CN116768971B - 一种微生物发酵生产硫链丝菌素的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及微生物发酵技术领域，具体涉及一种微生物发酵生产硫链丝菌素的方法，所述方法包括远青链霉菌种子液发酵培养过程中进行补料培养，所述补料培养是当碳源耗尽时补充碳源并采用流加的方式补充营养液，营养液补料分三个阶段，第一阶段流加速率为0.5‑0.65mL/L/h，开始补料时间为碳源耗尽时；第二阶段流加速率为0.75‑0.9mL/L/h，开始补料时间为发酵周期在85‑146h范围内；第三阶段流加速率为0.5‑0.75mL/L/h，开始补料时间为发酵周期在135‑180h范围内，发酵总周期为180h‑190h。本发明具有适用于工业化生产、工艺简单、发酵周期短的优点。
Description
技术领域
本发明涉及微生物发酵技术领域，具体涉及一种微生物发酵生产硫链丝菌素的方法。
背景技术
硫肽类(thiopeptide)抗生素是一类富含硫元素并且被高度修饰的聚噻(噁)唑肽类天然产物，具有独特的核心氮杂六元环，以及噻唑(啉)或噁唑(啉)、脱水氨基酸残基等结构。根据核心氮杂六元环的取代方式及氧化程度的差异，可以将硫肽家族成员分为5个亚家族：a族哌啶类，如硫肽菌素(thiopeptin)；b族脱氢哌啶，如盐屋霉素(siomycin，SIO)；c族二氢咪唑哌啶类，如Sch40832；d族三取代吡啶类，如高硫青霉素(thiocillin)；e族羟化吡啶类，如诺斯菌素(nosiheptide，NOS)。根据骨架结构中环的个数，可以分为双环硫肽和单环硫肽(III型)；根据侧环前体的不同，双环硫肽还可以细分为包含甲基吲哚酸(4-methyl-2-indolyl acid,MIA)单元(I型)和包含喹萘啶酸(quinaldic acid,QA)单元(II型)两种情况。
硫链丝菌素(thiostrepton,TSR)具有独特的化学结构和良好的生物活性，首次发现于远青链霉菌(Streptomyces azureus)后，TSR相继从劳伦链霉菌(Streptomyceslaurentii)等其他土壤链霉菌中得到分离。从核心氮杂六元环的结构来说，TSR属于b族硫肽；从环的个数和侧环前体来说，TSR属于II型硫肽。
硫链丝菌素具有抗***和分枝杆菌的活性。硫链丝菌素已作为家畜饲料添加剂，在欧洲、澳洲和北美广泛用于牛、羊、马抗乳酸中毒症。而且硫链丝菌素是基因工程领域常用筛选标记。另外，近几年有研究表明，硫链丝菌素能抑制牙周组织中的炎症细胞水平，促进成纤维细胞生成，有助于牙周炎的治疗，且无厌食、影响生长的副作用。因此，硫链丝菌素具有广泛的应用前景。
但是，硫链丝菌素分子结构复杂，化学合成难度较大，因此主要采用微生物发酵合成。但是关于微生物发酵生产硫链丝菌素的研究甚少，且目前的发酵工艺均不适合大工业生产。
因此，开发一种能解决上述技术问题的微生物发酵生产硫链丝菌素的方法是非常必要的。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足而提供一种适用于工业化生产、工艺简单、发酵周期短的微生物发酵生产硫链丝菌素的方法。
本发明是通过以下技术方案予以实现的：
一种微生物发酵生产硫链丝菌素的方法，包括如下步骤：
(1)将远青链霉菌接种于种子培养基A中培养，得到包含远青链霉菌的菌种液；
(2)将包含远青链霉菌的菌种液接种于种子罐中培养，得到种子液；
(3)将种子液进行发酵培养，其中发酵培养包括补料培养，所述补料培养是当碳源耗尽时补充碳源并采用流加的方式补充营养液，营养液补料分三个阶段，第一阶段流加速率为0.5-0.65mL/L/h，开始补料时间为碳源耗尽时；第二阶段流加速率为0.75-0.9mL/L/h，开始补料时间为发酵周期在85-146h范围内；第三阶段流加速率为0.5-0.75mL/L/h，开始补料时间为发酵周期在135-180h范围内，发酵总周期为180h-190h。
