,1.34mmol)加入到A(0.56g，3.35mmol)与Pd(PPh3)Cl2(91mg，0.13mmol)的1,2-二甲氧基乙烷(10mL)混合溶液中,然后加入碳酸钠溶液(2.0M,5mL)室温下用氮气置换三次,反应液在85℃氮气氛围下搅拌反应2.5小时。TLC点板检测原料消失，反应液加入水(30mL),乙酸乙酯(30mL)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗产物经硅胶柱层析(用含0％-7％乙酸乙酯的石油醚)洗脱得到无色油状物化合物29-B叔丁基烯丙基(3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-4-甲基苯基)氨基甲酸酯(475mg)。
LC-MS:(ES+):m/z 423.2[M+EtOH]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.56(s,1H),7.33-7.27(m,3H),5.98-5.88(m,1H),5.21-5.12(m,2H),4.25(dt,J＝2.0,4.0Hz,2H),2.33(d,J＝4.0Hz,3H),1.49(s,9H).
第二步：化合物29-C叔丁基烯丙基(3-(2-((3-(烯丙基(叔丁氧基羰基)氨基)苯基)氨基)-5-氟嘧啶-4-基)-4-甲基苯基)氨基甲酸酯
/>
此步的合成参照实施例15化合物25第二步的合成过程
LC-MS:(ES+):m/z 612.3[M+Na]+.
第三步：化合物29-D叔丁基烯丙基(3-((4-(5-(烯丙基(叔丁氧基羰基)氨基)-2-甲基苯基)-5-氟嘧啶-2-基)(叔丁氧基羰基)氨基)苯基)氨基甲酸酯
此步的合成参照实施例15化合物25第三步的合成过程
LC-MS:(ES+):m/z 690.0[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.60(s,1H),7.30-7.26(m,2H),7.25-7.19(m,2H),7.18-7.13(m,2H),7.09(dt,J＝4.0,8.0Hz,1H),5.94-5.84(m,2H),5.18-5.08(m,4H),4.21(t,J＝4.0Hz,4H),2.16(s,3H),1.46(s,9H),1.45(s,9H),1.41(s,9H).
第四步：化合物29-E三叔丁基(Z)-25-氟-16-甲基-3,5,10-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(1,3)-二苯环十烷-7-烯-3,5,10-三羧酸酯
此步的合成参照实施例15化合物25第四步的合成过程
LC-MS:(ES+):m/z 662.3[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.65(d,J＝2.0Hz,1H),7.37-7.30(m,2H),7.21-7.12(m,3H),7.04(s,1H),6.83(d,J＝4.0Hz,1H),5.75-5.50(m,2H),4.42(d,J＝4.0Hz,2H),4.08(d,J＝4.0Hz,2H),2.29(d,J＝4.0Hz,3H),2.16(s,3H),1.48(s,9H),1.46(s,9H),1.43(s,9H).
第五步：化合物29(Z)-25-氟-16-甲基-3,5,10-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(1,3)-二苯环十烷-7-烯
此步的合成参照实施例15化合物25第六步的合成过程
LC-MS:(ES+):m/z 362.1[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.41(s,1H),8.53(d,J＝2.0Hz,1H),7.67(s,1H),7.00(d,J＝8.0Hz,1H),6.88(t,J＝8.0Hz,1H),6.75(dd,J＝4.0,8.0Hz,1H),6.61(d,J＝4.0Hz,1H),6.43(d,J＝8.0Hz,1H),6.25(d,J＝8.0Hz,1H),6.09(t,J＝4.0Hz,1H),5.86(t,J＝4.0Hz,1H),5.40(s,2H),3.70(s,2H),3.54(s,2H),2.14(d,J＝4.0Hz,3H).
实施例20：化合物30的合成路线:
第一步：化合物30-A三叔丁基25-氟-16-甲基-3,5,10-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(1,3)-二苯环十烷-3,5,10-三羧酸酯
此步的合成参照实施例15化合物25第五步的合成过程
LC-MS:(ES+):m/z 664.4[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.64(d,J＝4.0Hz,1H),7.32-7.29(m,1H),7.28-7.26(m,2H),7.20-7.15(m,2H),7.10-7.07(m,1H),6.80(brs,1H),3.69(t,J＝8.0Hz,2H),3.62(t,J＝8.0Hz,2H),2.32(d,J＝4.0Hz,3H),1.58-1.35(m,31H).
第二步：化合物30 25-氟-16-甲基-3,5,10-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(1,3)-二苯环十烷
此步的合成参照实施例15化合物25第六步的合成过程
LC-MS:(ES+):m/z 364.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.45(s,1H),8.53(d,J＝4.0Hz,1H),7.83(s,1H),6.99(d,J＝8.0Hz,1H),6.92-6.85(m,2H),6.69(dd,J＝4.0,8.0Hz,1H),6.35(d,J＝8.0Hz,1H),6.22(dd,J＝2.0,8.0Hz,1H),5.54(t,J＝6.0Hz,1H),5.29(t,J＝6.0Hz,1H),3.19-3.17(m,3H),3.10-2.95(m,2H),2.10(d,J＝4.0Hz,3H),1.60-1.45(m,4H).
实施例21：化合物31的合成路线:
第一步：化合物31-C 1-(丁-3-烯基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1氢吡唑
在250ml单口瓶中，将化合物31-A 4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(5g,25.77mmol),化合物31-B 4-溴-1-丁烯(5.22g,38.66mmol)和碳酸铯(16g,51.33mmol)于DMF(50ml)中回流2小时。TLC监测反应结束，将反应液倒入水(500ml)中并用乙酸乙酯(100ml)萃取8次。合并有机相，用饱和食盐水洗2次，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到棕色油状液体粗品化合物31-C 1-(丁-3-烯基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1氢吡唑(4.3g)，未经进一步纯化直接用于下一步反应。
第二步：化合物31-E 4-(1-(丁-3-烯基))-1氢吡唑-4-基)-2,5-二氯嘧啶
此步的合成参照实施例8化合物12第七步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 269.15[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.50(s,1H),8.41(s,1H),8.35(s,1H),5.80-5.72(m,1H),5.12-5.08(m,2H),4.26(t,J＝7.2Hz,2H),2.69-2.67(m,2H).
第三步：化合物31-G叔丁基烯丙基(3-((4-(1-(丁-3-烯-1-基)-1H-吡唑-4-基)-5-氯嘧啶-2-基)氨基)苯基)氨基甲酸酯
此步的合成参照实施例1化合物2第六步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 481.55[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.35-8.30(m,3H),7.56(t,J＝2.0Hz,1H),7.48-7.45(m,1H),7.30-7.26(m,1H),7.12(s,1H),6.94-6.92(m,1H),5.99-5.90(m,1H),5.84-5.73(m,1H),5.21-5.08(m,4H),4.27-4.24(m,4H),2.71-2.65(m,2H),1.46(s.9H).
第四步：化合物31-H叔丁基(3-(烯丙基(叔丁氧基羰基)氨基)苯基)(4-(1-(丁-3-烯-1-基)-1H-吡唑-4-基)-5-氯嘧啶-2-基)氨基甲酸酯
此步的合成参照实施例15化合物25第三步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 581.45[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.53(s,1H),8.20(d,J＝1.6Hz,2H),7.33-7.29(m,1H),7.17-7.14(m,2H),7.08-7.06(m,1H),5.93-5.84(m,1H),5.80-5.70(m,1H),5.14-5.06(m,4H),4.23-4.20(m,4H),2.67-2.62(m,2H),1.46(s.9H),1.40(s.9H).
第五步：化合物31-I二叔丁基(14Z,7Z)-25-氯-11H-3,5-二氮杂-2(4,2)-嘧啶-1(4,1)-吡唑-4(1,3)-苯并环十烷-7-烯-3,5-二羧酸酯
此步的合成参照实施例15化合物25第四步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 553.35[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.74(s,1H),8.21(s,1H),7.62(s,1H),7.41-7.38(m,1H),7.32-7.30(m,1H),7.16-7.15(m,1H),7.02-7.00(m,1H),5.57-5.53(m,2H),4.33-4.32(m,2H),4.23-4.21(m,2H),2.45-2.44(m,2H),1.42(s,9H),1.37(s,9H).
第六步：化合物31(14Z,7Z)-25-氯-11H-3,5-二氮杂-2(4,2)-嘧啶-1(4,1)-吡唑-4(1,3)-苯并环十烷-7-烯
此步的合成参照实施例15化合物25第六步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 353.15[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.47(s,1H),8.43(s,1H),8.33(s,1H),8.12(s,1H),7.26(s,1H),6.92(t,J＝8.0Hz,1H),6.34-6.32(m,2H),5.86(t,J＝6.0Hz,1H),5.76-5.70(m,1H),5.55-5.51(m,1H),4.31-4.29(m,2H),3.60(s,2H),2.52-2.50(m,2H).
实施例22：化合物32的合成路线:
第一步：化合物32-A二叔丁基(Z)-25-氯-11H-3,5-二氮杂-2(4,2)-嘧啶-1(4,1)-吡唑-4(1,3)-苯并环十烷-3,5-二羧酸酯
此步的合成参照实施例14化合物23第一步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 555.35[M+H]+.
第二步：化合物32(Z)-25-氯-11H-3,5-二氮杂-2(4,2)-嘧啶-1(4,1)-吡唑-4(1,3)-苯并环十烷
此步的合成参照实施例15化合物25第六步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 355.10[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.49(s,1H),8.49(s,1H),8.46(s,1H),8.17(s,1H),7.52(s,1H),6.89(t,J＝8.0Hz,1H),6.30-6.28(m,1H),6.21-6.18(m,1H),5.76(t,J＝6.4Hz,1H),2.89-2.83(m,2H),1.82-1.79(m,2H),1.62-1.60(m,2H),0.86-0.84(m,2H).
实施例23：化合物33的合成路线:
第一步：化合物33-A 1-(丁-3-烯基)-3-氯-4-硝基-1H-吡唑
准备一个50ml的三口瓶和温度计，将化合物27-B 1-(1-丁烯基)-4-硝基吡唑(580mg,3.47mmol)加入到干燥的四氢呋喃(20ml)中，置换氮气三次。控制温度在-78℃，缓慢滴加Li-HMDS(8.7ml,8.68mmol,1M)。在-78℃温度下反应30min，然后将六氯乙烷(1.2g,5.2mmol)的四氢呋喃(5ml)溶液在-78℃下缓慢滴加到反应液中。保持温度-78℃反应2.5小时。TLC和LCMS监控反应完全。加入水(20ml)淬灭反应，用乙酸乙酯(30ml)萃取3次。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干得到黄色油状物粗品化合物33-A 1-(丁-3-烯基)-3-氯-4-硝基-1H-吡唑(853mg)，未经进一步纯化直接进行下一步反应。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.17(s,1H),5.79-5.70(m,1H),5.11-5.06(m,2H),4.27(t,J＝6.8Hz,2H),2.66-2.61(m,2H).
