CN116982559B - 一种樱草试管开花诱导培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种樱草试管开花诱导培养方法，属于植物组织培养技术领域，本发明所述培养基为花宝1号3g/L+NAA0.5mg/L+蔗糖20g/L+AC 1g/L+琼脂7g/L，pH为5.8，培养温度15℃，光照强度1600lx，光照时间12h/d。为本发明利用所述培养基和培养方法可以完成诱导樱草试管内开花，具有实验操作简单、周期短、实用性强等优点，为观花类试管花卉工厂化生产提供理论基础和技术支持。
Description
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域，具体的说，涉及一种樱草试管开花诱导培养方法。
背景技术
樱草（Primula sieboldii），隶属于报春花科（Primulaceae）报春花属（Primula），多年生草本，国内主要分布于东北三省及内蒙古东部。叶基生，长圆形或截形，莲座状，花葶直立，伞形花序顶生，花朵繁密，花冠***至淡红色，花色艳丽，整体显得十分典雅娟秀，亭亭玉立，常用于室内盆栽、园林造景及鲜切花使用，具有较高的园艺观赏价值。
试管花卉是利用植物组织培养技术，在人工控制的无菌环境条件下，在具有较好观赏性、可携带、微型的透明密闭容器中培养植物的技术。与传统的园艺种植方式相比，是一种非常新颖，较为独特的花卉观赏及栽培方式，具有不受季节限制、避免病害和自然灾害、便于管理等优点。满足了当下年轻人的求新、求异猎奇心理，具有广阔的开发前景。试管开花是指通过组织培养技术，使植物在密闭的培养容器内完成开花过程，是试管花卉中的重要组成部分。近年来市场的主流主要是以生长周期长、把玩时间久的观叶和株型为主的试管花卉，品种单调，而观花类试管花卉培养技术在物种选择、开花诱导、花期物候等方面依然存在难题。樱草试管开花实验体系的建立，为进一步研究报春花属植物营养生长向生殖生长转变过程中的生理代谢、基因差异表达以及试管杂交种质创新等提供简便可控的实验平台，也为试管花卉市场多元化提供更多可能。目前，关于樱草的试管开花诱导相关方面未见报道。
发明内容
为了克服背景技术中存在的问题，本发明提供了一种樱草试管开花诱导培养方法，利用开花诱导培养基可以完成诱导樱草试管内开花，具有实验操作简单、周期短、实用性强等优点，为观花类试管花卉工厂化生产提供理论基础和技术支持。
为实现上述目的，本发明是通过如下技术方案实现的：
所述的樱草试管开花诱导培养方法，通过以下方法进行培养，其具体包括以下步骤：
1）将樱草无菌苗的叶柄切成1cm长度接种在诱导培养基上进行愈伤诱导，继代培养30d后分化出不定芽，所述诱导培养基为MS+BA0.5mg/L+ NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L，pH为5.8；
2）将分化出的不定芽接种到增殖培养基上进行不定芽增殖，所述增殖培养基为MS+BA1.0mg/L+ NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+AC 1g/L+琼脂7g/L，pH为5.8；
3）将增殖后的不定芽单株接种到生根培养基上进行生根培养，所述的生根培养基为1/2MS+NAA0.5mg/L+蔗糖30g/L+AC 1g/L+琼脂7g/L，pH为5.8；
4）将具有9-10片叶的生根苗接种到开花诱导培养基上进行试管开花诱导，所述开花诱导培养基为花宝1号3g/L+ NAA0.5mg/L+蔗糖20g/L+AC 1g/L+琼脂7g/L，pH为5.8，培养温度15℃，光照强度1600lx，光照时间12h/d，培养60d后有花芽形成，继续培养20d左右花朵开放。
作为优选，步骤1）所述愈伤诱导培养条件为温度25±2℃，光照强度1600lx，光照时间12h/d。
作为优选，步骤2）所述不定芽增殖培养条件为温度25±2℃，光照强度1600lx，光照时间12h/d。
作为优选，步骤3）所述生根培养的培养条件为温度25±2℃，光照强度1600lx，光照时间12h/d。
本发明的有益效果：
本发明通过组织培养技术以及对培养基成分和植物生长调节剂的合理调配，可以完成诱导樱草试管内开花，解决了目前市场的试管花卉主流以生长周期长、把玩时间久的观叶和株型为主的问题，通过愈伤诱导、不定芽增殖、生根培养以及试管开花诱导提供了观花型试管花卉樱草花卉，具有实验操作简单、周期短、实用性强等优点，为观花类试管花卉工厂化生产提供理论基础和技术支持。
附图说明
图1是本发明樱草试管开花诱导过程；
图中，a表示樱草试管苗，b表示叶柄愈伤组织及诱导分化，c表示不定芽增殖，d表示生根培养，e表示试管开花植株，f表示高10cm培养瓶中的试管开花植株，g表示高7cm培养瓶中的试管开花植株，h表示高6cm培养瓶中的试管开花植株。
实施方式
为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，下面将结合附图，对本发明的优选实施例进行详细的说明，以方便技术人员理解。
申请植物离体库中樱草（Primula sieboldii）试管苗（图1a）为材料，其材料系用2017年采自黑龙江的樱草种子材料建立的无菌无性系，并以试管苗形式保存在中国西南野生生物种质资源库植物离体库。具体方法为：以樱草种子为原材料，将种子表面消毒和无菌萌发得到的无菌小苗，建立无菌无性系。
