CN116953125A - 一种千里香中化学成分的分离方法和含量测定方法 - Google Patents

一种千里香中化学成分的分离方法和含量测定方法 Download PDF

Info

Publication number
CN116953125A
CN116953125A CN202310966485.9A CN202310966485A CN116953125A CN 116953125 A CN116953125 A CN 116953125A CN 202310966485 A CN202310966485 A CN 202310966485A CN 116953125 A CN116953125 A CN 116953125A
Authority
CN
China
Prior art keywords
solution
chemical components
hydroxy
extraction
tetramethoxyflavone
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202310966485.9A
Other languages
English (en)
Inventor
谢文波
魏伟锋
马庆
叶姿
林红
曾烨
黄煜权
张洪胜
黄锦鹏
魏民
许雷
池莲锋
马良驹
刘晖晖
韩正洲
邢建永
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
China Resources 39 Lu'an Traditional Chinese Medicine Industry Development Co ltd
China Resources Sanjiu Modern Traditional Chinese Medicine Pharmaceutical Co ltd
Shenzhen Traditional Chinese Medicine Manufacturing Innovation Center Co ltd
China Resources Sanjiu Medical and Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
China Resources 39 Lu'an Traditional Chinese Medicine Industry Development Co ltd
China Resources Sanjiu Modern Traditional Chinese Medicine Pharmaceutical Co ltd
Shenzhen Traditional Chinese Medicine Manufacturing Innovation Center Co ltd
China Resources Sanjiu Medical and Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by China Resources 39 Lu'an Traditional Chinese Medicine Industry Development Co ltd, China Resources Sanjiu Modern Traditional Chinese Medicine Pharmaceutical Co ltd, Shenzhen Traditional Chinese Medicine Manufacturing Innovation Center Co ltd, China Resources Sanjiu Medical and Pharmaceutical Co Ltd filed Critical China Resources 39 Lu'an Traditional Chinese Medicine Industry Development Co ltd
Priority to CN202310966485.9A priority Critical patent/CN116953125A/zh
Publication of CN116953125A publication Critical patent/CN116953125A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
    • G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
    • G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/86—Signal analysis
    • G01N30/8624—Detection of slopes or peaks; baseline correction
    • G01N30/8631—Peaks
    • G01N30/8634—Peak quality criteria
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N2030/042—Standards
    • G01N2030/047—Standards external
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Quality & Reliability (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明属于中药的质量检测技术领域，具体提供了一种千里香中化学成分的分离方法和含量测定方法，建立了同时测定千里香中九里香酮、5,7,3',4',5'‑五甲氧基黄酮、5‑羟基‑3',4',6,7‑四甲氧基黄酮、去甲基川陈皮素四种成分的含量测定方法，可以准确、快速、便捷地测定千里香中的四种成分，分析效率有了明显的提高，千里香的相关产品质量可以得到更好的保障，能够快速、准确、全面地检测千里香的质量。

Description

一种千里香中化学成分的分离方法和含量测定方法
技术领域
本发明属于中药的质量检测技术领域，具体涉及一种千里香中化学成分的分离方法和含量测定方法。
背景技术
千里香(学名：Murraya paniculata(L.)Jack.)，芸香科小乔木或灌木，分布于广东、福建、海南及广西、湖南、贵州，云南四省、自治区南部。现代药理学研究显示，千里香叶及嫩枝中主要含有黄酮类、香豆素类、生物碱及挥发油类等成分；其中黄酮类化合物含量最高，又以多甲氧基黄酮类化合物为主，如：九里香酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮、去甲基川陈皮素，且甲氧基黄酮类化合物属于千里香植物体的功效成分，具有降血压、抗氧化、抗癌的作用；此外千里香还具有抗生育、终止妊娠，抑制病原真菌生长的作用。
