CN117460427A - 关节功能改善用组合物 - Google Patents

关节功能改善用组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN117460427A
CN117460427A CN202280011725.3A CN202280011725A CN117460427A CN 117460427 A CN117460427 A CN 117460427A CN 202280011725 A CN202280011725 A CN 202280011725A CN 117460427 A CN117460427 A CN 117460427A
Authority
CN
China
Prior art keywords
strain
lactobacillus
bifidobacterium
joint function
lactococcus
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202280011725.3A
Other languages
English (en)
Inventor
中野礼彪
安枝武彦
瀬户泰幸
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Megmilk Snow Brand Co Ltd
Original Assignee
Megmilk Snow Brand Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Megmilk Snow Brand Co Ltd filed Critical Megmilk Snow Brand Co Ltd
Publication of CN117460427A publication Critical patent/CN117460427A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A21—BAKING; EDIBLE DOUGHS
    • A21D—TREATMENT, e.g. PRESERVATION, OF FLOUR OR DOUGH, e.g. BY ADDITION OF MATERIALS; BAKING; BAKERY PRODUCTS; PRESERVATION THEREOF
    • A21D13/00—Finished or partly finished bakery products
    • A21D13/40—Products characterised by the type, form or use
    • A21D13/45—Wafers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
    • A23C19/02—Making cheese curd
    • A23C19/032—Making cheese curd characterised by the use of specific microorganisms, or enzymes of microbial origin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
    • A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L21/00—Marmalades, jams, jellies or the like; Products from apiculture; Preparation or treatment thereof
    • A23L21/10—Marmalades; Jams; Jellies; Other similar fruit or vegetable compositions; Simulated fruit products
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L9/00—Puddings; Cream substitutes; Preparation or treatment thereof
    • A23L9/10—Puddings; Dry powder puddings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/745—Bifidobacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/306—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on bone mass, e.g. osteoporosis prevention
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A23V2400/181—Salivarius
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/21—Streptococcus, lactococcus
    • A23V2400/239—Oralis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/51—Bifidobacterium
    • A23V2400/533—Longum
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus
    • C12R2001/23—Lactobacillus acidophilus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/46—Streptococcus ; Enterococcus; Lactococcus

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Sealing Material Composition (AREA)

Abstract

本发明解决的问题是提供：一种关节功能改善用组合物，其促进软骨细胞增殖并抑制滑膜细胞产生炎症因子、软骨基质降解因子、疼痛因子和神经伸长因子，因此，其可用于预防和治疗各种关节病，例如以膝骨关节炎为代表的骨关节炎和类风湿性关节炎；和各自含有前述组合物的关节功能改善用产品如饮食品、饲料和药品。一种关节功能改善用组合物，其包含属于乳杆菌属、乳球菌属、链球菌属或双歧杆菌属的细菌的细胞或其培养物。一种关节功能改善剂、关节功能改善用饮食品、关节功能改善用营养组合物、关节功能改善用饲料或关节功能改善用药品，其各自的特征在于，包含前述关节功能改善用组合物。

