CN117741153A

CN117741153A - 一种用于多癌种早期筛查、诊断和/或监测的生物标志物及应用

Info

Publication number: CN117741153A
Application number: CN202311476426.XA
Authority: CN
Inventors: 张硕; 徐蕊; 王霄霄
Original assignee: Nanjing Liandu Biotechnology Co ltd
Current assignee: Nanjing Liandu Biotechnology Co ltd
Priority date: 2023-11-07
Filing date: 2023-11-07
Publication date: 2024-03-22

Abstract

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种用于多癌种早期筛查、诊断和/或监测的生物标志物及应用。本发明所述方案通过筛选全新的标志物组合，即以外泌体表面磷酯酰丝氨酸(PS)和/或程序性死亡受体配体1(PD‑L1)为生物标志物，可以实现对多种癌种进行早期的筛查和诊断，显著优于现有标志物的结果。本发明所述方案不仅能够实现对多种癌种进行无创、快速、方便的诊断，同时具有高灵敏度和高特异性的特点，能够在肿瘤的超早期或早期进行诊断，有望成为一种新型的肿瘤无创诊断技术。

Description

一种用于多癌种早期筛查、诊断和/或监测的生物标志物及应用

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种用于多癌种早期筛查、诊断和/或监测的生物标志物及应用。

背景技术

癌症目前已成为人类健康的最大杀手之一，2020年全球新发癌症病例1929万例，同时癌症病人五年生存率仅为40.5％(2015年)。

癌症的治疗常常需要高昂的医疗费用和时间，而且随着病情的恶化，治疗难度也会增加。尽管癌症治疗取得了巨大进展，但一旦形成转移性肿瘤，治愈前景就很暗淡。早期癌症的发现可有效降低肿瘤发病率与死亡率，以结直肠癌为例，早期腺瘤5年生存率接近100％，IV期仅有10.8％，而美国通过筛查10年间将结直肠癌发病率降低约30％。因此，超早期的癌症筛查和早期的癌症诊断非常重要，为治疗干预提供较长的窗口期，可以提高癌症治疗的成功率，并大大改善患者的预后。

然而，大多数癌症类型只有在症状出现时才被诊断出来，这通常表明疾病已进展到晚期，这主要受限于传统的癌症筛查和诊断方法存在着一定的局限性和缺陷。传统肿瘤筛查仍面临诸多挑战，如侵入性强，灵敏度特异性差等，此外，部分检测还需要高昂的仪器设备，这些挑战阻碍了其广泛的应用，尤其是在欠发达地区。与传统诊断技术相比，液体活检具有无创、快速、可重复性好等优点，能够为临床医生提供更加准确、及早、全面的诊断信息。然而，当前无创诊断技术的局限性依然存在，如检测灵敏度和特异性等方面仍然需要进一步提高。因此，本领域需要一种微创的、多癌症筛查测试来早期检测多种癌症类型。基于血液的液体活检技术，可以采样循环DNA、RNA、蛋白质和细胞外囊泡(EVs)，具有检测癌症早期、更易治愈的潜力，并且是一种最小侵入性和敏感的方法，但目前技术面临着许多挑战。

外泌体是细胞分泌的纳米结构的囊状小泡，其参与细胞间的信息交流和物质运输。外泌体被报道广泛参与个体的肿瘤发生、代谢、免疫、神经发育等生理和病理功能。由于外泌体上有多种蛋白、核酸、脂质物质，因此通过在血液等循环***中检测到肿瘤来源的外泌体，就可做到肿瘤的无创诊断。外泌体定性高、包含信息大、数量更多、检测更加便捷，与疾病***密切，其检测方法相较于CTC捕获以及cfDNA检测有巨大优势。肿瘤来源的EVs是液体活检的有希望的生物标志物，因为它们在血液循环中的浓度高(每毫升高达10¹¹个)且稳定。数据表明，在最敏感的测定中，仅通过1毫升的血液样本可能检测到小于1mm³的肿瘤。因此外泌体特异标志物检测成为了多癌种超早期筛查的最佳解决方案之一。