第二步：化合物33-B 1-(丁-3-烯基)-3-氯-1H-吡唑-4-胺
此步的合成参照实施例1化合物2第四步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 171.75[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.21(s,1H),5.82-5.71(m,1H),5.10-5.04(m,2H),4.10(t,J＝7.6Hz,2H),2.92(brs,2H),2.57-2.52(m,2H).
第三步：化合物33-C 4-(1-(丁-3-烯基))-1H-吡唑-4-基)-氮-(1-(丁-3-烯基)-3-氯-1H-吡唑-4-基)-5-氯嘧啶-2-胺
此步的合成参照实施例15化合物25第三步的合成过程1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.34(s,1H),8.30(s,1H),8.26(s,1H),8.06(s,1H),6.54(s,1H),5.83-5.75(m,2H),5.14-5.07(m,4H),4.27-4.18(m,4H),2.68-2.61(m,4H).
第四步：化合物33-D叔丁基4-(1-(丁-3-烯基))-1H-吡唑-4-基)-5-氯嘧啶-2-基)(1-(丁-3-烯基))-3-氯-1H-吡唑-4-基)氨基甲酸酯
此步的合成参照实施例15化合物25第三步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 504.00[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.54(s,1H),8.23(s,1H),8.21(s,1H),7.56(s,1H),5.82-5.71(m,2H),5.12-5.05(m,4H),4.24-4.20(m,4H),2.66-2.61(m,4H),1.48(s,9H).
第五步：化合物33-E叔丁基(14Z,44E,7Z)-25,43-氯-11H,41H-3-氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(4,1)-双吡唑环十烷-7-烯-3-氨基甲酸酯
此步的合成参照实施例15化合物25第四步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 477.65[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.59(s,1H),8.28(s,1H),7.83(s,1H),7.46(s,1H),5.67-5.61(m,2H),4.44-4.35(m,2H),4.27-4.14(m,2H),2.74-2.57(m,4H),1.49(s,9H).
第六步：化合物33-F叔丁基(14Z,44E,7Z)-25,43-氯-11H,41H-3-氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(4,1)-双吡唑环十烷-3-氨基甲酸酯
此步的合成参照实施例14化合物23第一步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 478.8[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.60(s,1H),8.22(s,1H),7.68(s,1H),7.53(s,1H),4.36-4.25(m,2H),4.14-4.07(m,2H),2.08-1.99(m,2H),1.76-1.65(m,2H),1.51(s,9H),1.47-1.33(m,4H).
第七步：化合物33(14Z,44E,7Z)-25,43-氯-11H,41H-3-氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(4,1)-双吡唑环十烷
此步的合成参照实施例15化合物25第六步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 377.95[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.88(s,1H),8.40(s,1H),8.08(s,1H),7.82(s,1H),7.53(s,1H),4.30-4.05(m,4H),2.04-1.87(m,2H),1.77-1.64(m,2H),1.46-1.34(m,2H),1.21-1.12(m,2H).
实施例24：化合物34的合成路线:
第一步：化合物34-C 1-溴-3-(4-溴丁氧基)苯
在100ml的单口烧瓶中将化合物34-A间溴苯酚(1g,1.0eq)和化合物34-B1,4-二溴丁烷(6.24g,5.0eq)溶于DMF(12ml)中，室温搅拌下加入碳酸钾(4g,5.0eq)，升温至70℃反应20分钟。TLC监测反应结束，冷却到室温，将反应液倒入100ml水中，用乙酸乙酯(50ml)萃取3次。合并有机相，用100ml水反洗2次，饱和氯化钠洗1次，然后干燥浓缩，粗品用硅胶层析柱(石油醚:乙酸乙酯＝40:1)分离纯化得到无色油状物化合物34-C 1-溴-3-(4-溴丁氧基)苯(2.36g,纯度60％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.15-7.11(m,1H),7.08-7.04(m,2H),6.83-6.80(m,1H),3.98(t,J＝6.0Hz,2H),3.50-3.46(m,2H),2.10-2.07(m,2H),1.97-1.92(m,2H).
第二步：化合物34-E 4-(3-溴苯氧基)-N-(3-硝基苄基)丁-1-胺
在100ml的单口烧瓶中将化合物34-C 1-溴-3-(4-溴丁氧基)苯(2.36g,1.0eq)，化合物34-D 3-硝基苄胺盐酸盐(4.36g,3.0eq)溶于20毫升DMF中，室温搅拌下加入碳酸钾(8.5g,8.0eq)，碘化钾(1.92g，1.5eq)，40℃下搅拌3小时。TLC监测反应结束，冷却到室温，将反应液倒入160ml水中，用乙酸乙酯(40ml)萃取2次。合并有机相，用150ml水反洗1次，饱和氯化钠洗1次，然后干燥浓缩。粗品用硅胶层析柱(石油醚:乙酸乙酯:7M氨的甲醇溶液＝10:1:0.1)分离纯化得到淡黄色油状物化合物34-E 4-(3-溴苯氧基)-N-(3-硝基苄基)丁-1-胺(1.18g)。LC_MS:(ES+):m/z 380.00[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.22(m,1H),8.12-8.10(m,1H),7.68(d,J＝7.6Hz,1H),7.49(t,J＝8.0Hz,1H),7.12(t,J＝8.2Hz,1H),7.07-7.05(m,1H),7.04-7.03(m,1H),6.82-6.79(m,1H),3.96(t,J＝6.4Hz,2H),3.91(s,2H),2.71(t,J＝7.0Hz,2H),1.88-1.83(m,2H),1.73-1.66(m,2H).
第三步：化合物34-F(4-(3-溴苯氧基)丁基)(3-硝基苄基)氨基甲酸叔丁酯
在100ml的单口烧瓶中将化合物34-E 4-(3-溴苯氧基)-N-(3-硝基苄基)丁-1-胺(1.18g,1.0eq)，三乙胺(380mg，1.2eq)溶于20毫升二氯甲烷中，室温搅拌下加入Boc2O(815mg,1.2eq)，然后室温下搅拌4小时。TLC监测反应结束,反应液倒入30ml水中，用20ml二氯甲烷萃取2次。合并有机相，用30ml水反洗，饱和氯化钠水溶液(30ml)洗1次，然后干燥浓缩。粗品用硅胶层析柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝6:1)得到无色油状物化合物34-F(4-(3-溴苯氧基)丁基)(3-硝基苄基)氨基甲酸叔丁酯(1.3g)。
LC_MS:(ES+):m/z 380.55[M-100]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.14-8.12(m,2H),7.57(brs,1H),7.52-7.48(m,2H),7.14-7.10(m,1H),7.08-7.06(m,1H),7.02-7.01(m,1H),6.80-6.78(m,1H),4.53(brs,2H),3.93(t,J＝4.8Hz,2H),3.28-3.27(m,2H),1.75-1.74(m,4H),1.48-1.45(m,9H).
第四步：化合物34-G(3-硝基苄基)(4-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)苯氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯
此步的合成参照实施例8化合物12第六步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 526.90[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.12(d,J＝7.6Hz,2H),7.57(brs,1H),7.51-7.47(m,1H),7.39(d,J＝7.2Hz,1H),7.30-7.28(m,2H),6.97-6.95(m,1H),4.57-4.47(m,2H),3.98(t,J＝5.6Hz,2H),3.34-3.27(m,2H),1.74(brs,4H),1.49-1.45(m,9H),1.34(s,12H).
第五步：化合物34-I(4-(3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)苯氧基)丁基)(3-硝基苄基)氨基甲酸叔丁酯
此步的合成参照实施例8化合物12第七步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 547.10[M+H]+.
第六步：化合物34-J(3-氨基苄基)(4-(3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)苯氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯
此步的合成参照实施例1化合物2第四步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 516.90[M+H]+.
第七步：化合物34-K叔丁基25-氯-11-氧杂-3,6-二氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(1,3)-二苯并环十一烷-6-羧酸盐
此步的合成参照实施例24化合物35第八步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 481.15[M+H]+.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ9.89(s,1H),8.62(s,1H),8.20(brs,1H),7.64-7.62(m,2H),7.43(t,J＝8.0Hz,1H),7.27(t,J＝7.8Hz,1H),7.18-7.16(m,1H),7.10-7.08(m,1H),6.94(d,J＝7.6Hz,1H),4.28(s,2H),4.19(brs,2H),3.17(brs,2H),1.68(brs,4H),1.38(s,9H).
第八步：化合物34 25-氯-11-氧杂-3,6-二氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(1,3)-二苯并环十一烷
此步的合成参照实施例15化合物25第六步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 381.90[M+H]+.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ9.97(s,1H),8.66(s,1H),8.30(s,1H),7.61(m,1H),7.50-7.48(m,1H),7.42(t,J＝7.8Hz,1H),7.36(t,J＝7.8Hz,1H),7.20-7.16(m,3H),4.28(t,J＝5.8Hz,2H),4.06(s,2H),3.04-3.00(m,2H),1.83-1.76(m,4H).
实施例25：化合物35的合成路线:
第一步：化合物35-C 3-((3-硝基苄基)氨基)丙-1-醇
将化合物35-A 3-硝基苯甲醛(3g,19.8mmol),化合物35-B 3-氨基丙-1-醇(1.5g,19.8mmol)和乙酸(2.4g,39.6mmol)的甲醇(30ml)混合物在室温下搅拌30分钟，然后加入氰基硼氢化钠(2.5g,39.6mmol)。将所得混合物在室温下搅拌反应15小时。TLC显示反应完成。将反应混合物浓缩并将剩余物用饱和碳酸氢钠水溶液(30ml)淬灭。水相用乙酸乙酯(20ml×3)萃取。合并有机层，饱和食盐水(30ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得硅胶柱层析分离纯化(用5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)得到淡黄色油状物化合物35-C 3-((3-硝基苄基)氨基)丙-1-醇(3.58g,86％)。
LC_MS:(ES+):m/z 211.00[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ1.74-1.79(m,2H),2.90(t,J＝6.0Hz,2H),3.81(t,J＝5.2Hz,2H),3.92(s,2H),7.52(t,J＝7.6Hz,1H),7.68(d,J＝7.6Hz,1H),8.12-8.17(m,2H).