Description

关节功能改善用组合物
技术领域
本发明涉及一种关节功能改善用组合物，其可以改进关节功能。本发明具有促进软骨细胞生长的作用和抑制滑膜细胞产生炎症因子、软骨基质降解因子、疼痛因子或神经伸长因子的作用。根据本发明，可以提供一种具有关节功能改善作用的材料，其可用于预防或治疗各种关节病，例如包括作为典型实例的膝骨关节炎的骨关节炎和类风湿性关节炎。本发明进一步涉及含有具有关节功能改善作用的材料的关节功能改善剂、关节功能改善用饮食品、关节功能改善用营养组合物、关节功能改善用饲料或关节功能改善用药品。
背景技术
日本人的平均寿命最近已超过80岁，且该国家已经进入其中4人中约1人为65岁以上的超高龄社会。因此，运动障碍的发病率稳步增加。在2007年，日本整形外科协会(Japanese Orthopaedic Association)提出了一个新术语“运动障碍综合征(locomotivesyndrome)”，以改变公民和医生对运动器官(locomotorium)的健康的维持和改善以及护理的态度。运动障碍综合征是指由于运动器官功能障碍而需要长期护理的状态以及处于增加的需要长期护理的风险的状态，运动器官一般包括具有支撑和移动身体的作用的器官，例如骨骼、关节、韧带、脊柱、脊髓、肌肉、肌腱和周围神经。运动器官的典型的疾病和功能损伤包括骨质疏松症、肌少症、和骨关节炎等。
在2009年，日本的膝骨关节炎的患者数量估计约为2530万。据说50岁以上的群体的20％至30％遭受膝骨关节炎，膝骨关节炎是患者数量最多的关节病。引起骨关节炎的因素被认为是由于衰老和遗传因素导致的关节构成部分的退化，由于肥胖、劳动和运动等导致的关节的负荷。由于伴随骨关节炎的发作，在关节周围的滑膜组织中引起炎症，包括软骨的减少或丧失等关节变形加速。伴随并发炎症和关节变形，许多骨关节炎患者遭受疼痛，并且他们的QOL(生活质量)大幅下降。
由于关节软骨没有任何血管或神经元，因此一旦关节软骨受损，它的自发恢复被认为是困难的。因此，当骨关节炎的症状轻时，采用例如热疗和牵引等物理治疗、或使用镇痛药或抗炎药的缓和治疗。然而，现有的类固醇和非类固醇抗炎药具有例如肾上腺功能不全和小肠紊乱等副作用的严重问题。当症状严重时，实施向关节输注透明质酸或采用关节置换。然而，在日常生活中，为了缓解骨关节炎的症状和提高患者的QOL，针对疾病的本质，患者需要通过每日的、安全的且长期的摄取食物或食物中含有的活性成分，由患者自己维持软骨的形状、预防或修复软骨变形、或再生丧失的软骨和抑制关节周围的炎症和疼痛。
迄今为止，公开了一种关节功能改善剂，其特征在于含有枸杞(Lycium)提取物(专利文献1)。然而，迄今为止还不知道乳酸菌或双歧杆菌的细菌细胞组分或培养物直接作用于软骨细胞或滑膜细胞，因此促进软骨细胞的生长并抑制滑膜细胞产生炎症因子、软骨基质降解因子、疼痛因子或神经伸长因子。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：JP2020-94015A
发明内容
发明要解决的问题
本发明的一个目的是提供一种可以日常且安全地长期摄取的材料，并且所述材料具有促进软骨细胞的生长的作用、修复或再生变形或丧失的软骨以及缓解疼痛和关节功能改善作用的优异效果。本发明的另一目的是提供一种具有抑制滑膜细胞产生炎症因子、软骨基质降解因子、疼痛因子或神经伸长因子的作用的材料。所述材料可用于预防或治疗各种关节病，例如包括作为典型实例的膝骨关节炎的骨关节炎和类风湿性关节炎。本发明的另一目的是提供一种关节功能改善剂、关节功能改善用饮食品、关节功能改善用营养组合物、关节功能改善用饲料或关节功能改善用药品，其中混合了具有关节功能改善作用的材料。所述材料具有促进软骨细胞生长的作用。此外，所述材料具有抑制滑膜细胞产生炎症因子、软骨基质降解因子、疼痛因子或神经伸长因子的作用，因此具有修复或再生变形或丧失的软骨以及缓解疼痛的优异效果。
用于解决问题的方案
作为为了实现上述目的而进行广泛研究的结果，本发明人已经发现一些乳酸菌或双歧杆菌具有促进软骨细胞生长的作用或抑制滑膜细胞产生炎症因子、软骨基质降解因子、疼痛因子或神经伸长因子的作用，从而完成了本发明。
即，本发明具有以下特征。
(1)一种关节功能改善用组合物，其包含属于乳杆菌属(Lactobacillus)、乳球菌属(Lactococcus)、链球菌属(Streptococcus)或双歧杆菌属(Bifidobacterium)的细菌的细菌细胞和/或培养物作为活性成分。
(2)(1)的关节功能改善用组合物，其特征在于，所述属于乳杆菌属、乳球菌属、链球菌属或双歧杆菌属的细菌是选自嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)、唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、洛迪乳球菌(Lactococcus laudensis)、口腔链球菌(Streptococcus oralis)、长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)、假长双歧杆菌(Bifidobacterium pseudolongum)和嗜热双歧杆菌(Bifidobacterium thermophilum)中的一种以上。
(3)(2)的关节功能改善用组合物，其特征在于，所述属于唾液乳杆菌、乳酸乳球菌或长双歧杆菌的细菌是属于唾液乳杆菌唾液亚种(Lactobacillus salivariussubsp.Salivarius)、乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.Lactis)、乳酸乳球菌乳脂亚种(Lactococcus lactis subsp.cremoris)或长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp.Infantis)的细菌。
(4)(1)至(3)中任一项的关节功能改善用组合物，其特征在于，所述属于乳杆菌属、乳球菌属、链球菌属或双歧杆菌属的细菌是选自嗜酸乳杆菌SBT2062株(FERM BP-11075)、瑞士乳杆菌SBT2161株(NITE BP-1707)和SBT2171株(FERM BP-5445)、唾液乳杆菌SBT2687株(NITE ABP-03331)和SBT2651株(NITE P-03330)、唾液乳杆菌唾液亚种SBT2670株(FERM P-13247)、乳酸乳球菌乳酸亚种SBT0625株(NITE P-03078)、乳酸乳球菌乳脂亚种SBT11373株(NITE P-03246)、洛迪乳球菌SBT11178株(NITE P-03333)、口腔链球菌SBT0320株(NITE P-03332)、长双歧杆菌SBT2928株(FERM P-10657)、长双歧杆菌婴儿亚种SBT2785株(NITE P-03328)、假长双歧杆菌SBT2922株(NITE P-02984)和嗜热双歧杆菌SBT2992株(NITE P-03364)中的一种以上。
(5)一种关节功能改善剂、关节功能改善用饮食品、关节功能改善用营养组合物、关节功能改善用饲料或关节功能改善用药品，其特征在于，其包含(1)至(4)中任一项的关节功能改善用组合物。
(6)一种新型乳酸菌，唾液乳杆菌SBT2687株。
(7)一种新型乳酸菌，唾液乳杆菌SBT2651株。
(8)一种新型乳酸菌，洛迪乳球菌SBT11178株。
(9)一种新型乳酸菌，口腔链球菌SBT0320株。
(10)一种新型双歧杆菌菌株，长双歧杆菌婴儿亚种SBT2785株。
(11)一种新型双歧杆菌菌株，嗜热双歧杆菌SBT2992株。
(12)属于乳杆菌属、乳球菌属、链球菌属或双歧杆菌属的细菌的细菌细胞和/或培养物用于制造关节功能改善用组合物的用途。
(13)属于乳杆菌属、乳球菌属、链球菌属或双歧杆菌属的细菌的细菌细胞和/或培养物，其用于改善关节功能。
(14)一种改善关节功能的方法，所述方法包括使有需要的对象摄取有效量的属于乳杆菌属、乳球菌属、链球菌属或双歧杆菌属的细菌的细菌细胞和/或培养物，或向所述对象施用有效量的所述细菌细胞和/或培养物。
(15)一种促进软骨细胞生长用、抑制炎症因子产生用、抑制软骨基质降解因子产生用、抑制疼痛因子产生用和/或抑制神经伸长因子产生用组合物，其包含属于乳杆菌属、乳球菌属、链球菌属或双歧杆菌属的细菌的细菌细胞和/或培养物作为活性成分。
发明的效果
本发明的关节功能改善用组合物高度安全，并且通过促进软骨细胞的生长的作用或者抑制滑膜细胞产生炎症因子、软骨基质降解因子、疼痛因子或神经伸长因子的作用而具有显著的关节功能改善作用。所述关节功能改善用组合物可用于预防或治疗各种关节病，例如包括作为典型实例的膝骨关节炎的骨关节炎和类风湿性关节炎。此外，本发明可以改善关节的功能。本发明具有促进软骨细胞生长的作用，并且具有抑制滑膜细胞产生炎症因子、软骨基质降解因子、疼痛因子或神经伸长因子的作用。因此，本发明提供一种关节功能改善剂、关节功能改善用饮食品、关节功能改善用营养组合物、关节功能改善用饲料或关节功能改善用药品，其中混合了可用于预防或治疗各种关节病例如包括作为典型实例的膝骨关节炎的骨关节炎和类风湿性关节炎的关节功能改善用组合物。
具体实施方式
作为可用于本发明的乳酸菌，可以使用具有关节功能改善作用并且属于乳杆菌属、乳球菌属或链球菌属的任何乳酸菌，作为双歧杆菌，可以使用具有关节功能改善作用并且属于双歧杆菌属的任何双歧杆菌。
属于乳杆菌属的乳酸菌的实例包括属于嗜酸乳杆菌、瑞士乳杆菌、和唾液乳杆菌等的乳酸菌。属于乳球菌属的乳酸菌的实例包括属于乳酸乳球菌、和洛迪乳球菌等的乳酸菌。属于链球菌属的乳酸菌的实例包括属于口腔链球菌等的乳酸菌。属于双歧杆菌属的细菌的实例包括长双歧杆菌、假长双歧杆菌、嗜热双歧杆菌等的细菌。属于唾液乳杆菌的乳酸菌的实例包括例如唾液乳杆菌唾液亚种等的乳酸菌。属于乳酸乳球菌的乳酸菌的实例包括例如乳酸乳球菌乳酸亚种和乳酸乳球菌乳脂亚种等的乳酸菌。属于长双歧杆菌的双歧杆菌的实例包括长双歧杆菌婴儿亚种等的双歧杆菌。乳酸菌或双歧杆菌不限于作为实例所引用的那些。
可以通过一般的分类方法如16S核糖体RNA基因序列的分析来对可用于本发明的嗜酸乳杆菌、瑞士乳杆菌、唾液乳杆菌、唾液乳杆菌唾液亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种、乳酸乳球菌乳脂亚种、洛迪乳球菌、口腔链球菌、长双歧杆菌、长双歧杆菌婴儿亚种、假长双歧杆菌和嗜热双歧杆菌进行分类。
在本发明中，特别优选使用嗜酸乳杆菌SBT2062株(FERM BP-11075)、瑞士乳杆菌SBT2161株(NITE BP-1707)和SBT2171株(FERM BP-5445)、唾液乳杆菌SBT2687株(NITEABP-03331)和SBT2651株(NITE P-03330)、唾液乳杆菌唾液亚种SBT2670株(FERM P-13247)、乳酸乳球菌乳酸亚种SBT0625株(NITE P-03078)、乳酸乳球菌乳脂亚种SBT11373株(NITE P-03246)、洛迪乳球菌SBT11178株(NITE P-03333)、口腔链球菌SBT0320株(NITE P-03332)、长双歧杆菌SBT2928株(FERM P-10657)、长双歧杆菌婴儿亚种SBT2785株(NITE P-03328)、假长双歧杆菌SBT2922株(NITE P-02984)和嗜热双歧杆菌SBT2992株(NITE P-03364)，但本发明不限于此。
本发明的关节功能改善用组合物可以包含属于乳杆菌属、乳球菌属、链球菌属或双歧杆菌属的细菌的细菌细胞和培养物中的一种以上。本发明的活性成分可以由属于乳杆菌属、乳球菌属、链球菌属或双歧杆菌属的细菌的细菌细胞构成。本发明的活性成分可以由属于乳杆菌属、乳球菌属、链球菌属或双歧杆菌属的细菌的培养物构成。
(乳酸菌或双歧杆菌的培养方法)
本发明中使用的乳酸菌或双歧杆菌可以根据用于培养乳酸菌或双歧杆菌的一般方法培养。对于培养基，可以使用例如乳培养基、含有乳组分的培养基和不含乳组分的半合成培养基等各种培养基。这样的培养基的实例包括还原脱脂乳培养基(reduced skim milkmedium)等。通过例如离心等细胞收集手段从获得的培养物中分离的细菌细胞可以直接用作本发明的活性成分。还可以使用浓缩、干燥、或冷冻干燥等之后的细菌细胞，并且还可以使用通过加热干燥等获得的死细胞。