发明内容

为此，本发明的第一个目的在于提供一种适用于多癌种早期筛查和/或诊断和/或监测的生物标志物，将其作为肿瘤的生物标志物进行多癌种的早期筛查/诊断/监测；

本发明的第二个目的在于提供上述生物标志物用于制备适用于多癌种超早期筛查的制剂和/或产品的用途；

本发明的第三个目的在于提供一种通过检测外泌体的生物标志物进行多癌种肿瘤的早期筛查/诊断/监测的产品，该方法基于外泌体在肿瘤发生过程中的重要作用，针对外泌体标志物的特异性，将其作为肿瘤的生物标志物进行检测。

为解决上述技术问题，本发明所述的一种用于多癌种早期筛查、诊断和/或监测的生物标志物，所述生物标志物包括磷酯酰丝氨酸(PS)和/或程序性死亡受体配体1(PD-L1)。

具体的，所述磷酯酰丝氨酸(PS)和/或程序性死亡受体配体1(PD-L1)来源于外泌体。

具体的，所述外泌体来源于体液。

具体的，所述外泌体来源于全血、血清、血浆、淋巴液、尿液、唾液、脑脊液、器官粘膜分泌液、乳汁、腹水、眼泪或***分泌物等。

在本发明方案中，外泌体样品可以通过尿液、血液等体液中获得，处理过程主要包括离心、体积排阻、超滤、亲和层析等常规步骤。

本发明还公开了一种外泌体表面蛋白用于制备适用于多癌种早期筛查或辅助筛查、诊断或辅助诊断、术后监测或复发监测的生物标志物的用途，所述外泌体表面蛋白包括磷酯酰丝氨酸(PS)和程序性死亡受体配体1(PD-L1)。

具体的，所述生物标志物适用的癌症种类包括乳腺癌、肺癌、结直肠癌、***癌、胃癌、肝癌、***、食管癌、甲状腺癌、膀胱癌、胰腺癌、卵巢癌、非霍奇金淋巴瘤、急性髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病中的一种或多种。

本发明还公开了具有如下(1)-(2)中至少一项功能的检测物用于制备诊断或辅助诊断、筛查或辅助筛查、术后监测或复发监测多种癌症产品的用途：

(1)检测外泌体表面磷酯酰丝氨酸(PS)水平和/或含量的检测物；

(2)检测外泌体表面程序性死亡受体配体1(PD-L1)水平和/或含量的检测物。

具体的，所述检测物包括：

(1)可以结合所述磷酯酰丝氨酸的抗体、蛋白、多肽中的一种或几种的混合物；和/或，

(2)可以结合所述程序性死亡受体配体1的抗体、蛋白、多肽中的一种或几种的混合物。

本发明还公开了一种检测外泌体表面磷酯酰丝氨酸(PS)和/或程序性死亡受体配体1(PD-L1)水平和/或含量的检测试剂用于制备具有至少一种如下功能产品的用途：

(1)用于制备早期筛查或辅助筛查多种癌症产品的用途；

(2)用于制备早期诊断或辅助诊断多种癌症产品的用途；

(3)用于制备评估癌症患者患病风险的产品的用途；

(4)用于制备评估癌症患者预后效果的产品的用途；

(5)用于制备预测治疗癌症药物效果的产品的用途。

本发明还公开了一种用于诊断或辅助诊断、筛查或辅助筛查、术后监测或复发监测多种癌症的产品，所述产品包括可以检测外泌体表面磷酯酰丝氨酸(PS)和/或程序性死亡受体配体1(PD-L1)水平和/或含量的试剂；

