CN116422002B - 一种芦荟提取物及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种芦荟提取物及其制备方法与应用，涉及植物提取与分离技术领域。本发明的芦荟提取物的制备方法，包括以下步骤：(1)将芦荟和离子液体混合均匀，置于85～95℃水浴中反应4～8h得到提取原液；(2)向提取原液中加入稀释剂，得稀释原液；(3)向稀释原液中加入磷酸钾至磷酸钾饱和，过滤取滤液；(4)向步骤(3)的滤液中加入盐酸调节pH至1.5～2，离心收集沉淀物，干燥得芦荟提取物。本发明的离子液体绿色环保，避免由于有机溶剂的挥发对环境造成污染、提高有效成分的提取效率、操作简单、具有良好的推广应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及一种芦荟提取物及其制备方法与应用，属于植物提取与分离技术领域。
背景技术
芦荟为百合目、百合科的多年生常绿肉质草本植物，又名库拉索芦荟、中华芦荟、油葱、洋芦荟、翠叶芦荟、美国芦荟等。芦荟原产于非洲热带干旱地区，分布几乎遍及世界各地。在印度和马来西亚一带、非洲大陆和热带地区都有野生芦荟分布。在中国福建、台湾、广东、广西、四川、云南等地有栽培，也有野生状态的芦荟存在。芦荟(即库拉索芦荟)是芦荟属中少数可食用的物种之一，其制品被广泛应用于食品、美容、保健、医药等领域。
芦荟作为一种集医药、美容、保健、食品及观赏为一体的纯天然绿色植物，芦荟的多种药用价值和治疗作用引起了医学界的广泛重视。从20世纪80年代开始，芦荟就已受到消费者的不断追捧，并迅速在全球范围内掀起了“芦荟”热潮。芦荟富含芦荟甙、多糖、有机酸、蛋白质等活性成分，具有护肤美容、防晒、抗衰老、抗炎、抗癌、增强机体免疫力、解毒保健及促进伤口愈合等功能，已广泛应用于化妆品、日用化工，享有“万能良药”、“天然美容师”之美称，是一种颇具开发利用价值的植物资源。因此芦荟在民间还拥有一个家喻户晓的名称－“植物医生”。芦荟与胃肠病芦荟的黄汁有消炎、杀菌、健胃、通便等作用，对急性胃炎的治疗效果显著。另外，因为芦荟丰富的粘液可以黏附在破损的溃疡面上，不仅可以赋活细胞组织再生，还可以使溃疡部位以及周围组织长出新的组织，所以，芦荟对治疗胃酸引起的胃溃疡也有很大帮助。芦荟与便秘研究证实，芦荟所含的蒽醌类化合物衍生物在肠管中释放出芦荟大黄素，能有效地刺激大肠蠕动，从而有效改善肠胃功能不佳、便秘等症状，并可排毒去火、补虚养颜。
长期以来，人们一直以芦荟胶的形式来制备芦荟活性成分。最初是采取割取芦荟叶片，收集叶汁，置于锅内熬成稠膏，再浸人容器，冷却凝固而得。然而此方法制备得到的芦荟胶较为粗糙，用锅煮加热的方法，会将天然活性成分多数分解。基于传统制取工艺，Cobble最先提出一种能够制取稳定透明芦荟胶的方法，即在制备过程中加入抗氧化剂、防腐剂，在芦荟胶的提取质量上有所改进，但该提取方法提取得到的芦荟胶会引起皮肤过敏现象，且加热和氧化等过程，但加热会加速有效成分的降解，而氧化则可能导致有效成分的氧化。此外，对芦荟有效成分的提取还有酸提取法、碱提取法和酶提取法。随着科技的发展，衍生出其他新的提取方法。