作为细菌细胞，不仅可以使用纯分离的细菌细胞，还可以使用培养物、悬浮物、含有其他细菌细胞的材料以及通过使用酶或物理手段处理细菌细胞而获得的细胞质或细胞壁部分(fraction)。培养物等的形式的实例不仅包括使用例如作为合成培养基的MRS培养基(由DIFCO制造)、M17培养基(由DIFCO制造)和含有1％葡萄糖的GAM培养基(由NissuiPharmaceutical Co.，Ltd.制造)、以及还原脱脂乳培养基等通常用于培养乳酸菌的培养基的培养物，还包括乳制品，例如奶酪、发酵乳和乳酸菌饮品等，尽管对形式没有特别限制。此外，还可以使用通过使用例如离心和过滤操作等方法从获得的培养物去除乳蛋白沉淀物和细菌细胞组分而制备的培养物上清液。由于上清液的固体含量低，因此在饮食品等中的应用范围变广。例如，可以通过以5,000rpm离心还原脱脂乳培养基培养物10分钟来制备培养物上清液。
(新型乳酸菌菌株或新型双歧杆菌菌株)
本发明涉及新型乳酸菌菌株或新型双歧杆菌菌株。所述新型乳酸菌菌株或新型双歧杆菌菌株是唾液乳杆菌SBT2687株(NITE ABP-03331)、唾液乳杆菌SBT2651株(NITE P-03330)、洛迪乳球菌SBT11178株(NITE P-03333)、口腔链球菌SBT0320株(NITE P-03332)、长双歧杆菌婴儿亚种SBT2785株(NITE P-03328)和嗜热双歧杆菌SBT2992株(NITE P-03364)。所述乳酸菌菌株或双歧杆菌菌株有时被称为“本发明的乳酸菌或双歧杆菌”，“本发明的乳酸菌菌株或双歧杆菌菌株”或在下文中简称为SBT2687株、SBT2651株、SBT11178株、SBT0320株、SBT2785株和SBT2992株。
所述乳酸菌菌株于2020年12月1日或2021年1月19日保藏至国家技术评估学会，专利微生物保藏中心(日本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8 122号室，邮政编码292-0818)，SBT2687株的保藏编号为NITE ABP-03331，SBT2651株的保藏编号为NITE P-03330，SBT11178株的保藏编号为NITE P-03333，SBT0320株的保藏编号为NITE P-03332，SBT2785株的保藏编号为NITE P-03328，SBT2992株的保藏编号为NITE P-03364。
本发明的乳酸菌或双歧杆菌不限于保藏的乳酸菌菌株或保藏的双歧杆菌菌株，并且可以是与保藏的乳酸菌菌株或保藏的双歧杆菌菌株基本上等同的乳酸菌菌株或双歧杆菌菌株。基本上等同的乳酸菌菌株或双歧杆菌菌株是指属于嗜酸乳杆菌、瑞士乳杆菌、唾液乳杆菌、唾液乳杆菌唾液亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种、乳酸乳球菌乳脂亚种、洛迪乳球菌、口腔链球菌、长双歧杆菌、长双歧杆菌婴儿亚种、假长双歧杆菌或嗜热双歧杆菌、并且具有与保藏的乳酸菌菌株或保藏的双歧杆菌菌株相当的高关节功能改善作用的乳酸菌菌株或双歧杆菌菌株。“具有与保藏的乳酸菌菌株或保藏的双歧杆菌菌株相当的高关节功能改善作用的乳酸菌菌株或双歧杆菌菌株”是指，例如具有通过以下步骤1)至3)测定的软骨细胞生长促进效果、或通过步骤4)至7)测定的抑制滑膜细胞产生炎症因子、软骨基质降解因子、疼痛因子或神经伸长因子的效果的乳酸菌菌株或双歧杆菌菌株，与分别保藏的乳酸菌菌株或分别保藏的双歧杆菌菌株的软骨细胞生长促进效果、或抑制滑膜细胞产生炎症因子、软骨基质降解因子、疼痛因子或神经伸长因子的效果没有显著差异。
(软骨细胞生长促进效果的评价方法)
1)将小鼠来源的软骨前体细胞系(ATDC5)以5,000个细胞/孔接种至96孔平板细胞培养板中，并在含有5％(v/v)胎牛血清的Dulbecco改良Eagle培养基/Ham’s F-12混合培养基中培养24小时。
2)去除所有培养基后，将培养基更换为无胎牛血清的Dulbecco改良Eagle培养基/Ham’s F-12混合培养基，并将各乳酸菌细胞匀浆或双歧杆菌细胞匀浆以0.1mg/ml的最终浓度添加至培养基。进一步培养细胞48小时。
3)添加细胞生长试剂并培养5小时后，测定440nm处的吸光度。作为细胞生长试剂，例如可以使用WST-1(Roche Diagnostics K.K.)。
(抑制滑膜细胞产生炎症因子、软骨基质降解因子、疼痛因子或神经伸长因子的效果)
4)将人滑膜来源的细胞系(SW982)以100,000个细胞/孔接种至12孔平板细胞培养板中，并在含有10％(v/v)胎牛血清的Leibovitz’s L-15培养基中培养一周。
5)去除所有培养基后，将培养基更换为无胎牛血清的Leibovitz’s L-15培养基，并将人-IL-1β(白细胞介素-1β)以1ng/ml的最终浓度添加至培养基。将乳酸菌细胞匀浆或双歧杆菌细胞匀浆以1mg/ml的最终浓度添加至培养基，并进一步培养细胞24小时。
6)去除所有培养基，使用用于自生物样品的总RNA提取的试剂提取总RNA。使用实时PCR逆转录试剂盒进行逆转录。作为用于自生物样品的总RNA提取的试剂，例如可以使用Sepasol RNA1SuperG试剂(由Nacalai Tesque，Inc.制造)。作为实时PCR逆转录试剂盒，例如可以使用ReverTra Ace qPCR RT Master Mix(由Toyobo Co.，Ltd.制造)。
7)使用获得的cDNA，使用包含Taq DNA聚合酶的Realtime PCR试剂进行实时PCR，并定量TNF-α(肿瘤坏死因子-α)、MMP-13(基质金属蛋白酶-13)、COX-2(环氧合酶-2)和NGF(Nerve Growth Factor,神经生长因子)基因的表达水平。作为包含Taq DNA聚合酶的实时PCR试剂，例如可以使用THUNDERBIRD qPCR Mix(由Toyobo Co.，Ltd.制造)。
当通过上述步骤1)至3)评价软骨细胞生长促进效果时，与未添加乳酸菌菌株或双歧杆菌菌株的对照的软骨细胞生长促进效果相比，本发明的乳酸菌或双歧杆菌的测定的细胞生长促进效果优选高1.5倍以上、更优选2倍以上。“测定的细胞生长促进效果”是指在步骤1)至3)之后测定的吸光度的值的大小。
另外，当通过步骤4)至7)评价抑制滑膜细胞产生炎症因子、软骨基质降解因子、疼痛因子或神经伸长因子的效果时，与未添加乳酸菌菌株或双歧杆菌菌株的对照的抑制滑膜细胞产生炎症因子、软骨基质降解因子、疼痛因子或神经伸长因子的效果相比，本发明的乳酸菌或双歧杆菌的测定的抑制滑膜细胞产生炎症因子、软骨基质降解因子、疼痛因子或神经伸长因子的效果优选高1.5倍以上、进一步优选2倍以上、更优选3倍以上。“测定的抑制滑膜细胞产生炎症因子、软骨基质降解因子、疼痛因子或神经伸长因子的效果”指在步骤4)至7)之后测定的表达水平。表达水平越低，抑制滑膜细胞产生炎症因子、软骨基质降解因子、疼痛因子或神经伸长因子的效果越大。例如，在试验例2中，乳酸乳球菌乳酸亚种SBT0625株具有为对照(PBS)的五分之一以下的炎症因子，因此具有比对照的效果高5倍以上的炎症抑制效果。
在这一方面，评价方法不限于上述评价方法，并且可以使用本领域技术人员已知的软骨细胞生长促进效果的评价方法、或者抑制滑膜细胞产生炎症因子、软骨基质降解因子、疼痛因子或神经伸长因子的效果的评价方法来评价软骨细胞生长促进效果、或者抑制滑膜细胞产生炎症因子、软骨基质降解因子、疼痛因子或神经伸长因子的效果。
另外，基本上等同的乳酸菌菌株或双歧杆菌菌株具有与保藏的乳酸菌菌株或保藏的双歧杆菌菌株的16S核糖体RNA基因的核苷酸序列具有98％以上、优选99％以上、更优选100％的同源性的16S核糖体RNA基因的核苷酸序列，并且优选具有与保藏的乳酸菌株或保藏的双歧杆菌菌株相同的细菌学性质。此外，本发明的乳酸菌或双歧杆菌可以是由保藏的乳酸菌菌株、保藏的双歧杆菌菌株或其基本上等同的乳酸菌菌株或双歧杆菌菌株通过诱变、基因重组、天然存在的突变体的选择等培育而成的乳酸菌菌株或双歧杆菌菌株，只要不损害本发明的效果即可。
(活性成分的摄取量)
对本发明的乳酸菌或双歧杆菌的细菌细胞或培养物的摄取量没有特别限制，只要由该量表现出通过促进软骨细胞生长的作用或者抑制滑膜细胞产生炎症因子、软骨基质降解因子、疼痛因子或神经伸长因子的作用的关节功能改善作用即可，并且摄取量可以根据生产的容易性或优选的每日摄取量适当地调整。对本发明的施用对象没有特别限制，尽管可以施用至人，但施用对象也可以是非人的动物(例如狗、猫、马、牛、或兔等)。当施用对象是人时，可以对未满20岁的未成年人、成人、男性、女性、65岁以上的老年人等进行施用。本发明的乳酸菌或双歧杆菌的细菌细胞或培养物的摄取量是根据施用对象的症状、年龄、和性别等分别确定的，但对于成年人而言，通常可以以使对象可摄取10至200g的乳酸菌或双歧杆菌的培养物等或其0.1至5000mg的细菌细胞的方式调整量等。本发明的乳酸菌的细菌细胞或培养物或者双歧杆菌的细菌细胞或培养物可以直接口服摄取，但是当将细菌细胞或培养物混合在饮食品、营养组合物、饲料、或口服药物等中时，可以调整混合量以达到摄取量。通过以这种方式进行摄取，可以发挥期望的效果。
施用对象可以是患有例如包括作为典型实例的膝骨关节炎的骨关节炎和类风湿性关节炎等各种关节病的患者，也可以是发病风险高的对象或未患有疾病的健康对象。
(关于本发明的乳酸菌或双歧杆菌用于饮食品和药品的使用方法)
本发明的乳酸菌或双歧杆菌的细菌细胞或培养物可以单独地或以任意组合直接用作关节功能改善用组合物，但也可以在不丧失通过促进软骨细胞生长的作用或抑制滑膜细胞产生炎症因子、软骨基质降解因子、疼痛因子或神经伸长因子的作用的关节功能改善作用的范围内，根据需要，按照一般方法在使用前配制成散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、或饮品等。此外，细菌细胞或培养物也可以直接或在配制后混合在饮食品中，例如营养剂、奶粉、乳饮料、乳酸菌饮料、发酵乳、软饮料、奶酪、人造黄油、奶油、布丁、果冻和华夫饼、以及营养组合物、饲料和药品等。
本发明的乳酸菌或双歧杆菌的细菌细胞或培养物可以与其他饮食品、饲料和药物中通常含有的原料，例如稳定剂、糖类、脂类、香料、维生素、矿物质、类黄酮和多酚等，一起使用。
本发明的饮食品还可以用作功能声称食品、特定保健用途食品、营养功能声称食品或美容食品。
对于制剂而言，可以使用通常使用的稀释剂或赋形剂，例如填充剂、膨胀剂、粘结剂、崩解剂、表面活性剂和润滑剂。作为赋形剂，例如可以添加蔗糖、乳糖、淀粉、结晶纤维素、甘露醇、轻质硅酸酐、铝酸镁、合成硅酸铝、偏硅酸铝镁、碳酸钙、碳酸氢钠、磷酸氢钙和羧甲基纤维素钙等中的一种或两种以上的组合。
下文中将参考实施例和试验例详细说明本发明，但本发明不限于实施例和试验例。在本说明书中，除非另外明确指出，否则％为质量％。
实施例
(实施例1)
将嗜酸乳杆菌SBT2062株、瑞士乳杆菌SBT2161株和SBT2171株、唾液乳杆菌SBT2687株和SBT2651株、唾液乳杆菌唾液亚种SBT2670株和口腔链球菌SBT0320株分别在121℃下灭菌15分钟的MRS肉汤(由DIFCO制造)中、在37℃培养16小时，培养3代以上，并由此使菌株活化。将培养物分别以3％(v/v)接种到相同的培养基中，并在37℃培养16小时，然后通过离心分离细菌细胞。将细菌细胞用无菌盐水洗涤两次并用超纯水洗涤一次，然后冷冻干燥，由此获得嗜酸乳杆菌SBT2062株、瑞士乳杆菌SBT2161株和SBT2171株、唾液乳杆菌SBT2687株和SBT2651株、唾液乳杆菌唾液亚种SBT2670株和口腔链球菌SBT0320株的细菌细胞(实施例品1)。由此获得的嗜酸乳杆菌SBT2062株、瑞士乳杆菌SBT2161株和SBT2171株、唾液乳杆菌SBT2687株和SBT2651株、唾液乳杆菌唾液亚种SBT2670株和口腔链球菌SBT0320株的细菌细胞可以直接用作本发明的具有关节功能改善作用的乳酸菌。使用easy beads(AMRInc.)对实施例品1的细菌细胞进行物理均质化并用于以下试验。
(实施例2)
将乳酸乳球菌乳酸亚种SBT0625株，乳酸乳球菌乳脂亚种SBT11373株和洛迪乳球菌SBT11178株分别在培养基中在30℃培养16小时至24小时，培养3代以上，并由此使菌株活化，所述培养基是通过将在121℃灭菌15分钟的乳糖溶液以0.5％的最终浓度添加至在121℃灭菌15分钟的M17培养基(由DIFCO制造)中而得到的。将培养物分别以3％(v/v)接种到相同的培养基中并在30℃培养16小时至24小时，然后通过离心分离细菌细胞。将细菌细胞用无菌盐水洗涤两次并用超纯水洗涤一次，然后冷冻干燥，由此获得乳酸乳球菌乳酸亚种SBT0625株、乳酸乳球菌乳脂亚种SBT11373株和洛迪乳球菌SBT11178株的细菌细胞(实施例品2)。由此获得的乳酸乳球菌乳酸亚种SBT0625株、乳酸乳球菌乳脂亚种SBT11373株和洛迪乳球菌SBT11178株的细菌细胞可以直接用作本发明的具有关节功能改善作用的乳酸菌。使用easy beads(AMR Inc.)对实施例品2的细菌细胞进行物理均质化并用于以下试验。
(实施例3)
