CN116808115A - 显齿蛇葡萄提取物在制备抑菌和/或修护产品中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明发现显齿蛇葡萄提取物具有去面部痤疮、舒缓口腔牙龈肿痛及光损伤色斑修复功效，即对于丙酸痤疮杆菌、中间普氏菌和牙龈卟啉单胞菌尤其有效，且对于HaCaT细胞的增殖具有促进的作用，在未来抗菌产品、舒缓修护产品以及口腔用品的发展研究中具有重大的潜能，此外，本发明使用显齿蛇葡萄嫩茎叶制备显齿蛇葡萄提取物，实现了显齿蛇葡萄资源的充分利用。
Description
技术领域
本发明涉及植物提取物技术领域，尤其是涉及显齿蛇葡萄提取物在制备抑菌和/或修护产品中的应用。
背景技术
随显齿蛇葡萄属葡萄科，学名：Ampelopsis grossedentata(Hand.-Mazz.)W.T.Wang，是由葡萄科蛇葡萄属显齿蛇葡萄种植物，用其茎叶加工而成的茶，又名藤茶、莓茶、白茶、甘露茶，主要分布于广东、广西、云南、贵州、湖南、湖北、江西、福建等省区。其味甘、淡、性凉，具有清热解毒、祛风湿、强筋骨等功效，用于舒缓感冒发热、咽喉肿痛、黄疸型肝炎、疱疔等症，已有数百年应用历史，是一种名贵珍稀的保健茶。经茶史药典和多方专家追史溯源考证，茶圣陆羽在其第一部茶经里将它归为新梢枝性状的显齿蛇葡萄类中。它是茶叶王国里的瑰宝，药效性能很强的茶之奇葩。纯天然无污染的，具有清热解毒、润喉利肺功效的藤本茶叶，分布在云南、广西、广东、江西、湖南、贵州、湖北、福建等海拨400～1300m的山地灌丛中、林中、石上、河边，尤其喜好在山间阴湿的环境中生长。其制茶工艺流程：显齿蛇葡萄鲜叶→清洗→脱除表面水→杀青→揉捻→解块→烘干→筛分整形→成品藤茶→商品茶(散装茶或袋泡茶)。制作原料应采摘鲜嫩叶，一般在4～8月份采摘。
据民间长期饮用实践和现代科学研究证实，藤茶具有清热润肺、平肝益血、消炎解毒、降压减脂、消除疲劳等功效，尤其对因烟酒过度、油腻过多、肝火过旺引起的身体不适如咽喉炎、消化功能障碍等症，具有独特功效，显齿蛇葡萄的主要活性成分二氢杨梅素，且在该植物幼嫩芽头部位含量最高，高纯二氢杨梅素为白色结晶粉末，但现有技术对于显齿蛇葡萄的提取，提取物的粉末颜色大多为棕色，未见有干燥后为鲜黄色或黄绿色的存在。
此外，对于显齿蛇葡萄的抑菌、抗氧化效果均有报道，但关于藤茶提取物对皮肤去面部疔疮(火气痘)、舒缓口腔牙龈肿痛及光损伤色斑修复功效没有报道。
发明内容
本发明首次提出了显齿蛇葡萄提取物具有抑菌和修护受损细胞的功效，可用于制备抑菌和修护产品。
为实现上述第一个目的，本发明采用的技术方案是：
显齿蛇葡萄提取物在制备抑菌和/或修护产品中的应用，所述显齿蛇葡萄提取物干燥后为黄色或黄绿色粉末；
所述显齿蛇葡萄提取物的制备方法，包括以下步骤：
按料液比1:10～100g/mL将显齿蛇葡萄样品溶于提取溶剂中，缓慢升温到维持微沸打浆30-90min，以超声功率300W，频率40kHz超声45～60min，过滤并干燥后得(鲜)黄色或黄绿色粉末状显齿蛇葡萄提取物，更优选的，所述提取溶剂为水或乙醇水溶液，所述乙醇水溶液的体积浓度为50～90％。
优选的，所述显齿蛇葡萄提取物可抑制的细菌包括丙酸痤疮杆菌、中间普氏菌和牙龈卟啉单胞菌。
优选的，所述显齿蛇葡萄提取物对HaCaT细胞增殖具有促进的作用。
优选的，所述干燥为冷冻干燥或真空干燥，温度为-75～85℃，时间为0.5～2.5d。
优选的，所述显齿蛇葡萄样品包括显齿蛇葡萄嫩茎叶。
优选的，所述显齿蛇葡萄样品润湿状态下打碎至10-150μm。
优选的，所述抑菌产品包括抑菌药物和化妆品；所述修护产品包括口腔用品和护肤品。
优选的，所述显齿蛇葡萄提取物体外活性测试有效浓度为0.32-50μg/ml。
优选的，所述显齿蛇葡萄提取物临床人体有效浓度为5-2000mg/ml。
本发明相对于现有技术，有以下优点：
