CN116635389A - 吗啉衍生物及其药物组合物和用途 - Google Patents

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CN116635389A CN202280008061.5A CN202280008061A CN116635389A CN 116635389 A CN116635389 A CN 116635389A CN 202280008061 A CN202280008061 A CN 202280008061A CN 116635389 A CN116635389 A CN 116635389A
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关慧平
杨文�
朱经峰
石晓永
张凯
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Shanghai Haiyan Pharmaceutical Technology Co Ltd
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Abstract

本发明公开了一种取代的吗啉衍生物，其结构如式(I)所示。此外本发明还公开了该衍生物的药学上可接受的盐、立体异构体、药物组合物以及其用途。

Description

吗啉衍生物及其药物组合物和用途 技术领域
本发明涉及医药技术领域，特别涉及一种吗啉衍生物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、以及药物组合物及其用途。
背景技术
P2X嘌呤受体是由细胞外腺苷三磷酸(ATP)激活的离子通道家族。嘌呤受体牵涉多种生物功能，特别是与疼痛敏感性相关。P2X3受体是这个家族的成员之一，最初从大鼠背根神经节克隆而来(Chen等,Nature,第377卷,第428-431页(1995))。大鼠P2X3和人P2X3两者的核苷酸序列和氨基酸序列现在是已知的(Lewis等,Nature,第377卷,第432-435页(1995)；以及Garcia-Guzman等,BrainRes.Mol.BrainRes.,第47卷,第59-66页(1997))。
据报道，P2X3涉及控制膀胱容量反射的传入通路。因此，抑制P2X3可以治疗储尿和排尿相关的病症，如膀胱过度活动症(Cockayne等,Nature,第407卷,第1011-1015页(2000))。
P2X3还选择性地表达在伤害感受性、小直径感觉神经元(即由疼痛或损伤刺激的神经元)上，这与它在疼痛敏感性中的作用。此外，也有报道，阻断P2X3受体在慢性炎症性和神经性病理痛动物模型中具有镇痛作用(Jarvis等,PNAS,99,17179-17184(2002))。因此，降低P2X3水平或活性的方法将可用于调节疼痛对象的痛觉。
P2X3还能够与P2X2形成P2X2/3异二聚体，所述P2X2是P2X嘌呤能配体-门控离子通道家族的另一个成员。P2X2/3在感觉神经元的末梢(中枢和外周)上高表达(Chen等,Nature,第377卷,第428-431页(1995))。最新的研究结果还表明P2X2/3主要在膀胱感觉神经元中表达(超过P2X3)，并且有可能在膀胱充盈和伤害性感受的感觉中起作用(Zhong等,Neuroscience,第120卷,第667-675页(2003))。
鉴于上述，需要用于治疗与P2X3和/或P2X2/3相关的各种病症可能有用并且安全的新的P2X3和/或P2X2/3受体配体，特别是拮抗剂。
发明内容
本发明的目的是提供结构新颖的吗啉衍生物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体、其药物组合物及其作为P2X3拮抗剂的用途，该类化合物不仅对P2X3具有较高的抑制活性，对P2X2/3抑制活性较低，具有显著的抑制选择性，而且更为重要的是该类化合物还具有有利的药代动力学参数，例如较低的清除率和较高的体内暴露量，更有利于开发成为有效且安全的药物。
本发明第一方面提供了式(I)所示化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体：
其中，Q为-C(O)NHCH 3、
R 1为氢、C 1-6烷基(优选为C 1-3烷基，更优选为甲基)或卤素(优选为氟或氯)；
R 2为氢或卤素(优选为氟)；
R 3、R 4如下：
(i)R 3为氢；R 4为-C(O)R 4a或3至6元杂环烷基，所述3至6元杂环烷基为未取代的或被1、2或3个独立地选自下组的取代基取代：C 1-3烷基(优选为甲基)、羟基、羧基、氰基、卤素(优选为氟)、C 1-3烷氧基、卤代C 1-3烷基、卤代C 1-3烷氧基、-NR a0R b0、-SO 2C 1-3烷基、-C(O)NR a0R b0、-C(O)C 1-3烷基、-C(O)OC 1-3烷基、-OC(O)C 1-3烷基、C 3-6环烷基、C 3-6环烷基氧基、3至6元杂环烷基；
其中R 4a为C 1-6烷基(优选C 1-3烷基)、C 3-8环烷基(优选为C 3-6环烷基，更优选为环丙基)、3至6元杂环烷基；所述C 1-6烷基(优选C 1-3烷基)被1个或多个(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9个或更多个)独立地选自下组的取代基取代：氘、羟基、羧基、氰基、卤素(优选为氟)、C 1-3烷氧基、卤代C 1-3烷基、卤代C 1-3烷氧基、-NR a0R b0、-SO 2C 1-3烷基、-C(O)NR a0R b0、-C(O)C 1-3烷基、-C(O)OC 1-3烷基、-OC(O)C 1-3烷基、C 3-6环烷基、C 3-6环烷基氧基或3至6元杂环烷基；所述C 3-8环烷基(优选为C 3-6环烷基，更优选为环丙基)、3至6元杂环烷基(优选为环氧丙烷)为未取代的或被1个或多个(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9个或更多个)独立地选自下组的取代基取代：氘、C 1-3烷基(优选为甲基)、羟基、羧基、氰基、卤素(优选为氟)、C 1-3烷氧基、卤代C 1-3烷基、卤代C 1-3烷氧基、-NR a0R b0、-SO 2C 1-3烷基、-C(O)NR a0R b0、-C(O)C 1-3烷基、-C(O)OC 1-3烷基、-OC(O)C 1-3烷基、C 3-6环烷基、C 3-6环烷基氧基或3至6元杂环烷基；或者
(ii)R 3、R 4相连接，与所连接的碳和氮原子共同形成3至6元杂环烷基环、5至6元杂环烯基环、5至6元杂芳基环；其中所述3至6元杂环烷基环具有1、2或3个氮原子和0、1或2个氧原子作为环原子；其中所述5至6元杂环烯基环具有2、3或4个氮原子和0、1或2个氧原子作为环原子；所述5至6元杂芳基环具有2、3或4个氮原子和0或1个氧原子作为环原子；所述3至6元杂环烷基环、5至6元的杂环烯基环和5至6元杂芳基环为未取代的或被1、2或3个独立地选自下组的取代基取 代：C 1-3烷基、羟基、羧基、氰基、卤素、C 1-3烷氧基、卤代C 1-3烷基、卤代C 1-3烷氧基、-NR a0R b0、-SO 2C 1-3烷基、-C(O)NR a0R b0、-C(O)C 1-3烷基、-C(O)OC 1-3烷基、-OC(O)C 1-3烷基、C 3-6环烷基、C 3-6环烷基氧基或3至6元杂环烷基；
Z 1、Z 2、Z 3、Z 4代表环原子，各自独立地为C或N(优选Z 1为C，Z 2为C或N，Z 3为为C或N，Z 4为N)；
Z 5为CH 2或O；
Z 6、Z 7各自独立地为O、S或NR a0；
(R 5) n代表环 上的氢被n个R 5取代，n为0、1、2、3或4，每个R 5相同或不同，各自独立地为C 1-3烷基、羟基、羧基、氰基、卤素(优选为氟或氯)、C 1-3烷氧基、卤代C 1-3烷基、卤代C 1-3烷氧基、-NR a0R b0、-SO 2C 1-3烷基、-C(O)NR a0R b0、-C(O)C 1-3烷基、-C(O)OC 1-3烷基、-OC(O)C 1-3烷基、C 3-6环烷基、C 3-6环烷基氧基或3至6元杂环烷基；以及
R a0、R b0各自独立地为氢或C 1-3烷基。
在一些实施例中，R 1和R 2中一个为C 1-3烷基，另一个为氢；进一步地，R 1和R 2中一个为甲基，另一个为氢；更进一步地，R 1为甲基，R 2为氢。
在一些实施例中，R 1和R 2中一个为卤素，另一个为氢；进一步地，R 1和R 2中一个为氯，另一个为氢；更进一步地，R 1为氯，R 2为氢。
在一些实施例中，R 1和R 2中有一个为卤素，另一个为C 1-3烷基；进一步地，R 1和R 2中有一个为氟，另一个为甲基；进一步地，R 1为甲基，R 2为氟。
在一些实施例中， 为
在一些实施例中，R 4a为C 1-3烷基、C 3-6环烷基(优选为环丙基)、或3至6元杂环烷基，其中所述C 1-3烷基被1个或多个(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9个或更多个)独立地选自下组的取代基取代：氘、羟基、卤素(优选为氟)；所述C 3-6环烷基(优选为环丙基)和3至6元杂环烷基为未取代的或被1个或多个(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9个或更多个)独立地选自下组的取代基取代：氘、C 1-3烷基(优选为甲基)、羟基、卤素(优选为氟)。
在一些实施例中，R 4a为氘代C 1-6烷基；进一步地，R 4a为氘代C 1-3烷基。
在一些实施例中，R 4a为氘代C 1-3烷基，进一步地，选自：单氘代甲基、单氘代乙基、二氘代甲基、二氘代乙基、三氘代甲基、三氘代乙基。
在一些实施例中，R 4a为羟基取代C 1-6烷基；进一步地，R 4a为羟基取代C 1-3烷基；更进一步地，R 4a为羟基取代甲基。
在一些实施例中，R 4a为C 3-6环烷基；进一步地，R 4a为环丙基。在一些实施例中，R 4a为卤素取代的C 3-6环烷基或羟基取代的C 3-6环烷基；进一步地，R 4a为氟代环丙基或羟基取代的环丙基。