将长双歧杆菌SBT2928株、长双歧杆菌婴儿亚种SBT2785株、假长双歧杆菌SBT2922株和嗜热双歧杆菌SBT2992株分别在培养基中在37℃培养16小时至21小时，培养3代以上，并由此使菌株活化，所述培养基是将在115℃灭菌15分钟的葡萄糖溶液以1％的最终浓度添加至在115℃灭菌15分钟的GAM培养基(由Nissui Pharmaceutical Co.，Ltd.制造)中而得到的。将培养物分别以3％(v/v)接种到相同的培养基中并在37℃培养16小时至21小时，然后通过离心分离细菌细胞。将细菌细胞用无菌盐水洗涤2次并用超纯水洗涤1次，然后冷冻干燥，由此获得长双歧杆菌SBT2928株、长双歧杆菌婴儿亚种SBT2785株、假长双歧杆菌SBT2922株和嗜热双歧杆菌SBT2992株的细菌细胞(实施例品3)。由此获得的长双歧杆菌SBT2928株、长双歧杆菌婴儿亚种SBT2785株、假长双歧杆菌SBT2922株和嗜热双歧杆菌SBT2992株的细菌细胞可以直接用作本发明的具有关节功能改善作用的双歧杆菌。使用easy beads(AMR Inc.)对实施例品3的细菌细胞进行物理均质化并用于以下试验。
(比较例1)
将由雪印惠乳业株式会社(Megmilk Snow Brand Co.,Ltd.)拥有的融合魏斯氏菌(Weissella confusa)No.1株在121℃灭菌15分钟的MRS肉汤(由DIFCO制造)中、在37℃培养16小时，培养3代以上，并由此使该菌株活化。将培养物以3％(v/v)接种到相同的培养基中并在37℃培养16小时，然后通过离心分离细菌细胞。将细菌细胞用无菌盐水洗涤2次并用超纯水洗涤1次，然后冷冻干燥，由此获得融合魏斯氏菌No.1株的细菌细胞(比较例品1)。使用easy beads(AMR Inc.)将比较例品1的细菌细胞进行物理均质化并用于以下试验。
(比较例2)
将由雪印惠乳业株式会社拥有的戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)No.1株在121℃灭菌15分钟的MRS肉汤(由DIFCO制造)中、在37℃培养16小时，培养3代以上，并由此使该菌株活化。将培养物以3％(v/v)接种到相同的培养基中并在37℃培养16小时，然后通过离心分离细菌细胞。将细菌细胞用无菌盐水洗涤2次并用超纯水洗涤1次，然后冷冻干燥，由此获得戊糖片球菌No.1株的细菌细胞(比较例品2)。使用easy beads(AMR Inc.)将比较例品2的细菌细胞进行物理均质化并用于以下试验。
(比较例3)
将由雪印惠乳业株式会社拥有的肠膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)No.1株在121℃灭菌15分钟的MRS肉汤(由DIFCO制造)中、在25℃培养24小时，培养3代以上，并由此使该菌株活化。将培养物以3％(v/v)接种到相同的培养基中并在25℃培养24小时，然后通过离心分离细菌细胞。将细菌细胞用无菌盐水洗涤2次并用超纯水洗涤1次，然后冷冻干燥，由此获得肠膜明串珠菌No.1株的细菌细胞(比较例品3)。使用easy beads(AMRInc.)对比较例品3的细菌细胞进行物理均质化并用于以下试验。
(试验例1)
检验实施例品3的嗜热双歧杆菌SBT2992株的细菌细胞匀浆的软骨细胞生长促进效果。为了比较，还检验了比较例品1的融合魏斯氏菌菌株No.1的细菌细胞匀浆的软骨细胞生长促进效果。
将小鼠来源的软骨前体细胞系(ATDC5)以5,000个细胞/孔接种至96孔平板细胞培养板中，并在含有5％(v/v)胎牛血清的Dulbecco改良Eagle培养基/Ham’s F-12混合培养基中、在37℃、在5％ CO2的环境中培养24小时。然后，去除所有培养基，并用无胎牛血清的Dulbecco改良Eagle培养基/Ham’s F-12培养基洗涤细胞。更换培养基，将实施例品3的嗜热双歧杆菌SBT2992株和比较例品1的融合魏斯氏菌No.1株的细菌细胞匀浆以0.1mg/ml的最终浓度添加至培养基中。培养细胞48小时。然后，去除所有培养基，在以培养基中含有十分之一的量的方式添加细胞生长试剂WST-1(Roche Diagnostics K.K.)后，培养细胞5小时。使用读板器测量440nm处的吸光度。由于WST-1通过活细胞的代谢活性被还原成甲臜染料，因此甲臜染料的量与具有代谢活性的细胞的数量成比例。因此，将反映甲臜染料的量的吸光度值用作软骨细胞生长促进效果的指标。
[表1]
数值显示为平均值±标准偏差(n＝4).
※与对照(PBS)相比显示出显著差异(p<0.05)
结果，当添加嗜热双歧杆菌SBT2992株的细菌细胞匀浆时，与对照(PBS)相比，软骨前体细胞的细胞计数显著增加。因此，发现本发明的嗜热双歧杆菌SBT2992株的细菌细胞匀浆对软骨细胞具有生长促进效果。另一方面，比较例品1的融合魏斯氏菌No.1株的细菌细胞匀浆没有显示出对软骨细胞的生长促进效果。
(试验例2)
检验了以下菌株的细菌细胞匀浆抑制滑膜细胞产生炎症因子的效果：实施例品1的嗜酸乳杆菌SBT2062株、瑞士乳杆菌SBT2161株和SBT2171株、唾液乳杆菌SBT2687株和SBT2651株、唾液乳杆菌唾液亚种SBT2670株和口腔链球菌SBT0320株，实施例品2的乳酸乳球菌乳酸亚种SBT0625株、乳酸乳球菌乳脂亚种SBT11373株和洛迪乳球菌SBT11178株，以及实施例品3的长双歧杆菌SBT2928株和嗜热双歧杆菌SBT2992株。为了比较，还检验了比较例品2的戊糖片球菌No.1株的细菌细胞匀浆抑制滑膜细胞产生炎症因子的效果。
将人滑膜来源的细胞系(SW982)以100,000个细胞/孔接种到12孔平板细胞培养板中，并在含有10％(v/v)胎牛血清的Leibovitz’s L-15培养基中、在37℃、在5％ CO2的环境中培养一周。然后，去除所有培养基，并用无胎牛血清的Leibovitz’s L-15培养基洗涤细胞。更换培养基。将人-IL-1β(白细胞介素-1β)以1ng/ml的最终浓度添加至培养基中，并将本发明的细菌细胞匀浆以1mg/ml的最终浓度添加至培养基中。进一步培养细胞24小时。然后，使用Sepasol RNA 1 SuperG试剂(由Nacalai Tesque，Inc.制造)从培养的细胞提取总RNA。ReverTra Ace qPCR RT Master Mix(由Toyobo Co.，Ltd.制造)用于逆转录。使用所得的cDNA、用THUNDERBIRD qPCR Mix(由Toyobo Co.，Ltd.制造)进行实时PCR，由此定量炎症因子TNF-α(肿瘤坏死因子-α)的基因表达水平。这里，GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)基因的表达水平被用作评价基因表达水平的内部标准。为了分析，对于TNF-α，使用序列表的SEQID NOs:1和2的引物，和对于GAPDH，使用序列表的SEQ ID NOs:3和4的引物。
[表2]
[表3]
数值为平均值±标准偏差(n＝3).
※与对照(PBS)相比显示出显著差异(p＜0.05).
结果，当添加嗜酸乳杆菌SBT2062株、瑞士乳杆菌SBT2161株和SBT2171株、唾液乳杆菌SBT2687株和SBT2651株、唾液乳杆菌唾液亚种SBT2670株、口腔链球菌SBT0320株、乳酸乳球菌乳酸亚种SBT0625株、乳酸乳球菌乳脂亚种SBT11373株、洛迪乳球菌SBT11178株、长双歧杆菌SBT2928株和嗜热双歧杆菌SBT2992株的细菌细胞匀浆时，在所有情况下，与对照(PBS)相比，滑膜细胞中的TNF-α基因的表达被显著抑制。因此，发现本发明的嗜酸乳杆菌SBT2062株、瑞士乳杆菌SBT2161株和SBT2171株、唾液乳杆菌SBT2687株和SBT2651株、唾液乳杆菌唾液亚种SBT2670株、口腔链球菌SBT0320株、乳酸乳球菌乳酸亚种SBT0625株、乳酸乳球菌乳脂亚种SBT11373株洛迪乳球菌SBT11178株、长双歧杆菌SBT2928株和嗜热双歧杆菌SBT2992株的细菌细胞匀浆具有抑制滑膜细胞产生炎症因子的效果。另一方面，比较例2的戊糖片球菌No.1株的细菌细胞匀浆未显示出抑制滑膜细胞产生炎症因子的效果。
(试验例3)
检验了以下菌株的细菌细胞匀浆抑制滑膜细胞产生软骨基质降解因子的效果：实施例品1的嗜酸乳杆菌SBT2062株、瑞士乳杆菌SBT2161株和SBT2171株、唾液乳杆菌SBT2687株和SBT2651株、唾液乳杆菌唾液亚种SBT2670株和口腔链球菌SBT0320株、实施例品2的乳酸乳球菌乳酸亚种SBT0625株、乳酸乳球菌乳脂亚种SBT11373株和洛迪乳球菌SBT11178株、以及实施例品3的长双歧杆菌SBT2928株、长双歧杆菌婴儿亚种SBT2785株和假长双歧杆菌SBT2922株。为了比较，还检验了比较例品3的肠膜明串珠菌No.1株的细菌细胞匀浆抑制滑膜细胞产生软骨基质降解因子的效果。
将人滑膜来源的细胞系(SW982)以100,000个细胞/孔接种到12孔平板细胞培养板中，并在含有10％(v/v)胎牛血清的Leibovitz’s L-15培养基中、在37℃、在5％ CO2的环境中培养一周。然后，去除所有培养基，并用无胎牛血清的Leibovitz’s L-15培养基洗涤细胞。更换培养基。将人-IL-1β(白细胞介素-1β)以1ng/ml的最终浓度添加至培养基中，并将本发明的细菌细胞匀浆以1mg/ml的最终浓度添加至培养基中。进一步培养细胞24小时。然后，使用Sepasol RNA 1SuperG试剂(由Nacalai Tesque,Inc.制造)从培养的细胞提取总RNA。ReverTraAce qPCR RT Master Mix(由Toyobo Co.，Ltd.制造)用于逆转录。使用所得的cDNA、用THUNDERBIRD qPCR Mix(由Toyobo Co.，Ltd.制造)进行实时PCR，并由此定量软骨基质分解因子MMP-13(基质金属蛋白酶-13)的基因表达水平。这里，GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)基因的表达水平被用作评价基因表达水平的内部标准。为了分析，对于MMP-13，使用序列表的SEQ ID NOs:5和6的引物，对于GAPDH，使用序列表的SEQ ID NOs:3和4的引物。
[表4]
[表5]
数值为平均值±标准偏差(n＝3).
※与对照(PBS)相比显示出显著差异(p＜0.05)
结果，当添加嗜酸乳杆菌SBT2062株、瑞士乳杆菌SBT2161株和SBT2171株、唾液乳杆菌SBT2687株和SBT2651株、唾液乳杆菌唾液亚种SBT2670株、口腔链球菌SBT0320株、乳酸乳球菌乳酸亚种SBT0625株、乳酸乳球菌乳脂亚种SBT11373株、洛迪乳球菌SBT11178株、长双歧杆菌SBT2928株、长双歧杆菌婴儿亚种SBT2785株和假长双歧杆菌SBT2922株的细菌细胞匀浆时，在所有情况下，与对照(PBS)相比，滑膜细胞中的MMP-13基因的表达被显著抑制。因此，发现本发明的嗜酸乳杆菌SBT2062株、瑞士乳杆菌SBT2161株和SBT2171株、唾液乳杆菌SBT2687株和SBT2651株、唾液乳杆菌唾液亚种SBT2670株、口腔链球菌SBT0320株、乳酸乳球菌乳酸亚种SBT0625株、乳酸乳球菌乳脂亚种SBT11373株、洛迪乳球菌SBT11178株、长双歧杆菌SBT2928株、长双歧杆菌婴儿亚种SBT2785株和假长双歧杆菌SBT2922株的细菌细胞匀浆具有抑制滑膜细胞产生软骨基质降解因子的效果。另一方面，比较例品3的肠膜明串珠菌No.1株的细菌细胞匀浆未显示出抑制滑膜细胞产生软骨基质降解因子的效果。
(试验例4)
检验了以下菌株的细菌细胞匀浆抑制滑膜细胞产生疼痛因子的效果：实施例品1的唾液乳杆菌SBT2687株以及实施例品3的长双歧杆菌婴儿亚种SBT2785株和假长双歧杆菌SBT2922株。为了比较，还检验了比较例品1的融合魏斯氏菌No.1株的细菌细胞匀浆抑制滑膜细胞产生疼痛因子的效果。
将人滑膜来源的细胞系(SW982)以100,000个细胞/孔接种到12孔平板细胞培养板中，并在含有10％(v/v)胎牛血清的Leibovitz’s L-15培养基中、在37℃、在5％ CO2的环境中培养一周。然后，去除所有培养基，并用无胎牛血清的Leibovitz’s L-15培养基洗涤细胞。更换培养基。将人-IL-1β(白细胞介素-1β)以1ng/ml的最终浓度添加至培养基中，并将本发明的细菌细胞匀浆以1mg/ml的最终浓度添加至培养基中。进一步培养细胞24小时，然后，使用Sepasol RNA1SuperG试剂(由Nacalai Tesque，Inc.制造)从培养的细胞提取总RNA。ReverTra Ace qPCR RT Master Mix(由Toyobo Co.,Ltd.制造)用于逆转录。使用所得的cDNA、用THUNDERBIRD qPCR Mix(由Toyobo Co.,Ltd.制造)进行实时PCR，并由此定量疼痛因子COX-2(环氧合酶-2)的基因表达水平。这里，GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)基因的表达水平被用作评价基因表达水平的内部标准。为了分析，对于COX-2，使用序列表的SEQ IDNOs:7和8的引物，对于GAPDH，使用序列表的SEQ ID NOs:3和4的引物。