第二步：化合物35-D(3-羟丙基)(3-硝基苄基)氨基甲酸叔丁酯
0℃下向含有化合物35-C 3-((3-硝基苄基)氨基)丙-1-醇(950mg,4.52mmol)和碳酸钠(958mg,9.04mmol)的四氢呋喃(10ml)和水(10ml)的混合溶液中加入二碳酸二叔丁酯(985mg,4.52mmol)。反应混合物升至室温，搅拌反应2小时。TLC监测反应完全。反应混合物分配于乙酸乙酯(20ml)和水(20ml)中。收集有机层，无水硫酸钠干燥。减压浓缩得到黄色油状物化合物35-D(3-羟丙基)(3-硝基苄基)氨基甲酸叔丁酯(1.25g,crude)，未经进一步纯化，直接用于下一步。
LC_MS:(ES+):m/z 254.80[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ1.46(s,9H),1.70(s,2H),3.39-3.61(m,5H),4.47(s,2H),7.50-7.59(m,2H),8.13-8.15(m,2H).
第三步：化合物35-E 3-((叔丁氧基羰基)(3-硝基苄基)氨基)丙基4-甲基苯磺酸盐
0℃下向含有化合物35-D(3-羟丙基)(3-硝基苄基)氨基甲酸叔丁酯(1.46g,4.71mmol)和三乙胺(953mg,9.42mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入4-甲苯磺酰氯(898mg,4.71mmol)。反应混合物升至室温，搅拌反应14小时。TLC监测反应完全。反应混合物分配于二氯甲烷(20ml)和水(20ml)中。收集有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩所得粗品经硅胶柱层析分离纯化得到无色油状物化合物35-E 3-((叔丁氧基羰基)(3-硝基苄基)氨基)丙基4-甲基苯磺酸盐(1.48g)。
LC_MS:(ES+):m/z 364.9[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ1.44(s,9H),1.90(s,2H),2.45(s,3H),3.27(s,2H),4.04(t,J＝6.0Hz,2H),4.46(s,2H),7.34(d,J＝8.0Hz,2H),7.49-7.54(m,2H),7.77(d,J＝8.4Hz,2H),8.06-8.14(m,2H).
第四步：化合物35-F(3-((3-溴-4-甲基苯基)(叔丁氧基羰基)氨基)丙基)(3-硝基苄基)氨基甲酸叔丁酯
0℃下向含有化合物化合物12-G(3-溴-4-甲基苯基)氨基甲酸叔丁酯的无水N,N-二甲基甲酰胺(10ml)溶液中加入氢化钠(60％在煤油中)(203mg,5.08mmol)，反应混合物在室温下搅拌反应30分钟。然后在0℃下向体系中加入化合物35-E 3-((叔丁氧基羰基)(3-硝基苄基)氨基)丙基4-甲基苯磺酸盐(1.08g,2.54mmol)，反应混合物在室温下搅拌反应15小时。TLC监测反应完全。反应混合物加水(100ml)淬灭，乙酸乙酯(30ml x 2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(100ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经硅胶柱层析分离纯化(用含20％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)得到黄色油状物化合物35-F(3-((3-溴-4-甲基苯基)(叔丁氧基羰基)氨基)丙基)(3-硝基苄基)氨基甲酸叔丁酯(930mg,63％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ1.40(s,9H),1.46(s,9H),1.72-1.75(m,2H),2.38(s,3H),3.19-3.23(m,2H),3.60(t,J＝6.8Hz,2H),4.47(s,2H),6.96-7.00(m,1H),7.16(d,J＝8.0Hz,2H),7.31(s,1H),7.46-7.52(m,2H),8.06-8.12(m,2H).
第五步：化合物35-G叔丁基(3-((叔丁氧羰基)(4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基)氨基)丙基)(3-硝基苄基)氨基甲酸酯
此步的合成参照实施例8化合物12第六步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 725.15[M+H]+
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ1.33(s,12H),1.38(s,9H),1.46(s,9H),1.75(s,2H),2.52(s,3H),3.19-3.24(m,2H),3.62(t,J＝6.4Hz,2H),4.46(s,2H),7.05-7.11(m,2H),7.44-7.52(m,3H),8.07-8.11(m,2H).
第六步：化合物35-I叔丁基(3-((叔丁氧基羰基)(3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-4-甲基苯基)氨基)丙基)(3-硝基苄基)氨基甲酸酯
此步的合成参照实施例8化合物12第七步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 645.95[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ1.39(s,9H),1.44(s,9H),1.75-1.79(m,2H),2.21(s,3H),3.19-3.25(m,2H),3.63(t,J＝4.8Hz,2H),4.47(s,2H),7.07-7.17(m,2H),7.29-7.34(m,1H),7.46-7.52(m,2H),8.05-8.09(m,2H),8.69(s,1H).
第七步：化合物35-J叔丁基3-氨基苄基(3-((叔丁氧基羰基)(3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-4-甲基苯基)氨基)丙基)氨基甲酸酯
此步的合成参照实施例1化合物2第四步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 517.60[M+H]+
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ1.40(s,9H),1.43(s,9H),1.76(s,2H),2.21(s,3H),3.13-3.21(m,2H),3.61-3.66(m,4H),4.30(s,2H),6.50-6.55(m,3H),7.03-7.10(m,2H),7.17(s,1H),7.25(s,1H),8.68(s,1H).
第八步：化合物35-K 25-氯-16-甲基-3,6,10-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(1,3)-二苯环癸烷-6,10-二羧酸二叔丁酯
室温氮气氛围下向含有化合物35-J叔丁基3-氨基苄基(3-((叔丁氧基羰基)(3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-4-甲基苯基)氨基)丙基)氨基甲酸酯(90mg,0.146mmol)，1,1'-双(二苯基膦)二茂铁(49mg,0.088mmol)和碳酸铯(143mg,0.44mmol)的1,4-二氧六环(30ml)溶液中加入四三苯基膦钯(51mg,0.044mmol)，反应体系氮气置换三次。反应混合物在110℃下搅拌反应16小时。TLC监测反应完全。反应混合物过滤，滤液减压浓缩，所得粗品经硅胶柱层析分离纯化(用含25％乙酸乙酯的石油醚洗脱)得到白色固体化合物35-K 25-氯-16-甲基-3,6,10-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(1,3)-二苯环癸烷-6,10-二羧酸二叔丁酯(35mg,41％)。
LC_MS:(ES+):m/z 580.25[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ1.44(s,9H),1.45(s,9H),1.85(s,2H),2.31(s,3H),2.99-3.04(m,1H),3.40-3.48(m,2H),4.06-4.15(m,2H),4.25-4.34(m,1H),6.83-6.85(s,2H),7.23(s,4H),7.30(s,1H),8.20-8.27(m,1H),8.39(s,1H).
第九步：化合物35 25-氯-16-甲基-3,6,10-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(1,3)-二苯环癸烷
此步的合成参照实施例15化合物25第六步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 380.10[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.46-1.56(m,1H),1.70-1.80(m,1H),2.12(s,3H),2.69-2.75(m,1H),3.00-3.04(m,1H),3.40-3.52(m,3H),3.73(d,J＝12.8Hz,1H),5.61-5.65(m,1H),6.66-6.68(m,1H),6.72-6.73(m,1H),6.86(d,J＝7.6Hz,1H),6.96(d,J＝8.0Hz,1H),7.10(d,J＝8.0Hz,1H),7.20(t,J＝7.6Hz,1H),8.58(s,1H),8.65(s,1H),9.91(s,1H).
实施例26：化合物36的合成路线:
第一步：化合物36-C 2-溴-4-(4-溴丁氧基)-1-甲基苯
此步的合成参照实施例24化合物34第一步的合成过程1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.11(d,J＝8.4Hz,1H),7.09(d,J＝2.8Hz,1H),6.76-6.73(m,1H),3.95(t,J＝6.0Hz,2H),3.50-3.48(m,2H),2.32(s,3H),2.07-2.05(m,2H),1.96-1.91(m,2H).
第二步：化合物36-E 4-(3-溴-4-甲基苯氧基)-N-(3-硝基苄基)丁-1-胺
此步的合成参照实施例24化合物34第二步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 392.7[M+H]+.
第三步：化合物36-F(4-(3-溴-4-甲基苯氧基)丁基)(3-硝基苄基)氨基甲酸叔丁酯
此步的合成参照实施例24化合物34第三步的合成过程1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.13-8.07(m,2H),7.57(brs,1H),7.52-7.48(m,1H),7.10(d,J＝8.4Hz,1H),7.05(d,J＝2.4Hz,1H),6.73-6.70(m,1H),4.54-4.50(m,2H),3.91(t,J＝5.4Hz,2H),3.35-.3.25(m,2H),2.32(s,3H),1.72(brs,4H),1.49-1.44(m,9H).
第四步：化合物36-G叔丁基(4-(4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基丁基)3-硝基苄基)氨基甲酸酯
此步的合成参照实施例8化合物12第六步的合成过程1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.13-8.11(m,2H),7.56(brs,1H),7.52-7.47(m,1H),7.25(s,1H),7.06(d,J＝8.0Hz,1H),6.84-6.81(m,1H),4.54-4.50(m,2H),3.94(t,J＝5.4Hz,2H),3.34-.3.26(m,2H),2.46(s,3H),1.72(brs,4H),1.49-1.43(m,9H),1.26(s,12H).
第五步：化合物36-I(4-(3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-4-甲基苯氧基)丁基)(3-硝基苄基)氨基甲酸叔丁酯
此步的合成参照实施例8化合物12第七步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 561.10[M+H]+.
第六步：化合物36-J(3-氨基苄基)(4-(3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-4-甲基苯氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯
此步的合成参照实施例1化合物2第四步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 530.95[M+H]+.
第七步：化合物36-K叔丁基25-氯-16-甲基-11-氧基-3,6-二氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(1,3)-二苯环十一烷-6-羧酸盐
此步的合成参照实施例24化合物35第八步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 495.20[M+H]+.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ9.87(s,1H),8.60(s,1H),8.08(brs,1H),7.24-7.20(m,2H),7.14(d,J＝2.8Hz,1H),7.05-7.02(m,2H),6.88(d,J＝7.6Hz,1H),4.31-4.17(m,4H),3.21(brs,1H),2.99(brs,1H),2.14(s,3H),1.70-1.59(m,4H),1.35(s,9H).
第八步：化合物36 25-氯-16-甲基-11-氧基-3,6-二氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(1,3)-二苯环十一烷
此步的合成参照实施例15化合物25第六步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 395.25[M+H]+.