离子液体(ILs)是指完全由阴离子和阳离子组成、在100℃以下呈液态的盐类化合物。与常规的离子型化合物相比，离子液体常兼具偶极、氢键、范德华力等多种作用力，并且氢键碱性一般较强，作为分离溶剂有获得优异的分子选择性的潜质。与传统的有机溶剂相比，离子液体具有一系列突出的优点：几乎无蒸气压，不会造成环境污染且可用于低压条件，因此被称为“绿色溶剂”；不可燃，热稳定性和化学稳定性高；液体状态温度范围宽；还可通过阴阳离子的设计调控其极性及亲水性进而调节对有机化合物、无机化合物及聚合物的溶解性，因而又被称为“可设计性”溶剂；由于离子液体的这些特殊性质，离子液体作为绿色溶剂和功能材料受到人们的广泛关注，目前已有离子液体用于植物提取领域的报道，展现了广阔的应用前景。目前为止，鲜有采用离子液体对芦荟有效成分进行提取的相关报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种芦荟提取物及其制备方法与应用，本发明采用离子液体提取芦荟中的芦荟甙和芦荟黄酮类(槲皮素，芦丁)等活性成分，该方法绿色环保、特异性高、提取效率高、操作简单，提取得到的芦荟提取物具有很好的美白保湿和抗氧化作用。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种芦荟提取物的制备方法，包括以下步骤：(1)将芦荟和离子液体混合均匀，置于85～95℃水浴中反应4～8h得到提取原液；(2)向提取原液中加入稀释剂，得稀释原液；(3)向稀释原液中加入磷酸钾至磷酸钾饱和，过滤取滤液；(4)向步骤(3)的滤液中加入盐酸调节pH至1.5～2，离心收集沉淀物，干燥得芦荟提取物。
芦荟富含芦荟甙、多糖、有机酸、蛋白质等活性成分，具有护肤美容、防晒、抗衰老、抗炎等功效。传统的芦荟提取物的提取方法提取率低，提取物杂质较多，提取物的功效作用较差，且提取剂多为有机溶剂，还存在由于有机溶剂残留使提取物的应用受到限制，对环境造成污染等问题。本发明采用离子液体对芦荟进行提取。离子液体作为一种新型的萃取剂，由于离子液体的结构特质，对芦荟中的芦荟苷和黄酮类化合物有较高的选择性溶解能力，可以高效的提取芦荟中的芦荟甙和芦荟黄酮类(槲皮素，芦丁)。由于离子液体中的阴离子与芦荟甙和芦荟黄酮分子上的H连接，从成较强的分子间相互作用；阳离子与芦荟甙和芦荟黄酮分子上的O结合，从成较强的分子间氢键。这一过程破坏了芦荟中的芦荟甙和芦荟黄酮分子原有的分子间相互作用，从而溶解了芦荟中的芦荟甙和芦荟黄酮。因此，本发明的离子液体提取芦荟的方法具有提取率高、特异性高、操作简单且绿色环保的优点。
作为本发明所述芦荟提取物的制备方法的优选实施方式，所述离子液体由生物碱和氨基酸组成。离子液体是指在室温或接近室温下呈现液态的、完全由阴阳离子所组成的盐。离子液体种类繁多，改变阳离子、阴离子的不同组合，可以设计合成出不同的离子液体，不同的类型的离子液体可以发生不同的反应，对于相同的提取底物，采用不同的离子液体进行提取，其提取效率和提取物的功效作用不相同。本申请发明人经过大量的实验发现，采用生物碱和氨基酸组成离子液体对芦荟进行提取，其提取效率高、提取物的纯度高。
作为本发明所述芦荟提取物的制备方法的优选实施方式，所述生物碱为氧化苦参碱；所述氨基酸为赖氨酸。氧化苦参碱是从苦参根中提取的喹唑啉生物碱，具有抗肿瘤、抗菌、抗寄生虫、抗炎、消肿利尿和减轻环磷酰胺引起的白细胞减少等作用。本申请发明人经过大量的实验筛选和验证，发现采用氧化苦参碱制备得到的离子液体对芦荟进行提取，其提取效率更高。赖氨酸(Lysine)的化学名称为2,6-二氨基己酸，为必需氨基酸。赖氨酸在促进人体生长发育、增强机体免疫力、抗病毒、促进脂肪氧化、缓解焦虑情绪等方面都具有积极的营养学意义。本申请发明人经过大量的实验筛选和验证，发现采用赖氨酸制备得到的离子液体对芦荟进行提取，其提取效率更高。
作为本发明所述芦荟提取物的制备方法的优选实施方式，所述氧化苦参碱与赖氨酸的重量比为氧化苦参碱：赖氨酸＝1：2～4。本申请发明人研究发现，采用氧化苦参碱和赖氨酸制备离子液体对芦荟进行提取，并通过限定氧化苦参碱与赖氨酸的重量份数比，能够高效地从芦荟中提取芦荟甙和芦荟黄酮类等活性成分，且该离子液体绿色环保，不会造成环境污染。
