CN117129595A - 一种妥洛特罗中有关物质的分析方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及药物成分分析技术领域，公开了一种妥洛特罗中有关物质的分析方法，所述分析方法是结合高效液相色谱法进行的；色谱柱为耐纯水相色谱柱；流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A为缓冲盐和磷酸缓冲液的混合溶液，所述流动相B为有机溶剂；稀释剂为含有HCl溶液的流动相A。采用本发明的分析方法，可以得到保留时间合适的峰型，提高乙酸钠的出峰灵敏度、改善主峰峰型，减少干扰峰，响应良好；且通过对稀释剂的改进可以使得样品完全溶解，提高样品分析准确度。

Description

一种妥洛特罗中有关物质的分析方法
技术领域
本发明涉及药物成分分析技术领域，特别是涉及一种妥洛特罗中有关物质的分析方法。
背景技术
妥洛特罗(Tulobterol)，化学名为1-(2-氯苯基)-2-叔丁氨基乙醇，其为选择性β2受体激动药，对支气管平滑肌具有较强而持久的扩张作用，对心脏的兴奋性较弱，主要用于防治支气管哮喘、哮喘样支气管炎和慢性支气管炎等。妥洛特罗盐酸盐于1981年在日本作为抗哮喘药被批准上市，活性成分为妥洛特罗盐酸盐，1998年妥洛特罗贴剂被批准用于治疗COPD，其活性成分为妥洛特罗，目前多用于贴剂治疗儿童哮喘。
由于环境变化的影响，妥洛特罗在药物制剂中的存在形式容易发生改变，进而影响妥洛特罗的治疗效果，并且在妥洛特罗成品制备纯化过程中，采用氢氧化钠中和妥洛特罗醋酸盐的方法会生成乙酸钠，成品中有残留乙酸钠的风险，因此，对于妥洛特罗中有关物质的分析至关重要。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种妥洛特罗中有关物质的分析方法，实现对妥洛特罗中有关物质尤其是乙酸钠的定量检测。
为了达到上述目的，本发明采用如下方案：
一种妥洛特罗中有关物质的分析方法，所述分析方法是结合高效液相色谱法进行的；
色谱柱为耐纯水相色谱柱；
流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A为缓冲盐和磷酸缓冲液的混合溶液，所述流动相B为有机溶剂；
稀释剂为含有HCl溶液的流动相A。
优选的，在上述妥洛特罗中有关物质的分析方法中，所述色谱柱包括YMC-UltraHTHydrosphere C18、Ultimate HILIC Amide、ZORBAX SB-Aq、Waters Atlantis T3中的任意一种；进一步优选的，所述色谱柱为Waters Atlantis T3柱。
优选的，在上述妥洛特罗中有关物质的分析方法中，所述色谱柱的柱长为150-250mm，内径为2-10mm；所述色谱柱内填料的粒径为2-10μm；
进一步优选的，所述色谱柱的柱长为250mm，内径为4.6mm；所述色谱柱内填料的粒径为5μm。
优选的，在上述妥洛特罗中有关物质的分析方法中，所述稀释剂包括稀释剂A和稀释剂B；所述稀释剂A为流动相A；所述稀释剂B为含有HCl的流动相A，且HCl的浓度为1mol/L。
优选的，在上述妥洛特罗中有关物质的分析方法中，所述缓冲盐为钾盐或钠盐，更优选为钾盐，进一步优选为KH2PO4，且所述钾盐离子浓度为10-20mmol/L。
优选的，在上述妥洛特罗中有关物质的分析方法中，所述磷酸缓冲液为0.1%H3PO4缓冲液；和/或所述有机溶剂包括乙腈。
优选的，在上述妥洛特罗中有关物质的分析方法中，所述高效液相色谱法的洗脱方式为梯度洗脱；
进一步优选的，所述梯度洗脱的过程为：
0-7min 流动相A 100%；
7-20min流动相A从100%至35%，流动相B从0至65%；
20-30min 流动相A 35%+流动相B 65%；
30-31min 流动相A从35%至100%，流动相B从65%至0；
31-40min 流动相A 100%。
优选的，在上述妥洛特罗中有关物质的分析方法中，所述高效液相色谱法的柱温为35±5℃，检测波长为215±2nm，流速为1.0±0.2ml/min，所述检测器为PDA/UV。