1H NMR(400MHz,d6-DMSO):δ9.92(s,1H),8.63(s,1H),8.23(brs,1H),7.28(t,J＝7.6Hz,1H),7.23(d,J＝2.4Hz,1H),7.19(d,J＝8.4Hz,1H),7.08-6.99(m,3H),4.36-4.30(m,1H),4.18-4.08(m,1H),3.93-3.84(m,2H),2.91-2.79(m,2H),2.08(s,3H),1.85-1.57(m,4H).
实施例27：化合物37的合成路线:
第一步：化合物37-B(3-溴苯基)氨基甲酸叔丁酯
此步的合成参照实施例8化合物12第四步的合成过程
LC-MS:(ES+):m/z 217.0[M+1-56]+.
第二步：化合物37-C烯丙基(3-溴苯基)氨基甲酸叔丁酯
此步的合成参照实施例8化合物12第五步的合成过程
第三步：化合物37-D叔丁基烯丙基(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)苯基)氨基甲酸酯
此步的合成参照实施例8化合物12第六步的合成过程
第四步：化合物37-F烯丙基(3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯
此步的合成参照实施例8化合物12第七步的合成过程1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.55(d,J＝4.0Hz,1H),8.07(s,1H),7.97(dd,J＝4.0,8.0Hz,1H),7.53-7.45(m,2H),6.01-5.02(m,1H),5.23-5.17(m,2H),4.31(d,J＝8.0Hz,2H),1.50(s,9H).
第五步：化合物37-G叔丁基烯丙基(3-(2-((3-(烯丙基(叔丁氧基羰基)氨基)苯基)氨基)-5-氟嘧啶-4-基)苯基)氨基甲酸酯
此步的合成参照实施例8化合物12第八步的合成过程
LC-MS:(ES+):m/z 574.0[M-H]+.
第六步：化合物37-H二叔丁基(Z)-25-氟-3,5,10-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(1,3)-二苯并环辛炔-7-烯-5,10-三羧酸盐
此步的合成参照实施例8化合物12第九步的合成过程
第七步：化合物37(Z)-25-氟-3,5,10-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(1,3)-二苯并环辛炔-7-烯
此步的合成参照实施例8化合物12第十步的合成过程
LC-MS:(ES+):m/z 348.12[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.42(s,1H),8.54(d,J＝4.0Hz,1H),7.52(brs,1H),7.29(s,1H),7.23-7.17(m,2H),6.92(brs,1H),6.85(dd,J＝4.0,8.0Hz,1H),6.40-6.31(m,3H),5.99(brs,1H),5.52(d,J＝16.0Hz,1H),5.42(d,J＝16.0Hz,1H),3.71(s,2H),3.57(s,2H).
实施例28：化合物38的合成路线:
第一步：化合物38-A三叔丁基(Z)25-氟-3,5,10-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(1,3)-二苯环十烷-3,5,10-三羧酸酯
/>
此步的合成参照实施例15化合物25第三步的合成过程
LC-MS:(ES+):m/z 648.3[M+H]+.
第二步：化合物38-B三叔丁基25-氟-3,5,10-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(1,3)-二苯环十烷-3,5,10-三羧酸酯
此步的合成参照实施例2化合物4第一步的合成过程
LC-MS:(ES+):m/z 650.4[M+H]+.
第二步：化合物38 25-氟-3,5,10-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(1,3)-二苯环十烷
此步的合成参照实施例15化合物25第六步的合成过程
LC-MS:(ES+):m/z 350.1[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.79(s,1H),8.59(d,J＝4.0Hz,1H),8.04(s,1H),7.35(s,1H),7.31-7.15(m,3H),6.82-6.75(m,2H),6.62(s,1H),3.25(s,2H),3.13(t,J＝4.0Hz,2H),1.73-1.62(m,2H),1.58-1.51(m,2H).
实施例29：化合物39的合成路线:
第一步：化合物39-B(3-溴-4-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯
此步的合成参照实施例8化合物12第四步的合成过程
第二步：化合物39-C烯丙基(3-溴-4-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯
此步的合成参照实施例8化合物12第五步的合成过程1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.44(d,J＝4.0Hz,1H),7.15(d,J＝8.0Hz,1H),6.85(dd,J＝4.0,8.0Hz,1H),5.95-5.85(m,1H),5.18-5.12(m,2H),4.18(d,J＝8.0Hz,2H),3.90(s,3H),1.46(s,9H).
第三步：化合物39-D叔丁基烯丙基(4-甲氧基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基)氨基甲酸酯
此步的合成参照实施例8化合物12第六步的合成过程1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.44(s,1H),7.15(d,J＝8.0Hz,1H),6.85(dd,J＝4.0,8.0Hz,1H),5.93-5.87(m,1H),5.18-5.10(m,2H),4.18(d,J＝8.0Hz,2H),3.90(s,3H),1.46(s,12H),1.31(s,9H).
第四步：化合物39-F叔丁基烯丙基(3-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-4-甲氧基苯基)氨基甲酸酯
此步的合成参照实施例8化合物12第七步的合成过程1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.49(d,J＝4.0Hz,1H),7.42-7.37(m,2H),6.97(d,J＝8.0Hz,1H),5.98-5.89(m,1H),5.21-5.16(m,2H),4.24(d,J＝8.0Hz,2H),3.86(s,3H),1.47(s,9H).
第五步：化合物39-G叔丁基烯丙基(3-(2-((3-(烯丙基(叔丁氧基羰基)氨基)苯基)氨基)-5-氟嘧啶-4-基)-4-甲氧基苯基)氨基甲酸酯
此步的合成参照实施例8化合物12第八步的合成过程
LC-MS:(ES+):m/z 606.0[M+H]+.
第六步：化合物39-H二叔丁基(Z)-25-氟-16-甲氧基-3,5,10-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(1,3)-二苯并环辛炔-7-烯-5,10-二羧酸盐
此步的合成参照实施例8化合物12第九步的合成过程
第七步：化合物12(Z)-25-氟-16-甲氧基-3,5,10-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(1,3)-二苯并环辛炔-7-烯
此步的合成参照实施例8化合物12第十步的合成过程
LC-MS:(ES+):m/z 378.17[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.41(s,1H),8.46(d,J＝4.0Hz,1H),7.76(brs,1H),7.00-6.84(m,4H),6.71(s,1H),6.46(s,1H),6.22(s,1H),5.48(s,2H),3.74(s,3H),3.69(s,2H),3.57(s,2H).
实施例30：化合物40的合成路线:
第一步：化合物40-A三叔丁基(Z)25-氟-16-甲氧基-3,5,10-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(1,3)-二苯环十烷-7-烯-3,5,10-三羧酸酯
此步的合成参照实施例15化合物25第三步的合成过程
LC-MS:(ES+):m/z 678.3[M+H]+.
第二步：化合物40-B三叔丁基25-氟-16-甲氧基-3,5,10-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(1,3)-二苯环十烷-3,5,10-三羧酸酯
此步的合成参照实施例2化合物4第一步的合成过程
LC-MS:(ES+):m/z 680.3[M+H]+.
第三步：化合物40 25-氟-16-甲氧基-3,5,10-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-1,4(1,3)-二苯环十烷
此步的合成参照实施例15化合物25第六步的合成过程
LC-MS:(ES+):m/z 380.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.51(s,1H),8.51(s,1H),8.02(s,1H),7.04-6.87(m,4H),6.56(s,1H),6.35(s,1H),3.75(s,3H),3.19(d,J＝8.0Hz,2H),3.06(t,J＝8.0Hz,2H),1.64-1.55(m,2H),1.51-1.43(m,2H).
实施例31：化合物41的合成路线:
第一步：化合物41-C 2-(2-(4-硝基-1氢-吡唑-1-基)乙氧基)乙烷-1-醇
准备一个100ml的三口瓶和温度计，将化合物41-A二乙二醇(7g,66.3mmol),化合物41-B 4-硝基吡唑(5g,44.2mmol)和三苯基膦(23.2g,88.4mmol)加入到干燥的四氢呋喃(50ml)中，置换氮气三次，控制温度0℃到5℃之间，将偶氮二甲酸二异丙酯(15.4g,88.4mmol)缓慢滴加到反应液中，然后室温搅拌过夜。TLC和LCMS监控反应完全。将反应液旋干，粗品用甲基叔丁基醚打浆30分钟，析出固体(三苯氧磷)过滤，收集滤液旋干，将滤液粗品硅胶柱层析(PE:EA＝5:1到DCM:MeOH＝15:1)分离纯化得到淡黄色液体化合物41-C 2-(2-(4-硝基-1氢-吡唑-1-基)乙氧基)乙烷-1-醇(6.5g)。
LC_MS:(ES+):m/z 201.75[M+H]+.
第三步：化合物41-D 2-(2-(4-硝基-1氢-吡唑-1-基)乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸盐
此步的合成参照实施例25化合物35第三步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 356.40[M+H]+.
第四步：化合物41-E(3-溴-4-甲基苯基)(2-(2-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
此步的合成参照实施例25化合物35第四步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 412.20[M-56]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.06(d,J＝5.2Hz,2H),7.39(brs,1H),7.17(d,J＝8.0Hz,1H),6.99(d,J＝8.0Hz,1H),4.26(t,J＝4.8Hz,2H),3.79-3.73(m,4H),3.58(t,J＝5.6Hz,1H),2.38(s,3H),1.42(s,9H).
第五步：化合物41-F叔丁基(4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基)(2-(2-(4-硝基-1H-吡唑-)1-基)乙氧基)乙基)氨基甲酸酯
此步的合成参照实施例8化合物12第六步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 417.05[M-100]+.
第六步：化合物41-G(3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-4-甲基苯基)(2-(2-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
此步的合成参照实施例8化合物12第七步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 480.75[M-56]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.69(s,1H),8.02(s,2H),7.29-7.26(m,2H),7.21-7.08(m,2H),4.28(t,J＝5.0Hz,2H),3.80-3.74(m,4H),3.59(t,J＝5.4Hz,2H),2.21(s,3H),1.40(s,9H).
第七步：化合物41-I叔丁基(E)-25-氯-16-甲基-41氢-7-氧杂-3,10-二氮杂-2(4,2)-嘧啶-4(4,1)-吡唑-1(1,3)-苯环十烷-10-羧酸盐
此步的合成参照实施例24化合物35第八步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 471.25[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.41(s,1H),8.36(s,1H),7.49(brs,1H),7.31(s,1H),7.24(s,2H),6.98(s,1H),4.32-4.27(m,1H),4.23-4.17(m,1H),3.90-3.85(m,1H),3.79-3.75(m,1H),3.68-3.62(m,2H),3.57-3.49(m,2H),2.36(s,3H),1.42(s,9H).