具体的，所述检测试剂包括：

(1)可以结合所述磷酯酰丝氨酸(PS)的抗体、蛋白或多肽中的一种或几种的混合物；和/或，

(2)可以结合所述程序性死亡受体配体1(PD-L1)的抗体、蛋白或多肽中的一种或几种的混合物。

具体的，所述产品包括试剂盒。

本发明还公开了一种用于诊断或辅助诊断、筛查或辅助筛查多种癌症的***，包括：

检测装置和/或检测试剂，所述检测装置和/或检测试剂用于测定生物样品中外泌体表面磷酯酰丝氨酸(PS)和/或程序性死亡受体配体1(PD-L1)水平和/或含量；

判断装置，所述判断装置用于基于所述生物样品中外泌体表面磷酯酰丝氨酸(PS)和/或程序性死亡受体配体1(PD-L1)水平和/或含量，进行诊断或辅助诊断、筛查或辅助筛查、术后监测或复发监测待测人是否患有相关癌症。

本发明还公开了所述产品或者所述***的使用方法，包括如下步骤：

(1)收集外泌体样品进行预处理，并利用外泌体marker对所述外泌体进行表征；优选如CD63、CD8、CD9等；

(2)将所述检测试剂与外泌体表面标志物磷酯酰丝氨酸(PS)和/或程序性死亡受体配体1(PD-L1)相结合；

(3)检测所述试剂与外泌体表面标志物磷酯酰丝氨酸(PS)和/或程序性死亡受体配体1(PD-L1)的结合情况；

(4)根据检测结果进行筛查、诊断或监测结果的判断。

具体的，所述产品或者所述***的使用方法：

所述步骤(1)中，所述预处理步骤包括超速离心、密度梯度离心、超滤法、柱层析、色谱法、免疫磁珠微球法、沉淀法或超声破碎；和/或，

所述步骤(3)中，所述检测方法包括流式细胞仪检测、免疫检测、化学发光、ELISA等方法。需要说明的是，由于外泌体样品中的标志物浓度通常很低，因此在本方法中需要使用高灵敏度的检测方法，如流式细胞仪或者化学发光等方法。

本发明所述方案通过筛选全新的标志物组合，即以外泌体表面磷酯酰丝氨酸(PS)和/或程序性死亡受体配体1(PD-L1)为生物标志物，可以实现对多种癌种进行早期的筛查/诊断/预后监测，显著优于现有标志物的结果。本发明所述方案不仅能够实现对多种癌种进行无创、快速、方便的诊断，同时具有高灵敏度和高特异性的特点，可以实现在肿瘤的超早期或早期进行诊断，有望成为一种新型的肿瘤无创诊断技术。

附图说明

为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中，

图1为实施例1中外泌体提取验证结果；

图2为实施例2中质谱检测结果；

图3为实施例3中流式检测检测患者PS/PD-L1/PS+PD-L1阳性外泌体结果；

图4为实施例3中不同癌症受试者进行PS/PD-L1/PS+PD-L1指标检测的受试者工作曲线(ROC)，横坐标为100％-特异性，纵坐标为灵敏性，AUC代表受试者工作曲线的曲线下面积；

图5为实施例4中流式检测超早期患者PS/PD-L1/PS+PD-L1阳性外泌体的受试者工作曲线(ROC)；

图6为实施例5中预后检测患者样本中PS、PD-L1、PS+PD-L1、阳性外泌体结果；

图7为实施例6中采用化学发光法检测PS+PD-L1阳性外泌体结果。

具体实施方式

实施例1外泌体特征鉴定

本实施例收集了十五种常见癌细胞的培养基，包括乳腺癌细胞系MCF-7、结肠癌细胞系SW480、胰腺癌细胞系MiaPaca-2、肝癌细胞系Huh-7、胃癌细胞系AZ521、卵巢癌细胞系ES-2、膀胱癌细胞系J82、***细胞系Hela、肺癌细胞系H19751、肾癌细胞系HRC-A498、甲状腺癌细胞系TPC-1、食道癌细胞系TE-1、胆管癌细胞癌RBE、神经胶质瘤细胞系U87、***癌细胞系PC-3)和五种正常细胞(293T胚胎肾细胞系、LO2正常肝细胞系、MRC-5胚胎成纤维细胞系、HPNE胰管细胞系和HBE支气管上皮细胞系，制成混样后通过超速离心的方法进行外泌体的提取。

