CN117015400A - 使用trem2激动剂治疗与atp结合盒转运体1功能障碍有关的疾病 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种治疗人类患者中由ABCD1功能障碍导致和/或与ABCD1功能障碍相关的疾病或障碍的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的增加髓样细胞表达的触发受体2(TREM2)活性的化合物。在一些实施方案中，增加TREM2活性的化合物是TREM2激动剂。在一些实施方案中，TREM2激动剂是TREM2的小分子激动剂或TREM2的抗体激动剂。

Description

使用TREM2激动剂治疗与ATP结合盒转运体1功能障碍有关的 疾病
序列表
本申请含有序列表，所述序列表已经以ASCII格式以电子方式提交并且通过全文引用的方式特此并入。所述ASCII副本创建于2021年11月30日，命名为403433_006WO_SL.txt并且大小为2,755,371个字节。
技术领域
本发明涉及用于治疗由ATP结合盒转运体1(ABCD1)功能障碍导致的疾病和障碍的化合物及其使用方法。
背景技术
小胶质细胞是脑中常驻的巨噬细胞，具有许多稳态和损伤反应性作用，包括营养功能和吞噬功能。小胶质细胞高度依赖于过氧化作用以维持正常功能。ATP结合盒转运体1(ABCD1)基因编码关键的过氧化物酶体蛋白，所述过氧化物酶体蛋白负责将活化的极长链脂肪酸(VLCFA)转运到过氧化物酶体中进行进一步降解和β氧化以便产生能量。因此，ABCD1基因中的突变可导致小胶质细胞功能障碍和由于VLCFA的累积而造成的损伤，从而导致神经和肾上腺疾病和病症。X连锁肾上腺脑白质营养不良(X-ALD)是与ABCD1突变相关的这样一种病状，其特征是大脑和脊髓白质退化伴脱髓鞘和肾上腺功能不全，导致进行性认知和运动功能障碍并且最终导致死亡。迄今为止，对于由ABCD1功能障碍导致的疾病和障碍，还没有已知的治疗方法，并且通常通过管理疾病的症状来治疗患者。因此，本领域仍然需要治疗由ABCD1功能损失突变导致的疾病和障碍的方法。
发明内容
在一个方面，本发明提供了一种治疗人类患者中由ABCD1功能障碍导致和/或与ABCD1功能障碍相关的疾病或障碍的方法，所述方法包括向患者施用有效量的增加髓系细胞2上表达的触发受体(TREM2)活性的化合物。在一些实施方案中，增加TREM2活性的化合物是TREM2的激动剂。在一些实施方案中，TREM2激动剂是TREM2的小分子激动剂或TREM2的抗体激动剂。在一些实施方案中，由ABCD1功能障碍导致和/或与ABCD1功能障碍相关的疾病或障碍是x-ALD。
具体实施方式
TREM2、ABCD1和X-ALD
TREM2是在髓系细胞上表达的受体Ig超家族的成员，所述髓系细胞包括巨噬细胞、树突细胞和小胶质细胞(Schmid等人,Journal of Neurochemistry,第83卷:1309-1320,2002；Colonna,Nature Reviews Immunology,第3卷:445-453,2003；Kiialainen等人,Neurobiology of Disease,2005,18:314-322)。TREM2是结合许多内源性底物的先天免疫受体，并且通过与衔接蛋白DAP12复合的短的胞内结构域发出信号，所述衔接蛋白的胞质结构域包含ITAM基序(Bouchon等人,The Journal ofExperimental Medicine,2001,194:1111-1122)。在TREM2激活后，DAP12中的ITAM基序内的酪氨酸残基被激酶的Src家族磷酸化，所述Src家族通过它们的SH2结构域为酪氨酸激酶ζ链相关蛋白70(ZAP70)和脾酪氨酸激酶(Syk)提供停靠位点(Colonna,Nature Reviews Immunology,2003,3:445-453；Ulrich和Holtzman,ACS Chem.Neurosci.,2016,7:420-427)。ZAP70和Syk激酶诱导几种下游信号传导级联的激活，所述下游信号传导级联包括磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶C(PKC)、胞外调节激酶(ERK)和细胞内钙的升高(Colonna,Nature Reviews Immunology,2003,3:445-453；Ulrich和Holtzman,ACS Chem.Neurosci.,2016,7:420-427)。野生型人TREM2氨基酸序列以SEQ ID NO:1提供。
TREM2与若干髓样细胞过程相关，所述髓样细胞过程包括吞噬作用、增殖、存活和炎症细胞因子产生的调节(Ulrich和Holtzman,ACS Chem.Neurosci.,2016,7:420-427)。关键TREM2功能之一是调节髓样细胞数目。使用翻译阻断剂敲低原代小胶质细胞中的TREM2表达导致细胞数目减少(Zheng等人,Neurobiol.Aging,2016；42:132-141)。有证据表明，在各种情况下，TREM2对于髓样细胞存活、增殖和趋化具有重要作用，所有这些都可能导致包括小胶质细胞在内的髓样细胞数目的疾病相关增加(Jay等人,Mol Neurodegener.2017；12(1):56)。
已充分表征的TREM2功能是增强吞噬作用。TREM2在CNS内具有高吞噬能力的髓样细胞子集中表达(Bisht等人,Glia.2016；64:826-839)。在多项体外研究中，TREM2的丧失导致多种底物的吞噬作用减少，所述底物包括凋亡神经元或神经元细胞系(Takahashi等人,Exp Med.2005；201(4):647-657.；Hsieh等人,J Neurochem.2009；109(4):1144-1156)。相反，TREM2活化或过度表达增强了这些底物的吸收(Takahashi等人,J Exp Med.2005；201(4):647-657；Takahashi等人,PLoS Med.2007；4(4):e124；Jiang等人,Neuropsychopharmacology.2014；39(13):2949-2962.)。TREM2对于实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)中的髓鞘碎片(Takahashi等人,PLoS Med.2007；4(4):e124)和小鼠的中冠状动脉闭塞后的梗死周组织(MCAO)(Kawabori等人,J Neurosci.2015；35(8):3384-3396)的清除具有重要作用。
TREM2已经典地描述为消炎的，并且若干体外和体内研究支持TREM2在某些情形中的消炎作用(Yin等人,Traffic.2016；17(12):1286-1296)。敲低细胞系中的TREM2增加了促炎性介质的水平，如iNOS、TNFα、IL1β和IL6(Yin等人,Traffic.2016；17(12):1286-1296)，以响应凋亡神经元膜碎片(Takahashi等人,J Exp Med.2005；201(4):647-657.)；TLR配体(Turnbull等人,J Immunol.2006；177(6):3520-3524.)，包括LPS(Gawish等人,FASEBJ.2015年4月；29(4):1247-1257.；Gao等人,Mol Med Rep.2013年3月；7(3):921-926.；Takahashi等人,PLoS Med.2007；4(4):e124.)和Aβ42(Jiang等人,Neuropsychopharmacology.2014；39(13):2949-2962.)。此外，在细胞系或淀粉样蛋白(Jiang等人,Neuropsychopharmacology.2014；39(13):2949-2962.)和τ小鼠AD模型(Jiang等人,Neuropharmacology.2016；105:196-206.)中过度表达TREM2降低了这些促炎性转录物的水平。总之，这些研究表明，在一些情况下，TREM2可以减弱炎性反应。
TREM2已与几种严重疾病相关。例如，TREM2和DAP12二者的突变与常染色体隐性遗传病Nasu-Hakola病相关，Nasu-Hakola病的特征在于骨囊肿、肌肉萎缩和脱髓鞘表型(Guerreiro等人,New England Journal of Medicine,2013,368:117-127)。TREM2基因的变体与阿尔茨海默病(AD)和其他形式的痴呆症(包括额颞叶痴呆和肌萎缩性侧索硬化症)的风险增加有关(Jonsson等人,New England Journal of Medicine,2013,368:107-116；Guerreiro等人,JAMA Neurology,2013,70:78-84；Jay等人,Journal of ExperimentalMedicine,2015,212:287-295；Cady等人,JAMANeurol.2014年4月；71(4):449-53)。已经在朊病毒病、多发性硬化和中风的动物模型中报告了小胶质细胞增生的损伤，这表明TREM2可以在支持响应于中枢神经***的病理学或损伤的小胶质细胞增生方面发挥重要作用(Ulrich和Holtzman,ACS Chem.Neurosci.,2016,7:420-427)。
ABCD1基因提供了产生肾上腺脑白质营养不良蛋白(ALDP)的指令。ABCD1(ALDP)标绘于Xq28。ABCD1是ATP结合盒(ABC)转运体超家族的成员。该超家族含有可以将多种底物易位到胞外和胞内膜上的膜蛋白，包括代谢产物、脂质和甾醇以及药物。ALDP定位于称为过氧化物酶体的细胞结构的膜中。过氧化物酶体是细胞内处理很多类型分子的小囊。ALDP将一组称为极长链脂肪酸(VLCFA)的脂肪带入过氧化物酶体，在该处使它们分解。由于ABCD1在小胶质细胞中高表达，因此小胶质细胞功能障碍及其与其他细胞类型的密切相互作用可以积极参与神经退行性过程(Gong等人,Annals of Neurology.2017；82(5):813-827.)。研究已经表明，严重小胶质细胞丧失和损伤是具有携带ABCD1突变的X连锁ALD的大脑形式(cALD)患者的早期特征(Bergner等人,Glia.2019；67:1196–1209)。研究还表明，ABCD1缺陷导致骨髓谱系细胞的可塑性受损，这反映在抗炎反应的不完全建立上，因此可能有助于大脑肾上腺脑白质营养不良中的破坏性快速进行性脱髓鞘(Weinhor等人,BRAIN 2018:141；2329–2342)。最近83名患有cALD的年轻男性的报告中还显示，携带APOE4等位基因—TREM2的已知配体的患者具有增加的大脑疾病受累负荷，如通过Loes评分、钆强度评分(GIS)和神经功能评分(NFS)确定的(Orchard等人,Nature Scientific Reports 2019 9:7858)。这些发现强调了小胶质细胞/单核细胞/巨噬细胞是预防或阻止X连锁肾上腺脑白质营养不良患者中的髓鞘破坏的关键治疗靶标。
本发明涉及以下出乎意料的发现，TREM2激动剂的施用可以挽救具有ABCD1基因突变的细胞中的小胶质细胞的丧失。此前的研究已经显示，当培养基中的M-CSF水平降低至5ng/mL时，TREM2激动剂抗体4D9以剂量依赖性方式增加ATP发光(细胞数量和活性的度量)(Schlepckow等人,EMBO Mol Med.,2020)，并且当M-CSF被从培养基中完全移除时，TREM2激动剂AL002c增加ATP发光(Wang等人,J.Exp.Med.；2020,217(9):e20200785)。这一发现表明，TREM2激动作用可以补偿ABCD1功能的缺陷，从而导致小胶质细胞的持续活化、增殖、趋化性，维持抗炎环境并且减少由ABCD1减少和VLCFA积聚导致的星形细胞增多。本发明涉及以下出乎意料的发现，TREM2的活化可以挽救携带ABCD1突变并受到VLCFA增加挑战的小胶质细胞，并且在由于ABCD1突变而遭受功能性小胶质细胞丧失的患者中也可以观察到这种作用。在现有技术中，此前未教导或提出这一发现。
迄今为止，此前研究未表明，在存在ABCD1突变和VLCFA增加的情况下，TREM2激动作用可以挽救细胞中的小胶质细胞的丧失。此前的研究未教导或提出，通过TREM2激动作用逆转由于ABCD1突变而导致的小胶质细胞的丧失可以用于治疗由ABCD1突变导致和/或与ABCD1突变相关的疾病或障碍。
X连锁肾上腺脑白质营养不良(x-ALD)是由ABCD1突变引起的X染色体连锁的中枢神经***疾病，所述突变在患有所述疾病的患者中表现为可变发育行为、认知、运动和感觉功能变化。在受影响的男性中见到三种主要表型：(1)儿童期大脑形式最通常表现于四岁与八岁之间。它最初类似于注意力缺乏障碍或多动；认知、行为、视力、听力和运动功能的进行性障碍沿循初始症状，并且通常在六个月至两年内导致完全残疾，并且在5年内死亡。(2)肾上腺脊髓神经病变(AMN)最通常表现于第二个十年与第四个十年之间，表现为腿的进行性僵硬和无力、***紊乱、性功能障碍，并且经常表现为肾上腺皮质功能受损；所有症状在数十年内都是进行性的。(3)“单独的艾迪生病(Addison disease)”在两岁与成年期之间并且最通常是在7.5岁之前表现为原发性肾上腺皮质功能不全，没有神经异常的证据。x-ALD的儿童期大脑形式也称为大脑ALD(cALD)，其特征在于通过磁共振成像可见的斑片状大脑白质异常。然而，临床症状和MRI变化不是cALD特有的，在其他神经***疾病中也很常见，包括成人发病的轴突球体和色素性神经胶质细胞白质脑病(ALSP)、Nasu-Hakola病(NHD)和其他脑白质营养不良，这使得cALD的诊断和治疗非常困难。
研究已发现，X-ALD是遗传病症，其中男性患者的过氧化物酶体转运体基因ABCD1中携带功能缺失突变，引起VLCFA增加及发炎过程激活，导致脱髓鞘及轴突变性。在一个方面，本发明涉及以下出乎意料的发现，TREM2途径的活化可以挽救携带ABCD1突变的患者中的小胶质细胞的丧失，防止小胶质细胞凋亡，从而治疗ABCD1相关病症，例如但不限于x-ALD。
本发明还涉及令人惊讶的发现，即神经丝轻链和神经丝重链蛋白可用作治疗性生物标记，以确定在患有由ABCD1功能障碍导致和/或与ABCD1功能障碍相关的疾病或障碍(诸如x-ALD)的患者中的治疗功效。神经丝轻链(NfL)在患有x-ALD的患者的血浆、血清和CSF中大幅度升高(van Ballegoij等人,Ann Clin Transl Neurol,7:2127-2136.)。cALD的特征在于严重和快速的髓鞘分解，随后为神经变性。暴露于双环己酮草酰二腙(cuprizone)的小鼠(急性脱髓鞘模型)显示血浆NfL升高(Taylor Meadows等人,欧洲夏科基金会第25届年会(European Charcot Foundation 25th Annual Meeting)；2017年11月30日–12月2日；意大利巴韦诺(Baveno,Italy))。另外，暴露于双环己酮草酰二腙(cuprizone)的TREM2敲除小鼠显示出增加的神经毒性以及血浆和CSF NfL的进一步增加(Nugent等人,Neuron；2020,105(5):837-854；O'Loughlin等人,Poster#694ADPD Symposium，葡萄牙里斯本市(LisbonPortugal)，2019年4月)。在脑的多个区域中，cALD患者的小胶质细胞数量比健康个体少(Bergner等人,Glia.2019；67(6):1196-1209)。本发明涉及意想不到的发现，即神经丝在患有由ABCD1功能障碍导致和/或与ABCD1功能障碍相关的疾病或障碍(诸如x-ALD)的动物的神经元中被分解，导致血浆、血清和脑脊液(CSF)中神经丝分解产物的增加，并且用TREM2激动剂治疗所述疾病或障碍的功效可通过测量神经丝和中枢神经***(CNS)的中枢水平、其降解产物(即神经丝轻链和神经丝重链蛋白)的血浆和血清水平来确定。在一个方面，本发明提供了基于神经丝轻链或神经丝重链水平来选择可能经历其神经退行性或其他疾病表型进展、从而告知用TREM2激动剂治疗的时机的x-ALD患者的方法。
定义
除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。因此，以下术语旨在具有以下含义。
“激动剂”或“活化”剂，诸如化合物或抗体，是在药剂结合靶标之后诱导(例如增加)药剂的靶标(例如TREM2)的一种或多种活性或功能的药剂。
“拮抗剂”或“阻断”剂，诸如化合物或抗体，是在药剂结合靶标之后减少或消除(例如降低)靶标与一种或多种配体的结合，和/或在药剂结合靶标之后减少或消除(例如降低)靶标的一种或多种活性或功能的药剂。在一些实施方案中，拮抗剂或阻断剂显著或完全抑制靶标与其一种或多种配体的结合和/或靶标的一种或多种活性或功能。
“抗体”以最广泛的意义使用，指免疫球蛋白或其片段，并且涵盖包含抗体的抗原结合片段或区域的任何这种多肽。公认的免疫球蛋白基因包括κ、λ、α、γ、δ、ε和μ恒定区基因、以及无数的免疫球蛋白可变区基因。轻链通常被分为κ链或λ链。重链被分为γ链、μ链、α链、δ链或ε链，它们进而分别定义免疫球蛋白的种类：IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。免疫球蛋白类别还可进一步分为亚类，包括IgG亚类IgG1、IgG2、IgG3和IgG4；和IgA亚类IgA1和IgA2。该术语包括但不限于多克隆抗体、单克隆抗体、单特异性抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)、天然抗体、人源化抗体、人抗体、嵌合抗体、合成抗体、重组抗体、杂合抗体、突变抗体、接合抗体、抗体片段(例如全长抗体的一部分，通常是其抗原结合区或可变区，例如Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段)、以及体外产生的抗体，只要它们表现出所需的生物活性即可。该术语还包括单链抗体，例如单链Fv(sFv或scFv)抗体，其中可变重链和可变轻链连接在一起(直接或通过肽接头)形成连续多肽。
“分离的”是指从自然状态的改变，即从其原始环境中改变和/或去除。例如，当多核苷酸或多肽(例如，抗体)从天然环境中与其天然相关的物质中分离出来时，其就是分离的。因此，“分离的抗体”是从其自然环境的组分中分离和/或回收的抗体。
“纯化的抗体”指抗体制剂，其中与制剂中的其他污染物(例如，其他蛋白质)相比，抗体重量为至少80％或更多、至少85％或更多、至少90％或更多、至少95％或更多，诸如通过在还原或非还原条件下使用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)或毛细管电泳(CE)SDS进行确定。
“胞外结构域”和“胞外域”在用于指膜结合蛋白时可互换使用，并且指暴露在细胞脂质膜的细胞外侧的蛋白质部分。
在任何结合剂(例如抗体)的上下文中,“特异性结合”是指诸如以高亲和力特异性地结合抗原或表位并且不显著结合其他不相关的抗原或表位的结合剂。
“功能性的”是指一种分子形式，其具有该类型天然存在的分子的天然生物活性，或任何特定的所需活性，例如通过其结合配体分子的能力来判断。“功能性”多肽的实例包括通过其抗原结合区与抗原特异性地结合的抗体。
“抗原”是指一种物质，诸如但不限于能够结合特定抗体的特定肽、蛋白质、核酸或碳水化合物。
“表位”或“抗原决定簇”是指能够被特定抗体识别并特异性地结合的抗原部分。当抗原是多肽时，表位可由通过蛋白质的三级折叠并置的连续氨基酸和/或非连续氨基酸形成。线性表位是由氨基酸线性序列上的连续氨基酸形成的表位。线性表位可在蛋白质变性时保留。构象或结构表位是由不连续的氨基酸残基构成的表位，因此由通过分子折叠，诸如通过二级、三级和/或四级结构而彼此接近的氨基酸线性序列的分离部分构成。蛋白质变性后，构象或结构表位可能会丢失。在一些实施方案中，表位可在独特的空间构象中包含至少3个以及更通常至少5个或8-10个氨基酸。因此，如本文所用的表位涵盖定义的表位，其中抗体仅结合定义的表位的一部分。本领域已知许多方法用于定位和表征蛋白质上表位的位置，包括解析抗体-抗原复合物的晶体结构、竞争测定法、基因片段表达测定法、突变测定法和基于合成肽的测定法，例如在以下文献中所描述的：Using Antibodies:ALaboratoryManual，第11章，Harlow和Lane编辑，Cold Spring Harbor Laboratory Press,ColdSpring Harbor,New York(1999)。
“蛋白质”、“多肽”或“肽”表示由酰胺键共价连接的至少两个氨基酸的聚合物，而不考虑长度或翻译后修饰(例如，糖基化、磷酸化、脂质化、豆蔻酰化、泛素化等)。该定义包括D-和L-氨基酸、以及D-和L-氨基酸的混合物。除非另有说明，蛋白质、多肽或肽的氨基酸序列在本文中以常规的N末端到C末端方向显示。
“多核苷酸”和“核酸”在本文中可互换使用，并且是指共价连接在一起的两个或更多个核苷。多核苷酸可完全由核糖核苷构成(即RNA)，完全由2'脱氧核糖核苷构成(即DNA)或由核糖核苷和2'脱氧核糖核苷的混合物构成。核苷通常将通过糖-磷酸键(糖-磷酸骨架)连接在一起，但是多核苷酸可包括一个或多个非标准键。这种非标准键的非限制性实例包括氨基磷酸、硫代磷酸和酰胺(参见例如Eckstein,F.,Oligonucleotides and Analogues:A Practical Approach，牛津大学出版社(1992))。
“可操作地连接”或“可操作地关联”是指两个或更多个多核苷酸序列被定位以允许执行它们的常规功能的情况。例如，如果启动子能够控制编码序列的表达，则启动子可操作地连接到所述编码序列上。其他控制序列，诸如增强子、核糖体结合或进入位点、终止信号、聚腺苷酸化序列和信号序列也可操作地连接，以允许它们在转录或翻译中的正确功能。
“氨基酸位置”和“氨基酸残基”可互换使用，指多肽链中氨基酸的位置。在一些实施方案中，氨基酸残基可表示为“XN”，其中X表示氨基酸，N表示其在多肽链中的位置。当两个或更多个变异(例如多态性)出现在同一个氨基酸位置时，变异可用“/”表示，将变异分开。在特定残基位置将一个氨基酸残基用另一个氨基酸残基取代可用XNY表示，其中X表示原始氨基酸，N表示多肽链中的位置，Y表示替代或取代的氨基酸。当所述术语用于描述涉及较大多肽或蛋白质的多肽或肽部分时，引用的第一个数字描述多肽或肽开始的位置(即氨基末端)，引用的第二个数字描述多肽或肽结束的位置(即羧基末端)。
“多克隆”抗体指不同抗体分子的组合物，其能够与相同或不同抗原上的几种不同特异性抗原决定簇结合或反应。多克隆抗体也可被认为是“单克隆抗体的混合物”。多克隆抗体可以是任何来源的，例如嵌合的、人源化的或完全人类的。
“单克隆抗体”是指从基本上均一的抗体群体中获得的抗体，即，除了可能以少量存在的可能的天然发生的突变之外，构成该群体的单个抗体是相同的。每种单克隆抗体针对抗原上的单个决定簇。在一些实施方案中，根据本公开使用的单克隆抗体可通过Kohler等人,1975,Nature 256:495-7所描述的杂交瘤方法或通过重组DNA方法制备。单克隆抗体也可从例如噬菌体抗体文库中分离。
“嵌合抗体”指由至少两种不同来源的组分组成的抗体。嵌合抗体可包含与另一个分子(例如，源自第二物种的抗体的一部分)融合的源自第一物种的抗体的一部分。在一些实施方案中，嵌合抗体包含与源自人类的抗体的一部分融合的源自非人动物(例如小鼠或大鼠)的抗体的一部分。在一些实施方案中，嵌合抗体包含与源自人类的抗体的恒定区融合的源自非人动物的抗体的可变区的全部或一部分。
“人源化抗体”指包含供体抗体结合特异性的抗体，例如接合到人框架序列上的供体抗体(诸如小鼠单克隆抗体)的CDR区。“人源化抗体”通常与供体抗体结合相同的表位。
“完全人抗体”或“人抗体”指仅包含人免疫球蛋白序列的抗体。如果在非人细胞(例如小鼠)中、在小鼠细胞中或在源自小鼠细胞的杂交瘤中产生，则完全人抗体可含有鼠糖链。
“全长抗体”、“完整抗体”或“整个抗体”可互换使用，指抗体(诸如本公开的抗TREM2抗体)呈其基本上完整的形式，与抗体片段相对。具体地，整个抗体包括那些具有包括Fc区的重链和轻链的抗体。恒定区可以是天然序列恒定区(例如，人天然序列恒定区)或其氨基酸序列变体。在一些情况下，完整抗体可具有一种或多种效应子功能。
“抗体片段”或“抗原结合部分”指全长抗体的一部分，通常是其抗原结合或可变结构域。抗体片段的实例包括Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段；双抗体；线性抗体；单链抗体；和由结合两种或更多种不同抗原的抗体片段形成的多特异性抗体。含有增加的结合化学计量或可变化合价(2价、3价或4价)的抗体片段的几个实例包括三抗体、三价抗体和三聚抗体、四抗体、二双抗体和(sc(Fv)2)2分子，并且全部都可用作结合剂以高亲和力和亲合力结合可溶性抗原(参见例如，Cuesta等人,2010,Trends Biotech.28:355-62)。
“单链Fv”或“sFv”抗体片段包含抗体的VH和VL结构域，其中这些结构域存在于单个多肽链中。一般而言，Fv多肽还包含处于VH和VL结构域之间的多肽接头，所述接头能使sFv形成抗原结合所需的结构。关于sFv的综述，参见Pluckthun,The Pharmacology ofMonoclonal Antibodies,第113卷,第269-315页；Rosenberg和Moore编辑,Springer-Verlag,New York(1994)。
“双抗体”指具有两个抗原结合位点的小抗体片段，其包含与同一多肽链(VH-VL)中的轻链可变结构域(VL)相连的重链可变结构域(VH)。通过使用短到允许同一条链上的两个结构域之间配对的接头，所述结构域被迫与另一条链的互补结构域配对并产生两个抗原结合位点。
“抗原结合结构域”或“抗原结合部分”指与抗原的部分或全部特异性地结合和互补的抗原结合分子的区域或部分。在一些实施方案中，抗原结合结构域可以仅结合抗原的特定部分(例如，表位)，特别是当抗原很大时。抗原结合结构域可包含一个或多个抗体可变区，特别是抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)，并且特别是VH和VL链的每条链上的互补决定区(CDR)。
“可变区”和“可变结构域”可互换使用，指赋予每种特定抗体的结合和特异性特征的多肽区域。抗体重链的可变区被称为“VH”，而抗体轻链的可变区被称为“VL”。序列中的主要可变性通常位于可变结构域的三个区域，在VL区和VH区的每个区中称为“高变区”或“CDR”，并且形成抗原结合位点。可变结构域中更保守的部分被称为框架区FR。
“互补决定区”和“CDR”可互换使用，指在抗体分子的重链和轻链多肽的可变区内发现的不连续抗原结合区。在一些实施方案中，CDR也被描述为“高变区”或“HVR”。通常，天然存在的抗体包含六个CDR，VH中的三个(称为：CDR H1或H1；CDR H2或H2；和CDR H3或H3)以及VL中的三个(称为：CDR L1或L1；CDR L2或L2；和CDR L3或L3)。已经使用各种方法描绘了CDR结构域，并且应当理解，由不同方法定义的CDR也涵盖在本文中。用于定义CDR的“Kabat”方法使用序列可变性，并且是最常用的(Kabat等人,1991,“Sequences of Proteins ofImmunological Interest,第5版”NIH 1:688-96)。“Chothia”使用结构环的位置(Chothia和Lesk,1987,J Mol Biol.196:901-17)。由“AbM”定义的CDR是Kabat和Chothia方法之间的折衷，并且可使用牛津分子AbM抗体建模软件来描绘(参见，Martin等人,1989,Proc.NatlAcad Sci USA.86:9268；另参见万维网www.bioinf-org.uk/abs)。“Contact”CDR描绘基于对已知抗体-抗原晶体结构的分析(参见例如，MacCallum等人,1996,J.Mol.Biol.262,732-45)。当相互进行比较时，通过这些方法描绘的CDR通常包括氨基酸残基的重叠或子集。
应当理解，包含特定CDR的确切残基数量将根据CDR的序列和大小而变化，并且给定抗体可变区的氨基酸序列，本领域技术人员可以常规地确定哪些残基包含特定的CDR。
Kabat(同上)还定义了可变结构域序列的编号***，该***适用于任何抗体。当涉及可变结构域中的残基(大约轻链的残基1-107和重链的残基1-113)时，通常使用Kabat编号***(例如，Kabat等人,Sequences of Immunological Interest.第5版Public HealthService,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991))。当提及免疫球蛋白重链恒定区中的残基时，通常使用“EU或Kabat编号***”或“EU指数”(例如，Kabat等人(同上)报道的EU指数)。“Kabat的EU指数”是指人IgGl EU抗体的残基编号。提及抗体可变结构域中的残基编号意指通过Kabat编号***进行的残基编号。提及抗体恒定结构域中的残基编号意指通过EU或Kabat编号***进行的残基编号(例如，参见美国专利公开号2010-280227)。本领域技术人员可将这种“Kabat编号”***指定给任何可变结构域序列。因此，除非另有说明，提及抗体或抗原结合片段中特定氨基酸残基的编号是根据Kabat编号***。
“框架区”或“FR区”是指为可变区的一部分但不是CDR的一部分的氨基酸残基(例如，使用Kabat、Chothia或AbM定义)。抗体的可变区通常含有四个FR区：FR1、FR2、FR3和FR4。因此，VL区中的FR区以下列顺序出现：FR L1-CDR L1-FRL2-CDR L2-FRL3-CDR L3-FRL4，而VH区中的FR区以下列顺序出现：FR1H-CDR H1-FRH2-CDR H2-FRH3-CDR H3-FRH4。
“恒定区”或“恒定结构域”是指免疫球蛋白轻链或重链中与可变区不同的区域。重链的恒定区通常包含CH1结构域、铰链(例如，上、中和/或下铰链区)、CH2结构域和CH3结构域中的至少一个。在一些实施方案中，抗体可具有额外的恒定结构域CH4和/或CH5。在一些实施方案中，本文所述的抗体包含含有CH1结构域的多肽；含有CH1结构域、铰链结构域的至少一部分和CH2结构域的多肽；含有CH1结构域和CH3结构域的多肽；含有CH1结构域、铰链结构域的至少一部分和CH3结构域的多肽，或含有CH1结构域、铰链结构域的至少一部分、CH2结构域和CH3结构域的多肽。在一些实施方案中，抗体包含含有CH3结构域的多肽。轻链的恒定结构域被称为CL，并且在一些实施方案中，可以是κ或λ恒定区。然而，本领域普通技术人员将理解，这些恒定结构域(例如，重链或轻链)可以被修饰，使得它们在氨基酸序列上不同于天然存在的免疫球蛋白分子。
“Fc区”或“Fc部分”是指免疫球蛋白重链的C末端区域。Fc区可以是天然序列Fc区或非天然存在的变体Fc区。通常，免疫球蛋白的Fc区包含恒定结构域CH2和CH3。尽管Fc区的边界可以变化，但在一些实施方案中，人IgG重链Fc区可被定义为从位置C226的氨基酸残基或从P230延伸至其羧基末端。在一些实施方案中，人IgG Fc区的“CH2结构域”(也称为“Cγ2”)通常从约氨基酸残基231延伸至约氨基酸残基340。在一些实施方案中，N连接的糖链可被***完整天然IgG分子的两个CH2结构域之间。在一些实施方案中，人IgG Fc区的“CH3结构域”包含CH2结构域C末端的残基，例如从Fc区的约氨基酸残基341至约氨基酸残基447。“功能性Fc区”拥有天然序列Fc区的“效应子功能”。示例性的Fc“效应子功能”包括Clq结合；补体依赖性细胞毒性(CDC)；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体(例如LT受体)的下调；等等。此类效应子功能通常需要Fc区与结合结构域(例如，抗体可变结构域)结合，并且可使用本领域已知的各种测定法进行评估。
“天然序列Fc区”包含与天然存在的Fc区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。天然序列人Fc区包括天然序列人IgGl Fc区(非A和A同种异型)；天然序列人IgG2 Fc区；天然序列人IgG3 Fc区；和天然序列人IgG4 Fc区及其天然存在的变体。
“变体Fc区”包含与天然序列Fc区的不同之处在于至少一个氨基酸修饰(优选一个或多个氨基酸取代)的氨基酸序列。优选地，与天然序列Fc区或亲本多肽的Fc区相比，变体Fc区具有至少一个氨基酸取代，例如在天然序列Fc区或亲本多肽的Fc区中约一个至约十个氨基酸取代，优选约一个至约五个氨基酸取代。本文中的变体Fc区将优选与天然序列Fc区和/或与亲本多肽的Fc区具有至少约80％的同源性，最优选与其至少约90％的同源性，更优选于其至少约95％的同源性。
“亲和力成熟的”抗体，诸如本公开的亲和力成熟的抗TREM2抗体，是其一个或多个HVR中具有一个或多个改变的抗体，所述一个或多个改变导致与不具有那些改变的亲本抗体相比抗体对抗原的亲和力提高。在一个实施方案中，亲和力成熟的抗体对靶抗原具有纳摩尔或甚至皮摩尔的亲和力。通过本领域已知的程序产生亲和力成熟的抗体。例如，Marks等人,Bio/Technology,1992,10:779-783描述了通过VH和VL结构域改组的亲和力成熟。HVR和/或框架残基的随机诱变描述于例如：Barbas等人,Proc Nat.Acad.Sci.USA.,1994,91:3809-3813；Schier等人Gene,1995,169:147-155；Yelton等人,Immunol.,1995,155:1994-2004；Jackson等人,Immunol.,1995,154(7):3310-9；和Hawkins等人,J.Mol.Biol.,1992,226:889-896中。
“结合亲和力”是指配体和其结合配偶体之间非共价相互作用的总和的强度。在一些实施方案中，结合亲和力是反映配体和结合配偶体之间一对一相互作用的固有亲和力。亲和力通常用平衡缔合(KA)或解离常数(KD)来表示，它们依次是离解速率常数(koff)和缔合速率常数(kon)的倒数比。
“序列同一性百分比(％)”和“序列同源性百分比”在本文中可互换使用，是指多核苷酸或多肽之间的比较，并且通过在比较窗内比较两个最佳比对的序列来确定，其中为了实现两个序列的最佳比对，在比较窗内的多核苷酸或多肽序列部分与参考序列相比可包含缺口。可通过以下方式来计算百分比：确定相同的核酸碱基或氨基酸残基在两个序列中出现的位置的数量以产生匹配位置的数量，将匹配位置的数量除以比较窗口中位置的总数，并将结果乘以100以产生序列同一性的百分比。可替代地，可通过以下方式来计算百分比：确定相同的核酸碱基或氨基酸残基在两个序列中出现或者核酸碱基或氨基酸残基与缺口对齐的位置的数量以产生匹配位置的数量，将匹配位置的数量除以比较窗口中位置的总数，并将结果乘以100以产生序列同一性的百分比。本领域技术人员理解，有许多已建立的算法可用于比对两个序列。用于比较的序列的最佳比对可例如通过Smith和Waterman,1981,Adv Appl Math.2:482的局部同源算法，通过Needleman和Wunsch,1970,J MolBiol.48:443的同源性比对算法，通过Pearson和Lipman,1988,Proc Natl Acad SciUSA.85:2444-8的相似性搜索方法，以及特别是通过这些算法的计算机化实施方式(例如，BLAST、ALIGN、GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA；参见例如，Mount,D.W.,Bioinformatics:Sequence and Genome Analysis,第2版,Cold Spring Harbor Laboratory Press,ColdSpring Harbor,New York(2013))来进行。
适于确定序列同一性百分比和序列相似性的算法的实例是BLAST和BLAST 2.0、FASTDB或ALIGN算法，它们是公开可得的(例如，NCBI：国家生物技术信息中心(NationalCenter for Biotechnology Information))。本领域技术人员可确定用于比对序列的合适参数。例如，BLASTN程序(对于核苷酸序列)可使用默认值字长(W)为11、期望值(E)为10、M＝5、N＝-4、以及两条链的比较。使用BLASTP进行氨基酸序列的比较可使用默认值字长(W)为3、期望值(E)为10和BLOSUM62评分矩阵(参见Henikoff和Henikoff,1989,Proc Natl AcadSci USA.89:10915-9)。
“氨基酸取代”是指多肽中的一个氨基酸被另一个氨基酸替代。“保守氨基酸取代”是指具有相似侧链的残基的可互换性，因此通常涉及将多肽中的氨基酸用相同或相似定义的氨基酸类别内的氨基酸取代。作为实例而非限制，具有脂肪族侧链的氨基酸可被另一种脂肪族氨基酸取代，例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和甲硫氨酸；具有羟基侧链的氨基酸被另一个具有羟基侧链的氨基酸取代，例如丝氨酸和苏氨酸；具有芳香族侧链的氨基酸被另一个具有芳香族侧链的氨基酸取代，例如苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸和组氨酸；具有碱性侧链的氨基酸被另一个具有碱性侧链的氨基酸取代，例如赖氨酸、精氨酸和组氨酸；具有酸性侧链的氨基酸被另一个具有酸性侧链的氨基酸取代，例如天冬氨酸或谷氨酸；并且疏水性或亲水性氨基酸分别被另一个疏水性或亲水性氨基酸取代。
“氨基酸***”是指将至少一个氨基酸掺入预定的氨基酸序列中。***可以是一个或两个氨基酸残基的***；然而，本文考虑了约三个至约五个，或至多约十个或更多个氨基酸残基的更大***。
“氨基酸缺失”是指从预定的氨基酸序列中去除一个或多个氨基酸残基。缺失可以是一个或两个氨基酸残基的去除；然而，本文考虑了约三个至约五个，或至多约十个或更多个氨基酸残基的更大缺失。
“受试者”是指哺乳动物，包括但不限于人类、非人灵长类动物，以及非灵长类动物，诸如山羊、马和牛。在一些实施方案中，术语“受试者”和“患者”在本文中可互换使用，指代人类受试者。
“治疗有效剂量”或“治疗有效量”或“有效剂量”是指化合物(包括生物化合物或药物组合物)在施用于有需要的哺乳动物后足以产生所需活性的量。如本文所用，关于包含抗体的药物组合物，术语“治疗有效量/剂量”是指在施用于哺乳动物后足以产生有效反应的抗体或其药物组合物的量/剂量。
“药学上可接受的”是指通常安全、无毒且既不是生物学上也不是其他方面不期望的化合物或组合物，并且包括人类药学和兽医学使用上可接受的化合物或组合物。该化合物或组合物被或可被监管机构批准，或者被列入美国药典或其他认可的药典，用于动物(包括人类)。
“药学上可接受的赋形剂、载体或佐剂”是指可与至少一种治疗剂(例如，本公开的抗体)一起施用于受试者的赋形剂、载体或佐剂，并且当以足以递送治疗量的药剂的剂量施用时，所述赋形剂、载体或佐剂不会破坏其药理活性，并且通常是安全的、无毒的，既不是生物学上也不是其他方面不期望的。
术语“治疗”在本文中可与术语“治疗方法”互换使用，并且是指1)治愈、减缓、减轻诊断的病理状况、疾病或障碍的症状和/或停止诊断的病理状况、疾病或障碍的进展的治疗性处理或措施，和2)防预性/预防性措施。需要治疗的人可包括已经患有特定医学疾病或障碍的个体，以及最终可能患有该障碍的个体(即，处于风险中或需要预防措施的个体)。
如本文所用的术语“受试者”或“患者”是指执行主题方法的任何个体。通常，受试者是人，尽管如本领域技术人员所理解，受试者可以是任何动物。
在一些实施方案中，本发明的化合物能够穿过血脑屏障(BBB)。如本文所用，术语“血脑屏障”或“BBB”是指BBB本身以及血脊髓屏障。血脑屏障由脑血管内皮、基底膜和神经胶质细胞组成，用于限制物质渗透到脑中。在一些实施方案中，在施用于患者(例如口服或静脉内施用)之后，总药物的脑/血浆比为至少约0.01。在一些实施方案中，总药物的脑/血浆比为至少约0.03。在一些实施方案中，总药物的脑/血浆比为至少约0.06。在一些实施方案中，总药物的脑/血浆比为至少约0.1。在一些实施方案中，总药物的脑/血浆比为至少约0.2。
如本文所用的术语“同源物”，尤其是“TREM同源物”是指具有共同生物活性(包括抗原性/免疫原性和炎症调节活性)和/或结构性结构域并且具有如本文所定义的足够氨基酸或核苷酸序列同一性的一系列肽或核酸分子的任何成员。TREM同源物可来自相同或不同种类的动物。
如本文所用的术语“变体”是指给定肽的天然存在的等位基因变异，或者是给定肽或蛋白质的重组制备的变异，其中一个或多个氨基酸残基已经通过氨基酸取代、添加或缺失而被修饰。
如本文所用的术语“衍生物”是指给定肽或蛋白质的变异，其以其他方式被修饰，即通过将任何类型的分子(优选具有生物活性的分子)共价连接到肽或蛋白质上，包括非天然存在的氨基酸。
本发明的治疗方法的描述
在一个方面，本发明提供了一种治疗人类患者中由ABCD1功能障碍导致和/或与ABCD1功能障碍相关的疾病或障碍的方法，所述方法包括向所述患者施用增加TREM2活性的化合物。在一些实施方案中，增加TREM2活性的化合物是TREM2的激动剂。在一些实施方案中，增加TREM2活性的化合物是防止TREM2降解的化合物。
在一个方面，本发明提供了一种治疗人类患者中由ABCD1功能障碍导致和/或与ABCD1功能障碍相关的疾病或障碍的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的TREM2激动剂。在一些实施方案中，施用TREM2激动剂激活患者体内的DAP12信号传导途径，导致小胶质细胞增殖、小胶质细胞存活和小胶质细胞吞噬作用的增加，这进而导致疾病进展的减缓。在一些实施方案中，TREM2激动剂是抗体或小分子。
在一些实施方案中，TREM2激动剂激活髓样细胞(包括单核细胞、树突细胞、小胶质细胞和巨噬细胞)中的TREM2/DAP12信号传导。在一些实施方案中，TREM2激动剂激活、诱导、促进、刺激或以其他方式增加一种或多种TREM2活性。由激动剂激活或增加的TREM2活性包括但不限于：TREM2与DAP12的结合；DAP12与TREM2的结合；TREM2磷酸化，DAP12磷酸化；PI3K激活；可溶性TREM2(sTREM2)水平增加；可溶性CSF1R(sCSF1R)水平升高；选自IL-12p70、IL-4、IL-6和IL-10的一种或多种抗炎介质(例如细胞因子)的表达增加；选自IFN-a4、IFN-b、IL-6、IL-12p70、IL-12p40、IL-1β、TNF、TNF-α、IL-10、IL-8、CRP、趋化因子蛋白家族的TGF-β成员、IL-20家族成员、IL-33、LIF、IFN-γ、OSM、CNTF、TGF-β、GM-CSF、IL-11、IL-12、IL-17、IL-18和CRP的一种或多种促炎介质的表达降低；选自CCL2、CCL4、CXCL10、CCL3和CST7的一种或多种趋化因子的表达增加；TNF-α、IL-6或两者的表达降低；细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化；C-C趋化因子受体7(CCR7)的表达增加；诱导小胶质细胞向CCL19和CCL21表达细胞的趋化性；骨髓来源的树突细胞诱导抗原特异性T细胞增殖的能力的增加、正常化或两者；破骨细胞产生的诱导，破骨细胞生成速率的增加，或两者兼有；增加树突细胞、巨噬细胞、小胶质细胞、M1巨噬细胞和/或小胶质细胞、活化的M1巨噬细胞和/或小胶质细胞、M2巨噬细胞和/或小胶质细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞和库普弗细胞中的一种或多种的存活和/或功能；诱导一种或多种类型的清除，所述清除选自凋亡神经元清除、神经组织碎片清除、非神经组织碎片清除、细菌或其他外来体清除、致病蛋白清除、致病肽清除和致病核酸清除；诱导凋亡神经元、神经组织碎片、非神经组织碎片、细菌、其他外来体、致病蛋白、致病肽或致病核酸中的一种或多种的吞噬作用；被破坏的TREM2/DAP12依赖性基因表达的正常化；Syk、ZAP70或两者向TREM2/DAP12复合物的募集；Syk磷酸化；CD83和/或CD86在树突细胞、巨噬细胞、单核细胞和/或小胶质细胞上的表达增加；减少一种或多种炎性细胞因子的分泌，所述炎性细胞因子选自TNF-α、IL-10、IL-6、MCP-1、IFN-a4、IFN-b、IL-1β、IL-8、CRP、趋化因子蛋白家族的TGF-β成员、IL-20家族成员、IL-33、LIF、IFN-γ、OSM、CNTF、TGF-β、GM-CSF、IL-11、IL-12、IL-17、IL-18和CRP；一种或多种炎性受体的表达降低；在MCSF水平降低的条件下，增加巨噬细胞、树突细胞、单核细胞和/或小胶质细胞的吞噬作用；在正常水平的MCSF的存在下，降低巨噬细胞、树突细胞、单核细胞和/或小胶质细胞的吞噬作用；增加一种或多种TREM2依赖性基因的活性；CSF1、CSF2和IL-34中的一种或多种的水平增加；或者它们的任何组合。在另一个方面，本发明提供了一种用于制备治疗由ABCD1功能障碍导致和/或与ABCD1功能障碍相关的疾病或障碍的药物的TREM2激动剂。
在另一个方面，本发明提供了一种用于治疗人类患者中由ABCD1功能障碍导致和/或与ABCD1功能障碍相关的疾病或障碍的TREM2激动剂。
I.疾病和障碍
本发明的方法可用于治疗与ABCD1功能障碍有关的任何疾病或障碍。在一些实施方案中，基于诊断选择患者进行治疗，所述诊断包括ABCD1基因中存在影响ABCD1的功能的突变。在一些实施方案中，ABCD1基因中的突变是导致ABCD1活性降低或ABCD1活性停止的突变。在一些实施方案中，疾病或障碍是由杂合的ABCD1突变导致的。在一些实施方案中，疾病或障碍是由纯合的ABCD1突变导致的。在一些实施方案中，
疾病或障碍是由ABCD1基因中的剪接突变导致的。在一些实施方案中，疾病或障碍是由ABCD1基因中的错义突变导致的。
在一些实施方案中，疾病或障碍是由ABCD1活性的改变(例如增加、减少或停止)导致的疾病或障碍。在一些实施方案中，疾病或障碍是由ABCD1活性的减少或停止导致的疾病或障碍。在疾病或障碍中发生改变的ABCD1相关活性包括但不限于：脂肪酸和/或脂肪酰基CoA的过氧化物酶体输入和肾上腺脑白质营养不良蛋白(ALDP)的产生。
在一些实施方案中，疾病或障碍是由ABCD1中的功能丧失突变导致的。在一些实施方案中，功能丧失突变导致ABCD1功能的完全停止。在一些实施方案中，功能丧失突变导致ABCD1功能的部分丧失，或ABCD1活性的减少。在一些实施方案中，疾病或障碍是由ABCD1中的纯合突变导致的。
在一些实施方案中，疾病或障碍是神经退行性疾病。在一些实施方案中，疾病或障碍是由ABCD1功能障碍导致和/或与ABCD1功能障碍相关的神经退行性疾病。
在一些实施方案中，疾病或障碍是免疫障碍。在一些实施方案中，疾病或障碍是由ABCD1功能障碍导致和/或与ABCD1功能障碍相关的免疫障碍。
在一些实施方案中，所述疾病或障碍选自X连锁肾上腺脑白质营养不良(x-ALD)、球状细胞脑白质营养不良(也称为克拉伯疾病(Krabbe disease))、异染性脑白质营养不良(MLD)、大脑常染色体显性动脉病伴皮层下梗死和脑白质病(CADASIL)、亚历山大病(Alexander disease)、脆折X相关震颤共济失调综合征(FXTAS)、成年发作常染色体显性脑白质营养不良(ADLD)以及X连锁的夏科-马里-图思病(X-linked Charcot-Marie-Toothdisease，CMTX)。
在一些实施方案中，所述疾病或障碍选自X连锁肾上腺脑白质营养不良(x-ALD)、球状细胞脑白质营养不良(也称为克拉伯疾病)、异染性脑白质营养不良(MLD)、大脑常染色体显性动脉病伴皮层下梗死和脑白质病(CADASIL)、白质消融性疾病(VWM)、亚历山大病、脆折X相关震颤共济失调综合征(FXTAS)、成年发作常染色体显性脑白质营养不良(ADLD)以及X连锁的夏科-马里-图思病(CMTX)，其中前述疾病或障碍中的任一种存在于展现ABCD1功能障碍或在影响ABCD1功能的基因中具有突变的患者。
在一些实施方案中，疾病或障碍是X连锁肾上腺脑白质营养不良(x-ALD)。在一些实施方案中，x-ALD是X连锁ALD的大脑形式(cALD)。
在一些实施方案中，疾病或障碍是艾迪生病，其中已经发现患者在影响ABCD1功能的一个或多个ABCD1基因中具有突变。在一些实施方案中，疾病或障碍是艾迪生病，其中患者具有ABCD1的功能丧失突变。
在一些实施方案中，疾病或障碍是白质疾病，其中已经发现患者在影响ABCD1功能的一个或多个ABCD1基因中具有突变。在一些实施方案中，疾病或障碍是白质疾病，其中患者具有ABCD1的功能丧失突变。
在一些实施方案中，疾病或障碍是白质消融性白质脑病，其中已经发现患者在影响ABCD1功能的一个或多个ABCD1基因中具有突变。在一些实施方案中，疾病或障碍是白质消融性白质脑病，其中患者具有ABCD1的功能丧失突变。
在一些实施方案中，所述疾病或障碍选自Nasu-Hakola病、阿尔茨海默病、额颞叶型痴呆症、多发性硬化、吉兰-巴雷综合征(Guillain-Barre syndrome)、肌萎缩性侧索硬化(ALS)或帕金森氏病，其中前述疾病或障碍中的任一种存在于展现ABCD1功能障碍或在影响ABCD1功能的基因中具有突变的患者。
在一些实施方案中，疾病或障碍是阿尔茨海默病，其中已发现患者具有在一个或多个ABCD1基因中的影响ABCD1功能的突变。在一些实施方案中，基于神经病理学，患者已被诊断患有阿尔茨海默病，并且还发现患者具有在一个或多个ABCD1基因中的影响ABCD1功能的突变。在一些实施方案中，疾病或障碍是阿尔茨海默病，其中患者具有ABCD1的功能丧失突变。
在一些实施方案中，疾病或障碍是Nasu-Hakola病，其中已发现患者在一个或多个影响ABCD1功能的ABCD1基因中有突变。在一些实施方案中，基于神经病理学，患者已被诊断患有Nasu-Hakola病，并且还发现患者具有在一个或多个ABCD1基因中的影响ABCD1功能的突变。在一些实施方案中，疾病或障碍是Nasu-Hakola病，其中患者具有ABCD1的功能丧失突变。
在一些实施方案中，疾病或障碍是帕金森病，其中已发现患者具有在一个或多个ABCD1基因中的影响ABCD1功能的突变。在一些实施方案中，基于神经病理学，患者已被诊断患有帕金森病，并且还发现患者具有在一个或多个ABCD1基因中的影响ABCD1功能的突变。在一些实施方案中，疾病或障碍是帕金森病，其中患者具有ABCD1的功能丧失突变。
在一些实施方案中，疾病或障碍是多发性硬化，其中已发现患者具有在一个或多个ABCD1基因中的影响ABCD1功能的突变。在一些实施方案中，基于神经病理学，患者已被诊断患有多发性硬化，并且还发现患者具有在一个或多个ABCD1基因中的影响ABCD1功能的突变。在一些实施方案中，疾病或障碍是多发性硬化，其中患者具有ABCD1的功能丧失突变。
在一些实施方案中，疾病或障碍是ALS，其中已发现患者具有在一个或多个ABCD1基因中的影响ABCD1功能的突变。在一些实施方案中，基于神经病理学，患者已被诊断患有ALS，并且还发现患者具有在一个或多个ABCD1基因中的影响ABCD1功能的突变。在一些实施方案中，疾病或障碍是ALS，其中患者具有ABCD1的功能丧失突变。
在一些实施方案中，疾病或障碍是吉兰-巴雷(Guillain-Barre)综合征，其中已发现患者具有在一个或多个ABCD1基因中的影响ABCD1功能的突变。在一些实施方案中，基于神经病理学，患者已被诊断患有吉兰-巴雷综合征，并且还发现患者具有在一个或多个ABCD1基因中的影响ABCD1功能的突变。在一些实施方案中，疾病或障碍是吉兰-巴雷综合征，其中患者具有ABCD1的功能丧失突变。
在一些实施方案中，患者还具有在NOTCH3、HTRA1、TREX1、ARSA、EIF2B1、EIF2B2、EIF2B3、EIF2B4和EIF2B5中的一个或多个中的突变。
在一些实施方案中，疾病或障碍呈现选自以下的一种或多种症状：异常运动控制、帕金森综合病、缓慢运动(运动徐缓)、不自主颤抖(震颤)、肌肉僵硬(僵硬)、认知衰退、痴呆、不能说话、不能行走、记忆丧失、人格改变、癫痫发作、抑郁症、执行功能丧失、冲动控制丧失、注意力持续时间丧失、肾上腺功能不全、视力障碍、听力障碍、性功能障碍、肾上腺皮质功能障碍、注意力缺陷、多动症和失禁。
在一个方面，本发明提供了一种治疗人类患者中的x-ALD的方法，所述方法包括向所述患者施用增加TREM2活性的化合物。在一些实施方案中，增加TREM2活性的化合物是TREM2的激动剂。在一些实施方案中，增加TREM2活性的化合物是防止TREM2降解的化合物。
在一个方面，本发明提供了一种治疗人类患者的x-ALD的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的TREM2激动剂。在一些实施方案中，施用TREM2激动剂激活患者体内的DAP12信号传导途径，导致小胶质细胞增殖、小胶质细胞存活和小胶质细胞吞噬作用的增加，这进而导致x-ALD疾病进展的减缓。在一些实施方案中，TREM2激动剂是抗体或小分子。
在另一个方面，本发明提供了一种用于制备治疗与ABCD1功能障碍相关的疾病或障碍的药物的TREM2激动剂。在另一个方面，本发明提供了一种用于制备治疗x-ALD的药物的TREM2激动剂。
在另一个方面，本发明提供了一种用于治疗人类患者中与ABCD1功能障碍相关的疾病或障碍的TREM2激动剂。在另一个方面，本发明提供了一种用于治疗人类患者的x-ALD的TREM2激动剂。
亨廷顿氏病
在一个方面，本发明提供了一种治疗人类患者的亨廷顿病的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的TREM2激动剂。在一些实施方案中，施用TREM2激动剂激活患者体内的DAP12信号传导途径，导致小胶质细胞增殖、小胶质细胞存活和小胶质细胞吞噬作用的增加，这进而导致亨廷顿病的疾病进展的减缓。在一些实施方案中，TREM2激动剂是抗体或小分子。在一些实施方案中，TREM2激动剂是本文其他地方公开的抗体或小分子。在一些实施方案中，TREM2激动剂是本文其他地方公开的抗体。在一些实施方案中，TREM2激动剂是本文其他地方公开的小分子。在另一个方面，本发明提供了一种用于制备治疗亨廷顿病的药物的TREM2激动剂。在另一个方面，本发明提供了一种用于治疗人类患者的亨廷顿病的TREM2激动剂。
II.抗体
在一个方面，本发明提供了一种治疗人类患者的ALSP的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的增加TREM2活性的抗原结合蛋白或抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗体是TREM2的激动剂。在一些实施方案中，抗体是特异性地结合并活化人TREM2的TREM2激动剂。
TREM2激动剂抗体特异性地结合人TREM2(SEQ ID NO:1)或人TREM2的胞外结构域(ECD)(例如SEQ ID NO:2所示的ECD)，例如平衡解离常数(KD)小于50nM、小于25nM、小于10nM或小于5nM。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗体不与其他TREM蛋白(诸如人TREM1)交叉反应。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗体不结合人TREM1(SEQ ID NO:4)。
在一些实施方案中，TREM2抗体特异性地结合人TREM2残基19-174。在一些实施方案中，TREM2抗体特异性地结合人TREM2的IgV区，例如人TREM2残基19-140。
在某些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合人TREM2(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基29-112内或在TREM2蛋白上与SEQ ID NO:1的氨基酸残基29-112对应的氨基酸残基内的一个或多个氨基酸。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合人TREM2(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基29-41内或在TREM2蛋白上与SEQ ID NO:1的氨基酸残基29-41对应的氨基酸残基内的一个或多个氨基酸。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合人TREM2(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基47-69内或在TREM2蛋白上与SEQ ID NO:1的氨基酸残基47-69对应的氨基酸残基内的一个或多个氨基酸。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合人TREM2(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基76-86内或在TREM2蛋白上与SEQ ID NO:1的氨基酸残基76-86对应的氨基酸残基内的一个或多个氨基酸。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合人TREM2(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基91-100内或在TREM2蛋白上与SEQ ID NO:1的氨基酸残基91-100对应的氨基酸残基内的一个或多个氨基酸。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合人TREM2(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基99-115内或在TREM2蛋白上与SEQ ID NO:1的氨基酸残基99-115对应的氨基酸残基内的一个或多个氨基酸。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合人TREM2(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基104-112内或在TREM2蛋白上与SEQ ID NO:1的氨基酸残基104-112对应的氨基酸残基内的一个或多个氨基酸。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合人TREM2(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基114-118内或在TREM2蛋白上与SEQ ID NO:1的氨基酸残基114-118对应的氨基酸残基内的一个或多个氨基酸。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合人TREM2(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基130-171内或在TREM2蛋白上与SEQ ID NO:1的氨基酸残基130-171对应的氨基酸残基内的一个或多个氨基酸。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合人TREM2(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基139-153内或在TREM2蛋白上与SEQ ID NO:1的氨基酸残基139-153对应的氨基酸残基内的一个或多个氨基酸。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合人TREM2(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基139-146内或在TREM2蛋白上与SEQ ID NO:1的氨基酸残基139-146对应的氨基酸残基内的一个或多个氨基酸。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合人TREM2(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基130-144内或在TREM2蛋白上与SEQ ID NO:1的氨基酸残基130-144对应的氨基酸残基内的一个或多个氨基酸。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合人TREM2(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基158-171内或在TREM2蛋白上与SEQ ID NO:1的氨基酸残基158-171对应的氨基酸残基内的一个或多个氨基酸。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合人TREM2(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基43-50内或在TREM2蛋白上与SEQ ID NO:1的氨基酸残基43-50对应的氨基酸残基内的一个或多个氨基酸。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合人TREM2(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基49-57内或在TREM2蛋白上对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基49-57的氨基酸残基内的一个或多个氨基酸。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合人TREM2(SEQID NO:1)的氨基酸残基139-146内或在TREM2蛋白上与SEQ ID NO:1的氨基酸残基139-146对应的氨基酸残基内的一个或多个氨基酸。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合人TREM2(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基140-153内或在TREM2蛋白上对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基140-153的氨基酸残基内的一个或多个氨基酸。在一些实施方案中，TREM2抗体特异性地结合人TREM2的茎区，例如人TREM2的氨基酸残基145-174。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段特异性地结合TREM2并防止TREM2的降解或裂解。
在一些实施方案中，抗体是多克隆抗体。在一些实施方案中，抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗体是嵌合抗体。在一些实施方案中，抗体是人源化抗体。在一些实施方案中，抗体是人抗体，特别是完全人抗体。在一些实施方案中，抗体是双特异性或其他多价抗体。在一些实施方案中，抗体是单链抗体。
在一些实施方案中，TREM2活化抗体包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含本文所述的互补决定区CDRL1、CDRL2和CDRL3，所述重链可变区包含互补决定区CDRH1、CDRH2和CDRH3。
在某些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含至少一个含有来自本文所述的抗TREM2激动剂抗体的CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区，和至少一个含有CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区。
在一些实施方案中，TREM2活化抗体包含本文所述的轻链可变区和重链可变区。轻链和重链可变区或CDR可以来自本文所述的任何抗TREM2抗体或其变体。
序列信息
A.PCT专利申请公开号WO2018/195506A1
在一些实施方案中，TREM2激动剂是如PCT专利申请公开号WO2018/195506A1(该申请全文以引用的方式并入本文)中所述的抗原结合蛋白或抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含CDRL1或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体；CDRL2或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体；CDRL3或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体；CDRH1或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体；CDRH2或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体；和CDRH3或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体，其中所述CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2和CDRH3的氨基酸序列以及示例性轻链和可变区在下面表A1和A2中提供。
