CN116688212A - 一种具有修复抗衰作用的iii型重组胶原蛋白敷料及其制备方法和应用 - Google Patents
一种具有修复抗衰作用的iii型重组胶原蛋白敷料及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于生物和医药技术领域，具体涉及一种具有修复抗衰作用的III型重组胶原蛋白敷料及其制备方法和应用。所述III型重组胶原蛋白敷料，包括以下原料：重组Ⅲ型人源化胶原蛋白、D‑(+)‑海藻糖二水合物、卡波姆、黄原胶、丁二醇、甘油、三乙醇胺。其效果可达到缩短病程，促进创面愈合与皮肤修复，减轻炎症后色素沉着与瘢痕形成，同时对创面起到保湿作用，对皮肤具有修复抗衰的作用；进一步地，还可以提高敷料的保存时间，降低因敷料处于含水状态而导致变质的风险。
Description
技术领域
本发明属于生物和医药技术领域，具体涉及一种具有修复抗衰作用的III型重组胶原蛋白敷料及其制备方法和应用。
背景技术
皮肤浅表性擦伤、切割伤、小创口、激光/光子/果酸换肤/微整形术后是临床上比较常见皮肤损伤，如果创面处理不当，会造成伤口的微生物感染，有时会深入组织内部，导致组织坏死，严重的则会危及生命。所以，当皮肤出现浅表性损伤时，应及时进行清创处理与保护。目前，临床上对伤口的处理还是采用传统方法，用碘伏、双氧水或生理盐水等消毒剂清创处理后用棉纱布进行覆盖。传统纱布敷料，质地柔软，有较强的吸收能力并可以防止创面渗液积聚，对创面有一定的保护作用。但随着人们对伤口愈合研究的深入，认识到使用敷料的目的远远不止是为了覆盖创面，敷料还必须能帮助伤口愈合。以前的观点认为，应尽可能的为伤口创造一个干燥的环境，减少感染的机会，有利于伤口的愈合。但是，近年来的研究表明，在湿润的环境中伤口愈合得更快。那么，传统型皮肤敷料就显出了它的局限性，如对创面愈合无促进作用，无保湿作用，肉芽组织容易长入纱布网眼中致粘连结痂，易在换药时给创面造成第二次损伤，还存在愈后病灶易形成瘢痕等问题。
中国专利申请CN116019965A公开一种胶原蛋白薄膜敷料及其制备方法，包括原料：Ⅲ型重组人源化胶原蛋白、改性壳聚糖、油相载体、多元醇、防腐剂、改性大豆分离蛋白、芦荟发酵液、改性透明质酸、中药提取物、水，并声称其所提供的胶原蛋白薄膜敷料通过加入Ⅲ型重组人源化胶原蛋白，具有良好生物功能，有助于促进人体创伤愈合、组织修复；通过加入改性壳聚糖，具有丰富的孔结构，比表面积大，与其他组分充分混合、交联，形成稳定的三维凝胶网络，能够提高薄膜敷料的力学性能以及黏附性能，通过加入改性分离蛋白，提高了大豆分离蛋白的溶解性、凝胶性和乳化性，与改性壳聚糖协同作用，进一步提高薄膜敷料的力学性能。但该专利申请并没有公开和教导在减轻炎症和疤痕形成、以及修复抗衰等效果上有何种优势。
中国专利申请CN115998939A公开一种医用重组Ⅲ型人源化胶原蛋白贴，包括重组人源胶原蛋白、透明质酸钠、甘油、黄原胶、甘油辛酸酯、辛酰羟肟酸、1，2己二醇、纯化水、无纺布和医用铝膜袋，该敷料声称可以抑制和缓解皮炎、敏感性肌肤、痤疮、激光治疗后等各种原因引起的皮肤炎症反应，促进创面愈合与皮肤修复，缩短病程，减轻炎症后色素沉着与瘢痕形成的风险。该专利申请着重研究了力学性能而对其声称的其它性能并未做研究。
鉴于此，本发明提出一种具有修复抗衰作用的III型重组胶原蛋白敷料及其制备方法和应用。弥补传统型皮肤敷料的不足，达到缩短病程，促进创面愈合与皮肤修复，减轻炎症后色素沉着与瘢痕形成，同时对创面起到保湿作用，对皮肤具有修复抗衰的作用；进一步地，还可以提高敷料的保存时间，降低因敷料处于含水状态而导致变质的风险。