具体操作如下：细胞正常培养，待细胞密度达80％时，更换无血清培养基培养24h后收集培养上清，500g离心30min，2000g离心20min，10000g离心60min后，装入Beckman70Ti超离管，120500g离心1h 30min后，小心弃掉上清，沉淀用PBS重悬。

本实施例通过纳米颗粒跟踪分析、透射电子显微镜(TEM)和免疫印迹等方法，对异质性EVs进行了大小范围(30-150nm)、形态和EV蛋白标记的表征，扩展数据结果如图1中a、b、c所示。

其中，图1中a为Nanosight展示的提取到的外泌体浓度和粒径分布，正常细胞和肿瘤细胞分泌外泌体颗粒数均在10⁷个/mL，粒径范围均在30-150nm；图1中b为外泌体特征蛋白Western Blot的结果，正常细胞和肿瘤细胞分泌的外泌体上均含有CD9、CD63、TSG102、HSP70的表达，不存在外泌体阴性蛋白Calnexin的表达；图1中c为外泌体透射电镜结果，正常细胞和肿瘤细胞分泌的外泌体均呈现出茶托状的双层膜结构。

实施例2外泌体脂质&蛋白质质谱检测

本实施例进一步对于超速离心法获得的混样外泌体的脂质和蛋白质进行提取，通过超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS)评估，具体操作如下：

样品采用UHPLC Nexera LC-30A超高效液相色谱***进行分离，使用C18色谱柱；

柱温控制在45℃；

流速为300μL/min；

流动相组成如下：A-乙腈水溶液(乙腈：水＝6:4，v/v)，B-乙腈异丙醇溶液(乙腈：异丙醇＝1：9，v/v)；

梯度洗脱程序如下：0-2min，B维持在30％；2-25min，B从30％线性变化至100％；25-35min，B维持在30％。整个分析过程中样品置于10℃自动进样器中，为避免仪器检测信号波动而造成的影响，采用随机顺序，进行样本的连续分析。

本实施例中，对质谱结果进行质控、过滤、数据归一化机蛋白质定性和定量分析，结果见附图2。

其中，图2中a展示了脂质组学热图结果；图2中b展示了蛋白质组学散点图，-logP值代表的是P的对数值，Log2(癌症患者/健康人)表示蛋白倍数变化的对数值，最右上方为表达显著上调蛋白；左上方为表达显著下调蛋白，中间部分为表达差异不显著相对稳定的蛋白。

如图2中a结果显示，磷脂酰丝氨酸(PS)在癌细胞外囊泡中异位表达。磷脂酰丝氨酸(PS)是一种生物相容性磷脂，在细胞膜中发挥重要作用。PS在生物pH下呈负电荷，在不同细胞器膜上的浓度不同。PS在双层膜上不对称分布，在内侧叶片中的浓度较高。在某些生理条件下，如在凋亡的早期阶段，PS可从内质膜迁移至外侧，作为吞噬细胞吞噬凋亡细胞的信号。

如图2中b结果显示，经蛋白组学发现，程序性死亡受体配体1(PD-L1)蛋白在癌细胞来源外泌体中含量高于正常细胞分泌的外泌体，有研究表明肿瘤细胞膜上的PD-L1与T细胞等免疫细胞上的PD-1结合后，肿瘤细胞发出抑制信号，导致T细胞不能识别肿瘤细胞，进而无法对肿瘤细胞产生杀伤作用，机体的免疫功能因此受到抑制，肿瘤细胞则肆意生长。脂质组学和蛋白质组学数据提示外泌体上磷脂酰丝氨酸(PS)和/或程序性死亡受体配体1(PD-L1)可以作为生物标志物用于多种癌症的诊断或辅助诊断、筛查或辅助筛查、术后/复发监测。

