CN117530911B - 一种雪莲花发酵产物及其制备方法、应用和化妆品 - Google Patents

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Abstract

本发明属于日化新材料领域，公开了一种雪莲花发酵产物的制备方法，将发酵菌接种至雪莲花发酵培养液中进行有氧发酵处理，得到雪莲花发酵产物；所述雪莲花发酵培养液含碳源、银耳提取物、酵母抽提物、雪莲花粉末；所述发酵菌为酵母菌和/或复合菌。该方法采用银耳提取物、酵母抽提物、雪莲花粉末进行混合发酵，得到的发酵产物具有紧致、舒缓、抗皱的护肤功能，同时具有良好的安全温和无刺激性。同时，本发明还提供了雪莲花发酵产物以及其应用和化妆品。

Description

一种雪莲花发酵产物及其制备方法、应用和化妆品
技术领域
本发明涉及日化新材料领域，具体为一种雪莲花发酵产物及其制备方法、应用和化妆品。
背景技术
随着时代和科学技术的进步，化妆品产业也经历了无数的变革和创新，广大消费者对绿色、安全和功效型化妆品的需求日益增长，化妆品产品的核心竞争力逐步聚焦到安全和功效上。生物发酵技术作为一种新兴前沿的生物技术，利用微生物独有的某些功能，采用现代生物工程技术手段，通过工业大规模生产出产品或直接把微生物应用于产品终端，已经逐步应用到化妆品领域，大大改善化妆品的安全性和功效性。生物发酵技术应用于化妆品领域优势一方面体现在微生物中含有某些酶类，可以将植物原料的细胞壁及细胞间质中的纤维素、半纤维素等物质降解，从而使植物细胞破裂、细胞间隙增加并减小有效成分从胞内向提取介质中扩散的传质阻力，大大提高了功效成分的提取率。另一方面，生物发酵过程可以富集原材料的有效成分，产生出新的功效。相比传统的物理、化学等提取手段，生物发酵技术通过有目地选择菌种、对发酵条件进行控制、调节代谢途径并阐述发酵产物的功效机理，能够更大幅度地对有效成分进行转化和修饰，从而改进并优化原有功效成分性状；微生物转化的温和条件也可以在发酵过程中最大限度地减少对有效成分的破坏，因此对化妆品的功效性起到促进作用。此外，天然植物资源营养成分丰富，但成分复杂，存在重金属超标、农药残留等问题，限制了其应用和开发。经过微生物发酵技术进行生物转化，可以降低原来有毒物质的毒性，确保使用的安全性。雪莲为多年生菊科凤毛菊属植物，又名雪莲花、雪荷花、大木花等。雪莲适应高山环境的这种特点是其长期在高山严寒和干旱的条件下形成的，而这种特殊的生存习性和生长环境造就了雪莲广泛的药理作用和珍贵的实用价值。
雪莲花在化妆品中的应用主要分为两种，一种为提取物的使用，一种是提取物的发酵。
具体来说，如下文献所示：
现有技术1：CN110680775A，公开一种美白保湿补水精粹液，包括以下重量份的组分：
突厥蔷薇花水100-150份，麦冬根提取物5-10份，酵母提取物0.1-2份，二裂酵母发酵产物溶胞物1-5份，灵芝提取物1-5份，雪莲花提取物3-10份，银耳子实体提取物1-5份、光果甘草根提取物5-10份和防腐剂0.5-1.5份。
该技术是利用雪莲花提取物加入到化妆品中进行利用，其功效为美白、保湿、补水。
现有技术2：CN111728910A，公开了一种蓝莓和雪莲花的发酵提取物、制备方法及其应用。该蓝莓和雪莲花的发酵提取物为利用酿酒酵母对蓝莓和雪莲花共同进行发酵得到的发酵提取物。
该技术是利用雪莲花进行发酵，得到发酵提取物进行利用，其功效为保湿和抗氧化。
现有技术3：CN111249218B，公开一种雪莲发酵原液及其制备方法和应用，所述方法为混合雪莲粉末、发酵菌菌液、葡萄糖和水得初始体系，所述发酵菌菌液为植物乳杆菌与嗜热链球菌混合菌液，调节pH至4.5-6.5发酵，发酵温度35-43℃，发酵时间12-60h，得发酵液，将所述发酵液进行灭菌、离心、收集上清液，得到所述雪莲发酵原液。
该技术是利用雪莲花进行发酵，得到发酵提取物进行利用，其功效为抗氧化和美白功能。