发明内容
为克服以上技术问题，本发明提供了一种III型重组胶原蛋白敷料。能够有效解决以上问题，达到缩短病程，促进创面愈合与皮肤修复，减轻炎症后色素沉着与瘢痕形成，同时对创面起到保湿作用，对皮肤具有修复抗衰的作用；进一步地，还可以提高敷料的保存时间，降低因敷料处于含水状态而导致变质的风险。
为实现以上目的，本发明提供的技术方案如下：
本发明提供一种具有修复抗衰作用的III型重组胶原蛋白敷料，包括以下原料：
重组Ⅲ型人源化胶原蛋白、D-(+)-海藻糖二水合物、卡波姆、黄原胶、丁二醇、甘油、三乙醇胺。
优选地，按照重量份数计，所述III型重组胶原蛋白敷料，包括以下原料：
重组Ⅲ型人源化胶原蛋白0.05-0.1份、D-(+)-海藻糖二水合物0.15-1份、卡波姆0.15-0.5份、黄原胶0.1-1份、丁二醇1-5份、甘油1-5份、三乙醇胺0.1-0.5份、纯化水90-180份。
优选地，按照重量份数计，所述III型重组胶原蛋白敷料，包括以下原料：
重组Ⅲ型人源化胶原蛋白0.05-0.09份、D-(+)-海藻糖二水合物0.15-0.5份、卡波姆0.15-0.45份、黄原胶0.1-0.5份、丁二醇2-3份、甘油1-3份、三乙醇胺0.2-0.4份、纯化水92-150份。
本发明的目的还在于提供一种具有修复抗衰作用的III型重组胶原蛋白敷料的制备方法，包括以下步骤：
(1)取部分配方量的纯化水，溶解处方量的重组Ⅲ型人源化胶原蛋白，制成重组Ⅲ型人源化胶原蛋白溶液，备用；
(2)分别称取卡波姆、剩余配方量的纯化水，将卡波姆加入至纯化水中，均质，得到混合物1，静置备用；
(3)称取甘油、丁二醇、黄原胶、D-(+)-海藻糖二水合物，搅拌，得到混合物2；
(4)将混合物2加入混合物1中，加热，均质，保温，得到混合物3；
(5)向混合物3中加入三乙醇胺，搅拌，得到混合物4；
(6)将(1)中重组Ⅲ型人源化胶原蛋白溶液加入混合物4中，搅拌均质，得到III型重组胶原蛋白敷料基液；再将基液加入载体中，制得III型重组胶原蛋白敷料。
优选地，(3)中，所述搅拌在常温下以600-800r/min进行搅拌3-5min。
优选地，(4)中，所述加热至80-95℃，优选为92℃。
优选地，(4)中，所述保温30-60min。
优选地，(5)中，将混合物3温度降至50-60℃时，再加入所述三乙醇胺。
优选地，(6)中，将混合物4温度降至45℃以下时，再加入重组Ⅲ型人源化胶原蛋白溶液。
优选地，所述重组Ⅲ型人源化胶原蛋白溶液中的重组Ⅲ型人源化胶原蛋白与纯化水的重量比为0.05-0.1：30。
本发明的另一目的在于提供一种具有修复抗衰作用的III型重组胶原蛋白敷料的制备方法，包括以下原料：重组Ⅲ型人源化胶原蛋白、D-(+)-海藻糖二水合物、卡波姆、黄原胶、丁二醇、甘油、三乙醇胺、茶黄素、褐藻寡糖。
优选地，按照重量份数计，所述III型重组胶原蛋白敷料，包括如下原料：
重组Ⅲ型人源化胶原蛋白0.05-0.1份、D-(+)-海藻糖二水合物0.15-1份、茶黄素0.01-0.05份、褐藻寡糖0.05-0.2份、卡波姆0.15-0.5份、黄原胶0.1-1份、丁二醇1-5份、甘油1-5份、三乙醇胺0.1-0.5份、纯化水90-180份。
优选地，按照重量份数计，所述III型重组胶原蛋白敷料，包括以下原料：
重组Ⅲ型人源化胶原蛋白0.05-0.09份、D-(+)-海藻糖二水合物0.15-0.5份、茶黄素0.01-0.03份、褐藻寡糖0.05-0.1份、卡波姆0.15-0.45份、黄原胶0.1-0.5份、丁二醇2-3份、甘油1-3份、三乙醇胺0.2-0.4份、纯化水92-150份。
