CN116754773B - 一种免疫球蛋白e的检测试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种免疫球蛋白E的检测试剂盒，本发明采用理化性质高度均一、特异性好、可大量制备的单克隆抗体7F10、11C5建立双抗体夹心ELISA法检测血清IgE，单克隆抗体7F10、11C5均为是高亲和力、高特异性的鼠源性单克隆抗体，建立的夹心法灵敏度高，成本低，为血清IgE的检测提供了快速高效的分析手段，为开发快速检测试剂盒奠定基础。

Description

一种免疫球蛋白E的检测试剂盒
技术领域
本发明涉及免疫检测技术领域，尤其涉及一种免疫球蛋白E的检测试剂盒。
背景技术
过敏性疾病是全球最常见的疾病之一，其疾病负担持续增加。对患者做出过敏诊断主要是建立在识别出引起过敏性疾病的致敏原(通常是一种致敏蛋白)的基础上。对致敏性生物源的鉴定可以追溯到100多年前，数十年来，通过皮肤试验及经口或黏膜的激发试验，证明了过敏原的原始提取物与临床的致敏作用相关。自1967年纯化出IgE以来，血清学检测已经成为评价过敏性疾病的常用方法。随着高性能IgE检测方法的引入，sIgE分析在简单定性分析的基础上，进展为可以提供相关定量信息的检测方法。在疾病管理过程中要确认患者的过敏状态以确定引发过敏症状的过敏原具体种类，从而获得准确的诊断，制定最佳的治疗方案。
血清总IgE水平一般用国际单位(IU)或ng表示，1IU＝2.4ng，相当于WHO标准冻干血清制剂0.00928mg内所含的IgE量。正常人群IgE水平受环境、种族、遗传、年龄、检测方法及取样标准等因素的影响，以致各家报道的正常值相差甚远。婴儿脐带血IgE水平小于0.5IU/ml，出生后随年龄增长而逐渐升高，12岁时达成人水平。成人血清IgE水平约在20～200IU/ml之间，一般认为大于333IU/ml(800ng/ml)时为异常升高。
IgE升高相关的常见疾病有：过敏性哮喘、季节性过敏性鼻炎、特应性皮炎、药物性间质性肺炎、支气管肺曲菌病、麻风、类天疱疮及某些寄生虫感染等。上述疾病时IgE升高的程度并不一致，在过敏性支气管肺曲菌病时最为显著，其值可达5000～20000ng/ml，除了此病和特应性皮炎以及在花粉季节之外，任何血清总IgE水平大于5000ng/ml的患者均应考虑寄生虫感染的可能性。
IgE水平明显高于正常阈值，通常与过敏性疾病有关，但并不一定是过敏性疾病。相反，低值或正常值并不能排除存在IgE介导的疾病。因此，应结合临床病史和sIgE检测结果具体解读总IgE水平。目前，检测血清IgE的试剂主要以国外进口试剂为主，价格昂贵；国内检测血清IgE的产品较少，特异性差，限制了相关研究的进展。因此，需要一种特异性强、重复性高、成本低的检测IgE的试剂。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供一种免疫球蛋白E(IgE)的检测试剂盒。
本发明的第一个目的是提供一种免疫球蛋白E的检测试剂盒，包括捕获抗体和检测抗体，所述捕获抗体由单克隆细胞株DQ产生，所述检测抗体由单克隆细胞株LMHL产生；其中，
单克隆细胞株DQ，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2023年02月08日，保藏编号CGMCCNo.45464；
单克隆细胞株LMHL，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2023年02月08日，保藏编号CGMCCNo.45460。
进一步地，所述检测试剂盒为双抗体夹心ELISA试剂盒。
进一步地，所述捕获抗体采用固相载体进行包被。
进一步地，所述固相载体为酶标板、微球、硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜或尼龙膜中的至少一种。
进一步地，所述检测抗体采用检测标记进行标记。
进一步地，所述检测标记为胶体金标记、酶标记、生物素标记或荧光素标记中的至少一种。
进一步地，所述酶标记为辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、溶菌酶、苹果酸脱氢酶中的一种。