本方案所要解决的技术问题是：如何丰富雪莲花在化妆品中的功效，提高对应的功效效果。
发明内容
本发明的目的在于提供一种雪莲花发酵产物的制备方法，该方法采用银耳提取物、酵母抽提物、雪莲花粉末进行混合发酵，得到的发酵产物具有紧致、舒缓、抗皱的护肤功能，同时具有良好的安全温和无刺激性。
同时，本发明还提供了雪莲花发酵产物以及其应用和化妆品。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种雪莲花发酵产物的制备方法，将发酵菌接种至雪莲花发酵培养液中进行有氧发酵处理，得到雪莲花发酵产物；
所述雪莲花发酵培养液含碳源、银耳提取物、酵母抽提物、雪莲花粉末；
所述发酵菌为酵母菌和/或复合菌；
所述复合菌由嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、保加利亚乳杆菌、长双歧杆菌、短双歧杆菌、乳双歧杆菌、青春双歧杆菌、两歧双歧杆菌，婴儿双歧杆菌组成；
所述雪莲花发酵培养液中雪莲花粉末的浓度为0.1wt%～10wt%；
所述雪莲花发酵培养液中银耳提取物的浓度为0.1wt%～5wt%；
所述雪莲花发酵培养液中酵母抽提物的浓度为0.1wt%～5wt%；
所述雪莲花发酵培养液中碳源的浓度为0.1wt%～10wt%；
所述发酵菌的加入量为0.1～1g/kg雪莲花发酵培养液。
本发明的核心创造点在于利用酵母菌发酵含银耳提取物、酵母抽提物、雪莲花粉末的培养基。
具体来说，银耳提取物的主要成分为银耳多糖，其单独作用于化妆品时，能够起到皮肤调理和保湿作用，当其作为发酵培养液的成分存在时，其能够促进酵母菌的活性，在相关的文献（银耳多糖对嗜酸乳杆菌L101发酵生长影响的研究，《食品研究与开发》，2008年11月第29卷第11期）中已有报道；在本项目的研究过程中，我们发现银耳多糖同样对酵母菌的活性有着积极的影响；同时发酵后的产物中含有大量的活性银耳多糖，其能够起到非常好的保湿、美白和紧致效果；
酵母抽提物是通过提取酵母细胞中的可溶性成分（蛋白质、氨基酸、肽、核苷酸等），制成的黄色粉状或膏状产品，这些可溶性成分一方面作为提高酵母菌活性的有效成分，另外一方面发酵产物中含有这些有效成分能够起到较好的紧致、舒缓、抗皱作用。
雪莲花本身是一种中药常用药，其药效为甘温、微苦、归肝、肾经，可祛风湿、强筋骨、补肾阳、调经止血。雪莲花粉中含有丰富的多酚类化合物、黄酮类化合物以及维生素C、熊果苷，此外其含有蛋白质、天然植物多糖、有机酸、脂类等，在发酵菌的作用下，可以将有效成分释放到发酵液中，同时对蛋白质等进行分解，得到多种功能性多肽和氨基酸等。
通过以上的处理，得到的雪莲花发酵产物在紧致、舒缓、抗皱等方面具有优异的效果。
在上述的雪莲花发酵产物的制备方法中，所述碳源为蔗糖、葡萄糖、糖蜜中的一种或多种。
在上述的雪莲花发酵产物的制备方法中，所述雪莲花发酵培养液中，银耳提取物的浓度为0.1wt%～1wt%，雪莲花粉末的浓度为0.1wt%～5wt%，酵母抽提物的浓度为0.1wt%～1wt%，碳源的浓度为1wt%～3wt%。
在上述的雪莲花发酵产物的制备方法中，所述雪莲花发酵培养液中，银耳提取物的浓度为0.5wt%，雪莲花粉末的浓度为1.25wt%～5wt%，酵母抽提物的浓度为0.5wt%，碳源的浓度为2wt%，余量为水。
在上述的雪莲花发酵产物的制备方法中，所述发酵菌为酿酒酵母菌；
或，所述发酵菌为酿酒酵母菌和复合菌；
或，所述发酵菌为复合菌；
所述复合菌为安琪酵母股份有限公司提供的品名为百钻双歧杆菌10菌型酸奶发酵剂的复合菌。
在上述的雪莲花发酵产物的制备方法中，所述发酵菌以活菌菌粉的形式加入到雪莲花发酵培养液中。
在上述的雪莲花发酵产物的制备方法中，所述方法具体为：
S1、将碳源、雪莲花粉末、银耳提取物、酵母抽提物、水混合配制得到雪莲花发酵培养液，并调节溶液pH；
S2、将雪莲花发酵培养液进行灭菌；
S3、向冷却后的灭菌后的雪莲花发酵培养液中加入发酵菌，溶氧含量数值为10%～50%，将搅拌转速关联溶氧含量，自动补偿调节转速；