发酵总周期：从步骤(3)中种子液进行发酵培养开始时作为发酵起点，第三阶段补料结束作为发酵终点。
从步骤(3)中种子液开始进行发酵培养时作为发酵零点，发酵培养至碳源耗尽时进行第一次补料，流加速率为0.5-0.65mL/L/h；发酵培养至85-146h，第一次补料结束，开始进行第二次补料，流加速率为0.75-0.9mL/L/h；发酵培养至135-180h，第二次补料结束，开始进行第三次补料，流加速率为0.5-0.75mL/L/h；发酵培养至180h-190h，第三次补料结束。
一般发酵进行至60-96h碳源耗尽。
优选地，步骤(1)中远青链霉菌以甘油管种子液的形式进行接种，接种量为2-4％(按照体积百分比计)，培养方式为摇瓶培养，转速200-250rpm，25-30℃摇瓶培养25-35h。
优选地，步骤(1)中菌种液的菌浓(按照体积百分比计)为15-25％。
本发明的“接种量”均按照体积百分比进行计算。
优选地，步骤(1)中种子培养基A组成包括：葡萄糖1.5-2.5％(按照质量百分比计)，豆粕粉12-18g/L，玉米浆18-22g/L，酵母浸粉1.5-2.5g/L，磷酸二氢钾1.5-2.5g/L，硫酸铵0.8-1.2g/L，硫酸钙1.5-2.5g/L，七水硫酸镁0.2-0.6g/L，七水硫酸亚铁0.1-0.3g/L和微量元素液1-3mL/L。
优选地，步骤(2)中所述种子罐中添加种子培养基B，组成为：葡萄糖1.5-2.5％(按照质量百分比计)，豆粕粉18-22g/L，玉米浆27-33g/L，酵母浸粉1.5-2.5g/L，磷酸二氢钾1.5-2.5g/L，硫酸铵0.8-1.2g/L，硫酸钙1.5-2.5g/L，七水硫酸镁0.2-0.6g/L，七水硫酸亚铁0.1-0.3g/L，微量元素液1-3mL/L和消泡剂0.5-1.0g/L。
更优选地，步骤(2)中接种量为0.2-0.6％(按照包含远青链霉菌的菌种液占种子培养基B的体积百分比计)，种子罐初始搅拌速率为150-250rpm，通气比为0.8-1.2vvm，培养温度为25-27℃，压力0.03-0.07MPa，溶氧控制20％-40％，溶氧与搅拌关联，培养40-50h。
优选地，步骤(3)中发酵培养采用发酵培养基，组成为：葡萄糖4-8％(按照质量百分比计)，豆粕粉18-22g/L，玉米浆27-33g/L，酵母浸粉1.5-2.5g/L，磷酸二氢钠1.5-2.5g/L，硫酸铵0.8-1.2g/L，硫酸钙1.5-2.5g/L，七水硫酸镁0.2-0.6g/L，七水硫酸亚铁0.1-0.3g/L，微量元素液2-6mL/L和消泡剂0.5-1.0g/L。
优选地，步骤(3)中所述营养液组成为：豆粕水解液160-180g/L，玉米浆120-180g/L，磷酸二氢钾6-10g/L，硫酸钠15-20g/L和微量元素液6-10mL/L。
更优选地，所述微量元素液组成为：4-6g/L六水氯化钴，0.5-1.5g/L七水硫酸锌，0.5-1.5g/L二水硫酸铜，0.3-0.7g/L硼酸和0.3-0.7g/L钼酸钠。
优选地，步骤(3)补料培养过程中，控制碳源(葡萄糖)浓度在0.2-1.0％(按照质量百分比计)，pH在6.8。
优选地，步骤(3)中发酵移种量8-12％(按照种子液占发酵培养基的体积百分比计)，初始搅拌速率为150-250rpm，通气比为0.8-1.2vvm，培养温度为25-27℃，压力0.03-0.07MPa，控制溶氧15％-40％，溶氧与搅拌关联。
本发明的有益效果是：
本发明优化了发酵补料工艺，用豆粕水解液替代豆粕粉补料，避免了豆粕粉补料容易沉积在管路中，更易于工业化生产，且营养液采用梯度流加，前期采用低流速，逐渐递增再后期递减的补料方式。通过改进，硫链丝菌肽效价能稳定在2.30g/L以上，达到了工业化水平，本发明的发酵工艺简单，成本较低，进行工业化生产仍然具有较高的效价。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