作为本发明所述芦荟提取物的制备方法的优选实施方式，所述氧化苦参碱与赖氨酸的重量比为氧化苦参碱：赖氨酸＝1：2.5～3.5。本申请发明人研究发现，氧化苦参碱与赖氨酸的重量份数比在该范围内，离子液体的粘度适中，有利于对芦荟进行提取。
作为本发明所述芦荟提取物的制备方法的优选实施方式，所述离子液体提取剂的制备方法包括以下步骤：(1)称取氧化苦参碱与赖氨酸溶于水中，并置于75～85℃的水浴中反应5～7h，得离子液体水溶液；(2)将离子液体水溶液去除水分，得离子液体粗产物；(3)向离子液体粗产物中加入清洗液清洗3～4次，旋蒸得所述离子液体。
作为本发明所述芦荟提取物的制备方法的优选实施方式，所述步骤(2)中的去除水分具体为将离子液体水溶液置于70～75℃旋蒸1～2h；所述步骤(3)中的清洗液由乙腈和甲醇组成，其中乙腈和甲醇的体积比为乙腈：甲醇＝9：1。
作为本发明所述芦荟提取物的制备方法的优选实施方式，所述芦荟和离子液体的重量份数比为芦荟：离子液体提取剂＝1：10～20。
作为本发明所述芦荟提取物的制备方法的优选实施方式，所述步骤(2)中的稀释剂的加入量与离子液体提取剂的质量比为稀释剂：离子液体＝50：1。
作为本发明所述芦荟提取物的制备方法的优选实施方式，所述稀释剂由丙酮和水组成；所述稀释剂中丙酮和水的质量比为1：1。
本发明还提供一种芦荟提取物，所述芦荟提取物采用所述的芦荟提取物的制备方法制备得到。
本发明还提供一种护肤品，所述护肤品包括所述的芦荟提取物。
作为本发明所述的护肤品的优选实施方式，按所述护肤品计，所述芦荟提取物的质量百分比为5～20％。本申请发明人经过大量的实验发现，芦荟提取物的功效与其添加量相关，当护肤品中芦荟提取物的质量百分比为5～20％时，其美白、保湿、抗氧化功效较好。
作为本发明所述的护肤品的优选实施方式，按所述护肤品计，所述芦荟提取物的质量百分比为10％。本申请发明人经过大量的实验发现，当护肤品中芦荟提取物的质量百分比为10％时，其美白、保湿、抗氧化功效最佳。
本发明还提供所述的芦荟提取物在制备具有美白抗氧化功效的护肤品中的应用。
作为本发明所述的应用的优选实施方式，所述护肤品包括面霜、眼霜、爽肤水或精华液。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明提供了一种芦荟提取物及其制备方法与应用，该方法采用一定比例的氧化苦参碱和赖氨酸作为离子液体对芦荟进行提取。与现有的采用有机溶剂进行提取的方法相比，本发明的离子液体绿色环保，避免由于有机溶剂的挥发对环境造成污染，同时也避免有机溶剂的残留使芦荟提取物的应用受到限制；本发明的离子液体提取芦荟的方法操作简单、离子液体可以循环使用，具有良好的推广应用前景。
附图说明
图1为采用斑马鱼胚胎对实施例1制备的芦荟提取物进行舒缓功效评价结果图。
具体实施方式
为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。
下述实施例和对比例中所用的芦荟粉为市售购买。
实施例1
本发明实施例的一种芦荟提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)称取重量份数比为芦荟粉：离子液体＝1：15的芦荟粉和离子液体，混合均匀，置于90℃水浴中反应6h得到提取原液；
(2)按照稀释剂与离子液体的质量比为50：1向提取原液中加入稀释剂，得稀释原液；
(3)向稀释原液中加入过量的磷酸钾，搅拌至磷酸钾不再溶解，过滤取滤液；