S4、发酵培养结束后，将发酵培养液进行灭菌；
S5、使用离心机处理雪莲花发酵培养液，收集离心后的培养上清；
S6、将培养上清进行澄清过滤后制备得到雪莲花发酵产物。
在上述的雪莲花发酵产物的制备方法中，如果发酵菌仅含酵母菌，则发酵温度为26～29℃，发酵时间为6～72h；
如果发酵菌为复合菌和酵母菌，则先将酵母菌加入到雪莲花发酵培养液中，发酵温度为26～29℃，发酵时间为6～72h；然后再将复合菌加入到雪莲花发酵培养液中，提高发酵温度为36～38℃，发酵时间为6～72h；
S1中，pH为5.5～7.5。
同时，本发明还公开了一种雪莲花发酵产物，采用如上任一所述的方法制备得到。
同时，本发明还提供了上述的雪莲花发酵产物制备日化品的用途。
优选地，所述日化品的剂型为乳液、膏霜、精油或以水为连续相的精华液。
最后，本发明还提供一种化妆品，含有如上所述的雪莲花发酵产物。
优先地，所述化妆品中含有0.01wt%～10wt%所述的雪莲花发酵产物。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
（1）在发酵工艺方面，本发明选用不同的微生物菌种，即采用真菌类型的酿酒酵母菌、细菌微生物双歧杆菌等复合菌，以及包含真菌酵母菌和双歧杆菌等的细菌菌剂的联合菌剂对雪莲花培养液进行发酵，利用发酵罐实现微生物的高密度实现高密度培养，有利于对雪莲花的功效活性物进行高效提取，同时，利用微生物独特的代谢酶系，将培养液中多种小分子蛋白，有机酸，脂质等进行不同形式的转化，产生多种有益的新的活性物。
利用微生物发酵的形式对植物进行提取，一方面高程度提取和保留了植物本身功效物的含量和活性，另一方面，微生物在对植物代谢过程中，可以产生多种微生物活性成分，同时转化产生新的功效成分及降解植物毒性。本发明提供了不同类型微生物的雪莲花发酵产物制备方法，同时所制备的雪莲花发酵产物具有紧致、舒缓、抗皱的护肤功能，同时具有良好的安全温和无刺激性。
（2）在原料选择方面，选择了银耳提取物、酵母抽提物来辅助雪莲花粉进行发酵制备，得到功效更丰富、功效能力更强的产品，具体来说，
银耳提取物的主要成分为银耳多糖，其单独作用于化妆品时，能够起到皮肤调理和保湿作用，当其作为发酵培养液的成分存在时，其能够促进酵母菌的活性，在相关的文献（银耳多糖对嗜酸乳杆菌L101发酵生长影响的研究，《食品研究与开发》，2008年11月第29卷第11期）中已有报道；在本项目的研究过程中，我们发现银耳多糖同样对酵母菌的活性有着积极的影响；同时发酵后的产物中含有大量的活性银耳多糖，其能够起到非常好的保湿、美白和紧致效果；
酵母抽提物是通过提取酵母细胞中的可溶性成分（蛋白质、氨基酸、肽、核苷酸等），制成的黄色粉状或膏状产品，这些可溶性成分一方面作为提高酵母菌活性的有效成分，另外一方面发酵产物中含有这些有效成分能够起到较好的紧致、舒缓、抗皱作用。
雪莲花本身是一种中药常用药，其药效为甘温、微苦、归肝、肾经，可祛风湿、强筋骨、补肾阳、调经止血。雪莲花粉中含有丰富的多酚类化合物、黄酮类化合物以及维生素C、熊果苷，此外其含有蛋白质、天然植物多糖、有机酸、脂类等，在发酵菌的作用下，可以将有效成分释放到发酵液中，同时对蛋白质等进行分解，得到多种功能性多肽和氨基酸等。
通过以上优化，得到的雪莲花发酵产物在紧致（弹性蛋白酶抑制率测试）、舒缓（透明质酸酶抑制率测试）、抗皱（DPPH自由基清除率测试）等方面具有优异的效果。
附图说明
图1 为本发明的实施例3的配方的鸡胚绒毛***试验结果图（0min）；
图2 为本发明的实施例3的配方的鸡胚绒毛***试验结果图（5min）；
图3 为本发明的实施例4的配方的鸡胚绒毛***试验结果图（0min）；
图4 为本发明的实施例4的配方的鸡胚绒毛***试验结果图（5min）；
图5为本发明的实施例5的配方的鸡胚绒毛***试验结果图（0min）；
图6 为本发明的实施例5的配方的鸡胚绒毛***试验结果图（5min）；