表A1：示例性的抗人TREM2抗体轻链可变区氨基酸序列
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表A2：示例性的抗人TREM2抗体重链可变区氨基酸序列
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如上所述，TREM2激动剂抗原结合蛋白可包含表A1(轻链CDR；即CDRL)和表A2(重链CDR，即CDRH)中呈现的CDR中的一个或多个。
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含一个或多个轻链CDR，所述轻链CDR选自(i)选自SEQ ID NO:5至18的CDRL1，(ii)选自SEQ ID NO:19至30的CDRL2，和(iii)选自SEQ ID NO:31至45的CDRL3，和(iv)(i)、(ii)和(iii)的含有一个或多个(例如一个、两个、三个、四个或更多个)氨基酸取代(例如保守氨基酸取代)、不超过五个、四个、三个、两个或一个氨基酸的缺失或***的CDRL。在这些和其他实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含一个或多个重链CDR，所述重链CDR选自(i)选自SEQ ID NO:77至86的CDRH1，(ii)选自SEQ ID NO:87至94的CDRH2，和(iii)选自SEQ ID NO:95至109的CDRH3，和(iv)(i)、(ii)和(iii)的含有一个或多个(例如一个、两个、三个、四个或更多个)氨基酸取代(例如保守氨基酸取代)、不超过五个、四个、三个、两个或一个氨基酸的缺失或***的CDRH。
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白可包含表A1和A2中列出的CDR的1种、2种、3种、4种、5种或6种变体形式，每种形式与表A1和A2中列出的CDR序列具有至少80％、85％、90％或95％的序列同一性。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包括1个、2个、3个、4个、5个或6个在表A1和A2中列出的CDR，每个CDR与这些表中所列出的CDR的差异不超过1个、2个、3个、4个或5个氨基酸。
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有选自SEQ ID NO:5-18的序列或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体的CDRL1；含有选自SEQ ID NO:19-30的序列或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体的CDRL2；含有选自SEQ IDNO:31-45的序列或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体的CDRL3；含有选自SEQID NO:77-86的序列或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体的CDRH1；含有选自SEQ ID NO:87-94的序列或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体的CDRH2；和含有选自SEQ ID NO:95-109的序列或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体的CDRH3。
在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含CDRL1，所述CDRL1含有选自SEQ ID NO:5-18的序列；CDRL2，所述CDRL2含有选自SEQ ID NO:19-30的序列；CDRL3，所述CDRL3含有选自SEQ ID NO:31-45的序列；CDRH1，所述CDRH1含有选自SEQ IDNO:77-86的序列；CDRH2，所述CDRH2含有选自SEQ ID NO:87-94的序列；和CDRH3，所述CDRH3含有选自SEQ ID NO:95-109的序列。
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含CDRL1、CDRL2和CDRL3，其中：
(a)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:5、19和31的序列；
(b)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:6、20和32的序列；
(c)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:6、21和33的序列；
(d)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:6、20和33的序列；
(e)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:7、22和34的序列；
(f)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:8、22和35的序列；
(g)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:9、22和36的序列；
(h)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:10、23和37的序列；
(i)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:11、23和38的序列；
(j)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:12、24和39的序列；
(k)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:13、25和40的序列；
(l)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:14、26和41的序列；
(m)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:15、27和42的序列；
(n)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、28和43的序列；
(o)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:17、29和44的序列；或
(p)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:18、30和45的序列。
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中：
(a)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:77、87和95的序列；
(b)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:78、88和96的序列；
(c)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:78、88和97的序列；
(d)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:78、89和96的序列；
(e)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:77、90和98的序列；
(f)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:79、90和99的序列；
(g)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:80、91和100的序列；
(h)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:81、91和101的序列；
(i)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:82、92和102的序列；
(j)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:81、91和103的序列；
(k)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:81、91和104的序列；
(l)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:83、93和105的序列；
(m)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:84、91和106的序列；
(n)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和107的序列；
(o)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:86、94和108的序列；或
(p)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和109的序列。
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含CDRL1、CDRL2和CDRL3，所述重链可变区包含CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中：
(a)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:5、19和31的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:77、87和95的序列；
(b)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:6、20和32的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:78、88和96的序列；
(c)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:6、21和33的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:78、88和97的序列；
(d)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:6、20和33的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:78、88和97的序列；
(e)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:6、20和33的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:78、89和96的序列；
(f)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:7、22和34的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:77、87和95的序列；
(g)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:8、22和35的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:77、90和98的序列；
(h)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:9、22和36的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:79、90和99的序列；
(i)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:10、23和37的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:80、91和100的序列；
(j)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:10、23和37的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:81、91和101的序列；
(k)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:11、23和38的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:82、92和102的序列；
(l)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:12、24和39的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:81、91和103的序列；
(m)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:13、25和40的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:81、91和104的序列；
(n)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:14、26和41的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:83、93和105的序列；
(o)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:15、27和42的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:84、91和106的序列；
(p)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、28和43的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和107的序列；
(q)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:17、29和44的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:86、94和108的序列；或
(r)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:18、30和45的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和109的序列。
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含CDRL1、CDRL2和CDRL3，所述重链可变区包含CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:10、23和37的序列，CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:80、91和100的序列。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含CDRL1、CDRL2和CDRL3，所述重链可变区包含CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:10、23和37的序列，CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:81、91和101的序列。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含CDRL1、CDRL2和CDRL3，所述重链可变区包含CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQID NO:15、27和42的序列，CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:84、91和106的序列。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含CDRL1、CDRL2和CDRL3，所述重链可变区包含CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、28和43的序列，CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和107的序列。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含CDRL1、CDRL2和CDRL3，所述重链可变区包含CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:17、29和44的序列，CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:86、94和108的序列。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含CDRL1、CDRL2和CDRL3，所述重链可变区包含CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:8、22和35的序列，CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:77、90和98的序列。
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有选自SEQ ID NO:46-63的序列的轻链可变区和含有选自SEQ ID NO:110-126的序列的重链可变区。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有序列SEQ ID NO:46的轻链可变区和含有序列SEQID NO:110的重链可变区。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ IDNO:47的序列的轻链可变区以及含有SEQ ID NO:111的序列的重链可变区。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:48的序列的轻链可变区以及含有SEQID NO:112的序列的重链可变区。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:49的序列的轻链可变区以及含有SEQ ID NO:113的序列的重链可变区。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:50的序列的轻链可变区以及含有SEQ ID NO:114的序列的重链可变区。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:51的序列的轻链可变区以及含有SEQ ID NO:110的序列的重链可变区。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:53的序列的轻链可变区以及含有SEQ ID NO:116的序列的重链可变区。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:54的序列的轻链可变区以及含有SEQ ID NO:117的序列的重链可变区。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:55的序列的轻链可变区以及含有SEQ ID NO:118的序列的重链可变区。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:56的序列的轻链可变区以及含有SEQ ID NO:119的序列的重链可变区。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:57的序列的轻链可变区以及含有SEQ ID NO:120的序列的重链可变区。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:58的序列的轻链可变区以及含有SEQ IDNO:121的序列的重链可变区。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQID NO:59的序列的轻链可变区以及含有SEQ ID NO:122的序列的重链可变区。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:60的序列的轻链可变区以及含有SEQ ID NO:123的序列的重链可变区。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:61的序列的轻链可变区以及含有SEQ ID NO:124的序列的重链可变区。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:62的序列的轻链可变区以及含有SEQ ID NO:125的序列的重链可变区。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:63的序列的轻链可变区以及含有SEQ ID NO:126的序列的重链可变区。在又另一个实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:52的序列的轻链可变区以及含有SEQ ID NO:115的序列的重链可变区。
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白可包含选自如表A1中所示的LV-01、LV-02、LV-03、LV-04、LV-05、LV-06、LV-07、LV-08、LV-09、LV-10、LV-11、LV-12、LV-13、LV-14、LV-15、LV-16、LV-17和LV-18的轻链可变区，和/或选自如表A2中所示的HV-01、HV-02、HV-03、HV-04、HV-05、HV-06、HV-07、HV-08、HV-09、HV-10、HV-11、HV-12、HV-13、HV-14、HV-15、HV-16和HV-17的重链可变区，以及这些轻链和重链可变区的功能片段、衍生物、突变蛋白和变体。
在一些实施方案中，表A1中列出的每个轻链可变区可与表A2中列出的任何重链可变区组合，以形成本发明抗原结合蛋白的抗TREM2结合结构域。此类组合的实例包括但不限于：LV-01(SEQ ID NO:46)和HV-01(SEQ ID NO:110)；LV-02(SEQ ID NO:47)和HV-02(SEQID NO:111)；LV-03(SEQ ID NO:48)和HV-03(SEQ ID NO:112)；LV-04(SEQ ID NO:49)和HV-04(SEQ ID NO:113)；LV-05(SEQ ID NO:50)和HV-05(SEQ ID NO:114)；LV-06(SEQ ID NO:51)和HV-01(SEQ ID NO:110)；LV-07(SEQ ID NO:52)和HV-06(SEQ ID NO:115)；LV-08(SEQID NO:53)和HV-07(SEQ ID NO:116)；LV-09(SEQ ID NO:54)和HV-08(SEQ ID NO:117)；LV-10(SEQ ID NO:55)和HV-09(SEQ ID NO:118)；LV-11(SEQ ID NO:56)和HV-10(SEQ ID NO:119)；LV-12(SEQ ID NO:57)和HV-11(SEQ ID NO:120)；LV-13(SEQ ID NO:58)和HV-12(SEQID NO:121)；LV-14(SEQ ID NO:59)和HV-13(SEQ ID NO:122)；LV-15(SEQ ID NO:60)和HV-14(SEQ ID NO:123)；LV-16(SEQ ID NO:61)和HV-15(SEQ ID NO:124)；LV-17(SEQ ID NO:62)和HV-16(SEQ ID NO:125)；以及LV-18(SEQ ID NO:63)和HV-17(SEQ ID NO:126)。
在某些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有LV-09(SEQ IDNO:54)的序列的轻链可变区和含有HV-08(SEQ ID NO:117)的序列的重链可变区。在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有LV-10(SEQ ID NO:55)的序列的轻链可变区和含有HV-09(SEQ ID NO:118)的序列的重链可变区。在其他实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有LV-15(SEQ ID NO:60)的序列的轻链可变区和含有HV-14(SEQ ID NO:123)的序列的重链可变区。在仍其他实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有LV-16(SEQ ID NO:61)的序列的轻链可变区和含有HV-15(SEQ IDNO:124)的序列的重链可变区。在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有LV-17(SEQ ID NO:62)的序列的轻链可变区和含有HV-16(SEQ ID NO:125)的序列的重链可变区。在某些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有LV-07(SEQID NO:52)的序列的轻链可变区和含有HV-06(SEQ ID NO:115)的序列的重链可变区。
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与表A1中的轻链可变区(即选自LV-01、LV-02、LV-03、LV-04、LV-05、LV-06、LV-07、LV-08、LV-09、LV-10、LV-11、LV-12、LV-13、LV-14、LV-15、LV-16、LV-17或LV-18的VL)的序列仅在1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个或15个氨基酸残基处不同的连续氨基酸序列，其中每个这样的序列差异独立地是一个氨基酸的缺失、***或取代，其中相对于前述可变结构域序列，所述缺失、***和/或取代导致不超过15个氨基酸改变。一些TREM2激动剂抗原结合蛋白中的轻链可变区包含与SEQ ID NO:46-63的氨基酸序列(即表A1中的轻链可变区)具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％或至少99％序列同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与选自SEQ ID NO:46-63的序列至少90％相同的序列。在另一个实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与选自SEQ ID NO:46-63的序列至少95％相同的序列。在又另一个实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含选自SEQ ID NO:46-63的序列。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:54的序列。在其他实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:55的序列。在又其他实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:60的序列。在仍其他实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:61的序列。在某些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:62的序列。在其他实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:52的序列。
在这些和其他实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含与表A2中的重链可变区(即选自HV-01、HV-02、HV-03、HV-04、HV-05、HV-06、HV-07、HV-08、HV-09、HV-10、HV-11、HV-12、HV-13、HV-14、HV-15、HV-16或HV-17的VH)的序列仅在1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个或15个氨基酸残基处不同的连续氨基酸序列，其中每个这样的序列差异独立地是一个氨基酸的缺失、***或取代，其中相对于前述可变结构域序列，所述缺失、***和/或取代导致不超过15个氨基酸改变。一些TREM2激动剂抗原结合蛋白中的重链可变区包含与SEQ ID NO:110-126的氨基酸序列(即表A2中的重链可变区)具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％或至少99％序列同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含与选自SEQ ID NO:110-126的序列至少90％相同的序列。在另一个实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含与选自SEQ ID NO:110-126的序列至少95％相同的序列。在又另一个实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含选自SEQ IDNO:110-126的序列。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:117的序列。在其他实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:118的序列。在又其他实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:123的序列。在仍其他实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:124的序列。在某些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:125的序列。在其他实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:115的序列。
在一些实施方案中，可通过取代轻链或重链可变区中的一个或多个氨基酸来产生抗TREM2抗体的变体，以解决化学负债(chemical liabilities)(例如，天冬氨酸异构化、天冬酰胺脱酰胺化、色氨酸和甲硫氨酸氧化)或校正协方差违逆(covariance violations)(参见例如WO 2012/125495，其据此全文以引用的方式并入)。与亲本抗体相比，此类变体可具有改善的生物物理、表达和/或稳定性特性。在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区和/或重链可变区，所述轻链可变区和/或重链可变区具有一个或多个下面表A3-A4中列出的氨基酸取代。
在一些实施方案中，本文所述的抗TREM2抗体的另外的变体可通过亲和力调节本文所述的任何抗TREM2抗体来产生。“亲和力调节抗体”是在其轻链可变区序列和/或重链可变区序列中包含一个或多个氨基酸取代的抗体，其与不含氨基酸取代的亲本抗体相比增加或降低了抗体对靶抗原的亲和力。抗体亲和力调节方法是本领域技术人员已知的，可包括CDR步移诱变(Yang等人,J.Mol.Biol.,254,392-403,1995)、链改组(Marks等人,Bio/Technology,10,779-783,1992)、使用大肠杆菌突变菌株(Low等人,J.Mol.Biol.,250,350-368,1996)、DNA改组(Patten等人,Curr.Opin.Biotechnol.,1997,8:724-733)、噬菌体展示(Thompson等人,J.Mol.Biol.,1996,256:7-88)、PCR技术(Crameri等人,Nature,1998,391:288-291)和其他诱变策略(Barbas等人,Proc Nat.Acad.Sci.USA 91:3809-3813,1994；Schier等人,Gene 169:147-155,1995；Yelton等人,J.Immunol.155:1994-2004,1995；Jackson等人,J.Immunol.154(7):3310-9,1995；以及Hawkins等人,J.Mol.Biol.,1992,226:889-896)。在Hoogenboom,Trends in Biotechnology,1995,15:62-70以及Vaughan等人,Nature Biotechnology,1998,16535-539中讨论了亲和力调节方法。产生本文所述的抗TREM2抗体的亲和力调节变体的一种具体方法是使用酵母展示Fab诱变文库。
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区是本文所述的任何抗TREM2抗体的轻链可变区的变体。因此，在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白的轻链可变区包含与选自SEQ ID NO:46-63的序列至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少93％相同、至少94％相同或至少95％相同的序列。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白可包含来自下面表A3-A4列出的任何工程化抗TREM2抗体变体的轻链可变区。
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:54在一个或多个氨基酸位置64、79、80、85、94和/或100处具有突变的序列。在一些此类实施方案中，突变是V64G、V64A、Q79E、Q79D、S80P、S80A、F85V、F85L、F85A、F85D、F85I、F85L、F85M、F85T、W94F、W94Y、W94S、W94T、W94A、W94H、W94I、W94Q、P100R、P100Q、P100G或它们的组合。在另一个实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:55在一个或多个氨基酸位置64、79、80、94和/或100处具有突变的序列。此类突变可包括V64G、V64A、Q79E、Q79D、S80P、S80A、W94F、W94Y、W94S、W94T、W94A、W94H、W94I、W94Q、P100R、P100Q、P100G或它们的组合。在某些实施方案中，突变是V64G、V64A、Q79E、S80P、S80A、W94Y、W94S、P100R、P100Q或它们的组合。在另一个实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:60在一个或多个氨基酸位置60、92和/或93处具有突变的序列。此类实施方案中的突变可选自L60S、L60P、L60D、L60A、D92E、D92Q、D92T、D92N、S93A、S93N、S93Q、S93V或它们的组合。在另一个实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:61在一个或多个氨基酸位置56、57、92和/或93处具有突变的序列。在此类实施方案中，突变可以是N56S、N56T、N56Q、N56E、G57A、G57V、D92E、D92Q、D92T、D92N、S93A、S93N、S93Q、S93V或它们的组合。在某些实施方案中，突变是N56S、N56Q、G57A、D92E、D92Q、S93A或它们的组合。在仍另一个实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:62在氨基酸位置36、46、61和/或100处具有突变的序列。此类突变可包括F36Y、S46L、S46R、S46V、S46F、K61R、P100Q、P100G、P100R或它们的组合。在特定实施方案中，突变是F36Y、K61R、P100Q或它们的组合。在另一个实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:52在氨基酸位置91处具有突变的序列，所述突变可选自F91V、F91I、F91T、F91L或F91D。在一个实施方案中，突变是F91V。
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区是来自本文所述的任何抗TREM2抗体的重链可变区的变体。因此，在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白的重链可变区包含与选自SEQ ID NO:110-126的序列至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少93％相同、至少94％相同或至少95％相同的序列。例如，TREM2激动剂抗原结合蛋白可包含来自下面表A3-A4列出的任何工程化抗TREM2抗体变体的重链可变区。在一个实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:117在一个或多个氨基酸位置19、55、56、57、58和/或104处具有突变的序列。在一些此类实施方案中，突变是M19K、M19R、M19T、M19E、M19N、M19Q、D55E、D55Q、D55N、D55T、S56A、S56Q、S56V、D57S、D57E、D57Q、T58A、T58V、W104F、W104Y、W104T、W104S、W104A、W104H、W104I、W104Q或它们的组合。在另一个实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:118在一个或多个氨基酸位置19、55、56、57、58和/或104处具有突变的序列。此类突变可包括M19K、M19R、M19T、M19E、M19N、M19Q、D55E、D55Q、D55N、D55T、S56A、S56Q、S56V、D57S、D57E、D57Q、T58A、T58V、W104F、W104Y、W104T、W104S、W104A、W104H、W104I、W104Q或它们的组合。在某些实施方案中，突变是M19K、D55E、S56A、D57E、T58A、W104Y、W104T或它们的组合。在另一个实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:123在一个或多个氨基酸位置27、55、56、57、58、105和/或106处具有突变的序列。在一些实施方案中，突变选自H27Y、H27D、H27F、H27N、D55E、D55Q、D55N、D55T、S56A、S56Q、S56V、D57S、D57E、D57Q、T58A、T58V、D105E、D105Q、D105T、D105N、D105G、S106A、S106Q、S106V、S106T或它们的组合。在又另一个实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:124在一个或多个氨基酸位置55、56、57、58、105和/或106处具有突变的序列。此类实施方案中的突变可选自D55E、D55Q、D55N、D55T、S56A、S56Q、S56V、D57S、D57E、D57Q、T58A、T58V、D105E、D105Q、D105T、D105N、D105G、S106A、S106Q、S106V、S106T或它们的组合。在某些实施方案中，突变是D55E、D55Q、S56A、D57E、T58A、D105E、D105N、S106A或它们的组合。在仍另一个实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:125在一个或多个氨基酸位置43、76、85、99、100和/或116处具有突变的序列。此类突变可包括L43Q、L43K、L43H、I76T、R85S、R85G、R85N、R85D、D99E、D99Q、D99S、D99T、G100A、G100Y、G100V、T116L、T116M、T116P、T116R或它们的组合。在某些实施方案中，突变是L43Q、R85S、D99E、G100A、G100Y、T116L或它们的组合。在另一个实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:115在氨基酸位置62和/或63处具有突变的序列。在此类实施方案中，突变可选自D62E、D62Q、D62T、D62N、S63A、S63Q、S63V或它们的组合。在一些实施方案中，突变是D62E、D62Q、S63A或它们的组合。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含来自表A3、A4、A4、A5、A6、A7和A8中列出的任何抗TREM2变体抗体的轻链可变区和/或重链可变区。因此，在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白的轻链可变区包含与选自以下的序列至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少93％相同、至少94％相同或至少95％相同的序列：SEQ ID NO:61、153-162和295-300。在这些和其他实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白的重链可变区包含与选自以下的序列至少90％相同、至少91％相同、至少92％相同、至少93％相同、至少94％相同或至少95％相同的序列：SEQ ID NO:124、180-190和307-312。
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:54在一个或多个氨基酸位置64、79、80、85、94和/或100处具有突变的序列。此类突变可包括V64G、V64A、Q79E、Q79D、S80P、S80A、F85V、F85L、F85A、F85D、F85I、F85L、F85M、F85T、W94F、W94Y、W94S、W94T、W94A、W94H、W94I、W94Q、P100R、P100Q、P100G或它们的组合。在这些和其他实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:117在一个或多个氨基酸位置19、55、56、57、58和/或104处具有突变的序列。在某些实施方案中，突变选自M19K、M19R、M19T、M19E、M19N、M19Q、D55E、D55Q、D55N、D55T、S56A、S56Q、S56V、D57S、D57E、D57Q、T58A、T58V、W104F、W104Y、W104T、W104S、W104A、W104H、W104I、W104Q或它们的组合。
在其他实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:55在一个或多个氨基酸位置64、79、80、94和/或100处具有突变的序列。在一些实施方案中，突变选自V64G、V64A、Q79E、Q79D、S80P、S80A、W94F、W94Y、W94S、W94T、W94A、W94H、W94I、W94Q、P100R、P100Q、P100G或它们的组合。在某些实施方案中，突变选自V64G、V64A、Q79E、S80P、S80A、W94Y、W94S、P100R、P100Q或它们的组合。例如，在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:55具有选自V64G、Q79E、S80P、W94Y和P100Q的一个或多个突变的序列。在这些和其他实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:118在一个或多个氨基酸位置19、55、56、57、58和/或104处具有突变的序列。此类突变可包括M19K、M19R、M19T、M19E、M19N、M19Q、D55E、D55Q、D55N、D55T、S56A、S56Q、S56V、D57S、D57E、D57Q、T58A、T58V、W104F、W104Y、W104T、W104S、W104A、W104H、W104I、W104Q或它们的组合。在某些实施方案中，突变选自M19K、D55E、S56A、D57E、T58A、W104Y、W104T或它们的组合。
在某些其他实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:60在一个或多个氨基酸位置60、92和/或93处具有突变的序列。突变可选自L60S、L60P、L60D、L60A、D92E、D92Q、D92T、D92N、S93A、S93N、S93Q、S93V或它们的组合。在这些和其他实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:123在一个或多个氨基酸位置27、55、56、57、58、105和/或106处具有突变的序列。在一些实施方案中，突变选自H27Y、H27D、H27F、H27N、D55E、D55Q、D55N、D55T、S56A、S56Q、S56V、D57S、D57E、D57Q、T58A、T58V、D105E、D105Q、D105T、D105N、D105G、S106A、S106Q、S106V、S106T或它们的组合。
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:61在一个或多个氨基酸位置56、57、92和/或93处具有突变的序列。在某些实施方案中，突变选自N56S、N56T、N56Q、N56E、G57A、G57V、D92E、D92Q、D92T、D92N、S93A、S93N、S93Q、S93V或它们的组合。在一些实施方案中，突变选自N56S、N56Q、G57A、D92E、D92Q、S93A或它们的组合。在特定实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:61具有选自N56S、D92E和S93A的一个或多个突变的序列。在这些和其他实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:124在一个或多个氨基酸位置55、56、57、58、105和/或106处具有突变的序列。突变可选自D55E、D55Q、D55N、D55T、S56A、S56Q、S56V、D57S、D57E、D57Q、T58A、T58V、D105E、D105Q、D105T、D105N、D105G、S106A、S106Q、S106V、S106T或它们的组合。在某些实施方案中，突变是D55E、D55Q、S56A、D57E、T58A、D105E、D105N、S106A或它们的组合。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:124具有选自D55E、S56A、D57E、D105E和S106A的一个或多个突变的序列。
在其他实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:62在氨基酸位置36、46、61和/或100处具有突变的序列。在特定实施方案中，突变选自F36Y、S46L、S46R、S46V、S46F、K61R、P100Q、P100G、P100R或它们的组合。在一些实施方案中，突变是F36Y、K61R、P100Q或它们的组合。在一些实施方案中，突变是S46L、P100Q或它们的组合。在这些和其他实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:125在一个或多个氨基酸位置43、76、85、99、100和/或116处具有突变的序列。突变可选自L43Q、L43K、L43H、I76T、R85S、R85G、R85N、R85D、D99E、D99Q、D99S、D99T、G100A、G100Y、G100V、T116L、T116M、T116P、T116R或它们的组合。在某些实施方案中，突变是L43Q、I76T、R85S、D99E、G100A、G100Y、T116L或它们的组合。
在仍其他实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:52在氨基酸位置91处具有突变的序列。突变可选自F91V、F91I、F91T、F91L或F91D。在一个实施方案中，突变是F91V。在这些和其他实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:115在氨基酸位置62和/或63处具有突变的序列。在特定实施方案中，突变选自D62E、D62Q、D62T、D62N、S63A、S63Q、S63V或它们的组合。在一些实施方案中，突变选自D62E、D62Q、S63A或它们的组合。
表A3：10E3抗体的工程化变体
表A4：13E7抗体的工程化变体
表A5：4C5抗体的工程化变体
表A6：6E7抗体的工程化变体
表A7：5E3抗体的工程化变体
表A8：24G6抗体的工程化变体
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含本文所述抗TREM2抗体的变体的一个或多个CDR。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白可包含下面表A10、A11、A12、A13和A14中列出的抗TREM2抗体变体的一个或多个CDR。
在某些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含来自6E7抗体的亲和力调节变体的轻链可变区和/或重链可变区。例如，在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含具有表A9中列出的一个或多个氨基酸取代的轻链可变区和/或重链可变区。
表A9：6E7抗体亲和力调节变体
/>
/>
标记有*的结合信号值是用110nM Ab浓度获得的，然而所述列中的其余值是用10nM Ab浓度获得的。
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:61在一个或多个氨基酸位置24、31、50、52、54、56、89、92、93、94和/或96处具有突变的序列。在某些实施方案中，突变选自R24A、S31R、A50S、A50G、S52G、L54R、N56K、N56R、N56L、N56T、Q89G、D92V、S93R、F94Y、F94L、R96H、R96L或它们的组合。在这些和其他实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:124在一个或多个氨基酸位置27、28、30、32、50、54、58、60、61、63、66、99、101、103、104和/或110处具有突变的序列。在一些实施方案中，突变选自Y27S、S28G、S28H、T30N、T30G、T30E、T30A、Y32E、I50T、G54S、T58V、Y60L、S61A、S63G、S63E、G66D、Q99G、Q99S、Q99M、T101G、Y103R、Y104G、F110S或它们的组合。亲和力提高的示例性6E7抗体变体的轻链和重链可变区以及相关CDR的氨基酸序列分别如下面表A7和A8中所示。亲和力降低的示例性6E7抗体变体的轻链和重链可变区以及相关CDR的氨基酸序列分别如下面表A10和A11中所示。列出6E7抗体的对应序列用于比较。
表A10：用于亲和力提高的TREM2抗体的轻链可变区氨基酸序列
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表A11：用于亲和力提高的TREM2抗体的重链可变区氨基酸序列
/>
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在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白可包含一个或多个来自表A10(轻链CDR；即CDRL)和表A11(重链CDR，即CDRH)中呈现的亲和力提高的变体的CDR。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含源自亲和力提高的变体的共有CDR序列。例如，在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含CDRL2共有序列X1ASSX2QX3(SEQID NO:139)，其中X1是A或G；X2是L或R；并且X3是N、K、R、L或T。在另一个实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含CDRL3共有序列X1QADX2X3PX4T(SEQ ID NO:140)，其中X1是Q或G；X2是S或R；X3是F、L或Y；并且X4是R或H。在又另一个实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含CDRH2共有序列X1IYPGDSDX2RX3X4PX5FQX6(SEQ ID NO:141)，其中X1是I或T；X2是T或V；X3是Y或L；X4是S或A；X5是S、G或E；并且X6是G或D。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含CDRH3共有序列X1RTFYYDSSDYX2DY(SEQ ID NO:142)，其中X1是Q、G、S或M；并且X2是F或S。
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含互补决定区CDRL1、CDRL2和CDRL3，所述重链可变区包含互补决定区CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中CDRL1包含SEQ ID NO:16的序列，CDRL2包含SEQ ID NO:139的共有序列，CDRL3包含SEQ ID NO:140的共有序列，CDRH1包含SEQ ID NO:85的序列，CDRH2包含SEQ ID NO:141的共有序列，并且CDRH3包含SEQ ID NO:142的共有序列。
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:16的序列的CDRL1；含有选自SEQ ID NO:26和143-147的序列的CDRL2；含有选自SEQ ID NO:43和148-152的序列的CDRL3；含有SEQ ID NO:85的序列的CDRH1；含有选自SEQ ID NO:91和170-175的序列的CDRH2；和含有选自SEQ ID NO:176-179的序列的CDRH3。
在特定实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含CDRL1、CDRL2和CDRL3，其中：
(a)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、143和148的序列；
(b)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、144和149的序列；
(c)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、145和43的序列；
(d)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、146和148的序列；
(e)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、26和150的序列；
(f)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、143和151的序列；
(g)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、145和148的序列；
(h)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、145和152的序列；
(i)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、144和43的序列；或
(j)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、147和43的序列。
在相关实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中：(a)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、170和176的序列；
(b)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、171和177的序列；
(c)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、172和177的序列；
(d)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、171和178的序列；
(e)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、171和179的序列；
(f)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、173和177的序列；
(g)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和176的序列；
(h)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、174和176的序列；
(i)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、175和178的序列；或
(j)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和178的序列。
在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含CDRL1、CDRL2和CDRL3，所述重链可变区包含CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中：
(a)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、143和148的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、170和176的序列；
(b)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、144和149的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、171和177的序列；
(c)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、145和43的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、172和177的序列；
(d)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、146和148的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、171和178的序列；
(e)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、26和150的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、171和179的序列；
(f)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、143和151的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、173和177的序列；
(g)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、145和148的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和176的序列；
(h)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、145和152的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、171和178的序列；
(i)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、143和151的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、174和176的序列；
(j)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、144和43的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、175和178的序列；或
(k)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、147和43的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和178的序列。
在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白可包含选自如表A10所示的LV-101、LV-102、LV-103、LV-104、LV-105、LV-106、LV-107、LV-108、LV-109和LV-110的轻链可变区，和/或选自如表A11所示的HV-101、HV-102、HV-103、HV-104、HV-105、HV-106、HV-107、HV-108、HV-109、HV-110和HV-111的重链可变区，或者与表A10和A11中的任何序列至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同或至少95％相同的序列。例如，在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含(i)与选自SEQ ID NO:153-162的序列至少90％相同的序列，(ii)与选自SEQ ID NO:153-162的序列至少95％相同的序列，或(iii)选自SEQ ID NO:153-162的序列。在相关实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含(i)与选自SEQ ID NO:180-190的序列至少90％相同的序列，(ii)与选自SEQ ID NO:180-190的序列至少95％相同的序列，或(iii)选自SEQ ID NO:180-190的序列。