在一些实施例中，R 4a为C 1-3烷基、C 3-6环烷基(优选为环丙基)、或3至6元杂环烷基，其中，所述3至6元杂环烷基含有1、2或3个氧原子作为环原子；所述C 1-3烷基被1个或多个(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9个或更多个)独立地选自下组的取代基取代：羟基、卤素(优选为氟)；所述C 3-6环烷基、3至6元杂环烷基为未取代的或被1个或多个(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9个或更多个)独立地选自下组的取代基取代：羟基、C 1-3烷基、卤素(优选为氟)。
在一些实施例中，3至6元杂环烷基选自：环氧乙烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、二氧戊环基和二氧六环基。
在一些实施例中，3至6元杂环烷基选自以下基团：
在一些实施例中，R 3、R 4相连接，与所连接的碳和氮原子共同形成3至6元杂环烷基环、5至6元杂环烯基环或5至6元杂芳基环；其中所述3至6元杂环烷基环为 所述5至6元杂环烯基环为 所述5至6元杂芳基环为 其中所述3至6元杂环烷基环、5至6元杂环烯基环、5至6元杂芳基环为未取代的或被1、2或3个独立地选自下组的取代基取代：C 1-3烷基、羟基、羧基、氰基、卤素、C 1-3烷氧基、卤代C 1-3烷基、卤代C 1-3烷氧基、-NR a0R b0、-SO 2C 1-3烷基、-C(O)NR a0R b0、-C(O)C 1-3烷基、-C(O)OC 1-3烷基、-OC(O)C 1-3烷基、C 3-6环烷基、C 3-6环烷基氧基或3至6元杂环烷基。
在一些实施例中，R 3、R 4相连接，与所连接的碳和氮原子共同形成如下结构：
在一些实施例中，所述式(I)所示化合物具有式(Ⅱ)所示结构：
其中式中各基团如上所定义。
在一些实施例中，式(Ⅱ)中，R 1为甲基；R 2为氢。
在一些实施例中，式(Ⅱ)中，R 3、R 4相连接，与所连接的碳和氮原子共同形成的3至6元杂环烷基环为 5至6元杂环烯基环为 5至6元杂芳基环为 其中3至6元杂环烷基环、5至6元杂环烯基环、5至6元杂芳基环为未取代的或被1、2或3个独立地选自下组的取代基取代：C 1-3烷基、羟基、羧基、氰基、卤素、C 1-3烷氧基、卤代C 1-3烷基、卤代C 1-3烷氧基、-NR a0R b0、-SO 2C 1-3烷基、-C(O)NR a0R b0、-C(O)C 1-3烷基、-C(O)OC 1-3烷基、-OC(O)C 1-3烷基、C 3-6环烷基、C 3-6环烷基氧基或3至6元杂环烷基。
在一些实施例中，R 3、R 4相连接，与所连接的碳和氮原子共同形成如下结构：
在一些实施例中，所述式(I)所示化合物具有式(Ⅲ)所示结构：
其中式中各基团如上所定义。
在一些实施例中，式(Ⅲ)所示结构中，R 1为C 1-6烷基(优选为C 1-3烷基，更优选为甲基)；R 2为氢或卤素(优选为氟或氯)。
在一些实施例中，式(Ⅲ)所示结构中，R 1为甲基；R 2为氢或氟。
在一些实施例中，式(Ⅲ)所示结构中，Z 5为CH 2。
在一些实施例中，式(Ⅲ)所示结构中，n为0。
在一些实施例中，式(Ⅲ)所示结构中，R 5为羟基、羧基、-COOCH 3或-CONH 2。
在一些实施例中，式(Ⅲ)所示结构中，R 4a为氘代C 1-6烷基，或为氘代C 1-3烷基、或为单氘代甲基、单氘代乙基、二氘代甲基、二氘代乙基、三氘代甲基、三氘代乙基，或为三氘代甲基(CD 3)。
在一些实施例中，式(Ⅲ)所示结构中，R 4a为三氘代甲基(CD 3)。
在一些实施例中，式(Ⅲ)所示结构中，R 4a为C 3-8环烷基(优选为C 3-6环烷基，更优选为环丙基)、或被1、2或3个羟基取代的C 1-6烷基(优选被1个羟基取代的C 1-3烷基)。
在一些实施例中，式(Ⅲ)所示结构中，R 4a为环丙基、羟基取代的甲基和羟基取代的异丙基。
在一些实施例中，所述式(I)所示化合物具有式(Ⅳ)所示结构：
其中式中各基团如上所定义。
在一些实施例中，式(Ⅳ)所示结构中，R 2为H或氟。
在一些实施例中，式(Ⅳ)所示结构中，Z 6为NH，Z 7为S；或者Z 6为S，Z 7为NH。
在一些实施例中，式(Ⅳ)所示结构中，Z 6为CH 2，Z 7为S；或者Z 6为S，Z 7为CH 2。
在一些实施例中，式(Ⅳ)所示结构中，Z 6为CH 2，Z 7为S。
在一些实施例中，式(Ⅳ)所示结构中，Z 6为S，Z 7为CH 2。
在一些实施例中，式(Ⅳ)所示结构中，R 4a为C 1-3烷基、C 3-6环烷基(优选为环丙基)、或3至6元杂环烷基，其中所述C 1-3烷基被1个或多个(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9个或更多个)独立地选自下组的取代基取代：氘、羟基、卤素(优选为氟)；所述C 3-6环烷基(优选为环丙基)、3至6元杂环烷基为未取代的或被1个或多个(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9个或更多个)独立地选自下组的取代基取代：氘、C 1-3烷基(优选为甲基)、羟基、卤素(优选为氟)。
在一些实施例中，式(Ⅳ)所示结构中，R 4a选自：被1、2或3个羟基取代的C 3-8环烷基(优选为被1个羟基取代C 3-6环烷基，更优选为被1个羟基取代的环丙基)、被1、2或3个卤素取代的C 3-8环烷基(优选为被1个氟取代的C 3-6环烷基，更优选为被1个氟取代的环丙基)、和被1、2或3个羟基取代的C 1-6烷基(优选被1个羟基取代的C 1-3烷基)。
在一些实施例中，式(Ⅳ)所示结构中，R 4a选自：羟基取代环丙基、氟代环丙基、羟基取代甲基、羟基取代乙基。
在一些实施例中，式(I)化合物为下列化合物中的任意一个：
本发明第二方面提供了一种药物组合物，包括上述式(I)所示化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体；以及药学上可接受的载体。
本发明第三方面提供了上述式(I)所示化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体在制备治疗与P2X3活性或与P2X2/3活性相关的疾病的药物中的应用。
本发明第四方面提供了第二方面所述的药物组合物在制备治疗与P2X3活性或与P2X2/3活性相关的疾病的药物中的用途。
在一些实施例中，所述的与P2X3活性或与P2X2/3活性相关的疾病为疼痛、泌尿道病症、胃肠疾病、癌症、免疫相关的疾病、咳嗽、抑郁症、焦虑或应激相关病症。
本发明第五方面提供了一种治疗与P2X3活性或与P2X2/3活性相关的疾病的方法，包括向患者施加治疗有效量的本发明第一方面所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体或本发明第二方面所述的药物组合物。
具体实施方式
本发明人经过广泛而深入的研究，意外地发现了这类吗啉衍生物不仅具有显著的P2X3抑制活性和较低的P2X2/3抑制活性，此外还具有优异的体内药代参数，特别是较低的清除率和较高的吸收程度。因此该系列化合物有望开发成为用于调节P2X3和/或P2X2/3以治疗由P2X3和/或P2X2/3介导(或以其它方式与P2X3和/或P2X2/3相关)的各种疾病的药物。在此基础上，发明人完成了本发明。
术语定义
为了能够更清楚地理解本发明的技术内容，下面对本发明的术语作进一步说明。
“烷基”指直链和支链的饱和的脂族烃基。“C 1-6烷基”是指具有1至6个碳原子的烷基，优优选为C 1-3烷基；烷基的非限制性的例子包括：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各种支链异构体等更优选。
“环烷基”和“环烷基环”可互换使用，均指饱和单环、双环或多环环状烃基，该基团可以与芳基或杂芳基稠合。环烷基环可以任选地被取代。在某些实施方案中，环烷基环含有一个或多个羰基，例如氧代的基团。“C 3-8环烷基”是指具有3至8个碳原子的单环环烷基，环烷基的非限制性实施例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环丁酮、环戊酮、环戊烷-1,3-二酮等。优选为C 3-6环烷基，包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
“杂环烷基”和“杂环烷基环”可互换使用，均指包含至少一个选自氮、氧和硫的杂原子的环烷基，该基团可以与芳基或杂芳基稠合。杂环烷基环可以任选地被取代。在某些实施方案中，杂环烷基环含有一个或多个羰基或硫代羰基，例如包含氧代和硫代的基团。“3至6元杂环烷基”是指具有3至6个环原子，其中1、2或3个环原子为选自氮、氧和硫的杂原子的单环环状烃基，优选为3至6元杂环烷基中1或2个环原子为选自氮、氧和硫的杂原子。单环杂环烷基的非限制性实施例包括氮丙环基、环氧乙烷基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡咯基、噁唑烷基、二氧戊环基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、二氧六环基、硫代吗啉基、硫代吗啉-1,1-二氧化物、四氢吡喃基、氮杂环丁烷-2-酮基、氧杂环丁烷-2-酮基、二氢呋喃-2(3H)-酮基、吡咯烷-2-酮基、吡咯烷-2,5-二酮基、二氢呋喃-2,5-二酮基、哌啶-2-酮基、四氢-2H-吡喃-2-酮基、哌嗪-2-酮基、吗啉-3-酮基等。
“杂环烯基”和“杂环烯基环”可互换使用，是指环内包含一个或多个碳-碳双键或碳-氮双键的杂环烷基，但并不意图包括如本文所定义的杂芳基部分。该基团可以与芳基或杂芳基稠合。杂环烯基环可以任选地被取代。在某些实施方案中，杂环烯基环含有一个或多个羰基或硫代羰基，例如包含氧代和硫代的基团。“5至6元杂环烯基环”是指具有5至6个环原子，其中1、2或3个环原子为选自氮、氧和硫的杂原子的杂环烯基环。杂环烯基环的非限制性实施例包括4,5-二氢-1H-咪唑环、1,4,5,6-四氢嘧啶环、3,4,7,8-四氢-2H-1,4,6-恶二唑嗪环、1,6-二氢嘧啶环、4,5,6,7-四氢-1H-1,3-二氮杂卓环、2,5,6,7-四氢-1,3,5-恶二氮杂卓环。