第八步：化合物41(E)-25-氯-16-甲基-41氢-7-氧杂-3,10-二氮杂-2(4,2)-嘧啶-4(4,1)-吡唑-1(1,3)-苯环十烷
此步的合成参照实施例15化合物25第六步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 371.30[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.51(s,1H),8.34(s,1H),7.34(s,1H),7.07-7.02(m,3H),6.72-6.69(m,1H),4.38-4.23(m,2H),3.94-3.89(m,1H),3.75-3.70(m,1H),3.67-3.56(m,2H),3.46-3.40(m,2H),2.28(s,3H).
实施例32：化合物42，化合物43的合成路线:
第一步：化合物43-C 2-(三甲基甲硅烷基)乙基3-((叔丁氧基羰基)氨基)吡咯烷-1-羧酸酯
在100ml单口瓶中，将化合物43-A叔丁基吡咯烷-3-基氨基甲酸酯(1g,5.37mmol)和化合物43-B 2,5-二氧代吡咯烷-1-基(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)碳酸酯(1.67g,6.44mmol)溶于四氢呋喃(10ml)和水(10ml)的混合液中，加入碳酸钾(1.14g,10.74mmol)并于室温下搅拌2小时。TLC监测反应结束，将反应液倒入水(50ml)中并用乙酸乙酯(30ml)萃取2次，有机相用饱和食盐水洗1次，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到淡黄色油状液体化合物43-C 2-(三甲基甲硅烷基)乙基3-((叔丁氧基羰基)氨基)吡咯烷-1-羧酸酯(1.85g粗品),未经进一步纯化直接用于下一步反应。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ4.61(s,1H),4.19-4.14(m,3H),3.62-3.59(m,1H),3.46-3.41(m,2H),3.25-3.17(m,1H),2.12-2.10(m,1H),1.84-1.80(m,1H),1.44(s,9H),1.01-0.97(m,1H),0.03(s,9H).
第二步：化合物43-D 2-(三甲基甲硅烷基)乙基3-((叔丁氧基羰基)(3-((叔丁氧基羰基)(3-硝基苄基)氨基)丙基)氨基)吡咯烷-1-羧酸酯
此步的合成参照实施例25化合物35第四步的合成过程
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.12(t,J＝8.4Hz,2H),7.56-7.49(m,2H),4.51-4.45(m,3H),4.18(t,J＝8.0Hz,2H),3.63-3.49(m,2H),3.33-3.10(m,6H),2.00-1.93(m,2H),1.74(s,2H),1.48-1.44(m,18H),0.04(s,9H).
第三步：化合物43-E(3-((叔丁氧基羰基)(3-硝基苄基)氨基)丙基)(吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯
在10ml单口瓶中，将化合物43-D 2-(三甲基甲硅烷基)乙基3-((叔丁氧基羰基)(3-((叔丁氧基羰基)(3-硝基苄基)氨基)丙基)氨基)吡咯烷-1-羧酸酯(50mg,0.08mmol)溶于1ml四氢呋喃中，室温下加入TBAF的THF溶液(0.1ml,0.08mmol,1M)，30℃搅拌过夜。TLC监测反应结束。将反应液倒入水(10ml)中并用乙酸乙酯(10ml)萃取2次。合并有机相，用饱和食盐水洗1次，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩,粗品通过薄层色谱板(DCM：MeOH＝10：1)纯化后得到无色油状化合物43-E(3-((叔丁氧基羰基)(3-硝基苄基)氨基)丙基)(吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(21mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 479.60[M+H]+.
第四步：化合物43-F(3-((叔丁氧基羰基)(3-硝基苄基)氨基)丙基)(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯
室温下往10ml单口瓶中，依次加入化合物43-E(3-((叔丁氧基羰基)(3-硝基苄基)氨基)丙基)(吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(66mg，0.138mmol)，乙腈(2ml)和N,N-二异丙基乙胺(54mg，0.414mmol)。氮气置换3次，反应体系密封，用注射器往上述体系内加入2,4,5-三氯嘧啶(38mg，0.207mmol)。将所得反应体系置于60℃下密封反应2小时。TLC监测反应结束，将反应液倒入水(10ml)中并用乙酸乙酯(10ml)萃取3次。合并有机相，用饱和食盐水(10ml)洗1次，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，粗品通过薄层色谱(DCM：MeOH＝40：1)纯化后得到无色粘稠油状化合物43-F(3-((叔丁氧基羰基)(3-硝基苄基)氨基)丙基)(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(70mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 625.20[M+H]+.
第五步：化合物43-G(3-((3-氨基苄基)(叔丁氧基羰基)氨基)丙基)(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯
此步的合成参照实施例1化合物2第四步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 595.20[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.00(s,1H),7.08(t,J＝3.6Hz,2H),6.62-6.53(m,3H),4.42-4.34(m,3H),4.00(s,2H),3.70-3.49(m,4H),3.18-3.02(m,4H),2.03-2.01(m,2H),1.71(s,2H),1.48-1.45(m,18H).
第六步：化合物42二叔丁基25-氯-3,6,10-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-1(1,3)-吡咯烷-4(1,3)-苯并环十烷-6,10-二羧酸盐
此步的合成参照实施例8化合物12第八步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 560.55[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.32(s,1H),8.04-7.99(m,2H),7.22(t,J＝8.0Hz,1H),7.03-6.94(m,2H),4.74-4.71(m,1H),4.44(s,1H),3.93-3.69(m,5H),3.42(m,2H),2.96(s,1H),2.67(s,1H),2.06-1.96(m,2H),1.75(s,2H),1.45-1.23(m,18H).
第七步：化合物43 25-氯-3,6,10-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-1(1,3)-吡咯烷-4(1,3)-苯并环十烷
此步的合成参照实施例15化合物25第六步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 360.15[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.25(s,1H),8.45(s,1H),7.95(s,1H),7.13(t,J＝7.6Hz,1H),6.96-6.94(m,1H),6.79(d,J＝7.2Hz,1H),3.99-3.88(m,1H),3.87-3.80(m,2H),3.76-3.59(m,3H),3.35-3.28(m,3H),2.89-2.80(m,2H),2.73-2.64(m,2H),2.11-2.06(m,1H),1.85-1.75(m,1H),1.70-1.64(m,1H),1.57-1.48(m,1H).
实施例33：化合物44的合成路线:
第一步：化合物44-C 4-((3-硝基苄基)氨基)丁-1-醇
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此步的合成参照实施例25化合物35第一步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 225.05[M+H]+.
第二步：化合物44-D(4-羟基丁基)(3-硝基苄基)氨基甲酸叔丁酯
此步的合成参照实施例25化合物35第二步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 324.75[M+H]+.
第三步：化合物44-E 4-((叔丁氧基羰基)(3-硝基苄基)氨基)丁基4-甲基苯磺酸盐
此步的合成参照实施例25化合物35第三步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 378.90[M+H-100]+.
第四步：化合物44-F 2-(三甲基甲硅烷基)乙基3-((叔丁氧基羰基)(4-((叔丁氧基羰基)(3-硝基苄基)氨基)丁基)氨基)吡咯烷-1-羧酸酯
此步的合成参照实施例25化合物35第四步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 324.75[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.13-8.09(m,2H),7.57-7.48(m,2H),4.55-4.44(m,2H),4.24-4.09(m,4H),3.64-3.54(m,2H),3.48-3.41(m,1H),3.27-3.08(m,4H),2.06-1.90(m,2H),1.49,1.44(two singles,18H),1.30-1.22(m,4H),0.99(t,J＝8.4Hz,2H),0.03(s,9H).
第五步：化合物44-G(4-((叔丁氧基羰基)(3-硝基苄基)氨基)丁基)(吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯
此步的合成参照实施例32化合物43第三步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 493.30[M+H]+.
第六步：化合物44-H(4-((叔丁氧基羰基)(3-硝基苄基)氨基)丁基)(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯
此步的合成参照实施例32化合物43第四步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 639.20[M+H]+.
第七步：化合物44-I(4-((3-氨基苄基)(叔丁氧基羰基)氨基)丁基)(1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯
此步的合成参照实施例1化合物2第四步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 609.45[M+H]+.
第八步：化合物44-J二叔丁基25-氯-3,6,11-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-1(1,3)-吡咯烷-4(1,3)-苯并环烷-6,11-二羧酸酯
此步的合成参照实施例8化合物12第八步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 573.55[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.39(s,1H),8.17(s,1H),7.96(s,1H),7.24-7.21(m,1H),7.06-7.04(m,1H),6.91-6.85(m,1H),4.39(d,J＝14.8Hz,1H),4.17-4.05(m,3H),3.90-3.80(m,2H),3.64(t,J＝11.2Hz,1H),3.47-3.39(m,1H),3.27-3.19(m,1H),3.15-3.03(m,1H),2.88-2.77(m,1H),2.11-1.90(m,2H),1.45-1.37(m,22H).
第九步：化合物44 25-氯-3,6,11-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-1(1,3)-吡咯烷-4(1,3)-苯并环烷
此步的合成参照实施例15化合物25第六步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 373.30[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.25(s,1H),8.34(s,1H),7.93(s,1H),7.15(t,J＝7.8Hz,1H),6.99(d,J＝8.0Hz,1H),6.85(d,J＝7.6Hz,1H),4.02-3.98(m,3H),3.69-3.62(m,2H),3.51-3.40(m,2H),3.27-3.19(m,2H),2.78-2.60(m,4H),2.13-2.08(m,1H),1.57-1.51(m,1H),1.45-1.34(m,2H).
实施例34：化合物45的合成路线:
第一步：化合物45-C 3-羟基吡咯烷-1-羧酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯
准备100ml三口瓶和温度计，将化合物45-A 3-羟基吡咯烷(500mg,5.74mmol)和三乙胺(581mg,5.74mmol)溶于乙腈(5ml)和水(5ml)的混合液中，控温0度滴加底物化合物45-B N-[2-(三甲基硅基)乙氧羰氧基]琥珀酰亚胺(1.5g,5.74mmol)。滴加完毕升至室温反应2小时。TLC监测反应完全。反应倒入10ml水中用乙酸乙酯(10ml)萃取2次。有机相用饱和食盐水洗1次，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到无色油状液体粗品化合物45-C 3-羟基吡咯烷-1-羧酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(1.2g)，未经进一步纯化直接用于下一步反应。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ4.46(brs,1H),4.19-4.15(m,2H),3.55-3.34(m,4H),2.03-1.88(m,3H),0.99(t,J＝8.4Hz,2H),0.03(s,9H).