下述各实施例中微量元素液组成为：5g/L六水氯化钴，1g/L七水硫酸锌，1g/L二水硫酸铜，0.5g/L硼酸，0.5g/L钼酸钠。
消泡剂采用消泡剂THIX-298。
甘油管种子液为远青链霉菌(Streptomyces azureus)甘油管种子液，菌种从美国菌种保藏中心(ATCC)购买,保藏号为ATCC14921。具体制备工艺如下：加20mL无菌水到已长好的茄子瓶斜面，洗下菌丝体后，吸1mL菌悬液到装有25mL种子培养基的250mL的三角烧瓶中，在28℃，220rpm摇床培养48小时。分别吸0.8mL种子液到装有已灭过菌的0.8mL的40％甘油溶液的冻存管中，存放于-20℃的冰箱中备用。种子培养基为：葡萄糖2％，豆粕粉15g/L，玉米浆20g/L，酵母浸粉2g/L，磷酸二氢钾2g/L，硫酸铵1.0g/L，硫酸钙2.0g/L，七水硫酸镁0.4g/L，七水硫酸亚铁0.2g/L，微量元素液2mL/L。
实施例1
1)菌种培养
将1mL甘油管种子液接入25mL无菌摇瓶种子培养基中，种子培养基为：葡萄糖2％，豆粕粉15g/L，玉米浆20g/L，酵母浸粉2g/L，磷酸二氢钾2g/L，硫酸铵1.0g/L，硫酸钙2.0g/L，七水硫酸镁0.4g/L，七水硫酸亚铁0.2g/L，微量元素液2mL/L。摇瓶种子在220rpm，27℃摇床培养30h，得到菌种液，菌体浓度18％。
2)种子培养
种子培养基为：葡萄糖2％，豆粕粉20g/L，玉米浆30g/L，酵母浸粉2g/L，磷酸二氢钾2g/L，硫酸铵1.0g/L，硫酸钙2.0g/L，七水硫酸镁0.4g/L，七水硫酸亚铁0.2g/L，微量元素液2mL/L，消泡剂0.8g/L。按10L体积依次称好，用一定体积饮用水溶解混匀，倒入种子罐中，定容8L，用氢氧化钠将pH调至7.0，高温高压蒸汽灭菌，0.11-0.13MPa，121-123℃，保温30min，冷却至26℃，此时培养基体积为10L。将25mL步骤1)得到的菌种液移至种子罐，种子罐初始搅拌为200rpm，通气比为0.8vvm，培养温度为26℃，压力0.05MPa，溶氧控制20-40％，溶氧与搅拌关联，培养42h，得到种子液，菌体浓度20％。
3)发酵培养
发酵培养基为：葡萄糖6％，豆粕粉20g/L，玉米浆30g/L，酵母浸粉2g/L，磷酸二氢钠2g/L，硫酸铵1.0g/L，硫酸钙2.0g/L，七水硫酸镁0.4g/L，七水硫酸亚铁0.2g/L，微量元素液4mL/L，消泡剂0.8g/L。按25L体积依次称好，用一定体积饮用水溶解混匀，倒入罐中，定容18L，用氢氧化钠将pH调至7.0，高温高压蒸汽灭菌，0.11-0.13MPa，121-123℃，保温30min，冷却至26℃。发酵移种量10％，初始搅拌为200rpm，通气比为0.8vvm，培养温度为26℃，压力0.05MPa，溶氧控制15-40％，溶氧与搅拌关联。
4)补料方法
葡萄糖溶液：配制70％(w/v)葡萄糖水溶液8L，121℃灭菌20min，待用。
营养液：豆粕水解液(购自山东玉宝生物科技股份有限公司)500g，玉米浆450g，酵母浸粉250g，磷酸二氢钾25g，硫酸钠50g，微量元素液25mL，加适量饮用水至总体积3L，121℃灭菌30min，待用。
氨水：25％氨水溶液3L。
当发酵培养至63h，葡萄糖耗完，pH开始回升，开始补葡萄糖溶液，用补糖泵控制流速，用测糖仪测发酵液含糖量，全程控制葡萄糖浓度在0.3％。用氨水控制发酵液pH在6.8，同时流加营养液(共三次补料)，发酵培养至葡萄糖耗尽时进行第一次补料，流加速率为0.5mL/L/h；发酵培养至85h，第一次补料结束，开始进行第二次补料，流加速率为0.75mL/L/h；发酵培养至135h，第二次补料结束，开始进行第三次补料，流加速率为0.5mL/L/h；发酵培养至180h，第三次补料结束。放罐，产物发酵单位3.16g/L。