千里香为广西特色药材，《中国药典》2020年版未记载其含量测定的方法。国内外对千里香的研究，主要是对其药理作用的研究，其质量标准的研究甚少；目前，因无统一的千里香质量标准，不同的工艺会对千里香提取物的质量产生较大的影响，从而直接影响到下游产品的质量。现有技术中对千里香的质量标准研究较少，现有的研究也只针对单一成分的研究较多，中药的药效是多种化学成分共同作用的结果，单纯检测一个成分的含量不足以精准评价千里香的质量。如专利号CN200910089643.7的中国专利公开了一种千里香药材中九里香酮的含量测定方法。
此外，姜平川等建立HPLC测定千里香中九里香酮和5′-九里香酮含量的方法，检测广西不同产地千里香中九里香酮和5′-九里香酮的含量；闰江红等采用HPLC法对千里香叶中的5,7,3’4’-四甲氧基黄酮和5,7,3’,4’,5’-五甲氧基黄酮进行分离及含量测定。但是上述方法均无法同时对九里香酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮、去甲基川陈皮素进行分离并测定含量，分析手段较为单一，分析效率有待进一步提高。因此，研究一种新的快速、准确、全面地测定千里香中化学成分的方法成为了亟待解决的问题。
发明内容
因此，针对背景技术中提出的现有分析技术较为单一，仅能检测一种或者两种成分，无法同时对千里香中的九里香酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮、去甲基川陈皮素进行分离或者测定的问题，本发明提供了一种千里香中化学成分的分离方法和含量测定方法，建立同时测定千里香中九里香酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮、去甲基川陈皮素四种成分的含量测定方法，可以准确、快速、便捷地测定千里香中的四种成分，通过本发明的测试方法可以同步测试四种成分，分析效率有了明显的提高，千里香的相关产品质量可以得到更好的保障，能够快速、准确、全面地检测千里香的质量。
具体的，本发明公开了一种千里香中化学成分的分离方法，所述化学成分包括九里香酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮和去甲基川陈皮素，所述分离方法包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备；
(2)取供试品溶液采用超高效液相色谱法检测，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，采用规格为1.8μm，3.0×150mm的色谱柱，以乙腈-含甲酸的水溶液为流动相进行梯度洗脱；梯度洗脱程序包括：0→15min→16min→20min→25min，流动相中乙腈的体积百分数为：40％→42％→49％→49％→50％。
根据本发明任一项所述的分离方法，步骤(1)包括：称取千里香，采用提取溶剂进行提取，固液分离，取液体，即为供试品溶液。
根据本发明任一项所述的分离方法，所述步骤(1)还满足如下A-D中的任意一项或者多项：
A、供试品的质量与提取溶剂的体积比为0.5:25-100，其中，质量与溶剂的配比关系为g/mL；
B、所述固液分离选自离心或者过滤；
C、提取溶剂选自甲醇、水和乙醇中的至少一种；优选为乙醇；
D、所述提取为加热回流或者超声提取，提取时间为30-90min。
根据本发明任一项所述的分离方法，所述步骤(1)包括：取供试品约0.5g精密称定，精密加入无水乙醇25-100mL，密塞，称定重量，加热回流或者超声提取30-90分钟，放冷后，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，用0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
根据本发明任一项所述的分离方法，步骤(2)还满足如下1)-6)项中的任意一项或者多项：
1)所述梯度洗脱程序还包括：25min→26min→29min→30min→32min，流动相中乙腈的体积百分数为：50％→100％→100％→40％→40％；
2)所述含甲酸的水溶液中甲酸的体积百分数为0.1％-0.2％；
3)检测波长为320-340nm，优选为335nm；
4)流速为0.35-0.45mL/min，优选为0.4mL/min；
5)色谱柱采用规格为1.8μm，3.0×150mm的ACQUITYHSS T3柱；
6)柱温为25-35℃，优选为25℃。
根据本发明任一项所述的分离方法，还包括对照品溶液的制备方法。所述对照品包括九里香酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮和去甲基川陈皮素。
优选的，所述对照品溶液的制备方法包括如下步骤：取九里香酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮、去甲基川陈皮素，加溶剂制成每1mL含各对照品0.5～250μg的对照品溶液；优选的，所述溶剂选自甲醇或者甲醇水溶液；所述甲醇水溶液中甲醇的体积分数不低于30％。
本发明还提供了一种同时测定千里香中四种化学成分含量的方法，包括以下步骤：
(1)供试品溶液和对照品溶液的制备；分别以九里香酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮、去甲基川陈皮素为对照品，采用溶剂溶解对照品制成对照品溶液；
(2)取供试品溶液和对照品溶液采用超高效液相色谱法检测，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，采用规格为1.8μm，3.0×150mm的色谱柱，以乙腈-含甲酸的水溶液为流动相进行梯度洗脱；梯度洗脱程序包括：0→15min→16min→20min→25min，流动相中乙腈的体积百分数为：40％→42％→49％→49％→50％；采用外标法计算供试品溶液中各对照品的含量。
可以将各对照品混合制备混合对照品液，也可以单独配制各对照品溶液。
根据本发明任一项所述的同时测定千里香中四种化学成分含量的方法，所述对照品溶液的制备方法包括如下步骤：取九里香酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮、去甲基川陈皮素，加溶剂制成每1mL含各对照品0.5～250μg的对照品溶液；优选的，所述溶剂选自甲醇或者甲醇水溶液；所述甲醇水溶液中甲醇的体积分数不低于30％。
每1mL的所述对照品溶液含九里香酮0.9-160μg、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮1-250μg、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮0.7-160μg，去甲基川陈皮素1-250μg。
根据本发明任一项所述的同时测定千里香中四种化学成分含量的方法，步骤(1)包括：称取千里香，采用提取溶剂进行提取，固液分离，取液体，即为供试品溶液。