第二步：化合物45-D 2-(三甲基甲硅烷基)乙基3-(3-((叔丁氧基羰基)(3-硝基苄基)氨基)丙氧基)吡咯烷-1-羧酸酯
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准备50ml三口瓶和温度计，将化合物45-C 3-羟基吡咯烷-1-羧酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(172mg,0.74mmol)溶于DMF(2ml),控温0℃下分批加入钠氢(30mg,0.74mmol)。加完氮气置换升至室温反应1小时。然后体系降至0℃，慢慢滴加化合物35-E 3-((叔丁氧基羰基)(3-硝基苄基)氨基)丙基4-甲基苯磺酸盐(230mg,0.5mmol)的DMF(1ml)溶液，升至室温反应过夜。TLC监测反应完全。反应液倒入30ml水中，用乙酸乙酯(10ml)萃取3次。合并有机相用水(10ml)反洗2次，饱和食盐水洗涤1次，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱层析(PE：EA＝10:1～3:1)分离纯化得到淡黄色油状物化合物45-D 2-(三甲基甲硅烷基)乙基3-(3-((叔丁氧基羰基)(3-硝基苄基)氨基)丙氧基)吡咯烷-1-羧酸酯(113mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 524.20[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.13-8.04(m,2H),7.55-7.48(m,2H),4.58-4.39(m,2H),4.18-4.14(m,2H),3.98(brs,1H),3.49-3.26(m,8H),2.01-1.88(m,2H),1.84-1.73(m,2H),1.49-1.44(m,9H),0.99(t,J＝8.2Hz,2H),0.03(s,9H).
第三步：化合物45-E(3-硝基苄基)(3-(吡咯烷-3-基氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯
此步的合成参照实施例32化合物43第三步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 380.75[M+H]+.
第四步：化合物45-F(3-((1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吡咯烷-3-基)氧基)丙基)(3-硝基苄基)氨基甲酸叔丁酯
此步的合成参照实施例32化合物43第四步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 526.30[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.13-8.08(m,2H),7.98(s,1H),7.54-7.48(m,2H),4.57-4.39(m,2H),4.10-4.05(m,1H),4.03-3.74(m,4H),3.49-3.24(m,4H),2.14-2.07(m,1H),1.98-1.94(m,1H),1.87-1.75(m,2H),1.48-1.43(m,9H).
第五步：化合物45-G(3-氨基苄基)(3-((1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)吡咯烷-3-基)氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯
此步的合成参照实施例1化合物2第四步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 496.40[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.16(s,1H),6.93(t,J＝7.6Hz,1H),6.44-6.39(m,2H),6.31(d,J＝7.6Hz,1H),5.10(brs,2H),4.20(s,2H),4.08(brs,1H),3.96-3.56(m,4H),3.41-3.36(m,2H),3.21-3.06(m,2H),2.06-1.85(m,2H),1.69-1.63(m,2H),1.39(brs,9H).
第六步：化合物45-H叔丁基25-氯-10-氧杂-3,6-二氮杂-2(4,2)-嘧啶-1(1,3)-吡咯烷-4(1,3)-苯并环十烷-6-羧酸酯
此步的合成参照实施例8化合物12第八步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 460.40[M+H]+.
第七步：化合物45 25-氯-10-氧杂-3,6-二氮杂-2(4,2)-嘧啶-1(1,3)-吡咯烷-4(1,3)-苯并环十烷
此步的合成参照实施例15化合物25第六步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 360.30&360.50[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.26(s,1H),8.42(s,1H),7.95(s,1H),7.13(t,J＝7.8Hz,1H),6.95-6.92(m,1H),6.79(d,J＝7.2Hz,1H),4.14-4.09(m,1H),4.02-3.96(m,1H),3.89-3.66(m,5H),3.60-3.53(m,2H),3.40-3.38(m,1H),2.85-2.79(m,1H),2.71-2.66(m,1H),2.17-2.11(m,1H),1.99-1.92(m,1H),1.73-1.66(m,2H).
实施例35：化合物46的合成路线:
第一步：化合物46-C(2-羟乙基)(2-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
准备一个500ml的三口瓶和温度计，将化合物46-A N-叔丁氧羰基二乙醇胺(25g,0.12mol),化合物46-B 4-硝基吡唑(6.9g,0.06mol)和三苯基膦(32g,0.12mol)加入到干燥的四氢呋喃(200ml)中，置换氮气三次，控制温度0℃到5℃之间，将偶氮二甲酸二异丙酯(25g,0.12mol)缓慢滴加到反应液中，然后室温搅拌过夜。TLC和LCMS监控反应完全。将反应液旋干，粗品用甲基叔丁基醚打浆1小时，析出固体(三苯氧磷)过滤，收集滤液旋干，将滤液粗品硅胶柱层析(DCM:MeOH＝100:1到50:1)分离纯化得到黄色油状物产品化合物46-C(2-羟乙基)(2-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(15.6g)。
LC_MS:(ES+):m/z 301.15[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.17(s,1H),8.08-8.06(m,1H),4.38(s,2H),3.71(t,J＝5.6Hz,4H),3.31-3.23(m,2H),1.37(d,J＝13.6Hz,9H).
第二步：化合物46-D(2-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)乙基)(2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯
准备一个250ml的三口瓶和低温温度计，将草酰氯(3.7g,0.03mol)加入到二氯甲烷(50ml)中，氮气保护并控制温度-78℃到-60℃之间，将DMSO(4.6g,0.06mol)溶于二氯甲烷(10ml)，控温-78℃到-60℃之间缓慢滴加到反应液中，保温反应30分钟。然后将化合物46-C(2-羟乙基)(2-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(5.87g,0.02mol)溶于DCM(10ml),控温-78℃到-60℃之间缓慢滴加到反应液中，继续保温反应30分钟。然后将三乙胺(11.8g,0.12mol)溶于DCM(10ml),控温-78℃到-60℃之间缓慢滴加到反应液中，反应30分钟。移除低温环境，反应缓慢升至室温，TLC监控反应完全。将反应液过滤，用乙酸乙酯(50ml)洗涤滤饼，滤液搜集，旋干。加入水(50ml)和乙酸乙酯(100ml)，萃取分层，有机相用饱和的氯化铵水溶液(50ml)洗涤三次，然后用无水硫酸钠干燥，过滤和旋干得到黄色油状物粗产品化合物46-D(2-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)乙基)(2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(5.8g)，未纯化直接做下一步反应。
LC_MS:(ES+):m/z 298.95[M+H]+.
第三步：化合物46-F(2-((3-溴-4-甲基苯基)氨基)乙基)(2-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
准备一个250ml的单口瓶，将化合物46-D(2-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)乙基)(2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(5.8g,0.02mol)和化合物46-E 3-溴-4-甲基苯胺(3.6g,0.02mol)加入到无水甲醇(100ml)中，加入醋酸调节PH值在4-5之间，然后室温反应30min，分批次加入氰基硼氢化钠(2.5g,0.04mol)，室温反应过夜。TLC监控反应完全。反应液直接旋干，硅胶柱层析(PE:EA＝4:1)分离纯化得到黄色油状物化合物46-F(2-((3-溴-4-甲基苯基)氨基)乙基)(2-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(3.46g)。
LC_MS:(ES+):m/z 468.10[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.07-8.06(m,2H),6.99(d,J＝8.4Hz,1H),6.74(d,J＝2.0Hz,1H),6.43-6.41(m,1H),4.35-4.25(m,2H),3.66(t,J＝6.0Hz,2H),3.31-3.12(m,4H),2.27(s,3H),1.45(s,9H).
第四步：化合物46-G(3-溴-4-甲基苯基)(2-((叔丁氧基羰基)(2-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)乙基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
准备一个250ml的单口瓶和回流管，将化合物46-F(2-((3-溴-4-甲基苯基)氨基)乙基)(2-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.3g,2.78mmol)，三乙胺(2.8g,27.8mmol)和DMAP(3.4g,27.8mmol)加入到四氢呋喃(80ml)中，然后冰浴下加入Boc2O(6.07g,27.8mmol)。加完反应回流过夜(73℃)，TLC监控反应完全。将反应降至室温，旋干。加入饱和柠檬酸溶液(50ml)和乙酸乙酯(50ml)，萃取分液。有机相用柠檬酸水溶液(40ml)洗涤2次，饱和氯化钠水溶液(50ml)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤和旋干得到粗品。此粗品通过硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝5:1到3:1)分离纯化得到黄色油状物化合物46-G(3-溴-4-甲基苯基)(2-((叔丁氧基羰基)(2-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)乙基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.2g)。
LC_MS:(ES+):m/z 570.10[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.08(s,2H),7.34(s,1H),7.16(d,J＝8.0Hz,1H),6.99-6.98(m,1H),4.33-4.27(m,2H),3.66-3.59(m,4H),3.26-3.14(m,2H),2.36(s,3H),1.43(s,9H),1.36(s,9H).
第五步：化合物46-H叔丁基(2-((叔丁氧基羰基)(2-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)乙基)氨基)乙基)(4-甲基-3-(4,4,5,5-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基)氨基甲酸四甲酯
此步的合成参照实施例8化合物12第六步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 616.15[M+H]+.
第六步：化合物46-J叔丁基(2-((叔丁氧基羰基)(2-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)乙基)氨基)乙基)(3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-4-甲基苯基)氨基甲酸酯
此步的合成参照实施例8化合物12第七步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 636.20[M+H]+.
第七步：化合物46-K叔丁基(2-((2-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)乙基)(叔丁氧基羰基)氨基)乙基)(3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-4-甲基苯基)氨基甲酸酯
此步的合成参照实施例1化合物2第四步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 606.20[M+H]+.
第八步：化合物46-L二叔丁基(E)-25-氯-16-甲基-41氢-3,7,10-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-4(4,1)-吡唑-1(1,3)-苯并环十烷-7,10-二羧酸盐
此步的合成参照实施例8化合物12第八步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 570.60[M+H]+.