本发明的目的还在于提供一种具有修复抗衰作用的III型重组胶原蛋白敷料，包括以下步骤：
(1)取部分纯化水，溶解处方量中的重组Ⅲ型人源化胶原蛋白，制成重组Ⅲ型人源化胶原蛋白溶液，备用；
(2)分别称取卡波姆、茶黄素、褐藻寡糖、剩余配方量的纯化水，将卡波姆、茶黄素、褐藻寡糖依次加入纯化水中，均质，得到混合物1，静置备用；
(3)称取甘油、丁二醇、黄原胶、D-(+)-海藻糖二水合物，搅拌，得到混合物2；
(4)将混合物2加入混合物1中，加热，均质，保温，得到混合物3；
(5)向混合物3中加入三乙醇胺，搅拌，得到混合物4；
(6)将(1)中重组Ⅲ型人源化胶原蛋白溶液加入混合物4中，搅拌均质，得到III型重组胶原蛋白敷料基液；再将基液加入载体中，制得III型重组胶原蛋白敷料。
优选地，(3)中，所述搅拌在常温下以600-800r/min进行搅拌3-5min。
优选地，(4)中，所述加热至80-95℃，优选为92℃。
优选地，(4)中，所述保温30-60min。
优选地，(5)中，将混合物3温度降至50-60℃时，再加入所述三乙醇胺。
优选地，(6)中，将混合物4温度降至45℃以下时，再加入重组Ⅲ型人源化胶原蛋白。
优选地，所述重组Ⅲ型人源化胶原蛋白水溶液中的重组Ⅲ型人源化胶原蛋白与纯化水的重量比为0.05-0.1：30。
本发明中所述的载体可以选自纱布、无纺布、凝胶中的任一种或多种。
本发明的目的还在于提供一种所述III型重组胶原蛋白敷料在制备具有修复抗衰作用的产品中的应用。
与现有技术比，本发明的技术优势在于：
(1)本发明采用了重组Ⅲ型人源化胶原蛋白，与创面中断裂的胶原蛋白通过分子间范德华力形成超螺旋结构，这种网状的超螺旋结构可在受损组织表面形成一层保护膜，隔离、屏障皮肤创面。同时重组Ⅲ型人源化胶原蛋白具有较好的细胞粘附性(重组Ⅲ型人源化胶原蛋白其带电荷的氨基酸残基与细胞表面的电荷，通过物理的电荷相吸作用发生细胞黏附)，为细胞提供外部支撑，以促进损伤部位的修复。重组Ⅲ型人源化胶原蛋白可以直接补充创面的Ⅲ型胶原蛋白，降低瘢痕的发生几率。
(2)茶黄素、褐藻寡糖和D-(+)-海藻糖二水合物具有较好的协同作用，使在创面表面快速形成透气性的物理屏障，并利用卡波姆增稠剂，充分保证了创面的湿润环境，为创面愈合提供了更加稳定、湿润且透气性好的微环境，使在创面表面的微环境中，不仅具有良好抑菌、抗炎抗氧化作用，实现良好的清除皮肤中的自由基功能，避免自由基对细胞的损伤，加快创面愈合，缩短创面愈合时间，而且同时达到了对创面的护理的功能，促进皮肤的新陈代谢，减少色素的沉着，以及增强对皮肤创面的舒缓作用，有效降低了对创面肌肤的刺激作用，增加皮肤适应环境的能力，避免创面的二次感染和过敏反应。
(3)本发明的III型重组胶原蛋白敷料可广泛适用于非慢性创面(如浅表性创面、手术后缝合创面、机械创伤、小创口、擦伤、切割伤创面、穿刺器械的穿刺部位、I度或浅II度的烧烫伤创面、激光/光子/果酸换肤/微整形术后创面)的护理，适应性更广，制成的敷料可以单独使用，也可以搭配纱布、无纺布等载体使用。制得的皮肤创面敷料分别进行动物皮肤刺激试验、皮肤致敏试验、体外细胞毒性试验，结果均表明安全无毒。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行说明，以使本发明技术方案更易于理解、掌握，但本发明并不局限于此。下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料中如无特殊说明，均可从商业途径获得，且均为药典标准品或分析纯，购买来源不影响试验结果，本发明中所用试剂，同种试剂来源相同。