实施例3

本实施例针对血清外泌体磷脂酰丝氨酸(PS)和/或血清外泌体程序性死亡受体配体1(PD-L1)泛癌诊断效果评估。

现有的外泌体定量技术如ELISA、Western blot和磁珠流式细胞术分析仅限于大量EV分析，因此限制了EVs的实际临床应用。本实施例中，为了实现对单个EV的表面生物标志物方便准确的定量，选择了基于常用临床设备--流式细胞仪的新型检测技术。该方法旨在克服当前的限制，通过简单低速提取步骤实现单个囊泡的多参数表征，并使EVs能够在临床上应用。使用磷脂酰丝氨酸专一结合抗体/多肽进行标记了EVs，所得信号代表PS阳性EVs的数量或比例。同样的，使用程序性死亡受体配体1(PD-L1)特异性结合抗体对PD-L1进行了标记，所得信号代表PD-L1阳性EVs的数量或比例，通过同时标记磷脂酰丝氨酸专一结合的Annexin V和程序性死亡受体配体1特异性结合的PD-L1抗体，所得信号即代表PS与PD-L1双阳性EVs的数量或比例。该分析技术不仅减少了当前EV提取过程中繁琐的步骤，无需高速离心，而且能够同时对外泌体的粒径、浓度、脂质及蛋白含量进行精确定量。

本实施例中，具体检测步骤如下：

(1)本实施从鼓楼医院收集了临床上确诊为乳腺癌、肺癌、结直肠癌、***癌、胃癌、肝癌、***、食管癌、甲状腺癌、膀胱癌、胰腺癌、卵巢癌、非霍奇金淋巴瘤、急性髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病的患者血清以及各项临床表征均正常的年龄性别相匹配的健康对照各50例，超速离心获得外泌体进行溶解；

(2)外泌体上清样本加入2μL Anti-CD63捕获抗体(Santa cruz biotech)，4℃反应30min-60min后加入1μL Alexa Fluor 594goat anti-mouse(Thermo Fisher)，混合均匀后室温避光反应15-25min；

(3)CD63捕获样本中加入5μL Annexin-FITC(Biolegend)和/或APC Anti-PD-L1抗体，室温避光反应15-30min；

(4)流式仪器开机清洗后，分别检测不同粒径大小的纳米微球，通过调节电压和阈值，建立不同尺寸的颗粒大小校准曲线，并画出小于500nm的粒子区域，随后使用荧光抗体针对常见的EV标记CD63标记EVs，并在小于500nm的颗粒中筛选CD63阳性颗粒以识别EVs。

本实施例中，流式检测检测患者PS/PD-L1/PS+PD-L1阳性外泌体结果见附图3；其中，PS代表样本进行磷脂酰丝氨酸(PS)流式测试、PD-L1代表样本进行程序性死亡受体配体1(PD-L1)流式测试、PS+PD-L1代表样本进行磷脂酰丝氨酸(PS)和程序性死亡受体配体1(PD-L1)流式测试，横坐标为受试者类型，分为健康人组和乳腺癌、肺癌、结直肠癌、***癌、胃癌、肝癌、***、食管癌、甲状腺癌、膀胱癌、胰腺癌、卵巢癌、非霍奇金淋巴瘤、急性髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病组，纵坐标为检测到的每1万个外泌体中相关生物标志物阳性的外泌体数量。

如附图3所示结果，通过检测流式结果表明，与健康对照相比，乳腺癌、肺癌、结直肠癌、***癌、胃癌、肝癌、***、食管癌、甲状腺癌、膀胱癌、胰腺癌、卵巢癌、非霍奇金淋巴瘤、急性髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病的患者血清中PS阳性外泌体/PD-L1阳性外泌体/PS&PD-L1阳性外泌体的数量均显著高于健康对照(图3)。