优选的，在上述妥洛特罗中有关物质的分析方法中，包括以下步骤：
（1）供试品溶液的制备：取妥洛特罗，用稀释剂溶解稀释至每1ml含妥洛特罗5mg的溶液，即得供试品溶液；
（2）对照品溶液的制备：取乙酸钠，用稀释剂溶解稀释至每1ml含乙酸钠5µg的溶液，即得对照品溶液；
（3）分别精密量取所述供试品溶液和所述对照品溶液，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，通过峰面积外标法得到样品中乙酸钠的含量。
优选的，在上述妥洛特罗中有关物质的分析方法中，所述供试品溶液的制备方法如下：称取妥洛特罗100mg至20ml量瓶中，加入1ml稀释剂B完全溶解样品，再加入稀释剂A定容至刻度，即得供试品溶液；
所述对照品溶液的制备方法如下：称取乙酸钠100µg至20ml量瓶中，加入1ml稀释剂B完全溶解样品，再加入稀释剂A定容至刻度，即得对照品溶液。
本发明提供了一种妥洛特罗中有关物质的分析方法，与现有技术相比，其有益效果在于：
采用本发明的分析方法，可以得到保留时间合适的峰型，提高乙酸钠的出峰灵敏度、改善主峰峰型，减少干扰峰，响应良好；且通过对稀释剂的改进可以使得样品完全溶解，提高样品分析准确度。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1为试验例1妥洛特罗中乙酸钠的色谱图；
图2为试验例2妥洛特罗中乙酸钠的色谱图；
图3为试验例3妥洛特罗中乙酸钠的色谱图；
图4为妥洛特罗有关物质分析方法中专属性的验证色谱图；
图5为妥洛特罗中有关物质分析方法中乙酸钠的线性图。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例提供了一种妥洛特罗中有关物质的分析方法，所述分析方法是结合高效液相色谱法进行的；
色谱柱为耐纯水相色谱柱；流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A为缓冲盐和磷酸缓冲液的混合溶液，所述流动相B为有机溶剂；稀释剂为含有HCl溶液的流动相A。
在本发明的一些实施例中，所述色谱柱包括YMC-UltraHT Hydrosphere C18、Ultimate HILIC Amide、ZORBAX SB-Aq、Waters Atlantis T3中的任意一种；优选为WatersAtlantis T3柱。
具体的，Waters Atlantis T3柱的柱长为150-250mm，内径为2-10mm，色谱柱内填料的粒径为2-10μm；优选的，Waters Atlantis T3柱的柱长为250mm，内径为4.6mm，色谱柱内填料的粒径为5μm。
在本发明的一些实施例中，所述缓冲盐为钾盐或钠盐，更优选为钾盐，进一步优选为KH2PO4，且所述钾盐离子浓度为10-20mmol/L
在本发明的一些实施例中，所述磷酸缓冲液为0.1%H3PO4缓冲液；和/或所述有机溶剂包括乙腈。
在本发明的一些实施例中，所述稀释剂包括稀释剂A和稀释剂B；所述稀释剂A为流动相A；所述稀释剂B为含有HCl的流动相A，且HCl的浓度为1mol/L。
在本发明的一些实施例中，所述高效液相色谱法的洗脱方式为梯度洗脱，洗脱过程参见表1：
表1
在本发明的一些实施例中，所述高效液相色谱法的柱温为35±5℃，检测波长为215±2nm，流速为1.0±0.2ml/min，所述检测器为PDA/UV；优选的，柱温为35℃，检测波长为215nm，流速为1.0ml/min。
在本发明的一些实施例中，妥洛特罗中有关物质的分析方法包括以下步骤：
（1）供试品溶液的制备：取妥洛特罗，用稀释剂溶解稀释至每1ml含妥洛特罗5mg的溶液，即得供试品溶液；
（2）对照品溶液的制备：取乙酸钠，用稀释剂溶解稀释至每1ml含乙酸钠5µg的溶液，即得对照品溶液；
（3）设定色谱条件：采用Atlantis T3(4.6*250mm, 5µm)色谱柱，流动相A为20mmolKH2PO4+0.1%H3PO4缓冲液，流动相B为乙腈，稀释剂为含有5% 1mol/L HCl的流动相A，柱温为35℃，检测波长为215nm，流速为1.0ml/min，所述检测器为PDA/UV，进样量为50µl，洗脱采用如表1所示的梯度洗脱；