第九步：化合物46(E)-25-氯-16-甲基-41氢-3,7,10-三氮杂-2(4,2)-嘧啶-4(4,1)-吡唑-1(1,3)-苯并环十烷
此步的合成参照实施例15化合物25第六步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 370.15[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.81(s,1H),8.47(s,1H),8.37(s,1H),7.29(s,1H),6.97(d,J＝8.4Hz,1H),6.84(d,J＝2.4Hz,1H),6.68-6.65(m,1H),5.85-5.81(m,1H),4.29-4.22(m,1H),4.10-4.09(m,1H),3.98-3.94(m,1H),3.22-3.19(m,2H),3.04-2.98(m,1H),2.94-2.87(m,1H),2.76-2.73(m,1H),2.37-2.31(m,1H),2.16(s,3H).
实施例36：化合物47的合成路线:
第一步：化合物47-B氮4-烯丙基-氮2-(1-(丁-3-烯-1-基)-1H-吡唑-4-基)-5-氯嘧啶-2,4-二胺(3-溴-4-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯
此步的合成参照实施例17化合物27第三步的合成过程
LC-MS:(ES+):m/z 305.1[M+H]+.
第二步：化合物47-C叔丁基烯丙基(2-((1-(丁-3-烯-1-基)-1H-吡唑-4-基)(叔丁氧基羰基)氨基)-5-氯嘧啶-4-基)氨基甲酸酯
此步的合成参照实施例15化合物25第三步的合成过程
LC-MS:(ES+):m/z 505.1[M+H]+.
第三步：化合物47-D二叔丁基(34E,6Z)-15-氯-31H-2,9-二氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(4,1)-吡唑环壬烷-6-烯-2,9-二羧酸盐
此步的合成参照实施例15化合物25第四步的合成过程
LC-MS:(ES+):m/z 477.1[M+H]+.
第四步：化合物47-E二叔丁基(34E,6Z)-15-氯-31H-2,9-二氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(4,1)-吡唑环壬烷-2,9-二羧酸盐
此步的合成参照实施例15化合物25第五步的合成过程
LC-MS:(ES+):m/z 479.1[M+H]+.
第五步：化合物47(E)-15-氯-31H-2,9-二氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(4,1)-吡唑环壬烷
此步的合成参照实施例15化合物25第六步的合成过程
LC-MS:(ES+):m/z 279.0[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:7.83(s,1H),7.72(s,1H),7.29(s,1H),6.34(s,1H),5.37(s,1H),4.24(t,J＝4.0Hz,2H),3.19-3.12(m,2H),1.84-1.80(m,2H),1.53-1.39(m,4H).
实施例37：化合物48的合成路线:
第一步：化合物48-C 2-(2-(2，5-二氯嘧啶-4-基)氨基乙氧基)乙基氨基甲酸叔丁酯
此步的合成参照实施例1化合物2第五步的合成过程
LC-MS:(ES+):m/z 351.1[M+H]+.
第二步：化合物48-D 2-(2-氨基乙氧基)乙基-2,5-二氯嘧啶-4-胺
向含有化合物48-C 2-(2-(2，5-二氯嘧啶-4-基)氨基乙氧基)乙基氨基甲酸叔丁酯(340mg,0.97mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液中搅拌状态下加入三氟醋酸(4mL)。反应液在25℃搅拌反应1.0小时。LCMS监测到目标质谱，反应原料消失。反应液减压旋蒸浓缩，真空干燥，得黄色固体产品化合物48-D 2-(2-氨基乙氧基)乙基-2,5-二氯嘧啶-4-胺(350mg，三氟醋酸盐)。
LC_MS:(ES+):m/z 251.1[M+H]+
第三步：化合物48-F 2,5-二氯-N-(2-(3-硝基苄基氨基)乙氧基)乙基-4-氨基嘧啶
化合物48-D 2-(2-氨基乙氧基)乙基-2，5-二氯嘧啶-4-胺三氟醋酸盐(350mg,0.96mmol),醋酸钾(470mg,4.79mmol)和化合物48-E 3-硝基苯甲醛(145mg,0.96mmol)的1,2-二氯乙烷(3.0mL)混合物反应液在25℃条件下搅拌反应12小时。TLC监测反应完全。向反应混合物中分批次加入氰基硼氢化钠(90mg,1.44mmol)。在25℃条件下继续搅拌3.5小时。LCMS监测反应完全且检测到目标质谱。旋蒸溶剂，粗产品化合物48-F 2,5-二氯-N-(2-(3-硝基苄基氨基)乙氧基)乙基-4-氨基嘧啶(369mg,粗产品理论产量)直接进行下一步反应。
LC_MS:(ES+):385.9[M+H]+.
第四步：化合物48-G 2-(2-(2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基乙氧基)乙基(3-硝基苄基)氨基甲酸叔丁酯
向粗产品化合物48-F 2,5-二氯-N-(2-(3-硝基苄基氨基)乙氧基)乙基-4-氨基嘧啶(369mg,0.96mmol)的四氢呋喃(6mL)悬浊液中加入饱和碳酸氢钠溶液(6mL)。搅拌状态下加入二碳酸二叔丁酯(251mg,1.15mmol)。反应混合物室温下搅拌过夜。TLC监测反应完全。反应液浓缩，加入水(30mL),乙酸乙酯萃取(20mL x 2)，饱和食盐水(30mL)洗有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得粗产品。经硅胶柱层析(用含15％-35％乙酸乙酯的石油醚)洗脱浓缩得到固体化合物进一步制备分离纯化(10％-80％乙腈的水溶液)得浅黄色固体产品化合物48-G 2-(2-(2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基乙氧基)乙基(3-硝基苄基)氨基甲酸叔丁酯(200mg)。
LC_MS:(ES+):486.1[M+H]+.
第五步：化合物48-H(3-氨基苄基)(2-(2,5-二氯嘧啶-4-基(氨基)乙氧基)乙基氨基甲酸叔丁酯
此步的合成参照实施例1化合物2第四步的合成过程
LC_MS:(ES+):458.4[M+2+H]+.
第六步：化合物48-I 15-氯-8-氧杂-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-5-羧酸叔丁酯
此步的合成参照实施例25化合物35第八步的合成过程
LC_MS:(ES+):420.1[M+H]+.
第七步：化合物48 15-氯-8-氧杂-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷
此步的合成参照实施例15化合物25第六步的合成过程
LC_MS:(ES+):320.1[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.42(s,1H),7.91(s,1H),7.55(d,J＝8.0Hz,1H),7.24(t,J＝8.0Hz,1H),7.13(s,1H),6.90(d,J＝8.0Hz,1H),6.76(d,J＝8.0Hz,1H),5.54(s,1H),3.97(s,2H),3.73(s,6H),2.84(t,J＝4.0Hz,2H).
实施例38：化合物49的合成路线:
第一步：化合物49-C叔丁基(5-(1-(3-硝基苯基)乙基)氨基)戊基)氨基甲酸酯
将含有化合物49-A叔丁基(5-氨基戊基)氨基甲酸酯(500mg,2.47mmol)，化合物49-B 1-(3-硝基苯基)乙酮(408mg,2.47mmol)，醋酸(300mg,4.94mmol)的甲醇(5ml)溶液在室温下搅拌反应1小时。然后将氰基硼氢化钠(311mg,4.94mmol)加入反应液中并在50℃下搅拌反应16小时。TLC监测反应完全。减压浓缩反应液。剩余物分配于乙酸乙酯(20ml)和饱和碳酸氢钠溶液(20ml)中。收集有机层，饱和食盐水(20ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经硅胶柱层析(用含5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)分离纯化得到黄色油状物化合物49-C叔丁基(5-(1-(3-硝基苯基)乙基)氨基)戊基)氨基甲酸酯(264mg,30％)。
LC_MS:(ES+):m/z 352.50[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.20(t,J＝1.6Hz,1H),8.11-8.08(m,1H),4.52(s,1H),3.90-3.85(m,1H),3.12-3.07(m,2H),2.55-2.34(m,2H),1.48-1.43(m,13H),1.37(d,J＝6.4Hz,3H),1.34-1.30(m,2H).
第二步：化合物49-D N1-(1-(3-硝基苯基)乙基)戊基-1,5-二胺
将含有化合物49-C叔丁基(5-(1-(3-硝基苯基)乙基)氨基)戊基)氨基甲酸酯(260mg)和盐酸-二氧六环(4N,2ml)的甲醇(2ml)溶液在室温下搅拌反应2小时。TLC监测反应完全。浓缩反应液，剩余物用饱和碳酸氢钠溶液调节pH＝7-8，用含10％甲醇的二氯甲烷(10ml x 3)萃取。合并有机层，饱和食盐水(20ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到淡黄色油状物化合物49-D N1-(1-(3-硝基苯基)乙基)戊基-1,5-二胺(180mg,96％)。
LC_MS:(ES+):m/z 252.10[M+H]+.
第三步：化合物49-F(叔丁基(5)-(2,5-二氯嘧啶-4-基氨基)戊烷基)(1-(3-硝基苯基)乙基)氨基甲酸酯
-40℃下将含有化合物49-E 2,4,5-三氯嘧啶(138mg,0.75mmol)的无水四氢呋喃(5ml)中加入三乙胺(84mg,0.83mmol)，然后逐滴加入化合物49-DN1-(1-(3-硝基苯基)乙基)戊基-1,5-二胺(180mg,0.72mmol)。反应液在-40℃氮气氛围下搅拌反应3小时。反应完成后升至室温，加入三乙胺(84mg,0.83mmol)和二碳酸二叔丁酯(197mg,0.905mmol)。反应混合物在50℃搅拌过夜。TLC监测反应完全。反应混合物分配于乙酸乙酯(20ml×2)和水(20ml)中。收集有机层，饱和食盐水(20ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经硅胶柱层析(用含10-20％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)分离纯化得到黄色油状物化合物49-F(叔丁基(5)-(2,5-二氯嘧啶-4-基氨基)戊烷基)(1-(3-硝基苯基)乙基)氨基甲酸酯(350mg,98％)。
LC_MS:(ES+):m/z 498.35[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.15-8.12(m,2H),8.00(s,1H),7.63(d,J＝4.0Hz,1H),7.51(t,J＝8.0Hz,1H),5.46(s,1H),3.50-3.45(m,2H),3.13-2.96(m,2H),1.62(d,J＝3.6Hz,2H),1.54-1.52(m,2H),1.44(s,9H),1.30-1.25(m,4H).
第四步：化合物49-G(叔丁基(1)-3-氨基苯基乙基)(5-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)戊基)氨基甲酸酯
此步的合成参照实施例1化合物2第四步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 468.20[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.00(s,1H),7.10(t,J＝8.0Hz,1H),6.73-6.57(m,3H),5.53-5.46(m,1H),3.66(brs,2H),3.47-3.38(m,2H),3.10-2.81(m,2H),1.53-1.41(m,16H),1.23-1.14(m,2H).