本发明中使用的部分试剂说明：重组Ⅲ型人源化胶原蛋白购买自浙江诸暨聚源生物技术有限公司，规格型号：BSS；褐藻寡糖购买自青岛博智汇力生物科技有限公司(商品名为 简称：AOS)；卡波姆为卡波姆940(CAS 9007-20-9)；黄原胶(分子量241.115，CAS 11138-66-2)。
实施例1
一种具有修复抗衰作用的III型重组胶原蛋白敷料，按照重量份数计，包括以下原料：
重组Ⅲ型人源化胶原蛋白0.07份、D-(+)-海藻糖二水合物0.15份、卡波姆0.15份、黄原胶0.1份、丁二醇2.5份、甘油2份、三乙醇胺0.3份、92份纯化水。
所述具有修复抗衰作用的III型重组胶原蛋白敷料的制备方法，包括如下步骤：
(1)取30份纯化水，溶解处方量中的重组Ⅲ型人源化胶原蛋白，制成重组Ⅲ型人源化胶原蛋白溶液，备用；
(2)分别称取卡波姆、剩余配方量的纯化水(62份)，将卡波姆加入至纯化水中，均质，得到混合物1，静置备用；
(3)称取甘油、丁二醇、黄原胶、D-(+)-海藻糖二水合物，以700r/min进行搅拌4min，得到混合物2；
(4)将混合物2加入混合物1中，加热至92℃，均质，保温40min，得到混合物3；
(5)冷却混合物3，待混合物3温度降至60℃时，向混合物3中加入三乙醇胺，搅拌，得到混合物4；
(6)将混合物4温度降至45℃以下时，将重组Ⅲ型人源化胶原蛋白溶液加入混合物4中，搅拌均质，得到III型重组胶原蛋白敷料基液；
(7)将上述(6)所得III型重组胶原蛋白敷料基液，对无纺布进行浸泡，得到所述III型重组胶原蛋白敷料。
实施例2
一种具有修复抗衰作用的III型重组胶原蛋白敷料，按照重量份数计，所述III型重组胶原蛋白敷料，包括以下原料：包括如下原料：重组Ⅲ型人源化胶原蛋白0.05份、D-(+)-海藻糖二水合物1份、茶黄素0.01份、褐藻寡糖0.2份、卡波姆0.15份、黄原胶1份、丁二醇1份、甘油5份、三乙醇胺0.1份、纯化水150份。
所述具有修复抗衰作用的III型重组胶原蛋白敷料的制备方法，包括如下步骤：
(1)取30份纯化水，溶解处方量中的重组Ⅲ型人源化胶原蛋白，制成重组Ⅲ型人源化胶原蛋白溶液，备用；
(2)分别称取卡波姆、茶黄素、褐藻寡糖、剩余配方量的纯化水(120份)，将卡波姆、茶黄素、褐藻寡糖依次加入纯化水中，均质，得到混合物1，静置备用；
(3)称取甘油、丁二醇、黄原胶、D-(+)-海藻糖二水合物，以600r/min进行搅拌5min，得到混合物2；
(4)将混合物2加入混合物1中，加热至80℃，均质，保温30min，得到混合物3；
(5)冷却混合物3，待混合物3温度降至50℃时，向混合物3中加入三乙醇胺，搅拌，得到混合物4；
(6)将混合物4温度降至45℃以下时，将重组Ⅲ型人源化胶原蛋白溶液加入混合物4中，搅拌均质，得到III型重组胶原蛋白敷料基液；
(7)将上述(6)所得III型重组胶原蛋白敷料基液，对无纺布进行浸泡，得到所述III型重组胶原蛋白敷料。
实施例3
一种具有修复抗衰作用的III型重组胶原蛋白敷料，按照重量份数计，重组Ⅲ型人源化胶原蛋白0.1份、D-(+)-海藻糖二水合物0.15份、茶黄素0.05份、褐藻寡糖0.05份、卡波姆0.5份、黄原胶0.1份、丁二醇5份、甘油1份、三乙醇胺0.5份、纯化水130份。
所述具有修复抗衰作用的III型重组胶原蛋白敷料的制备方法，包括如下步骤：
(1)取30份纯化水，溶解处方量中的重组Ⅲ型人源化胶原蛋白，制成重组Ⅲ型人源化胶原蛋白溶液，备用；
(2)分别称取卡波姆、茶黄素、褐藻寡糖、剩余配方量的纯化水(100份)，将卡波姆、茶黄素、褐藻寡糖依次加入纯化水中，均质，得到混合物1，静置备用；