图7 为采用生理盐水测试的鸡胚绒毛***试验结果图（0min）；
图8 为采用生理盐水测试的鸡胚绒毛***试验结果图（5min）；
图9 为采用氢氧化钠溶液测试的鸡胚绒毛***试验结果图（0min）；
图10 为采用氢氧化钠溶液测试的鸡胚绒毛***试验结果图（5min）。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
原料和试剂
银耳提取物：河南龙腾生物工程有限公司，多糖含量50%，500g/袋；
酵母抽提物：广州鼎国生物技术有限公司500g/瓶，品牌OXOID，型号LP0021B，来源：进口；
雪莲花粉末：安徽惠丰国药有限公司500g/袋，生产批号230601，生产日期20230615，执行标准《安徽省中药饮片炮制规范》2019版；药品生产许可证：皖20190401；
酿酒酵母：广东微生物菌种保藏中心货号，CGMCC 2.1364；冻干粉/1支；
复合菌：安琪酵母股份有限公司8g/袋；品牌：Baker Dream/百钻；系列：10菌；产地：中国江苏省苏州市；品名：百钻双歧杆菌10菌型酸奶发酵剂；生产许可证编号：SC10632050900407。
实施例1 单一发酵菌剂酵母菌雪莲花发酵产物的制备
按照每1千克含葡萄糖20克、银耳提取物5克、酵母抽提物5克、雪莲花粉末12.5克的比例混合配制得到雪莲花发酵培养液，并调节溶液pH为6.0。配制完成后将上述培养液进行121℃，20min高温高压灭菌。待培养液冷却后向灭菌后的雪莲花发酵培养液中加入酿酒酵母菌剂，比例为每1千克培养液加入0.5克。设置发酵罐恒温培养温度28℃，溶氧含量数值为30%，搅拌转速关联溶氧含量，自动补偿调节转速，发酵培养时间24h。发酵培养结束后，将培养液进行121℃，20min高温高压灭菌。灭菌结束后使用离心机转速12000rpm处理雪莲花发酵培养液，收集离心后的培养上清。将培养上清进行澄清制备得到雪莲花发酵产物。
实施例2 单一发酵菌剂酵母菌雪莲花发酵产物的制备
按照每1千克含葡萄糖20克、银耳提取物5克、酵母抽提物5克、雪莲花粉末25克的比例混合配制得到雪莲花发酵培养液，并调节溶液pH为6.0。配制完成后将上述培养液进行121℃，20min高温高压灭菌。待培养液冷却后向灭菌后的雪莲花发酵培养液中加入酿酒酵母菌剂，比例为每1千克培养液加入0.5克。设置发酵罐恒温培养温度28℃，溶氧含量数值为30%，搅拌转速关联溶氧含量，自动补偿调节转速，发酵培养时间24h。发酵培养结束后，将培养液进行121℃，20min高温高压灭菌。灭菌结束后使用离心机转速12000rpm处理雪莲花发酵培养液，收集离心后的培养上清。将培养上清进行澄清制备得到雪莲花发酵产物。
实施例3 单一发酵菌剂酵母菌雪莲花发酵产物的制备
按照每1千克含葡萄糖20克、银耳提取物5克、酵母抽提物5克、雪莲花粉末50克的比例混合配制得到雪莲花发酵培养液，并调节溶液pH为6.0。配制完成后将上述培养液进行121℃，20min高温高压灭菌。待培养液冷却后向灭菌后的雪莲花发酵培养液中加入酿酒酵母菌剂，比例为每1千克培养液加入0.5克。设置发酵罐恒温培养温度28℃，溶氧含量数值为30%，搅拌转速关联溶氧含量，自动补偿调节转速，发酵培养时间24h。发酵培养结束后，将培养液进行121℃，20min高温高压灭菌。灭菌结束后使用离心机转速12000rpm处理雪莲花发酵培养液，收集离心后的培养上清。将培养上清进行澄清制备得到雪莲花发酵产物。
实施例4 复合菌雪莲花发酵产物的制备
按照每1千克含葡萄糖20克、银耳提取物5克、酵母抽提物5克、雪莲花粉末50克的比例混合配制得到雪莲花发酵培养液，并调节溶液pH为6.0。配制完成后将上述培养液进行121℃，20min高温高压灭菌。待培养液冷却后向灭菌后的雪莲花发酵培养液中加入复合细菌发酵菌剂，比例为每1千克培养液加入0.5克。设置发酵罐恒温培养温度37℃，溶氧含量数值为30%，搅拌转速关联溶氧含量，自动补偿调节转速，发酵培养时间24h。发酵培养结束后，将培养液进行121℃，20min高温高压灭菌。灭菌结束后使用离心机转速12000rpm处理雪莲花发酵培养液，收集离心后的培养上清。将培养上清进行澄清制备得到雪莲花发酵产物。