目前，显齿蛇葡萄的药用价值主要体现在抑菌以及抗氧化效果方面，本发明发现显齿蛇葡萄提取物具有去面部痤疮、舒缓口腔牙龈肿痛及光损伤色斑修复功效，即对于丙酸痤疮杆菌、中间普氏菌和牙龈卟啉单胞菌尤其有效，且对于HaCaT细胞的增殖具有促进的作用，在未来抗菌产品、舒缓修护产品以及口腔用品的发展研究中具有重大的潜能，此外，本发明使用显齿蛇葡萄嫩茎叶制备显齿蛇葡萄提取物，实现了显齿蛇葡萄资源的充分利用。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1a为本申请提取物对于引发IL-8和IL-6的释放的有无痤疮杆菌的对比示意图；
图1b为本申请提取物的浓度与IL-8的释放的对比示意图；
图1c为本申请提取物随作用时间的IL-8的释放变化示意图；
图2为本申请提取物MIC最低抑菌浓度与常规提取物的对比图；
图3a为HaCaT细胞存活率随光照强度变化的示意图；
图3b为不同浓度的本申请提取物对HaCaT的增殖变化示意图。
具体实施方式
下面结合具体实施例说明本发明的具体技术方案：
实施例1：显齿蛇葡萄提取物的制备
按料液比1:10～100g/mL将显齿蛇葡萄样品溶于水中，缓慢升温到维持微沸打浆30-90min，更换提取溶剂打浆2次，以超声功率300W，频率40kHz超声45～60min，过滤并冷冻干燥后得鲜黄色或黄绿色粉末状显齿蛇葡萄提取物；
所述微沸打浆的条件如下：提取溶剂润湿状态下在6-8叶刀片及电机最大转数35000rpm/min。
实施例2：藤茶提取物对丙酸痤疮杆菌诱导人类SZ95皮脂细胞释放因子抑制作用的实验
a)采用实施例1的制备方法制得藤茶提取物。
b)无细胞的丙酸痤疮杆菌提取液制备：丙酸痤疮杆菌在冰中超声，离心，在0.22μm的过滤头过滤即得。
将实施例1所制备的藤茶提取液按浓度为3.2μg/mL、16μg/mL、32μg/mL分别加入到含有100μg/ml的丙酸痤疮杆菌细胞提取液的人永生化皮脂细胞(SZ95)中作为实验组以及未含有丙酸痤疮杆菌细胞提取液的人永生化皮脂细胞(SZ95)中作为正常组，与SZ95皮脂细胞一起培养24h，收取加入藤茶提取物和未加入藤茶提取物的SZ95皮脂细胞进行研究。
c)应用酶联免疫吸附法试剂盒ELISA kit来定量测定细胞培养基中的IL-6和IL-8的释放(炎症因子IL-6和IL-8含量越高，痤疮杆菌引起的炎症越严重)，丙酸痤疮杆菌处理组为阴性对照，异维A酸被用来当做阳性对照，从而评估不同浓度的藤茶提取物对火气痘的抑制作用。数据mean±SD(n＝3)表示，采用Student’st-test进行统计。与对照组进行比较，*p<0.05，***p<0.001。
结果如图1a所示：无细胞的丙酸痤疮杆菌提取液都能引起IL-8和IL-6的释放，也都能被藤茶提取物(32μg/ml)抑制；图1b中其抑制能力和藤茶提取物的浓度呈相关性及图1c中为藤茶提取物随作用时间的变化曲线图，只有藤茶提取物的时候(32μg/ml)不会影响皮脂细胞IL-8的正常释放
实施例3：藤茶提取物抑制中间普氏菌和牙龈卟啉单胞菌的实验
a)采用实施例1的制备方法制得藤茶提取物。
b)96孔的微孔盘用于测定最低抑菌浓度，每个孔里接种5*105CFU/mL细菌。
c)分别在生长培养基中连续稀释藤茶提取物。
d)对照只包含了生长培养基中无测试用藤茶提取物，血根碱为阳性对照。
e)培养基都在37℃，10％H2，5％ CO2和85％N2的厌氧培养室内培养。
f)用胰蛋白酶-酵母培养基添加半胱氨酸盐酸盐0.05％，维生素K3 0.02μg/mL，氯化血红素5μg/mL，硝酸钾0.02％作为中间普氏菌和牙龈卟啉单胞菌的培养基。
g)培养48小时后在650nm下用微孔板读板机测定吸光度。
h)最低抑菌浓度定义为在650nm下测试目标物极限浊度＜0.05吸光度。