根据本发明任一项所述的同时测定千里香中四种化学成分含量的方法，所述步骤(1)还满足如下A-D中的任意一项或者多项：
A、供试品的质量与提取溶剂的体积比为0.5:25-100，其中，质量与溶剂的配比关系为g/mL；
B、所述固液分离选自离心或者过滤；
C、提取溶剂选自甲醇、水和乙醇中的至少一种；优选为乙醇；
D、所述提取为加热回流或者超声提取，提取时间为30-90min。
根据本发明任一项所述的同时测定千里香中四种化学成分含量的方法，步骤(2)还满足如下1)--6)项中的任意一项或者多项：
1)所述梯度洗脱程序还包括：25min→26min→29min→30min→32min，流动相中乙腈的体积百分数为：50％→100％→100％→40％→40％；
2)所述含甲酸的水溶液中甲酸的体积百分数为0.1％-0.2％；
3)检测波长为320-340nm，优选为335nm；
4)流速为0.35-0.45mL/min，优选为0.4mL/min；
5)色谱柱采用规格为1.8μm，3.0×150mm的ACQUITYHSS T3柱；
6)柱温为25-35℃，优选为25℃。
根据本发明任一项所述的同时测定千里香中四种化学成分含量的方法，还包括采用标准曲线法或者外标一点法计算供试品溶液中九里香酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮、去甲基川陈皮素的含量的步骤。
对于标准曲线法：包括构建一系列浓度的包含九里香酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮、去甲基川陈皮素的对照品溶液，并分别注入液相色谱仪，分别制得九里香酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮、去甲基川陈皮素的标准曲线，根据所述标准曲线，计算供试品溶液中九里香酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮、去甲基川陈皮素的含量。
各对照品溶液可以单独制备，也可以混合制备成混合对照品溶液。
本发明中，0.2％甲酸水指的是含体积百分数为0.2％的甲酸的水溶液。
本发明技术方案，具有如下优点：
1.本发明所述的千里香中化学成分的分离方法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，采用规格为1.8μm，3.0×150mm的色谱柱，以乙腈-含甲酸的水溶液为流动相梯度洗脱，并通过反复试验得到洗脱程序，在本发明的洗脱条件下，可以同时实现九里香酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮和去甲基川陈皮素四种化学成分的有效分离，明显提高了这些化学成分的分离度，节约检测时间和成本，峰形良好且无干扰，从而能够快速、准确、全面地检测千里香的质量。
2.本发明所述的同时测定千里香中四种化学成分含量的方法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-含甲酸的水溶液为流动相梯度洗脱，并通过反复试验得到洗脱程序，在本发明的洗脱条件下，可以同时测定九里香酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮和去甲基川陈皮素四种化学成分的含量。测定方法简单、快速、准确，线性关系良好，精密度高、稳定性好，重复性好，满足分析方法的要求。通过本发明的测试方法可以同步测试四种成分，分析效率有了明显的提高，千里香的相关产品质量可以得到更好的保障。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例2中对照品在全波长下的光谱图；
图2为本发明实施例2中采用色谱柱1得到的色谱图；
图3为本发明实施例2中采用色谱柱2得到的色谱图；
图4为本发明实施例2中采用色谱柱3得到的色谱图；
图5为本发明实施例2中采用流动相1得到的色谱图；
图6为本发明实施例2中采用流动相2得到的色谱图；
图7为本发明实施例2中采用流动相3得到的色谱图；
图8为本发明实施例2中采用流动相4得到的色谱图；
图9为本发明实施例2中采用洗脱梯度程序1得到的色谱图；
图10为本发明实施例2中采用洗脱梯度程序2得到的色谱图；
图11为本发明实施例2中采用洗脱梯度程序3得到的色谱图；
图12为本发明实施例2中采用洗脱梯度程序4得到的色谱图；
图13为本发明实施例2中采用洗脱梯度程序5得到的色谱图；
图14为本发明中线性考察中的标准曲线的对比图；
图15为本发明实施例1中对照品溶液的UPLC色谱图；
图16为本发明实施例1中供试品溶液的UPLC色谱图。
具体实施方式
提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。
实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
基于UPLC技术定量分析千里香化学成分的方法，在试验前，准备实验材料，具体实验材料如下表所示：
表1实验仪器
仪器名称 生产厂家 型号
超高效液相色谱仪(UPLC) 美国Waters公司 H-CLASS
万分之一分析天平 瑞士METTLER TOLEDO公司 XS205
数控超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司 KQ-250DE
超纯水处理*** Academic Milli-Q ZMQS50001
表2实验试剂
表3 18批千里香实验样品的来源和状态
编号 来源 状态
1 广西壮族自治区河池市南丹县里湖瑶族乡 栽培
2 广东省肇庆市怀集县六竹基地A 6个月生
3 广东省肇庆市怀集县六竹基地C 6个月生
4 广东省梅州市五华县横陂基地 栽培1年生
5 广东省茂名市高州市宝光街道下汉村 栽培
6 广东省梅州市五华县横陂基地 栽培6年生
7 广东省茂名市高州市镇江基地 栽培
8 广东省肇庆市怀集县六竹基地B 6个月生
9 广东省梅州市五华县横陂基地 栽培(野生移栽5年)
10 广东省河源市紫金县龙窝镇 栽培1.5年生
11 广东省惠州市博罗县04 栽培
12 广东省惠州市博罗县10 栽培
13 贵州省黔南布依族苗族自治州都匀市 野生
14 广西壮族自治区河池市东兰县 野生
15 广西壮族自治区百色市隆林各族自治县 野生
16 广西壮族自治区河池市环江毛南族自治县 野生
17 广西壮族自治区贺州市富川瑶族自治县 野生
18 广西壮族自治区河池市金城江区拔贡镇 野生
实施例1
本实施例提供了一种千里香中化学成分的分离方法，所述化合成分包括九里香酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮和5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮，所述分离方法包括以下步骤，