(3)称取甘油、丁二醇、黄原胶、D-(+)-海藻糖二水合物，以800r/min进行搅拌3min，得到混合物2；
(4)将混合物2加入混合物1中，加热至95℃，均质，保温60min，得到混合物3；
(5)冷却混合物3，待混合物3温度降至60℃时，向混合物3中加入三乙醇胺，搅拌，得到混合物4；
(6)将混合物4温度降至45℃以下时，将重组Ⅲ型人源化胶原蛋白溶液加入混合物4中，搅拌均质，得到III型重组胶原蛋白敷料基液；
(7)将上述(6)所得III型重组胶原蛋白敷料基液，对无纺布进行浸泡，得到所述III型重组胶原蛋白敷料。
实施例4
一种具有修复抗衰作用的III型重组胶原蛋白敷料，按照重量份数计，包括以下原料：
重组Ⅲ型人源化胶原蛋白0.07份、D-(+)-海藻糖二水合物0.15份、茶黄素0.03份、褐藻寡糖0.1份、卡波姆0.15份、黄原胶0.1份、丁二醇2.5份、甘油2份、三乙醇胺0.3份、95份纯化水。
所述具有修复抗衰作用的III型重组胶原蛋白敷料的制备方法，包括如下步骤：
(1)取30份纯化水，溶解处方量中的重组Ⅲ型人源化胶原蛋白，制成重组Ⅲ型人源化胶原蛋白溶液，备用；
(2)分别称取卡波姆、茶黄素、褐藻寡糖、剩余配方量的纯化水(65份)，将卡波姆、茶黄素、褐藻寡糖依次加入纯化水中，均质，得到混合物1，静置备用；
(3)称取甘油、丁二醇、黄原胶、D-(+)-海藻糖二水合物，以700r/min进行搅拌4min，得到混合物2；
(4)将混合物2加入混合物1中，加热至92℃，均质，保温40min，得到混合物3；
(5)冷却混合物3，待混合物3温度降至60℃时，向混合物3中加入三乙醇胺，搅拌，得到混合物4；
(6)将混合物4温度降至45℃以下时，将重组Ⅲ型人源化胶原蛋白溶液加入混合物4中，搅拌均质，得到III型重组胶原蛋白敷料基液；
(7)将上述(6)所得III型重组胶原蛋白敷料基液，对无纺布进行浸泡，得到所述III型重组胶原蛋白敷料。
对比例1
与实施例4相比，区别仅在于使用等量的茶黄素替换褐藻寡糖。
一种具有修复抗衰作用的III型重组胶原蛋白敷料，按照重量份数计，包括以下原料：
重组Ⅲ型人源化胶原蛋白0.07份、D-(+)-海藻糖二水合物0.15份、茶黄素0.13份、卡波姆0.15份、黄原胶0.1份、丁二醇2.5份、甘油2份、三乙醇胺0.3份、95份纯化水。
所述具有修复抗衰作用的III型重组胶原蛋白敷料的制备方法，包括如下步骤：
(1)同实施例4步骤(1)；
(2)分别称取卡波姆、茶黄素、剩余配方量的纯化水(65份)，将卡波姆、茶黄素依次加入纯化水中，均质，得到混合物1，静置备用；
(3)-(7)同实施例4步骤(3)-(7)，制备得到III型重组胶原蛋白敷料基液和所述III型重组胶原蛋白敷料。
对比例2
与实施例4相比，区别仅在于使用等量的褐藻寡糖替换茶黄素。
一种具有修复抗衰作用的III型重组胶原蛋白敷料，按照重量份数计，包括以下原料：
重组Ⅲ型人源化胶原蛋白0.07份、D-(+)-海藻糖二水合物0.15份、褐藻寡糖0.13份、卡波姆0.15份、黄原胶0.1份、丁二醇2.5份、甘油2份、三乙醇胺0.3份、95份纯化水。
所述具有修复抗衰作用的III型重组胶原蛋白敷料的制备方法，包括如下步骤：
(1)同实施例4步骤(1)；
(2)分别称取卡波姆、褐藻寡糖、剩余配方量的纯化水(65份)，将卡波姆、褐藻寡糖依次加入纯化水中，均质，得到混合物1，静置备用；
(3)-(7)同实施例4步骤(3)-(7)，制备得到III型重组胶原蛋白敷料基液和所述III型重组胶原蛋白敷料。
对比例3
与实施例4相比，区别仅在于使用表儿茶素代替茶黄素。