进一步的，根据上述分析，继续绘制不同癌症受试者进行PS/PD-L1/PS+PD-L1指标检测的受试者工作特征曲线(ROC)，结果如附图4所示。

可见，曲线结果显示PS-外泌体/PD-L1-外泌体/PS&PD-L1-外泌体与这15种癌症之间有强相关性。表1为不同检测指标对于不同癌种的诊断相关性结果，PS和PD-L1可以作为泛癌筛查的检测指标，其中，当PS和PD-L1联用时可以展示出最佳的诊断性能。

表1不同检测指标对于不同癌种的诊断结果

实施例4

本实施例针对血清外泌体磷脂酰丝氨酸(PS)和/或血清外泌体程序性死亡受体配体(PD-L1)早期泛癌诊断效果评估。

本实施例进一步对临床上确诊为包括乳腺癌、肺癌、结直肠癌、***癌、胃癌、肝癌、***、食管癌、甲状腺癌、膀胱癌、胰腺癌、卵巢癌、非霍奇金淋巴瘤、急性髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病等癌症在内的Ⅰ期患者血清样本中的外泌体进行提取，绘制ROC曲线结果如附图5及下表2。

表2灵敏度及特异度结果

	PD-L1	PS	PS+PD-L1
				灵敏度	64.71％	74.29％	76.00％
特异度	80.00％	77.14％	86.00％

图5所示曲线及表2所示结果，PS阳性外泌体对Ⅰ期癌症患者诊断的曲线下面积AUC为：0.7796，其灵敏度和特异性分别为74.29％和77.14％，PD-L1阳性外泌体对Ⅰ期癌症患者诊断的曲线下面积(AUC)为：0.6996，其灵敏度和特异性分别为64.71％和80％，PS&PD-L1阳性外泌体对Ⅰ期癌症患者诊断的曲线下面积(AUC)为：0.8440，其灵敏度和特异性为76％和86％。

实施例5

本实施例针对血清外泌体PS&PD-L1对预后效果进行评估。

本实施例中，进一步试图评估癌症患者术前和术后(术后第7天)血清中的PS&PD-L1-外泌体的情况。本实施例收集了临床上确诊为胃癌、肝癌、肺癌、乳腺癌以及结肠癌患者术前术后的血清样本各20例，预后检测患者样本中PS+、PD-L1+、PS+PD-L1、阳性外泌体结果见附图6。

流式检测结果显示，术后样本中PS&PD-L1阳性外泌体的数量显著下降(P<0.0001)，显示血清外泌体PS&PD-L1对预后效果较好。

实施例6化学发光试剂盒的迭代

本实施例中，为进一步实现泛癌早筛试剂盒的研制，我们进行了发光平台的迭代。前期结果已经表明，血清外泌体PS和/或PD-L1在多癌种肿瘤的早期筛查/诊断/监测/预后效果评估方法展示出极好的性能，其中PS&PD-L1效果更为显著。因此，本实施例采用磁珠偶联方式。首先制备亲和磁珠，将PS的亲和蛋白包被在磁珠微球上，混匀仪上反应2-3h，使磁珠与抗体充分交联。随后制备吖啶酯标记的第二个抗体：将生物素和特异性PD-L1抗体反应30-60min，随后将生物素化的PD-L1抗体与链霉亲和素按1：1混合均匀，孵育反应30-60min，反应完成后与吖啶酯标记的生物素进行反应，获得最终反应试剂。

本实施例中，收集了鼓楼医院临床上诊断为乳腺癌、肺癌、结直肠癌、***癌、胃癌、肝癌、***、食管癌、甲状腺癌、膀胱癌、胰腺癌、卵巢癌、非霍奇金淋巴瘤、急性髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病等癌症在内的患者血清样本，与性别年龄相匹配健康对照进行外泌体提取和化学发光检测，ROC结果见附图7。