[表6]
[表7]
数值为平均值±标准偏差(n＝3).
※与对照(PBS)相比显示出显著差异(p<0.05).
结果，当添加唾液乳杆菌SBT2687株、长双歧杆菌婴儿亚种SBT2785株和假长双歧杆菌SBT2922株的细菌细胞匀浆时，在所有情况下，与对照(PBS)相比，滑膜细胞中的COX-2基因的表达被显著抑制。因此，发现本发明的唾液乳杆菌SBT2687株、长双歧杆菌婴儿亚种SBT2785株和假长双歧杆菌SBT2922株的细菌细胞匀浆具有抑制滑膜细胞产生疼痛因子的效果。另一方面，比较例品1的融合魏斯氏菌No.1株的细菌细胞匀浆未显示出抑制滑膜细胞产生疼痛因子的效果。
(试验例5)
检验了以下菌株的细菌细胞匀浆抑制滑膜细胞产生神经伸长因子的效果：实施例品1的唾液乳杆菌SBT2687株和SBT2651株以及实施例品3的长双歧杆菌婴儿亚种SBT2785株和假长双歧杆菌SBT2922株。为了比较，还检验了比较例品2的戊糖片球菌No.1株的细菌细胞匀浆抑制滑膜细胞产生神经伸长因子的效果。
将人滑膜来源的细胞系(SW982)以100,000个细胞/孔接种到12孔平板细胞培养板中，并在含有10％(v/v)胎牛血清的Leibovitz’s L-15培养基中、在37℃、在5％ CO2的环境中培养一周。然后，去除所有培养基，并用无胎牛血清的Leibovitz’s L-15培养基洗涤细胞。更换培养基。将人-IL-1β(白细胞介素-1β)以1ng/ml的最终浓度添加至培养基中，并将本发明的细菌细胞匀浆以1mg/ml的最终浓度添加至培养基中。进一步培养细胞24小时。然后，使用Sepasol RNA1SuperG试剂(由Nacalai Tesque，Inc.制造)从培养的细胞提取总RNA。ReverTra Ace qPCR RT Master Mix(由Toyobo Co.,Ltd.制造)用于逆转录。使用所得的cDNA、用THUNDERBIRD qPCR Mix(由Toyobo Co.,Ltd.制造)进行实时PCR，并由此定量神经伸长因子NGF(神经生长因子)的基因表达水平。这里，GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)基因的表达水平被用作评价基因表达水平的内部标准。为了分析，对于NGF，使用序列表的SEQID NOs:9和10的引物，对于GAPDH，使用序列表的SEQ ID NOs:3和4的引物。
[表8]
[表9]
数值为平均值±标准偏差(n＝3).
※与对照(PBS)相比显示出显著差异(p＜0.05).
结果，当添加唾液乳杆菌SBT2687株和SBT2651株、长双歧杆菌婴儿亚种SBT2785株和假长双歧杆菌SBT2922株的细菌细胞匀浆时，在所有情况下，与对照(PBS)相比，滑膜细胞中的NGF基因的表达被显著抑制。因此，发现本发明的唾液乳杆菌SBT2687株和SBT2651株、长双歧杆菌婴儿亚种SBT2785株和假长双歧杆菌SBT2922株的细菌细胞匀浆具有抑制滑膜细胞产生神经伸长因子的效果。另一方面，比较例品2的戊糖片球菌No.1株的细菌细胞匀浆未显示出抑制滑膜细胞产生神经伸长因子的效果。
(实施例4)
(关节功能改善用胶囊剂的制备)
将原料与表10中所示的组分混合，然后通过一般方法造粒并包装在胶囊中，由此生产本发明的关节功能改善用胶囊剂。
[表10]
(实施例5)
(关节功能改善用片剂的制备)
将原料与表11所示的组分混合，然后通过一般方法以1g的量成形并压片，由此生产本发明的关节功能改善用片剂。
[表11]
(实施例6)
(关节功能改善用液体营养组合物的制备)
将25g的量的SBT2171株的细菌细胞(实施例品1)溶解于4975g去离子水中，加热至40℃后，将溶液用TK均质混合器(TK ROBO MICS；由Tokushu Kika Kogyo Co.,Ltd.制造)以6,000rpm搅拌和混合10分钟。由此获得25g/5kg的SBT2171株的细菌细胞溶液。在5.0kg的SBT2171株溶液中，混合5.0kg的酪蛋白、5.0kg的大豆蛋白、1.0kg的鱼油、3.0kg的紫苏油、17.0kg的糊精、6.0kg的矿物质混合物、1.95kg的维生素混合物、2.0kg的乳化剂、4.0kg的稳定剂和0.05kg的香料，将混合物装入200ml蒸煮袋(retort pouche)中，并用蒸煮灭菌釜(retort sterilizer)(1型压力容器，型号：RCS-4CRTGN，由Hisaka Works,Ltd.制造)在121℃灭菌20分钟。由此，生产了50kg的本发明的关节功能改善用液体营养组合物。此处，200g的本发明的关节功能改善用液体营养组合物中含有100mg的SBT2171株的细菌细胞。
(实施例7)
(关节功能改善用饮料的制备)
在将0.5g的实施例品1的SBT2687株的细菌细胞溶解于699.5g的去离子水中后，将溶液加热至40℃，然后用超分散机(ULTRA-TURRAX T-25；由IKA Japan制造)以9,500rpm搅拌和混合20分钟。在添加100g的麦芽糖醇、2g的酸化剂、20g的还原水、2g的香料和176g的去离子水后，将混合物装入100ml玻璃瓶中，在95℃灭菌15秒，然后密封，因此制备10瓶(容量100ml)本发明的关节功能改善用饮料。此处，100g的本发明的关节功能改善用饮料中含有50mg的SBT2687株的细菌细胞。
(实施例8)
(犬用关节功能改善用饲料的制备)
将2g的量的实施例品1的SBT2651株的细菌细胞溶解于3,998g的去离子水中，加热至40℃后，将溶液用TK均质混合器(MARK II 160型；由Tokushu Kika Kogyo Co.,Ltd.制造)以3,600rpm搅拌和混合20分钟。由此获得2g/4kg的SBT2651株的细菌细胞溶液。在2kg的SBT2651株的细菌细胞溶液中，混合1kg的大豆粕(soybean cake)、1kg的脱脂奶粉、0.4kg的大豆油、0.2kg的玉米油、2.3kg的棕榈油、1kg的玉米淀粉、0.9kg的面粉、0.2kg的麦麸、0.5kg的维生素混合物、0.3kg的纤维素和0.2kg的矿物质混合物，并将混合物在120℃加热-灭菌4分钟。由此，生产10kg的本发明的关节功能改善用饲料。此处，100g的本发明的关节功能改善用饲料中含有10mg的SBT2651株的细菌细胞。
(实施例9)
(关节功能改善用奶粉的制备)
将2g的量的实施例品1的SBT2670株的细菌细胞、9.998kg的脱脂奶粉和90kg的去离子水混合，加热至40℃后，将混合物用TK均质混合器(TK ROBO MICS；由Tokushu KikaKogyo Co.,Ltd制造)以6,000rpm搅拌和混合10分钟。将溶液喷雾-干燥，由此生产10kg的本发明的关节功能改善用奶粉。此处，10g的本发明的关节功能改善用奶粉中含有2mg的SBT2670株的细菌细胞。
(实施例10)
(关节功能改善用乳饮料的制备)
将1g的量的实施例品2的SBT0625株的细菌细胞和9.999kg的牛奶混合，加热至40℃后，将混合物用TK均质混合器(TK ROBO MICS；由Tokushu Kika Kogyo Co.,Ltd制造)以6,000rpm搅拌和混合10分钟。在130℃加热灭菌2秒后，将混合物冷却至10℃以下，由此生产10kg的本发明的关节功能改善用乳饮料。此处，200g的本发明的关节功能改善用乳饮料中含有20mg的SBT0625株的细菌细胞。
(实施例11)
(关节功能改善用发酵乳的制备)
将0.1g的量的实施例品2的SBT11373株的细菌细胞、1700g的脱脂奶粉、300g的葡萄糖和7699.9g的去离子水混合，所述混合物通过在95℃保持两小时来加热灭菌。将混合物冷却至37℃，并接种300g的乳酸菌发酵剂(starter)(嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus))。搅拌和混合后，将混合物在保持在37℃的培养箱中发酵直至pH达到4.0。pH达到4.0后，将所得物冷却至10℃以下，由此生产10kg的本发明的关节功能改善用发酵乳。此处，200g的本发明的关节功能改善用发酵乳中含有2mg的SBT11373株的细菌细胞。
(实施例12)
(关节功能改善用乳酸菌饮料的制备)
将1700g的量的脱脂奶粉、300g的葡萄糖和7700g的去离子水混合并通过在95℃保持2小时来加热-灭菌。将混合物冷却至37℃，并接种300g的乳酸菌发酵剂(干酪乳杆菌(Lb.casei))。搅拌和混合后，将混合物在保持在37℃的培养箱中发酵直至pH达到4.0。pH达到4.0后，将所得物边搅拌边冷却至10℃以下，由此得到发酵基质(fermentation base)。另外，将4g的实施例品2的SBT11178株的细菌细胞、1800g的细砂糖、20g的酸味剂、10g的香料和8166g的去离子水混合，在90℃灭菌10分钟后，将混合物冷却至10℃以下。由此获得糖溶液。将2000g的量的发酵基质和8000g的糖溶液混合，和用均质器使组织平滑。将混合物分配至50个200ml的纸容器和然后用铝盖密封，由此生产10kg的本发明的关节功能改善用乳酸菌饮料。此处，200ml的本发明的关节功能改善用乳酸菌饮料中含有64mg的SBT11178株的细菌细胞。
(实施例13)
(关节功能改善用软饮料的制备)
将3g的量的实施例品1的SBT0320株的细菌细胞、0.75kg的50％乳酸、5.7kg的赤藓糖醇、1kg的香料和42.547kg的去离子水混合，加热至40℃后，将混合物用TK均质混合器(TKROBO MICS；由Tokushu Kika Kogyo Co.,Ltd制造)以6,000rpm搅拌和混合10分钟。将溶液在90℃灭菌10分钟和然后冷却至10℃以下，由此生产50kg的本发明的关节功能改善用软饮料。此处，200ml的本发明的关节功能改善用软饮料中含有12mg的SBT0320株的细菌细胞。
(实施例14)
(关节功能改善用奶酪的制备)
将9.5kg的量的高达奶酪(Gouda cheese)、9.5kg的切达奶酪(Cheddar cheese)、4g的实施例品3的SBT2928株的细菌细胞、200g的柠檬酸钠和796g的去离子水混合并在85℃乳化。乳化后，将奶酪装入纸箱并在5℃冷却两昼夜，由此生产20kg的本发明的关节功能改善用奶酪。此处，100g的本发明的关节功能改善用奶酪中含有20mg的SBT2928株的细菌细胞。
(实施例15)
(关节功能改善用人造黄油的制备)
将2kg的量的氢化大豆油、4kg的精制大豆油、2.5kg的棕榈油和50g的甘油脂肪酸酯混合，由此制备油层。然后，将20g的实施例品3的SBT2785株的细菌细胞、10g的乳酸和1420g的去离子水混合并添加至油层，由此获得油包水乳液。将乳液冷却、固化并用人造黄油机捏合，由此生产10kg的本发明的关节功能改善用人造黄油。此处，10g的本发明的关节功能改善用人造黄油中含有20mg的SBT2785株的细菌细胞。
(实施例16)
(关节功能改善用奶油的制备)
将4.5kg的量的氢化菜籽油、40g的卵磷脂、10g的单甘油脂肪酸酯和10g的山梨糖醇脂肪酸酯混合，由此制备油相。然后，将40g的实施例品3的SBT2922株的细菌细胞、400g的脱脂奶粉、10g的酪蛋白酸钠、20g的糖酯、10g的磷酸盐、5g的黄原胶和4.955kg的去离子水混合，由此制备水相。将水相加热至65℃，并在搅拌时以少量添加在70℃加热的油相。将混合物用TK均质混合器(TK ROBO MICS；由Tokushu Kika Kogyo Co.,Ltd制造)以6,000rpm搅拌和混合10分钟。用均质器将混合物均质化，由此生产10kg的本发明的关节功能改善用奶油。此处，10g的本发明的关节功能改善用奶油中含有40mg的SBT2922株的细菌细胞。
(实施例17)
(关节功能改善用布丁的制备)