将申请得到的樱草无菌苗叶柄切成1cm长度接种到诱导培养基（MS+BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L，pH为5.8）上进行愈伤诱导，培养温度25±2℃，光照强度1600lx，光照时间12h/d，30d后统计愈伤诱导率达99.17%。将愈伤组织继续继代培养30d后，有愈伤分化出不定芽（图1b），诱导率为79.66%。
把分化的不定芽接种到增殖培养基（MS+BA1.0mg/L+ NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+AC1g/L+琼脂7g/L，pH为5.8）上进行不定芽增殖（图1c）。培养温度25±2℃，光照强度1600lx，光照时间12h/d，30d后增殖系数为3.17。
将增殖后的不定芽单株接种到生根培养基（1/2MS+NAA0.5mg/L+蔗糖30g/L+AC1g/L+琼脂7g/L，pH为5.8）上进行生根培养（图1d）。培养温度25±2℃，光照强度1600lx，光照时间12h/d，30d后统计生根率达100%。
将具有9-10片叶的生根苗接种到开花诱导培养基（花宝1号3g/L+ NAA0.5mg/L+蔗糖20g/L+AC 1g/L+琼脂7g/L，pH为5.8）上进行试管开花诱导，诱导开花瓶直径7.0cm，高11cm，培养温度15℃，光照强度1600lx，光照时间12h/d，培养60d后有花芽形成，继续培养20d左右花朵开放（图1e），伞形花序，试管开花诱导率达73.33%。
申请植物离体库中樱草（Primula sieboldii）试管苗为材料，其材料系用2017年采自黑龙江的樱草种子材料建立的无菌无性系，并以试管苗形式保存在中国西南野生生物种质资源库植物离体库。具体方法为：以樱草种子为原材料，将种子表面消毒和无菌萌发得到的无菌小苗，建立无菌无性系。
将申请得到的樱草无菌苗叶柄切成1cm长度接种到诱导培养基（MS+BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L，pH为5.8）上进行愈伤诱导，培养温度25±2℃，光照强度1600lx，光照时间12h/d，30d后统计愈伤诱导率达99.17%。将愈伤组织继续继代培养30d后，有愈伤分化出不定芽，诱导率为79.66%。
把分化的不定芽接种到增殖培养基（MS+BA1.0mg/L+ NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+AC1g/L+琼脂7g/L，pH为5.8）上进行不定芽增殖。培养温度25±2℃，光照强度1600lx，光照时间12h/d，30d后增殖系数为3.17。
将增殖后的不定芽单株接种到生根培养基（1/2MS+NAA0.5mg/L+蔗糖30g/L+AC1g/L+琼脂7g/L，pH为5.8）上进行生根培养。培养温度25±2℃，光照强度1600lx，光照时间12h/d，30d后统计生根率达100%。
将具有9-10片叶的生根苗接种到开花诱导培养基（1/2MS+NAA0.5mg/L+活性炭1g/L+蔗糖20g/L+琼脂6g/L，pH为5.8）上进行试管开花诱导，诱导开花瓶直径7.0cm，高11cm，培养温度15℃，光照强度1600lx，光照时间12h/d，培养90d后植株未见开花。
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把分化的不定芽接种到增殖培养基（MS+BA1.0mg/L+ NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+AC1g/L+琼脂7g/L，pH为5.8）上进行不定芽增殖。培养温度25±2℃，光照强度1600lx，光照时间12h/d，30d后增殖系数为3.17。
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把分化的不定芽接种到增殖培养基（MS+BA1.0mg/L+ NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+AC1g/L+琼脂7g/L，pH为5.8）上进行不定芽增殖。培养温度25±2℃，光照强度1600lx，光照时间12h/d，30d后增殖系数为3.17。
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申请植物离体库中樱草（Primula sieboldii）试管苗为材料，其材料系用2017年采自黑龙江的樱草种子材料建立的无菌无性系，并以试管苗形式保存在中国西南野生生物种质资源库植物离体库。具体方法为：以樱草种子为原材料，将种子表面消毒和无菌萌发得到的无菌小苗，建立无菌无性系。
将申请得到的樱草无菌苗叶片切成1cm长度接种到诱导培养基（MS+BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L，pH为5.8）上进行愈伤诱导，培养温度25±2℃，光照强度1600lx，光照时间12h/d，30d后统计愈伤诱导率达98.48%。将愈伤组织继续继代培养30d后，有愈伤分化出不定芽，诱导率为28.73%。愈伤组织诱导率与实施例1没有显著性差异，但是不定芽分化率极显著低于实施例1。