一种具有修复抗衰作用的III型重组胶原蛋白敷料，按照重量份数计，包括以下原料：
重组Ⅲ型人源化胶原蛋白0.07份、D-(+)-海藻糖二水合物0.15份、表儿茶素0.03份、褐藻寡糖0.1份、卡波姆0.15份、黄原胶0.1份、丁二醇2.5份、甘油2份、三乙醇胺0.3份、95份纯化水。
所述具有修复抗衰作用的III型重组胶原蛋白敷料的制备方法，包括如下步骤：
(1)同实施例4步骤(1)；
(2)分别称取卡波姆、表儿茶素、褐藻寡糖、剩余配方量的纯化水(65份)，将卡波姆、表儿茶素、褐藻寡糖依次加入纯化水中，均质，得到混合物1，静置备用；
(3)-(7)同实施例4步骤(3)-(7)，制备得到III型重组胶原蛋白敷料基液和所述III型重组胶原蛋白敷料。
对比例4
与实施例1相比，区别仅在于使用等量的褐藻寡糖代替D-(+)-海藻糖二水合物。
一种具有修复抗衰作用的III型重组胶原蛋白敷料，按照重量份数计，包括以下原料：
重组Ⅲ型人源化胶原蛋白0.07份、褐藻寡糖0.15份、卡波姆0.15份、黄原胶0.1份、丁二醇2.5份、甘油2份、三乙醇胺0.3份、92份纯化水。
所述具有修复抗衰作用的III型重组胶原蛋白敷料的制备方法，包括如下步骤：
(1)同实施例1步骤(1)；
(2)分别称取卡波姆、剩余配方量的纯化水(62份)，将卡波姆加入纯化水中，均质，得到混合物1，静置备用；
(3)称取甘油、丁二醇、黄原胶、褐藻寡糖，以700r/min进行搅拌4min，得到混合物2；
(4)-(7)同实施例1步骤(4)-(7)，制备得到III型重组胶原蛋白敷料基液和所述III型重组胶原蛋白敷料。
对比例5
使用CN 115998939 A中记载的配方，将其稀释成有效成分含量(除纯化水以外的其它成分均看作有效成分)同本申请实施例1一致，并按照本申请实施例1制成辅料。
一种III型重组胶原蛋白敷料，按照重量份数计，包括以下原料：重组Ⅲ型人源化胶原蛋白4份；透明质酸钠2份；甘油3份；黄原胶1份；甘油辛酸酯5份；辛酰羟肟酸3份；1，2己二醇2份；纯化水350份；
其制备方法，包括如下步骤：将透明质酸钠、甘油、1，2己二醇、重组Ⅲ型人源化胶原蛋白、甘油辛酸酯、黄原胶依次分散于纯化水中，再将辛酰羟肟酸分散于其中，得到混合液，将混合液，乳化均质10min，得到III型重组胶原蛋白敷料基液，使用所述III型重组胶原蛋白敷料基液对无纺布进行浸泡，得到所述III型重组胶原蛋白敷料。
效果试验
1、创面修复试验
(1)随机选择180例手术或外伤无明显感染皮肤创口患者，男性56例，女性124例，年龄在18～51岁，随机分成9组，每组20例，各患者的基本资料比较无明显差异，P＞0.05，可进行比较；
(2)治疗方法：每日进行皮损部位清洁后，实验组分别使用分配好的敷料，第1～10天期间，每日晚间敷用1次，第10天以后，隔天晚间敷用1次，每次贴敷时间为20分钟；
(3)治疗标准：
Ⅰ.皮肤症状评分：以红斑、水肿、渗出、刺痛、色素沉着5个指标记，每个指标按照无症状、有症状分别记0、1分。例如，红斑指标中，无红斑记为0分，有红斑则记为1分，类推至水肿、渗出、刺痛、色素沉着各指标。5个指标计分总和为每位患者皮肤症状评分总值。
疗效评估标准：分为痊愈、显效、有效、无效四个标准。
疗效指数＝[(治疗前积分-治疗后积分)÷治疗前积分]×100％。
分析治疗10天后的疗效指数；痊愈：疗效指数≥95％；显效：疗效指数70-94％；有效：疗效指数30-69％；无效：疗效指数＜30％。
Ⅱ.创面愈合时间：按照以上方法，统计各实验组和对照组中患者的平均创面愈合时间(天数)；平均愈合天数＝各患者的愈合天数之和/患者人数。