将2000g的量的蜂蜜、4g的实施例品3的SBT2992株的细菌细胞、800g的脱脂奶粉、300g的马斯卡普奶酪(mascarpone)、700g的液态水、500g的砂糖、250g的鲜奶油、200g的黄油、400g的加糖蛋黄、40g的明胶、15g的琼脂、120g的刺槐豆胶和4671g的去离子水混合，由此得到布丁混合物。将布丁混合物用TK均质混合器(TK ROBO MICS；由Tokushu Kika KogyoCo.,Ltd制造)以6,000rpm搅拌和混合10分钟，在通过加热至60℃溶解后，将布丁混合物各以100克的量包装在容器中并冷却。由此生产100个本发明的关节功能改善用布丁。此处，100g的本发明的关节功能改善用布丁中含有40mg的SBT2992株的细菌细胞。
(实施例18)
(关节功能改善用果冻的制备)
将4.4g的量的实施例品1的SBT2687株的细菌细胞、2000g的果糖、1500g的砂糖、500g的水、100g的琼脂、10g的香料和5885.6g的去离子水混合，将混合物用TK均质混合器(TK ROBO MICS；由Tokushu Kika Kogyo Co.,Ltd制造)以6,000rpm搅拌和混合10分钟。在通过加热至50℃溶解后，将混合物分别以100g的量装入容器中并冷却，由此生产100个本发明的关节功能改善用果冻。此处，100g的本发明的关节功能改善用果冻中含有44mg的SBT2687株的细菌细胞。
(实施例19)
(关节功能改善用华夫饼的制备)
将9.2g的实施例品1的SBT2651株的细菌细胞、8.5kg的面粉、1.21kg的玉米淀粉、0.22kg的棕榈油和0.05kg的泡打粉(baking powder)混合后，添加适量的去离子水，由此制备面糊。然后，通过用华夫饼烤炉烘烤，生产10kg的本发明的关节功能改善用华夫饼。此处，50g的本发明的关节功能改善用华夫饼中含有46mg的SBT2651株的细菌细胞。
产业上的可利用性
根据本发明，可以提供一种关节功能改善用组合物，其可被长期摄取，安全性高，并且通过促进软骨细胞生长的作用或者抑制滑膜细胞产生炎症因子、软骨基质降解因子、疼痛因子或神经伸长因子的作用而具有显著的关节功能改善作用。因此，通过摄取本发明，可以预防或治疗各种关节病，例如包括作为典型实例的膝骨关节炎的骨关节炎和类风湿性关节炎。
保藏编号
关于保藏的生物材料
(1)嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)SBT2062株
(i)保藏所述生物材料的保藏机构的名称和地址
国家高级工业科学技术学院，国际专利生物保藏中心
日本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8 122号室(邮政编码：292-0818)
(ii)在(i)中的保藏机构保藏生物材料的日期
1989年5月18日
(iii)由(i)中的保藏机构保藏的保藏编号
FERM BP-11075
(2)瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)SBT2161株
(i)保藏所述生物材料的保藏机构的名称和地址
国家技术评估学会，专利微生物保藏中心
日本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8 122号室(邮政编码：292-0818)
(ii)在(i)中的保藏机构保藏生物材料的日期
2013年9月18日
(iii)由(i)中的保藏机构保藏的保藏编号
NITE BP-1707
(3)瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)SBT2171株
(i)保藏所述生物材料的保藏机构的名称和地址
国家高级工业科学技术学院，国际专利生物保藏中心
日本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8 122号室(邮政编码：292-0818)
(ii)在(i)中的保藏机构保藏生物材料的日期
1994年6月22日(原保藏日)
1996年3月6日(原保藏向基于布达佩斯条约的保藏的移管日)
(iii)由(i)中的保藏机构保藏的保藏编号
FERM BP-5445
(4)唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)SBT2687株
(i)保藏所述生物材料的保藏机构的名称和地址
国家技术评估学会，专利微生物保藏中心
日本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8 122号室(邮政编码：292-0818)
(ii)在(i)中的保藏机构保藏生物材料的日期
2020年12月1日
2021年12月22日(原保藏向基于布达佩斯条约的保藏的移管日)
(iii)由(i)中的保藏机构保藏的保藏编号
NITE ABP-03331
(5)唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)SBT2651株(i)保藏所述生物材料的保藏机构的名称和地址国家技术评估学会，专利微生物保藏中心日本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8 122号室(邮政编码：292-0818)
(ii)在(i)中的保藏机构保藏生物材料的日期
2020年12月1日
(iii)由(i)中的保藏机构保藏的保藏编号
NITE P-03330
(6)唾液乳杆菌唾液亚种(Lactobacillus salivarius subsp.salivarius)SBT2670株(i)保藏所述生物材料的保藏机构的名称和地址国家高级工业科学技术学院，国际专利生物保藏中心日本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8 122号室(邮政编码：292-0818)
(ii)在(i)中的保藏机构保藏生物材料的日期
1992年11月6日
(iii)由(i)中的保藏机构保藏的保藏编号
FERM P-13247
(7)口腔链球菌(Streptococcus oralis)SBT0320株(i)保藏所述生物材料的保藏机构的名称和地址国家技术评估学会，专利微生物保藏中心日本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8 122号室(邮政编码：292-0818)
(ii)在(i)中的保藏机构保藏生物材料的日期
2020年12月1日
(iii)由(i)中的保藏机构保藏的保藏编号
NITE P-03332
(8)乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)SBT0625株
(i)保藏所述生物材料的保藏机构的名称和地址
国家技术评估学会，专利微生物保藏中心
日本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8 122号室(邮政编码：292-0818)
(ii)在(i)中的保藏机构保藏生物材料的日期
2019年11月25日
(iii)由(i)中的保藏机构保藏的保藏编号
NITE P-03078
(9)乳酸乳球菌乳脂亚种(Lactococcus lactis subsp.cremoris)SBT11373株
(i)保藏所述生物材料的保藏机构的名称和地址
国家技术评估学会，专利微生物保藏中心
日本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8 122号室(邮政编码：292-0818)
(ii)在(i)中的保藏机构保藏生物材料的日期
2020年7月14日
(iii)由(i)中的保藏机构保藏的保藏编号
NITE P-03246
(10)洛迪乳球菌(Lactococcus laudensis)SBT11178株
(i)保藏所述生物材料的保藏机构的名称和地址
国家技术评估学会，专利微生物保藏中心
日本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8 122号室(邮政编码：292-0818)
(ii)在(i)中的保藏机构保藏生物材料的日期
2020年12月1日
(iii)由(i)中的保藏机构保藏的保藏编号
NITE P-03333
(11)长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)SBT2928株(i)保藏所述生物材料的保藏机构的名称和地址国家高级工业科学技术学院，国际专利生物保藏中心日本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8 122号室(邮政编码：292-0818)
(ii)在(i)中的保藏机构保藏生物材料的日期
1989年4月13日
(iii)由(i)中的保藏机构保藏的保藏编号
FERM P-10657
(12)长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp.infantis)SBT2785株(i)保藏所述生物材料的保藏机构的名称和地址国家技术评估学会，专利微生物保藏中心日本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8 122号室(邮政编码：292-0818)
(ii)在(i)中的保藏机构保藏生物材料的日期
2020年12月1日
(iii)由(i)中的保藏机构保藏的保藏编号
NITE P-03328
(13)假长双歧杆菌(Bifidobacterium pseudolongum)SBT2922株(i)保藏所述生物材料的保藏机构的名称和地址国家技术评估学会，专利微生物保藏中心日本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8 122号室(邮政编码：292-0818)
(ii)在(i)中的保藏机构保藏生物材料的日期
2019年6月26日
(iii)由(i)中的保藏机构保藏的保藏编号
NITE P-02984
(14)嗜热双歧杆菌(Bifidobacterium thermophilum)SBT2992株
(i)保藏所述生物材料的保藏机构的名称和地址
国家技术评估学会，专利微生物保藏中心
日本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8 122号室(邮政编码：292-0818)
(ii)在(i)中的保藏机构保藏生物材料的日期
2021年1月19日
(iii)由(i)中的保藏机构保藏的保藏编号
NITE P-03364
序列表
<110> 雪印惠乳业株式会社(MEGMILK SNOW BRAND CO., LTD.)
<120> 关节功能改善用组合物
<130> 20P00006JP
<160> 10
<170> PatentIn 版本 3.5
<210> 1
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 1
gaggccaagc cctggtatg 19
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 2
cgggccgatt gatctcagc 19
<210> 3
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 3
ctgggctaca ctgagcacc 19
<210> 4
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 4
aagtggtcgt tgagggcaat g 21
<210> 5
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 5
tcctgatgtg ggtgaataca atg 23
<210> 6
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 6
gccatcgtga agtctggtaa aat 23
<210> 7
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 7
atgctgacta tggctacaaa agc 23
<210> 8
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 8
tcgggcaatc atcaggcac 19
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 9
ggcagacccg caacattact 20
<210> 10
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 10
caccaccgac ctcgaagtc 19