(1)供试品溶液的制备：取千里香约0.5g精密称定，置250mL的锥形瓶中，精密加入无水乙醇50mL，密塞，称定重量，连接冷凝回流装置，加热至沸腾，并保持微沸90分钟，放冷后，取下锥形瓶，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，用0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
(2)对照品溶液的制备：取千里香中九里香酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮、去甲基川陈皮素加甲醇制成每1mL含九里香酮20μg、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮20μg、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮20μg、去甲基川陈皮素20μg的混合对照品溶液。
(3)超高效液相色谱法检测
采用超高效液相色谱法对供试品溶液以及对照品溶液进行检测，色谱条件如下：色谱柱为HSS T3(1.8μm，3.0×150mm)，流动相A为乙腈，B为0.2％甲酸水，检测波长为335nm，柱温为常温(25℃)，流速为0.4mL/min，进样量为2μL，洗脱梯度见下表。
对照品溶液和供试品溶液的UPLC色谱图见图15-图16所示，在该色谱条件下，九里香酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮、去甲基川陈皮素与相邻峰之间的分离度均大于等于1.5，如对照品溶液的UPLC色谱图中，九里香酮与相邻峰之间的分离度为36.02，5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮与相邻峰之间的分离度为10.31，5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮与相邻峰之间的分离度为37.79，去甲基川陈皮素与相邻峰之间的分离度为14.49；理论塔板数均在28800以上，如九里香酮的理论塔板数为33965.67，5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮的理论塔板数为34637.65，5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮的理论塔板数为98784.78，去甲基川陈皮素的理论塔板数为79288.46。供试品溶液的UPLC色谱图中，九里香酮与相邻峰之间的分离度为6.35，5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮与相邻峰之间的分离度为2.71，5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮与相邻峰之间的分离度为5.01，去甲基川陈皮素与相邻峰之间的分离度为2.72；理论塔板数均在28800以上，如九里香酮的理论塔板数为30249.39，5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮的理论塔板数为28736.33，5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮的理论塔板数为92333.05，去甲基川陈皮素的理论塔板数为77389.12。
实施例2色谱条件的考察
(1)检测波长
取九里香酮对照品、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮对照品、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮对照品、去甲基川陈皮素对照品适量，用甲醇溶解制成混合对照品，在超高效液相***下开启3D通道进行全波长扫描。
扫描结果如图1所示，由图1可知，九里香酮在335.8nm处有最大吸收峰；5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮在325.9nm处有最大吸收峰；5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮在342nm处有最大吸收峰；去甲氧基黄酮在342.7nm处有最大吸收峰。
考察九里香酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮、去甲基川陈皮素分别在320nm、335nm、340nm波长下的峰面积，结果见表4、表5、表6。
表4
表5
表6
由表4可知，320nm下所测千里香成分的总峰面积为1158292；表5可知，335nm下所测千里香成分的总峰面积为1422556；表6可知，340nm下所测千里香成分的总峰面积为1400552。
由以上结果可知，千里香中九里香酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮、去甲基川陈皮素在335nm波长下吸收效果最好，所以选用335nm作为检测波长。
(2)色谱柱的考察
取千里香供试品溶液进行超高效液相色谱法检测，千里香供试品溶液按照实施例1的制备方法制成。色谱条件如下：以乙腈(A)-0.2％甲酸水(B)为流动相，比较了CAPCELLCORE(2.7μm 2.1×150mm)色谱柱(色谱柱1)、HSS T3(1.8μm，3.0×150mm)色谱柱(色谱柱2)和XSelect CSH Fluoro-Phenyl(2.5μm 2.1×150mm)(色谱柱3)对分离情况的影响，梯度洗脱程序包括：0→15min→16min→20min→25min→26min→29min→30min→32min，流动相中乙腈的体积百分数为：40％→42％→49％→49％→50％→100％→100％→40％→40％。柱温：常温。流速：0.4mL/min，进样量：2μL。波长：335nm。对比结果参照图2、图3、图4。
由图2、图3、图4对比可知，色谱柱1、3的各峰之间分离效果较差，而色谱柱2的分离效果较好，故选用色谱柱HSS T3(1.8μm，3.0×150mm)。
表7***适应性参数
(3)流动相的考察
取千里香供试品溶液进行超高效液相色谱法检测，千里香供试品溶液按照实施例1的制备方法制成。色谱条件如下，比较不同流动相对分离情况的影响：流动相1：乙腈(A)-0.1％甲酸水(B)；流动相2：乙腈(A)-0.2％甲酸水(B)；流动相3：乙腈(A)-水(B)；流动相4：甲醇(A)-水(B)。色谱柱为ACQUITYHSS T3(1.8μm，3.0×150mm)色谱柱，流动相2的梯度洗脱程序包括：0→15min→16min→20min→25min→26min→29min→30min→32min，流动相中乙腈的体积百分数为：40％→42％→49％→49％→50％→100％→100％→40％→40％。流动相1和流动相3、流动相4的梯度洗脱程序包括：0→15min→16min→20min→21min→29min→30min→31min→35min，流动相中A(乙腈或甲醇)的体积百分数为：40％→40％→35％→35％→50％→50％→100％→40％→40％。柱温：常温。流速：0.4mL/min，进样量：2μL。波长：335nm。比对结果如图5-图8所示。