（4）分别精密量取所述供试品溶液和所述对照品溶液，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，通过峰面积外标法得到样品中乙酸钠的含量。
在本发明的一些实施例中，所述供试品溶液的制备方法如下：称取妥洛特罗100mg至20ml量瓶中，加入1ml稀释剂B完全溶解样品，再加入稀释剂A定容至刻度，即得供试品溶液；
所述对照品溶液的制备方法如下：称取乙酸钠100µg至20ml量瓶中，加入1ml稀释剂B完全溶解样品，再加入稀释剂A定容至刻度，即得对照品溶液。
需要说明的是，由于妥洛特罗原料药成品在流动相A中溶解性较差，因此在供试品溶液和对照品溶液制备过程中，样品先用约1ml的1mol/L的HCl溶液（即稀释剂B）完全溶解后，再加稀释剂A稀释定容至刻度。
一、高效液相色谱条件的确定
试验例1
高效液相色谱条件如下：采用Thermo Acclaim Mixed-Mode WAX-1 YF-770(4.6*250mm, 5µm)色谱柱，流动相A为20mmol NaH2PO4盐溶液，流动相B为乙腈，稀释剂为流动相A与B(70：30)的混合液，柱温为35℃，检测波长为215nm，流速为1.0ml/min，所述检测器为PDA/UV，进样量为10µl，洗脱为等度洗脱，洗脱液为70%流动相A+30%流动相B。
供试品配制：取妥洛特罗，用稀释剂溶解稀释至每1ml含妥洛特罗5mg的溶液，注入高效液相色谱仪，色谱图如图1所示。
由图1可知，当色谱柱为混合离子交换柱时，乙酸钠的保留时间为7.7min左右，乙酸钠浓度为1mg/ml，S/N值为134，杂质响应值太弱，方法不适用，因此进一步筛选其他色谱柱，以优化杂质的出峰时间和灵敏度。
试验例2
高效液相色谱条件如下：采用Atlantis T3(4.6*250mm,5μm) 色谱柱，流动相A为pH 2.5的20mmol/L NaH2PO4缓冲溶液，流动相B为乙腈，稀释剂为流动相A，洗脱为梯度洗脱，洗脱过程参见表2，其余条件同试验例1。
表2
在该试验过程中参考杂质性质，使用偏酸性的检测体系，筛选耐纯水相色谱柱，筛选的色谱柱有YMC-UltraHT Hydrosphere C18、Ultimate HILIC Amide、ZORBAX SB-Aq、Atlantis T3，其中如图2所示，Atlantis T3系列柱子，主峰峰型较佳，但主峰前后有干扰.
相比较试验例1，试验例2方法的杂质保留时间较为合适，且主峰峰型有所改善，因此，色谱柱优选为Atlantis T3柱，进一步优化流动相体系。
试验例3
高效液相色谱条件如下：采用Atlantis T3(4.6*250mm,5μm) 色谱柱，流动相A为20mmol KH2PO4+0.1%H3PO4缓冲液，流动相B为乙腈，进样量为50µl，稀释剂分为稀释剂A和稀释剂B，稀释剂A为流动相A，稀释剂B为含有HCl的流动相A（HCl浓度为1mol/L），洗脱为梯度洗脱，洗脱过程参见表3，其余条件同试验例1。
表3
供试品配制：称取妥洛特罗原料药约100mg至20ml量瓶，加1ml的稀释剂B完全溶解样品，再加稀释剂A定容至刻度，混匀溶液注入高效液相色谱仪，色谱图如图3所示。
在该试验过程中，尝试调节调流动相pH值，更换缓冲盐钠盐为钾盐，乙酸钠杂质在偏酸性体系保留更强，且pH值越小，保留越强；碱性体系出峰太早；缓冲盐体系钾盐比钠盐干扰小，钠盐在出峰前后干扰峰较多，且经过多次实验发现钾盐离子浓度20mmol/L比10mmol/L响应更佳，因此最终选定20mmol/L KH2PO4+0.1%H3PO4缓冲液作为流动相A体系。
并且发现Atlantis T3长度为150mm的短柱子，乙酸钠保留较早，有干扰峰，影响积分，故选择250mm的长柱，作为最终选定色谱柱，选定该色谱条件检测乙酸钠的杂质含量，在6.099min保留，响应良好。
另外，由于妥洛特罗原料药成品在流动相A中溶解性较差，因此在供试品溶液和对照品溶液制备过程中，样品先用约1ml的1mol/L的HCl溶液（即稀释剂B）完全溶解后，再加稀释剂A稀释定容至刻度。