进一步地，所述检测试剂盒还包括阴性对照、阳性对照、终止液、显色液、酶联板、包被液、PBS-T缓冲液、PBS缓冲液中的至少一种。
进一步地，所述显色液为TMB显色液。
进一步地，所述终止液为8～12％H2SO4。
进一步地，所述包被液为碳酸盐包被缓冲液。
进一步地，所述碳酸盐包被缓冲液的浓度为0.04～0.06M，pH为9.0～10.0。
在本发明中，单克隆抗体7F10为包被抗体，单克隆抗体11C5为检测抗体；检测抗体(单克隆抗体11C5)为辣根过氧化物酶所标记的抗体。酶标板上包被单克隆抗体7F10用于特异性捕获IgE蛋白，并以酶标板上酶标抗体11C5-HRP与捕获的IgE结合，底物加入后被HRP酶催化并在450nm产生吸收值，根据P/N值判定结果，其中：若IgE被包被抗体7F10捕获并与酶标抗体11C5-HRP结合，并催化底物在450nm产生吸收值(P/N≥2.1)，判定为阳性；若IgE浓度过低(P/N＜2.1)被判定为阴性。
借由上述方案，本发明至少具有以下优点：
本发明采用理化性质高度均一、特异性好、可大量制备的单克隆抗体7F10、11C5建立双抗体夹心ELISA法检测血清IgE，单克隆抗体7F10、11C5均为是高亲和力、高特异性的鼠源性单克隆抗体，建立的夹心法灵敏度高，成本低，为血清IgE的检测提供了快速高效的分析手段，为开发快速检测试剂盒奠定基础。
生物材料样品保藏：
单克隆细胞株DQ，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2023年02月08日，保藏编号CGMCCNo.45464。
单克隆细胞株LMHL，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2023年02月08日，保藏编号CGMCCNo.45460。
附图说明
图1为IgE重组蛋白表达纯化后SDS-PAGE鉴定图；
图2为单克隆抗体7F10和11C5纯化后SDS-PAGE鉴定图；
图3为双抗体夹心法7F10-11C5/HRP的检测标准曲线。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好地理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。
所述单克隆细胞株DQ、LMHL的制备方法及筛选方法，可采用本领域常规方法。具体方法可包括以下步骤：
一、重组质粒构建
根据GenBank公开的IgE基因序列(其中抗原IgE的基因序列见SEQ IDNo.1)，以及氨基酸序列(SEQ ID No.2)，由无锡天霖生物科技有限公司负责优化和合成完整基因pCMV3-IgE，之后转化至Trans10感受态细胞中，涂布平板培养。
二、蛋白表达与纯化
从平板中挑选单菌落接种至液体培养基培养，大提质粒转染HEK293细胞。细胞培养4～6天后，10000～12000xg离心20～30min收集上清液，采用Ni-NTA纯化***纯化出目的蛋白IgE，PBS透析去除咪唑，NanoDrop One仪器测定浓度，-20至-30℃保存。
进一步的，ELISA方法可采用本领域通用方法，具体可包括如下步骤：
(一)制备特异性单克隆抗体：以IgE蛋白为免疫原，免疫6～8周龄的BALB/c小鼠，经免疫、融合，筛选对IgE蛋白强阳性的细胞进行亚克隆，得到单克隆细胞株DQ、LMHL，进一步制备腹水，最终获取IgE蛋白特异性单克隆抗体7F10(单克隆细胞株DQ产生)和11C5(单克隆细胞株LMHL产生)；
(二)筛选配对单克隆抗体：纯化步骤(一)中获取的IgE蛋白特异性单克隆抗体，并分别标记辣根过氧化物酶HRP，鉴定标记成功后进行夹心法配对；
(三)建立IgE蛋白特异性夹心ELISA方法：将步骤(二)中获取的配对单克隆抗体，以单克隆抗体7F10用作包被抗体，单克隆抗体11C5用作检测抗体，所述检测抗体为辣根过氧化物酶所标记(11C5-HRP)；酶标板上包被单克隆抗体7F10用于特异性捕获IgE蛋白，然后检测抗体即酶标抗体11C5-HRP与捕获的IgE结合，底物(TMB)加入后被HRP催化并在450nm产生吸收值，根据P/N值判定结果，其中：若IgE被包被抗体7F10捕获并与酶标抗体11C5-HRP结合，并催化底物在450nm产生吸收值，若P/N≥2.1，判定为阳性；否则被判定为阴性。