实施例5 复合菌和酵母菌联合发酵菌剂雪莲花发酵产物的制备
按照每1千克含葡萄糖20克、银耳提取物5克、酵母抽提物5克、雪莲花粉末50克的比例混合配制得到雪莲花发酵培养液，并调节溶液pH为6.0。配制完成后将上述培养液进行121℃，20min高温高压灭菌。待培养液冷却后向灭菌后的雪莲花发酵培养液中加入酿酒酵母菌剂，比例为每1千克培养液加入0.5克。设置发酵罐恒温培养温度28℃，溶氧含量数值为30%，搅拌转速关联溶氧含量，自动补偿调节转速，发酵培养时间24h。24h后，加入复合细菌发酵菌剂，比例为每1千克培养液加入0.5克。设置发酵罐恒温培养温度37℃，溶氧含量数值为30%，搅拌转速关联溶氧含量，自动补偿调节转速，发酵培养时间24h。发酵培养结束后，将培养液进行121℃，20min高温高压灭菌。灭菌结束后使用离心机转速12000rpm处理雪莲花发酵培养液，收集离心后的培养上清。将培养上清进行澄清制备得到雪莲花发酵产物。
实施例6
大体同实施例5，不同的地方在于，按照每1千克含葡萄糖10克、银耳提取物10克、酵母抽提物10克、雪莲花粉末10克的比例混合配制得到雪莲花发酵培养液。
实施例7
大体同实施例5，不同的地方在于，按照每1千克含葡萄糖30克、银耳提取物1克、酵母抽提物1克、雪莲花粉末1克的比例混合配制得到雪莲花发酵培养液。
对比例1
大体同实施例5，不同的地方在于，按照每1千克含葡萄糖20克、酵母抽提物10克、雪莲花粉末50克的比例混合配制得到雪莲花发酵培养液。
对比例2
大体同实施例5，不同的地方在于，按照每1千克含葡萄糖20克、灵芝多糖提取物5克、酵母抽提物5克、雪莲花粉末50克的比例混合配制得到雪莲花发酵培养液。
对比例3
大体同实施例5，不同的地方在于，按照每1千克含葡萄糖20克、海藻多糖提取物5克、酵母抽提物5克、雪莲花粉末50克的比例混合配制得到雪莲花发酵培养液。
对比例4
大体同实施例5，不同的地方在于，发酵菌为复合菌和红曲霉菌，将第一步酿酒酵母由红曲霉菌等比例替代。
对比例5
配置混合液，所述混合液中含银耳提取物5克、酵母抽提物5克、雪莲花提取物（SAUSSUREA INVOLUCRATA EXTRACT，供应商为：安徽惠丰国药有限公司）50克，加去离子水之1kg；搅拌分散，充分的溶解浸泡各原料24h，然后过滤，得到精华液。
测试例1.雪莲花发酵产物的功效测试
测试方法：
1.1弹性蛋白酶抑制率测试
对照物及试验样品处理：
样品：实施例1～7的雪莲花发酵产物、以及对比例1～4的雪莲花发酵产物以及对比例5的精华液。
阳性对照物（EGCG）：0.1% 表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG，98%）水溶液。
阴性对照物：纯水。
试验操作步骤
设立样品组、样品本底组、溶剂组和溶剂本底组，每个组别需设立3个平行，在96孔板中分别加入不同试剂溶液，轻轻摇匀，25℃孵育15min后，将其放在酶标仪中，在410nm处测定吸光值。
计算公式
；
式中：A—为不含样品的反应溶液的吸光度；
B—为不含样品和酶的反应溶液的吸光度；
C—为含有样品和酶的反应溶液的吸光度；
D—为含有样品和不含酶的反应溶液的吸光度。
数据分析
统计分析软件为SPSS，试验样品、阳性对照物和阴性对照物弹性蛋白酶抑制率之间的比较采用独立样本t检验。上述统计分析均为双尾检验，显著性水平为a=0.05。P≥0.05，表示两组之间无显著性差异；P＜0.05，表示两组之间具有显著性差异。
1.2透明质酸酶抑制率测试
对照物及试验样品处理
样品：实施例1～7雪莲花发酵产物、以及对比例1～4的雪莲花发酵产物以及对比例5的精华液。
阳性对照物：3%甘草酸二钾水溶液（甘草酸二钾，纯度≥98%）。