Ⅲ.皮肤生理功能指标检测：采用无创性皮肤生理功能测试仪(德国CK公司MC760)，检测各实验组患者治愈后的角质层平均含水量，测试方法为：在恒温恒湿的条件下进行测定，室温23～26℃，相对湿度为40％～60％，分别检测被患者的面颊非皮损部位，被测试者于检测前清洁待测皮肤并提前30min进入测试环境中待测。
(4)治疗结果如下表1：
表1创面修复试验结果
由以上数据可知，本发明实施例1相较于对比例4和对比例5在治疗效果方面具有较明显的优势。这说明本发明实施例1的配方相较于现有技术CN 115998939 A的配方来说具有较好的治愈效果优势，且根据对比例4的数据可知，本发明中的重组Ⅲ型人源化胶原蛋白和D-(+)-海藻糖二水合物具有一定的协同促效作用。
由实施例2-4和对比例1-3的数据比较得出，本发明实施例2-4在治疗效果方面明显优于对比例1-3，并且由实施例4和比较例1-3的数据可以看出，在不改变活性成分的总含量，只将其中的茶黄素、褐藻寡糖使用另一成分替换时，其皮肤治疗效果变差；同时，将茶黄素替换为具有同样功效的表儿茶素时，其效果也变差，这说明茶黄素、褐藻寡糖这两种组分与其他组分共同作用，能起到较好的协同增效效果。
2、DPPH自由基清除试验
试验试剂：DPPH(购自西格玛奥德里奇(中国)化学有限公司，产品CAS号为1898-66-4)；DPPH溶液为溶解于无水乙醇、浓度为6×10-5mol/L的DPPH溶液。
(1)取实施例1-4及比较例1-5中得到III型重组胶原蛋白敷料基液0.5mL与2.5mLDPPH溶液混合，作为试验组(即实施例1-4组、比较例1-5组)；
(2)取0.5mL无水乙醇与2.5mL DPPH溶液混合，作为空白组；
(3)室温避光静置30min后，同时测定各个组别的A519(最大吸收波长519nm处的吸光度A值)；试验组用A表示；空白组用A0表示，每组试验均进行三次平行试验，结果取平均值。
(4)DPPH自由基清除率计算公式：清除率％＝(空白组A0-实验组A)/空白组A0，试验结果见表2。
表2DPPH自由基清除试验结果
由以上数据可知，本发明实施例1相较于对比例4和对比例5在清除自由基能力方面具有较明显的优势。这说明本发明实施例1的配方相较于现有技术CN 115998939 A的配方来说具有较好的抗氧化优势，且根据对比例4的数据可知，本发明中的重组Ⅲ型人源化胶原蛋白和D-(+)-海藻糖二水合物具有一定的协同促效作用。
由实施例2-4和对比例1-3的数据比较得出，本发明实施例2-4在清除自由基效果方面明显优于对比例1-3，并且由实施例4和比较例1-3的数据可以看出，在不改变活性成分的总含量，只将其中的茶黄素、褐藻寡糖使用另一成分替换时，其抗氧化能力变差；同时，将茶黄素替换为具有同样功效的表儿茶素时，其效果也变差，这说明茶黄素、褐藻寡糖这两种组分与其他组分共同作用，能起到较好的协同增效效果。
由此可知，本发明提供的III型重组胶原蛋白敷料具有较好的修复、抗氧化抗衰作用。
上述详细说明是针对本发明其中之一可行实施例的具体说明，该实施例并非用以限制本发明的专利范围，凡未脱离本发明所为的等效实施或变更，均应包含于本发明技术方案的范围内。
Claims (10)
1.一种具有修复抗衰作用的III型重组胶原蛋白敷料，包括以下原料：
重组Ⅲ型人源化胶原蛋白、D-(+)-海藻糖二水合物、卡波姆、黄原胶、丁二醇、甘油、三乙醇胺。
2.如权利要求1所述的III型重组胶原蛋白敷料，按照重量份数计，包括以下原料：重组Ⅲ型人源化胶原蛋白0.05-0.1份、D-(+)-海藻糖二水合物0.15-1份、卡波姆0.15-0.5份、黄原胶0.1-1份、丁二醇1-5份、甘油1-5份、三乙醇胺0.1-0.5份、纯化水90-180份。