(4)向步骤(3)的滤液中加入盐酸调节pH至1.5～2，离心收集沉淀物，烘干得芦荟提取物。
本实施例的离子液体包括以下重量份的组分：1份氧化苦参碱、3份赖氨酸。
本实施例的离子液体的制备方法为：
(1)取氧化苦参碱与赖氨酸溶于水中，并置于80℃的水浴中反应6h，得离子液体水溶液；
(2)将离子液体水溶液置于75℃旋蒸1～2h去除水分，得离子液体粗产物；
(3)向离子液体粗产物中加入用1～2倍体积的清洗液清洗3～4次，旋蒸得所述离子液体；
所述清洗液由于体积比为9:1的乙腈和甲醇组成。
实施例2
本发明实施例与实施例1的区别仅在于离子液体的组分含量不同。本实施例中离子液体包括以下重量份的组分：1份氧化苦参碱、2份赖氨酸。
实施例3
本发明实施例与实施例1的区别仅在于离子液体的组分含量不同。本实施例中离子液体包括以下重量份的组分：1份氧化苦参碱、4份赖氨酸。
实施例4
本发明实施例与实施例1的区别仅在于离子液体的组分含量不同。本实施例中离子液体包括以下重量份的组分：1份氧化苦参碱、2.5份赖氨酸。
实施例5
本发明实施例与实施例1的区别仅在于离子液体的组分含量不同。本实施例中离子液体包括以下重量份的组分：1份氧化苦参碱、3.5份赖氨酸。
实施例6
本发明实施例与实施例1的区别仅在于芦荟粉和离子液体的重量份数比不同，本实施例中芦荟粉和离子液体的重量份数比为1：10。
实施例7
本发明实施例与实施例1的区别仅在于芦荟粉和离子液体的重量份数比不同，本实施例中芦荟粉和离子液体的重量份数比为1：20。
对比例1
本对比例与与实施例1的区别仅在于离子液体的组分含量不同。本实施例中离子液体包括以下重量份的组分：1份氧化苦参碱、1份赖氨酸。
对比例2
本对比例与与实施例1的区别仅在于离子液体的组分含量不同。本实施例中离子液体包括以下重量份的组分：1份茶碱、1份精氨酸。
对比例3
本对比例与与实施例1的区别仅在于离子液体的组分含量不同。本实施例中离子液体包括以下重量份的组分：1份茶碱、1份赖氨酸。
对比例4
本对比例与与实施例1的区别仅在于离子液体的组分含量不同。本实施例中离子液体包括以下重量份的组分：1份茶碱、1份丙氨酸。
对比例5
本对比例与与实施例1的区别仅在于离子液体的组分含量不同。本实施例中离子液体包括以下重量份的组分：1份茶碱、1份甘氨酸。
对比例6
本对比例与与实施例1的区别仅在于离子液体的组分含量不同。本实施例中离子液体包括以下重量份的组分：1份氧化苦参碱、3份丙氨酸。
对比例7
本对比例与与实施例1的区别仅在于离子液体的组分含量不同。本实施例中离子液体包括以下重量份的组分：1份氧化苦参碱、3份甘氨酸。
对比例8
本对比例与与实施例1的区别仅在于离子液体的组分含量不同。本实施例中离子液体包括以下重量份的组分：1份茶碱、3份赖氨酸。
对比例9
本对比例与与实施例1的区别仅在于离子液体的组分含量不同。本实施例中离子液体包括以下重量份的组分：1份氧化苦参碱、1份精氨酸。
对比例10
本对比例与与实施例1的区别仅在于离子液体的组分含量不同。本实施例中离子液体包括以下重量份的组分：1份氧化苦参碱、2份精氨酸。
对比例11
本对比例与与实施例1的区别仅在于离子液体的组分含量不同。本实施例中离子液体包括以下重量份的组分：1份氧化苦参碱、3份精氨酸。
对比例12
本对比例与与实施例1的区别仅在于离子液体的组分含量不同。本实施例中离子液体包括以下重量份的组分：1份氧化苦参碱、4份精氨酸。
效果例
1、采用离子液体对芦荟进行提取，离子液体的分散性和流动性关乎提取工艺能否顺利进行。本效果例采用粘度评价实施例1～7、对比例1～12的离子液体的分散性和流动性。结果如表1所示。