附图7所示结构显示，PS&PD-L1也展示出较好的诊断效果，与流式平台结果一致，其ROC曲线下面积为：0.9646，灵敏度和特异性分别为95％和96％。

综上，本发明通过筛选全新的标志物组合，即以外泌体表面磷酯酰丝氨酸(PS)和/或程序性死亡受体配体1(PD-L1)为生物标志物，可以实现对多种癌种进行早期的筛查/诊断/预后监测，具有高灵敏度和高特异性的优势。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims

1.一种用于多癌种早期筛查、诊断和/或监测的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物包括磷酯酰丝氨酸(PS)和/或程序性死亡受体配体1(PD-L1)。

2.根据权利要求1所述用于多癌种早期筛查、诊断和/或监测的生物标志物，其特征在于，所述磷酯酰丝氨酸和/或程序性死亡受体配体1来源于外泌体；

优选的，所述外泌体来源于体液；

优选的，所述外泌体来源于全血、血清、血浆、淋巴液、尿液、唾液、脑脊液、器官粘膜分泌液、乳汁、腹水、眼泪或***分泌物。

3.一种外泌体表面蛋白用于制备适用于多癌种早期筛查或辅助筛查、诊断或辅助诊断、术后监测或复发监测的生物标志物的用途，其特征在于，所述外泌体表面蛋白包括磷酯酰丝氨酸(PS)和/或程序性死亡受体配体1(PD-L1)。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述生物标志物适用的癌症种类包括乳腺癌、肺癌、结直肠癌、***癌、胃癌、肝癌、***、食管癌、甲状腺癌、膀胱癌、胰腺癌、卵巢癌、非霍奇金淋巴瘤、急性髓性白血病或慢性淋巴细胞白血病中的一种或多种。

5.具有如下(1)-(2)中至少一项功能的检测物用于制备诊断或辅助诊断、筛查或辅助筛查多种癌症产品的用途：

(1)检测外泌体磷酯酰丝氨酸水平和/或含量的检测物；

(2)检测外泌体程序性死亡受体配体1水平和/或含量的检测物。

6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述检测物包括：

7.一种检测外泌体表面磷酯酰丝氨酸和/或程序性死亡受体配体1水平和/或含量的检测试剂用于制备具有至少一项如下功能产品的用途：

(1)用于制备早期筛查或辅助筛查多种癌症产品的用途；

(2)用于制备早期诊断或辅助诊断多种癌症产品的用途；

(3)用于制备评估癌症患者患病风险的产品的用途；

(4)用于制备评估癌症患者预后效果的产品的用途；

(5)用于制备预测治疗癌症药物效果的产品的用途。

8.一种用于诊断或辅助诊断、筛查或辅助筛查、术后监测或复发监测多种癌症的产品，其特征在于，所述产品包括可以检测外泌体表面磷酯酰丝氨酸和/或程序性死亡受体配体1水平和/或含量的检测试剂；

所述检测试剂包括：

(1)可以结合所述磷酯酰丝氨酸的抗体、蛋白或多肽中的一种或几种的混合物；和/或，

(2)可以结合所述程序性死亡受体配体1的抗体、蛋白或多肽中的一种或几种的混合物。

9.一种用于诊断或辅助诊断、筛查或辅助筛查、术后监测或复发监测多种癌症的***，其特征在于，包括：

检测装置和/或检测试剂，所述检测装置和/或检测试剂用于测定生物样品中外泌体磷酯酰丝氨酸和/或程序性死亡受体配体1水平和/或含量；

判断装置，所述判断装置用于基于所述生物样品中外泌体磷酯酰丝氨酸和/或程序性死亡受体配体1水平和/或含量，进行诊断或辅助诊断、筛查或辅助筛查、术后监测或复发监测待测人是否患有相关癌症。

10.权利要求8所述产品或者权利要求9所述***的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)收集外泌体样品进行预处理，并利用外泌体marker对所述外泌体进行表征；

(2)将所述检测试剂与外泌体表面标志物PS和/或PD-L1相结合；

(3)检测所述试剂与外泌体表面标志物PS和/或PD-L1的结合情况；

(4)根据检测结果进行筛查或诊断结果的判断。