第五步：化合物49-H叔丁基15-氯-4-甲基-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷-5-羧酸盐
此步的合成参照实施例25化合物35第八步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 432.25[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.26(s,1H),8.24(s,1H),7.91(s,1H),7.34(t,J＝6.0Hz,1H),7.21(t,J＝7.6Hz,1H),7.01(d,J＝8.0Hz,1H),6.82(d,J＝7.2Hz,1H),5.44-5.33(m,1H),3.81-3.73(m,1H),3.14-3.00(m,2H),2.94-2.62(m,1H),
1.73-1.62(m,2H),1.48-1.35(m,14H),1.33-1.28(m,2H).
第六步：化合物49 15-氯-4-甲基-2,5,11-三氮杂-1(2,4)-嘧啶-3(1,3)-苯环十一烷
此步的合成参照实施例15化合物25第六步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 332.20[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.29(s,1H),8.20(s,1H),7.91(s,1H),7.38-7.29(m,2H),7.11-7.05(m,2H),4.31-4.30(m,1H),3.77-3.71(m,1H),3.10-3.03(m,1H),2.76-2.54(m,2H),1.89-1.49(m,7H),1.38-1.31(m,2H).
生物活性测试实施例：
生物测试实施例-1：CDK9激酶活性抑制实验:
化合物测试浓度为10nM，复孔检测，或10μM起，3倍稀释，10个浓度，复孔检测。
采用Caliper迁移率变动检测技术(Caliper mobility shift assay)的方法检测化合物对CDK9蛋白激酶的活性抑制作用。使用分液器Echo 550向目的板384-well-plate转移250nL 100倍终浓度的化合物。用1×激酶缓冲液配制2.5倍终浓度的激酶溶液。在化合物孔和阳性对照孔中分别加10μL的2.5倍终浓度的激酶溶液；在阴性对照孔中加入10μL的1×激酶缓冲液。1000rpm离心30秒后在室温下孵育10分钟。用1×激酶缓冲液配制5/3倍终浓度的ATP和激酶底物的混合溶液,加入15μL的5/3倍终浓度的ATP和底物的混合溶液，起始反应。将384孔板1000rpm离心30秒，振荡混匀后室温孵育相应的时间，加入30μL终止检测液终止激酶反应，1000rpm离心30秒，振荡混匀。用Caliper EZ Reader读取转化率。换算抑制率％＝(阳性对照转化率均值％-样品转化率％/(阳性对照转化率均值％-阴性对照转化率均值％)。其中：阴性对照孔，代表激酶缓冲液背景孔的转化率读数；阳性对照孔，代表没有化合物抑制孔的转化率读数。以浓度的log值作为x轴，百分比抑制率为y轴，采用分析软件GraphPad Prism 5的log(inhibitor)vs.response-Variable slope拟合量效曲线，从而得出各个化合物对酶活性的IC50值。计算公式：y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-x)ⅹhillslope))，x:抑制剂浓度的对数；y:％抑制率。
下表1中提供了一些化合物在10nM对CDK9激酶活性的抑制率：
(抑制率区间：A>50％；B:25-49％)
化合物 CDK9
5 B
8 A
10 B
12 A
15 B
18 A
在下表2中提供了一些化合物在CDK9激酶活性测定中的IC50区间：
(IC50区间：A<0.1μM；B:0.1-0.5μM；C:0.5-1μM)：
/>
按照上述激酶活性抑制实验的描述，使用CDK7，CDK9，JAK1，JAK2，JAK3，ITK，RET，TYK2，和LRRK2激酶测试了一些化合物在10nM针对这些激酶的选择性的抑制率。结果见下表3：(抑制率区间：A>50％；B:25-49％；C:<25％)：
化合物 JAK1 JAK2 JAK3 CDK7 CDK9 TYK2 ITK RET LRRK2
8 C B C C A C C C C
12 C C A C
15 C C B C
18 C C A
生物测试实施例-2：
检测受试化合物针对CDKs激酶的选择性。化合物测试浓度为0.1uM，复孔检测受试化合物在CDKs激酶上的抑制率，主要采用HTRF和ADP-Glo检测方法。
HTRF检测方法如下，用激酶反应缓冲液分别配制2×ATP/底物溶液和2×激酶/金属离子溶液，Echo 655转移化合物稀释液25nL到384检测板中，离心后加入2.5μL的2×激酶/金属离子溶液，25℃孵育10分钟。10分钟后加入2.5μL的2×底物/ATP溶液加入到384检测板中，25℃孵育60分钟。用检测缓冲液配制2×激酶检测试剂(XL665和抗体),每孔5μL激酶检测试剂加入到384孔检测板中，25℃孵育60分钟。酶标仪读620nm(Cryptate)和665nm(XL665)的荧光信号，计算比值和化合物对激酶活性的抑制率。
ADP-Glo检测方法如下，用激酶反应缓冲液分别配制2×ATP/底物溶液和2×激酶/金属离子溶液，Echo 655转移化合物稀释液20nL到384检测板中，离心后加入2μL的2×激酶/金属离子溶液，25℃孵育10分钟。10分钟后加入2μL的2×底物/ATP溶液加入到384检测板中，25℃孵育60分钟。每孔4μLADP-Glo试剂，室温孵育40分钟。每孔加入10μL ADP检测试剂，室温孵育40分钟。酶标仪读化学发光信号，计算激酶活性抑制率。
下表4中提供了化合物8在0.1uM对CDKs激酶活性的抑制率：
(区间：A>95％；B:75-95％；C:50-75％；D:<50％)
蛋白激酶 化合物8
CDK1/CycA2 D
CDK1/CycB1 D
CDK1/CycE1 D
CDK12/CyclinK C
CDK13/CyclinK C
CDK16/CyclinY C
CDK18/CyclinY D
CDK19/CycC D
CDK2/CyCA2 D
CDK2/CycE1 C
CDK3/CycE1 C
CDK4/cycD1 D
CDK4/CycD3 C
CDK5/p25NCK C
CDK5/p35NCK D
CDK6/CycD1 D
CDK6/CycD3 D
CDK7/CycH/MAT1 C
CDK9/CycT1 A
生物测试实施例-3：
CDK9细胞活性测试实验所用细胞系MV-4-11，用含10％胎牛血清的IMDM培养液(含100U/mL青霉素及0.1g/L链霉素)培养，细胞系HCC1187，用含10％胎牛血清的RPMI-1640培养液(含100U/mL青霉素及0.1g/L链霉素)培养，细胞系Mia Paca-2，用含10％胎牛血清和2.5％马血清的DMEM(含100U/mL青霉素及0.1g/L链霉素)培养，细胞系A375，用含10％胎牛血清的RPMI-1640培养液(含100U/mL青霉素及0.1g/L链霉素)培养，所有细胞均于37℃、5％CO2的饱和湿度培养箱中培养。
MV-4-11细胞、HCC1187细胞、Mia Paca-2细胞、A375细胞生长至80％-90％融合度时用胰酶消化、重悬、计数并用完全培养基稀释至一定的细胞密度，每孔100μL接种于96孔板中，以完全培养基作为背景对照，于37℃、5％CO2的饱和湿度培养箱中培养过夜。用DMSO稀释化合物为终浓度的200ⅹ，取3μL上述化合物的DMSO储存液加入197μL完全培养基，每孔加入50μL培养基稀释的化合物于细胞中，于37℃、5％CO2的饱和湿度培养箱中培养72小时。72小时后将培养板放置于室温平衡，每孔加入40μL试剂，振荡器混匀2分钟以裂解细胞，室温孵育60分钟以稳定化学发光信号，用PE EnVision酶标仪读取化学发光。计算细胞生长抑制率Inh％＝(DMSO孔-化合物处理孔)/(DMSO孔-背景孔)ⅹ100，用GraphPadPrism 5拟合得到细胞生长IC50值。
在下表5中提供了一些化合物在细胞活性测定中的IC50区间：
(IC50区间：A<0.25μM；B:0.25-1μM；C:1-5μM；NT表示未测)
/>

Claims (8)

1.式(I)化合物：
或其内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其可药用盐，
其中，
X选自H、C1-C3烷基、卤素、CF3、氨基甲酰基、氰基和C1-C3烷氧基羰基；
L选自单键、C6-C10芳基、5-12元杂芳基、C3-C8环烷基和3-8元杂环基，其中所述C6-C10芳基、5-12元杂芳基、C3-C8环烷基和3-8元杂环基任选进一步被一个或多个R1取代；
环A选自C6-C10芳基、5-12元杂芳基、C3-C8环烷基和3-8元杂环基，其中所述C6-C10芳基、5-12元杂芳基、C3-C8环烷基和3-8元杂环基任选进一步被一个或多个R2取代；
Y选自单键和-CH2NR3-，其中R3选自H、C1-C3烷基、C1-C3烷基酰基、和Boc；
其中L和Y中至少有一个选自单键；
Q选自C4-C5亚烷基和C4-C5亚烯基，其中上述基团中的1个-CH2-单元任选地被O原子、S原子或-NR3-所替代；优选的，Q选自:
R1和R2各自独立地选自氢、卤素、氨基、C1-C3烷基氨基、氰基、氧代基、羟基、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、3-8元杂环基和C1-C3烷基取代的3-8元杂环基。
2.根据权利要求1所述的式I化合物或者其内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其可药用盐，其中式I化合物具有以下式(II)结构：
其中，
X、Q、R2和R3如权利要求1中所定义。
3.根据权利要求1所述的式I化合物或者其内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其可药用盐，其中式I化合物具有以下式(III)结构：
其中，
X、Q、A和R1如权利要求1中所定义。
4.根据权利要求3所述的式III化合物或者其内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其可药用盐，其中环A选自苯环或者吡唑环。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的化合物或者其内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其可药用盐，其中所述化合物选自下述化合物：
6.药物组合物，其包含根据权利要求1-5中任一项所述的化合物或者其内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其可药用盐，以及任选的可药用载体。
7.如权利要求1至5中任一项所述的化合物或者其内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其可药用盐在制备用于治疗或预防与CDK9激酶活性失调相关的疾病或病症中的应用，其中所述与CDK9激酶活性失调相关的疾病或病症优选选自实体肿瘤和血液***恶性肿瘤。
8.如权利要求7所述的应用，其中所述与CDK9激酶活性失调相关的疾病或病症选自实体肿瘤和癌症，优选急性髓系白血病(AML)、乳腺癌、***癌、肝细胞癌和胰腺癌。
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