表8***适应性参数
由上表及图5-图8可知，流动相4的分离效果差，各峰之间不能分离开来；流动相3尽管分离度较好，但其对称因子均在0.9以下，流动相3的峰型从图中也明显能看出较流动相1和流动相2差。流动相1与流动相2峰形差异较小，其中流动相2的乙腈-0.2％甲酸水在相同时间内，分离效果更佳，且能更快洗脱出各种成分，最终以乙腈-0.2％甲酸水作为流动相。
(4)洗脱程序
取千里香供试品溶液进行超高效液相色谱法检测，千里香供试品溶液按照实施例1的方法制成。色谱条件如下：乙腈(A)-0.2％甲酸水(B)，色谱柱为ACQUITYHSS T3(1.8μm，3.0×150mm)色谱柱，梯度洗脱程序分别如下表9-13。柱温：常温。流速：0.4mL/min，进样量：2μL。波长：335nm。
表9洗脱梯度1
时间min A％(乙腈) B％(0.2％甲酸)
0 45.0 55.0
4 45.0 55.0
5 34.0 66.0
22 34.0 66.0
26 50.0 50.0
30 100.0 0.0
31 35.0 65.0
35 35.0 65.0
表10洗脱梯度2
时间min A％(乙腈) B％(0.2％甲酸)
0 38 62
12 40 60
15 40 60
16 35 65
20 35 65
21 50 50
29 50 50
30 100 0
31 40 60
35 40 60
表11洗脱梯度3
时间min A％(乙腈) B％(0.2％甲酸)
0 38 62
12 38 60
14 40 60
15 40 60
16 35 65
20 35 65
21 50 50
29 50 50
30 100 0
31 38 62
35 38 62
表12洗脱梯度4
时间min A％(乙腈) B％(0.2％甲酸)
0 35.0 65.0
14 37.0 63.0
15 48.0 52.0
20 48.0 52.0
21 50.0 50.0
29 50.0 50.0
30 100.0 0.0
31 37.0 63.0
32 35.0 65.0
表13洗脱梯度5
时间min A％(乙腈) B％(0.2％甲酸)
0 40.0 60.0
15 42.0 58.0
16 49.0 51.0
20 49.0 51.0
25 50.0 50.0
26 100.0 0.0
29 100.0 0.0
30 40.0 60.0
32 40.0 60.0
表14***适应性参数
由上述表14结果结合图9至图13可知，相比于其他洗脱梯度，采用洗脱梯度5可以明显提高分离效果，如相对于洗脱梯度1-4，洗脱梯度5的分离度均在1.5以上，且对称因子在0.9-1.2之间，分离效果明显提高，同时峰形明显改善，而洗脱梯度4得到的色谱图中5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮的峰则有一些拖尾现象。
(5)流速考察
选取0.45mL/min、0.40mL/min、0.35mL/min 3种不同流速对按实施例1的方法制得的千里香供试品溶液进行耐用性考察，其余色谱条件均与实施例1相同，结果见表15。
表15不同流速下的***适应性参数
在设定的色谱条件下0.45mL/min、0.40mL/min、0.35mL/min三种流速中九里香酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮、去甲基川陈皮素均可有效分离。由表15可知，各呈现三种差异较大的峰面积，且随着流速减小，峰面积越大，在0.45mL/min流速下，所需色谱峰出峰较快，色谱峰出现堆积情况；而在0.35mL/min流速下，色谱峰分离速度较慢，在相同时间内各成分不能完全洗脱，故优选流速为0.40mL/min。
(6)柱温考察
选取25℃、30℃、35℃3种不同柱温对按实施例1的方法制得的千里香供试品溶液进行耐用性考察，其余色谱条件均与实施例1相同，结果见表16。
表16不同柱温下的***适应性参数
由表16可知，九里香酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮、去甲基川陈皮素在这三种柱温下均能有效分离且峰面积差异较小；九里香酮峰面积RSD为0.71％，5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮峰面积RSD为0.86％，5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮峰面积RSD为1.71％，去甲基川陈皮素峰面积RSD为0.07％，表明25-35℃的范围温度下均可实现四种物质的完全洗脱和准确测定，但由于25℃下，千里香四成分的峰面积最大，故优选柱温为25℃。
实施例3供试品溶液制备方法的考察
(1)提取溶剂的考察
取6号千里香样品粉末6份，每份约0.5g，精密称定，其中三份精密加入甲醇50mL，另三份加入无水乙醇50mL，超声处理30分钟，相应的用甲醇，无水乙醇补足减失的重量，摇匀，用0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液按实施例1的色谱条件测定九里香酮，5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮，5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮，去甲基川陈皮素的含量，结果见表17。
表17
由表17可知，两种溶剂提取结果有较小差异，无水乙醇超声提取结果略高于甲醇超声提取，且无水乙醇较甲醇毒害性小，故优选提取溶剂为无水乙醇。
(2)提取方法的考察
取6号千里香样品粉末6份，每份约0.5g，精密称定，各加入无水乙醇50mL，其中三份超声处理30min，另三份回流提取30min，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，用0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液按实施例1的色谱条件测定九里香酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮，去甲基川陈皮素的含量。
表18
由表18可知，两种提取方法结果有较小差异，加热回流提取结果略高于超声提取，故优选提取方法为加热回流。
(3)提取溶剂溶度、提取时间、溶剂体积的正交试验
对供试品溶液制备的溶剂浓度，提取时间、溶剂体积3个因素进行考察，每个因素各3个水平，具体方法如下：按乙醇浓度为50％、75％、100％，提取时间为30min、60min、90min，溶剂体积为25mL、50mL、100mL进行正交试验，共9个试验；