Claims (15)

1.一种关节功能改善用组合物，其包含属于乳杆菌属、乳球菌属、链球菌属或双歧杆菌属的细菌的细菌细胞和/或培养物作为活性成分。
2.根据权利要求1所述的关节功能改善用组合物，其中所述属于乳杆菌属、乳球菌属、链球菌属或双歧杆菌属的细菌是选自嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)、唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、洛迪乳球菌(Lactococcus laudensis)、口腔链球菌(Streptococcus oralis)、长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)、假长双歧杆菌(Bifidobacterium pseudolongum)和嗜热双歧杆菌(Bifidobacterium thermophilum)中的一种以上。
3.根据权利要求2所述的关节功能改善用组合物，其中，所述属于唾液乳杆菌、乳酸乳球菌或长双歧杆菌的细菌是属于唾液乳杆菌唾液亚种(Lactobacillus salivariussubsp.salivarius)、乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)、乳酸乳球菌乳脂亚种(Lactococcus lactis subsp.cremoris)或长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp.infantis)的细菌。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的关节功能改善用组合物，其中，所述属于乳杆菌属、乳球菌属、链球菌属或双歧杆菌属的细菌是选自嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)SBT2062株(FERM BP-11075)、瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)SBT2161株(NITE BP-1707)和SBT2171株(FERM BP-5445)、唾液乳杆菌(Lactobacillussalivarius)SBT2687株(NITE ABP-03331)和SBT2651株(NITE P-03330)、唾液乳杆菌唾液亚种(Lactobacillus salivarius subsp.salivarius)SBT2670株(FERM P-13247)、乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)SBT0625株(NITE P-03078)、乳酸乳球菌乳脂亚种(Lactococcus lactis subsp.cremoris)SBT11373株(NITE P-03246)、洛迪乳球菌(Lactococcus laudensis)SBT11178株(NITE P-03333)、口腔链球菌(Streptococcusoralis)SBT0320株(NITE P-03332)、长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)SBT2928株(FERM P-10657)、长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp.infantis)SBT2785株(NITE P-03328)、假长双歧杆菌(Bifidobacterium pseudolongum)SBT2922株(NITE P-02984)和嗜热双歧杆菌(Bifidobacterium thermophilum)SBT2992株(NITE P-03329)的一种或多种。
5.一种关节功能改善剂、关节功能改善用饮食品、关节功能改善用营养组合物、关节功能改善用饲料或关节功能改善用药品，其包含根据权利要求1至4中任一项所述的关节功能改善用组合物。
6.一种新型乳酸菌，唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)SBT2687株。
7.一种新型乳酸菌，唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)SBT2651株。
8.洛迪乳球菌(Lactococcus laudensis)SBT11178株。
9.一种新型乳酸菌，口腔链球菌(Streptococcus oralis)SBT0320株。
10.一种新型双歧杆菌菌株，长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longumsubsp.infantis)SBT2785株。
11.一种新型双歧杆菌菌株，嗜热双歧杆菌(Bifidobacterium thermophilum)SBT2992株。
12.属于乳杆菌属、乳球菌属、链球菌属或双歧杆菌属的细菌的细菌细胞和/或培养物用于制造关节功能改善用组合物的用途。
13.属于乳杆菌属、乳球菌属、链球菌属或双歧杆菌属的细菌的细菌细胞和/或培养物，其用于改善关节功能的用途。
14.一种改善关节功能的方法，所述方法包括使有需要的对象摄取有效量的属于乳杆菌属、乳球菌属、链球菌属或双歧杆菌属的细菌的细菌细胞和/或培养物，或向所述对象施用有效量的所述细菌细胞和/或培养物。
15.一种促进软骨细胞生长用、抑制炎症因子产生用、抑制软骨基质降解因子产生用、抑制疼痛因子产生用和/或抑制神经伸长因子产生用组合物，其包含属于乳杆菌属、乳球菌属、链球菌属或双歧杆菌属的细菌的细菌细胞和/或培养物作为活性成分。
CN202280011725.3A 2021-01-26 2022-01-07 关节功能改善用组合物 Pending CN117460427A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2021010460 2021-01-26
JP2021-010460 2021-01-26
PCT/JP2022/000313 WO2022163323A1 (ja) 2021-01-26 2022-01-07 関節機能改善用組成物