进一步的，所述具体检测步骤可参考本领域常用方法，具体可包括如下步骤：
(1)包被：用4μg/mL的单克隆抗体7F10包被在酶标板上，用量100μL/孔，并于37℃温育1～3h；
(2)洗涤：用PBST洗板三次，每次3min，用量200μL/孔，然后甩干反应板；
(3)封闭：用含0.2％明胶的CBS封闭板孔，用量200μL/孔，于37℃封闭1～3h；
(4)洗涤：同步骤(2)；
(5)样品：用PBST将IgE蛋白按2倍梯度从400ng/mL连续稀释至0.39ng/mL，另设一个PBST空白对照，每孔加入100μL样品，于37℃温育0.5～2h；
(6)洗涤：同步骤(2)；
(7)加0.25μg/mL酶标抗体11C5-HRP，用量100μL/孔，并于37℃反应0.5～2h；
(8)洗涤：洗板四次；
(9)显色：按照TMB与底物液比例为1:5加显色液，用量100μL/孔，显色10～20min；
(10)终止：加终止液50μL/孔；
(11)测定：用酶标仪检测OD450nm。
进一步的，所述配对参数包括：4μg/mL包被抗体7F10，包被液为pH9.6、0.05M的碳酸盐缓冲液，标品(包括IgE蛋白)浓度50ng/mL，标品稀释液为pH7.2、0.01M的PBST，酶标抗体11C5-HRP浓度为0.2～0.3μg/mL。
实施例1
IgE重组蛋白制备
1、重组质粒构建
根据GenBank公开的IgE基因序列，选取其中一段胞外段106-427aa(基因序列见SEQ ID No.1)，以及氨基酸序列(SEQ ID No.2)，由无锡天霖生物科技有限公司负责优化和合成完整质粒pCMV3-IgE。将质粒转化至Trans10感受态细胞中，涂布在含有卡那霉素的LB平板上培养。
SEQ ID No.1：
agccgcgattttaccccgccgaccgtgaaaattctgcagagcagctgcgatggcggcggccattttccgccgaccattcagctgctgtgcctggtgagcggctataccccgggcaccattaacattacctggctggaagatggccaggtgatggatgtggatctgagcaccgcgagcaccacccaggaaggcgaactggcgagcacccagagcgaactgaccctgagcgaaaaacattggctgagcgatcgcacctatacctgccaggtgacctatcagggccatacctttgaagatagcaccaaaaaatgcgcggatagcaacccgcgcggcgtgagcgcgtatctgagccgcccgagcccgtttgatctgtttattcgcaaaagcccgaccattacctgcctggtggtggatctggcgccgagcaaaggcaccgtgaacctgacctggagccgcgcgagcggcaaaccggtgaaccatagcacccgcaaagaagaaaaacagcgcaacggcaccctgaccgtgaccagcaccctgccggtgggcacccgcgattggattgaaggcgaaacctatcagtgccgcgtgacccatccgcatctgccgcgcgcgctgatgcgcagcaccaccaaaaccagcggcccgcgcgcggcgccggaagtgtatgcgtttgcgaccccggaatggccgggcagccgcgataaacgcaccctggcgtgcctgattcagaactttatgccggaagatattagcgtgcagtggctgcataacgaagtgcagctgccggatgcgcgccatagcaccacccagccgcgcaaaaccaaaggcagcggcttttttgtgtttagccgcctggaagtgacccgcgcggaatgggaacagaaagatgaatttatttgccgcgcggtgcatgaagcggcgagcccgagccagaccgtgcagcgcgcggtgagcgtgaacccgggcaaa