表A10中列出的每个轻链可变区可与表A11中列出的任何重链可变区组合，以形成本发明抗原结合蛋白的抗TREM2结合结构域。此类组合的实例包括但不限于：LV-101(SEQID NO:153)和HV-101(SEQ ID NO:180)；LV-102(SEQ ID NO:154)和HV-102(SEQ ID NO:181)；LV-103(SEQ ID NO:155)和HV-103(SEQ ID NO:182)；LV-104(SEQ ID NO:156)和HV-104(SEQ ID NO:183)；LV-105(SEQ ID NO:157)和HV-105(SEQ ID NO:184)；LV-106(SEQ IDNO:158)和HV-106(SEQ ID NO:185)；LV-107(SEQ ID NO:159)和HV-107(SEQ ID NO:186)；LV-108(SEQ ID NO:160)和HV-108(SEQ ID NO:187)；LV-106(SEQ ID NO:158)和HV-109(SEQ ID NO:188)；LV-109(SEQ ID NO:161)和HV-110(SEQ ID NO:189)；和LV-110(SEQ IDNO:162)和HV-111(SEQ ID NO:190)。
表A12：用于亲和力降低的TREM2抗体的轻链可变区氨基酸序列
表A13：用于亲和力降低的TREM2抗体的重链可变区氨基酸序列
/>
/>
在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白可包含一个或多个来自表A12(轻链CDR；即CDRL)和表A13(重链CDR，即CDRH)中呈现的亲和力降低的变体的CDR。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含源自亲和力降低的变体的共有CDR序列。例如，在一个实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含CDRL1共有序列X1ASQGISX2WLA(SEQ ID NO:284)，其中X1是R或A；并且X2是S或R。在另一个实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含CDRL2共有序列X1AX2SLQN(SEQ ID NO:285)，其中X1是A或S；并且X2是S或G。在另一个实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含CDRL3共有序列QQAX1SFPX2T(SEQ ID NO:286)，其中X1是D或V；并且X2是R或L。在另一个实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含CDRH1共有序列SX1WIA(SEQ ID NO:287)，其中X1是Y或E。在又另一个实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含CDRH2共有序列IIYPX1DSDTRYSPSFQG(SEQ ID NO:288)，其中X1是G或S。在仍另一个实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含CDRH3共有序列QRX1FX2X3DSSDYFDY(SEQ ID NO:289)，其中X1是T或G；X2是Y或R；并且X3是Y或G。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含互补决定区CDRL1、CDRL2和CDRL3，所述重链可变区包含互补性决定区CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中CDRL1包含SEQ ID NO:284的序列，CDRL2包含SEQ ID NO:285的共有序列，CDRL3包含SEQ ID NO:286的共有序列，CDRH1包含SEQ ID NO:287的序列，CDRH2包含SEQ ID NO:288的共有序列，并且CDRH3包含SEQ ID NO:289的共有序列。
在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有选自SEQ IDNO:16、290和291的序列的CDRL1；含有选自SEQ ID NO:28、292和293的序列的CDRL2；含有选自SEQ ID NO:43、294和271的序列的CDRL3；含有SEQ ID NO:85或SEQ ID NO:302的序列的CDRH1；含有SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:303的序列的CDRH2；和含有选自SEQ ID NO:107和304-306的序列的CDRH3。
在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含CDRL1、CDRL2和CDRL3，其中：(a)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、28和43的序列；
(b)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、292和43的序列；
(c)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、28和294的序列；
(d)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:290、28和43的序列；
(e)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、293和43的序列；
(f)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、28和271的序列；或
(g)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:291、28和43的序列。
在相关实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中：
(a)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和304的序列；
(b)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和107的序列；
(c)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和305的序列；
(d)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、303和107的序列；
(e)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和306的序列；或
(f)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:302、91和107的序列。
在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含CDRL1、CDRL2和CDRL3，所述重链可变区包含CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中：
(a)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、28和43的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和304的序列；
(b)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、292和43的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和107的序列；
(c)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、28和294的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和107的序列；
(d)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、28和43的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和107的序列；
(e)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、28和43的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和305的序列；
(f)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、28和43的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、303和107的序列；
(g)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:290、28和43的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和107的序列；
(h)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、28和43的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和306的序列；
(i)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、293和43的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和107的序列；
(j)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、28和271的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、91和107的序列；或
(k)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:291、28和43的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:302、91和107的序列。
在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白可包含选自如表A12所示的LV-16、LV-201、LV-202、LV-203、LV-204、LV-205和LV-206的轻链可变区，和/或选自如表A13所示的HV-15、HV-201、HV-202、HV-203、HV-204、HV-205和HV-206的重链可变区，或者与表A12和A13中的任何序列至少80％相同、至少85％相同、至少90％相同或至少95％相同的序列。例如，在某些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含(i)与选自SEQ ID NO:61和295-300的序列至少90％相同的序列，(ii)与选自SEQ IDNO:61和295-300的序列至少95％相同的序列，或(iii)选自SEQ ID NO:61和295-300的序列。在相关实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含(i)与选自SEQ ID NO:124和307-312的序列至少90％相同的序列，(ii)与选自SEQ ID NO:124和307-312的序列至少95％相同的序列，或(iii)选自SEQ ID NO:124和307-312的序列。
在一些实施方案中，表A12中列出的每个轻链可变区可与表A13中列出的任何重链可变区组合，以形成本发明抗原结合蛋白的抗TREM2结合结构域。此类组合的实例包括但不限于：LV-16(SEQ ID NO:61)和HV-201(SEQ ID NO:307)；LV-201(SEQ ID NO:295)和HV-15(SEQ ID NO:124)；LV-202(SEQ ID NO:296)和HV-15(SEQ ID NO:124)；LV-16(SEQ ID NO:61)和HV-202(SEQ ID NO:308)；LV-16(SEQ ID NO:61)和HV-203(SEQ ID NO:309)；LV-16(SEQ ID NO:61)和HV-204(SEQ ID NO:310)；LV-203(SEQ ID NO:297)和HV-15(SEQ ID NO:124)；LV-16(SEQ ID NO:61)和HV-205(SEQ ID NO:311)；LV-204(SEQ ID NO:298)和HV-15(SEQ ID NO:124)；LV-205(SEQ ID NO:299)和HV-15(SEQ ID NO:124)；和LV-206(SEQ IDNO:300)和HV-206(SEQ ID NO:312)。
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含表A14中列出的抗TREM2抗体变体的一个或多个CDR。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含表A14中列出的抗TREM2抗体变体的轻链可变区和重链可变区。
表A14：工程化抗体的示例性可变区氨基酸序列
/>
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含CDRL1、CDRL2和CDRL3，其中：
(a)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、369和370的序列；
(b)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:10、23和372的序列；或
(c)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:6、21和33的序列；(d)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:6、20和33的序列。
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中：
(a)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:77、368和98的序列；
(b)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、371和107的序列；
(c)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:81、373和374的序列；或
(d)CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:86、94和375的序列。
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含CDRL1、CDRL2和CDRL3，所述重链可变区包含CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中：
(a)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:8、22和35的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:77、368和98的序列；
(b)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:16、369和370的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:85、371和107的序列；
(c)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:10、23和372的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:81、373和374的序列；或
(d)CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:17、29和44的序列，并且CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:86、94和375的序列。
因此，在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含CDRL1、CDRL2和CDRL3，所述重链可变区包含CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中所述CDRL1、CDRL2和CDRL3分别具有SEQ ID NO:10、23和372的序列，并且所述CDRH1、CDRH2和CDRH3分别具有SEQ ID NO:81、373和374的序列。
因此，在一些实施方案中，本发明提供了一种治疗人类患者的ALSP的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的TREM2激动剂抗原结合蛋白，其包含分别具有SEQ ID NO:10、23和372的序列的CDRL1、CDRL2和CDRL3以及分别具有SEQ ID NO:81、373和374的序列的CDRH1、CDRH2和CDRH3。在某些实施方案中，抗体是人的。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含
(a)含有SEQ ID NO:326的氨基酸序列的轻链可变区和含有SEQ ID NO:327的氨基酸序列的重链可变区；
(b)含有SEQ ID NO:328的氨基酸序列的轻链可变区和含有SEQ ID NO:329的氨基酸序列的重链可变区；
(c)含有SEQ ID NO:330的氨基酸序列的轻链可变区和含有SEQ ID NO:331的氨基酸序列的重链可变区；或
(d)含有SEQ ID NO:332的氨基酸序列的轻链可变区和含有SEQ ID NO:333的氨基酸序列的重链可变区。
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:330的氨基酸序列的轻链可变区和含有SEQ ID NO:331的氨基酸序列的重链可变区。
因此，在一些实施方案中，本发明提供了一种治疗人类患者的ALSP的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的TREM2激动剂抗原结合蛋白，所述TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:330的氨基酸序列的轻链可变区和含有SEQ ID NO:331的氨基酸序列的重链可变区。在某些实施方案中，抗体是人的。
在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含由SEQ ID NO:326、328、330或332的氨基酸序列组成或基本上由其组成的轻链可变区。在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含由SEQ ID NO:327、329、331或333的氨基酸序列组成或基本上由其组成的重链可变区。在具体实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区和重链可变区，其中所述轻链可变区由SEQ ID NO:326的氨基酸序列组成或基本上由其组成，并且所述重链可变区由SEQ ID NO:327的氨基酸序列组成或基本上由其组成。在具体实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区和重链可变区，其中所述轻链可变区由SEQ ID NO:328的氨基酸序列组成或基本上由其组成，并且所述重链可变区由SEQ ID NO:329的氨基酸序列组成或基本上由其组成。在具体实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区和重链可变区，其中所述轻链可变区由SEQ ID NO:330的氨基酸序列组成或基本上由其组成，并且所述重链可变区由SEQ IDNO:331的氨基酸序列组成或基本上由其组成。在具体实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区和重链可变区，其中所述轻链可变区由SEQ ID NO:332的氨基酸序列组成或基本上由其组成，并且所述重链可变区由SEQ ID NO:333的氨基酸序列组成或基本上由其组成。
在一些实施方案中，表A1、A10、A12和A14中公开的每个轻链可变区和表A2、A11、A13和3E中公开的每个重链可变区可分别连接到轻链恒定区(表EN1)和重链恒定区(EN2)以形成完整的抗体轻链和重链，如下文进一步讨论的。此外，每个产生的重链和轻链序列可以组合形成完整的抗体结构。应当理解，本文所提供的重链和轻链可变区也可以连接到具有与本文列出的示例性序列不同的序列的其他恒定结构域。
在一些实施方案中，表A15中公开了具有轻链可变区和重链可变区的示例性TREM2激动剂抗体，所述轻链可变区具有轻链恒定区，所述重链可变区具有重链恒定区。
表A15：示例性抗体的轻链和重链氨基酸序列
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/>
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在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:334的序列的轻链和含有SEQ ID NO:335的序列的重链。在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:334的序列的轻链和含有SEQ ID NO:336的序列的重链。在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:337的序列的轻链和含有SEQ ID NO:338的序列的重链。在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:339的序列的轻链和含有SEQ ID NO:340的序列的重链。在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:341的序列的轻链和含有SEQ ID NO:342的序列的重链。在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:2768的序列的轻链和含有SEQ ID NO:2769的序列的重链。在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:2768的序列的轻链和含有SEQ ID NO:2770的序列的重链。在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:2771的序列的轻链和含有SEQ ID NO:2772的序列的重链。在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:2773的序列的轻链和含有SEQ ID NO:2774的序列的重链。在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:2775的序列的轻链和含有SEQ ID NO:2776的序列的重链。
在一些实施方案中，本发明提供了一种治疗人类患者的ALSP的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的TREM2激动剂抗原结合蛋白，所述TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:334的序列的轻链和含有SEQ ID NO:335的序列的重链。在一些实施方案中，本发明提供了一种治疗人类患者的ALSP的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的TREM2激动剂抗原结合蛋白，所述TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:334的序列的轻链和含有SEQ ID NO:336的序列的重链。在一些实施方案中，本发明提供了一种治疗人类患者的ALSP的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的TREM2激动剂抗原结合蛋白，所述TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:337的序列的轻链和含有SEQ IDNO:338的序列的重链。在一些实施方案中，本发明提供了一种治疗人类患者的ALSP的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的TREM2激动剂抗原结合蛋白，所述TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:339的序列的轻链和含有SEQ ID NO:340的序列的重链。在一些实施方案中，本发明提供了一种治疗人类患者的ALSP的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的TREM2激动剂抗原结合蛋白，所述TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ IDNO:341的序列的轻链和含有SEQ ID NO:342的序列的重链。在一些实施方案中，本发明提供了一种治疗人类患者的ALSP的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的TREM2激动剂抗原结合蛋白，所述TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:2768的序列的轻链和含有SEQ ID NO:2769的序列的重链。在一些实施方案中，本发明提供了一种治疗人类患者的ALSP的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的TREM2激动剂抗原结合蛋白，所述TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:2768的序列的轻链和含有SEQ ID NO:2770的序列的重链。在一些实施方案中，本发明提供了一种治疗人类患者的ALSP的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的TREM2激动剂抗原结合蛋白，所述TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:2771的序列的轻链和含有SEQ ID NO:2772的序列的重链。因此，在一些实施方案中，本发明提供了一种治疗人类患者的ALSP的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的TREM2激动剂抗原结合蛋白，所述TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQID NO:2773的序列的轻链和含有SEQ ID NO:2774的序列的重链。在一些实施方案中，本发明提供了一种治疗人类患者的ALSP的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的TREM2激动剂抗原结合蛋白，所述TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:2775的序列的轻链和含有SEQ ID NO:2776的序列的重链。在一些实施方案中，本发明提供了一种治疗人类患者的ALSP的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的TREM2激动剂抗原结合蛋白，所述TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:2777的序列的轻链和含有SEQ ID NO:2778的序列的重链。
在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含由SEQ ID NO:334、337、339或341的氨基酸序列组成或基本上由其组成的轻链。在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含由SEQ ID NO:2768、2771、2773或2775的氨基酸序列组成或基本上由其组成的轻链。在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含由SEQ ID NO:335、336、338、340或342的氨基酸序列组成或基本上由其组成的重链。在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含由SEQ ID NO:2769、2770、2772、2774或2776的氨基酸序列组成或基本上由其组成的重链。在具体实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链和重链，其中：
(a)所述轻链由SEQ ID NO:334的氨基酸序列组成或基本上由其组成，并且所述重链由SEQ ID NO:335的氨基酸序列组成或基本上由其组成；
(b)所述轻链由SEQ ID NO:334的氨基酸序列组成或基本上由其组成，并且所述重链由SEQ ID NO:336的氨基酸序列组成或基本上由其组成；
(c)所述轻链由SEQ ID NO:337的氨基酸序列组成或基本上由其组成，并且所述重链由SEQ ID NO:338的氨基酸序列组成或基本上由其组成；
(d)所述轻链由SEQ ID NO:339的氨基酸序列组成或基本上由其组成，并且所述重链由SEQ ID NO:340的氨基酸序列组成或基本上由其组成；或
(e)所述轻链由SEQ ID NO:341的氨基酸序列组成或基本上由其组成，并且所述重链由SEQ ID NO:342的氨基酸序列组成或基本上由其组成。
在具体实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链和重链，其中：
(a)所述轻链由SEQ ID NO:2768的氨基酸序列组成或基本上由其组成，并且所述重链由SEQ ID NO:2769的氨基酸序列组成或基本上由其组成；
(b)所述轻链由SEQ ID NO:2768的氨基酸序列组成或基本上由其组成，并且所述重链由SEQ ID NO:2770的氨基酸序列组成或基本上由其组成；
(c)所述轻链由SEQ ID NO:2771的氨基酸序列组成或基本上由其组成，并且所述重链由SEQ ID NO:2772的氨基酸序列组成或基本上由其组成；
(d)所述轻链由SEQ ID NO:2773的氨基酸序列组成或基本上由其组成，并且所述重链由SEQ ID NO:2774的氨基酸序列组成或基本上由其组成；
(e)所述轻链由SEQ ID NO:2775的氨基酸序列组成或基本上由其组成，并且所述重链由SEQ ID NO:2776的氨基酸序列组成或基本上由其组成；或
(f)所述轻链由SEQ ID NO:2777的氨基酸序列组成或基本上由其组成，并且所述重链由SEQ ID NO:2778的氨基酸序列组成或基本上由其组成。
除非另有说明，提及相关讨论中的特定序列，免疫球蛋白重链或轻链中氨基酸残基的编号是根据Kabat-EU编号，如以下文献所述：Kabat等人,Sequences of Proteins ofImmunological Interest,第5版,USDepartment of Health and Human Services,NIH出版号91-3242,第662、680、689页(1991)，以及Edelman等人,Proc.Natl.Acad.USA,第63卷:78-85(1969)。当提及可变区内的氨基酸的位置时，通常使用Kabat编号方案，然而当提及免疫球蛋白恒定区内的氨基酸的位置时，通常使用EU编号方案。
在一些实施方案中，TREM2抗原结合蛋白包含抗体，该抗体与包含表A1、A10、A12和A14中公开的CDRL1、CDRL2、CDRL3或轻链可变区以及表A2、A11、A13和A14中公开的重链可变区的抗体竞争。在一些实施方案中，用于检测竞争性结合的合适测定法采用与***(Pall ForteBio)一起使用的动力学传感器，其使用生物层干扰量度法方法测量结合相互作用。一组抗体(即抗体10E3、13E7、24F4、4C5、4G10、32E3和6E7)相互竞争结合人TREM2，表明它们在人TREM2上共享相同或相似的表位。抗体16B8、26A10、26C10、26F2、33B12和5E3相互竞争TREM2结合，但不与第一组中的抗体或抗体24A10、24G6或25F12竞争，表明该第二组的抗体结合人TREM2上的不同表位。抗体24A10和24G6共享在人TREM2上相似的表位，因为这两种抗体相互竞争人TREM2结合，但不与任何其他抗体竞争。抗体25F12不与任何其他测试的抗体竞争人TREM2结合，表明该抗体结合又另一个表位。
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白与参考抗体竞争结合人TREM2，其中所述参考抗体包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区含有选自SEQ ID NO:46-63的序列，所述重链可变区含有选自SEQ ID NO:110-126的序列。在其他实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白与参考抗体竞争结合人TREM2，其中所述参考抗体包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区含有选自SEQ ID NO:153-162的序列，所述重链可变区含有选自SEQ ID NO:180-190的序列。在仍其他实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白与参考抗体竞争结合人TREM2，其中所述参考抗体包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区含有选自SEQ ID NO:61和295-300的序列，所述重链可变区含有选自SEQID NO:124和307-312的序列。在某些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白与一种或多种本文所述的抗TREM2抗体(包括12G10、26A10、26C10、26F2、33B12、24C12、24G6、24A10、10E3、13E7、14C12、25F12、32E3、24F4、16B8、4C5、6E7、5E3、4G10、V3、V9、V10、V23、V24、V27、V30、V33、V40、V44、V48、V49、V52、V57、V60、V68、V70、V73、V76、V83、V84和V90)竞争结合人TREM2。
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白与参考抗体竞争结合人TREM2，其中所述参考抗体包含含有SEQ ID NO:61的序列的轻链可变区和含有SEQ ID NO:124的序列的重链可变区。在此类实施方案中，与该参考抗体竞争结合人TREM2的抗原结合蛋白将结合与抗体6E7或任何其他抗体10E3、13E7、24F4、4C5、4G10和32E3相同或相似的表位。
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白与参考抗体竞争结合人TREM2，其中所述参考抗体包含含有SEQ ID NO:62的序列的轻链可变区和含有SEQ ID NO:125的序列的重链可变区。在此类实施方案中，与该参考抗体竞争结合人TREM2的抗原结合蛋白将结合与抗体5E3或任何其他抗体16B8、26A10、26C10、26F2和33B12相同或相似的表位。
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白与参考抗体竞争结合人TREM2，其中所述参考抗体包含含有SEQ ID NO:52的序列的轻链可变区和含有SEQ ID NO:115的序列的重链可变区。在此类实施方案中，与该参考抗体竞争结合人TREM2的抗原结合蛋白将结合与抗体24G6或抗体24A10相同或相似的表位。
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白与参考抗体竞争结合人TREM2，其中所述参考抗体包含含有SEQ ID NO:56的序列的轻链可变区和含有SEQ ID NO:119的序列的重链可变区。在此类实施方案中，与该参考抗体竞争结合人TREM2的抗原结合蛋白将结合与抗体25F12相同或相似的表位。
在一些实施方案中，编码本发明抗原结合蛋白的抗TREM2结合结构域的分离的核酸可用于合成抗原结合蛋白或用于产生变体。在一些实施方案中，多核苷酸可包含与表A15中列出的任何核苷酸序列至少80％相同、至少90％相同、至少95％相同或至少98％相同的核苷酸序列。
表A16：示例性抗TREM2抗体可变区核酸序列
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在一些实施方案中，编码抗TREM2抗体轻链可变区的分离的核酸包含与选自SEQID NO:208-236和313-318的序列至少80％相同、至少90％相同、至少95％相同或至少98％相同的序列。在某些实施方案中，编码抗TREM2抗体轻链可变区的分离的核酸包含选自SEQID NO:208-236和313-318的序列。在相关实施方案中，编码抗TREM2抗体重链可变区的分离的核酸包含与选自SEQ ID NO:237-264和319-325的序列至少80％相同、至少90％相同、至少95％相同或至少98％相同的序列。在其他相关实施方案中，编码抗TREM2抗体重链可变区的分离的核酸包含选自SEQ ID NO:237-264和319-325的序列。
在一些实施方案中，多核苷酸编码全长轻链和全长重链。在表A15中提供了示例性的多核苷酸序列。
B.美国专利号8,231,878
在一些实施方案中，TREM2激动剂是抗体或其抗原结合片段，如美国专利号8,231,878中所述，所述专利全文以引用的方式并入本文。在一些实施方案中，TREM2抗体是单克隆抗体29E3或其片段、同源物、衍生物或变体。
在一些实施方案中，TREM2抗原结合蛋白包含单克隆抗体29E3的轻链可变区的CDRL1、CDRL2和CDRL3以及重链可变区的CDRH1、CDRH2和CDRH3。单克隆抗体29E3在Bouchon等人,J Exp Med.,2001,194(8):1111-1122中有进一步的描述。
在一些实施方案中，TREM2抗原结合蛋白包含单克隆抗体29E3的轻链可变区和重链可变区。
在一些实施方案中，TREM2抗原结合蛋白是嵌合抗体或其工程化变体，所述嵌合抗体含有单克隆抗体29E3的轻链可变区和重链可变区以及人重链恒定区，诸如人Fc区。
在一些实施方案中，TREM2抗原结合蛋白(例如TREM2抗体)与单克隆抗体29E3竞争结合TREM2。
C.美国专利申请公开号US2019/0010230A1
在一些实施方案中，TREM2激动剂是抗体或其抗原结合片段，如美国专利申请公开号US2019/0010230A1(“'230申请”)中所述，所述申请全文以引用的方式并入本文。
在一些实施方案中，TREM2结合剂包含抗体，所述抗体包含'230申请说明书中公开的轻链可变结构域和重链可变结构域，所述轻链可变结构域包含CDRL1、CDRL2和CDRL3(也分别称为HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3)，所述重链可变结构域包含CDRH1、CDRH2和CDRH3(也分别称为HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3)。在一些实施方案中，TREM2结合剂包含抗体，所述抗体包含'230申请说明书中公开的轻链可变结构域和重链可变结构域。
在一些实施方案中，抗体包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含单克隆抗体Ab52的HVR-H1、HVR-H2和/或HVR-H3；和/或其中所述轻链可变结构域包含单克隆抗体Ab52的HVR-L1、HVR-L2和/或HVR-L3。在一些实施方案中，HVR-H1包含SEQ ID NO:772的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-H2包含SEQ ID NO:773的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-H3包含SEQ ID NO:774的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-L1包含SEQ ID NO:775的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-L2包含SEQ ID NO:776的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-L3包含SEQ ID NO:777的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含：(a)含有SEQ ID NO:772的氨基酸序列或与SEQ ID NO:772的氨基酸序列具有至少约95％同源性的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:773的氨基酸序列或与SEQ ID NO:773的氨基酸序列具有至少约95％同源性的氨基酸序列的HVR-H2；和；和/或(c)含有SEQ ID NO:774的氨基酸序列或与SEQ ID NO:774的氨基酸序列具有至少约95％同源性的氨基酸序列的HVR-H3；和/或其中所述轻链可变结构域包含：(a)含有SEQ ID NO:775的氨基酸序列或与SEQ ID NO:775的氨基酸序列具有至少约95％同源性的HVR-L1；(b)含有SEQ ID NO:776的氨基酸序列或与SEQ ID NO:776的氨基酸序列具有至少约95％同源性的氨基酸序列的HVR-L2；和/或(c)含有SEQ ID NO:777的氨基酸序列或与SEQ ID NO:777的氨基酸序列具有至少约95％同源性的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗体包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含单克隆抗体Ab21的HVR-H1、HVR-H2和/或HVR-H3；和/或其中所述轻链可变结构域包含单克隆抗体Ab21的HVR-L1、HVR-L2和/或HVR-L3。在一些实施方案中，HVR-H1包含SEQ ID NO:778的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-H2包含SEQ ID NO:779的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-H3包含SEQ ID NO:780的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-L1包含SEQ ID NO:781的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-L2包含SEQ ID NO:782的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-L3包含SEQ ID NO:783的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含：(a)含有SEQ ID NO:778的氨基酸序列或与SEQ ID NO:778的氨基酸序列具有至少约95％同源性的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:779的氨基酸序列或与SEQ ID NO:779的氨基酸序列具有至少约95％同源性的氨基酸序列的HVR-H2；和/或(c)含有SEQ ID NO:780的氨基酸序列或与SEQ ID NO:780的氨基酸序列具有至少约95％同源性的氨基酸序列的HVR-H3；和/或其中所述轻链可变结构域包含：(a)含有SEQ ID NO:781的氨基酸序列或与SEQ ID NO:781的氨基酸序列具有至少约95％同源性的HVR-L1；(b)含有SEQ ID NO:782的氨基酸序列或与SEQ ID NO:782的氨基酸序列具有至少约95％同源性的氨基酸序列的HVR-L2；和/或(c)含有SEQ ID NO:783的氨基酸序列或与SEQ ID NO:783的氨基酸序列具有至少约95％同源性的氨基酸序列的HVR-L3。
在一些实施方案中，所述重链可变结构域包含单克隆抗体Ab52的HVR-H1、HVR-H2和/或HVR-H3；和/或其中所述轻链可变结构域包含单克隆抗体Ab52的HVR-L1、HVR-L2和/或HVR-L3。在一些实施方案中，HVR-H1包含SEQ ID NO:772的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-H2包含SEQ ID NO:773的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-H3包含SEQ ID NO:774的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-L1包含SEQ ID NO:775的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-L2包含SEQ ID NO:776的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-L3包含SEQ IDNO:777的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含含有SEQ ID NO:772的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:773的氨基酸序列的HVR-H2和含有SEQ ID NO:774的氨基酸序列的HVR-H3，和/或其中所述轻链可变结构域包含含有SEQ ID NO:775的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:776的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:777的氨基酸序列的HVR-L3。
在一些实施方案中，所述重链可变结构域包含：(a)含有SEQ ID NO:772的氨基酸序列或与SEQ ID NO:772的氨基酸序列具有至少约95％同源性的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:773的氨基酸序列或与SEQ ID NO:773的氨基酸序列具有至少约95％同源性的氨基酸序列的HVR-H2；和；和/或(c)含有SEQ ID NO:774的氨基酸序列或与SEQ ID NO:774的氨基酸序列具有至少约95％同源性的氨基酸序列的HVR-H3；和/或其中所述轻链可变结构域包含：(a)含有SEQ ID NO:775的氨基酸序列或与SEQ ID NO:775的氨基酸序列具有至少约95％同源性的HVR-L1；(b)含有SEQ ID NO:776的氨基酸序列或与SEQ ID NO:776的氨基酸序列具有至少约95％同源性的氨基酸序列的HVR-L2；和/或(c)含有SEQ ID NO:777的氨基酸序列或与SEQ ID NO:777的氨基酸序列具有至少约95％同源性的氨基酸序列的HVR-L3。
在一些实施方案中，所述重链可变结构域包含单克隆抗体Ab21的HVR-H1、HVR-H2和/或HVR-H3；和/或其中所述轻链可变结构域包含单克隆抗体Ab21的HVR-L1、HVR-L2和/或HVR-L3。在一些实施方案中，HVR-H1包含SEQ ID NO:778的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-H2包含SEQ ID NO:779的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-H3包含SEQ ID NO:780的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-L1包含SEQ ID NO:781的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-L2包含SEQ ID NO:782的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-L3包含SEQ IDNO:783的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含含有SEQ ID NO:778的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:779的氨基酸序列的HVR-H2和含有SEQ ID NO:780的氨基酸序列的HVR-H3，和/或其中所述轻链可变结构域包含含有SEQ ID NO:781的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:782的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQ ID NO:783的氨基酸序列的HVR-L3。
在一些实施方案中，所述重链可变结构域包含：(a)含有SEQ ID NO:778的氨基酸序列或与SEQ ID NO:778的氨基酸序列具有至少约95％同源性的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:779的氨基酸序列或与SEQ ID NO:779的氨基酸序列具有至少约95％同源性的氨基酸序列的HVR-H2；和/或(c)含有SEQ ID NO:780的氨基酸序列或与SEQ ID NO:780的氨基酸序列具有至少约95％同源性的氨基酸序列的HVR-H3；和/或其中所述轻链可变结构域包含：(a)含有SEQ ID NO:781的氨基酸序列或与SEQ ID NO:781的氨基酸序列具有至少约95％同源性的HVR-L1；(b)含有SEQ ID NO:782的氨基酸序列或与SEQ ID NO:782的氨基酸序列具有至少约95％同源性的氨基酸序列的HVR-L2；和/或(c)含有SEQ ID NO:783的氨基酸序列或与SEQ ID NO:783的氨基酸序列具有至少约95％同源性的氨基酸序列的HVR-L3。
在一些实施方案中，抗体包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含：(a)含有选自SEQ ID NO:3-24、772和778的氨基酸序列的HVR-H1；含有选自SEQ ID NO:25-49、773和779的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)含有选自SEQ ID NO:50-119、774和780的氨基酸序列的HVR-H3 c；和/或其中所述轻链可变结构域包含：(a)含有选自SEQID NO:120-137、775和781的氨基酸序列的HVR-L1 c；(b)含有选自SEQ ID NO:138-152、776和782的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)含有选自SEQ ID NO:153-236、777和783的氨基酸序列的HVR-L3。在任何上述实施方案中，轻链可变结构域和/或重链可变结构域包含与所示氨基酸序列具有至少约90％同源性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体是美国专利申请公开号US2019/0010230A1的表1A、1B和8以及图20A和20B中公开的抗体，在下文中复制为表C1-C2。
表C1：Kabat重链CDR序列
表C2：Kabat轻链CDR序列
表C3：Kabat CDR序列
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表C4：重链可变区
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表C5：轻链可变区
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在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含：(a)包含至少一个、两个或三个HVR的重链可变区，所述HVR选自表C3中所列的任一种抗体的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3或选自Abl、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Abl11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20、Ab21、Ab22、Ab23、Ab24、Ab25、Ab26、Ab27、Ab28、Ab29、Ab30、Ab31、Ab32、Ab33、Ab34、Ab35、Ab36、Ab37、Ab38、Ab39、Ab40、Ab41、Ab42、Ab43、Ab44、Ab45、Ab46、Ab47、Ab48、Ab49、Ab50、Ab51、Ab52、Ab53、Ab54、Ab55、Ab56、Ab57、Ab58、Ab59、Ab60、Ab61、Ab62、Ab63、Ab64、Ab65、Ab66、Ab67、Ab68、Ab69、Ab70、Ab71、Ab72、Ab73、Ab74、Ab75、Ab76、Ab77、Ab78、Ab79、Ab80、Ab81、Ab82、Ab83、Ab84、Ab85、Ab86和Ab87；和/或(b)包含至少一个、两个或三个HVR的轻链可变区，所述HVR选自从Abl、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20、Ab21、Ab22、Ab23、Ab24、Ab25、Ab26、Ab27、Ab28、Ab29、Ab30、Ab31、Ab32、Ab33、Ab34、Ab35、Ab36、Ab37、Ab38、Ab39、Ab40、Ab41、Ab42、Ab43、Ab44、Ab45、Ab46、Ab47、Ab48、Ab49、Ab50、Ab51、Ab52、Ab53、Ab54、Ab55、Ab56、Ab57、Ab58、Ab59、Ab60、Ab61、Ab62、Ab63、Ab64、Ab65、Ab66、Ab67、Ab68、Ab69、Ab70、Ab71、Ab72、Ab73、Ab74、Ab75、Ab76、Ab77、Ab78、Ab79、Ab80、Ab81、Ab82、Ab83、Ab84、Ab85、Ab86和Ab87中选出的任一种抗体的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述轻链可变区包含HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3，并且所述重链可变结构域包含表C3中列出或选自以下的抗体的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3：Abl、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20、Ab21、Ab22、Ab23、Ab24、Ab25、Ab26、Ab27、Ab28、Ab29、Ab30、Ab31、Ab32、Ab33、Ab34、Ab35、Ab36、Ab37、Ab38、Ab39、Ab40、Ab41、Ab42、Ab43、Ab44、Ab45、Ab46、Ab47、Ab48、Ab49、Ab50、Ab51、Ab52、Ab53、Ab54、Ab55、Ab56、Ab57、Ab58、Ab59、Ab60、Ab61、Ab62、Ab63、Ab64、Ab65、Ab66、Ab67、Ab68、Ab69、Ab70、Ab71、Ab72、Ab73、Ab74、Ab75、Ab76、Ab77、Ab78、Ab79、Ab80、Ab81、Ab82、Ab83、Ab84、Ab85、Ab86和Ab87。
在一些实施方案中，抗人TREM2抗体是与选自以下的单克隆抗体竞争结合TREM2的抗体：Abl、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、A11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20、Ab21、Ab22、Ab23、Ab24、Ab25、Ab26、Ab27、Ab28、Ab29、Ab30、Ab31、Ab32、Ab33、Ab34、Ab35、Ab36、Ab37、Ab38、Ab39、Ab40、Ab41、Ab42、Ab43、Ab44、Ab45、Ab46、Ab47、Ab48、Ab49、Ab50、Ab51、Ab52、Ab53、Ab54、Ab55、Ab56、Ab57、Ab58、Ab59、Ab60、Ab61、Ab62、Ab63、Ab64、Ab65、Ab66、Ab67、Ab68、Ab69、Ab70、Ab71、Ab72、Ab73、Ab74、Ab75、Ab76、Ab77、Ab78、Ab79、Ab80、Ab81、Ab82、Ab83、Ab84、Ab85、Ab86和Ab87。
在一些实施方案中，表C5中公开的每个轻链可变区和表C4中公开的每个重链可变区可分别连接到轻链恒定区(EN1)和重链恒定区(EN2)以形成完整的抗体轻链和重链，如下文进一步讨论的。此外，每个产生的重链和轻链序列可以组合形成完整的抗体结构。应当理解，本文所提供的重链和轻链可变区也可以连接到具有与本文列出的示例性序列不同的序列的其他恒定结构域。
D.PCT专利申请公开号WO2017/062672A1
在一些实施方案中，TREM2激动剂是如PCT专利申请公开号WO2017/062672A1(“'672申请”)(该申请全文以引用的方式并入本文)中所述的抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，TREM2结合剂包含抗体，所述抗体包含'672申请说明书中公开的轻链可变结构域和重链可变结构域，所述轻链可变结构域包含CDRL1、CDRL2和CDRL3(也分别称为HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3)，所述重链可变结构域包含CDRH1、CDRH2和CDRH3(也分别称为HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3)。在一些实施方案中，TREM2结合剂包含抗体，所述抗体包含'672申请说明书中公开的轻链可变结构域和重链可变结构域。
在一些实施方案中，抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述轻链可变结构域或重链可变结构域或两者包含选自HVR-L1、HVR-L2、HVR-L3、HVR-Hl、HVR-H2和HVR-H3的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个HVR，使得：(a)HVR-L1包含选自SEQ IDNO:829-843、1401、1510-1514、1554-1558和1646-1648的氨基酸序列；(b)HVR-L2包含选自SEQ ID NO:844-853、1515-1517和1559-1563的氨基酸序列；(c)HVR-L3包含选自SEQ IDNO:854-867、1402、1403、1518-1522和1564-1566的氨基酸序列；(d)HVR-Hl包含选自SEQ IDNO:868-885、1404、1523-1525、1567-1574和1649-1655的氨基酸序列；(e)HVR-H2包含选自SEQ ID NO:886-904、1405-1407、1526-1528、1575-1582、1656-1662和1708的氨基酸序列；或(f)HVR-H3包含选自SEQ ID NO:905-992、1408、1409、1529、1530和1583-1590的氨基酸序列。在一些实施方案中：(a)HVR-L1包含SEQ ID NO:831的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ IDNO:846的氨基酸序列，HVR-L3包含SEQ ID NO:856的氨基酸序列，HVR-Hl包含SEQ ID NO:871的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:889的氨基酸序列，并且HVR-H3包含SEQ ID NO:908的氨基酸序列；(b)HVR-L1包含SEQ ID NO:834的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:848的氨基酸序列，HVR-L3包含SEQ ID NO:859的氨基酸序列，HVR-Hl包含SEQ ID NO:873的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:891的氨基酸序列，并且HVR-H3包含SEQ ID NO:910的氨基酸序列；(c)HVR-L1包含SEQ ID NO:831的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:846的氨基酸序列，HVR-L3包含SEQ ID NO:856的氨基酸序列，HVR-Hl包含SEQ ID NO:871的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:889的氨基酸序列，并且HVR-H3包含SEQ ID NO:908的氨基酸序列；(d)HVR-Ll包含SEQ ID NO:836的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:849的氨基酸序列，HVR-L3包含SEQ ID NO:855的氨基酸序列，HVR-Hl包含SEQ ID NO:875的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:893的氨基酸序列，并且HVR-H3包含SEQ ID NO:912的氨基酸序列；(e)HVR-Hl包含SEQ ID NO:978的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:896的氨基酸序列，并且HVR-H3包含SEQ ID NO:915的氨基酸序列；(f)HVR-Ll包含SEQ ID NO:839的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:848的氨基酸序列，HVR-L3包含SEQ ID NO:863的氨基酸序列，HVR-Hl包含SEQ ID NO:880的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:898的氨基酸序列，并且HVR-H3包含SEQ ID NO:917的氨基酸序列；(g)HVR-Ll包含SEQ ID NO:840的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:848的氨基酸序列，HVR-L3包含SEQ ID NO:868的氨基酸序列，HVR-Hl包含SEQ ID NO:881的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:899的氨基酸序列，并且HVR-H3包含SEQ ID NO:918的氨基酸序列；(h)HVR-Ll包含SEQ ID NO:841的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:852的氨基酸序列，HVR-L3包含SEQ ID NO:865的氨基酸序列，HVR-Hl包含SEQID NO:882的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:900的氨基酸序列，并且HVR-H3包含SEQID NO:919的氨基酸序列；(i)HVR-Ll包含SEQ ID NO:842的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ IDNO:849的氨基酸序列，HVR-L3包含SEQ ID NO:866的氨基酸序列，HVR-Hl包含SEQ ID NO:883的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:902的氨基酸序列，并且HVR-H3包含SEQ ID NO:920的氨基酸序列；或(j)HVR-Ll包含SEQ ID NO:936的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:849的氨基酸序列，HVR-L3包含SEQ ID NO:855的氨基酸序列，HVR-Hl包含SEQ ID NO:885的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:904的氨基酸序列，并且HVR-H3包含SEQ ID NO:922的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中轻链可变结构域包含：(a)HVR-L1，其包含选自SEQ ID NO:829-843、1401、1510-1514、1554-1558和1646-1648的氨基酸序列，或与选自SEQ ID NO:829-843、1401、1510-1514、1554-1558和1646-1648的氨基酸序列具有至少约90％同源性的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含选自SEQID NO:844-853、1515-1517和1559-1563的氨基酸序列，或与选自SEQ ID NO:844-853、1515-1517和1559-1563的氨基酸序列具有至少约90％同源性的氨基酸序列；和(c)HVR-L3，其包含选自SEQ ID NO:854-867、1402、1403、1518-1522和1564-1566的氨基酸序列，