表1
由表1可以看出，不同种类的碱和氨基酸并非都能形成离子液体对芦荟进行提取，本申请发明人经过大量的实验发现，氧化苦参碱和赖氨酸组成的离子液体能够对芦荟进行提取，且该离子液体具有较好的分散性和流动性。
2、测定实施例1～7制备得到的芦荟提取物的收率，结果如表2所示。
表2
| 组别 | 收率(％) |
| 实施例1 | 11.2％ |
| 实施例2 | 7.1％ |
| 实施例3 | 8.87％ |
| 实施例4 | 6.05％ |
| 实施例5 | 8.96％ |
| 实施例6 | 8.12％ |
| 实施例7 | 11.07％ |
由表2可以看出，离子液体中的氧化苦参碱和赖氨酸的比例、离子液体与芦荟的比例对最终制备得到的芦荟提取物的收率有很大的影响。当氧化苦参碱与赖氨酸的重量份数比为氧化苦参碱：赖氨酸为1：3时，制备得到的芦荟提取物的收率最高；当芦荟粉和离子液体的重量份数比为1:15时，制备得到的芦荟提取物的收率最高。
3、芦荟提取物的安全性评价
对上述实施例1～7制备得到的芦荟提取物进行化妆品刺激评价。
(1)受试人群为女性，70人，年龄16～65岁之间。受试者皮肤健康，无皮肤病过敏史，符合受试者志愿选入标准。随机分组，分为7组，每组10人。
测试方法为人体贴斑试验。选用合格的斑试器，将受试物约0.020-0.025g放置于斑试器内，将加有受试物的斑试器用无刺激胶带贴覆于受试者的背部或前臂屈侧，用手掌轻压使之均匀地贴覆在皮肤上，持续24h。去除受试斑试器后30min，待压痕消失后观察皮肤反应。如结果为阴性，于斑贴试验后24h和48h分别再观察一次。按照2007年《化妆品卫生规范》和2015年《化妆品安全技术规范》为参照标准，记录其结果。
评价标准：0级：阴性反应；1级：可疑反应，仅有微弱红斑；2级：弱阳性反应，红斑、浸润、水肿、可有丘疹；3级：强阳性反应，红斑、浸润、水肿、可有丘疹、反应可超出受试区；4级：极强阳性反应，明显红斑、严重浸润、水肿、融合性疱疹、反应超出受试区。
(2)人体皮肤贴斑实验结果显示：各组受试者通过实施例1～7制备得到的芦荟提取物的斑贴实验，在试验后24h和48h观察受试者的皮肤反应，所有受试者的皮肤反应均为阴性，说明实施例1～7制备得到的芦荟提取物使用安全。
4、芦荟提取物的DPPH自由基清除测试
DPPH自由基一种很稳定的氧中心的自由基，是样本抗氧化能力的重要指标之一，广泛应用于抗氧化类食品。保健品及药品的研究中。DPPH自由基有单电子，其醇溶液呈紫色，在515nm处有强吸收。当有抗氧化剂存在时，DPPH自由基被清除，其溶液颜色变浅，515nm的吸光度下降，在一定范围内其吸光度的变化与自由基被清除的程度成正比。通过吸光度下降的程度来反映样本清除DPPH自由基的能力。
DPPH自由基清除实验的具体实验步骤为：
(1)取实施例1～7制备得到的芦荟提取物溶于去离子水中，制成质量百分比为10％的芦荟提取物待测液，分别编号为试验组1～7；再取实施例1制备得到的芦荟提取物溶于去离子水中，分别制成质量百分比为5％、20％的芦荟提取物待测液，分别编号为试验组8、试验组9；
(2)参照表1，使用10mL试管设立样品管(T)、样品本底(T_0)、DPPH管(C)和溶剂本底(C_0)，每一样品的每个受试浓度的样品管(T)需设立三支平行管，同事DPPH管(C)也需设立三支平行管；
(3)在样品管(T)和样品本底(T_0)中各加入1mL相同浓度的样品溶液；
(4)在所有试管中(T、T_0、C、C_0)补充溶剂，T、T_0管加水，C、C_0加95％乙醇，补足3mL，混匀；