取6号千里香供试品粉末，每份约0.5g，精密称定，精密加入溶剂后称定重量，回流提取，放冷，再分别用相应浓度的乙醇补足减失的重量，摇匀，用0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液按实施例1的色谱条件测定九里香酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮，去甲基川陈皮素的含量，计算每个试验的总含量，结果见表19。
表19
/>
由表19可知，对提取率的影响从大到小的顺序是：乙醇浓度＞提取时间＞溶剂体积，由结果可知最佳的提取条件为：提取溶剂浓度为100％，提取时间为90min，加入溶剂体积为50mL。
(4)验证实验
取6号千里香样品粉末3份，每份约0.5g，精密称定，加入50mL，浓度为100％的乙醇(即无水乙醇)，称重，回流提取90min，放冷，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液按实施例1的色谱条件测定九里香酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮，去甲基川陈皮素的含量，结果见表20。
表20
由表20可知，千里香的九里香酮的含量为0.67％，5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮的含量为0.77％，5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮的含量为0.49％，去甲基川陈皮素的含量为0.81％，平均总含量为2.76％，RSD％值均在合格范围内(RSD≤2.0％)；与所测的四种成分含量相比均较高，所以千里香的最佳提取条件为，加入50mL无水乙醇回流提取90min。
实施例4方法学考察
1、线性考察
精密称取九里香酮对照品(含量98.8％)11.459mg、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮对照品(含量100％)14.393mg、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮对照品(含量98.0％)9.587mg，去甲基川陈皮素对照品(含量98.0％)14.350mg，置25mL的量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，作为混合对照品母液(含九里香酮452.860μg/mL、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮575.720μg/mL、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮375.810μg/mL，去甲基川陈皮素562.520μg/mL)。
系列标准曲线溶液配制：精密吸取上述混合对照品母液2.0mL，置5mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得标准曲线溶液(1)(含九里香酮151.144μg/mL、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮230.288μg/mL、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮150.324μg/mL，去甲基川陈皮素225.008μg/mL)；
精密吸取上述混合对照品母液2.0mL，置10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得标准曲线溶液(2)(含九里香酮90.572μg/mL、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮115.144μg/mL、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮75.162μg/mL，去甲基川陈皮素112.504μg/mL)；
精密吸取上述混合对照品母液2.0mL，置25mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得标准曲线溶液(3)(含九里香酮36.229μg/mL、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮46.058μg/mL、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮30.065μg/mL，去甲基川陈皮素45.002μg/mL)；
精密吸取标准曲线溶液(2)2.0mL，置10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得标准曲线溶液(4)(含九里香酮18.114μg/mL、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮23.029μg/mL、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮15.032μg/mL，去甲基川陈皮素22.501μg/mL)；
精密吸取上述混合对照母液2.0mL，置100mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得标准曲线溶液(5)(含九里香酮9.057μg/mL、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮11.514μg/mL、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮7.516μg/mL，去甲基川陈皮素11.250μg/mL)；
精密吸取标准曲线溶液(3)2.0mL，置10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得标准曲线溶液(6)(含九里香酮3.623μg/mL、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮4.606μg/mL、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮3.006μg/mL，去甲基川陈皮素4.500μg/mL)；
精密吸取标准曲线溶液(5)2.0mL，置10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得标准曲线溶液(7)(含九里香酮0.906μg/mL、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮1.151μg/mL、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮0.752μg/mL，去甲基川陈皮素1.125μg/mL)。