或与选自SEQ ID NO:854-867、1402、1403、1518-1522和1564-1566的氨基酸序列具有至少约90％同源性的氨基酸序列；且其中重链可变结构域包含：(a)HVR-H1，其包含选自SEQ ID NO:868-885、1404、1523-1525、1567-1574和1649-1655的氨基酸序列，或与选自SEQ ID NO:868-885、1404、1523-1525、1567-1574和1649-1655的氨基酸序列具有至少约90％同源性的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含选自SEQ ID NO:886-904、1405-1407、1526-1528、1575-1582、1656-1662和1708的氨基酸序列，或与选自SEQ ID NO:886-904、1405-1407、1526-1528、1575-1582、1656-1662和1708的氨基酸序列具有至少约90％同源性的氨基酸序列；和(c)HVR-H3，其包含选自SEQ ID NO:905-992、1408、1409、1529、1530和1583-1590的氨基酸序列，或与选自SEQ ID NO:905-992、1408、1409、1529、1530和1583-1590的氨基酸序列具有至少约90％同源性的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含选自SEQ ID NO:1039-1218、1422-1454、1499-1509、1544-1550、1629-1636、1641、1643、1664、1669和1670的氨基酸序列；和/或重链可变结构域，所述重链可变结构域包含选自SEQ ID NO:1219-1400、1455-1498、1551-1553和1637-1640、1642-1645和1665-1667的氨基酸序列的。
在一些实施方案中，抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中：(a)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1153且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ IDNO:1341；(b)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1670且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1341；(c)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1154且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1342；(d)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1155且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1343；(e)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1156且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1344；(f)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1157且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1345；(g)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1158且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1346；(h)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1159且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1346；(i)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1160且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1347；(j)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQID NO:1161且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1348；(k)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1162且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1349；(1)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1163且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ IDNO:1350；(m)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1663且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1665；(n)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1664且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1666；(o)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1664且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1667；(p)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1039且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1219；(q)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1050且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1229；(r)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1072且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1239；(s)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1061且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1249；(t)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1669且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1249；(u)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQID NO:1083且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1259；(v)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1094且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1269；(w)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1105且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ IDNO:1279；(x)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1106且重链可变结构域包含氨基酸序列
SEQ ID NO:1280；(y)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1107且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1281；(z)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ IDNO:1118且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1249；(aa)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1119且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1291；(bb)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1130且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1281；(cc)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1499且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1301；(dd)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1131且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1311；(ee)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1142且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1331；(ff)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1164且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1351；(gg)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1175且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1455；(hh)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1185且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1361；(ii)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1216且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1371；(jj)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1217且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1381；(kk)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1218且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1391；(11)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1544且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1551；(mm)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1629且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQID NO:1551；(nn)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1545且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1552；(oo)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1546且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1551；(pp)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ IDNO:1546且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1637；(qq)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1547且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1551；(rr)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1548且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1553；(ss)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1630且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1638；(tt)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1631且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1553；(uu)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1549且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1551；(vv)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1632且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1639；(ww)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1549且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1640；(xx)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1550且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1551；(yy)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1633且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1551；(zz)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1634且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1642；(aaa)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1635且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1644；或(bbb)轻链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1636且重链可变结构域包含氨基酸序列SEQ ID NO:1645。在任何上述实施方案中，轻链可变结构域和/或重链可变结构域包含与所示氨基酸序列具有至少约90％同源性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体是PCT专利申请公开号WO2017/062672A1的表2A、2B、3A、3B、4A、4B、7A和7B中公开的抗体，在下文中复制为表D1-D8。
表D1：EU或Kabat轻链HVR序列
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表D2：EU或Kabat轻链HVR共有序列
HVR 1,1
共有序列1 RXSENXYSXLA(SEQ ID NO:1646)
共有序列2 RSSQXXXHSNGXTYLX(SEQ ID NO:1647)
共有序列3 KSSQSXXXSXXQKXXLX(SEQ ID NO:1648)
表D3：EU或Kabat重链HVR序列
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表D4：EU或Kabat重链HVR共有序列
表D5：EU或Kabat轻链框架序列
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表D6：EU或Kabat重链框架序列
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表D7：人源化轻链可变区序列
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表D8：人源化重链可变区序列
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在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含表D1-D6中所列或选自1A7、3A2、3B10、6G12、6H6、7A9、7B3、8A1、8E10、8F11、8F8、9F5、9F5v2、9G1、9G3、10A9、10C1、11A8、12E2、12F9、12G6、2C7、2F5、3C1、4D7、4D11、6C11、6G12、7A3、7C5、7E9、7F6、7G1、7H1、8C3、8F10、12A1、1E9、2C5、3C5、4C12、4F2、5A2、6B3、7D1、7D9、11D8、8A12、10E7、10B 11、10D2、7D5、2A7、3G12、6H9、8G9、9B4、10A1、11A8、12F3、2F8、10E3、1H7、2F6、2H8、3A7、7E5、7E5v2、7F8、11H5、7C5、4F11、12D9、lB4vl、1B4V2、6H2、7Bllvl、7Bllv2、18D8、18E4vl、18E4v2、29F6vl、29F6v2、40D5vl、40D5v2、43B9、44A8vl、44A8v2、44B4vl和44B4v2的任一种抗体的轻链可变区；和/或表D1-D6中所列或选自1A7、3A2、3B 10、6G12、6H6、7A9、7B3、8A1、8E10、8F11、8F8、9F5、9G1、9G3、10A9、10C1、11A8、12E2、12F9、12G6、2C7、2F5、3C1、4D7、4D11、6C11、6G12、7A3、7C5、7E9、7F6、7G1、7H1、8C3、8F10、12A1、1E9、2C5、3C5、4C12、4F2、5A2、6B3、7D1、7D9、11D8、8A12、10E7、10B 11、10D2、7D5、2A7、3G12、6H9、8G9、9B4、10A1、11A8、12F3、2F8、10E3、1H7、2F6、2H8、3A7、7E5、7F8、11H5、7C5、4F11、12D9、lB4vl、1B4V2、6H2、7Bllvl、7Bllv2、18D8、18E4vl、18E4v2、29F6vl、29F6v2、40D5vl、40D5v2、43B9、44A8vl、44A8v2、44B4vl和44B4v2的任一种抗体的重链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体是选自1A7、3A2、3B 10、6G12、6H6、7A9、7B3、8A1、8E10、8F11、8F8、9F5、9G1、9G3、10A9、10C1、11A8、12E2、12F9、12G6、2C7、2F5、3C1、4D7、4D11、6C11、6G12、7A3、7C5、7E9、7F6、7G1、7H1、8C3、8F10、12A1、1E9、2C5、3C5、4C12、4F2、5A2、6B3、7D1、7D9、11D8、8A12、10E7、10B 11、10D2、7D5、2A7、3G12、6H9、8G9、9B4、10A1、11A8、12F3、2F8、10E3、1H7、2F6、2H8、3A7、7E5、7F8、11H5、7C5、4F11、12D9、lB4vl、1B4V2、6H2、7Bllvl、7Bllv2、18D8、18E4vl、18E4v2、29F6vl、29F6v2、40D5vl、40D5v2、43B9、44A8vl、44A8v2、44B4vl和44B4v2的抗TREM2单克隆抗体，和其人源化变体。
在一些实施方案中，表D1-D6中所公开、列举或选自1A7、3A2、3B 10、6G12、6H6、7A9、7B3、8A1、8E10、8F11、8F8、9F5、9F5v2、9G1、9G3、10A9、10C1、11A8、12E2、12F9、12G6、2C7、2F5、3C1、4D7、4D11、6C11、6G12、7A3、7C5、7E9、7F6、7G1、7H1、8C3、8F10、12A1、1E9、2C5、3C5、4C12、4F2、5A2、6B3、7D1、7D9、11D8、8A12、10E7、10B11、10D2、7D5、2A7、3G12、6H9、8G9、9B4、10A1、11A8、12F3、2F8、10E3、1H7、2F6、2H8、3A7、7E5、7E5v2、7F8、11H5、7C5、4F11、12D9、lB4vl、1B4V2、6H2、7Bllvl、7Bllv2、18D8、18E4vl、18E4v2、29F6vl、29F6v2、40D5vl、40D5v2、43B9、44A8vl、44A8v2、44B4vl、和44B4v2的各轻链可变区；和/或表D1-D6中所列或选自1A7、3A2、3B10、6G12、6H6、7A9、7B3、8A1、8E10、8F11、8F8、9F5、9G1、9G3、10A9、10C1、11A8、12E2、12F9、12G6、2C7、2F5、3C1、4D7、4D11、6C11、6G12、7A3、7C5、7E9、7F6、7G1、7H1、8C3、8F10、12A1、1E9、2C5、3C5、4C12、4F2、5A2、6B3、7D1、7D9、11D8、8A12、10E7、10B 11、10D2、7D5、2A7、3G12、6H9、8G9、9B4、10A1、11A8、12F3、2F8、10E3、1H7、2F6、2H8、3A7、7E5、7F8、11H5、7C5、4F11、12D9、lB4vl、1B4V2、6H2、7Bllvl、7B l lv2、18D8、18E4vl、18E4v2、29F6vl、29F6v2、40D5vl、40D5v2、43B9、44A8vl、44A8v2、44B4vl和44B4v2的任一种抗体的各重链可变区可分别连接到轻链恒定区(表EN1)和重链恒定区(表EN2)，以形成完整的抗体轻链和重链，如下文进一步论述。此外，每个产生的重链和轻链序列可以组合形成完整的抗体结构。应当理解，本文所提供的重链和轻链可变区也可以连接到具有与本文列出的示例性序列不同的序列的其他恒定结构域。
E.PCT专利申请公开号WO2019/028292A1
在一些实施方案中，TREM2激动剂是如PCT专利申请公开号WO2019/028292A1(“'292申请”)(该申请全文以引用的方式并入本文)中所述的抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，TREM2结合剂包含抗体，所述抗体包含'573申请说明书中公开的轻链可变结构域和重链可变结构域，所述轻链可变结构域包含CDRL1、CDRL2和CDRL3(也分别称为HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3)，所述重链可变结构域包含CDRH1、CDRH2和CDRH3(也分别称为HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3)。在一些实施方案中，TREM2结合剂包含抗体，所述抗体包含'573申请说明书中公开的轻链可变结构域和重链可变结构域。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体以比如下的抗TREM2抗体高至少约1倍的亲和力结合人和食蟹猴TREM2，所述抗TREM2抗体选自包含含有SEQ ID NO:1734的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:1763的氨基酸序列的轻链可变区的抗TREM2抗体(例如，抗体AL2p-h50)；包含含有SEQ ID NO:1798的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ IDNO:1810的氨基酸序列的轻链可变区的抗TREM2抗体(例如，抗体AL2p-h77)；和包含含有SEQID NO:1826的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:1827的氨基酸序列的轻链可变区的抗TREM2抗体(例如抗体AL2)。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体以比如下的抗TREM2抗体的亲和力高至少约10倍的亲和力结合初级人免疫细胞，所述抗TREM2抗体选自包含含有SEQ ID NO:1734的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:1763的氨基酸序列的轻链可变区的抗TREM2抗体；包含含有SEQ ID NO:1798的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:1810的氨基酸序列的轻链可变区的抗TREM2抗体；和包含含有SEQ ID NO:1826的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:1827的氨基酸序列的轻链可变区的抗TREM2抗体。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体聚集和活化TREM2信号传导的量比如下的抗TREM2抗体聚集和活化TREM2信号传导的量高至少约1倍，所述抗TREM2抗体选自包含含有SEQ ID NO:1734的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:1763的氨基酸序列的轻链可变区的抗TREM2抗体；包含含有SEQ ID NO:1798的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:1810的氨基酸序列的轻链可变区的抗TREM2抗体；和包含含有SEQ ID NO:1826的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:1827的氨基酸序列的轻链可变区的抗TREM2抗体。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体增加体外免疫细胞存活的程度大于如下的抗TREM2抗体，所述抗TREM2抗体选自包含含有SEQ ID NO:1734的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:1763的氨基酸序列的轻链可变区的抗TREM2抗体；包含含有SEQ ID NO:1798的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:1810的氨基酸序列的轻链可变区的抗TREM2抗体；和包含含有SEQ ID NO:1826的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:1827的氨基酸序列的轻链可变区的抗TREM2抗体。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体还可具有改善的体内半衰期。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体还可降低体内可溶性TREM2的血浆水平。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体也可减少可溶性TREM2。在一些实施方案中，可溶性TREM2被减少约10％、20％、30％、40％、50％或60％中的任一者。
在一些实施方案中，抗体结合TREM2蛋白，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含：含有根据式I的序列的HVR-H1：YAFX1X2X3WMN，其中X1是S或W，X2是S、L或R，并且X3是S、D、H、Q或E(SEQ ID NO:1828)；含有根据式II的序列的HVR-H2：RIYPGX1GX2TNYAX3KX4X5G，其中X1是D、G、E、Q或V，X2是D或Q，X3是Q、R、H、W、Y或G，X4是F、R或W，并且X5是Q、R、K或H(SEQ ID NO:1829)；和含有根据式III的序列的HVR-H3：ARLLRNX1PGX2SYAX3DY，其中X是Q或K，X2是E、S或A，并且X3是M或H(SEQ ID NO:1830)，并且其中所述抗体不是包含如下重链可变区的抗体，所述重链可变区包含含有序列YAFSSSWMN(SEQ ID NO:1831)的HVR-H1、含有序列RIYPGDGDTNYAQKFQG(SEQ ID NO:1832)的HVR-H2和含有序列ARLLRNQPGESYAMDY(SEQ ID NO:1833)的HVR-H3。在一些实施方案中，TREM2激动剂是结合TREM2蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含：含有根据式IV的序列的HVR-L1：RX1SX2SLX3HSNX4YTYLH，其中X1是S或T，X2是Q、R或S，X3是V或I，并且X4是G、R、W、Q或A(SEQ ID NO:1834)；含有根据式V的序列的HVR-L2：KVSNRX1S，其中X1是F、R、V或K(SEQ ID NO:1835)；和含有根据式V的序列的HVR-L3：SQSTRVPYT(SEQ ID NO:1836)，并且其中所述抗体不是包含如下轻链可变区的抗体，所述轻链可变区包含含有序列RSSQSLVHSNGYTYLH(SEQ ID NO:1837)的HVR-L1、含有序列KVSNRFS(SEQ ID NO:1838)的HVR-L2和含有序列SQSTRVPYT(SEQ ID NO:1836)的HVR-L3。在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含：含有根据式I的序列的HVR-H1：YAFX1X2X3WMN，其中X1是S或W，X2是S、L或R，并且X3是S、D、H、Q或E(SEQ IDNO:1828)；含有根据式II的序列的HVR-H2：RIYPGX1GX2TNYAX3KX4X5G，其中X1是D、G、E、Q或V，X2是D或Q，X3是Q、R、H、W、Y或G，X4是F、R或W，并且X5是Q、R、K或H(SEQ ID NO:1829)；和含有根据式III的序列的HVR-H3：ARLLRNX1PGX2SYAX3DY，其中X1是Q或K，X2是E、S或A，并且X3是M或H(SEQ ID NO:1830)，并且所述轻链可变区包含：含有根据式IV的序列的HVR-L1：RX1SX2SLX3HSNX4YTYLH，其中X是S或T，X2是Q、R或S，X3是V或I，并且X4是G、R、W、Q或A(SEQ IDNO:1834)；含有根据式V的序列的HVR-L2：KVSNRX1S，其中X1是F、R、V或K(SEQ ID NO:1835)；和含有以下序列的HVR-L3：SQSTRVPYT(SEQ ID NO:1836)，并且其中所述抗体不是包含如下重链可变区和包含如下轻链可变区的抗体，所述重链可变区包含含有序列YAFSSSWMN(SEQID NO:1831)的HVR-Hl、含有序列RIYPGDGDTNYAQKFQG(SEQ ID NO:1832)的HVR-H2和含有序列ARLLRNQPGESYAMDY(SEQ ID NO:1833)的HVR-H3，所述轻链可变区包含含有序列RSSQSLVHSNGYTYLH(SEQ ID NO:1837)的HVR-L1、含有序列KVSNRFS(SEQ ID NO:1838)的HVR-L2和含有序列SQSTRVPYT(SEQ ID NO:1836)的HVR-L3。
在一些实施方案中，抗体结合TREM2蛋白，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含：含有选自SEQ ID NO:1839和1843的序列的HVR-H1；含有选自SEQ ID NO:1840、1842、1844和1848的序列的HVR-H2；和含有选自SEQ ID NO:1833和1845的序列的HVR-H3；和/或所述轻链可变区包含：含有选自1837、1846、1849和1851的序列的HVR-L1；含有选自SEQ ID NO:1838、1841和1847的序列的HVR-L2；和含有SEQ ID NO:1836的序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含：含有SEQ ID NO:1839的序列的HVR-H1；含有选自SEQ ID NO:1840、1842和1848的序列的HVR-H2；和含有SEQ ID NO:1833的序列的HVR-H3；和/或所述轻链可变区包含：含有选自1837、1849和1851的序列的HVR-L1；含有选自SEQ ID NO:1838和1841的序列的HVR-L2；和含有SEQ ID NO:1836的序列的HVR-L3。
在一些实施方案中，抗体结合到TREM2蛋白，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含抗体AL2p-2、AL2p-3、AL2p-4、AL2p-7、AL2p-8、AL2p-9、AL2p-10、AL2p-11、AL2p-12、AL2p-13、AL2p-14、AL2p-15、AL2p-16、AL2p-17、AL2p-18、AL2p-19、AL2p-20、AL2p-21、AL2p-22、AL2p-23、AL2p-24、AL2p-25、AL2p-26、AL2p-27、AL2p-28、AL2p-29、AL2p-30、AL2p-31、AL2p-32、AL2p-35、AL2p-36、AL2p-37、AL2p-38、AL2p-39、AL2p-40、AL2p-41、AL2p-42、AL2p-43、AL2p-44、AL2p-45、AL2p-46、AL2p-47、AL2p-48、AL2p-49、AL2p-50、AL2p-51、AL2p-52、AL2p-53、AL2p-54、AL2p-55、AL2p-56、AL2p-57、AL2p-58、AL2p-59、AL2p-60、AL2p-61或AL2p-62的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3(如表E1-E3中所示)。在一些实施方案中，抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含抗体AL2p-5、AL2p-6、AL2p-7、AL2p-8、AL2p-9、AL2p-10、AL2p-11、AL2p-12、AL2p-13、AL2p-14、AL2p-15、AL2p-16、AL2p-17、AL2p-18、AL2p-19、AL2p-20、AL2p-21、AL2p-22、AL2p-23、AL2p-24、AL2p-25、AL2p-26、AL2p-27、AL2p-28、AL2p-29、AL2p-30、AL2p-31、AL2p-32、AL2p-33、AL2p-38、AL2p-39、AL2p-40、AL2p-41、AL2p-42、AL2p-43、AL2p-44、AL2p-45、AL2p-46、AL2p-47、AL2p-48、AL2p-49、AL2p-50、AL2p-51、AL2p-52、AL2p-53、AL2p-54、AL2p-55、AL2p-56、AL2p-57、AL2p-58、AL2p-59、AL2p-60、AL2p-61或AL2p-62的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3(如表E4-E6中所示)。在一些实施方案中，抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含抗体AL2p-2、AL2p-3、AL2p-4、AL2p-7、AL2p-8、AL2p-9、AL2p-10、AL2p-11、AL2p-12、AL2p-13、AL2p-14、AL2p-15、AL2p-16、AL2p-17、AL2p-18、AL2p-19、AL2p-20、AL2p-21、AL2p-22、AL2p-23、AL2p-24、AL2p-25、AL2p-26、AL2p-27、AL2p-28、AL2p-29、AL2p-30、AL2p-31、AL2p-32、AL2p-35、AL2p-36、AL2p-37、AL2p-38、AL2p-39、AL2p-40、AL2p-41、AL2p-42、AL2p-43、AL2p-44、AL2p-45、AL2p-46、AL2p-47、AL2p-48、AL2p-49、AL2p-50、AL2p-51、AL2p-52、AL2p-53、AL2p-54、AL2p-55、AL2p-56、AL2p-57、AL2p-58、AL2p-59、AL2p-60、AL2p-61或AL2p-62的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3(如表E1-E3中所示)；并且所述轻链可变区包含抗体AL2p-5、AL2p-6、AL2p-7、AL2p-8、AL2p-9、AL2p-10、AL2p-11、AL2p-12、AL2p-13、AL2p-14、AL2p-15、AL2p-16、AL2p-17、AL2p-18、AL2p-19、AL2p-20、AL2p-21、AL2p-22、AL2p-23、AL2p-24、AL2p-25、AL2p-26、AL2p-27、AL2p-28、AL2p-29、AL2p-30、AL2p-31、AL2p-32、AL2p-33、AL2p-38、AL2p-39、AL2p-40、AL2p-41、AL2p-42、AL2p-43、AL2p-44、AL2p-45AL2p-46、AL2p-47、AL2p-48、AL2p-49、AL2p-50、AL2p-5I、AL2p-52、AL2p-53、AL2p-54、AL2p-55、AL2p-56、AL2p-57、AL2p-58、AL2p-59、AL2p-60、AL2p-61或AL2p-62的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3(如表E4-E6中所示)。在一些实施方案中，抗体包含含有HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3的重链可变区以及含有HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3的轻链可变区，其中所述抗体包含抗体AL2p-2、AL2p-3、AL2p-4、AL2p-5、AL2p-6、AL2p-7、AL2p-8、AL2p-9、AL2p-10、AL2p-11、AL2p-12、AL2p-13、AL2p-14、AL2p-15、AL2p-16、AL2p-17、AL2p-18、AL2p-19、AL2p-20、AL2p-21、AL2p-22、AL2p-23、AL2p-24、AL2p-25、AL2p-26、AL2p-27、AL2p-28、AL2p-29、AL2p-30、AL2p-31、AL2p-32、AL2p-33、AL2p-35、AL2p-36、AL2p-37、AL2p-38、AL2p-39、AL2p-40、AL2p-41、AL2p-42、AL2p-43、AL2p-44、AL2p-45、AL2p-46、AL2p-47、AL2p-48、AL2p-49、AL2p-50、AL2p-51、AL2p-52、AL2p-53、AL2p-54、AL2p-55、AL2p-56、AL2p-57、AL2p-58、AL2p-59、AL2p-60、AL2p-61或AL2p-62的HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3、HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3(如表E1-E3和表E4-E6中所示)。
在一些实施方案中，重链可变区包含选自VH FRI、VH FR2、VH FR3和VH FR4的一个、两个、三个或四个框架区，其中：所述VH FRI包含选自SEQ ID NO:1716-1718的序列，所述VH FR2包含选自SEQ ID NO:1719和1720的序列，所述VH FR3包含选自SEQ ID NO:1721和1722的序列，并且所述VH FR4包含SEQ ID NO:1723的序列；和/或所述轻链可变区包含选自VL FRI、VL FR2、VL FR3和VL FR4的一个、两个、三个或四个框架区，其中：所述VL FRI包含选自SEQ ID NO:1724-1727的序列，所述VL FR2包含选自SEQ ID NO:1728和1729的序列，所述VL FR3包含选自SEQ ID NO:1730和1731的序列，并且所述VL FR4包含选自SEQ ID NO:1732和1733的序列。在一些实施方案中，抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:1734-1777和1798的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含选自SEQ ID NO:1799-1820和1825的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包含抗体AL2p-h50、AL2p-2、AL2p-3、AL2p-4、AL2p-5、AL2p-6、AL2p-7、AL2p-8、AL2p-9、AL2p-10、AL2p-11、AL2p-12、AL2p-13、AL2p-14、AL2p-15、AL2p-16、AL2p-17、AL2p-18、AL2p-19、AL2p-20、AL2p-21、AL2p-22、AL2p-23、AL2p-24、AL2p-25、AL2p-26、AL2p-27、AL2p-28、AL2p-29、AL2p-30、AL2p-31、AL2p-32、AL2p-33、AL2p-h77、AL2p-35、AL2p-36、AL2p-37、AL2p-38、AL2p-39、AL2p-40、AL2p-41、AL2p-42、AL2p-43、AL2p-44、AL2p-45、AL2p-46、AL2p-47、AL2p-48、AL2p-49、AL2p-50、AL2p-51、AL2p-52、AL2p-53、AL2p-54、AL2p-55、AL2p-56、AL2p-57、AL2p-58、AL2p-59、AL2p-60、AL2p-61或AL2p-62的重链可变区(如表E15所示)；和/或所述抗体包含抗体AL2p-h50、AL2p-2、AL2p-3、AL2p-4、AL2p-5、AL2p-6、AL2p-7、AL2p-8、AL2p-9、AL2p-10、AL2p-11、AL2p-12、AL2p-13、AL2p-14、AL2p-15、AL2p-16、AL2p-17、AL2p-18、AL2p-19、AL2p-20、AL2p-21、AL2p-22、AL2p-23、AL2p-24、AL2p-25、AL2p-26、AL2p-27、AL2p-28、AL2p-29、AL2p-30、AL2p-31、AL2p-32、AL2p-33、AL2p-h77、AL2p-35、AL2p-36、AL2p-37、AL2p-38、AL2p-39、AL2p-40、AL2p-41、AL2p-42、AL2p-43、AL2p-44、AL2p-45、AL2p-46、AL2p-47、AL2p-48、AL2p-49、AL2p-50、AL2p-5I、AL2p-52、AL2p-53、AL2p-54、AL2p-55、AL2p-56、AL2p-57、AL2p-58、AL2p-59、AL2p-60、AL2p-61或AL2p-62的轻链可变区(如表E17所示)。在一些实施方案中：(a)所述HVR-H1包含氨基酸序列YAFSSQWMN(SEQ ID NO:1839)，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIYPGGGDTNYARKFQG(SEQ ID NO:1840)，所述HVR-H3包含氨基酸序列ARLLRNQPGESYAMDY(SEQ ID NO:1833)，所述HVR-L1包含氨基酸序列RSSQSLVHSNGYTYLH(SEQID NO:1837)，所述HVR-L2包含氨基酸序列KVSNRRS(SEQ ID NO:1841)，并且所述HVR-L3包含氨基酸序列SQSTRVPYT(SEQ ID NO:1836)；(b)所述HVR-H1包含氨基酸序列YAFSSQWMN(SEQ ID NO:1839)，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIYPGGGDTNYAGKFQG(SEQ ID NO:1842)，所述HVR-H3包含氨基酸序列ARLLRNQPGESYAMDY(SEQ ID NO:1833)，所述HVR-L1包含氨基酸序列RSSQSLVHSNGYTYLH(SEQ ID NO:1837)，所述HVR-L2包含氨基酸序列KVSNRFS(SEQ ID NO:1838)，并且所述HVR-L3包含氨基酸序列SQSTRVPYT(SEQ ID NO:1836)；(c)所述HVR-H1包含氨基酸序列YAFSSDWMN(SEQ ID NO:1843)，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIYPGEGDTNYARKFHG(SEQ ID NO:1844)，所述HVR-H3包含氨基酸序列ARLLRNKPGESYAMDY(SEQ ID NO:1845)，所述HVR-L1包含氨基酸序列RTSQSLVHSNAYTYLH(SEQ ID NO:1846)，所述HVR-L2包含氨基酸序列KVSNRVS(SEQ ID NO:1847)，并且所述HVR-L3包含氨基酸序列SQSTRVPYT(SEQ ID NO:1836)；(d)所述HVR-H1包含氨基酸序列YAFSSQWMN(SEQ ID NO:1839)，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIYPGEGDTNYARKFQG(SEQ ID NO:1848)，所述HVR-H3包含氨基酸序列ARLLRNQPGESYAMDY(SEQ ID NO:1833)，所述HVR-L1包含氨基酸序列RSSQSLVHSNQYTYLH(SEQID NO:1849)，所述HVR-L2包含氨基酸序列KVSNRRS(SEQ ID NO:1841)，并且所述HVR-L3包含氨基酸序列SQSTRVPYT(SEQ ID NO:1836)；(e)所述HVR-H1包含氨基酸序列YAFSSQWMN(SEQ ID NO:1839)，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIYPGEGDTNYAGKFQG(SEQ ID NO:1850)，所述HVR-H3包含氨基酸序列ARLLRNQPGESYAMDY(SEQ ID NO:1833)，所述HVR-L1包含氨基酸序列RSSQSLVHSNQYTYLH(SEQ ID NO:1849)，所述HVR-L2包含氨基酸序列KVSNRFS(SEQ ID NO:1838)，并且所述HVR-L3包含氨基酸序列SQSTRVPYT(SEQ ID NO:1836)；(f)所述HVR-H1包含氨基酸序列YAFSSQWMN(SEQ ID NO:1839)，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIYPGGGDTNYAGKFQG(SEQ ID NO:1842)，所述HVR-H3包含氨基酸序列ARLLRNQPGESYAMDY(SEQ ID NO:1833)，所述HVR-L1包含氨基酸序列RSSQSLVHSNRYTYLH(SEQ ID NO:1851)，所述HVR-L2包含氨基酸序列KVSNRFS(SEQ ID NO:1838)，并且所述HVR-L3包含氨基酸序列SQSTRVPYT(SEQ ID NO:1836)；或(g)所述HVR-H1包含氨基酸序列YAFSSQWMN(SEQ ID NO:1839)，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIYPGGGDTNYARKFQG(SEQ ID NO:1840)，所述HVR-H3包含氨基酸序列ARLLRNQPGESYAMDY(SEQ ID NO:1833)，所述HVR-L1包含氨基酸序列RSSQSLVHSNRYTYLH(SEQID NO:1851)，所述HVR-L2包含氨基酸序列KVSNRRS(SEQ ID NO:1841)，并且所述HVR-L3包含氨基酸序列SQSTRVPYT(SEQ ID NO:1836)。在一些实施方案中，所述HVR-H1包含氨基酸序列YAFSSQWMN(SEQ ID NO:1839)，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIYPGGGDTNYARKFQG(SEQ IDNO:1840)，所述HVR-H3包含氨基酸序列ARLLRNQPGESYAMDY(SEQ ID NO:1833)，所述HVR-L1包含氨基酸序列RSSQSLVHSNGYTYLH(SEQ ID NO:1837)，所述HVR-L2包含氨基酸序列KVSNRRS(SEQ ID NO:1841)，并且所述HVR-L3包含氨基酸序列SQSTRVPYT(SEQ ID NO:1836)。在一些实施方案中，所述HVR-H1包含氨基酸序列YAFSSQWMN(SEQ ID NO:1839)，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIYPGGGDTNYAGKFQG(SEQ ID NO:1842)，所述HVR-H3包含氨基酸序列ARLLRNQPGESYAMDY(SEQ ID NO:1833)，所述HVR-L1包含氨基酸序列RSSQSLVHSNGYTYLH(SEQ ID NO:1837)，所述HVR-L2包含氨基酸序列KVSNRFS(SEQ ID NO:1838)，并且所述HVR-L3包含氨基酸序列SQSTRVPYT(SEQ ID NO:1836)。在一些实施方案中，所述HVR-HI包含氨基酸序列YAFSSDWMN(SEQ ID NO:1843)，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIYPGEGDTNYARKFHG(SEQID NO:1844)，所述HVR-H3包含氨基酸序列ARLLRNKPGESYAMDY(SEQ ID NO:1845)，所述HVR-L1包含氨基酸序列RTSQSLVHSNAYTYLH(SEQ ID NO:1846)，所述HVR-L2包含氨基酸序列KVSNRVS(SEQ ID NO:1847)，并且所述HVR-L3包含氨基酸序列SQSTRVPYT(SEQ ID NO:1836)。在一些实施方案中，所述HVR-H1包含氨基酸序列YAFSSQWMN(SEQ ID NO:1839)，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIYPGEGDTNYARKFQG(SEQ ID NO:1848)，所述HVR-H3包含氨基酸序列ARLLRNQPGESYAMDY(SEQ ID NO:1833)，所述HVR-L1包含氨基酸序列RSSQSLVHSNQYTYLH(SEQ ID NO:1849)，所述HVR-L2包含氨基酸序列KVSNRRS(SEQ ID NO:1841)，并且所述HVR-L3包含氨基酸序列SQSTRVPYT(SEQ ID NO:1836)。在一些实施方案中，所述HVR-H1包含氨基酸序列YAFSSQWMN(SEQ ID NO:1839)，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIYPGEGDTNYAGKFQG(SEQID NO:1850)，所述HVR-H3包含氨基酸序列ARLLRNQPGESYAMDY(SEQ ID NO:1833)，所述HVR-L1包含氨基酸序列RSSQSLVHSNQYTYLH(SEQ ID NO:1849)，所述HVR-L2包含氨基酸序列KVSNRFS(SEQ ID NO:1838)，并且所述HVR-L3包含氨基酸序列SQSTRVPYT(SEQ ID NO:1836)。在一些实施方案中，所述HVR-H1包含氨基酸序列YAFSSQWMN(SEQ ID NO:1839)，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIYPGGGDTNYAGKFQG(SEQ ID NO:1842)，所述HVR-H3包含氨基酸序列ARLLRNQPGESYAMDY(SEQ ID NO:1833)，所述HVR-L1包含氨基酸序列RSSQSLVHSNRYTYLH(SEQ ID NO:1851)，所述HVR-L2包含氨基酸序列KVSNRFS(SEQ ID NO:1838)，并且所述HVR-L3包含氨基酸序列SQSTRVPYT(SEQ ID NO:1836)。在一些实施方案中，所述HVR-HI包含氨基酸序列YAFSSQWMN(SEQ ID NO:1839)，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIYPGGGDTNYARKFQG(SEQID NO:1840)，所述HVR-H3包含氨基酸序列ARLLRNQPGESYAMDY(SEQ ID NO:1833)，所述HVR-L1包含氨基酸序列RSSQSLVHSNRYTYLH(SEQ ID NO:1851)，所述HVR-L2包含氨基酸序列KVSNRRS(SEQ ID NO:1841)，并且所述HVR-L3包含氨基酸序列SQSTRVPYT(SEQ ID NO:1836)。在一些实施方案中，所述HVR-H1包含氨基酸序列YAFSSQWMN(SEQ ID NO:1839)，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIYPGGGDTNYAGKFQG(SEQ ID NO:1842)，所述HVR-H3包含氨基酸序列ARLLRNQPGESYAMDY(SEQ ID NO:1833)，所述HVR-L1包含氨基酸序列RSSQSLVHSNRYTYLH(SEQ ID NO:1851)，所述HVR-L2包含氨基酸序列KVSNRFS(SEQ ID NO:1838)，并且所述HVR-L3包含氨基酸序列SQSTRVPYT(SEQ ID NO:1836)。
在一些实施方案中，抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含Kabat CDR和/或所述轻链可变区包含Kabat CDR。在一些实施方案中，所述重链可变区包含含有序列SQWMN(SEQ ID NO:1901)的CDR-H1、含有序列RIYPGGGDTNYAGKFQG(SEQ ID NO:1842)的CDR-H2和含有序列LLRNQPGESYAMDY(SEQ ID NO:1902)的CDR-H3。在一些实施方案中，所述轻链可变区包含含有序列RSSQSLVHSNGYTYLH(SEQ ID NO:1837)的CDR-L1、含有序列KVSNRFS(SEQ ID NO:1838)的CDR-L2和含有序列SQSTRVPYT(SEQ ID NO:1836)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述重链可变区包含含有序列SQWMN(SEQ ID NO:1901)的CDR-HI、含有序列RIYPGGGDTNYAGKFQG(SEQ ID NO:1842)的CDR-H2和含有序列LLRNQPGESYAMDY(SEQ IDNO:1902)的CDR-H3；并且所述轻链可变区包含含有序列RSSQSLVHSNGYTYLH(SEQ ID NO:1837)的CDR-L1、含有序列KVSNRFS(SEQ ID NO:1838)的CDR-L2和含有序列SQSTRVPYT(SEQID NO:1836)的CDR-L3。
在一些实施方案中，抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含Kabat CDR和/或所述轻链可变区包含Kabat CDR。在一些实施方案中，所述重链可变区包含含有序列SDWMN(SEQ ID NO:1903)的CDR-H1、含有序列RIYPGEGDTNYARKFHG(SEQ ID NO:1844)的CDR-H2和含有序列LLRNKPGESYAMDY(SEQ ID NO:1904)的CDR-H3。在一些实施方案中，所述轻链可变区包含CDR-L1，含有序列RTSQSLVHSNAYTYLH(SEQ ID NO:1846)、含有序列KVSNRVS(SEQ ID NO:1847)的CDR-L2和含有序列SQSTRVPYT(SEQ ID NO:1836)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述重链可变区包含含有序列SDWMN(SEQ ID NO:1903)的CDR-HI、含有序列RIYPGEGDTNYARKFHG(SEQ ID NO:1844)的CDR-H2和含有序列LLRNKPGESYAMDY(SEQ IDNO:1904)的CDR-H3；并且所述轻链可变区包含含有序列RTSQSLVHSNAYTYLH(SEQ ID NO:1846)的CDR-LI、含有序列KVSNRVS(SEQ ID NO:1847)的CDR-L2和含有序列SQSTRVPYT(SEQID NO:1836)的CDR-L3。
在一些实施方案中，抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含Kabat CDR和/或所述轻链可变区包含Kabat CDR。在一些实施方案中，所述重链可变区包含含有序列SQWMN(SEQ ID NO:1901)的CDR-H1、含有序列RIYPGGGDTNYAGKFQG(SEQ ID NO:1842)的CDR-H2和含有序列LLRNQPGESYAMDY(SEQ ID NO:1902)的CDR-H3。在一些实施方案中，所述轻链可变区包含含有序列RSSQSLVHSNRYTYLH(SEQ ID NO:1851)的CDR-Ll、含有序列KVSNRFS(SEQ ID NO:1838)1的CDR-L2和含有序列SQSTRVPYT(SEQ ID NO:1836)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述重链可变区包含含有序列SQWMN(SEQ ID NO:1901)的CDR-H1、含有序列RIYPGGGDTNYAGKFQG(SEQ ID NO:1842)的CDR-H2和含有序列LLRNQPGESYAMDY(SEQID NO:1902)的Kabat CDR-H3；并且所述轻链可变区包含含有序列RSSQSLVHSNRYTYLH(SEQID NO:1851)的CDR-L1、含有序列KVSNRFS(SEQ ID NO:1838)的CDR-L2和含有序列SQSTRVPYT(SEQ ID NO:1836)的CDR-L3。
在一些实施方案中，抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含Kabat CDR和/或所述轻链可变区包含Kabat CDR。在一些实施方案中，所述重链可变区包含含有序列SQWMN(SEQ ID NO:1901)的CDR-H1、含有序列RIYPGGGDTNYARKFQG(SEQ ID NO:1840)的CDR-H2和含有序列LLRNQPGESYAMDY(SEQ ID NO:1902)的CDR-H3。在一些实施方案中，所述轻链可变区包含含有序列RSSQSLVHSNRYTYLH(SEQ ID NO:1851)的CDR-L1、含有序列KVSNRRS(SEQ ID NO:1841)的CDR-L2和含有序列SQSTRVPYT(SEQ ID NO:1836)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述重链可变区包含含有序列SQWMN(SEQ ID NO:1901)的CDR-H1、含有序列RIYPGGGDTNYARKFQG(SEQ ID NO:1840)的CDR-H2和含有序列LLRNQPGESYAMDY(SEQ IDNO:1902)的CDR-H3；并且所述轻链可变区包含含有序列RSSQSLVHSNRYTYLH(SEQ ID NO:1851)的CDR-L1、含有序列KVSNRRS(SEQ ID NO:1841)的CDR-L2和含有序列SQSTRVPYT(SEQID NO:1836)的CDR-L3。
在一些实施方案中，抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含Kabat CDR和/或所述轻链可变区包含Kabat CDR。在一些实施方案中，所述重链可变区包含含有序列SQWMN(SEQ ID NO:1901)的CDR-H1、含有序列RIYPGEGDTNYARKFQG(SEQ ID NO:1848)的CDR-H2和含有序列LLRNQPGESYAMDY(SEQ ID NO:1902)的CDR-H3。在一些实施方案中，所述轻链可变区包含含有序列RSSQSLVHSNQYTYLH(SEQ ID NO:1849)的CDR-L1、含有序列KVSNRRS(SEQ ID NO:1841)的CDR-L2和含有序列SQSTRVPYT(SEQ ID NO:1836)的CDR-L3。在一些实施方案中，所述重链可变区包含含有序列SQWMN(SEQ ID NO:1901)的CDR-H1、含有序列RIYPGEGDTNYARKFQG(SEQ ID NO:1848)的CDR-H2和含有序列LLRNQPGESYAMDY(SEQ IDNO:1902)的CDR-H3；并且所述轻链可变区包含含有序列RSSQSLVHSNQYTYLH(SEQ ID NO:1849)的CDR-L1、含有序列KVSNRRS(SEQ ID NO:1841)的CDR-L2和含有序列SQSTRVPYT(SEQID NO:1836)的CDR-L3。
在一些实施方案中，抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:1734-1778和1798的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含选自SEQ ID NO:1799-1820和1825的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包含抗体AL2p-h50、AL2p-2、AL2p-3、AL2p-4、AL2p-5、AL2p-6、AL2p-7、AL2p-8、AL2p-9、AL2p-I0、AL2p-11、AL2p-I2、AL2p-13、AL2p-14、AL2p-15、AL2p-16、AL2p-17、AL2p-18、AL2p-19、AL2p-20、AL2p-21、AL2p-22、AL2p-23、AL2p-24、AL2p-25、AL2p-26、AL2p-27、AL2p-28、AL2p-29、AL2p-30、AL2p-31、AL2p-32、AL2p-33、AL2p-h77、AL2p-35、AL2p-36、AL2p-37、AL2p-38、AL2p-39、AL2p-40、AL2p-41、AL2p-42、AL2p-43、AL2p-44、AL2p-45、AL2p-46、AL2p-47、AL2p-48、AL2p-49、AL2p-50、AL2p-51、AL2p-52、AL2p-53、AL2p-54、AL2p-55、AL2p-56、AL2p-57、AL2p-58、AL2p-59、AL2p-60、AL2p-61或AL2p-62的重链可变区(如表E15所示)；和/或所述抗体包含抗体AL2p-h50、AL2p-2、AL2p-3、AL2p-4、AL2p-5、AL2p-6、AL2p-7、AL2p-8、AL2p-9、AL2p-10、AL2p-11、AL2p-12、AL2p-13、AL2p-14、AL2p-15、AL2p-16、AL2p-17、AL2p-18、AL2p-19、AL2p-20、AL2p-21、AL2p-22、AL2p-23、AL2p-24、AL2p-25、AL2p-26、AL2p-27、AL2p-28、AL2p-29、AL2p-30、AL2p-31、AL2p-32、AL2p-33、AL2p-h77、AL2p-35、AL2p-36、AL2p-37、AL2p-38、AL2p-39、AL2p-40、AL2p-41、AL2p-42、AL2p-43、AL2p-44、AL2p-45、AL2p-46、AL2p-47、AL2p-48、AL2p-49、AL2p-50、AL2p-51、AL2p-52、AL2p-53、AL2p-54、AL2p-55、AL2p-56、AL2p-57、AL2p-58、AL2p-59、AL2p-60、AL2p-61或AL2p-62的轻链可变区(如表E17所示)。在一些实施方案中：(a)所述重链可变区包含SEQ ID NO:1760的氨基酸序列，和/或所述轻链可变区包含SEQ IDNO:1804的氨基酸序列；(b)所述重链可变区包含SEQ ID NO:1766的氨基酸序列；和/或所述轻链可变区包含SEQ ID NO:1811的氨基酸序列；(c)所述重链可变区包含SEQ ID NO:1771的氨基酸序列；和/或所述轻链可变区包含SEQ ID NO:1815的氨基酸序列；(d)所述重链可变区包含SEQ ID NO:1777的氨基酸序列；和/或所述轻链可变区包含SEQ ID NO:1817的氨基酸序列；(e)所述重链可变区包含SEQ ID NO:1778的氨基酸序列；和/或所述轻链可变区包含SEQ ID NO:1818的氨基酸序列；(f)所述重链可变区包含SEQ ID NO:1766的氨基酸序列；和/或所述轻链可变区包含SEQ ID NO:1819的氨基酸序列；或(g)所述重链可变区包含SEQ ID NO:1760的氨基酸序列；和/或所述轻链可变区包含SEQ ID NO:1820的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含Fc区，所述Fc区包含选自SEQ ID NO:1853-1863的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含Fc区，所述Fc区包含SEQ ID NO:1853的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含Fc区，所述Fc区包含SEQ ID NO:1854的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含Fc区，所述Fc区包含SEQ ID NO:1855的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含Fc区，所述Fc区包含SEQ ID NO:1856的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含Fc区，所述Fc区包含SEQ ID NO:1857的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含Fc区，所述Fc区包含SEQ ID NO:1858的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含Fc区，所述Fc区包含SEQ ID NO:1859的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含Fc区，所述Fc区包含SEQ IDNO:1860的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含Fc区，所述Fc区包含SEQ ID NO:1861的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含Fc区，所述Fc区包含SEQ ID NO:1862的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含Fc区，所述Fc区包含SEQ ID NO:1863的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含重链，所述重链包含选自SEQ ID NO:1905-1920的氨基酸序列；和/或轻链，所述轻链包含选自SEQ ID NO:1921-1925的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含重链，所述重链包含选自SEQ ID NO:1905和1906的氨基酸序列；和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:1921的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含重链，所述重链包含选自SEQ ID NO:1907和1908的氨基酸序列；和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:1921的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含重链，所述重链包含选自SEQ ID NO:1909和1910的氨基酸序列；和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:1922的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含重链，所述重链包含选自SEQ ID NO:1911和1912的氨基酸序列；和轻链，所述轻链包含SEQID NO:1922的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含重链，所述重链包含选自SEQ IDNO:1913和1914的氨基酸序列；和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:1923的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含重链，所述重链包含选自SEQ ID NO:1915和1916的氨基酸序列；和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:1925的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含重链，所述重链包含选自SEQ ID NO:1917和1918的氨基酸序列；和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:1925的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含重链，所述重链包含选自SEQ ID NO:1919和1920的氨基酸序列；和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:1924的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述重链可变区包含SEQ ID NO:1760的氨基酸序列；和/或所述轻链可变区包含SEQ ID NO:1804的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述重链可变区包含SEQ ID NO:1766的氨基酸序列；和/或所述轻链可变区包含SEQ ID NO:1811的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述重链可变区包含SEQ ID NO:1771的氨基酸序列；和/或所述轻链可变区包含SEQ ID NO:1815的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述重链可变区包含SEQID NO:1777的氨基酸序列；和/或所述轻链可变区包含SEQ ID NO:1817的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述重链可变区包含SEQ ID NO:1778的氨基酸序列；和/或所述轻链可变区包含SEQ ID NO:1718的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述重链可变区包含SEQ ID NO:1766的氨基酸序列；和/或所述轻链可变区包含SEQ ID NO:1819的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述重链可变区包含SEQ ID NO:1760的氨基酸序列；和/或所述轻链可变区包含SEQ ID NO:1820的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:1734、1763和1779-1797的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含选自SEQ IDNO:1799、1811和1821-1824的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包含抗体AL2p-h19、AL2p-h21、AL2p-h22、AL2p-h23、AL2p-h24、AL2p-h25、AL2p-h26、AL2p-h27、AL2p-h28、AL2p-h29、AL2p-h30、AL2p-h31、AL2p-h32、AL2p-h33、AL2p-h34、AL2p-1135、AL2p-h36、AL2p-h42、AL2p-h43、AL2p-h44、AL2p-h47、AL2p-h59、AL2p-h76或AL2p-h90的重链可变区(如表E15所示)；和/或所述抗体包含抗体AL2p-h19、AL2p-h21、AL2p-h22、AL2p-h23、AL2p-h24、AL2p-h25、AL2p-h26、AL2p-h27、AL2p-h28、AL2p-h29、AL2p-h30、AL2p-h31、AL2p-h32、AL2p-h33、AL2p-h34、AL2p-h35、AL2p-h36、AL2p-h42、AL2p-h43、AL2p-h44、AL2p-h47、AL2p-h59、AL2p-h76或AL2p-h90的轻链可变区(如表E17所示)。
在一些实施方案中，抗体包含重链，所述重链包含选自SEQ ID NO:1905-1920的氨基酸序列；和/或轻链，所述轻链包含选自SEQ ID NO:1921-1925的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含重链，所述重链包含选自SEQ ID NO:1905和1906的氨基酸序列；和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:1921的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含重链，所述重链包含选自SEQ ID NO:1907和1908的氨基酸序列；和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:1921的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含重链，所述重链包含选自SEQ ID NO:1909和1910的氨基酸序列；和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:1922的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含重链，所述重链包含选自SEQ ID NO:1911和1912的氨基酸序列；和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:1922的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含重链，所述重链包含选自SEQ ID NO:1913和1914的氨基酸序列；和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:1923的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含重链，所述重链包含选自SEQ ID NO:1915和1916的氨基酸序列；和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:1925的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含重链，所述重链包含选自SEQ ID NO:1917和1918的氨基酸序列；和轻链，所述轻链包含SEQID NO:1925的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含重链，所述重链包含选自SEQ IDNO:1919和1920的氨基酸序列；和轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:1924的氨基酸序列。
在一些实施方案中，其可与任何前述实施方案组合。抗体是识别第一抗原和第二抗原的双特异性抗体，其中所述第一抗原是人TREM2或其天然存在的变体，并且所述第二抗原是：(a)促进跨血脑屏障转运的抗原；(b)促进跨血脑屏障转运的抗原，该抗原选自转铁蛋白受体(TR)、胰岛素受体(HIR)、***受体(IGFR)、低密度脂蛋白受体相关蛋白1和2(LPR-1和2)、白喉毒素受体、CRM197、美洲驼单结构域抗体、TMEM 30(A)、蛋白转导结构域、TAT、Syn-B、穿透素(penetratin)、聚精氨酸肽、血管肽(angiopeptide)和ANG1005；(c)选自致病肽或蛋白质或致病核酸的致病因子，其中所述致病核酸是反义GGCCCC(G2C4)重复扩增RNA，所述致病蛋白质选自淀粉样蛋白β、寡聚淀粉样蛋白β、淀粉样蛋白β斑块、淀粉样蛋白前体蛋白或其片段、τ蛋白(Tau)、TAPP蛋白、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72(9号染色体开放阅读框72)、c9RAN蛋白、朊病毒蛋白、PrPSc、亨廷顿蛋白(huntingtin)、降钙素、超氧化物歧化酶、失调蛋白(ataxin)、失调蛋白1、失调蛋白2、失调蛋白3、失调蛋白7、失调蛋白8、失调蛋白10、路易小体、心钠素、胰岛淀粉样多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、medin、催乳素、转甲状腺素蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角质上皮素、胱抑素、免疫球蛋白轻链AL、S-IBM蛋白、重复相关非ATG(RAN)翻译产物、二肽重复(DPR)肽、甘氨酸-丙氨酸(GA)重复肽、甘氨酸-脯氨酸(GP)重复肽、甘氨酸-精氨酸(GR)重复肽、脯氨酸-丙氨酸(PA)重复肽、泛素和脯氨酸-精氨酸(PR)重复肽；(d)在免疫细胞上表达的配体和/或蛋白质，其中所述配体和/或蛋白质选自CD40、OX40、ICOS、CD28、CD137/4-1BB、CD27、GITR、PD-L1、CTLA-4、PD-L2、PD-1、B7-H3、B7-H4、HVEM、BTLA、KIR、GAL9、TIM3、A2AR、LAG-3和磷脂酰丝氨酸；和(e)在一种或多种肿瘤细胞上表达的蛋白质、脂质、多糖或糖脂。在一些实施方案中，抗体特异性地结合人TREM2和食蟹猴TREM2。在一些实施方案中，所述抗体对人TREM2和/或食蟹猴TREM2的解离常数(KD)比包含含有SEQ ID NO:1734的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:1763的氨基酸序列的轻链可变区的抗TREM2抗体低了至少1倍；或者比包含含有SEQ ID NO:1798的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQID NO:1810的氨基酸序列的轻链可变区的抗TREM2抗体低了至少1倍。在一些实施方案中，所述抗体对人TREM2的解离常数(KD)在约9μM至约100pM的范围内或小于100pM，其中所述KD是在大约25℃的温度下确定的。在一些实施方案中，所述抗体对食蟹猴TREM2的解离常数(KD)在约50nM至约100pM的范围内或小于100pM，其中所述KD是在大约25℃的温度下确定的。在一些实施方案中，所述抗体以比包含含有SEQ ID NO:1734的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:1763的氨基酸序列的轻链可变区的抗TREM2抗体高至少10倍的亲和力结合初级人免疫细胞；或者以比包含含有SEQ ID NO:1798的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:1810的氨基酸序列的轻链可变区的抗TREM2抗体高至少10倍的亲和力结合初级人免疫细胞。在一些实施方案中，所述抗体聚集并活化TREM2信号传导的量比包含含有SEQID NO:1734的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:1763的氨基酸序列的轻链可变区的抗TREM2抗体聚集并活化TREM2信号传导的量高至少1倍；或者比包含含有SEQ ID NO:1798的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:1810的氨基酸序列的轻链可变区的抗TREM2抗体聚集并活化TREM2信号传导的量高至少1倍。在一些实施方案中，所述抗体增加体外免疫细胞存活的程度大于包含含有SEQ ID NO:1734的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:1763的氨基酸序列的轻链可变区的抗TREM2抗体；或者大于包含含有SEQ IDNO:1798的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:1810的氨基酸序列的轻链可变区的抗TREM2抗体。在一些实施方案中，抗体的体内半衰期低于人对照IgG1抗体。在一些实施方案中，抗体降低体内可溶性TREM2血浆水平的量比人对照IgG1抗体高至少25％。在一些实施方案中，抗体通过阻断裂解、抑制一种或多种金属蛋白酶和/或通过诱导内化来降低体内可溶性TREM2的血浆水平。在一些实施方案中，可溶性TREM2减少了约10％、20％、30％、40％或50％中的任一者。在一些实施方案中，所述抗体与选自AL2p-h50、AL2p-2、AL2p-3、AL2p-4、AL2p-5、AL2p-6、AL2p-7、AL2p-8、AL2p-9、AL2p-10、AL2p-11、AL2p-12、AL2p-13、AL2p-14、AL2p-15、AL2p-16、AL2p-17、AL2p-18、AL2p-19、AL2p-20、AL2p-21、AL2p-22、AL2p-23、AL2p-24、AL2p-25、AL2p-26、AL2p-27、AL2p-28、AL2p-29、AL2p-30、AL2p-31、AL2p-32、AL2p-33、AL2p-h77、AL2p-35、AL2p-36、AL2p-37、AL2p-38、AL2p-39、AL2p-40、AL2p-41、AL2p-42、AL2p-43、AL2p-44、AL2p-45、AL2p-46、AL2p-47、AL2p-48、AL2p-49、AL2p-50、AL2p-51、AL2p-52、AL2p-53、AL2p-54、AL2p-55、AL2p-56、AL2p-57、AL2p-58、AL2p-59、AL2p-60、AL2p-61、AL2p-62、AL2p-h19、AL2p-h21、AL2p-h22、AL2p-h23、AL2p-h24、AL2p-h25、AL2p-h26、AL2p-h27、AL2p-h28、AL2p-h29、AL2p-h30、AL2p-h31、AL2p-h32、AL2p-h33、AL2p-h34、AL2p-h35、AL2p-h36、AL2p-h42、AL2p-h43、AL2p-h44、AL2p-h47、AL2p-1159、AL2p-h76、AL2p-h90和它们的任何组合的一种或多种抗体竞争结合到TREM2。在一些实施方案中，抗体与选自以下的抗体结合基本相同的TREM2表位：AL2p-h50、AL2p-2、AL2p-3、AL2p-4、AL2p-5、AL2p-6、AL2p-7、AL2p-8、AL2p-9、AL2p-10、AL2p-11、AL2p-12、AL2p-13、AL2p-14、AL2p-15、AL2p-16、AL2p-17、AL2p-18、AL2p-19、AL2p-20、AL2p-21、AL2p-22、AL2p-23、AL2p-24、AL2p-25、AL2p-26、AL2p-27、AL2p-28、AL2p-29、AL2p-30、AL2p-31、AL2p-32、AL2p-33、AL2p-h77、AL2p-35、AL2p-36、AL2p-37、AL2p-38、AL2p-39、AL2p-40、AL2p-41、AL2p-42、AL2p-43、AL2p-44、AL2p-45、AL2p-46、AL2p-47、AL2p-48、AL2p-49、AL2p-50、AL2p-51、AL2p-52、AL2p-53、AL2p-54、AL2p-55、AL2p-56、AL2p-57、AL2p-58、AL2p-59、AL2p-60、AL2p-61、AL2p-62、AL2p-h19、AL2p-h21、AL2p-h22、AL2p-h23、AL2p-h24、AL2p-h25、AL2p-h26、AL2p-h27、AL2p-h28、AL2p-h29、AL2p-h30、AL2p-h31、AL2p-h32、AL2p-h33、AL2p-h34、AL2p-h35、AL2p-h36、AL2p-h42、AL2p-h43、AL2p-h44、AL2p-h47、AL2p-h59、AL2p-h76和AL2p-h90。在一些实施方案中，抗体结合SEQ ID NO:1的氨基酸残基149-157内的一个或多个氨基酸。在一些实施方案中，抗体结合选自SEQ ID NO:1的E151、D152和E156的一个或多个氨基酸残基。
在一些实施方案中，抗体是PCT专利申请公开号WO2019/028292A1的表2A、2B、2C、3A、3B、3C、4A-4D、5A-5D、6A、6B、7A或7B中公开的抗体，在下文中复制为表E1-E18。
表E1：抗TREM2抗体的重链HVR H1序列
表E2：抗TREM2抗体的重链HVR H2序列
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表E3：抗TREM2抗体的重链HVR H3序列
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表E4：抗TREM2抗体的轻链HVR Ll序列
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表E5：抗TREM2抗体的轻链HVR L2序列
表E6：抗TREM2抗体的轻链HVR L3序列
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表E7：抗TREM2抗体的重链框架1序列
表E8：抗TREM2抗体的重链框架2序列
表E9：抗TREM2抗体的重链框架3序列
表E10：抗TREM2抗体的重链框架4序列
表E11：抗TREM2抗体的轻链框架1序列
表E12：抗TREM2抗体的轻链框架2序列
表E13：抗TREM2抗体的轻链框架3序列
表E14：抗TREM2抗体的轻链框架4序列
表E15：抗TREM2抗体的重链可变区序列
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表E16：抗TREM2抗体的重链序列
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表E17：抗TREM2抗体的轻链可变区序列
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表E18：抗TREM2抗体的轻链序列
在一些实施方案中，表E1-E18中公开的每个轻链可变区和每个重链可变区以及其特定组合以及'573申请和本文中所描述的抗TREM2抗体的其他实施方案可连接到轻链恒定区(表EN1)和重链恒定区(表EN2)以分别形成完整的抗体轻链和重链，如下面进一步讨论的。此外，每个产生的重链和轻链序列可以组合形成完整的抗体结构。应当理解，本文所提供的重链和轻链可变区也可以连接到具有与本文列出的示例性序列不同的序列的其他恒定结构域。
F.PCT专利申请公开号WO2018/015573A1
在一些实施方案中，TREM2激动剂是如PCT专利申请公开号WO2018/015573A1(“'573申请”)(该申请全文以引用的方式并入本文)中所述的防止TREM2裂解的抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，TREM2结合剂包含抗体，所述抗体包含'573申请说明书中公开的轻链可变结构域和重链可变结构域，所述轻链可变结构域包含CDRL1、CDRL2和CDRL3，所述重链可变结构域包含CDRH1、CDRH2和CDRH3。在一些实施方案中，TREM2结合剂包含抗体，所述抗体包含'573申请说明书中公开的轻链可变结构域和重链可变结构域。
在一些实施方案中，抗体是抑制(优选防止)TREM2裂解的结合分子。更具体地，在本发明的上下文中，TREM2胞外域的裂解(即脱落)被本发明的结合分子抑制。在一些实施方案中，抗体是抑制(优选防止)TREM2裂解并活化TREM2活性的结合分子。在一些实施方案中，本文提供的结合分子在TREM2的胞外域内、优选在TREM2胞外域的茎区具有结合位点。
在一些实施方案中，所述抗体是：
(1)抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:1955的序列，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:1965的序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解；
(2)抗体，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:1955具有至少85％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少98％、以及最优选至少99％同一性的序列；并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:1965具有至少85％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少98％、以及最优选至少99％同一性的序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解；
(3)抗体，其中所述重链可变区的CDR1包含SEQ ID NO:1975的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR2包含SEQ ID NO:1985的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR3包含SEQ IDNO:1995的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR1包含SEQ ID NO:2005的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR2包含SEQ ID NO:2015的氨基酸序列；并且所述轻链可变区的CDR3包含SEQID NO:2025的氨基酸序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解；或
(4)抗体，其中所述重链可变区的CDR1包含与SEQ ID NO:1975具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、以及最优选至少85％同一性的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR2包含与SEQ ID NO:1985具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、甚至更优选至少85％、以及最优选至少90％同一性的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR3包含与SEQ IDNO:1995具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、甚至更优选至少85％、以及最优选至少90％同一性的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR1包含与SEQ ID NO:2005具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、甚至更优选至少85％、以及最优选至少90％同一性的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR2包含与SEQ ID NO:2015具有至少60％、优选100％同一性的氨基酸序列；并且所述轻链可变区的CDR3包含与SEQ ID NO:2025具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、以及最优选至少85％同一性的氨基酸序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解。
在一些实施方案中，所述抗体是抗体克隆14D3，其为：
(1)抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:1946的序列，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:1956的序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解；
(2)抗体，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:1946具有至少85％同一性的序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:1956具有至少85％同一性的序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解；
(3)抗体，其中所述重链可变区的CDR1包含SEQ ID NO:1966的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR2包含SEQ ID NO:1976的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR3包含SEQ IDNO:1986的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR1包含SEQ ID NO:1996的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR2包含SEQ ID NO:2006的氨基酸序列；并且所述轻链可变区的CDR3包含SEQID NO:2016的氨基酸序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解；或
(4)抗体，其中所述重链可变区的CDR1包含与SEQ ID NO:1966具有至少70％同一性的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR2包含与SEQ ID NO:1976具有至少70％同一性的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR3包含与SEQ ID NO:1986具有至少70％同一性的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR1包含与SEQ ID NO:1996具有至少70％同一性的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR2包含与SEQ ID NO:2006具有至少60％同一性的氨基酸序列；并且所述轻链可变区的CDR3包含与SEQ ID NO:2016具有至少70％同一性的氨基酸序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解。
在一些实施方案中，所述抗体是抗体克隆14D8，其为：
(1)抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:1947的序列，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:1957的序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解；
(2)抗体，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:1947具有至少85％同一性的序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:1957具有至少85％同一性的序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解；
(3)抗体，其中所述重链可变区的CDR1包含SEQ ID NO:1967的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR2包含SEQ ID NO:1977的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR3包含SEQ IDNO:1987的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR1包含SEQ ID NO:1997的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR2包含SEQ ID NO:2007的氨基酸序列；并且所述轻链可变区的CDR3包含SEQID NO:2017的氨基酸序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解；或
(4)抗体，其中所述重链可变区的CDR1包含与SEQ ID NO:1967具有至少70％同一性的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR2包含与SEQ ID NO:1977具有至少70％同一性的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR3包含与SEQ ID NO:1987具有至少70％同一性的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR1包含与SEQ ID NO:1997具有至少70％同一性的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR2包含与SEQ ID NO:2007具有至少60％同一性的氨基酸序列；并且所述轻链可变区的CDR3包含与SEQ ID NO:2017具有至少70％同一性的氨基酸序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解。
在一些实施方案中，所述抗体是抗体克隆7A12，其为：
(1)抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:1948的序列，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:1958的序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解；
(2)抗体，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:1948具有至少85％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少98％、以及最优选至少99％同一性的序列；并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:1958具有至少85％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少98％、以及最优选至少99％同一性的序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解；
(3)抗体，其中所述重链可变区的CDR1包含SEQ ID NO:1968的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR2包含SEQ ID NO:1978的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR3包含SEQ IDNO:1988的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR1包含SEQ ID NO:1998的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR2包含SEQ ID NO:2008的氨基酸序列；并且所述轻链可变区的CDR3包含SEQID NO:2018的氨基酸序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解；或
(4)抗体，其中所述重链可变区的CDR1包含与SEQ ID NO:1968具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、以及最优选至少85％同一性的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR2包含与SEQ ID NO:1978具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、甚至更优选至少85％、以及最优选至少90％同一性的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR3包含与SEQ IDNO:1988具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、甚至更优选至少85％、以及最优选至少90％同一性的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR1包含与SEQ ID NO:1998具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、甚至更优选至少85％、以及最优选至少90％同一性的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR2包含与SEQ ID NO:2008具有至少60％、优选100％同一性的氨基酸序列；并且所述轻链可变区的CDR3包含与SEQ ID NO:2018具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、以及最优选至少85％同一性的氨基酸序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解。
在一些实施方案中，所述抗体是抗体克隆8A11，其为：
(1)抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:1949的序列，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:1959的序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解；
(2)抗体，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:1949具有至少85％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少98％、以及最优选至少99％同一性的序列；并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:1959具有至少85％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少98％、以及最优选至少99％同一性的序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解；
(3)抗体，其中所述重链可变区的CDR1包含SEQ ID NO:1969的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR2包含SEQ ID NO:1979的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR3包含SEQ IDNO:1989的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR1包含SEQ ID NO:1999的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR2包含SEQ ID NO:2009的氨基酸序列；并且所述轻链可变区的CDR3包含SEQID NO:2019的氨基酸序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解；或
(4)抗体，其中所述重链可变区的CDR1包含与SEQ ID NO:1969具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、以及最优选至少85％同一性的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR2包含与SEQ ID NO:1979具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、甚至更优选至少85％、以及最优选至少90％同一性的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR3包含与SEQ IDNO:1989具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、甚至更优选至少85％、以及最优选至少90％同一性的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR1包含与SEQ ID NO:1999具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、甚至更优选至少85％、以及最优选至少90％同一性的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR2包含与SEQ ID NO:2009具有至少60％、优选100％同一性的氨基酸序列；并且所述轻链可变区的CDR3包含与SEQ ID NO:2019具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、以及最优选至少85％同一性的氨基酸序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解。
在一些实施方案中，所述抗体是抗体克隆21A3，其为：
(1)抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:1950的序列，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:1960的序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解；
(2)抗体，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:1950具有至少85％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少98％、以及最优选至少99％同一性的序列；并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:1960具有至少85％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少98％、以及最优选至少99％同一性的序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解；
(3)抗体，其中所述重链可变区的CDR1包含SEQ ID NO:1970的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR2包含SEQ ID NO:1980的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR3包含SEQ IDNO:1990的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR1包含SEQ ID NO:2000的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR2包含SEQ ID NO:2010的氨基酸序列；并且所述轻链可变区的CDR3包含SEQID NO:2020的氨基酸序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解；或
(4)抗体，其中所述重链可变区的CDR1包含与SEQ ID NO:1970具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、以及最优选至少85％同一性的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR2包含与SEQ ID NO:1980具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、甚至更优选至少85％、以及最优选至少90％同一性的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR3包含与SEQ IDNO:1990具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、甚至更优选至少85％、以及最优选至少90％同一性的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR1包含与SEQ ID NO:2000具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、甚至更优选至少85％、以及最优选至少90％同一性的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR2包含与SEQ ID NO:2010具有至少60％、优选100％同一性的氨基酸序列；并且所述轻链可变区的CDR3包含与SEQ ID NO:2020具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、以及最优选至少85％同一性的氨基酸序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解。
在一些实施方案中，所述抗体是抗体克隆10C3，其为：
(1)抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:1951的序列，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:1961的序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解；
(2)抗体，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:1951具有至少85％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少98％、以及最优选至少99％同一性的序列；并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:1961具有至少85％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少98％、以及最优选至少99％同一性的序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解；
(3)抗体，其中所述重链可变区的CDR1包含SEQ ID NO:1971的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR2包含SEQ ID NO:1981的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR3包含SEQ IDNO:1991的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR1包含SEQ ID NO:2001的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR2包含SEQ ID NO:2011的氨基酸序列；并且所述轻链可变区的CDR3包含SEQID NO:2021的氨基酸序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解；或
(4)抗体，其中所述重链可变区的CDR1包含与SEQ ID NO:1971具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、以及最优选至少85％同一性的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR2包含与SEQ ID NO:1981具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、甚至更优选至少85％、以及最优选至少90％同一性的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR3包含与SEQ IDNO:1991具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、甚至更优选至少85％、以及最优选至少90％同一性的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR1包含与SEQ ID NO:2001具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、甚至更优选至少85％、以及最优选至少90％同一性的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR2包含与SEQ ID NO:2011具有至少60％、优选100％同一性的氨基酸序列；并且所述轻链可变区的CDR3包含与SEQ ID NO:2021具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、以及最优选至少85％同一性的氨基酸序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解。
在一些实施方案中，所述抗体是抗体克隆18F9，其为：
(1)抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:1952的序列，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:1962的序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解；
(2)抗体，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:1952具有至少85％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少98％、以及最优选至少99％同一性的序列；并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:1962具有至少85％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少98％、以及最优选至少99％同一性的序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解；
(3)抗体，其中所述重链可变区的CDR1包含SEQ ID NO:1972的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR2包含SEQ ID NO:1982的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR3包含SEQ IDNO:1992的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR1包含SEQ ID NO:2002的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR2包含SEQ ID NO:2012的氨基酸序列；并且所述轻链可变区的CDR3包含SEQID NO:2022的氨基酸序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解；或
(4)抗体，其中所述重链可变区的CDR1包含与SEQ ID NO:1972具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、以及最优选至少85％同一性的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR2包含与SEQ ID NO:1982具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、甚至更优选至少85％、以及最优选至少90％同一性的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR3包含与SEQ IDNO:1992具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、甚至更优选至少85％、以及最优选至少90％同一性的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR1包含与SEQ ID NO:2002具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、甚至更优选至少85％、以及最优选至少90％同一性的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR2包含与SEQ ID NO:2012具有至少60％、优选100％同一性的氨基酸序列；并且所述轻链可变区的CDR3包含与SEQ ID NO:2022具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、以及最优选至少85％同一性的氨基酸序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解。
在一些实施方案中，所述抗体是抗体克隆15C5，其为：
(1)抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:1953的序列，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:1963的序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解；
(2)抗体，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:1953具有至少85％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少98％、以及最优选至少99％同一性的序列；并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:1963具有至少85％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少98％、以及最优选至少99％同一性的序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解；
(3)抗体，其中所述重链可变区的CDR1包含SEQ ID NO:1973的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR2包含SEQ ID NO:1983的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR3包含SEQ IDNO:1993的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR1包含SEQ ID NO:2003的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR2包含SEQ ID NO:2013的氨基酸序列；并且所述轻链可变区的CDR3包含SEQID NO:2023的氨基酸序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解；或
(4)抗体，其中所述重链可变区的CDR1包含与SEQ ID NO:1973具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、以及最优选至少85％同一性的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR2包含与SEQ ID NO:1983具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、甚至更优选至少85％、以及最优选至少90％同一性的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR3包含与SEQ IDNO:1993具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、甚至更优选至少85％、以及最优选至少90％同一性的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR1包含与SEQ ID NO:2003具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、甚至更优选至少85％、以及最优选至少90％同一性的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR2包含与SEQ ID NO:2013具有至少60％、优选100％同一性的氨基酸序列；并且所述轻链可变区的CDR3包含与SEQ ID NO:2023具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、以及最优选至少85％同一性的氨基酸序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解。
在一些实施方案中，所述抗体是抗体克隆1G6，其为：
(1)抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:1954的序列，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:1964的序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解；
(2)抗体，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:1954具有至少85％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少98％、以及最优选至少99％同一性的序列；并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:1964具有至少85％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少98％、以及最优选至少99％同一性的序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解；
(3)抗体，其中所述重链可变区的CDR1包含SEQ ID NO:1974的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR2包含SEQ ID NO:1984的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR3包含SEQ IDNO:1994的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR1包含SEQ ID NO:2004的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR2包含SEQ ID NO:2014的氨基酸序列；并且所述轻链可变区的CDR3包含SEQID NO:2024的氨基酸序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解；或
(4)抗体，其中所述重链可变区的CDR1包含与SEQ ID NO:1974具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、以及最优选至少85％同一性的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR2包含与SEQ ID NO:1984具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、甚至更优选至少85％、以及最优选至少90％同一性的氨基酸序列；所述重链可变区的CDR3包含与SEQ IDNO:1994具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、甚至更优选至少85％、以及最优选至少90％同一性的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR1包含与SEQ ID NO:2004具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、甚至更优选至少85％、以及最优选至少90％同一性的氨基酸序列；所述轻链可变区的CDR2包含与SEQ ID NO:2014具有至少60％、优选100％同一性的氨基酸序列；并且所述轻链可变区的CDR3包含与SEQ ID NO:2024具有至少70％、优选至少75％、更优选至少80％、以及最优选至少85％同一性的氨基酸序列；并且其中所述抗体抑制TREM2裂解。
在一些实施方案中，抗体是PCT专利申请公开号WO2018/015573A1的图9中公开的抗体，在下文中复制为表F1-F4。
表F1
表F2
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表F3
表F4
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在一些实施方案中，上表中公开的每个轻链可变区和每个重链可变区以及其特定组合以及'573申请和本文中所描述的抗TREM2抗体的其他实施方案可连接到轻链恒定区(表EN1)和重链恒定区(表EN2)上分别形成完整的抗体轻链和重链，如下面进一步讨论的。此外，每个产生的重链和轻链序列可以组合形成完整的抗体结构。应当理解，本文所提供的重链和轻链可变区也可以连接到具有与本文列出的示例性序列不同的序列的其他恒定结构域。
G.PCT专利申请公开号WO2019/055841A1
在一些实施方案中，TREM2激动剂是如PCT专利申请公开号WO2019/055841A1(“'841申请”)(该申请全文以引用的方式并入本文)中所述的抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，TREM2结合剂包含抗体，所述抗体包含'841申请说明书中公开的轻链可变结构域和重链可变结构域，所述轻链可变结构域包含CDRL1、CDRL2和CDRL3，所述重链可变结构域包含CDRH1、CDRH2和CDRH3。在一些实施方案中，TREM2结合剂包含抗体，所述抗体包含'841申请说明书中公开的轻链可变结构域和重链可变结构域。
在一些实施方案中，抗体包含一个或多个(例如，一个、两个、三个、四个、五个或全部六个)选自以下的CDR：
(a)重链CDR1序列，其与SEQ ID NO:2049、2077、2080、2086、2092、2098、2103、2109、2115、2122、2126、2347和2355中任一者的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性或者相对于SEQ ID NO:2049、2077、2080、2086、2092、2098、2103、2109、2115、2122、2126、2347和2355中任一者的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代；
(b)重链CDR2序列，其与SEQ ID NO:2050、2078、2081、2087、2093、2099、2104、2110、2116、2120、2123、2127、2348和2356中任一者的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或者相对于SEQ ID NO:2050、2078、2081、2087、2093、2099、2104、2110、2116、2120、2123、2127、2348和2356中任一者的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代；
(c)重链CDR3序列，其与SEQ ID NO:2051、2082、2088、2094、2100、2105、2111、2117、2124、2128、2349和2357中任一者的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性或者相对于SEQ ID NO:2051、2082、2088、2094、2100、2105、2111、2117、2124、2128、2349和2357中任一者的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代；
(d)轻链CDR1序列，其与SEQ ID NO:2052、2083、2089、2095、2101、2106、2112、2118、2129和2351中任一者的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性或者相对于SEQ IDNO:2052、2083、2089、2095、2101、2106、2112、2118、2129和2351中任一者的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代；
(e)轻链CDR2序列，其与SEQ ID NO:2053、2079、2084、2090、2096、2107、2113、2352和2359中任一者的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性或者相对于SEQ ID NO:2053、2079、2084、2090、2096、2107、2113、2352和2359中任一者的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代；和
(f)轻链CDR3序列，其与SEQ ID NO:2054、2085、2091、2097、2102、2108、2114、2119、2121、2125、2130和2353中任一者的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性或者相对于SEQ ID NO:2054、2085、2091、2097、2102、2108、2114、2119、2121、2125、2130和2353中任一者的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代。
在一些实施方案中，所述抗体包含：
(a)含有SEQ ID NO:2049的氨基酸序列的重链CDR1序列、含有SEQ ID NO:2050的氨基酸序列的重链CDR2序列、含有SEQ ID NO:2051的氨基酸序列的重链CDR3序列、含有SEQID NO:2052的氨基酸序列的轻链CDR1序列、含有SEQ ID NO:2052的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含有SEQ ID NO:2053的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(b)含有SEQ ID NO:2077的氨基酸序列的重链CDR1序列、含有SEQ ID NO:2078的氨基酸序列的重链CDR2序列、含有SEQ ID NO:2051的氨基酸序列的重链CDR3序列、含有SEQID NO:2052的氨基酸序列的轻链CDR1序列、含有SEQ ID NO:2079的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含有SEQ ID NO:2054的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(c)含有SEQ ID NO:2080的氨基酸序列的重链CDR1序列、含有SEQ ID NO:2081的氨基酸序列的重链CDR2序列、含有SEQ ID NO:2082的氨基酸序列的重链CDR3序列、含有SEQID NO:2083的氨基酸序列的轻链CDR1序列、含有SEQ ID NO:2084的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含有SEQ ID NO:2085的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(d)含有SEQ ID NO:2086的氨基酸序列的重链CDR1序列、含有SEQ ID NO:2087的氨基酸序列的重链CDR2序列、含有SEQ ID NO:2088的氨基酸序列的重链CDR3序列、序列含有SEQ ID NO:2089的氨基酸序列的轻链CDR1、含有SEQ ID NO:2090的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含有SEQ ID NO:2091的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(e)含有SEQ ID NO:2092的氨基酸序列的重链CDR1序列、含有SEQ ID NO:2093的氨基酸序列的重链CDR2序列、含有SEQ ID NO:2094的氨基酸序列的重链CDR3序列、含有SEQID NO:2095的氨基酸序列的轻链CDR1序列、含有SEQ ID NO:2096的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含有SEQ ID NO:2097的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或(f)含有SEQ ID NO:2098的氨基酸序列的重链CDR1序列、含有SEQ ID NO:2099的氨基酸序列的重链CDR2序列、含有SEQID NO:2100的氨基酸序列的重链CDR3序列、含有SEQ ID NO:2101的氨基酸序列的轻链CDR1序列、含有SEQ ID NO:2079的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含有SEQ ID NO:2102的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(g)含有SEQ ID NO:2103的氨基酸序列的重链CDR1序列、含有SEQ ID NO:2104的氨基酸序列的重链CDR2序列、含有SEQ ID NO:2105的氨基酸序列的重链CDR3序列、含有SEQID NO:2106的氨基酸序列的轻链CDR1序列、含有SEQ ID NO:2107的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含有SEQ ID NO:2108的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(h)含有SEQ ID NO:2109的氨基酸序列的重链CDR1序列、含有SEQ ID NO:2110的氨基酸序列的重链CDR2序列、含有SEQ ID NO:2111的氨基酸序列的重链CDR3序列、含有SEQID NO:2112的氨基酸序列的轻链CDR1序列、含有SEQ ID NO:2113的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含有SEQ ID NO:2114的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(i)含有SEQ ID NO:2115的氨基酸序列的重链CDR1序列、含有SEQ ID NO:2116的氨基酸序列的重链CDR2序列、含有SEQ ID NO:2117的氨基酸序列的重链CDR3序列、含有SEQID NO:2118的氨基酸序列的轻链CDR1序列、含有SEQ ID NO:2119的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含有SEQ ID NO:2119的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(j)含有SEQ ID NO:2115的氨基酸序列的重链CDR1序列、含有SEQ ID NO:2120的氨基酸序列的重链CDR2序列、含有SEQ ID NO:2117的氨基酸序列的重链CDR3序列、含有SEQID NO:2118的氨基酸序列的轻链CDR1序列、含有SEQ ID NO:2079的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含有SEQ ID NO:2121的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(k)含有SEQ ID NO:2123的氨基酸序列的重链CDR1序列、含有SEQ ID NO:2132的氨基酸序列的重链CDR2序列、含有SEQ ID NO:2133的氨基酸序列的重链CDR3序列、含有SEQID NO:2102的氨基酸序列的轻链CDR1序列、含有SEQ ID NO:2079的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含有SEQ ID NO:2125的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(1)含有SEQ ID NO:2126的氨基酸序列的重链CDR1序列、含有SEQ ID NO:2127的氨基酸序列的重链CDR2序列、含有SEQ ID NO:2128的氨基酸序列的重链CDR3序列、含有SEQID NO:2129的氨基酸序列的轻链CDR1序列、含有SEQ ID NO:2079的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含有SEQ ID NO:2130的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(m)含有SEQ ID NO:2347的氨基酸序列的重链CDR1序列、含有SEQ ID NO:2348的氨基酸序列的重链CDR2序列、含有SEQ ID NO:2349的氨基酸序列的重链CDR3序列、含有SEQID NO:2351的氨基酸序列的轻链CDR1序列、含有SEQ ID NO:2352的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含有SEQ ID NO:2353的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(n)含有SEQ ID NO:2355的氨基酸序列的重链CDR1序列、含有SEQ ID NO:2356的氨基酸序列的重链CDR2序列、含有SEQ ID NO:2357的氨基酸序列的重链CDR3序列、序列含有SEQ ID NO:2089的氨基酸序列的轻链CDR1、含有SEQ ID NO:2359的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含有SEQ ID NO:2091的氨基酸序列的轻链CDR3序列。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合部分包含：
(a)含有与SEQ ID NO:2047具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和含有与SEQ ID NO:2048具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(b)含有与SEQ ID NO:2055具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和含有与SEQ ID NO:2066具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(c)含有与SEQ ID NO:2056具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和含有与SEQ ID NO:2067具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(d)含有与SEQ ID NO:2057具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和含有与SEQ ID NO:2068具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(e)含有与SEQ ID NO:2058具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和含有与SEQ ID NO:2069具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(f)含有与SEQ ID NO:2059具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和含有与SEQ ID NO:2070具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(g)含有与SEQ ID NO:2060具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和含有与SEQ ID NO:2071具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(h)含有与SEQ ID NO:2061具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和含有与SEQ ID NO:2072具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(i)含有与SEQ ID NO:2062具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和含有与SEQ ID NO:2073具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(j)含有与SEQ ID NO:2063具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和含有与SEQ ID NO:2074具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(k)含有与SEQ ID NO:2064具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和含有与SEQ ID NO:2075具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(l)含有与SEQ ID NO:2065具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和含有与SEQ ID NO:2076具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(m)含有与SEQ ID NO:2346具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和含有与SEQ ID NO:2350具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(n)含有与SEQ ID NO:2354具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和含有与SEQ ID NO:2358具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体是PCT专利申请公开号WO2019/055841A1的表15中公开的抗体，在下文中复制为表G1。在一些实施方案中，抗体是包含含有表G1中公开的CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变结构域以及含有CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变结构域的抗体。
表G1
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在一些实施方案中，上表中公开的每个轻链可变区和每个重链可变区以及其特定组合以及'841申请和本文中所描述的抗TREM2抗体的其他实施方案可连接到轻链恒定区(表EN1)和重链恒定区(表EN2)上分别形成完整的抗体轻链和重链，如下面进一步讨论的。此外，每个产生的重链和轻链序列可以组合形成完整的抗体结构。应当理解，本文所提供的重链和轻链可变区也可以连接到具有与本文列出的示例性序列不同的序列的其他恒定结构域。
H.PCT专利申请公开号WO2019/118513A1
在一些实施方案中，TREM2激动剂是如PCT专利申请公开号WO2019/118513A1(“'513申请”)(该申请全文以引用的方式并入本文)中所述的抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，TREM2结合剂包含抗体，所述抗体包含'513申请说明书中公开的轻链可变结构域和重链可变结构域，所述轻链可变结构域包含CDRL1、CDRL2和CDRL3，所述重链可变结构域包含CDRH1、CDRH2和CDRH3。在一些实施方案中，TREM2结合剂包含抗体，所述抗体包含'513申请说明书中公开的轻链可变结构域和重链可变结构域。
在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO:2514所示的序列的CDR-H1、含有SEQID NO:2515所示的序列的CDR-H2、含有SEQ ID NO:11所示的序列的CDR-H3、含有SEQ IDNO:2517所示的序列的CDR-L1、含有SEQ ID NO:2518所示的序列的CDR-L2和含有SEQ IDNO:2519所示的序列的CDR-L3。
在一些实施方案中，抗体是无岩藻糖基化的，并且包含SEQ ID NO:2506所示的VH序列、SEQ ID NO:2507所示的VL序列和活性人IgG1 Fc区。
在一些实施方案中，抗体包含SEQ ID NO:2512所示序列的所有3个重链CDR和SEQID NO:2513所示序列的所有3个轻链CDR。
在一些实施方案中，抗体包含SEQ ID NO:2512所示序列的位置97处的A至T取代；以及SEQ ID NO:2512所示序列的位置98处的K至R取代。
在一些实施方案中，抗体包含SEQ ID NO:2506、2508或2510所示的VH序列。
在一些实施方案中，抗体包含SEQ ID NO:2506、2508或2510所示的VH序列和SEQID NO:2507、2509或2511所示的VL序列。在一些实施方案中，抗体包含SEQ ID NO:2506所示的VH序列。
在一些实施方案中，抗体包含SEQ ID NO:2506所示的VH序列和SEQ ID NO:2507所示的VL序列。
在一些实施方案中，抗体是37012抗体(参见表H1)。
在一些实施方案中，抗体是具有在表1A中公开的VL、VH、全长重链序列或全长轻链序列或在PCT专利申请公开号WO2019/118513A1的表1B中公开的CDR序列的抗体，所述VL、VH、全长重链序列或全长轻链序列或所述CDR序列在下文中分别复制为表H1和H2。
表H1
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表H2：人源化抗体的CDR
CDR 序列
CDR-H1 FSNYYMA(SEQ ID NO:2514)
CDR-H2 SLTNSGGSTY(SEQ ID NO:2515)
CDR-H3 EWAGSGY(SEQ ID NO:2516)
CDR-L1 NVGNNLA(SEQ ID NO:2517)
CDR-L2 YTSNRFT(SEQ ID NO:2518)
CDR-L3 RIYNSPW(SEQ ID NO:2519)
在一些实施方案中，上表中公开的每个轻链可变区和每个重链可变区以及其特定组合以及'513申请和本文中所描述的抗TREM2抗体的其他实施方案可连接到轻链恒定区(表EN1)和重链恒定区(表EN2)上分别形成完整的抗体轻链和重链，如下面进一步讨论的。此外，每个产生的重链和轻链序列可以组合形成完整的抗体结构。应当理解，本文所提供的重链和轻链可变区也可以连接到具有与本文列出的示例性序列不同的序列的其他恒定结构域。
I.PCT专利申请公开号WO2020/055975A1
在一些实施方案中，TREM2激动剂是如PCT专利申请公开号WO2020/055975A1(“'975申请”)(该申请全文以引用的方式并入本文)中所述的抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，TREM2结合剂包含抗体，所述抗体包含'975申请说明书中公开的轻链可变结构域和重链可变结构域，所述轻链可变结构域包含CDRL1、CDRL2和CDRL3，所述重链可变结构域包含CDRH1、CDRH2和CDRH3。在一些实施方案中，TREM2结合剂包含抗体，所述抗体包含'975申请说明书中公开的轻链可变结构域和重链可变结构域。
在一些实施方案中，抗体包含(a)轻链可变区，所述轻链可变区包含衍生自SEQ IDNO:2539的L1、衍生自SEQ ID NO:2539的L2、衍生自SEQ ID NO:2539的L3、或它们的任何组合；和/或(b)重链可变区，所述重链可变区包含衍生自SEQ ID NO:2540的H1、衍生自SEQ IDNO:2540的H2、衍生自SEQ ID NO:2540的H3、或它们的任何组合。
在一些实施方案中，抗体包含(a)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:2541的L1、含有氨基酸序列IVS的L2、SEQ ID NO:2542的L3、或它们的任何组合；和/或(b)重链可变区，所述重链可变区包含含有SEQ ID NO:2543的H1、含有SEQ ID NO:2544的H2、含有SEQ ID NO:2545的H3、或它们的任何组合。
在一些实施方案中，抗体包含(a)轻链可变区，所述轻链可变区包含衍生自SEQ IDNO:2546的L1、衍生自SEQ ID NO:2546的L2、衍生自SEQ ID NO:2546的L3、或它们的任何组合；和/或(b)重链可变区，所述重链可变区包含衍生自SEQ ID NO:2547的H1、衍生自SEQ IDNO:2547的H2、衍生自SEQ ID NO:2547的H3、或它们的任何组合。
在一些实施方案中，抗体包含(a)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:2548的L1、含有氨基酸序列KVS的L2、SEQ ID NO:2549的L3、或它们的任何组合；和/或(b)重链可变区，所述重链可变区包含含有SEQ ID NO:2550的H1、含有SEQ ID NO:2551的H2、含有SEQ ID NO:2552的H3、或它们的任何组合。
在一些实施方案中，抗体包含(a)轻链可变区，所述轻链可变区包含衍生自SEQ IDNO:2553的L1、衍生自SEQ ID NO:2553的L2、衍生自SEQ ID NO:2553的L3、或它们的任何组合；和/或(b)重链可变区，所述重链可变区包含衍生自SEQ ID NO:2554的H1、衍生自SEQ IDNO:2554的H2、衍生自SEQ ID NO:2554的H3、或它们的任何组合。
在一些实施方案中，抗体包含(a)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:2555的L1、含有氨基酸序列KVS的L2、SEQ ID NO:2556的L3、或它们的任何组合；和/或(b)重链可变区，所述重链可变区包含含有SEQ ID NO:2557的H1、含有SEQ ID NO:2558的H2、含有SEQ ID NO:2559的H3、或它们的任何组合。
在一些实施方案中，抗体包含(a)轻链可变区，所述轻链可变区包含衍生自SEQ IDNO:2560的L1、衍生自SEQ ID NO:2560的L2、衍生自SEQ ID NO:2560的L3、或它们的任何组合；和/或(b)重链可变区，所述重链可变区包含衍生自SEQ ID NO:2561的H1、衍生自SEQ IDNO:2561的H2、衍生自SEQ ID NO:2561的H3、或它们的任何组合。
在一些实施方案中，抗体包含(a)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:2562的L1、含有氨基酸序列KVS的L2、SEQ ID NO:2563的L3、或它们的任何组合；和/或(b)重链可变区，所述重链可变区包含含有SEQ ID NO:2564的H1、含有SEQ ID NO:2565的H2、含有SEQ ID NO:2566的H3、或它们的任何组合。
在一些实施方案中，抗体包含(a)轻链可变区，所述轻链可变区包含衍生自SEQ IDNO:2567的L1、衍生自SEQ ID NO:2567的L2、衍生自SEQ ID NO:2567的L3、或它们的任何组合；和/或(b)重链可变区，所述重链可变区包含衍生自SEQ ID NO:2568的H1、衍生自SEQ IDNO:2568的H2、衍生自SEQ ID NO:2568的H3、或它们的任何组合。本文考虑了包含抗体的组合物，包括但不限于药物组合物。在某些实施方案中，抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，抗体包含(a)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:2569的L1、含有氨基酸序列KVS的L2、SEQ ID NO:2570的L3、或它们的任何组合；和/或(b)重链可变区，所述重链可变区包含含有SEQ ID NO:2571的H1、含有SEQ ID NO:2572的H2、含有SEQ ID NO:2573的H3、或它们的任何组合。
在一些实施方案中，抗体包含(a)轻链可变区，所述轻链可变区包含衍生自SEQ IDNO:2574的L1、衍生自SEQ ID NO:2574的L2、衍生自SEQ ID NO:2574的L3、或它们的任何组合；和/或(b)重链可变区，所述重链可变区包含衍生自SEQ ID NO:2575的H1、衍生自SEQ IDNO:2575的H2、衍生自SEQ ID NO:2575的H3、或它们的任何组合。
在一些实施方案中，抗体包含(a)轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:2576的L1、含有氨基酸序列WAS的L2、SEQ ID NO:2577的L3、或它们的任何组合；和/或(b)重链可变区，所述重链可变区包含含有SEQ ID NO:2578的H1、含有SEQ ID NO:2579的H2、含有SEQ ID NO:2580的H3、或它们的任何组合。
在一些实施方案中，抗体是HJ23.4、HJ23.7、HJ23.8、HJ23.9、HJ23.10或HJ23.13。在一些实施方案中，抗体是衍生自HJ23.4、HJ23.7、HJ23.8、HJ23.9、HJ23.10或HJ23.13的人源化抗体。产生抗体HJ23.4、HJ23.7、HJ23.8、HJ23.9、HJ23.10和HJ23.13的杂交瘤的登录号以及它们各自的轻链可变区和重链可变区记录在表I1中：
表I1
在一些实施方案中，抗体是PCT专利申请公开号WO2020/055975A1的实施方案2所附的表A和B或摘要表中公开的抗体，在下文中复制为表I2-4。
表I2
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表I3
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表I4
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在一些实施方案中，上文公开的每个轻链可变区和每个重链可变区(包括表17B(例如，抗体1-378)和表17C(抗体1-252)中的那些)可连接到轻链恒定区(表EN1)和重链恒定区(表EN2)以分别形成完整的抗体轻链和重链，如下文进一步讨论的。此外，每个产生的重链和轻链序列可以组合形成完整的抗体结构。应当理解，本文所提供的重链和轻链可变区也可以连接到具有与本文列出的示例性序列不同的序列的其他恒定结构域。
J.PCT专利申请公开号WO2020/079580A1
在一些实施方案中，TREM2激动剂是如PCT专利申请公开号WO2020/079580A1(“'580申请”)(该申请全文以引用的方式并入本文)中所述的抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，TREM2结合剂包含抗体，所述抗体包含'580申请说明书中公开的轻链可变结构域和重链可变结构域，所述轻链可变结构域包含CDRL1、CDRL2和CDRL3，所述重链可变结构域包含CDRH1、CDRH2和CDRH3。在一些实施方案中，TREM2结合剂包含抗体，所述抗体包含'580申请说明书中公开的轻链可变结构域和重链可变结构域。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
a)含有SEQ ID NO:2623或SEQ ID NO:2626或SEQ ID NO:2627或SEQ ID NO:2629的重链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2624或SEQ ID NO:2628或SEQ ID NO:2630的重链可变区CDR2；含有SEQ ID NO:2625或SEQ ID NO:2631的重链可变区CDR3；含有SEQ ID NO:2636或SEQ ID NO:2639或SEQ ID NO:2642的轻链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2637或SEQ IDNO:2640的轻链可变区CDR2；和含有SEQ ID NO:2638或SEQ ID NO:2641的轻链可变区CDR3；
b)含有SEQ ID NO:2586或SEQ ID NO:2589或SEQ ID NO:2590或SEQ ID NO:2592的重链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2587或SEQ ID NO:2591或SEQ ID NO:2593的重链可变区CDR2；含有SEQ ID NO:2588或SEQ ID NO:2594的重链可变区CDR3；含有SEQ ID NO:2599或SEQ ID NO:2602或SEQ ID NO:2605的轻链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2600或SEQ IDNO:2603的轻链可变区CDR2；和含有SEQ ID NO:2601或SEQ ID NO:2604的轻链可变区CDR3；
c)含有SEQ ID NO:2586或SEQ ID NO:2589或SEQ ID NO:2590或SEQ ID NO:2592的重链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2587或SEQ ID NO:2591或SEQ ID NO:2593的重链可变区CDR2；含有SEQ ID NO:2588或SEQ ID NO:2594的重链可变区CDR3；含有SEQ ID NO:2599或SEQ ID NO:2602或SEQ ID NO:2605的轻链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2600或SEQ IDNO:2603的轻链可变区CDR2；和含有SEQ ID NO:2660或SEQ ID NO:2661的轻链可变区CDR3；或
d)含有SEQ ID NO:2666或SEQ ID NO:2669或SEQ ID NO:2670或SEQ ID NO:2672的重链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2667或SEQ ID NO:2671或SEQ ID NO:2673的重链可变区CDR2；含有SEQ ID NO:2668或SEQ ID NO:2674的重链可变区CDR3；含有SEQ ID NO:2679或SEQ ID NO:2682或SEQ ID NO:2685的轻链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2680或SEQ IDNO:2683的轻链可变区CDR2；和含有SEQ ID NO:2681或SEQ ID NO:2684的轻链可变区CDR3。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
a)与SEQ ID NO:2595或与SEQ ID NO:2632具有至少95％序列同一性的VH多肽序列，以及与SEQ ID NO:2606或与SEQ ID NO:2643具有至少95％序列同一性的VL多肽序列；或
b)与SEQ ID NO:2595或与SEQ ID NO:2675具有至少95％序列同一性的VH多肽序列，以及与SEQ ID NO:2662或与SEQ ID NO:2686具有至少95％序列同一性的VL多肽序列。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
a)含有SEQ ID NO:2589的重链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2587的重链可变区CDR2；含有SEQ ID NO:2588的重链可变区CDR3；含有SEQ ID NO:2599的轻链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2600的轻链可变区CDR2；和含有SEQ ID NO:2601的轻链可变区CDR3；b)含有SEQ ID NO:2626的重链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2624的重链可变区CDR2；含有SEQ IDNO:2625的重链可变区CDR3；含有SEQ ID NO:2636的轻链可变区CDR1；含有(例如由以下组成)SEQ ID NO:2637的轻链可变区CDR2；和含有SEQ ID NO:2638的轻链可变区CDR3；c)含有SEQ ID NO:2589的重链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2587的重链可变区CDR2；含有SEQ IDNO:2588的重链可变区CDR3；含有SEQ ID NO:2599的轻链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2600的轻链可变区CDR2；和含有SEQ ID NO:2660的轻链可变区CDR3；或d)含有SEQ ID NO:2669的重链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2667的重链可变区CDR2；含有SEQ ID NO:2668的重链可变区CDR3；含有SEQ ID NO:2679的轻链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2680的轻链可变区CDR2；和含有SEQ ID NO:2681的轻链可变区CDR3。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
a)SEQ ID NO:2590的重链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2591的重链可变区CDR2；含有SEQ ID NO:2588的重链可变区CDR3；含有SEQ ID NO:2602的轻链可变区CDR1；含有SEQID NO:2603的轻链可变区CDR2；和含有SEQ ID NO:2604的轻链可变区CDR3；
b)含有SEQ ID NO:2627的重链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2628的重链可变区CDR2；含有SEQ ID NO:2625的重链可变区CDR3；含有SEQ ID NO:2639的轻链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2640的轻链可变区CDR2；和含有SEQ ID NO:2641的轻链可变区CDR3；
c)含有SEQ ID NO:2590的重链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2591的重链可变区CDR2；含有SEQ ID NO:2588的重链可变区CDR3；含有SEQ ID NO:2602的轻链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2603的轻链可变区CDR2；和含有SEQ ID NO:2661的轻链可变区CDR3；或
d)含有SEQ ID NO:2670的重链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2671的重链可变区CDR2；含有SEQ ID NO:2668的重链可变区CDR3；含有SEQ ID NO:2682的轻链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2683的轻链可变区CDR2；和含有SEQ ID NO:2684的轻链可变区CDR3。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
a)含有SEQ ID NO:2592的重链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2593的重链可变区CDR2；含有SEQ ID NO:2594的重链可变区CDR3；含有SEQ ID NO:2605的轻链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2603的轻链可变区CDR2；和含有SEQ ID NO:2601的轻链可变区CDR3；
b)含有SEQ ID NO:2629的重链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2630的重链可变区CDR2；含有SEQ ID NO:2631的重链可变区CDR3；含有SEQ ID NO:2642的轻链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2640的轻链可变区CDR2；和含有SEQ ID NO:2638的轻链可变区CDR3；
c)含有SEQ ID NO:2592的重链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2593的重链可变区CDR2；含有SEQ ID NO:2594的重链可变区CDR3；含有SEQ ID NO:2605的轻链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2603的轻链可变区CDR2；和含有SEQ ID NO:2660的轻链可变区CDR3；或
d)含有SEQ ID NO:2672的重链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2673的重链可变区CDR2；含有SEQ ID NO:2674的重链可变区CDR3；含有SEQ ID NO:2685的轻链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2683的轻链可变区CDR2；和含有SEQ ID NO:2681的轻链可变区CDR3。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
a)含有SEQ ID NO:2586的重链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2587的重链可变区CDR2；含有SEQ ID NO:2588的重链可变区CDR3；含有SEQ ID NO:2599的轻链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2600的轻链可变区CDR2；和含有SEQ ID NO:2601的轻链可变区CDR3；
b)含有SEQ ID NO:2623的重链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2624的重链可变区CDR2；含有SEQ ID NO:2625的重链可变区CDR3；含有SEQ ID NO:2636的轻链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2637的轻链可变区CDR2；和含有SEQ ID NO:2638的轻链可变区CDR3；
c)含有SEQ ID NO:2586的重链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2587的重链可变区CDR2；含有SEQ ID NO:2588的重链可变区CDR3；含有SEQ ID NO:2599的轻链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2600的轻链可变区CDR2；和含有SEQ ID NO:2660的轻链可变区CDR3；或
d)含有SEQ ID NO:2666的重链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2667的重链可变区CDR2；含有SEQ ID NO:2668的重链可变区CDR3；含有SEQ ID NO:2679的轻链可变区CDR1；含有SEQ ID NO:2680的轻链可变区CDR2；和含有SEQ ID NO:2681的轻链可变区CDR3。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
a)含有SEQ ID NO:2595的VH和含有SEQ ID NO:2606的VL；或
b)含有SEQ ID NO:2632的VH和含有SEQ ID NO:2643的VL；或
c)含有与SEQ ID NO:2595具有至少95％同源性的序列的VH和含有与SEQ ID NO:2606具有至少95％同源性的序列的VL；或
d)含有与SEQ ID NO:2632具有至少95％同源性的序列的VH和含有与SEQ ID NO:2643具有至少95％同源性的序列的VL；或
e)含有(例如由以下组成)与SEQ ID NO:2595差别至少1个、2个、3个、4个、5个或6个氨基酸的序列的VH和含有(例如由以下组成)与SEQ ID NO:2606差别至少1个、2个、3个、4个、5个或6个氨基酸的序列的VL；或
f)含有(例如由以下组成)与SEQ ID NO:2632差别至少1个、2个、3个、4个、5个或6个氨基酸的序列的VH和含有(例如由以下组成)与SEQ ID NO:2643差别至少1个、2个、3个、4个、5个或6个氨基酸的序列的VL；g)含有SEQ ID NO:2595的VH和含有SEQ ID NO:2662的VL；或
h)含有SEQ ID NO:2675的VH和含有SEQ ID NO:2686的VL；或
i)含有与SEQ ID NO:2595具有至少95％同源性的序列的VH和含有与SEQ ID NO:2662具有至少95％同源性的序列的VL；或
j)含有与SEQ ID NO:2675具有至少95％同源性的序列的VH和含有与SEQ ID NO:2686具有至少95％同源性的序列的VL；或
k)含有(例如由以下组成)与SEQ ID NO:2595差别至少1个、2个、3个、4个、5个或6个氨基酸的序列的VH和含有(例如由以下组成)与SEQ ID NO:2662差别至少1个、2个、3个、4个、5个或6个氨基酸的序列的VL；或
l)含有(例如由以下组成)与SEQ ID NO:2675差别至少1个、2个、3个、4个、5个或6个氨基酸的序列的VH和含有(例如由以下组成)与SEQ ID NO:2686差别至少1个、2个、3个、4个、5个或6个氨基酸的序列的VL。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
a)含有SEQ ID NO:2597、SEQ ID NO:2611、SEQ ID NO:2615、SEQ ID NO:2617、SEQID NO:2619或SEQ ID NO:2621的重链氨基酸序列，和含有SEQ ID NO:2608的轻链氨基酸序列；b)含有SEQ ID NO:2634、SEQ ID NO:2648、SEQ ID NO:2652、SEQ ID NO:2654、SEQ IDNO:2656或SEQ ID NO:2658的重链氨基酸序列，和含有SEQ ID NO:2645的轻链氨基酸序列；c)与SEQ ID NO:2597、SEQ ID NO:2611、SEQ ID NO:2615、SEQ ID NO:2617、SEQ ID NO:2619或SEQ ID NO:2621具有至少95％序列同一性的重链氨基酸序列，和与SEQ ID NO:2608具有至少95％序列同一性的轻链氨基酸序列；
d)与SEQ ID NO:2634、SEQ ID NO:2648、SEQ ID NO:2652、SEQ ID NO:2654、SEQID NO:2656或SEQ ID NO:2658具有至少95％序列同一性的重链氨基酸序列，和与SEQ IDNO:2645具有至少95％序列同一性的轻链氨基酸序列；
e)含有SEQ ID NO:2597的重链氨基酸序列，和含有SEQ ID NO:2664的轻链氨基酸序列；
f)含有SEQ ID NO:2677的重链氨基酸序列，和含有SEQ ID NO:2688的轻链氨基酸序列；
g)与SEQ ID NO:2597具有至少95％序列同一性的重链氨基酸序列，和与SEQ IDNO:2664具有至少95％序列同一性的轻链氨基酸序列；或
h)与SEQ ID NO:2677具有至少95％序列同一性的重链氨基酸序列，和与SEQ IDNO:2688具有至少95％序列同一性的轻链氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
a)含有SEQ ID NO:2597的重链序列和含有SEQ ID NO:2608的轻链序列；
b)含有SEQ ID NO:2611的重链序列和含有SEQ ID NO:2608的轻链序列；
c)含有SEQ ID NO:2615的重链序列和含有SEQ ID NO:2608的轻链序列；
d)含有SEQ ID NO:2617的重链序列和含有SEQ ID NO:2608的轻链序列；
e)含有SEQ ID NO:2619的重链序列和含有SEQ ID NO:2608的轻链序列；
f)含有SEQ ID NO:2621的重链序列和含有SEQ ID NO:2608的轻链序列；
g)含有SEQ ID NO:2634的重链序列和含有SEQ ID NO:2645的轻链序列；
h)含有SEQ ID NO:2648的重链序列和含有SEQ ID NO:2645的轻链序列；
i)含有SEQ ID NO:2652的重链序列和含有SEQ ID NO:2645的轻链序列；
j)含有SEQ ID NO:2654的重链序列和含有SEQ ID NO:2645的轻链序列；
k)含有SEQ ID NO:2656的重链序列和含有SEQ ID NO:2645的轻链序列；
l)含有SEQ ID NO:2658的重链序列和含有SEQ ID NO:2645的轻链序列；
m)含有SEQ ID NO:2597的重链序列和含有SEQ ID NO:2664的轻链序列；或
n)含有SEQ ID NO:2677的重链序列和含有SEQ ID NO:2688的轻链序列。
在一些实施方案中，抗体是PCT专利申请公开号WO2020/079580A1的表1中公开的抗体，在下文中复制为表J1。
表J1：结合人TREM2的示例性单克隆抗体的序列
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在一些实施方案中，上文公开的每个轻链可变区和每个重链可变区(包括上面表J1中的那些)可连接到轻链恒定区(表EN1)和重链恒定区(表EN2)以分别形成完整的抗体轻链和重链，如下文进一步讨论的。此外，每个产生的重链和轻链序列可以组合形成完整的抗体结构。应当理解，本文所提供的重链和轻链可变区也可以连接到具有与本文列出的示例性序列不同的序列的其他恒定结构域。
K.KR专利申请公开号KR20200048069A
在一些实施方案中，TREM2激动剂是如KR专利申请公开号KR20200048069A(该申请全文以引用的方式并入本文)中所述的抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，TREM2抗体包含由登录号为KCTC 13471BP的杂交瘤细胞或登录号为KTC 13470BP的杂交瘤细胞产生的抗体的轻链可变区中的CDR L1、CDR L2和CDR L3。
在一些实施方案中，TREM2抗体包含由登录号为KCTC 13471BP的杂交瘤细胞或登录号为KTC 13470BP的杂交瘤细胞产生的抗体的重链可变区中的CDR H1、CDR H2和CDR H3。
在一些实施方案中，TREM2抗体包含由登录号为KCTC 13471BP的杂交瘤细胞或登录号为KTC 13470BP的杂交瘤细胞产生的抗体的轻链可变区中的CDR L1、CDRL2和CDR L3以及重链可变区中的CDR H1、CDR H2和CDR H3。
在一些实施方案中，TREM2抗体包含由登录号为KCTC 13471BP的杂交瘤细胞或登录号为KTC 13470BP的杂交瘤细胞产生的抗体的轻链可变区和重链可变区。
在一些实施方案中，TREM2激动剂是由登录号为KCTC 13471BP的杂交瘤细胞或登录号为KTC 13470BP的杂交瘤细胞产生的抗体。
在一些实施方案中，上文所述的由登录号为KCTC 13471BP的杂交瘤细胞或登录号为KTC 13470BP的杂交瘤细胞产生的抗体的轻链可变区和重链可变区可连接到轻链恒定区(表EN1)和重链恒定区(表EN2)以分别形成完整的抗体轻链和重链，如下文进一步讨论的。此外，每个产生的重链和轻链序列可以组合形成完整的抗体结构。应当理解，本文所提供的重链和轻链可变区也可以连接到具有与本文列出的示例性序列不同的序列的其他恒定结构域。
L.PCT专利申请公开号WO2020/172450A1
在一些实施方案中，TREM2激动剂是如PCT专利申请公开号WO2020/172450A1(“'450申请”)(该申请全文以引用的方式并入本文)中所述的抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)含有序列GFSIEDFYIH(SEQ ID NO:2717)的CDR-H1；
(b)含有序列W-I-D-P-E-β6-G-β8-S-K-Y-A-P-K-F-Q-G(SEQ ID NO:2735)的CDR-H2序列，其中β6是N或Q，并且β8是D或E；
(c)含有序列HADHGNYGSTMDY(SEQ ID NO:2719)的CDR-H3；
(d)含有序列HASQHINVWLS(SEQ ID NO:2720)的CDR-L1序列；
(e)含有序列KASNLHT(SEQ ID NO:2721)的CDR-L2序列；和
(f)含有序列QQGQTYPRT(SEQ
ID NO:2722)的CDR-L3序列。
在一些实施方案中，CDR-H2序列选自SEQ ID NO:2718、2727、2729和2731。
在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段包含：
(a)含有SEQ ID NO:2717的氨基酸序列的CDR-H1、含有SEQ ID NO:2718的氨基酸序列的CDR-H2、含有SEQ ID NO:2719的氨基酸序列的CDR-H3、含有SEQ ID NO:2720的氨基酸序列的CDR-L1、含有SEQ ID NO:2721的氨基酸序列的CDR-L2和含有SEQ ID NO:2722的氨基酸序列的CDR-L3；或
(b)含有SEQ ID NO:2717的氨基酸序列的CDR-H1、含有SEQ ID NO:2727的氨基酸序列的CDR-H2、含有SEQ ID NO:2719的氨基酸序列的CDR-H3、含有SEQ ID NO:2720的氨基酸序列的CDR-L1、含有SEQ ID NO:2721的氨基酸序列的CDR-L2和含有SEQ ID NO:2722的氨基酸序列的CDR-L3；或
(c)含有SEQ ID NO:2717的氨基酸序列的CDR-H1、含有SEQ ID NO:2729的氨基酸序列的CDR-H2、含有SEQ ID NO:2719的氨基酸序列的CDR-H3、含有SEQ ID NO:2720的氨基酸序列的CDR-L1、含有SEQ ID NO:2721的氨基酸序列的CDR-L2和含有SEQ ID NO:2722的氨基酸序列的CDR-L3；或
(d)含有SEQ ID NO:2717的氨基酸序列的CDR-H1、含有SEQ ID NO:2731的氨基酸序列的CDR-H2、含有SEQ ID NO:2719的氨基酸序列的CDR-H3、含有SEQ ID NO:2720的氨基酸序列的CDR-L1、含有SEQ ID NO:2721的氨基酸序列的CDR-L2和含有SEQ ID NO:2722的氨基酸序列的CDR-L3。
在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:2715、2723、2725、2726、2728、2730、2732、2733和2734中的任一者具有至少85％序列同一性的VH序列。在一些实施方案中，所述VH序列与SEQ ID NO:2715具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，所述VH序列与SEQ ID NO:2715具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，所述VH序列包含SEQ ID NO:2715。在一些实施方案中，所述VH序列与SEQ ID NO:2730具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，所述VH序列与SEQ ID NO:2730具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，所述VH序列包含SEQ ID NO:2730。在一些实施方案中，所述VH序列与SEQ ID NO:2733具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，所述VH序列与SEQID NO:2733具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，所述VH序列包含SEQ ID NO:2733。
在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:2716或SEQ ID NO:2724具有至少85％序列同一性的VL序列。在一些实施方案中，所述VL序列与SEQ ID NO:2716具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，所述VL序列与SEQ ID NO:2716具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，所述VL序列包含SEQ ID NO:2716。在一些实施方案中，所述VL序列与SEQ ID NO:2724具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，所述VL序列与SEQ ID NO:2724具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，所述VL序列包含SEQ ID NO:2724。
在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段包含：
(a)含有SEQ ID NO:2715的VH序列和含有SEQ ID NO:2716的VL序列；或
(b)含有SEQ ID NO:2723的VH序列和含有SEQ ID NO:2724的VL序列；或
(c)含有SEQ ID NO:2725的VH序列和含有SEQ ID NO:2724的VL序列；或
(d)含有SEQ ID NO:2726的VH序列和含有SEQ ID NO:2724的VL序列；或
(e)含有SEQ ID NO:2728的VH序列和含有SEQ ID NO:2724的VL序列；或
(f)含有SEQ ID NO:2730的VH序列和含有SEQ ID NO:2724的VL序列；或
(g)含有SEQ ID NO:2732的VH序列和含有SEQ ID NO:2724的VL序列；或
(h)含有SEQ ID NO:2733的VH序列和含有SEQ ID NO:2724的VL序列；或
(i)含有SEQ ID NO:2734的VH序列和含有SEQ ID NO:2724的VL序列。
在一些实施方案中，特异性地结合TREM2的抗体或其抗原结合片段包含：
(a)含有序列G-F-T-F-T-α6-F-Y-M-S(SEQ ID NO:2736)的CDR-H1序列，其中α6是D或N；
(b)含有序列V-I-R-N-β5-β6-N-β8-Y-T-β11-β12-Y-N-P-S-V-K-G(SEQ ID NO:2737)的CDR-H2序列，其中β5是K或R；β6是A或P；β8是G或A；β11是A或T；并且β12是G或D；
(c)含有序列γ1-R-L-γ4-Y-G-F-D-Y(SEQ ID NO:2738)的CDR-H3序列，其中γ1是A或T；并且γ4是T或S；
(d)含有序列Q-S-S-K-S-L-L-H-S-διο-G-K-T-Y-L-N(SEQ ID NO:2739)的CDR-L1序列，其中διο是N或T；
含有序列WMSTRAS(SEQ ID NO:2696)的CDR-L2序列；和
(e)含有序列Q-Q-F-L-E-φ6-P-F-T
(SEQ ID NO:2740)的CDR-L3序列，其中φ6是Y或F。
在一些实施方案中，CDR-H1序列选自SEQ ID NO:2692和2700中的任一者。在一些实施方案中，CDR-H2序列选自SEQ SEQ NO:2693、2701和2713中的任一者。在一些实施方案中，CDR-H3序列选自SEQ SEQ NO:2694、2702和2705中的任一者。在一些实施方案中，CDR-L1序列选自SEQ ID NO:2695和2711中的任一者。在一些实施方案中，CDR-L3序列选自SEQ IDNO:2697和2706中的任一者。
在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段包含：
(a)含有SEQ ID NO:2692的氨基酸序列的CDR-H1、含有SEQ ID NO:2693的氨基酸序列的CDR-H2、含有SEQ ID NO:2705的氨基酸序列的CDR-H3、含有SEQ ID NO:2695的氨基酸序列的CDR-L1、含有SEQ ID NO:2696的氨基酸序列的CDR-L2和含有SEQ ID NO:2706的氨基酸序列的CDR-L3；或
(b)含有SEQ ID NO:2692的氨基酸序列的CDR-H1、含有SEQ ID NO:2693的氨基酸序列的CDR-H2、含有SEQ ID NO:2705的氨基酸序列的CDR-H3、含有SEQ ID NO:2711的氨基酸序列的CDR-L1、含有SEQ ID NO:2696的氨基酸序列的CDR-L2和含有SEQ ID NO:2706的氨基酸序列的CDR-L3；或
(c)含有SEQ ID NO:2692的氨基酸序列的CDR-H1、含有SEQ ID NO:2713的氨基酸序列的CDR-H2、含有SEQ ID NO:2705的氨基酸序列的CDR-H3、含有SEQ ID NO:2695的氨基酸序列的CDR-L1、含有SEQ ID NO:2696的氨基酸序列的CDR-L2和含有SEQ ID NO:2706的氨基酸序列的CDR-L3；或
(d)含有SEQ ID NO:2692的氨基酸序列的CDR-H1、含有SEQ ID NO:2713的氨基酸序列的CDR-H2、含有SEQ ID NO:2705的氨基酸序列的CDR-H3、含有SEQ ID NO:2711的氨基酸序列的CDR-L1、含有SEQ ID NO:2696的氨基酸序列的CDR-L2和含有SEQ ID NO:2706的氨基酸序列的CDR-L3；或
(e)含有SEQ ID NO:2692的氨基酸序列的CDR-H1、含有SEQ ID NO:2693的氨基酸序列的CDR-H2、含有SEQ ID NO:2694的氨基酸序列的CDR-H3、含有SEQ ID NO:2695的氨基酸序列的CDR-L1、含有SEQ ID NO:2696的氨基酸序列的CDR-L2和含有SEQ ID NO:2697的氨基酸序列的CDR-L3；或
(f)含有SEQ ID NO:2700的氨基酸序列的CDR-H1、含有SEQ ID NO:2701的氨基酸序列的CDR-H2、含有SEQ ID NO:2702的氨基酸序列的CDR-H3、含有SEQ ID NO:2695的氨基酸序列的CDR-L1、含有SEQ ID NO:2696的氨基酸序列的CDR-L2和含有SEQ ID NO:2697的氨基酸序列的CDR-L3；或
(g)含有SEQ ID NO:2692的氨基酸序列的CDR-H1、含有SEQ ID NO:2713的氨基酸序列的CDR-H2、含有SEQ ID NO:2705的氨基酸序列的CDR-H3、含有SEQ ID NO:2695的氨基酸序列的CDR-L1、含有SEQ ID NO:2696的氨基酸序列的CDR-L2和含有SEQ ID NO:2697的氨基酸序列的CDR-L3。
在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:2690、2698、2703、2708、2709、2712、2714和2752中的任一者具有至少85％序列同一性的VH序列。在一些实施方案中，所述VH序列与SEQ ID NO:2703具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，所述VH序列与SEQ ID NO:2703具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，所述VH序列包含SEQ ID NO:2703。在一些实施方案中，所述VH序列与SEQ ID NO:2712具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，所述VH序列与SEQ ID NO:2712具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，所述VH序列包含SEQ ID NO:2712。在一些实施方案中，所述VH序列与SEQ ID NO:79具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，所述VH序列与SEQ IDNO:79具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，所述VH序列包含SEQ ID NO:79。
在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:2691、2699、2704、2708、2710和2741中的任一者具有至少85％序列同一性的VL序列。在一些实施方案中，所述VL序列与SEQ ID NO:2704具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，所述VL序列与SEQ ID NO:2704具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，所述VL序列包含SEQ IDNO:2704。在一些实施方案中，所述VL序列与SEQ ID NO:2710具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，所述VL序列与SEQ ID NO:2710具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，所述VL序列包含SEQ ID NO:2710。在一些实施方案中，所述VL序列与SEQ ID NO:2741具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，所述VL序列与SEQ ID NO:2741具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，所述VL序列包含SEQ ID NO:2741。
在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段包含：
(a)含有SEQ ID NO:2703的VH序列和含有SEQ ID NO:2704的VL序列；或
(b)含有SEQ ID NO:2707的VH序列和含有SEQ ID NO:2708的VL序列；或
(c)含有SEQ ID NO:2709的VH序列和含有SEQ ID NO:2708的VL序列；或
(d)含有SEQ ID NO:2707的VH序列和含有SEQ ID NO:2710的VL序列；或
(e)含有SEQ ID NO:79的VH序列和含有SEQ ID NO:2710的VL序列；或
(f)含有SEQ ID NO:2712的VH序列和含有SEQ ID NO:2708的VL序列；或
(g)含有SEQ ID NO:2714的VH序列和含有SEQ ID NO:2708的VL序列；或
(h)含有SEQ ID NO:2712的VH序列和含有SEQ ID NO:2710的VL序列；或
(i)含有SEQ ID NO:2714的VH序列和含有SEQ ID NO:2710的VL序列；或
(j)含有SEQ ID NO:2690的VH序列和含有SEQ ID NO:2691的VL序列；或
(k)含有SEQ ID NO:2698的VH序列和含有SEQ ID NO:2699的VL序列；或
(l)含有SEQ ID NO:2712的VH序列和含有SEQ ID NO:2741的VL序列。
在一些实施方案中，特异性地结合TREM2的抗体或其抗原结合片段包含：
(a)含有SEQ ID NO:2692、2700和2717中任一者的氨基酸序列的CDR-H1序列；
(b)含有SEQ ID NO:2693、2701、2713、2718、2727、2729和2731中任一者的氨基酸序列的CDR-H2序列；
(c)含有SEQ ID NO:2694、2702、2705和2719中任一者的氨基酸序列的CDR-H3序列；
(d)含有SEQ ID NO:2695、2711和2720中任一者的氨基酸序列的CDR-L1序列；
(e)含有SEQ ID NO:2696和2721中任一者的氨基酸序列的CDR-L2序列；和
(f)含有SEQ ID NO:2697、2706和2722中任一者的氨基酸序列的CDR-L3序列。
在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段包含：
(a)含有SEQ ID NO:2692的氨基酸序列的CDR-H1、含有SEQ ID NO:2693的氨基酸序列的CDR-H2、含有SEQ ID NO:2694的氨基酸序列的CDR-H3、含有SEQ ID NO:2695的氨基酸序列的CDR-L1、含有SEQ ID NO:2696的氨基酸序列的CDR-L2和含有SEQ ID NO:2697的氨基酸序列的CDR-L3；或
(b)含有SEQ ID NO:2692的氨基酸序列的CDR-H1、含有SEQ ID NO:2693的氨基酸序列的CDR-H2、含有SEQ ID NO:2705的氨基酸序列的CDR-H3、含有SEQ ID NO:2695的氨基酸序列的CDR-L1、含有SEQ ID NO:2696的氨基酸序列的CDR-L2和含有SEQ ID NO:2706的氨基酸序列的CDR-L3；或
(c)含有SEQ ID NO:2692的氨基酸序列的CDR-H1、含有SEQ ID NO:2693的氨基酸序列的CDR-H2、含有SEQ ID NO:2705的氨基酸序列的CDR-H3、含有SEQ ID NO:2711的氨基酸序列的CDR-L1、含有SEQ ID NO:2696的氨基酸序列的CDR-L2和含有SEQ ID NO:2706的氨基酸序列的CDR-L3；或
(d)含有SEQ ID NO:2692的氨基酸序列的CDR-H1、含有SEQ ID NO:2713的氨基酸序列的CDR-H2、含有SEQ ID NO:2705的氨基酸序列的CDR-H3、含有SEQ ID NO:2695的氨基酸序列的CDR-L1、含有SEQ ID NO:2696的氨基酸序列的CDR-L2和含有SEQ ID NO:2706的氨基酸序列的CDR-L3；或
(e)含有SEQ ID NO:2692的氨基酸序列的CDR-H1、含有SEQ ID NO:2713的氨基酸序列的CDR-H2、含有SEQ ID NO:2705的氨基酸序列的CDR-H3、含有SEQ ID NO:2711的氨基酸序列的CDR-L1、含有SEQ ID NO:2696的氨基酸序列的CDR-L2和含有SEQ ID NO:2706的氨基酸序列的CDR-L3；或
(f)含有SEQ ID NO:2700的氨基酸序列的CDR-H1、含有SEQ ID NO:2701的氨基酸序列的CDR-H2、含有SEQ ID NO:2702的氨基酸序列的CDR-H3、含有SEQ ID NO:2695的氨基酸序列的CDR-L1、含有SEQ ID NO:2696的氨基酸序列的CDR-L2和含有SEQ ID NO:2697的氨基酸序列的CDR-L3；
(g)含有SEQ ID NO:2717的氨基酸序列的CDR-H1、含有SEQ ID NO:2718的氨基酸序列的CDR-H2、含有SEQ ID NO:2719的氨基酸序列的CDR-H3、含有SEQ ID NO:2720的氨基酸序列的CDR-L1、含有SEQ ID NO:2721的氨基酸序列的CDR-L2和含有SEQ ID NO:2722的氨基酸序列的CDR-L3；或
(h)含有SEQ ID NO:2717的氨基酸序列的CDR-H1、含有SEQ ID NO:2727的氨基酸序列的CDR-H2、含有SEQ ID NO:2719的氨基酸序列的CDR-H3、含有SEQ ID NO:2720的氨基酸序列的CDR-L1、含有SEQ ID NO:2721的氨基酸序列的CDR-L2和含有SEQ ID NO:2722的氨基酸序列的CDR-L3；或
(i)含有SEQ ID NO:2717的氨基酸序列的CDR-H1、含有SEQ ID NO:2729的氨基酸序列的CDR-H2、含有SEQ ID NO:2719的氨基酸序列的CDR-H3、含有SEQ ID NO:2720的氨基酸序列的CDR-L1、含有SEQ ID NO:2721的氨基酸序列的CDR-L2和含有SEQ ID NO:2722的氨基酸序列的CDR-L3；或
(j)含有SEQ ID NO:2717的氨基酸序列的CDR-H1、含有SEQ ID NO:2731的氨基酸序列的CDR-H2、含有SEQ ID NO:2719的氨基酸序列的CDR-H3、含有SEQ ID NO:2720的氨基酸序列的CDR-L1、含有SEQ ID NO:2721的氨基酸序列的CDR-L2和含有SEQ ID NO:2722的氨基酸序列的CDR-L3；或
(k)含有SEQ ID NO:2692的氨基酸序列的CDR-H1、含有SEQ ID NO:2713的氨基酸序列的CDR-H2、含有SEQ ID NO:2705的氨基酸序列的CDR-H3、含有SEQ ID NO:2695的氨基酸序列的CDR-L1、含有SEQ ID NO:2696的氨基酸序列的CDR-L2和含有SEQ ID NO:2697的氨基酸序列的CDR-L3。
在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段包含：
(a)与SEQ ID NO:2690具有至少85％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:2691具有至少85％序列同一性的VL序列；或
(b)与SEQ ID NO:2698具有至少85％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:2699具有至少85％序列同一性的VL序列；或
(c)与SEQ ID NO:2703具有至少85％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:2704具有至少85％序列同一性的VL序列；或
(d)与SEQ ID NO:2707具有至少85％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:2708具有至少85％序列同一性的VL序列；或
与SEQ ID NO:2709具有至少85％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:2708具有至少85％序列同一性的VL序列；或
(f)与SEQ ID NO:2707具有至少85％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:2710具有至少85％序列同一性的VL序列；或
(g)与SEQ ID NO:79具有至少85％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:2710具有至少85％序列同一性的VL序列；或
(h)与SEQ ID NO:2712具有至少85％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:2708具有至少85％序列同一性的VL序列；或
(i)与SEQ ID NO:2714具有至少85％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:2708具有至少85％序列同一性的VL序列；或
(j)与SEQ ID NO:2712具有至少85％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:2710具有至少85％序列同一性的VL序列；或
(k)与SEQ ID NO:2714具有至少85％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:2710具有至少85％序列同一性的VL序列；或
(l)与SEQ ID NO:2715具有至少85％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:2716具有至少85％序列同一性的VL序列；或
(m)与SEQ ID NO:2723具有至少85％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:2724具有至少85％序列同一性的VL序列；或
(n)与SEQ ID NO:2725具有至少85％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:2724具有至少85％序列同一性的VL序列；或
(o)与SEQ ID NO:2726具有至少85％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:2724具有至少85％序列同一性的VL序列；或
(p)与SEQ ID NO:2728具有至少85％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:2724具有至少85％序列同一性的VL序列；或
(q)与SEQ ID NO:2730具有至少85％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:2724具有至少85％序列同一性的VL序列；或
(r)与SEQ ID NO:2732具有至少85％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:2724具有至少85％序列同一性的VL序列；或
(s)与SEQ ID NO:2733具有至少85％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:2724具有至少85％序列同一性的VL序列；或
(t)与SEQ ID NO:2734具有至少85％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:2724具有至少85％序列同一性的VL序列；或
(u)与SEQ ID NO:2712具有至少85％序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:2741具有至少85％序列同一性的VL序列。
在一些实施方案中，特异性地结合TREM2的抗体或其抗原结合片段识别与由如下抗体克隆识别的表位相同或基本相同的表位，所述抗体克隆选自：CL0020306、克隆CL0020188、克隆CL0020188-1、克隆CL0020188-2、克隆CL0020188-3、克隆CL0020188-4、克隆CL0020188-5、克隆CL0020188-6、克隆CL0020 188-7、克隆CL0020188-8、克隆CL0020307、克隆CL0020123、克隆CL0020 123-1、克隆CL0020123-2、克隆CL0020123-3、克隆CL0020123-4、克隆CL0020123-5、克隆CL0020123-6、克隆CL0020123-7和克隆CL0020123-8。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段识别与由如下抗体克隆识别的表位相同或基本相同的表位，所述抗体克隆选自：克隆CL0020123、克隆CL0020123-1、克隆CL0020123-2、克隆CL0020123-3、克隆CL0020123-4、克隆CL0020123-5、克隆CL0020123-6、克隆CL0020123-7和克隆CL0020123-8。在特定实施方案中，抗体或抗原结合片段识别SEQID NO:1中的下列表位中的一个或多个：(i)氨基酸残基55-63(GEKGPCQRV(SEQ ID NO:2743))、(ii)氨基酸96-107(TLRNLQPHDAGL(SEQ ID NO:2744))和(iii)氨基酸残基126-129(VEVL(SEQ ID NO:2745))。在另一个方面，本公开的特征在于特异性地结合人TREM2的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段识别包含以下或由以下组成的表位：SEQ ID NO:1中的下列表位中的一个或多个：(i)氨基酸残基55-63(GEKGPCQRV(SEQID NO:2743))、(ii)氨基酸96-107(TLRNLQPHDAGL(SEQ ID NO:2744))和(iii)氨基酸残基126-129(VEVL(SEQ ID NO:2745))。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段识别与由如下抗体克隆识别的表位相同或基本相同的表位，所述抗体克隆选自：克隆CL0020188、克隆CL0020188-1、克隆CL0020188-2、克隆CL0020188-3、克隆CL0020188-4、克隆CL0020188-5、克隆CL0020188-6、克隆CL0020 188-7、克隆CL0020188-8、克隆CL0020307和克隆CL0020306。在特定实施方案中，所述抗体或抗原结合片段识别SEQ ID NO:1中的氨基酸残基143-149(FPGESES(SEQ ID NO:2742))。在另一个方面，本公开的特征在于特异性地结合人TREM2的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段识别包含以下或由以下组成的表位：SEQ ID NO:1中的氨基酸残基143-149(FPGESES(SEQ ID NO:2742))。
在一些实施方案中，本文公开的抗体或抗原结合片段降低可溶性TREM2蛋白(sTREM2)的水平。在一些实施方案中，本文公开的抗体或抗原结合片段结合健康人CSF或食蟹猴CSF中的可溶性TREM2蛋白(sTREM2)的效力好于参考抗体。在一些实施方案中，参考抗体由选自以下的序列的组合表示：SEQ ID NO:2746和2747；SEQ ID NO:2748和2749；以及SEQ ID NO:2750和2751。
在一些实施方案中，所述抗体是具有在PCT专利申请公开号WO 2020/172450A1的表IX“非正式序列列表”中公开的VL、VH、全长重链序列、全长轻链序列、CDR序列或全长序列的抗体，在下文中复制为表L1。
表L1
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在一些实施方案中，表L1中公开的每个轻链可变区和每个重链可变区以及其特定组合以及'450申请和本文中所描述的抗TREM2抗体的其他实施方案可连接到轻链恒定区(表EN1)和重链恒定区(表EN2)以分别形成完整的抗体轻链和重链，如下面进一步讨论的。此外，每个产生的重链和轻链序列可以组合形成完整的抗体结构。应当理解，本文所提供的重链和轻链可变区也可以连接到具有与本文列出的示例性序列不同的序列的其他恒定结构域。
M.PCT专利申请公开号WO2021/101823A1
在一些实施方案中，TREM2激动剂是如PCT专利申请公开号WO2021/101823A1(“'823申请”)(该申请全文以引用的方式并入本文)中所述的抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)含有序列GFSFNTYWIG(SEQ ID NO:2753)的CDR-H1序列；
(b)含有序列IIYPGDQDIRYSPSFQG(SEQ ID NO:2754)的CDR-H2序列；
(c)含有序列ARYGRYIYGYGGYHGMDV(SEQ ID NO:2755)的CDR-H3序列；
(d)含有序列RASQAIRDDLG(SEQ ID NO:2756)的CDR-L1序列；
(e)含有序列YAASSLQS(SEQ ID NO:2757)的CDR-L2序列；和
(f)含有序列LQNYNYPHT(SEQ ID NO:2758)的CDR-L3序列。
在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:2753的氨基酸序列的CDR-H1、含有SEQ ID NO:2754的氨基酸序列的CDR-H2、含有SEQ ID NO:2755的氨基酸序列的CDR-H3、含有SEQ ID NO:2756的氨基酸序列的CDR-L1、含有SEQ ID NO:2757的氨基酸序列的CDR-L2和含有SEQ ID NO:2758的氨基酸序列的CDR-L3。
在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:2759具有至少85％序列同一性的VH序列。在一些实施方案中，所述VH序列与SEQ ID NO:2759具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，所述VH序列与SEQ ID NO:2759具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，所述VH序列包含SEQ ID NO:2759。
在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:2760具有至少85％序列同一性的VL序列。在一些实施方案中，所述VL序列与SEQ ID NO:2760具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，所述VL序列与SEQ ID NO:2760具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，所述VL序列包含SEQ ID NO:2760。
在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:2759的VH序列和含有SEQ ID NO:2760的VL序列。
在一些实施方案中，特异性地结合TREM2的抗体或其抗原结合片段识别与由'823申请的抗体1识别的表位相同或基本相同的表位。
在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段识别存在于人TREM2胞外结构域上的表位。在特定实施方案中，所述抗体或抗原结合片段识别存在于SEQ ID NO:2763中的人TREM2胞外结构域上的表位。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段识别存在于小鼠TREM2胞外结构域上的表位。在特定实施方案中，所述抗体或抗原结合片段识别存在于SEQID NO:2764中的小鼠TREM2胞外结构域上的表位。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段识别存在于大鼠TREM2胞外结构域上的表位。在特定实施方案中，所述抗体或抗原结合片段识别存在于SEQ ID NO:2765中的大鼠TREM2胞外结构域上的表位。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段识别存在于兔TREM2胞外结构域上的表位。在特定实施方案中，所述抗体或抗原结合片段识别存在于SEQ ID NO:2766中的兔TREM2胞外结构域上的表位。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段识别存在于食蟹猴TREM2胞外结构域上的表位。在特定实施方案中，所述抗体或抗原结合片段识别存在于SEQ ID NO:2767中的食蟹猴TREM2胞外结构域上的表位。
在一些实施方案中，所述抗体是具有PCT专利申请公开号WO2021/101823A1的“序列”表中公开的VL、VH、全长重链序列、全长轻链序列、CDR序列或全长序列的抗体，在下文中复制为表M1。
表M1
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在一些实施方案中，表M1中公开的每个轻链可变区和每个重链可变区以及其特定组合以及'823申请和本文中所描述的抗TREM2抗体的其他实施方案可连接到轻链恒定区(表EN1)和重链恒定区(表EN2)以分别形成完整的抗体轻链和重链，如下面进一步讨论的。此外，每个产生的重链和轻链序列可以组合形成完整的抗体结构。应当理解，本文所提供的重链和轻链可变区也可以连接到具有与本文列出的示例性序列不同的序列的其他恒定结构域。
示例性抗TREM2抗体
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含CDRL1或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体；CDRL2或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体；CDRL3或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体；CDRH1或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体；CDRH2或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体；和CDRH3或其具有一个、两个、三个或四个氨基酸取代的变体，其中所述CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2和CDRH3的氨基酸序列以及示例性轻链和可变区在下面表EX1和EX2中提供。
表EX1：示例性的抗TREM2抗体轻链可变区
表EX2：示例性的抗TREM2抗体重链可变区
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如上所述，抗TREM2抗体可包含表EX1(轻链CDR；即CDRL)和表EX2(重链CDR，即CDRH)中呈现的CDR中的一个或多个。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链，所述轻链包含具有根据SEQ ID NO:10的氨基酸序列的CDRL1、具有根据SEQ ID NO:23的氨基酸序列的CDRL2、具有根据SEQ IDNO:372的氨基酸序列的CDRL3，或氨基酸序列含有SEQ ID NO:10、23和372中的任一者的不超过五个、四个、三个、两个或一个氨基酸的一或多个、例如一个、两个、三个、四个或更多个氨基酸取代(例如保守氨基酸取代)、缺失或***的任何CDRL1、CDRL2或CDRL3。此类取代、缺失和***会保持显著的抗TREM2结合活性。在这些和其他实施方案中，抗TREM2抗体包含：具有根据SEQ ID NO:81的氨基酸序列的CDRH1、具有根据SEQ ID NO:373的氨基酸序列的CDRH2、具有根据SEQ ID NO:374的氨基酸序列的CDRH3，或氨基酸序列含有SEQ ID NO:81、373和374中的任一者的不超过五个、四个、三个、两个或一个氨基酸的一或多个、例如一个、两个、三个、四个或更多个氨基酸取代(例如保守氨基酸取代)、缺失或***的任何CDRH1、CDRH2或CDRH3。此类取代、缺失和***会保持显著的抗TREM2结合活性。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含：轻链可变区，其包含具有根据SEQ ID NO:10的氨基酸序列的CDRL1、具有根据SEQ ID NO:23的氨基酸序列的CDRL2和具有根据SEQ IDNO:372的氨基酸序列的CDRL3；以及重链可变区，其包含具有根据SEQ ID NO:81的氨基酸序列的CDRH1、具有根据SEQ ID NO:373的氨基酸序列的CDRH2和具有根据SEQ ID NO:374的氨基酸序列的CDRH3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区具有根据SEQID NO:330的氨基酸序列，或含有SEQ ID NO:330的不超过五个、四个、三个、两个或一个氨基酸的一或多个、例如一个、两个、三个、四个或更多个氨基酸取代(例如保守氨基酸取代)、缺失或***的任何氨基酸序列。此类取代、缺失和***会保持显著的抗TREM2结合活性。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区具有根据SEQ ID NO:331的氨基酸序列，或含有SEQ ID NO:331的不超过五个、四个、三个、两个或一个氨基酸的一或多个、例如一个、两个、三个、四个或更多个氨基酸取代(例如保守氨基酸取代)、缺失或***的任何氨基酸序列。此类取代、缺失和***会保持显著的抗TREM2结合活性。
在特定实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区具有根据SEQ ID NO:330的氨基酸序列，所述重链可变区具有根据SEQ ID NO:331的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含选自表EX3的重链氨基酸序列和/或轻链氨基酸序列。表EX3显示了示例性抗体“Ab-1”、“Ab-2”和“Ab-3”的示例性抗TREM2抗体重链和轻链。
表EX3：示例性抗TREM2抗体重链和轻链
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在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链，所述轻链具有根据SEQ ID NO:2777、339和2780中的任一者的氨基酸序列，或含有SEQ ID NO:2777、339和2780中的任一者的不超过五个、四个、三个、两个或一个氨基酸的一或多个、例如一个、两个、三个、四个或更多个氨基酸取代(例如保守氨基酸取代)、缺失或***的任何氨基酸序列。此类取代、缺失和***会保持显著的抗TREM2结合活性。在这些和其他实施方案中，抗TREM2抗体包含重链，所述重链具有根据SEQ ID NO:2774、340、2779和2781中的任一者的氨基酸序列，或含有SEQ IDNO:2774、340、2779和2781中的任一者的不超过五个、四个、三个、两个或一个氨基酸的一或多个、例如一个、两个、三个、四个或更多个氨基酸取代(例如保守氨基酸取代)、缺失或***的任何氨基酸序列。此类取代、缺失和***会保持显著的抗TREM2结合活性。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链和重链可变区，所述轻链具有根据SEQID NO:2777的氨基酸序列，所述重链可变区具有根据SEQ ID NO:2774的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链和重链可变区，所述轻链具有根据SEQ ID NO:339的氨基酸序列，所述重链可变区具有根据SEQ ID NO:340的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链和重链可变区，所述轻链具有根据SEQ ID NO:2780的氨基酸序列，所述重链可变区具有根据SEQ ID NO:2781的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链和重链可变区，所述轻链具有根据SEQ ID NO:2780的氨基酸序列，所述重链可变区具有根据SEQ ID NO:2779的氨基酸序列。
抗体恒定结构域和工程化恒定区
在一些实施方案中，任何抗原结合剂都可具有任何来源的轻链和/或重链上的恒定结构域。如本文所用的术语“恒定区”是指抗体的除可变区之外的所有结构域。恒定结构域可以是啮齿动物的、灵长类动物的或其他哺乳动物的。在一些实施方案中，恒定结构域是人源的。因此，在一些实施方案中，本文所述的任何抗原结合剂都可具有人恒定区，其中的一些如上文所述。
在一些实施方案中，人恒定区是例如人轻链恒定区或人重链恒定区。
术语“轻链”或“免疫球蛋白轻链”是指从氨基末端到羧基末端包含单个免疫球蛋白轻链可变区(VL)和单个免疫球蛋白轻链恒定结构域(CL)的多肽。免疫球蛋白轻链恒定结构域(CL)可以是人卡帕(κ)或人兰布达(λ)恒定结构域。
术语“重链”或“免疫球蛋白重链”是指从氨基末端到羧基末端包含单个免疫球蛋白重链可变区(VH)、免疫球蛋白重链恒定结构域1(CH1)、免疫球蛋白铰链区、免疫球蛋白重链恒定结构域2(CH2)、免疫球蛋白重链恒定结构域3(CH3)和任选的免疫球蛋白重链恒定结构域4(CH4)的多肽。重链被分为缪(μ)、德尔塔(δ)、伽马(γ)、阿尔法(α)和伊普西隆(ε)，并将抗体的同种型分别定义为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。IgG类和IgA类抗体进一步被分为亚类，即分别为IgG1、IgG2、IgG3和IgG4以及IgA1和IgA2。IgG、IgA和IgD抗体的重链具有三个结构域(CH1、CH2和CH3)，然而IgM和IgE抗体中的重链具有四个结构域(CH1、CH2、CH3和CH4)。免疫球蛋白重链恒定结构域可以来自任何免疫球蛋白同种型，包括亚型。抗体链通过CL结构域和CH1结构域之间(即轻链和重链之间)以及抗体重链的铰链区之间的多肽间二硫键连接在一起。
在一些实施方案中，人轻链恒定区包含人κ或人λ恒定区。在一些实施方案中，基于本文所述的任何轻链可变区或轻链可变区的CDR的抗原结合剂包括人轻链恒定区，诸如κ或λ恒定区序列，其存在于所有五种抗体同种型中。人免疫球蛋白轻链恒定区序列的实例如下面表EN1所示。
表EN1:示例性的人免疫球蛋白轻链恒定区
在一些实施方案中，人恒定区包含以下的至少一个或全部：人CH1、人铰链、人CH2和CH3结构域。在一些实施方案中，重链恒定区包含Fc区，其中所述Fc部分是人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或IgM同种型。术语“Fc区”是指免疫球蛋白重链的C末端区域，其可通过完整抗体的木瓜蛋白酶消化产生。免疫球蛋白的Fc区通常包含两个恒定结构域，即CH2结构域和CH3结构域，并且任选地包含CH4结构域。在某些实施方案中，Fc区是来自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4免疫球蛋白的Fc区。在一些实施方案中，Fc区包含来自人IgG1或人IgG2免疫球蛋白的CH2和CH3结构域。Fc区可以保留效应子功能，诸如C1q结合、补体依赖性细胞毒性(CDC)、Fc受体结合、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和吞噬作用。在其他实施方案中，Fc区可以被修饰以减少或消除效应子功能，如下面进一步详细描述的。
在一些实施方案中，基于本文所述的任何重链可变区或重链可变区的CDR的抗原结合剂包括人重链恒定区，例如包含人CH1、人铰链、人CH2和CH3结构域中的至少一个或全部的人恒定区。在一些实施方案中，基于本文所述的任何重链可变区或重链可变区的CDR的抗原结合剂包括Fc区，其中所述Fc区是人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或IgM同种型。人IgG1、IgG2和IgG4重链恒定区序列的实例如下面表EN2所示。
表EN2：示例性的人免疫球蛋白重链恒定区
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在一些实施方案中，重链恒定区(特别是Fc区)是工程化重链恒定区。在一些实施方案中，抗原结合蛋白(例如单克隆抗体)在Fc区包含一个或多个氨基酸取代以增强效应子功能，包括ADCC活性、CDC活性、ADCP活性和/或抗原结合蛋白的清除率或半衰期。可增强效应子功能的示例性氨基酸取代(根据EU编号方案)包括但不限于E233L、L234I、L234Y、L235S、G236A、S239D、F243L、F243V、P247I、D280H、K290S、K290E、K290N、K290Y、R292P、E294L、Y296W、S298A、S298D、S298V、S298G、S298T、T299A、Y300L、V305I、Q311M、K326A、K326E、K326W、A330S、A330L、A330M、A330F、I332E、D333A、E333S、E333A、K334A、K334V、A339D、A339Q、P396L或任何前述的组合。
在一些实施方案中，TREM2抗原结合蛋白(例如单克隆抗体)在重链恒定区中包含一个或多个氨基酸取代以降低效应子功能。可降低效应子功能的示例性氨基酸取代(根据EU编号方案)包括但不限于C220S、C226S、C229S、E233P、L234A、L234V、V234A、L234F、L235A、L235E、G237A、P238S、S267E、H268Q、N297A、N297G、N297Q、V309L、E318A、L328F、A330S、A331S、P331S或任何前述的组合。
在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白包含影响结合蛋白的糖基化水平或类型的一个或多个氨基酸取代。糖基化可有助于抗体(尤其是IgG1抗体)的效应子功能。多肽的糖基化通常是N-连接的或O-连接的。N-连接的是指碳水化合物部分连接到天冬酰胺残基的侧链上。三肽序列天冬酰胺-X-丝氨酸和天冬酰胺-X-苏氨酸(其中X是除脯氨酸之外的任何氨基酸)是碳水化合物部分酶促连接到天冬酰胺侧链的识别序列。因此，这些三肽序列中的任何一个在多肽中的存在都会产生潜在的糖基化位点。O-连接的糖基化是指糖N-乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖中的一种连接到羟基氨基酸，最常见丝氨酸或苏氨酸，但是也可以使用5-羟基脯氨酸或5-羟基赖氨酸。
在一些实施方案中，通过例如向结合蛋白的Fc区添加一个或多个糖基化位点来增加本文所述的TREM2激动剂抗原结合蛋白的糖基化。通过改变氨基酸序列，使得其含有一个或多个上述三肽序列(对于N-连接的糖基化位点)，可以方便地实现向抗原结合蛋白添加糖基化位点。也可通过向起始序列添加或替代成一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基(对于O-连接的糖基化位点)来进行改变。为了方便起见，抗原结合蛋白氨基酸序列可通过在DNA水平的改变来改变，特别是通过在预选碱基处突变编码靶多肽的DNA，从而产生将翻译成所需氨基酸的密码子。
本发明还涵盖产生具有导致改变的效应子活性的改变的碳水化合物结构的TREM2抗原结合蛋白分子，包括表现出改善的ADCC活性的缺乏或降低的岩藻糖基化的抗原结合蛋白。本领域已知各种减少或消除岩藻糖基化的方法。例如，ADCC效应子活性是通过抗体分子与FcγRIII受体的结合来介导的，这已被证明依赖于CH2结构域的N297残基处的N-连接糖基化的碳水化合物结构。非岩藻糖基化抗体以增加的亲和力结合该受体，并比天然的岩藻糖基化抗体更有效地触发FcγRIII介导的效应子功能。例如，在CHO细胞中重组产生非岩藻糖基化抗体，其中α-1,6-岩藻糖基转移酶已被敲除，导致抗体的ADCC活性增加100倍(参见Yamane-Ohnuki等人,Biotechnol Bioeng.87(5):614-22,2004)。通过降低α-1,6-岩藻糖基转移酶或岩藻糖基化途径中其他酶的活性，例如通过siRNA或反义RNA处理、工程化细胞系以敲除酶，或与选择性糖基化抑制剂一起培养，可以实现类似的效应(参见Rothman等人,Mol Immunol.26(12):1113-23,1989)。一些宿主细胞株(例如Lec13或大鼠杂交瘤YB2/0细胞系)天然地产生具有较低岩藻糖基化水平的抗体(参见Shields等人,J Biol Chem.277(30):26733-40,2002以及Shinkawa等人,J Biol Chem.278(5):3466-73,2003)。也已经确定例如通过在过表达GnTIII酶的细胞中重组产生抗体增加二等分(bisected)碳水化合物的水平会增加ADCC活性(参见Umana等人,Nat Biotechnol.17(2):176-80,1999)。
在其他实施方案中，通过例如从结合蛋白的Fc区移除一个或多个糖基化位点来降低或消除本文所述的TREM2激动剂抗原结合蛋白的糖基化。在一些实施方案中，TREM2激动剂抗原结合蛋白是去糖基化的人单克隆抗体，例如去糖基化的人IgG1单克隆抗体。消除或改变N-连接的糖基化位点的氨基酸取代可减少或消除抗原结合蛋白的N-连接的糖基化。在某些实施方案中，本文所述的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含位置N297处的突变(根据EU编号方案)，诸如N297Q、N297A或N297G。在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含来自在位置N297具有突变的人IgG1抗体的Fc区。在一个特定实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含来自具有N297G突变的人IgG1抗体的Fc区。例如，在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:202的序列的重链恒定区。
为了提高包含N297突变的分子的稳定性，可进一步工程化TREM2激动剂抗原结合蛋白的Fc区。例如，在一些实施方案中，Fc区中的一个或多个氨基酸被半胱氨酸取代，以促进二聚体状态下的二硫键形成。因此，与IgG1Fc区的V259、A287、R292、V302、L306、V323或I332(根据EU编号方案)对应的残基可被半胱氨酸取代。优选地，特定残基对被半胱氨酸取代，使得它们优先彼此形成二硫键，从而限制或防止二硫键混乱。优选的对包括但不限于A287C和L306C、V259C和L306C、R292C和V302C以及V323C和I332C。在某些实施方案中，本文所述的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含来自具有突变R292C和V302C的人IgG1抗体的Fc区。在此类实施方案中，Fc区也可包含N297突变，诸如N297G突变。在一些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白包含含有SEQ ID NO:203的序列的重链恒定区。
可对本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白(例如单克隆抗体)的重链铰链区和/或CH1结构域和/或轻链恒定区进行修饰，以减少或消除二硫化物异质性。已经观察到IgG2抗体的结构异质性，其中IgG2抗体的铰链区和CH1区中的二硫键可以被改组以产生不同的结构性二硫化物同种型(IgG2A、IgG2B和IgG2A-B)，它们可具有不同水平的活性。参见例如，Dillon等人,J.Biol.Chem.,第283卷:16206-16215；Martinez等人,Biochemistry,第47卷:7496-7508,2008；以及White等人,Cancer Cell,第27卷:138-148,2015。可在铰链区、CH1结构域和/或轻链恒定区中进行氨基酸取代，以促进单一二硫化物同种型的形成或将抗原结合蛋白(例如单克隆抗体)锁定到特定的二硫化物同种型(例如IgG2A或IgG2B)中。此类突变在WO 2009/036209和White等人,Cancer Cell,Vol.27:138-148,2015(将这两篇文献据此全文以引用的方式并入)中有所描述，并且包括重链中的C131S、C219S和C220S(根据EU编号方案)突变和轻链中的C214S(根据EU编号方案)突变。在某些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白是人IgG2抗TREM2激动剂抗体。在一些此类实施方案中，TREM2激动剂抗体在其重链中包含C131S突变(根据EU编号方案)。在其他实施方案中，TREM2激动剂抗体包含在其轻链中的C214S突变(根据EU编号方案)和在其重链中的C220S突变(根据EU编号方案)。在仍其他实施方案中，TREM2激动剂抗体包含在其轻链中的C214S突变(根据EU编号方案)和在其重链中的C219S突变(根据EU编号方案)。
在其他实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白是抗TREM2激动剂抗体，其包含来自人IgG2抗体的CH1区和铰链区以及来自人IgG1抗体的Fc区。据报道，IgG2抗体铰链区中二硫键的独特排列赋予某些抗癌抗体增强的刺激活性(White等人,Cancer Cell,第27卷:138-148,2015)。通过将IgG1抗体的CH1和铰链区更换为IgG2抗体中的CH1和铰链区，这种增强的活性可转移到IgG1型抗体上(White等人,2015)。IgG2铰链区包括氨基酸序列ERKCCVECPPCP(SEQ ID NO:206)。来自人IgG2抗体的CH1和铰链区的氨基酸序列可包含以下氨基酸序列：
ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSNFGTQT YTCNVDHKPS NTKVDKTVER KCCVECPPCP(SEQ ID NO:207)。
在一些实施方案中，抗原结合剂基于任何重链可变区或CThus，在一些实施方案中，抗TREM2激动剂抗体包含SEQ ID NO:207的序列与来自人IgG1抗体的Fc区的组合。在此类实施方案中，抗TREM2抗体可包含一种或多种上述突变，以将抗TREM2抗体锁定在特定的二硫化物同种型中。例如，在一个实施方案中，抗TREM2抗体包含来自人IgG2抗体的CH1区和铰链区以及来自人IgG1抗体的Fc区，并且包含在其重链中的C131S突变(根据EU编号方案)。在另一个实施方案中，抗TREM2抗体包含来自人IgG2抗体的CH1区和铰链区以及来自人IgG1抗体的Fc区，并且包含在其轻链中的C214S突变(根据EU编号方案)和在其重链中的C220S突变(根据EU编号方案)。在又另一个实施方案中，抗TREM2抗体包含来自人IgG2抗体的CH1区和铰链区以及来自人IgG1抗体的Fc区，并且包含在其轻链中的C214S突变(根据EU编号方案)和在其重链中的C219S突变(根据EU编号方案)。
在其中抗TREM2抗体包含来自人IgG2抗体的CH1区和铰链区以及来自人IgG1抗体的Fc区的实施方案中，抗TREM2抗体可包含上述Fc区中的任何突变以调节抗体的糖基化。例如，这种抗TREM2抗体的人IgG1 Fc区可包含在其重链中的氨基酸位置N297(根据EU编号方案)处的突变。在一个特定实施方案中，N297突变是N297G突变。在某些实施方案中，Fc区还可包含在其重链中的R292C和V302C突变(根据EU编号方案)。
在某些实施方案中，本发明的抗TREM2抗体包含来自人IgG2抗体的CH1区和铰链区以及来自人IgG1抗体的Fc区，其中所述Fc区包含以下氨基酸序列：
APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEV
HNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYK
TTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:281)。
在其他实施方案中，本发明的抗TREM2抗体包含来自人IgG2抗体的CH1区和铰链区以及来自人IgG1抗体的Fc区，其中所述Fc区包含以下氨基酸序列：
APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEV
HNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYK
TTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:282)。
修饰本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白以增加血清半衰期也可能是期望的，例如，通过掺入或添加补救受体结合表位(例如，通过适当区域的突变或通过将表位掺入肽标签中，该肽标签然后在任一末端或在中间融合到抗原结合蛋白，例如，通过DNA或肽合成；参见例如，WO96/32478)或添加分子诸如PEG或其他水溶性聚合物，包括多糖聚合物。补救受体结合表位优选地构成这样的区域，其中来自Fc区的一个或两个环的任何一个或多个氨基酸残基被转移到抗原结合蛋白的类似位置。甚至更优选地，来自Fc区的一个或两个环的三个或更多个残基被转移。仍更优选地，表位取自Fc区(例如IgG Fc区)的CH2结构域，并转移到抗原结合蛋白的CH1、CH3或VH区或多于一个这样的区域。可替代地，表位取自Fc区的CH2结构域，并转移到抗原结合蛋白的CL区或VL区或两者。关于Fc变体及其与补救受体的相互作用的描述，参见国际申请WO 97/34631和WO 96/32478。
抗体片段
在一些实施方案中，抗原结合剂可以是本公开抗体的片段，包括全长抗体的部分，并且包括抗原结合或可变区。示例性的抗体片段包括Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段。在一些实施方案中，用木瓜蛋白酶进行蛋白水解消化产生两个相同的抗原结合片段，即Fab'片段，每个片段具有单个抗原结合位点。在一些实施方案中，用胃蛋白酶进行蛋白水解消化产生具有两个能够交联抗原的抗原结合片段的F(ab')2片段和残留的pFc'片段。在一些实施方案中，抗体片段直接在重组宿主细胞中产生，例如具有编码本文所述的抗原结合剂的多核苷酸的宿主细胞。例如，Fab、Fv和scFv抗体片段全部都可在大肠杆菌中表达和分泌，因此允许直接产生大量的这些片段。如上所讨论，也可从抗体噬菌体文库中分离抗TREM2抗体片段。可替代地，Fab'-SH片段可直接从大肠杆菌中回收，并且化学偶联形成F(ab')2片段(Carter等人,Bio/Technology10:163-167(1992))。根据另一种方法，F(ab')2片段可直接从重组宿主细胞培养物中分离。在美国专利号5,869,046中描述了体内半衰期增加的Fab和F(ab')2抗体片段的产生。在其他实施方案中，选择的抗体是单链Fv片段(scFv)。参见WO93/16185；美国专利号5,571,894和美国专利号5,587,458。因此，其他类型的片段可包括双抗体、线性抗体、单链抗体和由抗体片段形成的多特异性抗体。在一些实施方案中，抗体片段是有功能的，因为它们保留了期望的抗原结合特性，例如，特异性结合TREM2、激活TREM2活性等，如本文所述。
双特异性抗体
在一些实施方案中，TREM2结合蛋白是结合本公开的TREM2蛋白和第二抗原的双特异性抗体。在一些实施方案中，本公开的双特异性抗体结合人TREM2(SEQ ID NO:1)的一个或多个氨基酸残基、或与SEQ ID NO:1的氨基酸残基对应的TREM2蛋白上的氨基酸残基。在一些实施方案中，本文所述的任何TREM2结合蛋白可用于制备双特异性抗体。
在一些实施方案中，本公开的双特异性抗体识别第一抗原和第二抗原。在一些实施方案中，第一抗原是人TREM2或其天然存在的变体。在一些实施方案中，第二抗原是DAP12或与TREM2相互作用的其他蛋白质或配体。在一些实施方案中，第二抗原是(a)促进跨血脑屏障转运的抗原；(b)促进跨血脑屏障转运的抗原，例如转铁蛋白受体(TR)、胰岛素受体(HIR)、***受体(IGFR)、低密度脂蛋白受体相关蛋白1和2(LPR-1和2)、白喉毒素受体、CRM 197、美洲驼单结构域抗体、TMEM 30(A)、蛋白转导结构域、TAT、Syn-B、穿透素(penetratin)、聚精氨酸肽、血管肽(angiopep peptide)和ANG1005；(c)致病蛋白质，所述致病蛋白质选自淀粉样蛋白β、寡聚淀粉样蛋白β、淀粉样蛋白β斑块、淀粉样蛋白前体蛋白或其片段、τ蛋白(Tau)、IAPP蛋白、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72(9号染色体开放阅读框72)、c9RAN蛋白、朊病毒蛋白、PrPSc、亨廷顿蛋白(huntingtin)、降钙素、超氧化物歧化酶、失调蛋白(ataxin)、失调蛋白1、失调蛋白2、失调蛋白3、失调蛋白7、失调蛋白8、失调蛋白10、路易小体、心钠素、胰岛淀粉样多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、medin、催乳素、转甲状腺素蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角质上皮素、胱抑素、免疫球蛋白轻链AL、S-IBM蛋白、重复相关非ATG(RAN)翻译产物、二肽重复(DPR)肽、甘氨酸-丙氨酸(GA)重复肽、甘氨酸-脯氨酸(GP)重复肽、甘氨酸-精氨酸(GR)重复肽、脯氨酸-丙氨酸(PA)重复肽、泛素和脯氨酸-精氨酸(PR)重复肽；和(d)在免疫细胞上表达的配体和/或蛋白质，其中所述配体和/或蛋白质选自CD40、OX40、ICOS、CD28、CD137/4-1BB、CD27、GITR、PD-L1、CTLA-4、PD-L2、PD-1、B7-H3、B7-H4、HVEM、BTLA、KIR、GAL9、TIM3、A2AR、LAG-3和磷脂酰丝氨酸；和(e)在一种或多种肿瘤细胞上表达的蛋白质、脂质、多糖或糖脂；以及它们的任何组合。
用于制备双特异性抗体的方法是本领域已知的。全长双特异性抗体的传统产生基于两对免疫球蛋白重链/轻链的共表达，其中两条链具有不同的特异性。Millstein等人,Nature,305:537-539(1983)。因为免疫球蛋白重链和轻链的随机分类，这些杂交瘤(细胞杂交瘤(quadromas))产生10种不同抗体分子的潜在混合物，其中只有一种具有正确的双特异性结构。通常通过亲和层析步骤进行的对正确分子的纯化相当麻烦，并且产物产率很低。在WO 93/08829和在Traunecker等人,EMBO J.,10:3655-3659(1991)中公开了类似的程序。
在一些实施方案中，将具有所需结合特异性的抗体可变结构域(抗体-抗原结合位点)融合到免疫球蛋白恒定结构域序列上。该融合优选地是与免疫球蛋白重链恒定结构域融合，所述免疫球蛋白重链恒定结构域包含铰链区、CH2区和CH3区中的至少一部分。优选地，第一重链恒定区(CH1)包含轻链结合所需的位点，其存在于至少一个融合体中。将编码免疫球蛋白重链融合体和(如果需要)免疫球蛋白轻链的DNA***单独的表达载体中，并且共转染到合适的宿主生物体中。在实施方案中，当构建中使用的三个多肽链的不同比例提供最佳产率时，这为调节三个多肽片段的相互比例提供了很大的灵活性。然而，当至少两条多肽链以相等的比例表达导致高产率时或者当所述比例没有特别的意义时，可以在一个表达载体中***两条或所有三条多肽链的编码序列。
在一些实施方案中，双特异性抗体由在一条臂中具有第一结合特异性的杂交免疫球蛋白重链和在另一条臂中的杂交免疫球蛋白重链-轻链对(提供第二结合特异性)构成。发现这种不对称结构促进所需双特异性化合物与不需要的免疫球蛋白链组合的分离，因为在仅一半双特异性分子中存在免疫球蛋白轻链提供了容易的分离方式。在WO 94/04690中公开了这种方法。关于产生双特异性抗体的进一步细节，参见例如Suresh等人,Methods inEnzymology121:210(1986)；以及Garber,Nature Reviews Drug Discovery 13,799-801(2014)。
在一些实施方案中，可如WO 96/27011或美国专利号5,731,168中所述制备双特异性抗体。在这些实施方案中，可以工程化一对抗体分子之间的界面，以最大化从重组细胞培养物中回收的异源二聚体的百分比。优选的界面包含抗体恒定结构域的CH3区的至少一部分。在该方法中，来自第一抗体分子界面的一个或多个小氨基酸侧链被较大的侧链(例如，酪氨酸或色氨酸)替代。通过用较小的氨基酸侧链(例如丙氨酸或苏氨酸)替代大的氨基酸侧链，在第二抗体分子的界面上产生了与大的侧链大小相同或相似的补偿性“空腔”。这提供了用于提高异源二聚体的产率超过其他不需要的终产物诸如同源二聚体的机制。
在一些实施方案中，可制备双特异性抗体。从抗体片段产生双特异性抗体的技术已经在例如Brennan等人,Science,1985,229:81中进行了描述，该文献描述了完整抗体的蛋白水解裂解以产生F(ab')2片段，然后将其在二硫醇络合剂***的存在下还原以稳定邻位二硫醇并防止分子间二硫化物形成。然后将产生的Fab'片段转化为硫硝基苯甲酸酯(TNB)衍生物。然后，Fab'-TNB衍生物之一再转化为Fab'-TNB衍生物，形成双特异性抗体。所产生的双特异性抗体可用作选择性地固定酶的药剂。
还已经描述了直接从重组细胞培养物中制备和分离二价抗体片段的各种技术。例如，已经使用亮氨酸拉链产生了二价异源二聚体。Kostelny等人,Immunol.,1992,148(5):1547-1553。由Hollinger等人,Proc.Nat'l Acad.Sci.USA,1993,90:6444-6448所述的“双抗体”技术提供了用于制备双特异性/二价抗体片段的替代机制。所述片段包含通过接头连接到轻链可变结构域(VL)的重链可变结构域(VH)，所述接头太短以至于不能在同一条链上的两个结构域之间配对。因此，一个片段的VH和VL结构域被迫与另一个片段的互补VL和VH结构域配对，从而形成两个抗原结合位点。通过使用单链Fv(sFv)二聚体制备双特异性/二价抗体片段的另一种策略(参见例如，Gruber等人,Immunol,152:5368(1994))。
单链抗体
在一些实施方案中，TREM2结合蛋白是单链抗体，例如单链Fv(sFv或scFv)抗体，其中可变重链和可变轻链连接在一起(直接或通过肽接头)形成连续多肽。“单链Fv”或“sFv”抗体片段包含抗体的VH和VL结构域，其中这些结构域存在于单个多肽链中。一般而言，Fv多肽还包含处于VH和VL结构域之间的多肽接头，所述接头能使sFv形成抗原结合所需的结构。关于sFv的综述，参见Pluckthun,The Pharmacology of Monoclonal Antibodies,第113卷,第269-315页；Rosenburg和Moore编辑,Springer-Verlag,New York(1994)。本文所述的任何TREM2结合剂都可用于制备单链抗体。
在一些实施方案中，可通过噬菌体展示方法制备单链抗体，其中抗原结合结构域被表达为单个多肽，并对特异性结合活性进行筛选。可替代地，可通过从细胞中克隆重链和轻链来制备单链抗体，所述细胞通常是表达所需抗体的杂交瘤细胞系。通常，长度通常为10至25个氨基酸的接头肽用于连接重链和轻链。接头可以是富含甘氨酸、丝氨酸和/或苏氨酸的，以赋予单链抗体柔性和溶解性。产生单链抗体的具体方法描述于例如Loffler等人,2000,Blood 95(6):2098-103；Worn和Pluckthun,2001,J Mol Biol.305,989-1010；Pluckthun,The Pharmacology of Monoclonal Antibodies,第113卷,第269-315页；Rosenburg和Moore编辑,Springer-Verlag,New York(1994)；美国专利号5,840,301；美国专利号5,844,093；和美国专利号5,892,020；所述文献全部以引用的方式并入本文。
多价抗体
在一些实施方案中，抗TREM2抗体是多价抗体，其可比二价抗体更快地被表达抗体结合的抗原的细胞内化(和/或分解代谢)。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体或其抗体片段可以是具有三个或更多个抗原结合位点的多价抗体(其不是IgM类的)(例如，四价抗体)，其可以通过重组表达编码抗体多肽链的核酸而容易地产生。多价抗体可包含二聚化结构域和三个或更多个抗原结合位点。优选的二聚化结构域包含Fc区或铰链区。在这种情景下，抗体将包含Fc区和Fc区氨基末端的三个或更多个抗原结合位点。本文优选的多价抗体包含三个至约八个，但优选四个抗原结合位点。多价抗体含有至少一条多肽链(以及优选两条多肽链)，其中所述一条或多条多肽链包含两个或更多个可变结构域。例如，所述一条或多条多肽链可包含VDl-(Xl)n-VD2-(X2)n-Fc，其中VD1是第一可变结构域，VD2是第二可变结构域，Fc是Fc区的一条多肽链，X1和X2代表氨基酸或多肽，并且n是0或1。类似地，所述一条或多条多肽链可包含VH-CH1-柔性接头-VH-CH1-Fc区链；或VH-CH1-VH-CH1-FC区链。本文的多价抗体优选地还包含至少两种(以及优选四种)轻链可变结构域多肽。本文的多价抗体可例如包含约两钟至约八种轻链可变结构域多肽。这里考虑的轻链可变结构域多肽包含轻链可变结构域，并且任选地，还包含CL结构域。
多价抗体可识别TREM2抗原以及不限于另外的抗原，如β肽、抗原或α突触核蛋白抗原或τ蛋白抗原或TDP-43蛋白抗原或朊病毒蛋白抗原或亨廷顿蛋白抗原、或RAN翻译产物抗原(包括由甘氨酸-丙氨酸(GA)、甘氨酸-脯氨酸(GP)、甘氨酸-精氨酸(GR)、脯氨酸-丙氨酸(PA)或脯氨酸-精氨酸(PR)构成的二肽重复序列(DPR肽))、胰岛素受体、***受体。转铁蛋白受体或任何其他促进跨血脑屏障的抗体转移的抗原。
编码TREM2抗体的多核苷酸
在另一个方面，本公开提供了编码本文所述的抗体或抗原结合区的多核苷酸。特别地，多核苷酸是分离的多核苷酸。多核苷酸可与一个或多个控制基因表达的异源控制序列可操作地连接，以产生能够表达感兴趣的多肽的重组多核苷酸。可将含有编码相关多肽或蛋白质的异源多核苷酸的表达构建体引入适当的宿主细胞中，以表达对应的多肽。
如本领域技术人员所理解的，由于遗传密码的简并性，其中相同的氨基酸由替代或同义密码子编码，可产生极大量的核酸，所有这些核酸都编码本文所述抗原结合蛋白的CDR、可变区、重链和轻链或其他组分。因此，鉴定了特定的氨基酸序列，本领域的技术人员可通过以不改变编码蛋白质的氨基酸序列的方式简单地修饰一个或多个密码子的序列来产生任何数量的不同核酸。在这方面，本公开包括编码本文公开的多肽的多核苷酸的每一种可能的变异。
在从天然存在的来源分离的核酸的情况下，“分离的核酸”在本文中可与“分离的多核苷酸”互换使用，是指从分离核酸的生物体基因组中存在的相邻遗传序列中分离的核酸。在从模板酶促合成或化学合成核酸的情况下，诸如PCR产物、cDNA分子或寡核苷酸，应当理解从此类过程产生的核酸是分离的核酸。分离的核酸分子是指呈分离片段形式或作为更大核酸构建体的组分的核酸分子。在一个优选的实施方案中，核酸基本上不含污染的内源性物质。
在一些实施方案中，多核苷酸编码本文所述的轻链可变区的CDR L1、CDR L2和CDRL3。在一些实施方案中，多核苷酸编码本文所述的重链可变区的CDR H1、CDR H2和CDR H3。
在一些实施方案中，多核苷酸编码本文所述的轻链可变区的CDR L1、CDR L2和CDRL3以及重链可变区的CDR H1、CDR H2和CDR H3。
在一些实施方案中，多核苷酸编码与本文公开的可变轻链的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的轻链可变区VL。
在一些实施方案中，多核苷酸编码与本文公开的可变重链的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的重链可变区VH。
在一些实施方案中，可以以多种方式操作本文的多核苷酸，以提供编码多肽的表达。在一些实施方案中，多核苷酸可操作地连接到控制序列，包括用于多核苷酸和/或对应多肽的表达的转录启动子、前导序列、转录增强子、核糖体结合或进入位点、终止序列和聚腺苷酸化序列等。取决于表达载体，在将分离的多核苷酸***载体中之前对其进行操作可能是期望的或必需的。利用重组DNA方法修饰多核苷酸和核酸序列的技术是本领域熟知的。Sambrook等人,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第3版,Cold Spring HarborLaboratory Press(2001)；以及Current Protocols in Molecular Biology,Ausubel.F.编辑,Greene Pub.Associates(1998)，更新至2013年。
在一些实施方案中，抗原结合蛋白的变体(包括本文所述的变体)可通过使用盒或PCR诱变或本领域熟知的其他技术对编码多肽的DNA中的核苷酸进行定点诱变来制备，以产生编码所述变体的DNA，此后如本文所概述的在细胞培养物中表达重组DNA。然而，可通过使用已建立的技术通过体外合成来制备包含具有多达约100-150个残基的变体CDR的抗原结合蛋白。变体通常表现出与天然存在的类似物相同的定性生物活性，例如与抗原结合。此类变体包括例如抗原结合蛋白的氨基酸序列中残基的缺失和/或***和/或取代。可进行缺失、***和取代的任何组合来获得最终构建体，条件是最终构建体具有所需的特征。氨基酸变化也可改变抗原结合蛋白的翻译后过程，诸如改变糖基化位点的数量或位置。在一些实施方案中，制备抗原结合蛋白变体的目的是为了修饰那些直接参与表位结合的氨基酸残基。在其他实施方案中，出于本文讨论的目的，不直接参与表位结合的残基或不以任何方式参与表位结合的残基的修饰是期望的。预期在任何CDR区、框架区和/或恒定区内进行诱变。熟练技术人员可使用协方差分析技术来设计抗原结合蛋白氨基酸序列的有用修饰。参见例如Choulier等人,Proteins 41:475-484,2000；Demarest等人,J.Mol.Biol.,2004,335:41-48；Hugo等人,Protein Engineering,2003,16(5):381-86；Aurora等人,美国专利公开号2008/0318207A1；Glaser等人,美国专利公开号2009/0048122A1；Urech等人,WO 2008/110348 A1；Borras等人,WO 2009/000099 A2。通过协方差分析确定的此类修饰可改善抗原结合蛋白的效力、药代动力学、药效学和/或可制造性特征。
在另一个方面，本发明还提供了载体，所述载体包含编码本文所述抗原结合蛋白的一种或多种组分(例如，可变区、轻链和重链)的一种或多种核酸或多核苷酸。如本文所用，术语“载体”是指用于将蛋白质编码信息转移到宿主细胞中的任何分子或实体(例如，核酸、质粒、噬菌体或病毒)。载体的实例包括但不限于质粒、病毒载体、非附加型哺乳动物载体和表达载体，例如重组表达载体。如本文所用的术语“表达载体”或“表达构建体”是指含有所需编码序列和在特定宿主细胞中表达可操作地连接的编码序列所必需的适当核酸控制序列的重组DNA分子。表达载体可包括但不限于影响或控制转录、翻译并且如果存在内含子还影响与其可操作地连接的编码区的RNA剪接的序列。在原核生物中表达所必需的核酸序列包括启动子、任选地操纵子序列、核糖体结合位点和可能的其他序列。已知真核细胞利用启动子、增强子、以及终止和聚腺苷酸化信号。如果需要，分泌信号肽序列也可任选地由表达载体编码，与感兴趣的编码序列可操作地连接，使得所表达的多肽可由重组宿主细胞分泌，以便更容易地从细胞中分离感兴趣的多肽。
重组表达载体可以是任何载体(例如质粒或病毒)，其可方便地进行重组DNA程序并且可造成多核苷酸序列的表达。载体的选择通常将取决于载体与载体将被引入的宿主细胞的相容性。载体可以是线性或闭环质粒。示例性的表达载体包括基于T7或T7lac启动子的载体(pACY：Novagen；pET)；基于杆状病毒(Baculovirus)启动子的载体(例如pBAC)；基于Ef1-α和HTLV启动子的载体(例如，pFUSE2；Invitrogen,CA,USA)；基于CMV增强子和人铁蛋白轻链基因启动子的载体(例如，pFUSE：Invitrogen,CA,USA)；基于CMV启动子的载体(例如，pFLAG：Sigma,USA)；和基于二氢叶酸还原酶启动子的载体(例如，pEASE：Amgen,USA)。各种载体可用于感兴趣多肽的瞬时或稳定表达。
宿主细胞
在另一个方面，编码本文所述抗原结合蛋白的多核苷酸(例如，可变区、轻链和重链)可操作地连接到一个或多个控制序列，用于多肽在宿主细胞中的表达。因此，在另外的方面，本公开提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞包含编码本文所述TREM2激动剂抗原结合蛋白的组分的一种或多种表达载体。
示例性的宿主细胞包括原核生物、酵母或高等真核生物细胞。原核宿主细胞包括真细菌，诸如革兰氏阴性或革兰氏阳性生物体，例如肠杆菌科(Enterobacteriaceae)，诸如埃希氏菌属(Escherichia)，例如大肠杆菌、肠杆菌属(Enterobacter)、欧文氏菌属(Erwinia)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、变形杆菌属(Proteus)、沙门氏菌属(Salmonella)(例如鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium))、沙雷氏菌属(Serratia)(例如，粘质沙雷氏菌(Serratia marcescans))和志贺氏菌属(Shigella)，以及芽孢杆菌属(Bacillus)(诸如枯草芽孢杆菌(B.subtilis)和地衣芽孢杆菌(B.licheniformis))、假单胞菌属(Pseudomonas)和链霉菌属(Streptomyces)。真核微生物诸如丝状真菌或酵母是重组多肽的合适克隆或表达宿主。酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或普通烘焙酵母是低等真核宿主微生物中最常用的。然而，许多其他属、物种和菌株通常可获得并可用于本文，诸如毕赤酵母属(Pichia)，例如巴斯德毕赤酵母(P.pastoris)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)；克鲁维酵母属(Kluyveromyces)，子囊菌酵母属(Yarrowia)；念珠菌属(Candida)；里氏木霉(Trichoderma reesia)；粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)；许旺酵母属(Schwanniomyces)，诸如西方许旺酵母(Schwanniomyces occidentalis)；和丝状真菌，诸如脉孢菌属(Neurospora)、青霉属(Penicillium)、弯颈霉属(Tolypocladium)和曲霉属宿主(诸如构巢曲霉(A.nidulans)和黑曲霉(A.niger))。
用于表达糖基化抗原结合蛋白的宿主细胞可源自多细胞生物体。无脊椎动物细胞的实例包括植物和昆虫细胞。已经鉴定了许多杆状病毒株和变体以及来自宿主诸如草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)(毛虫)、埃及伊蚊(Aedes aegypti)(蚊子)、白纹伊蚊(Aedes albopictus)(蚊子)、黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)(果蝇)和家蚕(Bombyxmori)的对应许可性昆虫宿主细胞。用于转染此类细胞的多种病毒株是公开可得的，例如苜蓿尺蠖(Autographa californica)NPV的L-1变体和家蚕NPV的Bm-5株。
脊椎动物宿主细胞也是合适的宿主，并且从此类细胞重组生产抗原结合蛋白已经成为常规程序。可用作表达宿主的哺乳动物细胞系是本领域熟知的，包括但不限于可从美国典型培养物保藏中心(ATCC)获得的永生化细胞系，包括但不限于中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括CHOK1细胞(ATCC CCL61)、DXB-11、DG-44和中国仓鼠卵巢细胞/-DHFR(CHO，Urlaub等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1980,77:4216)；由SV40转化的猴肾CV1系(COS-7，ATCCCRL 1651)；人胚胎肾细胞系(亚克隆用于悬浮培养物中的生长的293或293细胞，(Graham等人,J.Gen Virol.36:59,1977)；幼仓鼠肾细胞(BHK，ATCC CCL 10)；小鼠支持细胞(TM4，Mather,Biol.Reprod.,1980,23:243-251)；猴肾细胞(CV1 ATCC CCL 70)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76，ATCC CRL-1587)；人***细胞(HELA，ATCC CCL 2)；犬肾细胞(MDCK，ATCC CCL34)；水牛大鼠肝细胞(BRL 3A，ATCC CRL 1442)；人肺细胞(W138，ATCC CCL 75)；人肝癌细胞(Hep G2，HB 8065)；小鼠乳腺肿瘤(MMT 060562，ATCC CCL51)；TRI细胞(Mather等人,Annals N.Y Acad.Sci.,1982,383:44-68)；MRC 5细胞或FS4细胞；哺乳动物骨髓瘤细胞和许多其他细胞系。在某些实施方案中，可通过确定哪些细胞系具有高表达水平并且组成型产生具有人TREM2结合特性的抗原结合蛋白来选择细胞系。在另一个实施方案中，可选择来自B细胞谱系的细胞系，所述细胞系不产生自身抗体，但具有产生和分泌异源抗体的能力。在一些实施方案中，CHO细胞是用于表达本发明TREM2激动剂抗原结合蛋白的优选宿主细胞。
在各种实施方案中，用本公开的多核苷酸(诸如用于表达抗原结合蛋白的表达载体)引入和转化宿主细胞是通过如下方法来完成的，所述方法包括转染、感染、磷酸钙共沉淀、电穿孔、显微注射、脂转染、DEAE-葡聚糖介导的转染或其他已知技术。在一些实施方案中，所选择的方法可由所用宿主细胞的类型来指导。合适的方法描述于例如Sambrook等人,2001。
表达和分离
在一些实施方案中，将包含编码本文所述抗原结合蛋白的一种或多种组分(例如可变区、轻链和重链)的多核苷酸的宿主细胞用于表达感兴趣的抗原结合蛋白。在一些实施方案中，用于表达抗原结合蛋白的方法包括在适于表达感兴趣的蛋白质的合适培养基和条件下培养宿主细胞。
所选择的培养基类型和培养条件是基于宿主细胞的类型。在一些实施方案中，用于哺乳动物宿主细胞的示例性培养基包括例如但不限于汉氏(Ham's)F10(Sigma)、最小必需培养基(MEM，Sigma)、RPMI-1640(Sigma)和杜尔贝克氏改良伊格尔培养基(Dulbecco'sModified Eagle's Medium(DMEM),Sigma)。在一些实施方案中，培养基可根据需要补充激素和/或其他生长因子(诸如胰岛素、转铁蛋白或表皮生长因子)、盐(诸如氯化钠、钙、镁和磷酸盐)、缓冲液(诸如HEPES)、核苷酸(诸如腺苷和胸苷)、抗生素(诸如GentamycinTM药物)、微量元素(定义为通常以微摩尔范围的终浓度存在的无机化合物)和葡萄糖或等同的能量来源。在一些实施方案中，培养条件，诸如温度、pH、％CO2等，可使用技术人员可用和已知的条件。
在一些实施方案中，从宿主细胞中分离和/或纯化所表达的抗原结合蛋白。在所表达的蛋白质存在于培养基中的一些实施方案中，含有所表达的蛋白质的培养基经受分离程序。在抗原结合蛋白在细胞内产生的一些实施方案中，对细胞进行破碎，并且作为第一步骤，例如通过离心或超滤去除颗粒碎片，无论是宿主细胞还是裂解的片段。随后，可通过各种已知技术分离和进一步纯化抗原结合蛋白。此类分离技术包括用蛋白-A琼脂糖凝胶的亲和层析、尺寸排阻色谱、离子交换色谱、高效液相色谱、差别溶解等(参见例如，Fisher,Laboratory Techniques,于Biochemistry And Molecular Biology中,Work和Burdon编辑,Elsevier(1980)；Antibodies:A Laboratory Manual,Greenfield,E.A.编辑,ColdSpring Harbor Laboratory Press,New York(2012)；Coligan等人,同上,第2.7.1-2.7.12章节和第2.9.1-2.9.3章节；Barnes等人,Purification of Immunoglobulin G(IgG),Methods Mol.Biol.,第10卷,第79-104页,Humana Press(1992))。
在一些实施方案中，分离的抗体可进一步纯化，如可通过以下方法测量的：(1)使用Lowry方法确定的蛋白质重量；(2)达到足以通过使用旋转杯测序仪获得N末端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度；或(3)通过SDS-PAGE在还原或非还原条件下使用考马斯蓝或优选银染达到同质性。如通过前述方法确定的，纯化的抗体可以是按重量计85％或更多、90％或更多、95％或更多或至少99％的。
抗体制剂
在某些实施方案中，本发明提供了一种组合物(例如药物组合物)，所述组合物包含一种或多种本文公开的TREM2活化抗体和TREM2激动剂抗体和抗原结合蛋白，以及药学上可接受的稀释剂、载剂、赋形剂、增溶剂、乳化剂、防腐剂和/或佐剂。本发明的药物组合物包括但不限于液体、冷冻和冻干组合物。“药学上可接受的”是指在所用的剂量和浓度下对人类接受者无毒和/或当施用于人类时不产生过敏或不良反应的分子、化合物和组合物。在一些实施方案中，药物组合物可包含用于改变、维持或保持例如组合物的pH、渗透压、粘度、透明度、颜色、等渗性、气味、无菌性、稳定性、溶解或释放速率、吸附或渗透的制剂材料。在此类实施方案中，合适的制剂材料包括但不限于氨基酸(诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸)；抗微生物剂；抗氧化剂(诸如抗坏血酸、亚硫酸钠或亚硫酸氢钠)；缓冲剂(诸如硼酸盐、碳酸氢盐、Tris-HCl、柠檬酸盐、磷酸盐或其他有机酸)；填充剂(诸如甘露醇或甘氨酸)；螯合剂(诸如乙二胺四乙酸(EDTA))；络合剂(诸如咖啡因、聚乙烯吡咯烷酮、β-环糊精或羟丙基-β-环糊精)；填料；单糖；二糖；和其他碳水化合物(诸如葡萄糖、甘露糖或糊精)；蛋白质(诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白)；着色剂、调味剂和稀释剂；乳化剂；亲水性聚合物(诸如聚乙烯吡咯烷酮)；低分子量多肽；成盐抗衡离子(诸如钠)；防腐剂(诸如苯扎氯铵、苯甲酸、水杨酸、硫柳汞、苯乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、氯己定、山梨酸或过氧化氢)；溶剂(诸如甘油、丙二醇或聚乙二醇)；糖醇(诸如甘露醇或山梨醇)；悬浮剂；表面活性剂或湿润剂(诸如普郎尼克类、PEG、脱水山梨醇酯、聚山梨醇酯诸如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、triton、氨丁三醇、卵磷脂、胆固醇、泰洛沙泊)；稳定性增强剂(诸如蔗糖或山梨醇)；张力增强剂(诸如碱金属卤化物，优选氯化钠或氯化钾，甘露醇、山梨醇)；递送媒介物；稀释剂；赋形剂和/或药物佐剂。配制用于治疗用途的分子的方法和合适的材料在制药领域中是已知的，并且在例如Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版,(A.R.Genrmo编辑),1990,Mack Publishing Company中有所描述。
在一些实施方案中，本发明的药物组合物包含标准药物载剂，诸如无菌磷酸盐缓冲盐水溶液、抑菌水等。可使用各种水性载剂，例如水、缓冲水、0.4％盐水、0.3％甘氨酸等，并且可包括用于增强稳定性的其他蛋白质，诸如白蛋白、脂蛋白、球蛋白等，经受温和的化学修饰等。
制剂中抗原结合蛋白的示例性浓度范围可以是约0.1mg/ml至约200mg/ml、或约0.1mg/mL至约50mg/mL、或约0.5mg/mL至约25mg/mL，或可替代地约2mg/mL至约10mg/mL。抗原结合蛋白的水性制剂可在pH缓冲溶液中制备，例如，pH范围为约4.5至约6.5、或约4.8至约5.5或可替代地为约5.0。适于该范围内的pH的缓冲剂实例包括乙酸盐(例如乙酸钠)、琥珀酸盐(诸如琥珀酸钠)、葡糖酸盐、组氨酸、柠檬酸盐和其他有机酸缓冲剂。缓冲剂浓度可以是约1mM至约200mM、或约10mM至约60mM，这取决于例如缓冲剂和制剂所需的等渗性。
制剂中可以包括也可稳定抗原结合蛋白的张力剂。示例性的张力剂包括多元醇，诸如甘露醇、蔗糖或海藻糖。优选地，水性制剂是等渗的，尽管高渗或低渗溶液可能是合适的。制剂中多元醇的示例性浓度的范围可以是约1％至约15％w/v。
还可向抗原结合蛋白制剂中添加表面活性剂，以减少所配制的抗原结合蛋白的聚集和/或使制剂中颗粒的形成最小化和/或减少吸附。示例性的表面活性剂包括非离子表面活性剂，诸如聚山梨醇酯(例如，聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80)或泊洛沙姆(例如，泊洛沙姆188)。表面活性剂的示例性浓度的范围可以是约0.001％至约0.5％、或约0.005％至约0.2％、或可替代地约0.004％至约0.01％w/v。
在一个实施方案中，该制剂含有上文鉴定的药剂(即抗原结合蛋白、缓冲剂、多元醇和表面活性剂)，并且基本上不含一种或多种防腐剂，诸如苯甲醇、苯酚、间甲酚、氯丁醇和苄索氯铵。在另一个实施方案中，制剂中可包含防腐剂，例如浓度范围为约0.1％至约2％、或可替代地约0.5％至约1％。一种或多种其他药学上可接受的载剂、赋形剂或稳定剂(诸如在REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES,第18版,(A.R.Genrmo编辑),1990,MackPublishing Company中所述的那些)可包含在制剂中，条件是它们不会对制剂的所需特性产生不利影响。
通过将具有所需程度的纯度的抗原结合蛋白与任选的生理学上可接受的载剂、赋形剂或稳定剂混合，制备抗原结合蛋白的治疗制剂用于储存(Remington'sPharmaceutical Sciences,第18版,(A.R.Genrmo编辑),1990,Mack PublishingCompany)，所述治疗制剂呈冻干制剂或水溶液的形式。可接受的载剂、赋形剂或稳定剂在所用的剂量和浓度下对接受者无毒，并且包括缓冲剂(例如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸)；抗氧化剂(例如抗坏血酸和蛋氨酸)；防腐剂(诸如十八烷基二甲基苄基氯化铵、氯己双铵、苯扎氯铵、苄索氯铵、苯酚、丁醇或苯甲醇、对羟基苯甲酸烷基酯诸如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯、儿茶酚；间苯二酚、环己醇、3-戊醇和间甲酚)；低分子量(例如少于约10个残基)多肽；蛋白质(诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白)；亲水性聚合物(例如聚乙烯吡咯烷酮)；氨基酸(例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸)；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖、麦芽糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖类，诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐抗衡离子，诸如钠；金属复合物(例如，Zn-蛋白质复合物)；和/或非离子表面活性剂，诸如聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80)或泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188)；或聚乙二醇(PEG)。
在一个实施方案中，所要求保护的发明的合适制剂含有等渗缓冲剂，诸如磷酸盐、乙酸盐或TRIS缓冲剂，以及张力剂，诸如多元醇、山梨醇、蔗糖或氯化钠，它们具有张力和稳定性。这种张力剂的一个实例是5％山梨醇或蔗糖。此外，所述制剂可任选地包含例如0.01％至0.02％wt/vol的表面活性剂，以防止聚集或提高稳定性。所述制剂的pH值可以在4.5至6.5、或4.5至5.5的范围内。用于抗原结合蛋白的药物制剂的其他示例性描述可以在美国专利公开号2003/0113316和美国专利号6,171,586中找到，所述文献中的每一篇据此全文以引用的方式并入。
也考虑了抗原结合蛋白的悬浮液和晶体形式。制备悬浮液和晶体形式的方法是本领域技术人员已知的。
用于体内施用的制剂必须是无菌的。本发明的组合物可以通过常规的、熟知的灭菌技术灭菌。例如，通过无菌过滤膜的过滤很容易完成灭菌。所得溶液可包装进行使用或在无菌条件下过滤并冻干，冻干制备物在施用前与无菌溶液组合。
冷冻干燥过程通常用于稳定多肽供长期存储，特别是当多肽在液体组合物中相对不稳定时。冻干循环通常由三个步骤构成：冷冻、初级干燥和二级干燥(参见Williams和Polli,Journal of Parenteral Science and Technology,1984,38(2):48-59)。在冷冻步骤中，溶液被冷却直到充分冷冻。溶液中的大量水在这个阶段形成冰。冰在初级干燥阶段升华，这是通过使用真空将室压降低到冰的蒸汽压以下来进行的。最后，在降低的室压和升高的搁板温度下，在二级干燥阶段除去吸附或结合的水。该过程产生了一种叫做冻干饼的物质。此后，所述饼可在使用前重构。
冻干材料的标准重构实践是加回一定体积的纯水(通常相当于冻干期间除去的体积)，尽管在生产肠胃外施用的药物中有时使用抗菌剂的稀释溶液(参见Chen,DrugDevelopment and Industrial Pharmacy,第18卷:1311-1354,1992)。
已注意到赋形剂在一些情况下充当冻干产品的稳定剂(参见Carpenter等人,第74卷:225-239,1991)。例如，已知的赋形剂包括多元醇(包括甘露醇、山梨醇和甘油)；糖类(包括葡萄糖和蔗糖)；以及氨基酸(包括丙氨酸、甘氨酸和谷氨酸)。
此外，多元醇和糖也经常用于保护多肽免受冷冻和干燥引起的损伤，并增强在干燥状态下储存期间的稳定性。一般来说，糖(特别是二糖)在冷冻干燥过程和存储期间都是有效的。其他种类的分子(包括单糖和二糖以及聚合物诸如PVP)也被报道作为冻干产品的稳定剂。
对于注射，药物制剂和/或医药可以是适于用如上所述的适当溶液重构的粉末。这些的实例包括但不限于冷冻干燥、旋转干燥或喷雾干燥的粉末、无定形粉末、颗粒、沉淀物或微粒。对于注射，制剂可任选地含有稳定剂、pH调节剂、表面活性剂、生物利用度调节剂以及这些的组合。
可制备持续释放制备物。持续释放制备物的合适实例包括含有抗原结合蛋白的固体疏水性聚合物的半渗透基质，所述基质为成型制品的形式，例如薄膜或微胶囊。持续释放基质的实例包括聚酯、水凝胶(例如，聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚丙交酯(美国专利号3,773,919)、L-谷氨酸和y-乙基-L-谷氨酸的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物诸如Lupron DepotTM(由乳酸-乙醇酸共聚物和乙酸亮丙瑞林构成的可注射微球)和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。虽然聚合物诸如乙烯-乙酸乙烯酯和乳酸-乙醇酸能够释放分子持续100天以上，但是某些水凝胶释放蛋白质持续的时间较短。当包封的多肽长时间保留在体内时，它们可能由于暴露于37℃的湿气而变性或聚集，导致生物活性的丧失和免疫原性的可能变化。取决于所涉及的机制，可以为稳定化设计合理的策略。例如，如果发现聚集机制是通过硫代-二硫化物互换形成分子间S-S键，则可通过修饰巯基残基、从酸性溶液中冻干、控制水分含量、使用合适的添加剂和开发特定的聚合物基质组合物来实现稳定化。
可将本发明的制剂设计成短效的、快速释放的、长效的或持续释放的。因此，也可将药物制剂配制用于控制释放或用于缓慢释放。
取决于待治疗的疾病、障碍或病症、年龄、体重、一般健康状况、性别和受试者的饮食、剂量间隔、施用途径、***率和药物组合，可调整具体的剂量。
本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白可通过任何合适的方式施用，包括肠胃外、皮下、腹膜内、肺内、鞘内、脑内、脑室内和鼻内施用，并且如果需要进行局部治疗，还包括病灶内施用。肠胃外施用包括静脉内、动脉内、腹膜内、肌肉内、皮内或皮下施用。此外，特别是在抗原结合蛋白剂量递减的情况下，抗原结合蛋白适宜通过脉冲输注施用。优选地，给药通过注射，最优选静脉内或皮下注射给予，这部分取决于施用是短暂的还是长期的。考虑了其他施用方法，包括局部施用，特别是经皮、经粘膜、直肠、口服或局部施用，例如通过放置在所需部位附近的导管。在某些实施方案中，本发明的TREM2激动剂抗原结合蛋白在生理溶液中以在0.01mg/kg至100mg/kg之间的范围内的剂量以每天一次至每周一次至每月一次范围内的频率(例如每天一次、每隔一天一次、每三天一次或每周2次、3次、4次、5次或6次)，优选以0.1至45mg/kg、0.1至15mg/kg或0.1至10mg/kg范围内的剂量以每周一次、每两周一次或每月一次的频率静脉内或皮下施用。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体经由IV输注施用于人患者。在一些实施方案中，抗TREM2抗体IV输注至多约5小时、至多约4小时、至多约3小时、至多约2小时或至多约60分钟。在一些实施方案中，抗TREM2抗体IV输注约5分钟至约5小时、约5分钟至约4小时、约5分钟至约3小时、约5分钟至约2小时，或约5分钟至约60分钟。在一些实施方案中，抗TREM2抗体IV输注约5分钟、约10分钟、约15分钟、约20分钟、约25分钟、约30分钟、约35分钟、约40分钟、约45分钟、约50分钟、约55分钟、约60分钟、约70分钟、约80分钟或约90分钟。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体以至多约200mg/kg的剂量施用于人患者。在一些实施方案中，抗TREM2抗体以至多约150mg/kg的剂量施用于人患者。在一些实施方案中，抗TREM2抗体以至多约100mg/kg的剂量施用于人患者。在一些实施方案中，抗TREM2抗体以约1mg/kg至约100mg/kg、约1mg/kg至约90mg/kg、约1mg/kg至约80mg/kg、约1mg/kg至约70mg/kg、或约1mg/kg至约60mg/kg的剂量施用于人患者。在一些实施方案中，抗TREM2抗体以约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg、约40mg/kg、约45mg/kg、约50mg/kg、约55mg/kg或约60mg/kg的剂量施用于人患者。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体每天施用于人患者一次。在一些实施方案中，抗TREM2抗体每周施用于人患者1、2、3或4次。在一些实施方案中，抗TREM2抗体每月施用于人患者1、2、3或4次。在一些实施方案中，抗TREM2抗体每1、2、3或4周施用于人患者一次。在一些实施方案中，抗TREM2抗体每2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天或14天施用于人患者一次。在一些实施方案中，抗TREM2抗体每周施用于人患者一次。
在一些实施方案中，本发明提供了一种液体制剂，其包含浓度至多约300mg/mL的抗TREM2抗体。在一些实施方案中，本发明提供了一种液体制剂，其包含浓度至多约250mg/mL的抗TREM2抗体。在一些实施方案中，本发明提供了一种液体制剂，其包含浓度至多约200mg/mL的抗TREM2抗体。在一些实施方案中，本发明提供了一种液体制剂，其包含浓度至多约150mg/mL的抗TREM2抗体。在一些实施方案中，本发明提供一种液体制剂，其包含浓度为约300mg/mL、约250mg/mL、约200mg/mL、约180mg/mL、约170mg/mL、约160mg/mL、约150mg/mL、约140mg/mL、约130mg/mL、约120mg/mL、约110mg/mL或约100mg/mL的抗TREM2抗体。在一些实施方案中，本发明提供了一种液体制剂，其包含浓度为约140mg/mL的抗TREM2抗体。在一些实施方案中，本发明的方法包括向人患者施用如本文所述的液体制剂。在一些实施方案中，本发明的方法包括向患者施用液体制剂，所述液体制剂包含浓度为约140mg/mL的抗TREM2抗体。
本文所述的TREM2激动剂抗原结合蛋白(例如，抗TREM2激动剂单克隆抗体及其结合片段)可用于预防、治疗或改善在有需要的患者中的与TREM2缺乏或TREM2生物功能丧失相关的病症。如本文所用，术语“治疗”(“treating”或“treatment”)是为了防止障碍的发展或改变障碍的病理而进行的干预。因此，“治疗”是指治疗性治疗和防预性或预防性措施。需要治疗的患者包括那些已经被诊断患有或已经患有所述疾病或障碍的患者，以及那些将要预防所述障碍或病症的患者，诸如基于例如遗传标记而有风险发展所述障碍或病症的患者。“治疗”包括任何成功改善损伤、病理或病症的标志，包括任何客观或主观参数，诸如症状的减轻、缓解、消失，或使损伤、病理或病症对患者更易耐受，减缓退行性变或衰退的速度，使退行性变的终点不那么使人虚弱，或改善患者的身体或精神健康。症状的治疗或改善可基于客观或主观参数，包括身体检查结果、患者自我报告、认知测试、运动功能测试、神经精神检查和/或精神病学评估。
III.小分子TREM2激动剂
在一些实施方案中，TREM2的激动剂是TREM2的小分子激动剂。
在一些实施方案中，TREM2的激动剂是TREM2的脂质配体。在一些实施方案中，TREM2的脂质配体选自1-棕榈酰基-2-(5'-氧代-戊酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(POVPC)、2-花生酰基甘油(2-AG)、7-酮基胆固醇(7-KC)、24(S)羟基胆固醇(240HC)、25(S)羟基胆固醇(250HC)、27-羟基胆固醇(270HC)、酰基肉碱(AC)、烷基酰基甘油磷酸胆碱(PAF)、α-半乳糖基神经酰胺(KRN7000)、双(单酰甘油)磷酸酯(BMP)、心磷脂(CL)、神经酰胺、神经酰胺-1-磷酸酯(CIP)、胆固醇酯(CE)、胆固醇磷酸酯(CP)、二酰基甘油34:1(DG 34:1)、二酰基甘油38:4(DG 38:4)、二酰基甘油焦磷酸酯(DGPP)、二氢神经酰胺(DhCer)、二氢鞘磷脂(DhSM)、醚磷脂酰胆碱(PCe)、游离胆固醇(FC)、半乳糖神经酰胺(GalCer)、半乳糖鞘氨醇(GalSo)、神经节苷脂GM1、神经节苷脂GM3、葡萄糖基鞘氨醇(GlcSo)、汉克氏平衡盐溶液(HBSS)、Kdo2-脂质A(KLA)、乳糖神经酰胺(LacCer)、溶血烷基酰基甘油磷酸胆碱(LPAF)、溶血磷脂酸(LPA)、溶血磷脂酰胆碱(LPC)、溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)、溶血磷脂酰甘油(LPG)、溶血磷脂酰肌醇(LPI)、溶血鞘磷脂(LSM)、溶血磷脂酰丝氨酸(LPS)、N-酰基-磷脂酰乙醇胺(NAPE)、N-酰基-丝氨酸(NSer)、氧化磷脂酰胆碱(oxPC)、棕榈酸-9-羟基-硬脂酸(PAHSA)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰乙醇(PEtOH)、磷脂酸(PA)、磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、二氢鞘氨醇、二氢鞘氨醇-1-磷酸酯(SalP)、鞘磷脂(SM)、鞘氨醇、鞘氨醇-1-磷酸酯(SolP)、或硫苷脂(Sulfatide)、或它们的盐。
在一些实施方案中，TREM2的激动剂是脂多糖。
在一些实施方案中，TREM2的激动剂是PCT申请公开WO2019/079529中公开的小分子，其全文以引用的方式并入本文。在一些实施方案中，TREM2的激动剂是酪氨酸磷酸化抑制剂(Tyrphostin)AG 538、AC1NS458、IN1040、紫铆因(Butein)、奥卡宁(Okanin)、AGL2263、GB19、GB16、GB20、GB17、GB18、GB21、GB22、GB27、GB44、GB42、GB2、4,4'-二羟基查耳酮或3,4-二羟基二苯甲酮或任何前述物质的衍生物或盐。
在一些实施方案中，TREM2的激动剂是通过PCT申请公开WO2019/079529中公开的方法鉴定的小分子。在一些实施方案中，通过将小分子化合物应用于表达TREM2和酪氨酸激酶结合蛋白(TYROBP)的宿主细胞并测量由报告分子发出的信号来鉴定TREM2的小分子激动剂，其中所述宿主细胞具有包含NFAT反应元件和编码报告分子的核苷酸序列的合成序列。
在一些实施方案中，TREM2的激动剂是PCT申请公开WO2021/226135或WO2021/226629中公开的小分子。
在一些实施方案中,TREM2的激动剂是包含双环核心的TREM2激动剂化合物。在一些实施方案中，双环核心是10元杂芳基核心。在一些实施方案中,TREM2激动剂化合物包含10元杂芳基核心，所述杂芳基核心包含1至4个氮原子作为核心环结构的一部分。在一些实施方案中，TREM2激动剂化合物包含10元杂芳基核心，所述杂芳基核心包含3个或4个取代基基团。
IV.其他TREM2激动剂
在一些实施方案中，TREM2的激动剂是热休克蛋白60(HSP60)。
在一些实施方案中，TREM2的激动剂是载脂蛋白E(ApoE)。
V.药学上可接受的组合物
在某些实施方案中，将本文公开的TREM2活化抗体或小分子配制成组合物以施用于需要这种组合物的患者。
术语“药学上可接受的载体、佐剂或媒介物”是指不破坏与其一起配制的化合物的药理活性的无毒载体、佐剂或媒介物。可用于本发明组合物的药学上可接受的载体、佐剂或媒介物包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白诸如人血清白蛋白、缓冲物质诸如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸、水、盐或电解质诸如鱼精蛋白硫酸盐的偏甘油酯混合物、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶态二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素基物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。
“药学上可接受的衍生物”意指本发明化合物的任何无毒的盐、酯、酯的盐或其他衍生物，当施用于接受者时，能够直接或间接提供本发明化合物或其抑制活性代谢物或残余物。
本发明的组合物可以口服、肠胃外、通过吸入喷雾、局部、直肠、鼻腔、经颊、***或通过移植的储库施用。如本文所用，术语“肠胃外”包括皮下、静脉内、肌肉内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内和颅内注射或输注技术。在一些实施方案中，组合物通过口服、腹膜内或静脉内施用。本发明的组合物的无菌注射用形式可以是水性或油性混悬剂。这些混悬剂可以根据本领域已知的技术使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂来配制。无菌注射用制备物也可以是在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射用溶液剂或混悬剂，例如在1,3-丁二醇中的溶液剂。可以使用的可接受的媒介物和溶剂是水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外，按照惯例将无菌、固定油用作溶剂或悬浮介质。
为此目的，可以采用任何温和的固定油，包括合成甘油一酯或甘油二酯。脂肪酸，诸如油酸及其甘油酯衍生物可用于制备注射剂，以及天然药学上可接受的油，诸如橄榄油或蓖麻油，尤其是它们的聚氧乙基化形式。这些油溶液剂或混悬剂还可以含有长链醇稀释剂或分散剂，诸如羧甲基纤维素或类似的分散剂，它们通常被用于药学上可接受的剂型包括乳剂和悬浮剂的制剂中。其他常用的表面活性剂诸如吐温(Tweens)、斯潘(Spans)以及通常用于制造药学上可接受的固体、液体或其他剂型的其他乳化剂或生物利用率增强剂也可以用于制剂的目的。
本发明的药学上可接受的组合物可以以任何口腔可接受的剂型口服施用，包括但不限于胶囊剂、片剂、水性混悬剂或溶液剂。在口服片剂的情况下，常用的载剂包括乳糖和玉米淀粉。通常还添加润滑剂，诸如硬脂酸镁。对于胶囊形式的口服施用，有用的稀释剂包括乳糖和干玉米淀粉。当口服使用需要水性混悬剂时，将活性成分与乳化剂和助悬剂组合。如果需要，还可以添加某些甜味剂、调味剂或着色剂。
可替代地，本发明的药学上可接受的组合物可以以用于直肠施用的栓剂形式施用。这些可以通过将药剂与合适的无刺激性赋形剂混合来制备，所述赋形剂在室温下为固体，但是在直肠温度下为液体，因此会在直肠中融化以释放药物。此类材料包括可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。
本发明的药学上可接受的组合物也可以局部施用，尤其是当治疗的靶标包括通过局部施用容易接近的区域或器官时，包括眼睛、皮肤或下肠道疾病。很容易为这些区域或器官中的每者制备合适的局部制剂。
可以在直肠栓剂制剂(参见上文)或合适的灌肠剂制剂中实现下肠道的局部施用。还可以使用局部透皮贴剂。
对于局部施用，所提供的药学上可接受的组合物可以被配制为合适的软膏剂，所述软膏剂含有悬浮或溶解于一种或多种载剂中的活性组分。用于本发明的化合物的局部施用的载剂包括但不限于矿物油、液体凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。可替代地，所提供的药学上可接受的组合物可以被配制为合适的洗剂或霜剂，所述洗剂或霜剂含有悬浮或溶解于一种或多种药学上可接受的载剂中的活性组分。合适的载剂包括但不限于矿物油、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、十六烷基酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苄醇和水。
对于眼科用途，所提供的药学上可接受的组合物可以在存在或不存在防腐剂诸如苯扎氯铵的情况下，被配制为在等渗的、pH调节的无菌盐水中的微粉化悬浮液，或者被配制为在等渗的、pH调节的无菌盐水中的溶液。可替代地，对于眼科用途，药学上可接受的组合物可以被配制为软膏诸如凡士林。
本发明的药学上可接受的组合物也可以通过鼻腔气雾剂或吸入施用。此类组合物根据药物制剂领域中熟知的技术来制备，并且可以采用苄醇或其他合适的防腐剂、增加生物利用率的吸收促进剂、碳氟化合物和/或其他常规增溶剂或分散剂制备为在盐水中的溶液。
在一些实施方案中，本发明的药学上可接受的组合物被配制用于口服施用。此类制剂可以在存在或不存在食物的情况下施用。在一些实施方案中，本发明的药学上可接受的组合物在不存在食物的情况下施用。在其他实施方案中，本发明的药学上可接受的组合物与食物一起施用。
在其他实施方案中，本发明的药学上可接受的组合物被配制用于静脉内(IV)施用。
可以与载剂材料组合以产生单一剂型的组合物的本发明的化合物的量将取决于所治疗的宿主、特定施用方式而变化。优选地，所提供的组合物应当被配制为使得可以将在0.01-100mg/kg体重/天之间的抑制剂的剂量施用于接受这些组合物的患者。
还应当理解，任何特定患者的特定剂量和治疗方案将取决于多种因素，包括所采用的特定化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用的时间、***率、药物组合、以及主治医生的判断和正在治疗的特定疾病的严重度。组合物中的本发明的化合物的量还将取决于组合物中的特定化合物。
本公开的每个方面的所有特征在加以必要的修正后适用于所有其他方面。本文提及的每篇参考文献，包括但不限于专利、专利申请和期刊文章，均以引用的方式并入本文，如同其全部内容被完全阐述一样。
为了更全面地理解本文所述的公开内容，阐述了以下实施例。应当理解的是，这些实施例仅仅是出于说明的目的，而不应该被解释为以任何方式限制本公开。
实施例
一般程序
小胶质细胞分化方案
用含有80ng/mL BMP4的mTeSR定制培养基诱导多能干细胞(PSC)分化。第4天，在StemPro-34 SFM(具有2mM GutaMAX，Life Technologies)中用25ng/mL碱性成纤维细胞生长因子、100ng/mL干细胞因子(SCF)和80ng/mL血管内皮生长因子诱导细胞。两天后，培养基补充50ng/mL SCF、50ng/mL IL-3、5ng/mL血小板生成素、50ng/mL巨噬细胞CSF(M-CSF)和50ng/mL Flt3l，并且从第14天起补充50ng/mL M-CSF、50ng/mL Flt3l和25ng/mL GMCSF。第25天与第50天之间，分离出CD14+或CD14+CX3CR1+祖细胞且在小胶质细胞培养基(含有2mM GlutaMAX-I、10ng/mL GM-CSF和100ng/mL IL-34的RPMI-1640[Life Technologies])中涂铺于经组织培养物处理的培养皿或Thermanox塑料盖玻片(都来自Thermo Fisher Scientific)上。培养基每3至4天补充一次，历时至少2周。
由原代健康成纤维细胞、肾上腺脊髓神经病(AMN)成纤维细胞和儿童期大脑ALD(cALD)成纤维细胞产生诱导性多能干细胞(iPSC)
从健康个体(AG01439，3日龄男性)、肾上腺脊髓神经病(AMN)(GM 07530，26岁男性)和cALD(GM04934，存在VLCFA异常和临床X-ALD疾病的7岁男性)患者获得成纤维细胞的细胞培养物。还获得对照人IPSC ATCC-DYR0100细胞系。成纤维细胞在含有10％ FBS、2mML-谷氨酰胺和1％青霉素/链霉素的DMEM中、在37℃和5％ CO2下培养。
在成纤维细胞培养基(DMEM+10％ FBS)中以每孔0.2×106个细胞接种于6孔板中的成纤维细胞用设计成递送人类OCT4、SOX2、c-MYC、KLF4、Nanog和Lin28 cDNA序列的六个慢病毒载体转导。第二天，在转导后第24小时将新鲜成纤维细胞培养基添加到细胞中。在转导后第48小时，将培养基用一半的E8培养基和一半的成纤维细胞培养基更换。当细胞达到约60％汇合时，将它们在E8培养基(StemCell Technologies)中转移到10cm Matrigel涂覆板(6孔板的一个孔进入一个10cm培养皿中)，并且每天更换培养基。在培养的第15天和第30天之间，使用Leica立体显微镜人工拾取单个hiPS克隆。扩增各种hiPS克隆并且根据免疫荧光进行表征以获知Oct4和Tra-1-60的表达。IPSC在IPSC培养基(来自加拿大温哥华(Vancouver,Canada)的Stemcell technologies的mTeSR培养基)中、在Matrigel(BD-Biosceicnes)涂覆板上培养，并且每天更换培养基直至细胞准备好传代为止。
小胶质细胞表征分析和方法
使用流式细胞术、免疫组织化学和细胞定量程序分析小胶质细胞，例如Masuda等人所公开的程序(Masuda等人,Nature.2019；566:388-394.)
单核细胞衍生的巨噬细胞分离方案
单核细胞衍生的巨噬细胞(MDM)来源于从患有肾上腺脊髓神经病(AMN)或cALD的患者收集的PBMC，并且通过磁珠分离和分化成巨噬细胞进行分离，如Jin等人,J VisExp.2016；(112):54244中所报道。收集CD14+单核细胞用于下述实例中。
实施例1.在VLCFA攻击后，TREM2激动剂对小胶质细胞的作用。
概念基础
饱和的超长链脂肪酸(VLCFA；>C22:0)在患有X连锁肾上腺脑白质营养不良(X-ALD，OMIM 300100)的患者的小胶质细胞中累积，X连锁肾上腺脑白质营养不良是归因于过氧化物酶体受损的严重遗传神经退化性疾病。先前的研究分析了X-ALD在人体和基因敲除动物模型中的发展。然而，VLCFA导致严重症状和进行性和多病灶脱髓鞘、肾上腺功能不全和炎症的毒性作用仍然不清楚。为了理解VLCFA在脑中的毒性作用，将神经细胞暴露于VLCFA并分析其作用。用二十二烷酸(C22:0)、二十四烷酸(C24:0)和二十六烷酸(C26:0)攻击的少突细胞和星形胶质细胞在24小时内死亡。VLCFA诱导线粒体原位去极化和所有三种脑细胞类型中的胞内Ca21含量增加提供了关于VLCFA的毒性机制的指示。VLCFA在最大程度上影响产生髓鞘的少突细胞。在分离的线粒体中，VLCFA通过影响内线粒体膜和促进通透性转换而施加有害作用。不打算局限于任何特定理论，可合理地得出结论，由于线粒体功能障碍和Ca21失调的显著细胞生理效应，因此VLFA具有强毒性活性。这证明了存在过氧化物酶体缺陷和随后VLCFA聚积的神经退化性疾病具有基于线粒体的细胞死亡机制。TREM2激动剂治疗通过阻止细胞凋亡和激活吞噬机制以清除髓鞘碎片、从而降低轴突病附近的炎症来挽救VLCFA累积于小胶质细胞中的至少一些有害作用。
实验
将健康患者来源的小胶质细胞涂铺在96孔微量滴定板中。每个孔还含有TREM2激动剂(例如TREM2抗体激动剂或TREM2小分子激动剂)或对照化合物(例如同种型对照IgG作为对照抗体或DMSO作为对照小分子)。示例性方法是在测试孔中使用每孔10μg的经固着的TREM2抗体激动剂并且在对照孔中使用以每孔10μg涂铺的同种型对照物。另一种示例性方法是在测试孔中使用溶解的TREM2抗体激动剂或小分子激动剂。添加VLCFA(例如C26:0、C24:0、C22:0以10至20μM浓度至培养基中；Hein等人,Human Molecular Genetics 2008；17:1750-176.)之前，将细胞在含有CSF1的培养基(50ng/mL)中维持2天。在VLCFA攻击24小时后，通过免疫组织化学染色对孔进行显微镜下分析，例如针对Iba1、P2YR12或其他髓样细胞表面标记物的染色、指示细胞凋亡的凋亡蛋白酶染色，和针对活细胞数量的染色以及针对细胞形态的染色。可以用裂解缓冲液处理其他微量滴定孔以收集mRNA用于对髓样表型的标记物进行qPCR分析，例如稳恒或活化的细胞状态(Keren-Shaul等人,Cell.2017；169:1276-1290；Desckowska等人,Cell.2018；173:1073-1081)。通过测量培养上清液中的乳酸脱氢酶水平，即细胞裂解的量度，可以分析其他微量滴定孔的总细胞死亡(Hein等人,HumanMolecular Genetics.2008；17:1750-176.)。可以修改这个实验，以便通过分析随时间发生的变化和不同VGL101剂量下发生的变化来测量上述试验之后的表型转变动力学，从而理解拯救的剂量依赖性。此外，监测细胞培养物的Incucyte方法可用于实时监测形态变化。
还使用单核细胞衍生的巨噬细胞代替小胶质细胞来重复进行上述实验。
实施例2.TREM2激动剂对ABCD1功能障碍的小胶质细胞的影响。
概念基础
来源于患有cALD的患者的小胶质细胞，例如患者iPSC或患者单核细胞分化而成的小胶质细胞，具有与健康供者来源的小胶质细胞不同的转录和生物化学标志，例如针对疾病相关的小胶质细胞(DAM)潜在地富集的转录和生物化学标志。体外用VLCFA处理来源于cALD患者的小胶质细胞将因功能障碍的过氧化物酶体所调节的代谢所致的脂肪酸累积而产生毒性和促炎性作用。cALD小胶质细胞还可以在没有胞外攻击的情况下自主地使VLCFA累积。可通过转录和生物化学分析对细胞毒性和发炎状态的拯救进行表征，所述拯救是通过在VLCFA攻击期间用TREM2激动剂处理来实现。
实验
将来源于患有ABCD1功能障碍、例如cALD或AMN的患者的iPSC或单核球衍生的小胶质细胞涂铺于96孔微量滴定板中。每个孔还含有TREM2激动剂(例如TREM2抗体激动剂或TREM2小分子激动剂)或对照化合物(例如同种型对照IgG作为对照抗体或DMSO作为对照小分子)。示例性方法是在测试孔中使用每孔10μg的经固着的TREM2抗体激动剂并且在对照孔中使用以每孔10μg涂铺的同种型对照物。另一种示例性方法是在测试孔中使用溶解的TREM2抗体激动剂或小分子激动剂。添加VLCFA(例如C26:0、C24:0、C22:0以10至20μM浓度至培养基中；Hein等人,Human Molecular Genetics 2008；17:1750-176.)之前，将细胞在含有CSF1的培养基(50ng/mL)中维持2天。将媒介物代替VLCFA添加到选定的孔中。攻击24小时之后，藉由免疫组织化学染色对孔进行显微镜下分析，例如针对Iba1、PYR12或其他髓样细胞表面标记物的染色、指示细胞凋亡的凋亡蛋白酶染色，和针对活细胞数量的染色以及针对细胞形态的染色。可以用裂解缓冲液处理其他微量滴定孔以收集mRNA用于对髓样表型的标记物进行qPCR分析，例如稳恒或活化的细胞状态(Keren-Shaul等人,Cell.2017；169:1276-1290；Desckowska等人,Cell.2018；173:1073-1081)。通过测量培养上清液中的乳酸脱氢酶水平，即细胞裂解的量度，可以分析其他微量滴定孔的总细胞死亡(Hein等人,HumanMolecular Genetics.2008；17:1750-176.)。可以修改这个实验，以便通过分析随时间发生的变化和不同VLCFA或VGL101剂量下发生的变化来测量上述试验之后的表型转变动力学，从而理解拯救的剂量依赖性。此外，监测细胞培养物的Incucyte方法可用于实时监测形态变化。
还使用单核细胞衍生的巨噬细胞代替iPSC或小胶质细胞来重复进行上述实验。上述实验也可以如下重复进行，其中用已知可诱导VLCFA在cALD小胶质细胞中累积增加的替代添加剂置换VLCFA攻击。举例来说，可以将髓鞘碎片或脂质代替VLCFA添加到孔中。
实施例3.神经丝轻链作为追踪x-ALD治疗功效的生物标记
对x-ALD患者血清中神经丝轻链(NfL)水平的监测将如下进行，以便选择患者进行治疗并监测治疗功效。根据使用需要，在不同的时间点从患者收集血清。将血清在-80℃下储存在样品等分试样中。当准备好进行分析时，将样品在冰上解冻。使用2步骤测定法Neat2.0方案，使用在HD-1仪器(QUANTERIX)上运行的测定法来确定NfL的测量；100μl样品或校准品(稀释剂：Tris缓冲盐水[TBS]、0.1％吐温20、1％奶粉、400μg/mlHeteroblock[Omega Biologicals,Bozeman,MT])、25μl缀合珠(稀释剂：TBS、0.1％吐温20、1％奶粉、300ug/ml Heteroblock)和20μl的mAB 2:1(0.1μg/ml；稀释剂：TBS、0.1％吐温20、1％奶粉、300ug/ml Heteroblock)孵育47步调(1步调＝45秒)。洗涤后，添加100μl链霉亲和素缀合的b半乳糖苷酶(150pM；Quanterix)，随后进行7步调孵育和洗涤。读数前，添加25μl试卤灵b-D-吡喃半乳糖苷(QUANTERIX)。将校准品(纯)和样品(血清：1:4稀释)一式两份进行测量。牛冻干NfL获自UmanDiagnostics。对于血清测量，校准品的范围为0至2,000pg/ml，对于CSF测量，校准品的范围为0至10,000pg/ml。将批量制备的校准品储存在-80℃。将通过上述方法测量的最终NfL水平用于帮助选择用TREM2激动剂治疗的患者，并且指导对TREM2激动剂治疗的反应。/>

Claims (28)

1.一种治疗人类患者中由ATP结合盒转运体1(ABCD1)功能障碍导致和/或与ABCD1功能障碍相关的疾病或障碍的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的髓样细胞表达的触发受体2(TREM2)的激动剂。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述疾病或障碍选自X连锁肾上腺脑白质营养不良(x-ALD)、球状细胞脑白质营养不良、异染性脑白质营养不良(MLD)、大脑常染色体显性动脉病伴皮层下梗死和脑白质病(CADASIL)、亚历山大病(Alexander disease)、脆折X相关震颤共济失调综合征(FXTAS)、成年发作常染色体显性脑白质营养不良(ADLD)以及X连锁的夏科-马里-图思病(X-linked Charcot–Marie–Tooth disease)(CMTX)。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述疾病或障碍选自Nasu-Hakola病、阿尔茨海默病、额颞叶型痴呆症、多发性硬化、吉兰-巴雷综合征(Guillain-Barre syndrome)、肌肉萎缩性侧索硬化(ALS)或帕金森氏病；其中所述患者展现ABCD1功能障碍和/或在影响ABCD1功能的基因中具有突变。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述疾病或障碍是x-ALD。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述疾病或障碍是艾迪生病，其中已经发现所述患者在影响ABCD1功能的一个或多个ABCD1基因中具有突变。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述TREM2激动剂的施用增强所述患者的小胶质细胞功能。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述TREM2激动剂激活髓样细胞中的TREM2/DAP12信号传导。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述TREM2激动剂激活、诱导、促进、刺激或以其他方式增加选自以下的一种或多种TREM2活性：
(a)TREM2与DAP12的结合；DAP12与TREM2的结合；TREM2磷酸化；DAP12磷酸化；
(b)PI3K活化；
(c)可溶性TREM2(sTREM2)水平增加；
(d)可溶性CSF1R(sCSF1R)水平增加；
(e)选自IL-12p70、IL-4、IL-6和IL-10的一种或多种抗炎介质的表达增加；
(f)选自IFN-a4、IFN-b、IL-6、IL-12p70、IL-12p40、IL-1β、TNF、TNF-α、IL-10、IL-8、CRP、趋化因子蛋白家族的TGF-β成员、IL-20家族成员、IL-33、LIF、IFN-γ、OSM、CNTF、TGF-β、GM-CSF、IL-11、IL-12、IL-17、IL-18和CRP的一种或多种促炎介质的表达降低；
(g)选自CCL2、CCL4、CXCL10、CCL3和CST7的一种或多种趋化因子的表达增强；
(h)TNF-α、IL-6或两者的表达减少；胞外信号调节的激酶(ERK)磷酸化；C-C趋化因子受体7(CCR7)的表达增强；
(i)诱导小胶质细胞的趋化性朝向表达CCL19和CCL21的细胞；
(j)骨髓源树突状细胞诱导抗原特异性T细胞增殖的能力增强、正常化或两者；
(k)破骨细胞产生的诱导、破骨细胞生成速率的增加、或两者兼有；增加树突细胞、巨噬细胞、小胶质细胞、M1巨噬细胞和/或小胶质细胞、活化的M1巨噬细胞和/或小胶质细胞、M2巨噬细胞和/或小胶质细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞和库普弗细胞中的一种或多种的存活和/或功能；
(l)诱导一种或多种类型的清除，所述清除选自凋亡神经元清除、神经组织碎片清除、非神经组织碎片清除、细菌或其他外来体清除、致病蛋白清除、致病肽清除和致病核酸清除；
(m)诱导凋亡神经元、神经组织碎片、非神经组织碎片、细菌、其他外来体、致病蛋白、致病肽或致病核酸中的一种或多种的吞噬作用；被破坏的TREM2/DAP12依赖性基因表达的正常化；
(n)Syk、ZAP70或两者向TREM2/DAP12复合物的募集；Syk磷酸化；CD83和/或CD86在树突细胞、巨噬细胞、单核细胞和/或小胶质细胞上的表达增加；
(o)减少一种或多种炎性细胞因子的分泌，所述炎性细胞因子选自TNF-α、IL-10、IL-6、MCP-1、IFN-a4、IFN-b、IL-1β、IL-8、CRP、趋化因子蛋白家族的TGF-β成员、IL-20家族成员、IL-33、LIF、IFN-γ、OSM、CNTF、TGF-β、GM-CSF、IL-11、IL-12、IL-17、IL-18和CRP；
(p)一种或多种炎性受体的表达降低；在MCSF水平降低的条件下，增加巨噬细胞、树突细胞、单核细胞和/或小胶质细胞的吞噬作用；
(q)在正常水平的MCSF的存在下，降低巨噬细胞、树突细胞、单核细胞和/或小胶质细胞的吞噬作用；增加一种或多种TREM2依赖性基因的活性；
(r)CSF1、CSF2和IL-34中的一种或多种的含量增加；或
(s)它们的任何组合。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述TREM2激动剂是抗原结合蛋白或抗体或其抗原结合片段。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述TREM2激动剂是单克隆抗体。
11.根据权利要求9所述的方法，其中所述TREM2激动剂是人源化抗体。
12.根据权利要求9所述的方法，其中所述TREM2激动剂是人抗体。
13.根据权利要求7至12中任一项所述的方法，其中所述TREM2激动剂是与SEQ ID NO:1的多肽特异性地结合的抗体。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述抗体特异性地结合SEQ ID NO:1的氨基酸残基19-174的多肽。
15.根据权利要求13所述的方法，其中所述抗体特异性地结合SEQ ID NO:1的氨基酸残基19-140的多肽。
16.根据权利要求7至15中任一项所述的方法，其中所述TREM2激动剂是包含轻链可变区和重链可变区的抗体，所述轻链可变区具有选自表EX1和A10的CDRL1、CDRL2和CDRL3，所述重链可变区具有选自表EX2和A11的CDRH1、CDRH2和CDRH3。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述TREM2激动剂是抗体，所述抗体具有：含有选自SEQ ID NO:5-18的序列的CDRL1；含有选自SEQ ID NO:19-30的序列的CDRL2；含有选自SEQ ID NO:31-45的序列的CDRL3；含有选自SEQ ID NO:77-86的序列的CDRH1；含有选自SEQID NO:87-94的序列的CDRH2；和含有选自SEQ ID NO:95-109的序列的CDRH3。
18.根据权利要求16所述的方法，其中所述TREM2激动剂是抗体，所述抗体包含：
(a)分别包含SEQ ID NO:8、22和35的序列的CDRL1、CDRL2和CDRL3，以及分别包含SEQID NO:77、368和98的序列的CDRH1、CDRH2和CDRH3；
(b)分别包含SEQ ID NO:16、369和370的序列的CDRL1、CDRL2和CDRL3，以及分别包含SEQ ID NO:85、371和107的序列的CDRH1、CDRH2和CDRH3；
(c)分别包含SEQ ID NO:10、23和372的序列的CDRL1、CDRL2和CDRL3，以及分别包含SEQID NO:81、373和374的序列的CDRH1、CDRH2和CDRH3；或
(d)分别包含SEQ ID NO:17、29和44的序列的CDRL1、CDRL2和CDRL3，以及分别包含SEQID NO:86、94和375的序列的CDRH1、CDRH2和CDRH3。
19.根据权利要求9至15中任一项所述的方法，其中所述TREM2激动剂是包含选自表EX1或A14的轻链可变区和选自表EX2和A15的重链可变区的抗体。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述TREM2激动剂抗原结合蛋白包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区含有选自SEQ ID NO:46-63的序列，所述重链可变区含有选自SEQ ID NO:110-126的序列。
21.根据权利要求19所述的方法，其中所述TREM2激动剂抗原结合蛋白包含
(a)含有SEQ ID NO:326的氨基酸序列的轻链可变区，和含有SEQ ID NO:327的氨基酸序列的重链可变区；
(b)含有SEQ ID NO:328的氨基酸序列的轻链可变区，和含有SEQ IDNO:329的氨基酸序列的重链可变区；
(c)含有SEQ ID NO:330的氨基酸序列的轻链可变区，和含有SEQ ID NO:331的氨基酸序列的重链可变区；或
(d)含有SEQ ID NO:332的氨基酸序列的轻链可变区，和含有SEQ ID NO:333的氨基酸序列的重链可变区。
22.根据权利要求1所述的方法，其中所述TREM2激动剂是TREM2的小分子激动剂。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述TREM2激动剂是TREM2的脂质配体。
24.根据权利要求23所述的方法，其中所述TREM2激动剂选自1-棕榈酰基-2-(5'-氧代-戊酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(POVPC)、2-花生酰基甘油(2-AG)、7-酮基胆固醇(7-KC)、24(S)羟基胆固醇(240HC)、25(S)羟基胆固醇(250HC)、27-羟基胆固醇(270HC)、酰基肉碱(AC)、烷基酰基甘油磷酸胆碱(PAF)、α-半乳糖基神经酰胺(KRN7000)、双(单酰甘油)磷酸酯(BMP)、心磷脂(CL)、神经酰胺、神经酰胺-1-磷酸酯(CIP)、胆固醇酯(CE)、胆固醇磷酸酯(CP)、二酰基甘油34:1(DG 34:1)、二酰基甘油38:4(DG 38:4)、二酰基甘油焦磷酸酯(DGPP)、二氢神经酰胺(DhCer)、二氢鞘磷脂(DhSM)、醚磷脂酰胆碱(PCe)、游离胆固醇(FC)、半乳糖神经酰胺(GalCer)、半乳糖鞘氨醇(GalSo)、神经节苷脂GM1、神经节苷脂GM3、葡萄糖基鞘氨醇(GlcSo)、汉克氏平衡盐溶液(HBSS)、Kdo2-脂质A(KLA)、乳糖神经酰胺(LacCer)、溶血烷基酰基甘油磷酸胆碱(LPAF)、溶血磷脂酸(LPA)、溶血磷脂酰胆碱(LPC)、溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)、溶血磷脂酰甘油(LPG)、溶血磷脂酰肌醇(LPI)、溶血鞘磷脂(LSM)、溶血磷脂酰丝氨酸(LPS)、N-酰基-磷脂酰乙醇胺(NAPE)、N-酰基-丝氨酸(NSer)、氧化磷脂酰胆碱(oxPC)、棕榈酸-9-羟基-硬脂酸(PAHSA)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰乙醇(PEtOH)、磷脂酸(PA)、磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、二氢鞘氨醇、二氢鞘氨醇-1-磷酸酯(SalP)、鞘磷脂(SM)、鞘氨醇、鞘氨醇-1-磷酸酯(SolP)、或硫苷脂(Sulfatide)、或它们的盐。
25.根据权利要求23所述的方法，其中所述TREM2激动剂是脂多糖。
26.根据权利要求22所述的方法，其中所述TREM2激动剂选自酪氨酸磷酸化抑制剂AG538、AC1NS458、IN1040、紫铆因、奥卡宁、AGL 2263、GB19、GB16、GB20、GB17、GB18、GB21、GB22、GB27、GB44、GB42、GB2、4,4'-二羟基查耳酮或3,4-二羟基二苯甲酮或它们的盐。
27.根据权利要求1所述的方法，其中所述TREM2激动剂是热休克蛋白60(HPS60)。
28.根据权利要求1所述的方法，其中所述TREM2激动剂是载脂蛋白E(ApoE)。
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