CN116987148B - 一种乙酰基六肽-8的合成工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种乙酰基六肽‑8的合成工艺，属于肽技术领域，其特征在于，包括如下步骤：依次合成Boc‑Met‑Gln‑OH、Ac‑Glu(Otbu)‑Glu(Otbu)‑OH、H‑Arg‑NH‑DMB·HCl、H‑Arg‑Arg‑NH‑DMB·HCl、H‑Met‑Gln‑Arg‑Arg‑NH‑DMB·HCl、Ac‑Glu(Otbu)‑Glu(Otbu)‑Met‑Gln‑Arg‑Arg‑NH‑DMB、Ac‑Glu‑Glu‑Met‑Gln‑Arg‑Arg‑NH2；通过七部步反应及重结晶得到合格的产品，大幅度降低了生产周期和生产成本；且本发明的工艺过程使用没有保护的精氨酸、谷氨酰胺，原料成本低。
Description
技术领域
本发明涉及肽技术领域，具体涉及一种乙酰基六肽-8的合成工艺。
背景技术
乙酰基六肽-8英文名称是Argireline，序列为Ac-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH2，又被称为类肉毒杆菌素、阿基瑞林，是模仿SNAP-25蛋白N端6个氨基酸的寡肽一。阿基瑞林为高端化妆品常用的原料之一，功效主要是减少由面部表情肌收缩造成的皱纹，对额头或眼睛周围的皱纹有理想的祛除效果。阿基瑞林是一种更安全、更廉价、温和的肉毒杆菌毒素替代品。阿基瑞林参与竞争SNAP-25在融泡复合体的位点，从而影响融泡复合体的形成，导致囊泡不能有效释放神经递质，使肌肉收缩减弱，进而可以放松肌肉、舒缓细纹使肌肤呈现清透无暇，也可以促使细胞再生使肌肤恢复柔软弹性，因此被广泛应用于制备化妆品和保健品。
目前，阿基瑞林的合成方法主要有固相合成法和液相合成法。目前已公开的几种阿基瑞林的合成方法，均存在不同的缺陷。公开号CN103694316A、CN106632609A、CN102603869A等专利文件所记载的制备方法，采用树脂载体固相合成，取代度低，且价格昂贵，难以降低成本，不适合大规模生产。公开号为CN103613642A、CN102199188A所记载的合成方法，采用液相方法合成，虽然原料成本能够有效降低，但是生产周期较长，各中间体纯化困难，不适用于规模化生产。公开号为CN113845586A所记载的液相合成方法，采用两个精氨酸侧链Pdf保护，谷氨酰胺侧链Trt保护，谷氨酸侧链叔丁酯保护，造成原料成本增加，且其多次使用钯碳催化加氢，而且用量在10％，钯碳价格昂贵，所以该工艺在成本上不具有竞争力。
发明内容
本发明针对现有技术中所存在的上述问题提供了一种乙酰基六肽-8的合成工艺。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种乙酰基六肽-8的合成工艺，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一：合成Boc-Met-Gln-OH
向容器中加入溶剂(THF)、Boc-Met-OH、对硝基苯酚、DCC进行反应，后加入Gln，并调节体系pH使原料反应，反应产物经纯化得到Boc-Met-Gln-OH；反应式如下：
步骤二：合成Ac-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-OH
向容器中加入溶剂(THF)、对硝基苯酚、Ac-Glu(Otbu)-OH、DCC进行反应，后加入H-Glu(Otbu)-OH、碳酸氢钠进行反应，反应产物经纯化得到Ac-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-OH；反应式如下：
步骤三：合成H-Arg-NH-DMB·HCl
向容器中加入溶剂(DMF)、Boc-Arg-OH、2,4-二甲氧基苄胺、HBTU、DIEA进行反应，反应产物经纯化得到H-Arg-NH-DMB·HCl；反应式如下：
步骤四：合成H-Arg-Arg-NH-DMB·HCl
向容器中加入溶剂(DMF)、Boc-Arg-OH、H-Arg-NH-DMB·HCl、HBTU、DIEA进行反应，反应产物经纯化得到H-Arg-Arg-NH-DMB·HCl；反应式如下：
步骤五：合成H-Met-Gln-Arg-Arg-NH-DMB·HCl