3.如权利要求1所述的III型重组胶原蛋白敷料，按照重量份数计，按照重量份数计，包括以下原料：重组Ⅲ型人源化胶原蛋白0.05-0.09份、D-(+)-海藻糖二水合物0.15-0.5份、卡波姆0.15-0.45份、黄原胶0.1-0.5份、丁二醇2-3份、甘油1-3份、三乙醇胺0.2-0.4份、纯化水92-150份。
4.一种如权利要求1-3任一所述具有修复抗衰作用的III型重组胶原蛋白敷料的制备方法，包括以下步骤：
(1)取部分配方量的纯化水，溶解处方量的重组Ⅲ型人源化胶原蛋白，制成重组Ⅲ型人源化胶原蛋白溶液，备用；
(2)分别称取卡波姆、剩余配方量的纯化水，将卡波姆加入至纯化水中，均质，得到混合物1，静置备用；
(3)称取甘油、丁二醇、黄原胶、D-(+)-海藻糖二水合物，搅拌，得到混合物2；
(4)将混合物2加入混合物1中，加热，均质，保温，得到混合物3；
(5)向混合物3中加入三乙醇胺，搅拌，得到混合物4；
(6)将(1)中重组Ⅲ型人源化胶原蛋白溶液加入混合物4中，搅拌均质，得到III型重组胶原蛋白敷料基液，再将基液加入载体中，制得III型重组胶原蛋白敷料。
5.如权利要求4所述具有修复抗衰作用的III型重组胶原蛋白敷料的制备方法，所述重组Ⅲ型人源化胶原蛋白溶液中的重组Ⅲ型人源化胶原蛋白与纯化水的重量比为0.05-0.1：30。
6.一种具有修复抗衰作用的III型重组胶原蛋白敷料，包括以下原料：重组Ⅲ型人源化胶原蛋白、D-(+)-海藻糖二水合物、卡波姆、黄原胶、丁二醇、甘油、三乙醇胺、茶黄素、褐藻寡糖。
7.如权利要求6所述的III型重组胶原蛋白敷料，按照重量份数计，包括如下原料：
重组Ⅲ型人源化胶原蛋白0.05-0.1份、D-(+)-海藻糖二水合物0.15-1份、茶黄素0.01-0.05份、褐藻寡糖0.05-0.2份、卡波姆0.15-0.5份、黄原胶0.1-1份、丁二醇1-5份、甘油1-5份、三乙醇胺0.1-0.5份、纯化水90-180份。
8.如权利要求6所述的III型重组胶原蛋白敷料，按照重量份数计，包括以下原料：
重组Ⅲ型人源化胶原蛋白0.05-0.09份、D-(+)-海藻糖二水合物0.15-0.5份、茶黄素0.01-0.03份、褐藻寡糖0.05-0.1份、卡波姆0.15-0.45份、黄原胶0.1-0.5份、丁二醇2-3份、甘油1-3份、三乙醇胺0.2-0.4份、纯化水92-150份。
9.一种如权利要求6-8任一所述具有修复抗衰作用的III型重组胶原蛋白敷料，包括以下步骤：
(1)取部分纯化水，溶解处方量中的重组Ⅲ型人源化胶原蛋白，制成重组Ⅲ型人源化胶原蛋白溶液，备用；
(2)分别称取卡波姆、茶黄素、褐藻寡糖、剩余配方量的纯化水，将卡波姆、茶黄素、褐藻寡糖依次加入纯化水中，均质，得到混合物1，静置备用；
(3)称取甘油、丁二醇、黄原胶、D-(+)-海藻糖二水合物，搅拌，得到混合物2；
(4)将混合物2加入混合物1中，加热，均质，保温，得到混合物3；
(5)向混合物3中加入三乙醇胺，搅拌，得到混合物4；
(6)将(1)中重组Ⅲ型人源化胶原蛋白溶液加入混合物4中，搅拌均质，得到III型重组胶原蛋白敷料基液，再将基液加入载体中，制得III型重组胶原蛋白敷料。
10.如权利要求1-3或权利要求6-8任一所述III型重组胶原蛋白敷料在制备具有修复抗衰作用的产品中的应用。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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