实施例2
1)菌种培养
将1mL甘油管种子液接入25mL无菌摇瓶种子培养基中，种子培养基为：葡萄糖2％，豆粕粉15g/L，玉米浆20g/L，酵母浸粉2g/L，磷酸二氢钾2g/L，硫酸铵1.0g/L，硫酸钙2.0g/L，七水硫酸镁0.4g/L，七水硫酸亚铁0.2g/L，微量元素液2mL/L。摇瓶种子在220rpm，27℃摇床培养38h，得到菌种液，菌体浓度21％。
2)种子培养
种子培养基为：葡萄糖2％，豆粕粉20g/L，玉米浆30g/L，酵母浸粉2g/L，磷酸二氢钾2g/L，硫酸铵1.0g/L，硫酸钙2.0g/L，七水硫酸镁0.4g/L，七水硫酸亚铁0.2g/L，微量元素液2mL/L，消泡剂0.8g/L。按10L体积依次称好，用一定体积饮用水溶解混匀，倒入种子罐中，定容8L，用氢氧化钠将pH调至7.0，高温高压蒸汽灭菌，0.11-0.13MPa，121-123℃，保温30min，冷却至26℃，此时培养基体积为10L。将25mL步骤1)得到的菌种液移至种子罐，种子罐初始搅拌为200rpm，通气比为1.0vvm，培养温度为26℃，压力0.05MPa，溶氧控制20％-40％，溶氧与搅拌关联，培养45h，得到种子液，菌体浓度22％。
3)发酵培养
发酵培养基为：葡萄糖6％，豆粕粉20g/L，玉米浆30g/L，酵母浸粉2g/L，磷酸二氢钠2g/L，硫酸铵1.0g/L，硫酸钙2.0g/L，七水硫酸镁0.4g/L，七水硫酸亚铁0.2g/L，微量元素液4mL/L，消泡剂0.8g/L。按25L体积依次称好，用一定体积饮用水溶解混匀，倒入罐中，定容18L，用氢氧化钠将pH调至7.0，高温高压蒸汽灭菌，0.11-0.13MPa，121-123℃，保温30min，冷却至26℃。发酵移种量10％，初始搅拌为200rpm，通气比为1.2vvm，培养温度为26℃，压力0.05MPa，溶氧控制15％-40％，溶氧与搅拌关联。
4)补料方法
葡萄糖溶液：配制70％(w/v)葡萄糖水溶液8L，121℃灭菌20min，待用。
营养液：豆粕水解液(购自山东玉宝生物科技股份有限公司)500g，玉米浆450g，磷酸二氢钾25g，硫酸钠50g，微量元素液25mL，加适量饮用水至总体积3L，121℃灭菌30min，待用。
氨水：25％氨水溶液3L
当发酵培养至60h，葡萄糖耗完，pH开始回升，开始补葡萄糖溶液，用补糖泵控制流速，用测糖仪测发酵液含糖量，全程控制葡萄糖浓度在0.5％。用氨水控制发酵液pH在6.8，同时流加营养液(共三次补料)。发酵培养至葡萄糖耗尽时进行第一次补料，流加速率为0.65mL/L/h；发酵培养至146h，第一次补料结束，开始进行第二次补料，流加速率为0.9mL/L/h；发酵培养至170h，第二次补料结束，开始进行第三次补料，流加速率为0.75mL/L/h；发酵培养至185h，第三次补料结束。放罐，产物发酵单位3.21g/L。
实施例3
1)菌种培养
将1mL甘油管种子液接入25mL无菌摇瓶种子培养基中，种子培养基为：葡萄糖2％，豆粕粉15g/L，玉米浆20g/L，酵母浸粉2g/L，磷酸二氢钾2g/L，硫酸铵1.0g/L，硫酸钙2.0g/L，七水硫酸镁0.4g/L，七水硫酸亚铁0.2g/L，微量元素液2mL/L。摇瓶种子在220rpm，27℃摇床培养40h，得到菌种液，菌体浓度22％。
2)种子培养
种子培养基为：葡萄糖2％，豆粕粉20g/L，玉米浆30g/L，酵母浸粉2g/L，磷酸二氢钾2g/L，硫酸铵1.0g/L，硫酸钙2.0g/L，七水硫酸镁0.4g/L，七水硫酸亚铁0.2g/L，微量元素液2mL/L，消泡剂0.8g/L。按10L体积依次称好，用一定体积饮用水溶解混匀，倒入种子罐中，定容8L，用氢氧化钠将pH调至7.0，高温高压蒸汽灭菌，0.12MPa，122℃，保温30min，冷却至26℃，此时培养基体积为10L。将25mL步骤1)得到的菌种液移至种子罐，种子罐初始搅拌为200rpm，通气比为1.0vvm，培养温度为26℃，压力0.05MPa，溶氧控制20％-40％，溶氧与搅拌关联，培养43h，得到种子液，菌体浓度20％。