SEQ ID No.2：
srdftp ptvkilqssc dggghfppti qllclvsgyt pgtinitwle dgqvmdvdlstasttqegelastqseltls qkhwlsdrty tcqvtyqght fedstkkcad snprgvsayl srpspfdlfirksptitclvvdlapskgtv nltwsrasgk pvnhstrkee kqrngtltvt stlpvgtrdw iegetyqcrvthphlpralmrsttktsgpr aapevyafat pewpgsrdkr tlacliqnfm pedisvqwlh nevqlpdarhsttqprktkgsgffvfsrle vtraeweqkd eficravhea aspsqtvqra vsvnpgk
2、蛋白表达与纯化
从LB的平板中挑选单菌落接种至含有卡那霉素的LB液体培养基培养16h，收集菌体，使用质粒提取试剂盒大提质粒，转染HEK293细胞。细胞在恒温摇床培养4天后，12000xg离心30min收集上清液，采用Ni-NTA纯化***纯化出目的蛋白IgE(参照Ni-NTA纯化***说明书进行)。取梯度洗脱的收集液进行SDS-PAGE验证(参见图1)，对有目的条带的洗脱液用0.01MPBS透析去除咪唑。用NanoDrop One仪器测定浓度，-20℃保存备用。
实施例2：
一、制备特异性单克隆抗体
1、实验动物：选择6只6-8周龄的BALB/c小鼠进行免疫；
2、免疫：将新购的BLAB/c小鼠按5只/笼随机分组，先在动物屏障环境中饲养7-10天，使其适应环境。以IgE为免疫原，分别颈背部皮下多点注射免疫小鼠。首次免疫，免疫剂量为100μg/只，取适量免疫原与等体积弗氏完全佐剂混合，在双通道注射乳化器上充分乳化，形成油包水的乳化液，免疫小鼠。四周后进行第一次加强免疫，免疫剂量为50μg/只，免疫原与等体积弗氏不完全佐剂混合乳化。之后每间隔三周进行一次加强免疫，免疫剂量均为50μg/只，免疫佐剂均为弗氏不完全佐剂。第二次加强免疫后一周，从小鼠尾静脉采血5μL至995μL抗体稀释液中，获得抗血清。通过直接ELISA检测抗血清对IgE的效价即亲和力。如未达标预期效价，需再次加强免疫。当抗血清的效价达到预期水平时，即可对小鼠进行冲刺免疫。冲刺免疫剂量为25μg/只，免疫原用生理盐水稀释至25μg/μL，取100μL注射到小鼠左腹腔。冲刺免疫三到四天后即可取脾脏进行细胞融合实验。
3、细胞融合：
(1)骨髓瘤细胞SP2/0的饲养。融合前十天复苏冻存的SP2/0细胞，并进行扩大培养。取一部分SP2/0用HAT培养基培养24小时，观察细胞是否会凋亡。
(2)饲养细胞准备：融合前一天取健康的Balb/c小鼠的饲养细胞进行铺板，细胞浓度为细胞至1×105个/mL，每孔100μL。
(3)SP2/0的准备：把细胞轻轻吹下来，收集至离心管中，记下溶液总体积，混匀并取少量细胞适当稀释后进行计数。脾细胞的准备：取出融合小鼠的脾脏，用1640基础培养基冲洗脾脏，且使脾脏处于湿润的环境中，研磨脾脏，用基础培养基冲洗残留在针芯和滤网上的脾脏细胞，收集研磨液，记录总体积。取部分研磨液进行计数。
(4)SP2/0细胞和脾细胞按照1:5～1:10的比例在离心管中混匀，1000rpm/min离心7min，弃上清。加入1mL已经在37℃水中预热好的PEG1450，接着滴入已经预热好的15mL的RPMI-1640基础培养基终止反应，1000rpm/min离心7min，弃上清，加入HAT完全培养基重悬，每孔加入100μL，放置细胞培养箱中培养，五天后观察融合结果。
4、阳性细胞筛选与克隆化
(1)在融合后第五天观察细胞，对细胞团较大的孔进行换液，第三天取细胞上清液到包有50ng/孔抗原的板中，ELISA试验检测，阳性孔需要再换一次液，隔天再次检测，对两次都检测为阳性的孔进行克隆化。
(2)用有限稀释法对阳性细胞进行克隆化，一般要进行三次克隆化，最后得到单克隆细胞株DQ、LMHL。
7、腹水的制备
(1)在注射杂交瘤细胞株前7～14天对接种的BaLb/c小鼠腹腔注射1mL的灭菌后的石蜡油。