(5)在样品管(T)和DPPH管(C)中加入DPPH乙醇溶液1mL，样品本底(T_0)和溶剂本底(C_0)用95％乙醇代替，轻轻摇匀，室温下静置5分钟；
(6)将各支反应溶液移入1cm比色皿中，在517处测定吸光值。
DPPH自由基清除率：清除率(％)＝(1-(T-T_0)/(C-C_0))×100％
按DPPH自由基清除率测试方法分别测定上述各试验组的芦荟提取物待测液的DPPH自由基清除率。试验结果如表4所示。
表3
表4
5、芦荟提取物的酪氨酸酶活性抑制测试
黑色素的合成受酪氨酸酶影响，酪氨酸酶能够催化L-酪氨酸羟化成多巴，并把多巴氧化成多巴醌，多巴醌形成最终的反应产物黑色素。具有酪氨酸酶活性抑制作用的受试物可以减慢酪氨酸酶催化L-酪氨酸转化成多巴醌，通过测定475nm处多巴醌的吸光度，根据吸光度的变化来评估受试物对酪氨酸酶活性的抑制效果。
酪氨酸酶活性抑制实验的具体实验步骤为：
(1)取实施例1～7制备得到的芦荟提取物溶于去离子水中，制成质量百分比为10％的芦荟提取物待测，分别编号为试验组1～7；再取实施例1制备得到的芦荟提取物溶于去离子水中，分别制成质量百分比为5％、20％的芦荟提取物待测，分别编号为试验组8、试验组9；
(2)参照表5试剂添加量，在各孔依次加入L-酪氨酸溶液、样品溶液/溶剂、PBS缓冲液，充分混匀，置于37℃恒温环境下孵育10min后依次在各孔加入20μL的酪氨酸酶溶液，37℃混匀反应5min±5s后即刻放入酶标仪，在475nm波长处进行测定。
酪氨酸酶活性抑制率：Y＝(1-(A_d-A_c)/(A_b-A_a))×100％
式中：Y—酪氨酸酶活性抑制率；Ad—样品反应孔吸光度；Ac—样品本底孔吸光度；Ab—样品反应孔吸光度平均值；Aa—溶剂本底孔吸光度平均值。
按酪氨酸酶活性抑制率测试方法分别测定上述各试验组的芦荟提取物待测液的酪氨酸酶活性抑制率。试验结果如表6所示。
表5
| 试剂 | T_a | T_b | T_c | T_d |
| L-酪氨酸溶液/uL | 0 | 40 | 0 | 40 |
| 样品溶液/uL | 0 | 0 | 40 | 40 |
| 溶剂/uL | 40 | 40 | 0 | 0 |
| PBS缓冲液/uL | 70 | 30 | 70 | 30 |
| 酪氨酸酶溶液/uL | 20 | 20 | 20 | 20 |
表6
6、芦荟提取物的保湿性能测试
采用称重法测定芦荟提取物的保湿性能，具体实验方法如下：
(1)取实施例1～7制备得到的芦荟提取物溶于去离子水中，制成质量百分比为10％的芦荟提取物待测，分别编号为试验组1～7；再取实施例1制备得到的芦荟提取物溶于去离子水中，分别制成质量百分比为5％、20％的芦荟提取物待测，分别编号为试验组8、试验组9；阳性对照组为3％甘油水溶液；
(2)称取重量相等各组样品，置于恒重的玻璃器皿中，使其在玻璃器皿中可以平铺开，分别在不同时间段进行称量(24小时)，记录样品重量随时间的变化，样品重复测试3次。
保湿率计算公式：保湿率＝(M_2-M_0)/(M_1-M_0)×100％
式中：M_0为空板质量(g)；M_1为加样后玻璃板质量(g)；M_2为干燥器中放置若干小时后质量(g)。
测试结果如表7所示。
表7
7、芦荟提取物的舒缓功效测试
斑马鱼胚胎有极强的敏感性，可以通过经皮吸收或显微注射等方式，对包括药物、食品、化妆品等化合物的安全性进行评价。拟使用经皮吸收的方式进行给样，观察胚胎的自旋情况，以评价受试样品的舒缓情况。具体实验方法如下：选用AB系野生型斑马鱼受精后24小时(24hpf)胚胎。将斑马鱼分成空白组、模型组、阳性对照组和实验组。空白组不做处理，模型组用十二烷基磺酸钠造模、阳性对照组为甘草酸二钾，实验组使用实施例1制备的芦荟提取物稀释液(浓度分别为8.456mg/mL、4.228mg/mL、2.114mg/mL)，孵育一段时间后，进行视频录制，每空录制30s，录制结束后对斑马鱼胚胎自旋次数进行统计测试结果如表8及图1所示。