分别吸取标准曲线溶液，按实施例1的色谱条件测定，以对照品的浓度(μg/mL)为横坐标(x)，峰面积为纵坐标(y)，绘制标准曲线，结果见图14，并计算线性相关系数r，得到相应的线性范围，结果见表21。
表21
由图14和表21可知，四种成分在相应的浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系(R2≥0.9990)。
2、仪器精密度
取6号千里香样品，按实施例1的方法制备供试品溶液，按实施例1的色谱条件平行进样测定6次，结果见表22。
表22
由表22可知，九里香酮的RSD为0.38％，5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮RSD为0.42％，5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮RSD为0.40％，去甲基川陈皮素RSD为0.42％，结果表明仪器精密度良好。
3、重复性
取6号千里香样品，按实施例1的方法平行制备6份供试品溶液，按实施例1的色谱条件进样测定，计算含量，结果见表23。
表23
由表23可知，九里香酮的RSD为1.68％，5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮RSD为1.39％，5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮RSD为1.61％，去甲基川陈皮素RSD为1.71％，表明重复性良好。
4、稳定性
取按实施例1的方法制得的千里香供试品溶液分别在0、2、4、8、16、24、48h时按实施例1的色谱条件进行测定，结果见表24。
表24
由表24可知，48小时内四种成分的峰面积基本不变，九里香酮峰面积、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮峰面积、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮峰面积，去甲基川陈皮素峰面积的RSD分别为1.34％、1.77％、1.49％和1.49％，表明供试品在48小时内稳定。
实施例5多批次测定
本实施例提供了一种同时测定千里香中四种化学成分含量的方法，将18批千里香样品按实施例1的方法处理，按实施例1的色谱条件下进行定量测定，以外标一点法计算各供试品中四种成分的含量，结果见表25。
表25
由表25可知，18份千里香样品中，九里香酮的平均含量为2.8741mg/g，其中广西隆林县(15号)的含量最低，只有0.3044mg/g，广东惠州(12号)的含量最高为7.2562mg/g；5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮的平均含量为4.2607mg/g，其中广东怀集六竹基地(8号)的含量最低为0.8860mg/g，广西环江县(16号)的含量最高可达到12.9333mg/g；5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮的平均含量为1.9607mg/g，其中广西隆林县(15号)的含量最低，只有0.3113mg/g，而广东惠州(11号)的含量最高，有6.6890mg/g；去甲基川陈皮素的平均含量为6.4558mg/g，其中广西隆林县(15号)的含量最低，为1.3234mg/g；而广西环江县(16号)的含量最高，可达到12.2271mg/g。
综上所述，本发明通过UPLC技术建立同时测定千里香中九里香酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮、去甲基川陈皮素四种成分的含量测定方法。
本发明可以准确、快速、便捷地测定千里香中的四种成分；通过测定18批千里香药材可知，九里香酮含量在0.3044-7.2562mg/g，5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮含量在0.8860-12.9333mg/g，5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮含量在0.3113-6.6890mg/g，去甲基川陈皮素含量在1.3234-12.2271mg/g；四种成分分离度达到1.5，理论塔板数在28000以上，重复性、稳定性良好。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种千里香中化学成分的分离方法，其特征在于，所述化学成分包括九里香酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮和去甲基川陈皮素，所述分离方法包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备；
(2)取供试品溶液采用超高效液相色谱法检测，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，采用规格为1.8μm，3.0×150mm的色谱柱，以乙腈-含甲酸的水溶液为流动相进行梯度洗脱；梯度洗脱程序包括：
0→15min→16min→20min→25min，流动相中乙腈的体积百分数为：40％→42％→49％→49％→50％。
2.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，步骤(1)包括：称取千里香，采用提取溶剂进行提取，固液分离，取液体，即为供试品溶液。
3.根据权利要求2所述的分离方法，其特征在于，所述步骤(1)还满足如下A-D中的任意一项或者多项：
A、供试品的质量与提取溶剂的体积比为0.5:25-100，其中，质量与溶剂的配比关系为g/mL；
B、所述固液分离选自离心或者过滤；
C、提取溶剂选自甲醇、水和乙醇中的至少一种；优选为乙醇；
D、所述提取为加热回流或者超声提取，提取时间为30-90min。
4.根据权利要求1-3中任一所述的分离方法，其特征在于，步骤(2)还满足如下1)-6)项中的任意一项或者多项：
1)所述梯度洗脱程序还包括：25min→26min→29min→30min→32min，流动相中乙腈的体积百分数为：50％→100％→100％→40％→40％；
2)所述含甲酸的水溶液中甲酸的体积百分数为0.1％-0.2％；
3)检测波长为320-340nm，优选为335nm；
4)流速为0.35-0.45mL/min，优选为0.4mL/min；
5)色谱柱采用规格为1.8μm，3.0×150mm的ACQUITY HSS T3柱；
6)柱温为25-35℃，优选为25℃。