(2)每只小鼠腹腔注射2×105～1×106个杂交瘤细胞株，注射体积为1mL。一般7～14天后小鼠腹部明显***，行动缓慢时可以抽取腹水。
(3)把收集到的腹水4℃、12000rpm/min离心30min，取上清，分装置于-20℃保存。
8、抗体的纯化和保存
采用辛酸-饱和硫酸铵法纯化腹水，0.01M PBS透析后得到单克隆抗体7F10、11C5，采用微量紫外方法测定其浓度后分装后放入-20℃保存。
二、HRP标记抗体
本法是以NaIO4先将HRP表面的糖分子氧化成醛基，然后再与抗体蛋白的氨基相结合，所获酶标记抗体的产率高，具体步骤如下：
1)HRP酶的准备：称取10mg HRP酶，加2mL纯水配置为5mg/ml的HRP液体，按照每mgHRP酶加入34μL计算，加340μL NaIO4,4℃避光放置，1h后，按照每mg HRP酶加入250μL的量加入乙二醇250μL，避光放置4℃,30min后转入透析袋中，用l mM醋酸缓冲液(pH 4.0～4.4)透析过夜，期间至少换液2次，均要求避光。
2)抗体的准备：0.01M的PBS缓冲液进行4℃透析过夜，并测定抗体浓度。
3)标记：抗体与HRP酶按1:1(质量比)混合，加入lmol/L Na2C03缓冲液(1:80)，调解反应的pH为9,25℃反应2～3h。
4)终止：新鲜配制0.lmol/L NaH4B(5mg/mL)，按照每mg HRP酶加入47μL。4℃放置2h后，转入透析袋。用0.0l mol/L PBS缓冲液(pH7.0～7.2)透析过夜，期间至少换液两次，避光。
三、抗体效价测定步骤：
(1)将IgE蛋白用0.05M，pH9.6的碳酸盐包被缓冲液稀释至0.1μg/mL后包被在96孔酶标板上，100μL/孔，于37℃温育箱内温育2h，取出酶标板后将板甩干，每孔注入200μL洗涤液PBST溶液，摇床上振荡3min，用力甩掉洗涤液，在吸水纸上拍干，继续洗涤2次，以下洗涤方法相同；
(2)充分洗涤后，用0.2％明胶的CBS封闭酶标板，200μL/孔，于37℃温育箱内温育2h后取出，洗涤，烘干待用；
(3)将单克隆抗体7F10和11C5梯度稀释10000、20000、40000、80000、160000、320000和640000倍。对应加入到酶标板的前7行列，第8行加入稀释液作对照，100μL/孔，37℃孵育35min后洗涤、拍干；
(4)每孔加入100μL，1:3000稀释的HRP标记的羊抗鼠IgG，37℃孵育35min后洗涤四次、拍干；
(5)每孔加入100μL显色液(TMB与底物液比例为1:5)，暗处37℃反应15min，取出后每孔加入50μL终止液(10％的硫酸)，用酶标仪测定吸光值OD450nm；
三、特异性双抗体夹心法测定步骤：
a、包被：用4μg/mL的单克隆抗体7F10包被酶标板，100μL/孔，37℃温育2h；
b、洗涤：用PBST洗板三次，每次3min，200μL/孔，然后甩干反应板；
c、封闭：含0.2％明胶的CBS，200μL/孔，37℃封闭2h；
d、洗涤：用PBST洗板三次，每次3min，200μL/孔，然后甩干反应板；
e、样品：用PBS将IgE按3倍梯度从83.3IU/mL连续稀释至0.1IU/mL(83.3、27.9、9.2、3.1、1.0、0.3、0.1IU/mL)，另设一个PBS空白对照。每孔加入100μL样品，于37℃温育lh；
f、洗涤：用PBST洗板三次，每次3min，200μL/孔，然后甩干反应板；
g、加酶标抗体(11C5-HRP，0.25μg/mL)，100μL/孔，37℃反应1h；
h、洗涤：洗板四次；
i、显色：加显色液(TMB与底物液比例为1:5)100μL/孔，显色12min；
j、终止：加终止液(10％的硫酸)，50μL/孔；
k、测定：用酶标仪检测OD450nm。