“杂芳基”和“杂芳基环”可互换使用，均指具有环碳原子和环杂原子的单环、双环或多环的4n+2芳族环体系(例如，具有以环状排列共享的6或10个π电子)的基团，其中每个杂原子独立地选自氮、氧和硫。本发明中，杂芳基还包括其中上述杂芳基环与一个或多个环烷基环、杂环烷基环、环烯基环、杂环烯基环或芳环稠合的环***。杂芳基环可以任选地被取代。“5至6元杂芳基”是指具有5至6个环原子，其中1、2、3或4个环原子为杂原子的单环杂芳基。非限制性实施例包括噻吩基、呋喃基、噻唑基、异噻唑基、咪唑基、噁唑基、吡咯基、吡唑基、***基、1,2,3-***基、1,2,4-***基、1,2,5-***基、1,3,4-***基、四唑基、异噁唑基、噁二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-恶二唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、四嗪基。“8至10元杂芳基”是指具有8至10个环原子，其中1、2、3或4个环原子为杂原子的双环杂芳基，非限制性实施例包括吲哚基、异吲哚基、吲唑基、苯并***基、苯并噻吩基、异苯并噻吩基、苯并呋喃基、苯并异呋喃基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并噁二唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、苯并噻二唑基、茚嗪基、嘌呤基、吡啶并[3,2-d]嘧啶基、吡啶并[2,3-d]嘧啶基、吡啶并[3,4-d]嘧啶基、吡啶并[4,3-d]嘧啶基、1,8-萘啶基、1,7-萘啶基、1,6-萘啶基、1,5-萘啶基、喋啶基、喹啉基、异喹啉基、噌琳基、喹喔啉基、酞嗪基和喹唑啉基。“杂原子”是指氮、氧或硫。在含有一个或多个氮原子的杂芳基中，只要化合价允许，连接点可以是碳或氮原子。杂芳基双环***在一个或两个环中可以包括一个或多个杂原子。
“卤素”指氟、氯、溴或碘。
“卤代”指基团中一个或多个(如1、2、3、4或5个)氢被卤素所取代。
“卤代烷基”指烷基被一个或多个(如1、2、3、4或5个)卤素取代，其中烷基的定义如上所述。优选为卤代C 1-8烷基，更选为卤代C 1-6烷基，更优选为卤代C 1-3烷基。卤代烷基的例子包括(但不限于)一氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、一氯乙基、1,2-二氯乙基、三氯乙基、一溴乙基、一氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、一氟乙基、二氟乙基、三氟乙基等。
“氘代烷基”指烷基被一个或多个(如1、2、3、4或5个)氘原子取代，其中烷基的定义如上所述。优选为氘代C 1-8烷基，更优选为氘代C 1-6烷基，更优选为氘代C 1-3烷基。氘代烷基的例子包括(但不限于)单氘代甲基、单氘代乙基、二氘代甲基、二氘代乙基、三氘代甲基、三氘代乙基等。
“烷氧基”指-O-烷基，其中烷基的定义如上所述。优选C 1-8烷氧基，更优选C 1-6烷氧基，最优选C 1-3烷氧基。烷氧基的非限制性实施例包含甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、异丁氧基、戊氧基等。
“环烷基氧基”指-O-环烷基，其中环烷基的定义如上所述。优选C 3-8环烷基氧基，更优选C 3-6环烷基氧基。环烷基氧基的非限制性实施例包含环丙基氧基、环丁基氧基、环戊基氧基、环己基氧基等。
“卤代烷氧基”指烷氧基被一个或多个(如1、2、3、4或5个)卤素取代，其中烷氧基的定义如上所述。优选为卤代C 1-8烷氧基，更优选为卤代C 1-6烷氧基，更优选为卤代C 1-3烷氧基。卤代烷氧基包括(但不限于)三氟甲氧基、三氟乙氧基、一氟甲氧基、一氟乙氧基、二氟甲氧基、二氟乙氧基等。
“氨基”指NH 2，“氰基”指CN，“硝基”指NO 2，“苯甲基”指-CH 2-苯基，“氧代基”指＝O，“羧基”指-C(O)OH，“乙酰基”指 -C(O)CH 3，“羟甲基”指-CH 2OH，“羟乙基”指-CH 2CH 2OH或-CHOHCH 3，“羟基”指-OH，“硫醇”指SH。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为1～5个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
本发明中未指出取代基数目时表述任选可取代数目的取代基进行取代。
除非另有定义，本发明所述“各自独立地选自……的取代基”是指当基团上的一个以上的氢被取代基取代时，所述的取代基种类可以相同或不同，所选自的取代基为各自独立的种类。
除非另有定义，否则本文任一基团可以是取代的或未取代的。上述基团被取代时，取代基优选为1至5个独立地选自以下的基团：氰基、卤素(优选氟或氯)、C 1-8烷基(优选C 1-6烷基，更优选C 1-3烷基)、C 1-8烷氧基(优选C 1-6烷氧基，更优选C 1-3烷氧基)、卤代C 1-8烷基(优选卤代C 1-6烷基，更优选卤代C 1-3烷基)、C 3-8环烷基(优选C 3-6环烷基)、卤代C 1-8烷氧基(优选卤代C 1-6烷氧基，更优选卤代C 1-3烷氧基)、C 1-8烷基取代的氨基、卤代C 1-8烷基取代的氨基、乙酰基、羟基、羟甲基、羟乙基、羧基、硝基、C 6-10芳基(优选苯基)、C 3-8环烷基氧基(优选为C 3-6环烷基氧基)、C 2-8烯基(优选C 2-6烯基，更优选C 2-4烯基)、C 2-8炔基(优选C 2-6炔基，更优选C 2-4炔基)、-CONR a0R b0、-C(O)OC 1-10烷基(优选为-C(O)OC 1-6烷基，更优选为-C(O)OC 1-3烷基)、-CHO、-OC(O)C 1-10烷基(优选为-OC(O)C 1-6烷基，更优选为-OC(O)C 1-3烷基)、-SO 2C 1-10烷基(优选为-SO 2C 1-6烷基，更优选为-SO 2C 1-3烷基)、-SO 2C 6-10芳基(优选为-SO 2C 6芳基，如-SO 2-苯基)、-COC 6-10芳基(优选为-COC 6芳基，如-CO-苯基)、4至6元饱和或不饱和单杂环、4至6元饱和或不饱和单环、5至6元单环杂芳基环、8至10元双环杂芳基环、螺环、螺杂环、桥环或桥杂环，其中R a0、R b0各自独立地为氢或C 1-3烷基。
本文以上所述的各类取代基团其自身也是可以被本文所描述的基团取代。
药物组合物
通常本发明化合物或其药学上可接受的盐、或其溶剂化物、或其立体异构体、或前药可以与一种或多种药用载体形成适合的剂型施用。这些剂型适用于口服、直肠给药、局部给药、口内给药以及其他非胃肠道施用(例如，皮下、肌肉、静脉等)。例如，适合口服给药的剂型包括胶囊、片剂、颗粒剂以及糖浆等。这些制剂中包含的本发明的化合物可以是：固体粉末或颗粒；水性或非水性液体中的溶液或是混悬液；油包水或水包油的乳剂等。上述剂型可由活性化合物与一种或多种载体或辅料经由通用的药剂学方法制成。上述的载体需要与活性化合物或其他辅料兼容。对于固体制剂，常用的无毒载体包括但不限于甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、纤维素、葡萄糖、蔗糖等。用于液体制剂的载体包括水、生理盐水、葡萄糖水溶液、乙二醇和聚乙二醇等。活性化合物可与上述载体形成溶液或是混悬液。
“药学上可接受的载体”是指无毒、惰性、固态、半固态的物质或液体灌装机、稀释剂、封装材料或辅助制剂或任何类型辅料，其与患者相兼容，最好为哺乳动物，更优选为人，其适合将活性试剂输送到目标靶点而不终止试剂的活性。
本发明的组合物以符合医学实践规范的方式配制、定量和给药。给予化合物的“治疗有效量”由要治疗的具体病症、治疗的个体、病症的起因、药物的靶点以及给药方式等因素决定。
“治疗有效量”是指将引起个体的生物学或医学响应，例如降低或抑制酶或蛋白质活性或改善症状、缓解病症、减缓或延迟疾病进程或预防疾病等的本发明化合物的量。
本发明的所述药物组合物或所述药用组合物中含有的本发明化合物或其药学上可接受的盐、或其溶剂化物、或其立体异构体、或其前药的治疗有效量优选为0.1mg-5g/kg(体重)。
“患者”是指一种动物，最好为哺乳动物，更好的为人。术语“哺乳动物”是指温血脊椎类哺乳动物，包括如猫、狗、兔、熊、狐狸、狼、猴子、鹿、鼠、猪和人类。
“治疗”是指减轻、延缓进展、衰减、预防，或维持现有疾病或病症(例如癌症)。治疗还包括将疾病或病症的一个或多个症状治愈、预防其发展或减轻到某种程度。
所述“药学上可接受的盐”包括药学上可接受的酸加成盐和药学上可接受的碱加成盐。
“药学上可接受的酸加成盐”是指能够保留游离碱的生物有效性而无其他副作用的、与无机酸或有机酸所形成的盐。无机酸盐包括但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐等；有机酸盐包括但不限于甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、乙醇酸盐、葡糖酸盐、乳酸盐、草酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、谷氨酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐和水杨酸盐等。这些盐可通过本专业已知的方法制备。
“药学上可接受的碱加成盐”，包括但不限于无机碱的盐，如钠盐，钾盐，钙盐和镁盐等，并且包括但不限于有机碱的盐，比如铵盐，三乙胺盐，赖氨酸盐，精氨酸盐等。这些盐可通过本专业已知的方法制备。
本发明的化合物可以含有一个或多个手性中心，并以不同的光学活性形式存在。当化合物含有一个手性中心时，化合物包含对映异构体。本发明包括这两种异构体和异构体的混合物，如外消旋混合物。对映异构体可以通过本专业已知的方法拆分，例如结晶以及手性色谱等方法。当化合物含有多于一个手性中心时，可以存在非对映异构体。本发明包括拆分过的光学纯的特定异构体以及非对映异构体的混合物。非对映异构体可由本专业已知方法拆分，比如结晶以及制备色谱。
制备方法
本发明提供了式(I)化合物的制备方法，使用本领域技术人员已知的标准合成技术或使用本领域已知的方法与本发明描述的方法组合可以合成式(I)化合物。本发明给出的溶剂、温度和其它反应条件可以根据本领域技术而改变。所述反应可以按顺序使用，以提供本发明的化合物，或者它们可以用于合成片段，所述片段通过本发明所描述的方法和/或本领域已知的方法随后加入。
本发明描述的化合物可以使用与下述类似的方法或实施例中所述的示例性方法，或本领域技术人员所用的相关公开文献，通过使用适当的可选择的起始原料合成。用于合成本发明所描述的化合物的起始原料可以是合成的或可以从商业来源获得。本发明描述的化合物和其它相关具有不同取代基的化合物可以使用本领域技术人员已知的技术和原料合成。制备本发明公开的化合物的一般方法可以来自本领域已知的反应，并且该反应可以通过由本领域技术人员所认为适当的试剂和条件修改，以引入本发明提供的分子中的各种部分。
与现有技术相比，本发明的主要优点在于：提供了一系列结构新颖的吗啉衍生物，其对P2X3具有较高的抑制活性，对P2X2/3抑制活性较低，具有用于治疗与P2X3活性或与P2X2/3活性相关的疾病的潜能。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施 例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。除非另行定义，本文所用的术语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或同等的方法及材料皆可应用于本发明中。
试剂与仪器
1HNMR：Bruker AVANCE-400核磁仪，内标为四甲基硅烷(TMS)。
LC-MS：Agilent 1290 HPLC System/6130/6150 MS液质联用质谱仪(生产商：安捷伦)，柱子Waters BEH/CHS，50×2.1mm，1.7μm。
制备高效液相色谱(pre-HPLC)：GX-281(生产商：吉尔森)。
采用ISCO Combiflash-Rf75或Rf200型自动过柱仪，Agela 4g、12g、20g、40g、80g、120g一次性硅胶柱。
已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可以购自ABCR GmbH&Co.KG，Acros Organics，Aldrich Chemical Company，韶远化学科技(Accela ChemBio Inc)和达瑞化学品等公司。
实施例中，反应进程的监测可采用薄层色谱法(TLC)，化合物纯化可采用柱层析。柱层析或TLC所用的展开剂体系可选自：二氯甲烷和甲醇体系、正己烷和乙酸乙酯体系、石油醚和乙酸乙酯体系和丙酮体系等，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节。
如本文所用，DCM为二氯甲烷，DCE为1,2-二氯乙烷，DMF为N,N-二甲基甲酰胺，DMSO为二甲基亚砜，THF为四氢呋喃，EA为乙酸乙酯，PE为石油醚，n-BuLi为正丁基锂，HATU为2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯，TEA为三乙胺，DIEA或DIPEA为N,N-二异丙基乙胺，NBS为N-溴代丁二酰亚胺，NCS为N-氯代丁二酰亚胺，TBAF为四丁基氟化铵。
如本文所用，室温是指约20-30℃。
中间体V1的制备
步骤1：将NaOH(14.42g,360.56mmol)溶到水(300mL)中，然后降到0℃，把Br 2(19.45g,121.69mmol)缓慢滴加到反应体系中保持0℃反应半个小时，然后把((苄氧基)羰基)-L-天冬酰胺(30g,112.68mmol)分批加到反应体系中，升到55℃反应3小时。反应液降到室温，用EA萃洗两遍，然后把水相用6M HCl调到PH为1，有固体析出，过滤，旋干滤饼得到V1-1(24.6g)。MS m/z(ESI):265.0[M+1] +。
步骤2：将V1-1(6.3g,23.84mmol)溶于MeOH(50mL)中。将反应液冷却到-20℃,然后SOCl 2(2.13g,17.88mmol,1.30mL)加到反应液中。反应液在-20℃搅拌2小时，再在25℃条件下搅拌16时。反应完全后，旋干溶剂，加入水和EtOAC，分离，EtOAc萃取两次，Na 2SO 4干燥。旋干EtOAC得到V1-2(6g)。MS m/z(ESI):279.0[M+1] +。
步骤3：将V1-2(4g,14.38mmol)溶于DMF(40mL)中，然后加入Cs 2CO 3(7.03g,21.56mmol)和碘甲烷(4.08g,28.75mmol)。该反应在室温条件下搅拌16小时。反应完成后，加入水，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥。过滤后旋干溶剂得到V1-3(3.4g)。MS m/z(ESI):293.0[M+1] +。
步骤4：将V1-3(3.4g,11.63mmol)溶于甲醇(40mL)中，然后加入10％Pd/C(1.23g,1.16mmol,10％purity)。该反应在氢气中室温条件下搅拌2小时，并通过LC-MS监测反应情况，反应完成后，过滤。过滤后得到V1-4(1.5g)。MS m/z(ESI):159.1[M+1] +。
步骤5：将V1-4溶于DMF(20mL)中，然后加入3-溴丙-1-烯(2.29g,18.97mmol)和Cs 2CO 3(4.64g,14.23mmol)。该反应在室温条件下搅拌16小时，并通过LC-MS监测反应情况。反应完成后，加入水得到固体，EtOAc萃取，无水硫酸钠干燥。旋干溶剂后得到V1-5(1.3g)。MS m/z(ESI):199.1[M+1] +。
步骤6：将V1-5(1.3g,6.56mmol)溶于乙醇(15mL)中，然后加入NaBH 4(248.10mg,6.56mmol)。该反应在室温条件下搅拌2小时，并通过LC-MS监测反应情况。反应完成后，加入醋酸淬灭，碳酸钠中和，过滤，滤液旋干后得到V1-6(1.1g)。MS m/z(ESI):171.1[M+1] +。
步骤7：将V1-6(1.1g,6.46mmol)溶于DCM(15mL)中，然后加入对甲苯磺酰氯(2.46g,12.93mmol)和TEA(1.96g,19.39mmol,2.70mL)。该反应在室温条件下搅拌16小时，并通过LC-MS监测反应情况，反应完成后。减压旋干后经过柱分离(20g， 0～80％EA/PE)得到V1-7(410mg)。MS m/z(ESI):325.1[M+1] +。
步骤8：将AD-mix-beta(CAS NO：148618-32-0)(9.85g,12.64mmol)加入水(150mL)和叔丁醇(150mL)的混合溶剂中，室温搅拌得黄色澄清溶液。冷却到0℃后加入V1-7(410mg,1.26mmol)。反应液在0℃搅拌24小时,LC-MS监测，反应完成。加入35g亚硫酸钠后，升温到室温搅拌30分钟。加入饱和氯化钠溶液(150mL)，用DCM(250mLX5)萃取。有机相干燥后减压浓缩。用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系(二氯甲烷/甲醇：1/0～10/1)纯化得到V1-8(170mg)。MS m/z(ESI):359.0[M+1] +。
步骤9：V1-8(170mg,474.32μmol)溶于DMF(5mL)中，然后加入咪唑(129.16mg,1.90mmol)和TBSCl(142.98mg,948.64μmol)。反应液在室温搅拌4小时,LC-MS监测，反应完成。加入饱和食盐水和乙酸乙酯，乙酸乙酯用食盐水洗两遍，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂。用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系(二氯甲烷/甲醇：1/0～10/1)纯化得到V1-9(190mg)。MS m/z(ESI):473.2[M+1] +。
步骤10：将V1-9(190mg,401.97μmol)溶于THF中，冷却到0℃后加入NaH(32.16mg,803.94μmol,60％purity)。反应液在0℃搅拌4小时,LC-MS监测，反应完成。加入饱和氯化铵溶液淬灭，用DCM萃取。有机相干燥后减压浓缩得到V1-10(105mg)。MS m/z(ESI):301.1[M+1] +。
步骤11：将V1-10(160mg,532.50μmol)溶于THF(5mL)。然后加入TBAF(1M,639.00μL)，反应液在室温搅拌2小时,LC-MS监测，反应完成，旋干溶剂。用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系(二氯甲烷/甲醇：1/0～10/1)纯化所得残余物，得到V1-11(95mg)。MS m/z(ESI):187.1[M+1] +。
步骤12：V1-11(95mg,510.18μmol)加入DCM(2mL)。冷却到0℃后加入戴斯-马丁氧化剂(259.67mg,612.22μmol)。反应液在室温条件下搅拌2小时,LC-MS监测，反应完成。加入亚硫酸钠后，升温到室温搅拌5分钟。加入饱和氯化钠溶液，用DCM萃取。有机相干燥后减压浓缩。用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系(二氯甲烷/甲醇：1/0～10/1)纯化所得残余物，得到V1(90mg)。MS m/z(ESI):203.1[M+1+18] +.
中间体V2的制备
步骤1：将三光气(19.07g,64.28mmol)的THF(100mL)溶液加入到(2S)-2-氨基-3-羟基丙酸甲酯(10g,64.28mmol,HCl)的THF(200mL)中，加热到80℃搅拌4小时。减压旋干溶剂，经柱层析纯化(石油醚含80-90％乙酸乙酯为流动相)得到V2-1(8g)。MS m/z(ESI):146.1[M+1] +。
步骤2：将V2-1(6g,41.35mmol)和碳酸铯(26.96g,82.69mmol)溶于DMF(25mL)中，然后将溴丙烯(10.00g,82.69mmol)加入其中。该反应在室温下搅拌12小时，LCMS显示反应完全。过滤，滤液减压旋干。柱层析纯化(石油醚含90％四氢呋喃为流动相)得到V2-2(5g)。MS m/z(ESI):186.0[M+1] +。
步骤3：将V2-2(4g,21.60mmol)溶于EtOH(5mL)中，然后将NaBH 4(4.09g,108.00mmol)加入其中。该反应在室温下搅拌1小时。通过LC-MS监测反应完成。醋酸淬灭反应，过滤,滤液旋干，溶于DCM中，加入碳酸钾固体，过滤，滤液直接旋干得到V2-3(2.5g)。MS m/z(ESI):158.1[M+1] +。
步骤4：将V2-3(2g,12.73mmol)，对甲苯磺酰氯(2.91g,15.27mmol)溶于DCM(30mL)中，然后将TEA(2.57g,25.45mmol,3.54mL)加入其中。该反应在室温下搅拌6小时。通过LC-MS监测反应完成。饱和碳酸氢钠加入反应液中，DCM萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压旋干，柱层析纯化(石油醚含50％四氢呋喃为流动相)得到V2-4(2.6g)，MS m/z(ESI):312.0[M+1] +。
步骤5：将AD-MIX-BETA(55.29g,70.98mmol)溶于水(100mL)溶剂中，冷却至0℃，将V2-4(1.7g,5.46mmol)溶液加入其中。该反应在0℃条件下搅拌24小时。通过LC-MS监测反应完成。加入55g亚硫酸钠，搅拌半小时。加入500毫升DCM萃取，水相用300毫升DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压旋干，柱层析纯化(二氯甲烷含20％甲醇为流动相)得到V2-5(1.5g,4.34mmol,79.55％yield)，MS m/z(ESI):346.0[M+1] +
步骤6：将V2-5(1.4g,4.05mmol)和咪唑(1.10g,16.21mmol)溶于DMF(15mL)中，冷却至0℃，将TBSCl(1.22g,8.11mmol)加入其中。该反应在室温条件下搅拌2小时。通过LC-MS监测反应完成。加入水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取。 有机相干燥后减压浓缩，经柱层析纯化(石油醚含80～100％乙酸乙酯)得到产物V2-6(1.4g)。MS m/z(ESI):460.1[M+1] +。
步骤7：将V2-6溶于THF(5mL)中，冷却至0℃，将NaH(365.48mg,9.14mmol,60％purity)加入其中。该反应在室温件下搅拌2小时。通过LC-MS监测反应完成。反应完成后，饱和食盐水淬灭反应，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂。经柱层析纯化(二氯甲烷含20％甲醇为流动相)得到V2-7(0.6g)，MS m/z(ESI):288.1[M+1] +。
步骤8：将V2-7(0.6g,2.09mmol)溶于THF(6mL)中，然后将TBAF(654.96mg,2.50mmol)加入其中。该反应在室温条件下搅拌2小时。通过LC-MS监测反应完成。加水淬灭反应，减压旋干溶剂。柱层析纯化(石油醚含90％四氢呋喃为流动相)得到V2-8(320mg)，MS m/z(ESI):174.1[M+1] +。
步骤9：将V2-8(300mg,1.73mmol)溶于乙腈(10mL)中，然后将IBX(727.68mg,2.60mmol)加入其中。该反应100℃条件下搅拌2小时。通过LC-MS监测反应完成。降至室温，过滤，滤饼用DCM洗涤。滤液减压旋干得到V2(230mg)。MS m/z(ESI):172.0[M+1] +。
中间体V3的制备
步骤1：将原料(R)-3-氨基丙烷-1,2-二醇(9.1g，0.1mol)溶解在DCM(500ml)中，冷却至-20℃，加入TEA(12.1g，0.12mol)，再将氯乙酰氯(12.43g，0.12mol)的DCM溶液慢慢滴加进入，然后自然升温至室温，搅拌过夜，过滤，滤液水洗后干燥，浓缩，剩余黄色固体用甲基叔丁基醚洗，剩余固体真空干燥，得到V3-1(16g)MS m/z(ESI):168.0[M+1] +。
步骤2：叔丁醇钾(27g，0.241mol，2.5eq)溶液在叔戊醇(200ml)中，将V3-1(16g，0.0952mol)的叔戊醇(300ml)溶液慢慢滴加进去，在室温条件下，搅拌1小时，反应液用乙酸调节PH＝3-4，析出大量黄色固体，过滤，固体有水淋洗至中性，真空干燥，得到V3-2(7.7g)MS m/z(ESI):132.1[M+1] +。
步骤3：将V3-2(7.7g58.8mmol)悬浮在DCM(300ml)中，加入TEA(7.12g，70.6mmol)，再将苯甲酰氯(9.06g，64.7mmol)慢慢滴加进入，反应液室温下搅拌4小时。反应结束后，反应液用水洗，干燥，浓缩，用硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯/石油醚＝3/1),得到V3-3(9.12g)MS m/z(ESI):236.1[M+1] +。
步骤4：将V3-3(2.35g，10mmol)溶解在DCM(80ml)中，加入四氟硼酸三甲基氧鎓(1.78g，12mmol)，室温下搅拌6小时，然后将肼基甲酸甲酯(1.08g，12mmol)加入，室温搅拌过夜，反应液浓缩得到V3-4(5g)。MS m/z(ESI):308.1[M+1] +。
步骤5：将V3-4(2g)溶解在DMF(20ml)中，微波条件下加热到170℃，反应1小时，冷却至室温，反应液浓缩得到红色油状物。产物用硅胶柱层析纯化(甲醇/二氯甲烷＝1/20)得到V3-5(0.46g)。MS m/z(ESI):276.1[M+1] +。
步骤6：将V3-5(0.46g，1.67mmol)溶解在DMF(15ml)中，加入碳酸钾(0.69g，5mmol)和碘甲烷(0.71g，5mmol)，室温搅拌20小时，反应液过滤，浓缩，产物用硅胶柱层析纯化(甲醇/二氯甲烷＝1/20)得到V3(0.26g)。MS m/z(ESI):290.2[M+1] +。
中间体V4的制备
步骤1：参考中间体V3步骤4的方法，区别是用乙酰肼替代肼基甲酸甲酯，可制备得到V4-1。
步骤2：参考中间体V3步骤5的方法，可制备得到V4。MS m/z(ESI):274.1[M+1] +。
中间体V5的制备
参考中间体V3步骤6的方法，区别是用碘代异丙烷替代碘甲烷，可制备得到V5。MS m/z(ESI):318.2[M+1] +。
中间体V6的制备
参考中间体V3步骤6的方法，区别是用2,2,2-三氟乙基甲磺酸酯替代碘甲烷，可制备得到V6。MS m/z(ESI):358.1[M+1] +。
中间体V7的制备
参考中间体V3步骤6的方法，区别是用2,2'-联吡啶取代碘甲烷替代碘甲烷，可制备得到V7。MS m/z(ESI):316.1[M+1] +。
中间体V8的制备
步骤1：将N-氯代乙酰胺(20g,145.39mmol)和三苯基膦(38.13g,145.39mmol)溶到乙腈(200mL)中，然后在90℃反应12小时。反应液旋干，然后用DCM溶解，用2N的氢氧化钾水溶液洗涤，DCM萃取，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，旋干得到化合物V8-1(45g)。MS m/z(ESI):364.1[M+1] +。
步骤2：将化合物V8-1(18g,83.63mmol)和N-甲氧基-N-甲基-2-(三苯基亚膦基)乙酰胺(30.39g,83.63mmol)加入DCM(200mL)中，反应液室温搅拌16小时。反应液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系(石油醚/乙酸乙酯：1/0～1/1)纯化所得残余物，得到化合物V8-2(27g)，MS m/z(ESI):245.1[M+1] +。
步骤3：将化合物V8-2(30g,99.88mmol)溶解在甲醇(300mL)中，加入Pd/C(10％)(30g,99.88mmol)。反应液在氢气保护下搅拌12小时，反应液过滤，滤液减压浓缩得到化合物V8-3(30g)。MS m/z(ESI):247.1[M-55] -。
步骤4：将1-溴-3,5-二氟苯(15.32g,79.37mmol)溶解于THF(100mL)中，氮气保护下冷却至-78℃，滴加入LDA(2M,49.61mL)。反应液在-78℃搅拌1小时。然后滴加化合物V8-3(20g,66.15mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液。反应液在-78℃搅拌1小时后，升温到25℃继续搅拌3小时。加入饱和氯化铵溶液(50mL)淬灭反应，用二氯甲烷(50mL X 3)萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压旋干。用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系(石油醚/乙酸乙酯：1/0～3/1)纯化所得残余物，得到化合物V8-4(20g)。MS m/z(ESI):336.0[M+1] +。
步骤5：将化合物V8-4(20g,46.05mmol)溶解到THF(200mL)中，冷却到0℃,然后加入NaH(3.53g,88.24mmol,60％purity)，反应液在室温搅拌半小时。然后加入叔丁基二甲基氯硅烷(13.88g,92.11mmol)，反应液继续搅1小时。加入饱和氯化铵溶液(100mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(100mL X 3)萃取,有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到化合物V8-5(25g)。MS m/z(ESI):492.0[M+1] +。
步骤6：将化合物V8-5(25g,45.58mmol)加到水(100mL)和THF(100mL)中，冷却到0℃，然后加入N-溴代丁二酰亚胺(8.11g,45.58mmol)。反应液在0℃搅拌1小时。加入水(100mL)，用乙酸乙酯(100mL X 3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系(石油醚/乙酸乙酯：1/0～4/1)得到化合物 V8(19g)。MS m/z(ESI):413.9[M+1] +。
中间体V9的制备
步骤1：将化合物V10(2.4g,4.79mmol)溶于水(2mL)和甲醇(20mL)，加入氢氧化锂(343.81mg,14.36mmol)，室温搅拌2小时。加入6N盐酸溶液调节PH至1，加入二氯甲烷萃取，有机相无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到化合物V9-1(2.2g),MS m/z(ESI):488.1[M+1] +。
步骤2:将化合物V9-1(2.2g,4.51mmol)溶于DMF(21.85mL)，加入甲胺盐酸盐(609.40mg,9.03mmol)，HATU(2.55g,6.77mmol)和三乙胺(2.28g,22.56mmol,3.15mL)，室温搅拌过夜，减压浓缩。通过柱层析(0-30％，DCM/MeOH)分离得到V9-2(2.1g)，MS m/z(ESI):501.1[M+1] +。
步骤3：将V9-2(2.1g,4.20mmol)溶于甲醇(20mL)，加入HCL(4.0M,3.15mL)，室温搅拌2小时。减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液调剂PH至8，二氯甲烷/甲醇(10/1)萃取。有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到V9(2g)，MSm/z(ESI):401.1[M+1] +。
中间体V10的制备
参考中间体化合物V25-3的制备方法，区别是用2-氯-4-甲基吡啶替代2-氯-5-氟-4-甲基吡啶，可制备得到V10。MS m/z(ESI):502.1[M+1] +。
中间体V11的制备
步骤1：将4-甲基-2-硝基苯胺(1g,6.57mmol)溶于THF(20mL)，在0℃加入钠氢(788.61mg,19.72mmol,60％purity)，0℃搅拌半小时，加入Boc 2O(2.15g,9.86mmol)，室温搅拌半小时。加入水淬灭反应，加入乙酸乙酯萃取，有机相减压浓缩得到化合物V11-1(1.6g)。MS m/z(ESI):153.1(M+H-100)。
步骤2：将化合物V11-1(1.6g,6.34mmol)溶于甲醇(20mL)，加入10％Pd/C(770.33mg,6.34mmol)，在氢气条件下室温反应2小时。过滤，减压浓缩得到化合物V11(1.4g)。MS m/z(ESI):167.1(M+H-56)。
中间体V12的制备
步骤1：将3,5-二氟-4-甲酰基-苯甲酸(1g,5.37mmol)和甲胺盐酸盐(362.78mg,5.37mmol)溶于DMF(12.75mL)中，然后将HATU(3.04g,8.06mmol)和TEA(1.63g,16.12mmol,2.25mL)加入其中。该反应在室温条件下搅拌过夜。反应完成后，减压旋干溶剂后经过柱分离(40g，0～60％EA/PE)得到化合物V12-1(650mg)。MS m/z(ESI):218.0(M+H+18)。
步骤2：将化合物V12-1(5.5g,27.62mmol)溶于DMF(6mL)，加入硫酸过氧钾(25.44g,41.43mmol)，室温搅拌过夜。反应液过滤，滤液减压浓缩得到黄色油状物，油状物通过过柱分离(80g，0～30％MeOH/DCM)得到化合物V12-2(2.1g)。MS m/z(ESI):216.1[M+1]。
步骤3：将化合物V11(300mg,1.35mmol)溶于乙腈(20mL)，加入化合物V12-2(290.38mg,1.35mmol)和N，N，N'， N'-四甲基氯甲氨基六氟磷酸盐(1.14g,4.05mmol)，室温搅拌半小时。加入N-甲基咪唑(224.34mg,2.70mmol)，室温搅拌过夜。减压浓缩得到，油状物通过柱分离(20g，0-90％EA/PE)得到化合物V12-3(420mg)。MS m/z(ESI):320.1(M+H-100)。
步骤4：将化合物V12-3(410mg,977.54μmol)溶于甲醇(10mL)，加入盐酸甲醇(10mL)，反应液搅拌4小时，减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液，有固体析出，过滤得到化合物V12(180mg)。产率57.67％。MS m/z(ESI):320.1[M+1]。
中间体V13的制备
步骤1：将4-溴-2,6-二氟苯甲醛(9.38g,42.43mmol),5-氟-4-甲基吡啶-2-胺(4.46g,35.36mmol),(2S)-2-乙炔基吗啉-4-羧酸叔丁酯(8.96g,42.43mmol)，三氟甲基磺酸铜(II)(3.84g,10.61mmol)，N,N-二甲基乙酰胺(924.17mg,10.61mmol)和氯化亚铜(1.05g,10.61mmol)溶于Xylene(100mL)。反应液在氮气保护下85℃搅拌16小时。并通过LC-MS监测反应情况。反应完成后，旋干溶剂。减压旋干后经过柱分离(120g，0～80％EA/PE)得到化合物V13-1(7.1g)。MS m/z(ESI):540.1[M+1]。
步骤2：将化合物V13-1(2.3g,4.26mmol)溶于甲醇(10mL)和HCl/dioxane(10mL)中。该反应在室温条件下搅拌4小时.并通过LC-MS监测反应情况。反应完成后，旋干溶剂得到化合物V13-2(1.7g)。MS m/z(ESI):440.0[M+1]。
步骤3：将化合物V13-2(1.7g,3.86mmol)溶于DCM(19.33mL)中，然后将DIEA(998.09mg,7.72mmol,1.35mL)。将反应液冷却到0℃，然后加入2,2,2-三氘代乙酰氯(472.15mg,5.79mmol)。该反应在室温条件下搅拌0.5小时.反应完成后，加入水和DCM，水相用DCM萃取两遍，无水硫酸钠干燥。减压旋干后得到化合物V13(1.8g)。MS m/z(ESI):485.0[M+1]。
中间体V15的制备
参考中间体V18的制备方法，区别是用4-甲基吡啶-2-胺替代5-氟-4-甲基吡啶-2-胺，可制备得到V15。MS m/z(ESI):427.1[M+1] +。
中间体V18的制备
步骤1：将中间体V8(147.47mg)溶于乙醇(1mL)中。该反应在120℃条件下置于空气中搅拌，大约半小时溶剂挥发完，反复继续加乙醇(1mLx8)，搅拌8小时。LCMS显示反应完全.减压旋干溶剂，经柱层析纯化(石油醚含50-60％乙酸乙酯为流动相)得到V18-1(60mg)。MS m/z(ESI):540.0[M+1] +。
步骤2：将V18-1(59.73mg)和吡咯烷-2-酮(18.81mg)溶于二氧六环(10mL)中，然后将Pd 2dba 3(10.12mg)，Xantphos(12.79mg)，碳酸铯(72.07mg)加入其中。该反应在氩气保护下100℃条件下搅拌8小时。LCMS显示反应完全。反应完成后，减压旋干溶剂，经柱层析纯化(二氯甲烷含10-15％甲醇为流动相)得到V18-2(40mg)。MS m/z(ESI):545.2[M+1] +。
步骤3：将V18-2(40mg,73.45μmol)溶于二氧六环(2.85mL)中，然后将盐酸气(二氧六环)(4M,146.91μL)加入其中。该反应在室温下搅拌1小时。LC-MS监测反应结束。减压旋干溶剂。减压旋干溶剂，得到V18(35mg)，MS m/z(ESI):445.1[M+1] +。
中间体V21的制备
参考中间体V25的制备方法，区别是用2-氯-4-甲基吡啶替代2-氯-5-氟-4-甲基吡啶，可制备得到V21。MS m/z(ESI):444.0[M+1] +。
中间体V25的制备
步骤1：将2-氯-5-氟-4-甲基吡啶(4g,27.48mmol)和氨基甲酸叔丁酯(4.83g,41.22mmol)溶解于甲苯(40mL)中，加入碳酸铯(13.43g,41.22mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(2.52g,2.75mmol)和4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(1.59g,2.75mmol)。反应液在氮气保护下100℃搅拌12小时。反应液冷却到室温，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系(石油醚/乙酸乙酯：5/0～3/1)纯化所得残余物，得到V25-1(4g)。MS m/z(ESI):171.0[M-55] -。
步骤2：将V25-1(5g,22.10mmol)加入DCM(50mL)中，然后把三氟乙酸(8.53g,74.79mmol,5.56mL)滴加到反应液中，室温搅拌12小时。用1N的氢氧化钠水溶液(50mL)淬灭反应液，然后用DCM(50mL)萃取三次，合并有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得到V25-2(2.5g)。MS m/z(ESI):127.0[M+1] +。
步骤3：将V25-2(630.22mg,5.00mmol)和3,5-二氟-4-甲酰基苯甲酸甲酯(1g,5.00mmol)加入乙醇(20mL)中，在80℃搅拌反应12小时。然后把反应液旋干，溶到甲苯(20mL)中，加入叔丁基(S)-2-乙炔基吗啉-4-羧酸盐(1.06g,5.00mmol)，三氟甲烷磺酸铜(Ⅱ)(542.14mg,1.50mmol)，氯化亚铜(148.40mg,1.50mmol)和N,N-二甲基乙酰胺(130.59mg,1.50mmol)，反应液在氮气保护下85℃搅拌12小时。反应液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系(二氯甲烷/甲醇：1/0～10/1)纯化，得到V25-3(1g)。MS m/z(ESI):520.1[M+1] +。
步骤4：将V25-3(0.3g,577.47μmol)溶解于DCM(30mL)中，加入4M盐酸的1,4-二氧六环溶液(1.44mL)。反应液在室温搅拌2小时。反应液直接旋干得到V25-4(220mg)。MS m/z(ESI):420.1[M+1] +。
步骤5：将V25-4(0.5g,1.19mmol)加入DCM(20mL)中，然后加入TEA(241.28mg,2.38mmol,332.56μL)和氯甲酸甲酯(168.99mg,1.79mmol)，反应液室温反应2小时。加入水(20mL)，用DCM(20mLX3)萃取。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系(二氯甲烷/甲醇：1/0～10/1)纯化所得残余物得到V25-5(400mg)。MS m/z(ESI):478.1[M+1] +。
步骤6：将V25-5(0.4g,837.82μmol)溶于乙醇(20mL)中，加入水合肼(524.27mg,8.38mmol)，反应液在90℃搅拌4小时。反应液直接旋干得到V25-6(400mg)。MS m/z(ESI):478.1[M+1] +。
步骤7：将V25-6(0.4g,837.81μmol)溶到DCM(20mL)中，加入TEA(169.56mg,1.68mmol,233.71μL)和二碳酸二叔丁酯(274.27mg,1.26mmol)，室温搅拌过夜。反应液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系(石油醚/乙酸乙酯：2/1～1/1)得到V25-7(400mg)。MS m/z(ESI):578.2[M+1] +。
步骤8：将V25-7(200mg,346.29μmol)和劳森试剂(210.10mg,519.43μmol)加入1,4二氧六环(4mL)中，在微波反 应器中140℃搅拌40分钟。冷却到室温，反应液减压浓缩。用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系(二氯甲烷/甲醇：10/1～5/1)纯化所得残余物，得到V25-8(150mg)。MS m/z(ESI):594.2[M+1] +。
步骤9：将V25-8(150mg,252.69μmol)溶解于DCM(6mL)中，滴加入三氟乙酸(2mL)。反应液室温搅拌1小时。反应液减压浓缩后，用DCM(20mL)稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)洗，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，有机相减压浓缩得到V25-9(100mg)。MS m/z(ESI):494.1[M+1] +。
步骤10：将V25-9(100mg,243.16μmol)和N,N'-羰基二咪唑(39.43mg,243.16μmol)溶解于四氢呋喃(20mL)中，反应液在室温搅拌1小时。减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系(二氯甲烷/甲醇：10/1～5/1)纯化所得残余物，得到V25-10(57mg)。MS m/z(ESI):520.1[M+1] +。
步骤11：将V25-10(57mg,109.72μmol)加入4N盐酸的1,4-二氧六环溶液(2mL)和浓盐酸(2mL)中，反应液加热到110℃搅拌过夜。反应液减压浓缩得V25(50mg)。MS m/z(ESI):462.1[M+1] +。
中间体V26的制备
参考中间体V28的制备方法，区别是用4-甲基吡啶-2-胺替代4-氯吡啶-2-胺，可制备得到V26(100mg)。MS m/z(ESI):444.0[M+1] +。
中间体V28的制备
步骤1：将中间体V8(450mg,876.91μmol)和4-氯吡啶-2-胺(112.73mg,876.91μmol)放置于微波管中，加入乙醇(0.5mL)。该反应在120℃搅拌4小时(敞口反应，保持很少量的溶剂)。减压旋干溶剂。用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系(石油醚/乙酸乙酯：1/0～2/1)纯化所得残余物得到V28-1(142mg)。LC-MS m/z(ESI):542.1[M+1] +。
步骤2：将V28-1(120mg，0.221mmol)和氰化锌(18.17mg,154.75μmol)放置于微波管中，加入DMF(5mL)，然后将双(三叔丁基膦)钯(0)(11.30mg,22.11μmol)加入其中。该反应在微波反应器中90℃条件下搅拌30分钟。反应完成后，冷却至室温，减压旋干溶剂后得到V28-2(108mg)。MS m/z(ESI):489.2[M+1] +。
步骤3：将V28-2(108mg,220.90μmol)和盐酸羟胺(23.03mg,331.35μmol)加入乙醇(10mL)中，然后加入DIPEA(57.10mg,441.80μmol)。反应液在80℃搅拌2小时。反应液直接减压浓缩，用制备薄层色谱以层析体系(二氯甲烷/甲醇：100/7)纯化所得残余物得到V28-3(60mg)。MS m/z(ESI):522.2[M+1] +。
步骤4：将V28-3(60mg,114.96μmol)和N,N'-硫羰基二咪唑(30.73mg,172.43μmol)溶解于四氢呋喃(10mL)。反应液在室温搅拌2小时。反应液加入20mL水，用乙酸乙酯(30mLx3)萃取。有机相干燥后，过滤，减压浓缩得到V28-4(72mg)。MS m/z(ESI):632.2[M+1] +。
步骤5：将V28-4(72mg,126.41μmol)溶解于四氢呋喃(20mL)中，冷却到0℃。加入三氟化硼***(89.71mg,632.04μmol)。反应液室温搅拌16小时。减压浓缩得到V28-5(63mg)。MS m/z(ESI):564.1[M+1] +。
步骤6：将V28-5(63mg,111.70μmol)溶解于甲醇(2.86mL)中，加入盐酸的1,4-二氧六环溶液(4M,1mL)。反应液在室温搅拌1小时。减压浓缩，加入7N氨的甲醇溶液调节PH到中性。用制备薄层色谱以层析体系(二氯甲烷/甲醇/氨的甲醇溶液：100/10/2)纯化所得残余物得到V28(50mg)。MS m/z(ESI):464.1[M+1] +。
实施例1：化合物Z-1的制备
将中间体V9(0.1g,249.74μmol)和2-羟基-2-甲基丙酸(31.20mg,299.68μmol)溶到DMF(10mL)中，然后依次加入DIPEA(32.28mg,249.74μmol)和HATU(94.22mg,249.74μmol)，然后在25℃反应2个小时。加入10mL水淬灭反应液，再加入20mL的乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用制备液相色谱(制备柱：21.2X250mm C18柱；体系：10mM NH4HCO3H2O；波长：254/214nm；梯度：30％-60％乙腈变化)纯化所得残余物，得到化合物Z-1(15mg)。MS m/z(ESI):487.2[M+1] +； 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.66(d,J＝4.7Hz,1H),8.36(d,J＝7.1Hz,1H),7.61(d,J＝8.0Hz,2H),6.80(dd,J＝7.3,1.7Hz,1H),5.30(s,1H),4.56(s,1H),4.07(s,1H),3.64(d,J＝11.5Hz,1H),3.44(d,J＝19.5Hz,2H),3.19(d,J＝2.9Hz,2H),3.01(d,J＝6.9Hz,3H),2.78(d,J＝4.5Hz,3H),2.34(d,J＝1.1Hz,3H),1.18(d,J＝10.1Hz,6H).
实施例2：化合物Z-2的制备
实施例2可参考实施例1的方法，区别在于用2-羟基乙酸替代2-羟基-2-甲基丙酸，制备得到化合物Z-2(12mg)。MS m/z(ESI):459.2[M+1] +；1H NMR(400MHz,CDCl3)8.17(br s,1H),7.45-7.41(m,3H),7.03-6.89(m,1H),6.73-6.69(m,1H),4.30-4.27(m,1H),4.15-3.79(m,3H),3.57(br s,1H),3.45-3.42(m,1H),3.38-2.83(m,7H),2.79-2.72(m,1H),2.55-2.42(m,4H).