二、分析方法验证
1.***适用性
***适用性的可接受标准：对照溶液I中，连续进样5针，乙酸钠峰面积的RSD应不大于10.0%，对照溶液II进样1针，与对照溶液I相比，乙酸钠响应因子RD不得大于10.0%。
取乙酸钠适量，用稀释剂溶解稀释至每1ml含乙酸钠5µg的溶液，作为对照溶液。
取对照溶液I连续进样5针，对照溶液II进样1针，计算***适用性及两溶液所测得乙酸钠响应的RD值，参见表4。
表4 ***适用性结果
由表4可知，***适用性试验中，对照I连续进样5针，峰面积的RSD为0.93%，小于10.0%，两份对照响应值计算RD为1.52%，小于10.0%，***适用性良好。
2.专属性
专属性的可接受标准：稀释剂、其它已知杂质、供试品及未知杂质在乙酸钠出峰处无显著色谱峰干扰，如果观察到的干扰在LOQ之下可忽略不计，分离度溶液中，乙酸钠与其相邻峰间分离度不得小于1.5。
单标定位溶液：取杂质适量，用稀释剂溶液稀释至每1ml含杂质50μg的溶液，作为定位溶液。（2-氯苯乙烯、2-叔丁胺-1-(4-氯苯基)乙醇、乙酸钠定位溶液均该方法配制）
分离度：取妥洛特罗、2-氯苯乙烯、2-叔丁胺-1-(4-氯苯基)乙醇、乙酸钠适量，用稀释剂溶液稀释至每1ml含妥洛特罗 5mg，乙酸钠15μg，2-氯苯乙烯、2-叔丁胺-1-(4-氯苯基)乙醇各5μg的溶液。
通过对方法中稀释剂、对照溶液、供试品溶液的考察，证明方法中稀释剂及供试品在对照处无干扰，结果参见表5及图4。
表5 专属性结果
由表5可知，稀释剂在乙酸钠处无干扰，且相邻峰间均能达到基线分离，乙酸钠与其后分离度35.191，符合要求。
3.检测限和定量限
定量限的可接受标准：定量限溶液信噪比不得小于10；定量限溶液连续进样6针，乙酸钠峰面积的RSD不得大于10.0%。；
检测限的可接受标准：检测限溶液信噪比不得小于3。
取对照I溶液，逐级稀释，作为定量限溶液、检测限溶液，结果参见表6。
表6 灵敏度试验结果
由表6可知，当乙酸钠浓度约为0.3813µg/ml(约相当供试品浓度的0.008%)作为检测限，信噪比为3.9，大于3，符合要求。当乙酸钠浓度约为1.2710µg/ml(约相当供试品浓度的0.025%)作为定量限，连续进样6针，信噪比最小为13.4，大于10；RSD为5.87%，小于10.0%，符合要求，所测浓度满足检测要求。
4.线性和范围
线性和范围的可接受标准：相关系数r应不小于0.990；y轴截距绝对值应不大于杂质限度浓度溶液峰面积的25%。
配制线性贮备液，逐级稀释，配制成各浓度的线性溶液，L1为LOQ限度溶液，其余L2-L5线性溶液，参见表7及图5。
表7 线性结果
由表7及图5可知，在定量限至0.2%供试品浓度范围内，以浓度及峰面积为坐标，所得线性方程为y=996.48x-171.63，r=0.9997，大于0.990；且截距小于限度浓度溶液峰面积的25%，符合要求。
5.准确度
准确度的可接受标准：回收率应在80.0%-120.0%之间；9份样品回收率RSD不得小于10.0%(若为LOQ浓度，回收率可放宽至70.0%-130.0%，RSD≤15.0%)。
未加标供试品溶液：取妥洛特罗适量，用稀释剂溶解并稀释至每1ml含供试品5mg的溶液，作为未加标供试品溶液；
对照溶液：同***适用性；
加标供试品溶液：取妥洛特罗、乙酸钠适量，用稀释剂溶解并稀释至每1ml含供试品5mg、乙酸钠2.5μg的溶液，作为50%加标供试品溶液；
取妥洛特罗、乙酸钠适量，用稀释剂溶解并稀释至每1ml含供试品5mg、乙酸钠5μg的溶液，作为100%加标供试品溶液；
取妥洛特罗、乙酸钠适量，用稀释剂溶解并稀释至每1ml含供试品5mg、7.5μg的溶液，作为150%加标供试品溶液；
准确度通过回收率来考察，研究采用50%、100%、150%限度浓度加标样品确认，结果参见表8-9。
表8 准确度对照结果
表9 准确度结果
由表8-9可得，测得9份样品回收率为99.32%-116.37%，在80%-120%范围内；RSD为5.74%，小于10.0%，符合要求。
6.精密度