阴性对照物：纯水。
试验操作步骤
设立样品组、样品本底组、溶剂组和溶剂本底组，每个组别需设立3个平行，分别在四组中加入不同试剂溶液，摇匀，室温放置30min显色，用紫外分光光度计测定波长为528nm处吸光度值。
计算公式
；
式中：A—为不含样品的反应溶液的吸光度；
B—为不含样品和酶的反应溶液的吸光度；
C—为含有样品和酶的反应溶液的吸光度；
D—为含有样品和不含酶的反应溶液的吸光度。
数据分析
统计分析软件为SPSS，试验样品、阳性对照物和阴性对照物透明质酸酶抑制率之间的比较采用独立样本t检验。上述统计分析均为双尾检验，显著性水平为a=0.05。P≥0.05，表示两组之间无显著性差异；P＜0.05，表示两组之间具有显著性差异。
1.3 DPPH自由基清除率测试
对照物及试验样品处理：
样品：实施例1～7雪莲花发酵产物、以及对比例1～4的雪莲花发酵产物以及对比例5的精华液。
阳性对照物：0.1%维生素E（纯度≥95%）的乙醇（95%）溶液。
阴性对照物：纯水。
试验操作步骤
设立样品管、样品本底管、DPPH管和溶剂本底管，每个组别需设立3个平行管，分别在四个组别中加入不同试剂溶液，轻轻摇匀，室温下静置5min。将各组反应溶液移入1cm比色皿中，在517nm处测定吸光值。
计算公式
；
式中：
T—为样品管吸光值，即样品与DPPH反应后溶液吸光值；
T0—为样品本底吸光值；
C—为DPPH管吸光值3次平行值，即未加样品时DPPH溶液吸光值；
C0—为含溶液本底吸光值。
数据分析
统计分析软件为SPSS，试验样品、阳性对照物和阴性对照物透明质酸酶抑制率之间的比较采用独立样本t检验。上述统计分析均为双尾检验，显著性水平为a=0.05。P≥0.05，表示两组之间无显著性差异；P＜0.05，表示两组之间具有显著性差异。
测试结果
弹性蛋白酶抑制率% 测试结果如表1所示：
表1 弹性蛋白酶抑制率结果
项目 弹性蛋白酶抑制率% P值
实施例1 41.322±0.716 ＜0.05
实施例2 43.388±2.581 ＜0.05
实施例3 45.868±0.716 ＜0.05
实施例4 46.694±5.010 ＜0.05
实施例5 45.041±5.726 ＜0.05
实施例6 20.909±2.727 ＜0.05
实施例7 19.091±1.575 ＜0.05
对比例1 8.182±2.727 ＜0.05
对比例2 30.928±1.786 ＜0.05
对比例3 21.649±3.571 ＜0.05
对比例4 23.711±3.093 ＜0.05
对比例5 6.186±3.093 ＜0.05
阴性对照 -6.098±1.829 /
阳性对照 87.805±2.794 ＜0.05
由表1可知，实施例1～5所得的雪莲花发酵产物对弹性蛋白酶都有较明显的抑制效果，通过检测数据可知，本发明采用不同菌种对雪莲花的发酵方式，即使用单一菌剂酿酒酵母菌，复合菌，联合菌剂包含酿酒酵母和复合菌等，发酵所得到的雪莲花发酵产物都有较优异的舒缓功效。
通过对比例1-3可见，银耳提取物在本发明中是一个关键成分，当其被其他具有类似功能多糖的组分替换后，其弹性蛋白酶抑制效果明显降低。
透明质酸酶抑制率% 测试结果如表2所示：
表2 透明质酸酶抑制率结果
项目 透明质酸酶抑制率% P值
实施例1 25.615±0.355 ＜0.05
实施例2 39.754±0.939 ＜0.05
实施例3 41.393±1.280 ＜0.05
实施例4 35.246±0.939 ＜0.05
实施例5 30.123±1.775 ＜0.05
实施例6 22.417±0.338 ＜0.05
实施例7 35.283±1.217 ＜0.05
对比例1 43.080±0.585 ＜0.05
对比例2 21.942±0.360 ＜0.05
对比例3 29.844±1.589 ＜0.05
对比例4 31.175±1.362 ＜0.05
对比例5 40.048±0.719 ＜0.05