四、建立的单克隆抗体7F10为包被抗体，单克隆抗体11C5为检测抗体的双抗体夹心ELISA检测方法检测曲线的建立和检测范围的确立：用0.05M，pH 9.6的碳酸盐包被缓冲液稀释抗体7F10至4μg/mL，每孔加100μL，4℃过夜。洗涤后用含0.2％明胶的CBS，200μL/孔，37℃封闭2小时。洗涤后分别加入不同浓度的用PBST缓冲液溶液稀释的重组IgE蛋白作为抗原(83.3、27.9、9.2、3.1、1.0、0.3、0.1IU/mL)，每孔100μL，37℃孵育1小时。洗涤后每孔分别加入100μL稀释的酶标抗体11C5-HRP(0.25μg/mL)，37℃孵育1小时。洗涤后每孔分别加入100μL显色液TMB，显色12分钟，加入50μL终止液(10％ H2SO4)。酶标仪读取450nm吸光度数值OD450，分析数据，根据数据做出标准曲线。在IgE浓度在0.5ng/mL～200ng/mL范围内，随着IgE浓度的升高，ELISA反应OD450值升高，IgE浓度与OD450值呈线性相关，因此本方法的检测的范围为：0.1IU/mL～83.3IU/mL。并绘制了7F10为包被抗体，11C5为检测抗体的双抗体夹心ELISA检测方法的标准曲线(图3)。
五、精密度检测：
使用上述方法进行精密度的检测，检测浓度为50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL的参考品，分别添加到阴性血清中进行加标回收实验。三个浓度的加标样品用同批次试纸条分别检测3次进行批内实验，批间实验是用不同批次的试纸条连续3天进行检测，每天检测1次，比较试纸条在不同添加浓度时的回收率及批内和批间差异。计算检测结果的精密度、标准差和变异系数，具体的检测及统计结果见下表3：
表3精密度测试和统计结果
a3次重复试验的平均值
b批间实验是用不同批次的试剂盒连续监测3天
试纸条的批内回收率为97.9％～103.5％，变异系数为1.6％～10.4％；批间回收率为96.0％～100.7％，变异系数为3.8％～12.4％。批内和批间的变异系数均小于15％，说明建立的方法准确度较好。因此满足行业标准要求及临床检测对产品精密度要求，检测结果稳定性好。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种免疫球蛋白E的检测试剂盒，其特征在于，包括捕获抗体和检测抗体，所述捕获抗体由单克隆细胞株DQ产生，所述检测抗体由单克隆细胞株LMHL产生；其中，
单克隆细胞株DQ，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2023年02月08日，保藏编号CGMCCNo.45464；
单克隆细胞株LMHL，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2023年02月08日，保藏编号CGMCCNo.45460。
2.根据权利要求1所述检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒为双抗体夹心ELISA试剂盒。
3.根据权利要求2所述检测试剂盒，其特征在于，所述捕获抗体采用固相载体进行包被。
4.根据权利要求3所述检测试剂盒，其特征在于，所述固相载体为酶标板、微球、硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜或尼龙膜中的至少一种。
5.根据权利要求2所述检测试剂盒，其特征在于，所述检测抗体采用检测标记进行标记。
6.根据权利要求5所述检测试剂盒，其特征在于，所述检测标记为胶体金标记、酶标记、生物素标记或荧光素标记中的至少一种。
7.根据权利要求6所述检测试剂盒，其特征在于，所述酶标记为辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、溶菌酶、苹果酸脱氢酶中的一种。
8.根据权利要求1所述检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括阴性对照、阳性对照、终止液、显色液、酶联板、包被液、PBS-T缓冲液、PBS缓冲液中的至少一种。
9.根据权利要求8所述检测试剂盒，其特征在于，所述显色液为TMB显色液。
10.根据权利要求8所述检测试剂盒，其特征在于，所述终止液为8～12％H2SO4。
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