3)发酵培养
发酵培养基为：葡萄糖6％，豆粕粉20g/L，玉米浆30g/L，酵母浸粉2g/L，磷酸二氢钠2g/L，硫酸铵1.0g/L，硫酸钙2.0g/L，七水硫酸镁0.4g/L，七水硫酸亚铁0.2g/L，微量元素液，消泡剂0.8g/L。按25L体积依次称好，用一定体积饮用水溶解混匀，倒入罐中，定容18L，用氢氧化钠将pH调至7.0，高温高压蒸汽灭菌，0.11-0.13MPa，121-123℃，保温30min，冷却至26℃。发酵移种量10％，初始搅拌为200rpm，通气比为1.0vvm，培养温度为26℃，压力0.05MPa，溶氧控制15％-40％，溶氧与搅拌关联。
4)补料方法
葡萄糖溶液：配制70％(w/v)葡萄糖水溶液8L，121℃灭菌20min，待用。
营养液：豆粕水解液(购自山东玉宝生物科技股份有限公司)500g，玉米浆450g，磷酸二氢钾25g，硫酸钠50g，微量元素液25mL，加适量饮用水至总体积3L，121℃灭菌30min，待用。
氨水：25％氨水溶液3L
当发酵培养至63h，葡萄糖耗完，pH开始回升，开始补葡萄糖溶液，用补糖泵控制流速，用测糖仪测发酵液含糖量，全程控制葡萄糖浓度在1.0％。用氨水控制发酵液pH在6.8，同时流加营养液(共三次补料)。发酵培养至葡萄糖耗尽时进行第一次补料，流加速率为0.60mL/L/h；发酵培养至115h，第一次补料结束，开始进行第二次补料，流加速率为0.85mL/L/h；发酵培养至165h，第二次补料结束，开始进行第三次补料，流加速率为0.60mL/L/h；发酵培养至190h，第三次补料结束。放罐，产物发酵单位3.30g/L。
对比例1
与实施例3的区别仅在于步骤4)补料方法中营养液的加入方式不同，其余条件均相同，具体如下：
发酵培养至葡萄糖耗尽时流加营养液，流加速率为0.85mL/L/h，发酵总周期190h，放罐，产物发酵单位2.50g/L。
对比例2
与实施例3的区别仅在于步骤4)补料方法中营养液的组成不同，豆粕水解液替换为等质量的豆粕粉，其余条件均相同。
最终产物发酵单位为2.93g/L。
对比例3
与实施例3的区别仅在于步骤4)补料方法中营养液的加入方式不同，其余条件均相同，具体如下：
发酵培养至葡萄糖耗尽时进行第一次补料，流加速率为0.85mL/L/h；发酵培养至115h，第一次补料结束，开始进行第二次补料，流加速率为0.85mL/L/h；发酵培养至165h，第二次补料结束，开始进行第三次补料，流加速率为0.60mL/L/h；发酵培养至190h，第三次补料结束。放罐。
最终产物发酵单位为2.79g/L。
对比例4
与实施例3的区别仅在于步骤4)补料方法中营养液的加入方式不同，其余条件均相同，具体如下：
发酵培养至葡萄糖耗尽时进行第一次补料，流加速率为0.60mL/L/h；发酵培养至115h，第一次补料结束，开始进行第二次补料，流加速率为0.85mL/L/h；发酵培养至165h，第二次补料结束，开始进行第三次补料，流加速率为0.85mL/L/h；发酵培养至190h，第三次补料结束。放罐。
最终产物发酵单位为2.86g/L。
上述详细说明是针对本发明其中之一可行实施例的具体说明，该实施例并非用以限制本发明的专利范围，凡未脱离本发明所为的等效实施或变更，均应包含于本发明技术方案的范围内。
Claims (7)
1.一种微生物发酵生产硫链丝菌素的方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）将远青链霉菌接种于第一种子培养基中培养，得到包含远青链霉菌的菌种液；