阴性对照 -2.667±2.0367 /
阳性对照 57.33±0.7689 ＜0.05
由表2可知，实施例1～7所得的雪莲花发酵产物对透明质酸酶都有较明显的抑制效果，通过检测数据可知，本发明采用不同菌种对雪莲花的发酵方式，即使用单一菌剂酿酒酵母菌，复合菌，联合菌剂包含酿酒酵母和复合菌等，发酵所得到的雪莲花发酵产物都有较优异的紧致功效。
需要说明的是：在透明质酸酶的检测过程中，出现了一些令人比较难于理解的数据结果，对比例5的抑制效果优于实施例5，这是在实验进行过程中所没有预期的结果。或者猜测，发酵并不利于透明质酸酶抑制效果的提高。
同时实施例7的抑制效果优于实施例5和实施例6，这也是令人难于理解的，经过和检测人员的开会讨论，暂时无法针对该结果给出合理的机理解释。
通过实施例5、对比例1-3可见，银耳提取物在透明质酸酶的抑制方面并非占据绝对优势。
DPPH自由基清除率% 测试结果如表3所示：
表3 DPPH自由基清除率结果
项目 DPPH自由基清除率% P值
实施例1 46.247±0.951 ＜0.05
实施例2 41.614±0.686 ＜0.05
实施例3 49.718±1.238 ＜0.05
实施例4 56.250±1.145 ＜0.05
实施例5 47.582±1.011 ＜0.05
实施例6 16.028±2.830 ＜0.05
实施例7 16.695±2.806 ＜0.05
对比例1 2.064±0.865 ＜0.05
对比例2 26.108±1.156 ＜0.05
对比例3 18.059±1.654 ＜0.05
对比例4 19.235±2.386 ＜0.05
对比例5 1.938±0.199 ＜0.05
阴性对照 -2.721±0.012 /
阳性对照 85.355±1.287 ＜0.05
由表3可知，实施例1～5所得的雪莲花发酵产物对DPPH自由基都有较明显的清除效果，通过检测数据可知，本发明采用不同菌种对雪莲花的发酵方式，即使用单一菌剂酿酒酵母菌，复合菌，联合菌剂包含酿酒酵母和复合菌等，发酵所得到的雪莲花发酵产物都有较优异的抗皱功效。
总结：通过表1至表3可以得到以下结论：
1.在DPPH自由基清除率、弹性蛋白酶抑制率方面，实施例普遍优于对比例；
2.在透明质酸酶抑制率方面，各个测试组具有一定的不确定性，但是很明显的是，采用单一菌种发酵会优于复合菌种发酵。
3.基于综合优势判断，选择实施例3-5所代表的配方是本发明的最优选。
4.基于综合优势判断，采用复合细菌发酵菌剂发酵由于二次发酵和单一酿酒酵母菌发酵。
5.基于综合优势判断，在配方中使用银耳提取物是一个非常重要、不可或缺的手段。
6.基于表2的结果启示，在实际应用配方中，在发酵产物的基础上再额外加入银耳提取物、酵母抽提物、雪莲花提取物或许是实现各项性能最优化的一个方向。在后续实验中，会进行这方面的研究和探讨；如在实施例1-5的基础上，特别是在实施例4的基础上，加入10～50wt%对比例5所示的精华液。
测试例2.雪莲花发酵产物的安全性测试
一、测试方法
鸡胚绒毛***试验
对照物及试验样品处理
样品：实施例3至实施例5雪莲花发酵产物。
阴性对照物：生理盐水。
阳性对照物：0.1mol/L NaOH溶液。
试验操作步骤
本次测试每组选用6只鸡胚，用拍照设备记录绒毛***的情况，将聚四氟乙烯树脂环置于鸡胚的绒毛***上并拍照记录。把待测样品加至聚四氟乙烯树脂环内，记录加样品的时间并用润湿的保鲜膜盖在气室上，把鸡胚移至恒温恒湿箱内培养，观察每种毒性效应变化的程度。
计算结果：
采用终点评价法进行试验，计算终点评价（ES），结果保留小数点后两位；每只鸡胚记分=每只鸡胚观察到的出血、凝血和血管融解程度的和；ES-6鸡胚得到的数学总和的平均值。按照以下公式计算ES平均分值：
；
结果判定标准：
ES≤4，无刺激性；4＜ES≤12，轻刺激性；12＜ES＜16，中度刺激性；ES≥16，强刺激性/腐蚀性。
二、 测试结果
鸡胚绒毛***试验测试结果如表4所示：