申请植物离体库中樱草（Primula sieboldii）试管苗为材料，其材料系用2017年采自黑龙江的樱草种子材料建立的无菌无性系，并以试管苗形式保存在中国西南野生生物种质资源库植物离体库。具体方法为：以樱草种子为原材料，将种子表面消毒和无菌萌发得到的无菌小苗，建立无菌无性系。
将申请得到的樱草无菌苗根尖切成1cm长度接种到诱导培养基（MS+BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L，pH为5.8）上进行愈伤诱导，培养温度25±2℃，光照强度1600lx，光照时间12h/d，30d后统计愈伤诱导率达98.55%。将愈伤组织继续继代培养30d后，有愈伤分化出不定芽，诱导率为34.33%。愈伤组织诱导率与实施例1没有显著性差异，但是不定芽分化率极显著低于实施例1。
申请植物离体库中樱草（Primula sieboldii）试管苗为材料，其材料系用2017年采自黑龙江的樱草种子材料建立的无菌无性系，并以试管苗形式保存在中国西南野生生物种质资源库植物离体库。具体方法为：以樱草种子为原材料，将种子表面消毒和无菌萌发得到的无菌小苗，建立无菌无性系。
将申请得到的樱草无菌苗叶柄切成1cm长度接种到诱导培养基（MS+BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L，pH为5.8）上进行愈伤诱导，培养温度25±2℃，光照强度1600lx，光照时间12h/d，30d后统计愈伤诱导率达99.17%。将愈伤组织继续继代培养30d后，有愈伤分化出不定芽，诱导率为79.66%。
把分化的不定芽接种到增殖培养基（MS+BA1.0mg/L+ NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+AC1g/L+琼脂7g/L，pH为5.8）上进行不定芽增殖。培养温度25±2℃，光照强度1600lx，光照时间12h/d，30d后增殖系数为3.17。
将增殖后的不定芽单株接种到生根培养基（1/2MS+NAA0.5mg/L+蔗糖30g/L+AC1g/L+琼脂7g/L，pH为5.8）上进行生根培养。培养温度25±2℃，光照强度1600lx，光照时间12h/d，30d后统计生根率达100%。
将具有9-10片叶的生根苗接种到开花诱导培养基（花宝1号3g/L+ NAA0.5mg/L+蔗糖20g/L+AC 1g/L+琼脂7g/L，pH为5.8）上进行试管开花诱导，诱导开花培养瓶直径4.5cm，高分别为10cm、7cm、6cm，并剪除外轮叶片，培养温度15℃，光照强度1600lx，光照时间12h/d，培养60d后有花芽形成，继续培养20d左右花朵开放，高10cm的培养瓶花序两花（图1f），高6cm、7cm的培养瓶花序单花（图1g-h）。
注：不同小写字母表示处理间同列在0.05水平差异显著，大写字母表示0.01水平差异极显著，下同。
表1 不同开花诱导培养基对樱草试管开花诱导的影响
表2 不同外植体愈伤诱导及分化的比较
表3 不同型号的培养瓶对樱草试管开花诱导的影响
最后说明的是，以上优选实施例仅用于说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。
Claims (4)
1.一种樱草试管开花诱导培养方法，其特征在于：通过以下方法进行培养，其具体包括以下步骤：
1）将樱草无菌苗的叶柄切成1cm长度接种在诱导培养基上进行愈伤诱导，继代培养30d后分化出不定芽，所述诱导培养基为MS+BA0.5mg/L+ NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L，pH为5.8；
2）将分化出的不定芽接种到增殖培养基上进行不定芽增殖，所述增殖培养基为MS+BA1.0mg/L+ NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+AC 1g/L+琼脂7g/L，pH为5.8；
3）将增殖后的不定芽单株接种到生根培养基上进行生根培养，所述的生根培养基为1/2MS+NAA0.5mg/L+蔗糖30g/L+AC 1g/L+琼脂7g/L，pH为5.8；
4）将具有9-10片叶的生根苗接种到开花诱导培养基上进行试管开花诱导，所述开花诱导培养基为花宝1号3g/L+ NAA0.5mg/L+蔗糖20g/L+AC 1g/L+琼脂7g/L，pH为5.8，培养温度15℃，光照强度1600lx，光照时间12h/d，培养60d后有花芽形成，继续培养20d左右花朵开放。
2.根据权利要求1所述的一种樱草试管开花诱导培养方法，其特征在于：步骤1）所述愈伤诱导培养条件为温度25±2℃，光照强度1600lx，光照时间12h/d。
3.根据权利要求1所述的一种樱草试管开花诱导培养方法，其特征在于：步骤2）所述不定芽增殖培养条件为温度25±2℃，光照强度1600lx，光照时间12h/d。
4.根据权利要求1所述的一种樱草试管开花诱导培养方法，其特征在于：步骤3）所述生根培养的培养条件为温度25±2℃，光照强度1600lx，光照时间12h/d。
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