重复性的可接受标准：研发实验室一名实验员配制6份加标供试品溶液，回收率应在80.0%-120.0%之间，乙酸钠回收含量测定结果的RSD不得大于10.0%。
重现性的可接受标准：不同实验室，另一中实验员配制6份加标供试品溶液，回收率应在80.0%-120.0%之间，乙酸钠回收含量测定结果的RSD不得大于10.0%；两位实验员共测得的12份加标供试品溶液，回收率应在80.0%-120.0%之间，乙酸钠回收含量测定结果的RSD不得大于20.0%。
由两名实验员，独立在不同日期，使用不同仪器，配制2份对照溶液、1份未加标样品溶液及6份100%溶液进行测定。结果参见表10-12。
表10 研发实验室重复性结果
表11 QC实验室重现性对照结果
表12 QC实验室重现性结果
由表10-12可知，研发实验室测得6份样品回收率99.18%-112.44%，在80.0%-120.0%范围内；RSD为4.80%，小于10.0%，符合要求；QC实验室测得6份样品回收率，在80.0%-120.0%范围内；RSD为0.90%，小于10.0%，符合要求；两个实验室于不同时间不同实验员共测得12数据回收率在80.0%-120.0%范围内，RSD为3.35%，小于20.0%，符合要求。
7.溶液稳定性
溶液稳定性的可接受标准：各时间点，加标供试品溶液测得乙酸钠的峰面积与0时间测定结果比较，变化值≤20.0%；各时间点，乙酸钠对照溶液测得的峰面积与0时间测定结果比较，变化值≤10.0%。
制备对照溶液1份和100%溶液，分别置于室温下，不同时间点进行检测，根据不同时间测得的结果与初次结果得到变化的绝对值，来考察对照溶液及加标供试品溶液的稳定性，结果参见表13。
表13 溶液稳定性试验结果
由表13可知，在室温条件下，对照溶液放置65h、供试品及加标供试品溶液59h时，对照溶液峰面积的变化值最大为5.51%，小于10.0%；供试品溶液未检出乙酸钠；加标供试品溶液中峰面积的变化值最大为16.62%；小于20.0%。故对照溶液在65h、供试品及加标供试品溶液在59h内稳定，满足检测要求。
8.耐用性
耐用性的可接受标准：微量改变色谱参数，***适用性均符合要求；调整色谱参数与正常条件测得的加标供试品溶液中杂质回收含量测定结果的RSD均应符合重现性可接受标准。
通过微量改变方法参数来考察***适用性及杂质含量的变化，以验证并获取方法耐用性信息。分别取对照溶液两份和100%溶液1份，于正常色谱条件及调整参数下进样，计算各条件下供试品溶液中乙酸钠回收率的RSD，具体耐用性参数方案及结果参见表14-19：
表14耐用性参数调整
调整项目 色谱柱 流动相H3PO4的量% 流速(ml/min) 柱温℃ 波长(nm)
正常参数 Atlantis T3 4.6*250mm,5μm 0.1 1.0 35 215
调整参数1 Atlantis T3 4.6*250mm,5μm 0.1±0.02 1.0 35 215
调整参数2 Atlantis T3 4.6*250mm,5μm 0.1 1.0±0.1 35 215
调整参数3 Atlantis T3 4.6*250mm,5μm 0.1 1.0 35±2 215
调整参数4 Atlantis T3 4.6*250mm,5μm 0.1 1.0 35 215±2
调整参数5 同一品牌同一类型不同批次的色谱柱 0.1 1.0 35 215
注：1.正常条件下试验结果见准确度项下对照、未加标及100%-1回收率结果。
2.更换色谱柱(调整参数5)试验结果见重现性项下对照、未加标及100%-1回收率结果。
表15耐用性试验结果-调整参数1
表16 耐用性试验结果-调整参数2
表17 耐用性试验结果-调整参数3
表18 耐用性试验结果-调整参数4
表19 耐用性试验回收率结果汇总