结果如图2所示：藤茶提取物能抑制口腔致病菌-中间普氏菌和牙龈卟啉单胞菌；再结合其抑制IL-8和IL-6等炎性因子的释放从而具有抗过敏反应，在人体测试中有舒缓牙龈肿痛作用。
实施例4：藤茶提取物对HaCaT细胞增殖具有促进的作用测试
a)采用实施例1的制备方法制得藤茶提取物。
b)在550nm下根据吸光度测定细胞活度选定50mJ/cm2作为光线对皮肤细胞产生损伤适宜能量。
c)将所制备的藤茶提取物加入到人永生化表皮细胞(HaCaT)，再暴露在强能量光照后，与HaCaT皮肤细胞一起培养24小时，收取加入藤茶提取物和未加入藤茶提取物的HaCaT皮肤细胞进行研究。
d)应用MTT试验测试细胞存活率，与空白对照比较，从而评估藤茶提取物对光损皮肤细胞的修复增生作用。
结果如图3a所示：皮肤细胞HaCaT细胞存活率在强能量光照下逐渐降低；如图3b所示，藤茶提取物对于皮肤细胞HaCaT没有毒性，且在选定的50mJ/cm2光照能量下不同浓度的藤茶提取物对HaCaT皮肤细胞有光损色斑增生修复作用。
本发明相对于现有技术，有以下优点：
目前，显齿蛇葡萄的药用价值主要体现在抑菌以及抗氧化效果方面，根据上述实验以及实验结果证明，本发明发现显齿蛇葡萄提取物具有去面部痤疮、舒缓口腔牙龈肿痛及光损伤色斑修复功效，即对于丙酸痤疮杆菌、中间普氏菌和牙龈卟啉单胞菌尤其有效，且对于HaCaT细胞的增殖具有促进的作用，在未来抗菌产品、舒缓修护产品以及口腔用品的发展研究中具有重大的潜能，此外，本发明使用显齿蛇葡萄嫩茎叶制备显齿蛇葡萄提取物，实现了显齿蛇葡萄资源的充分利用。
以上所述仅为本申请的较佳实施例而已，并不用以限制本申请，凡在本申请的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。
Claims (9)
1.显齿蛇葡萄提取物在制备抑菌和/或修护产品中的应用，其特征在于：所述显齿蛇葡萄提取物干燥后为黄色或黄绿色粉末；
所述显齿蛇葡萄提取物的制备方法，包括以下步骤：
按料液比1:10～100g/mL将显齿蛇葡萄样品溶于提取溶剂中，缓慢升温到维持微沸打浆30-90min，以超声功率300W，频率40kHz超声45～60min，过滤，活性小分子浓缩富集并干燥后得(鲜)黄色或黄绿色粉末状显齿蛇葡萄提取物；所述提取溶剂为水或体积比50～90％的乙醇水溶液。
2.根据权利要求1所述的显齿蛇葡萄提取物在制备抑菌和/或修护产品中的应用，其特征在于：所述显齿蛇葡萄提取物可抑制的细菌包括丙酸痤疮杆菌、中间普氏菌和牙龈卟啉单胞菌。
3.根据权利要求1所述的显齿蛇葡萄提取物在制备抑菌和/或修护产品中的应用，其特征在于：所述显齿蛇葡萄提取物对HaCaT细胞增殖具有促进的作用。
4.根据权利要求1所述的显齿蛇葡萄提取物在制备抑菌和/或修护产品中的应用，其特征在于：所述干燥为冷冻干燥或真空干燥，温度为-75～85℃，时间为0.5～2.5d。
5.根据权利要求1所述的显齿蛇葡萄提取物在制备抑菌和/或修护产品中的应用，其特征在于：所述显齿蛇葡萄样品包括显齿蛇葡萄嫩茎叶。
6.根据权利要求1或5所述的显齿蛇葡萄提取物在制备抑菌和/或修护产品中的应用，其特征在于：所述显齿蛇葡萄样品润湿状态下打碎至10-150μm。
7.根据权利要求1所述的显齿蛇葡萄提取物在制备抑菌和/或修护产品中的应用，其特征在于：所述抑菌产品包括抑菌药物和化妆品；所述修护产品包括口腔用品和护肤品。
8.根据权利要求1所述的显齿蛇葡萄提取物在制备抑菌和/或修护产品中的应用，其特征在于：所述显齿蛇葡萄提取物体外活性测试有效浓度为0.32-50μg/ml。
9.根据权利要求1所述的显齿蛇葡萄提取物在制备抑菌和/或修护产品中的应用，其特征在于：所述显齿蛇葡萄提取物临床人体有效浓度为5-2000mg/ml。
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