表4 鸡胚绒毛***试验测试结果
项目 ES分值 结果
实施例3 3.67 无刺激性
实施例4 4.00 无刺激性
实施例5 3.67 无刺激性
阳性对照 18.00 强刺激性
实施例1～3都是采用单一菌剂酿酒酵母和相同发酵方式，区别在于实施例3雪莲花粉末的添加量更多，通过前期表由表1～3的功效检测数据可知，实施例3的功效数据均优异于实施例1～2，因此，这里只对实施例3～5的雪莲花发酵产物作安全性检测。
由表4和附图1～10可知，实施例3～5所得的雪莲花发酵产物对鸡胚绒毛***均无刺激性，因此可说明本发明采用不同菌种对雪莲花的发酵方式，即使用单一菌剂酿酒酵母菌，复合菌保加利亚乳杆菌、双歧杆菌等，联合菌剂包含酿酒酵母和复合菌等，发酵所得到的雪莲花发酵产物都具有良好的安全性。
应用例
一种半乳糖酵母菌雪莲花精华液，由A相、B相、C相和D相组成：
A相包含以下质量百分比的各组分：3g 1，3-丁二醇、5g甘油、0.2g Carbopol 941、0.02g EDTA 二钠、0.05g透明质酸；
B相包含以下质量百分比的各组分：0.05g辛酰羟戊酸、0.05g乙基己基甘油、0.6g1，2-己二醇、1g 1，2-戊二醇；
C相包含以下质量百分比的各组分：0.2g精氨酸；
D相包含以下质量百分比的各组分：5g雪莲花发酵原液。
一种半乳糖酵母菌雪莲花精华液，将A相加入至乳化锅中，加热至85℃，搅拌均匀，接着降温到45℃，依次加入B、C、D相，30r/min搅拌10min，得到半乳糖酵母菌雪莲花精华液。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。

Claims (8)

1.一种雪莲花发酵产物的制备方法，其特征在于，将发酵菌接种至雪莲花发酵培养液中进行有氧发酵处理，经灭菌、分离和收集上清，得到雪莲花发酵产物；有氧发酵时雪莲花发酵培养液的溶氧含量数值为10%～50%，pH为5.5～7.5，有氧发酵的发酵温度为37℃，发酵时间为24h；
所述雪莲花发酵培养液含碳源、银耳提取物、酵母抽提物、雪莲花粉末；
所述发酵菌为复合菌；所述复合菌的品名为百钻双歧杆菌10菌型酸奶发酵剂的复合菌；
所述雪莲花发酵培养液中，银耳提取物的浓度为0.1wt%～1wt%，雪莲花粉末的浓度为0.1wt%～5wt%，酵母抽提物的浓度为0.1wt%～1wt%，碳源的浓度为1wt%～3wt%；
所述发酵菌的加入量为0.1～1g/kg雪莲花发酵培养液；
所述发酵菌以活菌菌粉的形式加入到雪莲花发酵培养液中。
2.根据权利要求1所述的雪莲花发酵产物的制备方法，其特征在于，所述碳源为蔗糖、葡萄糖、糖蜜中的一种或多种。
3.根据权利要求1或2所述的雪莲花发酵产物的制备方法，其特征在于，所述方法具体为：
S1、将碳源、雪莲花粉末、银耳提取物、酵母抽提物、水混合配制得到雪莲花发酵培养液，并调节溶液pH；
S2、将雪莲花发酵培养液进行灭菌；
S3、向冷却后的灭菌后的雪莲花发酵培养液中加入发酵菌，将搅拌转速关联溶氧含量，自动补偿调节转速；
S4、发酵培养结束后，将发酵培养液进行灭菌；
S5、使用离心机处理经发酵培养并灭菌后的雪莲花发酵培养液，收集离心后的培养上清；
S6、将培养上清进行澄清过滤后制备得到雪莲花发酵产物。
4.一种雪莲花发酵产物，其特征在于，采用如权利要求1～3任一所述的方法制备得到。
5.采用如权利要求4所述的雪莲花发酵产物制备日化品的用途。
6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述日化品的剂型为乳液、膏霜、精油或以水为连续相的精华液。
7.一种化妆品，其特征在于，含有如权利要求4所述的雪莲花发酵产物。
8.根据权利要求7所述的化妆品，其特征在于，所述化妆品中含有0.01wt%～10wt%所述的雪莲花发酵产物。
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