表8
模型组与空白对照组相比，模型组的斑马鱼胚胎自旋次数显著增加(P<0.05)，说明造模成功，阳性对照物给药后能缓解造模的刺激，有效减少胚胎自旋的次数。芦荟提取物的测试中发现在8.456mg/mL、4.228mg/mL、2.114mg/mL的稀释浓度下，相对于模型组，斑马鱼胚胎自旋的次数显著减少。综上所述，通过实验结果分析，在本实验条件下芦荟提取物具有舒缓功效。
最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (12)
1.一种芦荟提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将芦荟和离子液体混合均匀，置于85~95℃水浴中反应4~8h得到提取原液；
（2）向提取原液中加入稀释剂，得稀释原液；
（3）向稀释原液中加入磷酸钾至磷酸钾饱和，过滤取滤液；
（4）向步骤（3）的滤液中加入盐酸调节pH至1.5~2，离心收集沉淀物，干燥得芦荟提取物；
所述离子液体由氧化苦参碱和赖氨酸组成；
所述氧化苦参碱与赖氨酸的重量比为氧化苦参碱：赖氨酸=1：2~4；
所述离子液体的制备方法包括以下步骤：
a. 称取氧化苦参碱与赖氨酸溶于水中，并置于75~85℃的水浴中反应5~7h，得离子液体水溶液；
b. 将离子液体水溶液去除水分，得离子液体粗产物；
c. 向离子液体粗产物中加入清洗液清洗3~4次，旋蒸得所述离子液体。
2.根据权利要求1所述的芦荟提取物的制备方法，其特征在于，所述氧化苦参碱与赖氨酸的重量比为氧化苦参碱：赖氨酸=1：2.5~3.5。
3.根据权利要求1所述的芦荟提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤b中的去除水分具体为将离子液体水溶液置于70~75℃旋蒸1~2h；所述步骤c中的清洗液由乙腈和甲醇组成，其中乙腈和甲醇的体积比为乙腈：甲醇=9：1。
4.根据权利要求1所述的芦荟提取物的制备方法，其特征在于，所述芦荟和离子液体的重量比为芦荟：离子液体=1：10~20。
5.根据权利要求1所述的芦荟提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中的稀释剂与离子液体的质量比为稀释剂：离子液体=50：1。
6.根据权利要求1所述的芦荟提取物的制备方法，其特征在于，所述稀释剂由丙酮和水组成；所述稀释剂中丙酮和水的质量比为1：1。
7.一种芦荟提取物，其特征在于，所述芦荟提取物采用权利要求1~6任一项所述的芦荟提取物的制备方法制备得到。
8.一种护肤品，其特征在于，所述护肤品包括权利要求7所述的芦荟提取物。
9.根据权利要求8所述的护肤品，其特征在于，按所述护肤品计，所述芦荟提取物的质量百分比为5~20%。
10.根据权利要求9所述的护肤品，其特征在于，按所述护肤品计，所述芦荟提取物的质量百分比为10%。
11.根据权利要求7所述的芦荟提取物在制备具有美白抗氧化功效的护肤品中的应用。
12.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，所述护肤品为面霜、眼霜、爽肤水或精华液。
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