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN117460427A true CN117460427A (zh) 2024-01-26

Family

ID=82653356

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202280011725.3A Pending CN117460427A (zh) 2021-01-26 2022-01-07 关节功能改善用组合物

Country Status (9)

Country Link
US (1) US20240075081A1 (zh)
EP (1) EP4285997A1 (zh)
JP (1) JPWO2022163323A1 (zh)
KR (1) KR20230138497A (zh)
CN (1) CN117460427A (zh)
AU (1) AU2022213579A1 (zh)
CA (1) CA3208281A1 (zh)
TW (1) TW202239958A (zh)
WO (1) WO2022163323A1 (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116195742B (zh) * 2021-11-30 2024-07-09 内蒙古伊利实业集团股份有限公司 乳双歧杆菌bl-99在保护软骨中的应用

Family Cites Families (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH1084909A (ja) * 1996-09-13 1998-04-07 Snow Brand Milk Prod Co Ltd 腸内酪酸濃度上昇促進剤
AU2002249531A1 (en) * 2001-04-02 2002-10-28 Alimentary Health Limited Immunotherapy based on dendritic cells
JP4377117B2 (ja) * 2002-09-03 2009-12-02 株式会社エイ・エル・エイ 炎症性疾患の改善用組成物
WO2004087178A1 (en) * 2003-03-31 2004-10-14 Alimentary Health Limited A formulation comprising a bacterial strain
GB0323039D0 (en) * 2003-10-01 2003-11-05 Danisco Method
HUP0700552A2 (en) * 2007-08-27 2009-03-30 Janos Dr Feher Method and composition inhibiting inflammation
NL1034964C2 (nl) * 2008-01-28 2009-07-30 Friesland Brands Bv Werkwijze en composities voor de behandeling van botaandoeningen.
JP5840368B2 (ja) * 2011-02-02 2016-01-06 カルピス株式会社 関節炎予防改善用物質
KR101355440B1 (ko) * 2011-10-26 2014-02-05 주식회사한국야쿠르트 류마티스 관절염 예방 효능을 갖는 락토바실러스 헬베티쿠스 에이취와이7801 및 이를 유효성분으로 함유하는 제품
JP6491422B2 (ja) * 2013-09-26 2019-03-27 雪印メグミルク株式会社 免疫疾患予防剤
CN104546944B (zh) * 2014-09-30 2019-02-01 深圳华大基因科技有限公司 乳酸乳球菌在治疗或预防类风湿性关节炎或其相关疾病中的应用
JP2015096555A (ja) * 2015-02-10 2015-05-21 雪印メグミルク株式会社 加齢に伴う代謝異常疾患の予防・改善・治療剤
KR102069807B1 (ko) * 2017-03-09 2020-01-28 가톨릭대학교 산학협력단 유산균 혼합물을 포함하는 면역 질환의 예방 및 치료용 조성물
KR102050265B1 (ko) * 2017-03-13 2019-12-02 가톨릭대학교 산학협력단 락토바실러스 아시도필루스를 포함하는 관절염, 섬유증, 대장염 또는 이식거부 반응의 예방 또는 치료용 조성물
CA3056715A1 (en) * 2017-03-15 2018-09-20 University Of Rochester Compositions of oligofructose and commensal microorganisms and methods thereof
JP6799673B2 (ja) * 2017-03-30 2020-12-16 森永乳業株式会社 炎症制御遺伝子の発現促進用組成物
AU2018367596A1 (en) * 2017-11-15 2020-05-21 Evelo Biosciences, Inc. Compositions and methods for treating immune disorders using immune modulating
CN112074193A (zh) * 2018-01-29 2020-12-11 精密生物集团有限公司 一种用于预防和治疗肠易激综合征的组合产品
KR102185981B1 (ko) * 2018-02-28 2020-12-03 주식회사 엠디헬스케어 스트렙토코커스 속 세균 유래 나노소포 및 이의 용도
WO2019178309A1 (en) * 2018-03-14 2019-09-19 Sustainable Community Development, Llc Probiotic composition and feed additive
KR102074445B1 (ko) * 2018-12-12 2020-02-06 주식회사 비피도 류마티스관절염 개선, 예방 또는 치료를 위한 비피도박테리움 롱검 rapo 균주 및 이를 포함하는 조성물
JP7220457B2 (ja) 2018-12-14 2023-02-10 丸善製薬株式会社 ヒアルロン酸産生促進剤、関節機能改善剤、及び経口用組成物
KR20200131658A (ko) * 2019-05-14 2020-11-24 한국식품연구원 락토바실러스 아시도필루스를 포함하는 갱년기 여성의 근관절통, 두통, 또는 질 건조증의 예방, 개선, 또는 치료용 조성물
JPWO2021112041A1 (zh) * 2019-12-02 2021-06-10
CN112155207A (zh) * 2020-04-15 2021-01-01 杭州劲膳美健康管理有限公司 一种类风湿性关节炎医学配方食品及其制备方法
CN112023030A (zh) * 2020-09-09 2020-12-04 山东润德生物科技有限公司 一种护理骨关节新组氨糖益生菌骨胶原蛋白肽配方

Also Published As

Publication number Publication date
WO2022163323A1 (ja) 2022-08-04
EP4285997A1 (en) 2023-12-06
US20240075081A1 (en) 2024-03-07
KR20230138497A (ko) 2023-10-05
AU2022213579A9 (en) 2024-05-02
AU2022213579A1 (en) 2023-08-10
CA3208281A1 (en) 2022-08-04
JPWO2022163323A1 (zh) 2022-08-04
TW202239958A (zh) 2022-10-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CA2677030C (en) Agent for reducing visceral fat
DK2478910T3 (en) ANTI-ADIPOSITY AGENT, ANTI-ADIPOSITA NUTRITION OR DRINK, GLUCOSE TOLERANCE EFFECTIVE AGENT, AND NUTRITION OR DRINK FOR IMPROVING GLUCOSE TOLERANCE
EP2305838B1 (en) Bifidobacteria that produces folic acid, food composition and use of said bifidobacteria
TWI594758B (zh) 包含雙歧桿菌的組合物、其製備方法及其用途
EP1972208A1 (en) Composition for improving intestinal microflora
CN109069555B (zh) 面向新生儿的用于改善脑功能的组合物
MX2015007814A (es) Cepa de bifidobacterium animalis ssp. animalis.
WO2021112041A1 (ja) 骨強化剤
CN106604736A (zh) 副干酪乳杆菌促进生态失调后肠道菌群多样性恢复的应用
WO2018003900A1 (ja) 栄養状態改善に使用するための組成物
WO2018003899A1 (ja) 腎性貧血改善用組成物
AU2009220403B2 (en) Agents for promoting secretion and/or suppressing decrease of adiponectin
CN117460427A (zh) 关节功能改善用组合物
JP2003252770A (ja) 糖尿病合併症予防・改善・治療剤
JP2003252772A (ja) 加齢に伴う代謝異常症の予防・改善・治療剤
JP6894242B2 (ja) 非アルコール性肝障害抑制剤
WO2018003898A1 (ja) 軟骨再生促進用組成物
JP2004315477A (ja) 骨吸収抑制剤
JP2003252771A (ja) 加齢に伴う代謝異常疾患の予防・改善・治療剤
CN115466687A (zh) 一种降低体脂含量和体重的组合物及其应用
JP2021042141A (ja) 腎機能障害の予防又は改善用組成物、並びに、該組成物を用いた医薬品組成物及び飲食品組成物

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 40098199

Country of ref document: HK