（2）将包含远青链霉菌的菌种液接种于种子罐中培养，得到种子液；
（3）将种子液进行发酵培养，其中发酵培养包括补料培养，所述补料培养是当碳源耗尽时补充碳源并采用流加的方式补充营养液，营养液补料分三个阶段，第一阶段流加速率为0.5-0.65 mL/L/h，开始补料时间为碳源耗尽时；第二阶段流加速率为0.75-0.9 mL/L/h，开始补料时间为发酵周期在85-146 h范围内；第三阶段流加速率为0.5-0.75 mL/L/h，开始补料时间为发酵周期在135-180 h范围内，发酵总周期为180 h-190 h；
步骤（3）中所述营养液组成为：豆粕水解液160-180 g/L，玉米浆120-180 g/L，磷酸二氢钾6-10 g/L，硫酸钠15-20 g/L和微量元素液6-10 mL/L；
步骤（3）补料培养过程中pH在6.8；
步骤（3）中发酵培养采用发酵培养基，组成为：葡萄糖4-8%，豆粕粉18-22 g/L，玉米浆27-33 g/L，酵母浸粉1.5-2.5 g/L，磷酸二氢钠1.5-2.5 g/L，硫酸铵0.8-1.2 g/L，硫酸钙1.5-2.5 g/L，七水硫酸镁0.2-0.6 g/L，七水硫酸亚铁0.1-0.3 g/L，微量元素液2-6 mL/L和消泡剂0.5-1.0 g/L；
步骤（3）补料培养过程中，控制碳源质量百分比浓度在0.2-1.0%。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中远青链霉菌以甘油管种子液的形式进行接种，接种量为2-4%，培养方式为摇瓶培养，转速200-250 rpm，25-30℃摇瓶培养25-35 h；步骤（1）中菌种液的菌浓为15-25%。
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中第一种子培养基组成包括：葡萄糖1.5-2.5%，豆粕粉12-18 g/L，玉米浆18-22 g/L，酵母浸粉1.5-2.5 g/L，磷酸二氢钾1.5-2.5 g/L，硫酸铵0.8-1.2 g/L，硫酸钙1.5-2.5 g/L，七水硫酸镁0.2-0.6 g/L，七水硫酸亚铁0.1-0.3 g/L和微量元素液1-3 mL/L。
4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中所述种子罐中添加第二种子培养基，组成为：葡萄糖1.5-2.5%，豆粕粉18-22 g/L，玉米浆27-33 g/L，酵母浸粉1.5-2.5 g/L，磷酸二氢钾1.5-2.5 g/L，硫酸铵0.8-1.2 g/L，硫酸钙1.5-2.5 g/L，七水硫酸镁0.2-0.6g/L，七水硫酸亚铁0.1-0.3 g/L，微量元素液1-3mL/L和消泡剂0.5-1.0 g/L。
5. 根据权利要求3-4任一所述的方法，其特征在于，所述微量元素液组成为：4-6 g/L六水氯化钴，0.5-1.5 g/L七水硫酸锌，0.5-1.5 g/L二水硫酸铜，0.3-0.7 g/L硼酸和0.3-0.7 g/L钼酸钠。
6. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中接种量为0.2-0.6%，种子罐初始搅拌速率为150-250 rpm，通气比为0.8-1.2 vvm，培养温度为25-27℃，压力0.03-0.07MPa，溶氧控制20%-40%，溶氧与搅拌关联，培养40-50 h。
7. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）中发酵移种量8-12%，初始搅拌速率为150-250 rpm，通气比为0.8-1.2 vvm，培养温度为25-27℃，压力0.03-0.07 MPa，控制溶氧15%-40%，溶氧与搅拌关联。
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