5.一种同时测定千里香中四种化学成分含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)供试品溶液和对照品溶液的制备；分别以九里香酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮、去甲基川陈皮素为对照品，采用溶剂溶解对照品制成对照品溶液；
(2)取供试品溶液和对照品溶液采用超高效液相色谱法检测，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，采用规格为1.8μm，3.0×150mm的色谱柱，以乙腈-含甲酸的水溶液为流动相进行梯度洗脱；梯度洗脱程序包括：0→15min→16min→20min→25min，流动相中乙腈的体积百分数为：40％→42％→49％→49％→50％；采用外标法计算供试品溶液中各对照品的含量。
6.根据权利要求5所述的同时测定千里香中四种化学成分含量的方法，其特征在于，步骤(1)包括：称取千里香，采用提取溶剂进行提取，固液分离，取液体，即为供试品溶液。
7.根据权利要求6所述的同时测定千里香中四种化学成分含量的方法，其特征在于，所述步骤(1)还满足如下A-D中的任意一项或者多项：
A、供试品的质量与提取溶剂的体积比为0.5:25-100，其中，质量与溶剂的配比关系为g/mL；
B、所述固液分离选自离心或者过滤；
C、提取溶剂选自甲醇、水和乙醇中的至少一种；优选为乙醇；
D、所述提取为加热回流或者超声提取，提取时间为30-90min。
8.根据权利要求5-7中任一所述的同时测定千里香中四种化学成分含量的方法，其特征在于，步骤(2)还满足如下1)-6)项中的任意一项或者多项：
1)所述梯度洗脱程序还包括：25min→26min→29min→30min→32min，流动相中乙腈的体积百分数为：50％→100％→100％→40％→40％；
2)所述含甲酸的水溶液中甲酸的体积百分数为0.1％-0.2％；
3)检测波长为320-340nm，优选为335nm；
4)流速为0.35-0.45mL/min，优选为0.4mL/min；
5)色谱柱采用规格为1.8μm，3.0×150mm的ACQUITY HSS T3柱；
6)柱温为25-35℃，优选为25℃。
9.根据权利要求5-8中任一所述的同时测定千里香中四种化学成分含量的方法，其特征在于，每1mL的所述对照品溶液含九里香酮0.9-160μg、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮1-250μg、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮0.7-160μg，去甲基川陈皮素1-250μg。
10.根据权利要求5-9中任一所述的同时测定千里香中四种化学成分含量的方法，其特征在于，还包括采用标准曲线法或者外标一点法计算供试品溶液中九里香酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮、5-羟基-3',4',6,7-四甲氧基黄酮、去甲基川陈皮素的含量的步骤。
CN202310966485.9A 2023-08-01 2023-08-01 一种千里香中化学成分的分离方法和含量测定方法 Pending CN116953125A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310966485.9A CN116953125A (zh) 2023-08-01 2023-08-01 一种千里香中化学成分的分离方法和含量测定方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310966485.9A CN116953125A (zh) 2023-08-01 2023-08-01 一种千里香中化学成分的分离方法和含量测定方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116953125A true CN116953125A (zh) 2023-10-27

Family

ID=88452829

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202310966485.9A Pending CN116953125A (zh) 2023-08-01 2023-08-01 一种千里香中化学成分的分离方法和含量测定方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116953125A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101850070B (zh) 中药唐草片的检测方法
CN107796892B (zh) 艽龙胶囊的指纹图谱及其在质量控制与成分分析中的应用
CN111879887A (zh) 黄芪药材及其制剂中成分的检测方法和应用
CN112730674B (zh) 一种罗汉茶的质量检测方法
CN101703610A (zh) 清脑降压片质量检测方法
CN112684036A (zh) 黄蛭益肾胶囊指纹图谱测定方法及其应用
CN108490095B (zh) 一种毛大丁草药材中多种成分含量测定的方法
CN103487528B (zh) 一种治咳川贝枇杷滴丸的hplc指纹图谱测定方法
CN116953125A (zh) 一种千里香中化学成分的分离方法和含量测定方法
CN106769964B (zh) 一枝蒿提取物的质量控制方法
CN113759010B (zh) 一种月季花特征图谱的构建方法
CN108918721A (zh) 一种款冬花中绿原酸含量的测定方法
CN113759011B (zh) 一种银柴胡及其制剂特征图谱的建立方法
CN111351883B (zh) 一种槐芩软膏中芦丁的含量测定方法
CN109061024B (zh) 小儿扶脾颗粒的标准指纹图谱的构建方法及其应用
CN104597168B (zh) 桑枝精制饮片含量测定方法
CN108593794B (zh) 一种多指标成分uplc检测红花中有效成分含量方法
CN112051352A (zh) 一种腹可安片质量控制的新方法
CN110031533A (zh) 固相萃取与毛细管电泳技术联合分离检测桑叶中多酚类物质的方法
CN115266961B (zh) 一种紫苏梗药物制剂的特征图谱的构建方法
CN114814034B (zh) 同时检测浙麦冬中皂苷和黄酮含量的液相色谱方法
CN115372516B (zh) 一种鱼腥草芩蓝合剂中间体核苷类成分的含量测定方法
CN115267005B (zh) 一种开心散中多指标成分含量的检测方法
CN115015418B (zh) 一种矮地茶汤剂质量检测方法
CN105510451B (zh) 一种中药组方的质量检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination