CN116948032B - 人源cd4单克隆抗体及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及抗体技术领域,具体涉及人源CD4单克隆抗体及其制备方法和应用。本发明提供的抗体或其抗原结合片段具体限定了重链互补决定区CDR‑H1、CDR‑H2、CDR‑H3及轻链互补决定区CDR‑L1、CDR‑L2、CDR‑L3的氨基酸序列。该人源CD4抗体能够特异性地识别并结合人源CD4蛋白和CD4+细胞,具有高亲和力,可用于CD4+细胞的流式细胞术检测,在人源CD4蛋白及CD4+细胞检测中具有广泛的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及抗体技术领域,尤其涉及人源CD4单克隆抗体及其制备方法和应用。
背景技术
CD4蛋白是一种单链糖蛋白,分子量为55kDa,存在于细胞膜表面,表达于部分T淋巴细胞、胸腺细胞及某些B淋巴细胞、EB病毒转化的B细胞、单核-巨噬细胞及脑细胞膜上。CD4检测有助于某些免疫疾病、感染疾病等的诊断。
单克隆抗体技术(monoclonal antibody technique)是在1975年由英国科学家Milstein和Kohler所发明的,其原理是:B淋巴细胞能够产生抗体,但在体外不能进行无限***;而瘤细胞虽然可以在体外进行无限传代,但不能产生抗体。将这两种细胞融合后得到的杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特性。单克隆抗体的获得过程包括动物免疫、细胞融合、细胞筛选、克隆化和特征鉴定等,能够识别特定的单一抗原表位,具有高度的特异性。
对于人CD4(hCD4),目前仍缺少能够高效与其结合并适用于流式细胞术等检测的人CD4抗体。
发明内容
有鉴于背景技术中的问题,本发明提供了一种人源CD4抗体及其制备方法和应用。
具体的,本发明的技术方案如下:
第一方面,本发明提供了一种抗体或其抗原结合片段,所述抗体或其抗原结合片段的重链互补决定区CDR-H1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示、重链互补决定区CDR-H2的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示、重链互补决定区CDR-H3的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示;轻链互补决定区CDR-L1的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示、轻链互补决定区CDR-L2的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示、轻链互补决定区CDR-L3的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。
以上所述的抗体或其抗原结合片段能够特异性地识别并结合人源CD4蛋白和表达人源CD4蛋白的细胞(CD4+细胞),具有高亲和力。
优选地,所述抗体或其抗原结合片段的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示或与如SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列具有至少80%的相似性,轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示或与如SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列具有至少80%的相似性。
在本发明的一些实施方式中,所述抗体或其抗原结合片段的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示,轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。
在具有以上所述的重链互补决定区CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3和轻链互补决定区CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3的情况下,重链可变区的氨基酸序列为与如SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列具有至少80%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少99.5%的序列相似性的氨基酸序列,且轻链可变区的氨基酸序列为与如SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列具有至少80%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少99.5%的序列相似性的氨基酸序列对应的抗体或其抗原结合片段也在本发明的保护范围内。
以上所述的抗体或其抗原结合片段为选自单克隆抗体、Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fv、dAb、互补决定区片段、单链抗体中的任意一种。
其中,单克隆抗体包括动物源抗体(例如鼠源抗体)、嵌合抗体或人源化抗体等。
第二方面,本发明提供了包含以上所述的抗体或其抗原结合片段的双特异性抗体或多特异性抗体。
第三方面,本发明提供了一种核酸分子,所述核酸分子编码以上所述的抗体或其抗原结合片段。
根据以上所述的抗体或其抗原结合片段的氨基酸序列和密码子规则,本领域技术人员能够获得编码上述抗体或其抗原结合片段的核酸分子的核苷酸序列。由于密码子的简并性,编码上述抗体或其抗原结合片段的核酸分子的核苷酸序列并不唯一,所有能够编码产生上述抗体或其抗原结合片段的核酸分子均在本发明的保护范围内。
第四方面,本发明提供了包含以上所述的核酸分子的生物材料,所述生物材料为表达盒、载体或宿主细胞。
以上所述的核酸分子与启动子、终止子等调控元件可操作性地连接可得到所述表达盒。
以上所述的载体包括但不限于质粒载体、病毒载体等。
以上所述的宿主细胞包括微生物细胞或动物细胞。其中微生物细胞包括但不限于大肠杆菌、酵母等,动物细胞包括但不限于CHO细胞、293T细胞等。
第五方面,本发明提供了一种抗体偶联物,其为将以上所述的抗体或其抗原结合片段或所述双特异性抗体或多特异性抗体与标记物或蛋白偶联得到。
优选地,所述标记物选自化学发光染料标记、酶标记、生物素标记、荧光染料标记、胶体金标记、放射性标记中的一种或多种。
本发明提供的抗体或其抗原结合片段可采用本领域常规方法制备得到,包括:化学合成、宿主表达等。
第六方面,本发明提供了以上所述的抗体或其抗原结合片段的制备方法,所述方法包括:培养能够表达所述抗体或其抗原结合片段的宿主细胞,经分离得到所述抗体或其抗原结合片段。
第七方面,本发明提供了以上所述的抗体或其抗原结合片段或所述双特异性抗体或多特异性抗体或所述核酸分子或所述生物材料或所述抗体偶联物的以下任一种应用:
(1)在制备用于检测人源CD4蛋白或表达人源CD4蛋白的细胞在样品中的存在或其水平的产品中的应用;
(2)在检测人源CD4蛋白在样品中的存在或其水平中的应用;
(3)在检测表达人源CD4蛋白的细胞在样品中的存在或其水平中的应用。
上述(1)中,所述产品可为检测试剂或试剂盒。
上述(1)、(2)、(3)中,所述样品可以是来自有生命的人或动物的样品(包括血液等),也可以是体外培养的细胞或细胞培养液等并非来自有生命的人或动物的样品。
对于上述(2)、(3),优选为非疾病诊断和治疗目的检测。
上述(1)、(2)、(3)所述应用中,利用本发明提供的抗体或其抗原结合片段进行检测的方法优选为流式细胞术。
第八方面,本发明提供一种产品,所述产品包含以上所述的抗体或其抗原结合片段,或包含所述双特异性抗体或多特异性抗体,或包含所述抗体偶联物;所述产品为检测试剂或药物组合物。
本发明的有益效果在于:本发明提供的人源CD4抗体能够特异地识别并结合人源CD4蛋白和CD4+细胞,具有高亲和力,可用于CD4+细胞的流式细胞术等检测,具有高灵敏度和特异性,在人源CD4蛋白及CD4+细胞检测中具有广泛的应用前景。
附图说明
为了更清楚地说明本发明或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作一简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例2中hCD4单克隆抗体用于流式细胞术检测的结果,其中,A、B、C、D分别为A、B、C、D四管的检测结果。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将结合本发明中的附图,对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
具体地,本发明提供一种人源CD4(hCD4)单克隆抗体,该抗体的获得包括动物免疫(以重组hCD4蛋白为抗原)、细胞融合、阳性杂交瘤细胞的筛选和克隆过程、以及腹水纯化和流式细胞术验证。本发明提供的人源CD4单克隆抗体能够有效结合hCD4和CD4+细胞,性能稳定,可用于流式细胞术检测CD4+细胞。
本发明中,阳性杂交瘤细胞的筛选通过重组hCD4蛋白筛选,再通过流式细胞术验证,不仅确保了单克隆抗体能够有效识别天然hCD4蛋白,而且避免了后期大规模筛选的问题,缩短了单克隆抗体的研发周期、操作简单。
以下实施例中使用的试剂及其配方如表1所示。
表1
实施例1 人源CD4单克隆抗体的获得
本发明提供的hCD4单克隆抗体的获得包括以下步骤:
重组hCD4表达纯化
(1)将hCD4重组质粒转染HEK293细胞100ml,5%的CO2恒温摇床,37℃、120rpm恒温振荡培养6d,停止培养。
(2)将细胞液置于1000rpm,离心5min,吸取上清液,过0.45um滤膜。
(3)使用1M Tris-HCl (pH8.8) 调节上清液pH至7.4。
(4)开启纯仪器,用10mL1×PBS冲洗层析柱。
(5)开始上样,上样流速为1mL/min。
(6)用10mL 1×PBS冲洗层析柱。
(7)洗脱并收集hCD4,蛋白定量仪器测定浓度,将高浓度的hCD4溶液合并 。
(8)将纯化后hCD4溶液置于1×PBS,4℃透析过夜。
(9)收集hCD4溶液,利用BCA蛋白定量试剂盒进行定量。
二、动物免疫
将重组hCD4稀释至0.4mg/mL,与水溶性快速佐剂(博奥龙 Quick antibodymouse5w)等体积混合,腿部肌肉多点接种6周龄 Balb/c 雌鼠6只,接种抗原剂量为20μg/只。21d后再次注射,免疫量与第一次相同。细胞融合前3d,腹腔注射不加佐剂的重组hCD4进行免疫冲击,随后进行细胞融合。
三、重组hCD4间接ELISA方法的建立
(1)将重组hCD4用碳酸盐缓冲液(pH 9.6)分别稀释至1、5、10、15、20μg/mL,100μL/孔,在 37℃下孵育1h,4℃过夜。
(2)甩干包被液,PBST洗涤3次。
(3)加入5%脱脂乳封闭液,250μL/孔,37℃孵育1h。
(4)同上PBST 洗涤3次。
(5)5%脱脂乳将阴性血清和阳性血清分别做 1:1000、1:2000、1:4000、1:8000、1:16000、1:32000、1:64000和1:128000稀释,100μL/孔,37℃孵育1 h。
(6)同上PBST洗涤3次。
(7)羊抗鼠IgG-HRP用脱脂乳进行1:10000倍稀释,100μL/孔,37℃孵育 0.5h。
(8)PBST洗涤4次。
(9)每孔加入新鲜配制的TMB显色液,100μL/孔,室温避光显色10min。
(10)加入1M H2SO4,50μL/孔,终止反应。
(11)酶标仪测定各孔OD450。
通过以上的实验确定重组hCD4蛋白的最佳包被浓度,以及阴性血清和阳性血清的最佳稀释度。
四、sp2/0 骨髓瘤细胞的准备
液氮罐中取出sp2/0细胞,放入37℃水中融化,1000rpm离心5min后弃上清,用DMEM完全培养液重悬,转入细胞瓶中,37℃、5%CO2、饱和湿度培养箱中培养。融合当天取细胞形态均一、边界清晰、生长状态良好的sp2/0细胞,弃去培养液,用DMEM培养液洗涤2次,再用20mL DMEM培养液重悬细胞,然后计数,放置4℃备用。
五、饲养细胞的准备
融合前1d,选择未免疫的10周龄昆明雌鼠2只,颈椎脱臼处死,75%酒精浸泡消毒5min后,无菌条件下剪开腹部皮肤,充分暴露腹部;用镊子拎起腹膜,用注射器向腹腔中注入 8mL HAT培养液,用酒精棉球轻轻按压腹部,最后用注射器将腹腔内的培养液吸出,细胞计数,用HAT培养液重悬调节细胞数至 2×105个/mL,100μL/孔加入96孔培养板,置于37℃、5%CO2、饱和湿度培养箱中过夜,观察是否污染。
六、脾细胞的制备
利用间接ELISA方法测定免疫小鼠血清的效价,当血清中hCD4抗体效价达到16000时,重组hCD4加强免疫一次。3d后,小鼠眼球采血,将血液在37℃放置0.5 h,4℃放置1h,4000rpm离心5min,分离后的血清作为阳性血清。处死小鼠,75%酒精浸泡消毒5min后,无菌的条件下取出脾脏,置于70μm细胞筛上研磨。获取的脾细胞用DMEM培养液洗涤2次(1000rpm,离心8min),再用20mL DMEM培养液悬浮细胞,计数。
七、细胞融合
1、将准备好的sp2/0骨髓瘤细胞和脾细胞以1:5-1:10的比例混和,置于50mL离心管内,用DMEM培养液洗涤3次,1000rpm离心8min,最后一次离心后吸干上清,用手指轻击离心管底部,使细胞松散。
2、将离心管置于37℃水浴中,吸取1mL 37℃预热的PEG1450(美国西格玛公司,Sigma)匀速加入离心管,边加边轻轻搅拌,1min内加完,静置1min。
3、缓慢加入30mL DMEM培养液,第1min,加入1mL,第2min,加入3mL,第3min,加入5mL,第4min,加入7mL,第5min全部加完。
4、1000rpm离心 8min,弃上清。
5、HAT 培养液重悬融合细胞,动作轻柔,防止将刚融合上的细胞吹散,加入60-100mL HAT 培养液,开始铺 96 孔细胞培养板,可铺 6-10块。
6、将细胞培养板置于37℃、5%CO2、饱和湿度温箱中培养,融合3d后用HAT培养液半量换液,融合后10d更换为HT培养液。
八、hCD4杂交瘤细胞株的建立
1、阳性杂交瘤细胞的筛选
第10d改用HT培养液,待杂交瘤细胞长满孔底1/4时,进行检测。将重组hCD4按照最佳包被浓度包被酶标板,于换液2d后取杂交瘤细胞培养上清液,与重组hCD4反应,同时将sp2/0细胞培养上清液作为阴性对照,阳性小鼠血清做为阳性对照,选取与重组hCD4反应的杂交瘤细胞孔作为阳性细胞株进行下一次亚克隆。
2、亚克隆细胞
按步骤四制备饲养细胞,用HT营养液冲洗小鼠腹腔后获得的饲养细胞铺96 孔板,100μL/孔,96孔板置于37℃、5%CO2、饱和湿度培养箱中过夜培养。将已检测为阳性的杂交瘤细胞孔中的细胞吹起混匀,取10μL细胞,10倍比稀释后细胞计数,经计算从相应孔中取100个细胞加入10mL HT培养液中,接种于铺有饲养细胞的96孔细胞培养板,100μL/孔,即每孔约1个细胞。将细胞板置于37℃、5%CO2、饱和湿度培养箱中培养。4d后观察每孔克隆数,7-10d细胞长到1/4孔底时,进行ELISA检测,取2次检测均为阳性的单克隆孔进行再次亚克隆。经3次亚克隆化,直至所有克隆化细胞孔检测阳性率为100%时,即可确定已获得能够稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
3、hCD4杂交瘤细胞的冻存与复苏
将最后一次克隆全为阳性,且在显微镜下观察为单个克隆孔进行扩大培养,将孔内细胞吹散转入6孔板中,待6孔板中的细胞长满后将细胞转入50mL细胞瓶中培养。细胞长到80%-90%后传代培养,同时冻存杂交瘤细胞株,每株冻存3管。取生长对数期,状态良好的细胞,吹散混匀,1000rpm离心8min,弃上清,用冻存液重悬细胞,使细胞数达到1×106个/mL,转入冻存管中,1mL/管,放入程序降温盒-70℃过夜,第二天转入液氮中保存。
4、腹水制备
取10周龄 Balb/c雌鼠,腹腔注入0.5mL液体石蜡。7d后,腹腔接种1×106 个/只杂交瘤细胞。接种前,用DMEM培养液将杂交瘤细胞洗涤两次,浓度调整为1×107个/mL,取0.1mL细胞悬液,注入小鼠腹腔。7d后,即可产生腹水,注射器吸取收集。将收集的腹水3000rpm离心5min,收集上清。
九、hCD4单克隆抗体纯化
1、将腹水12000rpm离心5min,收集上清,弃掉沉淀。
2、将离心后的腹水使用0.22μm滤膜进行过滤。
3、使用10倍填料体积的PBS冲洗Protein A柱,流速1mL/min。
4、将过滤后腹水加入层析柱,流速1mL/min。
5、使用10倍填料体积的PBS冲洗Protein A柱,流速1mL/min。
6、用pH 3.0、0.1M甘氨酸-盐酸进行洗脱,流速1mL/min,用1.5mL离心管收集洗脱液,每管收集0.5mL,连续收集12管,收集完成后,每管加入20μL 1M Tris-HCl(pH8.8)进行中和,PAGE-SDS电泳验证。
7、将纯化后的单克隆抗体对PBS透析,4℃透析过夜,利用BCA定量试剂盒定量,调整浓度至1mg/mL。
将hCD4单克隆抗体进行序列测定,测序结果显示,hCD4单克隆抗体的重链互补决定区CDR-H1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示、重链互补决定区CDR-H2的氨基酸序列如SEQID NO.2所示、重链互补决定区CDR-H3的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示;轻链互补决定区CDR-L1的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示、轻链互补决定区CDR-L2的氨基酸序列如SEQ IDNO.5所示、轻链互补决定区CDR-L3的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示,重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示,轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。
8、hCD4单克隆抗体效价检测
(1)将重组hCD4用碳酸盐缓冲液(pH 9.6)稀释至1μg/mL,100μL/孔,在 37℃下孵育1h,4℃过夜。
(2)甩干包被液,PBST洗涤3次。
(3)加入5%脱脂乳封闭液,250μL/孔,37℃孵育1h。
(4)同上PBST 洗涤3次。
(5)以5%脱脂乳将1mg/mL hCD4单克隆抗体和1mg/mL hCD14单克隆抗体(阴性对照)分别做 1:1000、1:2000、1:4000、1:8000、1:16000、1:32000、1:64000和1:128000稀释,100μL/孔,37℃孵育1 h。
(6)同上PBST洗涤3次。
(7)将羊抗鼠IgG-HRP用脱脂乳进行1:10000倍稀释,100μL/孔,37℃孵育 0.5h。
(8)PBST洗涤4次。
(9)每孔加入新鲜配制的TMB显色液,100μL/孔,室温避光显色10min。
(10)加入1M H2SO4,50μL/孔,终止反应。
(11)酶标仪测定各孔OD450。
结果如表2所示,hCD4单克隆抗体效价为1:128000。
表2
实施例2 人源CD4单克隆抗体用于流式细胞术检测
将实施例1制得的人源CD4单克隆抗体用于流式细胞术检测,具体方法如下:
1、取4支1.5mL离心管,分别标记A、B、C、D,调整PBMC浓度为1×106个/mL,每管取0.5mL,加入1mL的PBS,350 g离心5min,去上清。
2、A管加入200μL PBS重悬细胞。
3、B管加入100μL PBS重悬细胞,然后加入2μL anti-mouse(抗小鼠抗体) IgG-PE流式抗体(美国百进生物科技有限公司,BioLegend),充分混匀,避光孵育15 min,1mL PBS终止反应,350 g离心5min,去上清,加入200μL PBS重悬细胞,再加入2μL 7AAD染色液(美国百进生物科技有限公司,BioLegend),充分混匀,避光孵育15 min。
4、C管加入100μL PBS重悬细胞,然后加入2μL anti-hCD4-PE流式抗体(美国百进生物科技有限公司,BioLegend),充分混匀,避光孵育15 min,1mL PBS终止反应,350g离心5min,去上清,加入200μL PBS重悬细胞,再加入2μL 7AAD染色液(美国百进生物科技有限公司,BioLegend),充分混匀,避光孵育15 min。
5、D管加入100μL PBS重悬细胞,加入1μL hCD4单克隆抗体,充分混合,室温孵育30min。加1mLPBS颠倒混匀,350 g离心5min,去上清,洗涤2次。100μL PBS重悬细胞,加入2μLanti-mouse(抗小鼠抗体) IgG-PE流式抗体,充分混匀,避光孵育15 min,1mL PBS终止反应,350 g离心5min,去上清,加入200μL PBS重悬细胞,再加入2μL 7AAD染色液(美国百进生物科技有限公司,BioLegend),充分混匀,避光孵育15 min。
6、将4管细胞上机检测。
检测结果如图1所示,结果显示:D管阳性细胞比为31.9%,与C管结果(32.7%)相近,表明hCD4单克隆抗体能够有效识别CD4+细胞,可以用于流式细胞术检测。
最后应说明的是:以上实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对其限制;尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换;而这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (10)
1.靶向CD4的抗体或其抗原结合片段,其特征在于,所述抗体或其抗原结合片段的重链互补决定区CDR-H1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示、重链互补决定区CDR-H2的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示、重链互补决定区CDR-H3的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示;轻链互补决定区CDR-L1的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示、轻链互补决定区CDR-L2的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示、轻链互补决定区CDR-L3的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段,其特征在于,所述抗体或其抗原结合片段的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示或与如SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列具有至少80%的相似性,轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示或与如SEQ IDNO.8所示的氨基酸序列具有至少80%的相似性。
3.根据权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段,其特征在于,所述抗体或其抗原结合片段为选自单克隆抗体、Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fv、dAb、单链抗体中的任意一种。
4.包含权利要求1~3任一项所述的抗体或其抗原结合片段的双特异性抗体或多特异性抗体。
5.核酸分子,其特征在于,所述核酸分子编码权利要求1~3任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
6.生物材料,其特征在于,所述生物材料包含权利要求5所述的核酸分子,所述生物材料为表达盒、载体或宿主细胞。
7.抗体偶联物,其特征在于,其为将权利要求1~3任一项所述的抗体或其抗原结合片段或权利要求4所述的双特异性抗体或多特异性抗体与标记物或蛋白偶联得到;所述标记物选自化学发光染料标记、酶标记、生物素标记、荧光染料标记、胶体金标记、放射性标记中的一种或多种。
8.权利要求1-3任一项所述的抗体或其抗原结合片段的制备方法,其特征在于,所述方法包括:培养能够表达所述抗体或其抗原结合片段的宿主细胞,经分离得到所述抗体或其抗原结合片段。
9.权利要求1~3任一项所述的抗体或其抗原结合片段或权利要求4所述的双特异性抗体或多特异性抗体或权利要求5所述的核酸分子或权利要求6所述的生物材料或权利要求7所述的抗体偶联物在制备用于检测人源CD4蛋白或表达人源CD4蛋白的细胞在样品中的存在或其水平的产品中的应用。
10.检测人源CD4蛋白的试剂或药物组合物,其特征在于,所述检测人源CD4蛋白的试剂或药物组合物包含权利要求1~3任一项所述的抗体或其抗原结合片段,或包含权利要求4所述的双特异性抗体或多特异性抗体,或包含权利要求7所述的抗体偶联物。
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Citations (3)
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CN101885769A (zh) * | 2009-05-12 | 2010-11-17 | 中国医药集团总公司四川抗菌素工业研究所 | 一种特异性结合cd4的全人源抗体及应用 |
CN102649818A (zh) * | 2011-02-25 | 2012-08-29 | 厦门大学 | 抗cd4蛋白的单克隆抗体及其活性片段及用途 |
CN105111311A (zh) * | 2005-12-20 | 2015-12-02 | Sbi生物技术有限公司 | 抗ilt7抗体 |
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2023
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Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105111311A (zh) * | 2005-12-20 | 2015-12-02 | Sbi生物技术有限公司 | 抗ilt7抗体 |
CN101885769A (zh) * | 2009-05-12 | 2010-11-17 | 中国医药集团总公司四川抗菌素工业研究所 | 一种特异性结合cd4的全人源抗体及应用 |
CN102649818A (zh) * | 2011-02-25 | 2012-08-29 | 厦门大学 | 抗cd4蛋白的单克隆抗体及其活性片段及用途 |
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Legal Events
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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