向容器中加入溶剂(DMF)、Boc-Met-Gln-OH、H-Arg-Arg-NH-DMB·HCl、HBTU、DIEA进行反应，反应产物经纯化得到H-Met-Gln-Arg-Arg-NH-DMB·HCl；反应式如下：
步骤六：合成Ac-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-Met-Gln-Arg-Arg-NH-DMB
向容器中加入溶剂(DMF)、Ac-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-OH、H-Met-Gln-Arg-Arg-NH-DMB·HCl、HBTU、DIEA进行反应，反应产物经纯化得到Ac-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-Met-Gln-Arg-Arg-NH-DMB；反应式如下：
步骤七：合成Ac-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH2
向容器中加入TFA、苯甲硫醚、水，控制体系温度，分批加入Ac-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-Met-Gln-Arg-Arg-NH-DMB进行反应，反应产物经重结晶得到Ac-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH2。反应式如下：
进一步的，所述步骤一中Boc-Met-Gln-OH的纯化过程为：将反应产物首先浓缩掉溶剂，抽滤，滤液调节pH至5.0，萃取，然后滤液调节pH至2.0，再次萃取；萃取产物洗涤，干燥，过滤，滤液浓缩，得到淡黄色的油状物，然后加入甲醇溶解，内温保持50-55度滴加***至料液浑浊，内温保持5-10度，析晶，抽滤，滤饼浓缩掉溶剂，得到Boc-Met-Gln-OH。
进一步的，所述步骤二中Ac-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-OH的纯化过程为：将反应产物过滤，滤液浓缩掉溶剂，调节pH至2.0，萃取，萃取产物洗涤，干燥，过滤，滤液浓缩，得到淡黄色油状物；向淡黄色油状物中加入丙酮，搅拌溶清后，自然降至室温，析出固体，抽滤，滤饼烘干，得到Ac-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-OH。
进一步的，所述步骤三中H-Arg-NH-DMB·HCl的纯化过程为：向反应液中加水，调节pH至9.0，萃取，萃取产物洗涤，干燥，过滤，滤液浓缩掉溶剂，得到淡黄色油状物；然后加入甲醇，保持内温0-10度，滴加TMSCl，滴完内温25度反应，反应完后，浓缩反应液，得到H-Arg-NH-DMB·HCl。
进一步的，所述步骤四中H-Arg-Arg-NH-DMB·HCl的纯化过程为：向反应液中加入水，调节pH为9.0，萃取，萃取产物洗涤，干燥，过滤，滤液浓缩掉溶剂，然后加入甲醇溶清，保持内温5-10度，滴加TMSCl反应，反应完后，浓缩反应液，然后加入甲醇搅拌溶清，滴加***至料液浑浊，内温保持0-5度，结晶，抽滤，滤饼烘干，得到H-Arg-Arg-NH-DMB·HCl。
进一步的，所述步骤五中H-Met-Gln-Arg-Arg-NH-DMB·HCl的纯化过程为：向反应液中加入水，并调节pH为9.0，萃取，萃取产物洗涤，干燥，过滤，滤液浓缩掉溶剂，然后加入甲醇溶清，保持内温5-10度，滴加TMSCl反应，反应完后，浓缩反应液，然后加入乙醇搅拌溶清，滴加***至料液浑浊，内温保持0-5度，结晶，抽滤，滤饼烘干，得到H-Met-Gln-Arg-Arg-NH-DMB·HCl。
进一步的，所述步骤六中
Ac-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-Met-Gln-Arg-Arg-NH-DMB的纯化过程为：向反应液中加入水，并调节pH为9.0，萃取，萃取产物洗涤，干燥，过滤，滤液浓缩掉溶剂，得到Ac-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-Met-Gln-Arg-Arg-NH-DMB。
进一步的，所述步骤七中的重结晶方式为：向反应液中加入***以析出固体，抽滤，滤饼用甲醇溶清，用NH3或甲醇调节料液pH为6.0，然后滴加乙酸乙酯至料液轻微浑浊；内温保持0-5度，静置以析出颗粒状固体，抽滤，滤饼再用甲醇溶解，加入活性炭，搅拌后抽滤，向滤液中加入乙酸乙酯，静置后抽滤，得到终产物。
进一步的，各步骤的反应溶剂采用THF、DMF、乙腈或NMP。
进一步的，各步骤的萃取溶剂采用乙酸乙酯、正丁醇、DCM、醋酸丁酯或醋酸叔丁酯。。
本发明的有益效果是：本发明通过七部步反应以及最终产品通过重结晶就可以得到合格的产品，大幅度降低了生产周期，降低了生产成本；且本发明的工艺过程使用没有保护的精氨酸、谷氨酰胺，原料成本大幅降低；制得终产物的纯度在98％以上，且收率可达80％左右。
具体实施方式
下面对本发明的原理和特征进行描述，所举实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1
本实施例的乙酰基六肽-8的合成工艺包括如下步骤：
步骤一：合成Boc-Met-Gln-OH
5L三口瓶，加入1L THF、232gBoc-Met-OH、142.4g对硝基苯酚，搅拌溶清后，内温保持0-10度，滴加DCC的THF溶液(211.2g DCC溶于100ml THF)，滴完，内温25度反应约3h后，加入1L水、136g Gln，并用氢氧化钠溶液控制料液pH为8.0-9.0，经HPLC检测原料反应完后，外温45度浓缩掉THF，抽滤，滤液调节pH为5.0，用乙酸乙酯萃取3次(每次用100ml乙酸乙酯)，然后滤液调节pH为2.0，用600ml乙酸乙酯萃取产物，乙酸乙酯相再用pH为2.0的水洗涤3次(每次100ml)，100ml饱和氯化钠洗涤一次，20g无水硫酸镁干燥，过滤，外温45度浓缩至不出。得到淡黄色的油状物，然后加入100ml甲醇溶解，内温保持50-55度滴加300ml***至料液浑浊，内温保持5-10度，析晶5h后，抽滤，滤饼外温45度浓缩掉溶剂，得到255g类白色固体，收率：72.6％。
步骤二：合成Ac-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-OH
5L三口瓶，加入1.2L THF，112.3g对硝基苯酚，180g Ac-Glu(Otbu)-OH搅拌溶清后，保持内温5-10度，滴加DCC的THF溶液(166.6g DCC用100ml THF溶解)滴完，内温25度反应约3h，加入1.2L水，149.1g H-Glu(Otbu)-OH，加入74g碳酸氢钠。经HPLC检测反应完后，过滤，滤液外温45度浓缩。调节pH为2.0，用1L乙酸乙酯萃取1次。乙酸乙酯相再用pH为2.0的水洗涤3次，每次300ml。洗涤后的乙酸乙酯相再用饱和氯化钠洗涤1次，50g无水硫酸镁干燥，过滤。滤液外温45度浓缩至不出，得到淡黄色油状物。向装有油状物的瓶子中加入300ml丙酮，外温60度搅拌溶清后，自然降至室温，析出固体，抽滤，滤饼外温40度烘干，得到232g类白色固体，收率73.4％。
步骤三：合成H-Arg-NH-DMB·HCl
5L三口瓶，加入300mlDMF,216g Boc-Arg-OH,131.7g 2,4-二甲氧基苄胺，内温0-5度加入313.6g HBTU，滴加305.3g DIEA，滴完，内温25度反应1h。经HPLC检测反应完后，向反应液中加入3L水，调节pH为9.0，用2L乙酸乙酯萃取1次。乙酸乙酯相用饱和碳酸氢钠洗涤3次，每次500ml，然后用50g无水硫酸镁干燥，过滤，滤液外温45度浓缩至不出，得到淡黄色油状物。然后加入500ml甲醇，保持内温0-10度，滴加342g TMSCl，滴完内温25度反应。经HPLC检测反应完后，外温45度浓缩反应液至不出，得到257.3g淡黄色油状物。收率：90.8％。
步骤四：合成H-Arg-Arg-NH-DMB·HCl
5L三口瓶，加入500ml DMF，180g Boc-Arg-OH,236.1g H-Arg-NH-DMB·HCl,搅拌溶清后，加入261.3g HBTU，保持内温0-5度，滴加254.4g DIEA，然后内温升至25度反应1h。经HPLC检测反应完后，向反应液中加入5L水，并调节pH为9.0。然后加入3L正丁醇萃取一次。正丁醇相再用饱和碳酸氢钠洗涤3次，每次1L。饱和氯化钠洗涤1次，100g无水硫酸镁干燥，过滤，滤液外温65度浓缩至不出，然后加入600ml甲醇溶清，保持内温5-10度，滴加285.1gTMSCl，滴完。经HPLC检测反应完后，外温45度浓缩反应液至不出，然后加入300ml甲醇搅拌溶清，滴加230ml***至料液浑浊。内温保持0-5度，结晶10h后，抽滤，滤饼外温40度烘干，得到296.5g白色固体，收率：87.6％。
步骤五：合成H-Met-Gln-Arg-Arg-NH-DMB·HCl
5L三口瓶，加入400ml DMF，150g Boc-Met-Gln-OH，205.1gH-Arg-Arg-NH-DMB·HCl，搅拌溶清后，加入158.3g HBTU，内温0-5度滴加154.1g DIEA，滴完。内温25度反应1h后，经HPLC检测反应完。向反应液中加入4L水，并调节pH为9.0。然后加入3L正丁醇萃取一次。正丁醇相再用饱和碳酸氢钠洗涤3次，每次1L。饱和氯化钠洗涤1次，100g无水硫酸镁干燥，过滤，滤液外温65度浓缩至不出，然后加入400ml甲醇溶清，保持内温5-10度，滴加172.7g TMSCl，滴完。经HPLC检测反应完后，外温45度浓缩反应液至不出，然后加入200ml乙醇搅拌溶清，滴加150ml***至料液浑浊。内温保持0-5度，结晶12h后，抽滤，滤饼外温40度烘干，得到283.3g白色固体，收率：91.9％。
步骤六：合成Ac-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-Met-Gln-Arg-Arg-NH-DMB
5L三口瓶，加入450mlDMF，150g Ac-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-OH，270.2gH-Met-Gln-Arg-Arg-NH-DMB·HCl搅拌溶清后，加入138.8g HBTU，保持内温0-5度滴加135.1g DIEA。滴完，内温25度反应1h后，经HPLC检测反应完。向反应液中加入4.5L水，并调节pH为9.0。然后加入3L正丁醇萃取一次。正丁醇相再用饱和碳酸氢钠洗涤3次，每次1L。饱和氯化钠洗涤1次，100g无水硫酸镁干燥，过滤，滤液外温65度浓缩至不出，得到383.6g类白色固体，收率：95.6％。
步骤七：合成Ac-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH2
5L三口瓶，加入900ml TFA，50ml苯甲硫醚，50ml水，内温保持0-5度，分批加入Ac-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-Met-Gln-Arg-Arg-NH-DMB，搅拌溶清后，内温20-25度反应约2h，经HPLC检测反应完。向反应液中加入2L***，析出大量类白色固体。抽滤，滤饼用500ml甲醇溶清，用NH3/甲醇调节料液pH为6.0，然后滴加600ml乙酸乙酯至料液轻微浑浊。然后内温保持0-5度，静置放置约6h后，析出大量颗粒状固体，抽滤。滤饼再用500ml甲醇溶解，加入5g活性炭，搅拌1h后，抽滤。向滤液中加入1L乙酸乙酯，静置约3h后，抽滤，得到216.7g类白色固体，纯度98.9％，收率80.2％。
实施例2
本实施例乙酰基六肽-8的合成工艺基本同实施例1，所不同是，各步骤所用的反应溶剂为乙腈。结果所得产物的纯度98.2％，收率78.5％。
实施例3
本实施例乙酰基六肽-8的合成工艺基本同实施例1，所不同是，各步骤所用的反应溶剂为NMP。结果所得产物的纯度98.4％，收率79.3％。
实施例4
本实施例乙酰基六肽-8的合成工艺基本同实施例1，所不同是，各步骤所用的萃取溶剂为DCM。结果所得产物的纯度98.3％，收率80.1％。
实施例5
本实施例乙酰基六肽-8的合成工艺基本同实施例1，所不同是，各步骤所用的萃取溶剂为醋酸丁酯。结果所得产物的纯度98.4％，收率78.9％。
对比例1
本对比例乙酰基六肽-8的合成工艺的步骤一至步骤六同实施例1，所不同是，改变步骤七中的结晶pH条件，具体如下：
步骤七：合成Ac-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH2
5L三口瓶，加入900ml TFA，50ml苯甲硫醚，50ml水，内温保持0-5度，分批加入Ac-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-Met-Gln-Arg-Arg-NH-DMB，搅拌溶清后，内温20-25度反应约2h，经HPLC检测反应完。向反应液中加入2L***，析出大量类白色固体。抽滤，滤饼用500ml甲醇溶清，用NH3/甲醇调节料液pH为5.0，然后滴加600ml乙酸乙酯至料液轻微浑浊。然后内温保持0-5度，静置放置约6h后，析出大量颗粒状固体，抽滤。滤饼再用500ml甲醇溶解，加入5g活性炭，搅拌1h后，抽滤。向滤液中加入1L乙酸乙酯，静置约3h后，抽滤，得到189.9g类白色固体，纯度98.2％，收率70.3％，收率显著降低。
对比例2
对比例乙酰基六肽-8的合成工艺的步骤一至步骤六同实施例1，所不同是，改变步骤七中的结晶pH条件，具体如下：
步骤七：合成Ac-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH2
5L三口瓶，加入900ml TFA，50ml苯甲硫醚，50ml水，内温保持0-5度，分批加入Ac-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-Met-Gln-Arg-Arg-NH-DMB，搅拌溶清后，内温20-25度反应约2h，经HPLC检测反应完。向反应液中加入2L***，析出大量类白色固体。抽滤，滤饼用500ml甲醇溶清，用NH3/甲醇调节料液pH为7.0，然后滴加600ml乙酸乙酯至料液轻微浑浊。然后内温保持0-5度，静置放置约6h后，析出大量颗粒状固体，抽滤。滤饼再用500ml甲醇溶解，加入5g活性炭，搅拌1h后，抽滤。向滤液中加入1L乙酸乙酯，静置约3h后，抽滤，得到141.3g类白色固体，纯度97.5％，收率52.3％，收率显著降低。
Claims (10)
1.一种乙酰基六肽-8的合成工艺，其特征在于，由如下步骤组成：
步骤一：合成Boc-Met-Gln-OH
向容器中加入溶剂、Boc-Met-OH、对硝基苯酚、DCC进行反应，后加入Gln，并调节体系pH使原料反应，反应产物经纯化得到Boc-Met-Gln-OH；
步骤二：合成Ac-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-OH
向容器中加入溶剂、对硝基苯酚、Ac-Glu(Otbu)-OH、DCC进行反应，后加入H-Glu(Otbu)-OH、碳酸氢钠进行反应，反应产物经纯化得到Ac-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-OH；
步骤三：合成H-Arg-NH-DMB·HCl
向容器中加入溶剂、Boc-Arg-OH、2,4-二甲氧基苄胺、HBTU、DIEA进行反应，反应产物经纯化得到H-Arg-NH-DMB·HCl；
步骤四：合成H-Arg-Arg-NH-DMB·HCl
向容器中加入溶剂、Boc-Arg-OH、H-Arg-NH-DMB·HCl、HBTU、DIEA进行反应，反应产物经纯化得到H-Arg-Arg-NH-DMB·HCl；
步骤五：合成H-Met-Gln-Arg-Arg-NH-DMB·HCl
向容器中加入溶剂、Boc-Met-Gln-OH、H-Arg-Arg-NH-DMB·HCl、HBTU、DIEA进行反应，反应产物经纯化得到H-Met-Gln-Arg-Arg-NH-DMB·HCl；
步骤六：合成Ac-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-Met-Gln-Arg-Arg-NH-DMB
向容器中加入溶剂、Ac-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-OH、H-Met-Gln-Arg-Arg-NH-DMB·HCl、HBTU、DIEA进行反应，反应产物经纯化得到Ac-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-Met-Gln-Arg-Arg-NH-DMB；
步骤七：合成Ac-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH2
向容器中加入TFA、苯甲硫醚、水，控制体系温度，分批加入Ac-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-Met-Gln-Arg-Arg-NH-DMB进行反应，反应产物经重结晶得到Ac-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH2。
2.根据权利要求1所述的乙酰基六肽-8的合成工艺，其特征在于，所述步骤一中Boc-Met-Gln-OH的纯化过程为：将反应产物首先浓缩掉溶剂，抽滤，滤液调节pH至5.0，萃取，然后滤液调节pH至2.0，再次萃取；萃取产物洗涤，干燥，过滤，滤液浓缩，得到淡黄色的油状物，然后加入甲醇溶解，内温保持50-55度滴加***至料液浑浊，内温保持5-10度，析晶，抽滤，滤饼浓缩掉溶剂，得到Boc-Met-Gln-OH。
3.根据权利要求1所述的乙酰基六肽-8的合成工艺，其特征在于，所述步骤二中Ac-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-OH的纯化过程为：将反应产物过滤，滤液浓缩掉溶剂，调节pH至2.0，萃取，萃取产物洗涤，干燥，过滤，滤液浓缩，得到淡黄色油状物；向淡黄色油状物中加入丙酮，搅拌溶清后，自然降至室温，析出固体，抽滤，滤饼烘干，得到Ac-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-OH。
4.根据权利要求1所述的乙酰基六肽-8的合成工艺，其特征在于，所述步骤三中H-Arg-NH-DMB·HCl的纯化过程为：向反应液中加水，调节pH至9.0，萃取，萃取产物洗涤，干燥，过滤，滤液浓缩掉溶剂，得到淡黄色油状物；然后加入甲醇，保持内温0-10度，滴加TMSCl，滴完内温25度反应，反应完后，浓缩反应液，得到H-Arg-NH-DMB·HCl。
5.根据权利要求1所述的乙酰基六肽-8的合成工艺，其特征在于，所述步骤四中H-Arg-Arg-NH-DMB·HCl的纯化过程为：向反应液中加入水，调节pH为9.0，萃取，萃取产物洗涤，干燥，过滤，滤液浓缩掉溶剂，然后加入甲醇溶清，保持内温5-10度，滴加TMSCl反应，反应完后，浓缩反应液，然后加入甲醇搅拌溶清，滴加***至料液浑浊，内温保持0-5度，结晶，抽滤，滤饼烘干，得到H-Arg-Arg-NH-DMB·HCl。
6.根据权利要求1所述的乙酰基六肽-8的合成工艺，其特征在于，所述步骤五中H-Met-Gln-Arg-Arg-NH-DMB·HCl的纯化过程为：向反应液中加入水，并调节pH为9.0，萃取，萃取产物洗涤，干燥，过滤，滤液浓缩掉溶剂，然后加入甲醇溶清，保持内温5-10度，滴加TMSCl反应，反应完后，浓缩反应液，然后加入乙醇搅拌溶清，滴加***至料液浑浊，内温保持0-5度，结晶，抽滤，滤饼烘干，得到H-Met-Gln-Arg-Arg-NH-DMB·HCl。
7.根据权利要求1所述的乙酰基六肽-8的合成工艺，其特征在于，所述步骤六中Ac-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-Met-Gln-Arg-Arg-NH-DMB的纯化过程为：向反应液中加入水，并调节pH为9.0，萃取，萃取产物洗涤，干燥，过滤，滤液浓缩掉溶剂，得到Ac-Glu(Otbu)-Glu(Otbu)-Met-Gln-Arg-Arg-NH-DMB。
8.根据权利要求1所述的乙酰基六肽-8的合成工艺，其特征在于，所述步骤七中的重结晶方式为：向反应液中加入***以析出固体，抽滤，滤饼用甲醇溶清，用NH3或甲醇调节料液pH为6.0，然后滴加乙酸乙酯至料液轻微浑浊；内温保持0-5度，静置以析出颗粒状固体，抽滤，滤饼再用甲醇溶解，加入活性炭，搅拌后抽滤，向滤液中加入乙酸乙酯，静置后抽滤，得到终产物。
9.根据权利要求1所述的乙酰基六肽-8的合成工艺，其特征在于，各步骤的反应溶剂采用THF、DMF、乙腈或NMP。
10.根据权利要求2-7任一项所述的乙酰基六肽-8的合成工艺，其特征在于，各步骤的萃取溶剂采用乙酸乙酯、正丁醇、DCM、醋酸丁酯或醋酸叔丁酯。
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