由表14-19可知，正常条件与调整的8个参数下，空白稀释剂不干扰杂质测定，加标供试品溶液中，乙酸钠出峰临近处无干扰，对照I连续进样5针，峰面积的RSD最大为2.06%，小于10.0%；两份对照计算RD最大为1.91%，小于10.0%；10个参数下测得的杂质回收率平均值为103.59%，在80%-120%之间；RSD为5.73%，小于20.0%；故该方法在色谱条件有微小变动下，耐用性良好。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。对于实施例公开的方案而言，由于其与实施例公开的方法相对应，所以描述的比较简单，相关之处参见方法部分说明即可。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (10)

1.一种妥洛特罗中有关物质的分析方法，其特征在于，所述分析方法是结合高效液相色谱法进行的；
色谱柱为耐纯水相色谱柱；
流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A为缓冲盐和磷酸缓冲液的混合溶液，所述流动相B为有机溶剂；
稀释剂为含有HCl溶液的流动相A。
2.根据权利要求1所述的妥洛特罗中有关物质的分析方法，其特征在于，所述色谱柱包括YMC-UltraHT Hydrosphere C18、Ultimate HILIC Amide、ZORBAX SB-Aq、WatersAtlantis T3中的任意一种。
3.根据权利要求1所述的妥洛特罗中有关物质的分析方法，其特征在于，所述色谱柱为Waters Atlantis T3柱；
所述色谱柱的柱长为150-250mm，内径为2-10mm；
所述色谱柱内填料的粒径为2-10μm。
4.根据权利要求3所述的妥洛特罗中有关物质的分析方法，其特征在于，所述稀释剂包括稀释剂A和稀释剂B；
所述稀释剂A为流动相A；
所述稀释剂B为含有HCl的流动相A，且HCl的浓度为1mol/L。
5.根据权利要求1所述的妥洛特罗中有关物质的分析方法，其特征在于，所述缓冲盐为钾盐或钠盐；
和/或所述磷酸缓冲液为0.1%H3PO4缓冲液；
和/或所述有机溶剂包括乙腈。
6.根据权利要求5所述的妥洛特罗中有关物质的分析方法，其特征在于，所述缓冲盐为钾盐KH2PO4，且所述钾盐离子浓度为10-20mmol/L。
7.根据权利要求1所述的妥洛特罗中有关物质的分析方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的洗脱方式为梯度洗脱，所述梯度洗脱的过程为：
0-7min 流动相A 100%；
7-20min流动相A从100%至35%，流动相B从0至65%；
20-30min 流动相A 35%+流动相B 65%；
30-31min 流动相A从35%至100%，流动相B从65%至0；
31-40min 流动相A 100%。
8.根据权利要求1所述的妥洛特罗中有关物质的分析方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的柱温为35±5℃，检测波长为215±2nm，流速为1.0±0.2ml/min，所述检测器为PDA/UV。
9.根据权利要求1-8任一项所述的妥洛特罗中有关物质的分析方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）供试品溶液的制备：取妥洛特罗，用稀释剂溶解稀释至每1ml含妥洛特罗5mg的溶液，即得供试品溶液；
（2）对照品溶液的制备：取乙酸钠，用稀释剂溶解稀释至每1ml含乙酸钠5µg的溶液，即得对照品溶液；
（3）分别精密量取所述供试品溶液和所述对照品溶液，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，通过峰面积外标法得到样品中乙酸钠的含量。
10.根据权利要求9所述的妥洛特罗中有关物质的分析方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备方法如下：称取妥洛特罗100mg至20ml量瓶中，加入1ml稀释剂B完全溶解样品，再加入稀释剂A定容至刻度，即得供试品溶液；
所述对照品溶液的制备方法如下：称取乙酸钠100µg至20ml量瓶中，加入1ml稀释剂B完全溶解样品，再加入稀释剂A定容至刻度，即得对照品溶液。
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