实施例3：化合物Z-3的制备
实施例3可参考实施例1的方法，区别在于用2-羟基丙酸替代2-羟基-2-甲基丙酸，制备得到化合物Z-3(12mg)。MS m/z(ESI):473.2[M+1] +；1H NMR(400MHz,CDCl3)8.17(br s,1H),7.43(br s,3H),7.13(br s,1H),6.72(br s,1H),5.32(d,J＝8Hz,1H),4.39-4.19(m,2H),3.91-3.77(m,1H),3.57(br s,1H),3.44-3.36(m,2H),3.16-3.00(m,5H),2.81-2.74(m,1H),2.48-2.42(m,4H),1.27-1.23(m,3H)。
实施例4：化合物Z-4的制备
将化合物V9(60mg,149.84μmol)溶于乙腈(5mL)，加入三乙胺(45.49mg,449.53μmol,62.70μL)和3-甲氧基乙烷-3-三氟甲烷磺酸酯(CAS.NO:1379585-89-3)(65.98mg,299.68μmol)，室温搅拌2小时。减压浓缩，通过pre-HPLC分离得到化合物Z-4(4.89mg)。MS m/z(ESI):471.1[M+1] +； 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.65(s,1H),8.37-8.35(d,J＝8Hz,1H),7.62(m,2H),7.31(s,1H),6.80-6.78(d,J＝8Hz,1H),3.54(m,3H),2.95-2.91(m,2H),2.78(s,3H),2.60-2.58(m,2H),2.56-2.55(m,1H),2.26(s,3H),2.18-2.15(m,2H),2.10-2.07(m,1H),1.88-1.85(m,1H),1.68-1.62(m,1H),1.15(s,3H)。
实施例5：化合物Z-5的制备
实施例5可参考实施例1的方法，区别在于用氧杂环丁烷-2-羧酸替代2-羟基-2-甲基丙酸，制备得到化合物Z-5(25mg)。MS m/z(ESI):485.1[M+1] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ8.27(d,J＝22.6Hz,1H),7.52(dd,J＝23.4,12.3Hz,3H),7.06(d,J＝86.6Hz,1H),6.81(s,1H),5.35–5.01(m,1H),4.69–4.19(m,3H),3.92–3.11(m,5H),2.71(q,J＝16.9,11.5Hz,2H),2.50–2.40(m,3H),1.23(s,6H).
实施例6：化合物Z-6的制备
实施例6可参考实施例1的方法，区别在于用四氢呋喃-2-羧酸替代2-羟基-2-甲基丙酸，制备得到化合物Z-6(25mg)。MS m/z(ESI):499.1[M+1] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)8.24(s,1H),7.54-7.45(m,3H),6.79(s,1H),4.45-4.32(m,2H),3.85-3.39(m,6H),3.02-3.01(m,5H),2.45(s,3H),2.20-1.93(m,4H),1.23(s,3H).
实施例7：化合物Z-7的制备
实施例6可参考实施例1的方法，区别在于用四氢-2H-吡喃-2-羧酸替代2-羟基-2-甲基丙酸，制备得到化合物Z-7(20mg)。MS m/z(ESI):513.2[M+1] +；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.34–7.94(m,1H),7.44(t,J＝9.9Hz,3H),6.95–6.42(m,2H),4.30(d,J＝13.4Hz,1H),4.08–3.31(m,7H),3.22–2.79(m,6H),2.43(s,4H),1.23(s,6H).
实施例8：化合物Z-8的制备
步骤1：将化合物V12(156.02mg,488.62μmol)和化合物V1(90mg,488.62μmol)加入甲醇(10mL)中，室温搅拌0.5小时。然后加入NaBH3CN(92.11mg,1.47mmol)。反应液在室温搅拌16小时,LC-MS监测情况。反应完后，减压浓缩得黄色油。用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系(二氯甲烷/甲醇：1/0～10/1)纯化所得残余物，得到8-1(120mg)。MS m/z(ESI):488.2[M+1] +.
步骤2：将化合物8-1(120mg,246.15μmol)加入1.2-二氯乙烷(5mL)中。然后加入无水硫酸镁(100mg)和TFA(28.07mg,246.15μmol)。反应液在120℃微波反应1小时,LC-MS监测情况。反应完后，过滤，滤液减压浓缩，用制备液相色谱(制备柱：21.2X250mm C18柱；体系：10mM NH4HCO3H2O；波长：254/214nm；梯度：30％-60％乙腈变化)纯化所得残余物，得到Z-8(5.04mg)。MS m/z(ESI):470.1[M+1] +；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.74(s,1H),7.68(d,J＝8Hz,2H),7.62(d,J＝8Hz,1H),7.47(s,1H),7.18-7.14(m,1H),4.32-4.28(m,1H),4.07-4.01(m,1H),3.55-3.50(m,2H),3.37-3.30(m,3H),3.20-3.18(m,1H),2.81-2.80(m,1H),2.80(d,J＝4Hz,3H),2.75-2.74(m,1H),2.55(s,3H),2.41(s,3H).
实施例9：化合物Z-9的制备
实施例9可参考实施例8的方法，区别在于用化合物V2替代化合物V1，制备得到化合物Z-9(20.86mg)。LCMS:MS m/z(ESI):457.1[M+1] +； 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.87(s,1H),7.64(s,1H),7.49(d,J＝8.5Hz,2H),7.35(d,J＝8.4Hz,1H),7.25(s,1H),4.30(t,J＝8.5Hz,1H),4.25–4.12(m,1H),4.03(dd,J＝15.2,7.6Hz,1H),3.83–3.64(m,4H),3.58(dd,J＝10.6,7.8Hz,1H),3.09(t,J＝10.9Hz,1H),3.01(d,J＝4.5Hz,3H),2.68(dd,J＝12.9,11.3Hz,1H),2.52(s,3H).
实施例10：化合物Z-10的制备
步骤1：将中间体V3(0.26g，0.9mmol)溶解在四氢呋喃/甲醇/水(10/1/1)混合溶剂(24ml)中，加入氢氧化锂(0.19g，4.5mmol)，室温搅拌2小时，反应液浓缩得到10-1(0.4g)。MS m/z(ESI):186.1[M+1] +
步骤2：将化合物10-1(0.4g)溶解在DCM(20ml)中，加入TEA(0.33g，3.3mmol)，将甲磺酰氯(0.23g，2.0mmol)的DCM(10ml)溶液慢慢滴加进入，室温搅拌2小时，反应液直接水洗，干燥，浓缩。产物用硅胶柱层析纯化(甲醇/二氯甲烷＝1/25)，得到10-2(0.25g)。MS m/z(ESI):248.1[M+1] +
步骤3：将化合物10-2(0.25g，1mmol)溶解在DMF(15ml)中，加入叠氮化钠(0.14g，2mmol)，升温至80℃，搅拌过夜。冷却至室温，反应液用乙酸乙酯稀释，水洗，饱和氯化钠溶液洗，干燥后浓缩，得到10-3(0.2g)。MS m/z(ESI):211.1[M+1]+
步骤4：化合物10-3(0.2g)溶解在乙醇(20ml)中，加入10％的湿钯碳(80mg)，氢气置换三次，室温下搅拌20小时，过滤，滤液浓缩，得到10-4(0.17g)。MS m/z(ESI):185.2[M+1]
步骤5：向圆底烧瓶中加入化合物10-4(0.17g)，1-氟-4-甲基硝基苯(0.2g，1.2mmol)，碳酸钾(0.25g，1.8mmol)和DMF(15ml)，升温至80℃，搅拌过夜，冷却至室温，过滤，滤液浓缩。产物用硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯/石油醚＝1/4)，得到10-5(0.11g)。MS m/z(ESI):320.2[M+1] +
步骤6：将化合物10-5(0.11g，0.34mmol)悬浮在无水乙醇(20ml)中，加入10％湿钯碳(60mg)，氢气置换三次，室温下搅拌1小时，过滤，浓缩得到10-6(0.07g)。MS m/z(ESI):290.1[M+1] +
步骤7：将10-6(70mg，0.24mmol)，2,6-二氟-4-(甲基氨基甲酰基)苯甲酸(63mg，0.29mmol)，HATU(110mg，0.29mmol)和TEA(88mg，0.87mmol)溶解在DMF(3ml)中，室温搅拌过夜，反应液浓缩，产物用硅胶柱层析纯化(甲醇/二氯甲烷＝1/25)，得到10-7(76mg)。MS m/z(ESI):487.1[M+1] +
步骤8：将化合物10-7(76mg，0.156mmol)溶解在1,2-二氯乙烷中(8ml)，加入三氟乙酸(1ml)和无水硫酸镁固体(76mg)，微波条件下加热到130℃，反应40分钟，冷却至室温，过滤，浓缩。产物用制备HPLC纯化(制备柱：21.2X250mm C18柱；体系：10mM NH 4HCO 3H 2O；波长：254/214nm；梯度：30％--60％乙腈变化)，得到Z-10(19mg)。MS m/z(ESI):469.2[M+1] +； 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.74-8.71(m,1H),7.69-7.66(m,3H),7.51-7.49(m,1H),7.18-7.15(m,1H),4.55-4.52(m,1H),4.47-4.45(m,1H),4.28-4.25(m,1H),4.17-4.13(m,1H),4.06–3.93(m,1H),3.78(dd,J＝12.1,3.5Hz,1H),3.23–3.09(m,4H),2.80(s,3H),2.42(s,3H).
实施例11：化合物Z-11的制备
实施例11可参考实施例10的方法，区别在于用化合物V4替代化合物V3，可制备得到化合物Z-11(24mg)。MS m/z(ESI):453.2[M+1] +； 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.75-8.72(m,1H),7.75–7.62(m,3H),7.53-7.50(m,1H),7.20-7.16(m,1H),4.80-4.76(m,1H),4.63–4.47(m,2H),4.25–4.14(m,2H),4.10–4.00(m,1H),3.66-3.62(m,1H),2.80(d,J＝4.5Hz,3H),2.43(s,3H),2.30(s,3H).
实施例12：化合物Z-12的制备
实施例12可参考实施例10的方法，区别在于用化合物V5替代化合物V3，可制备得到化合物Z-12(32mg)。MS m/z(ESI):497.2[M+1] +； 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.74-8.72(m,1H),7.73–7.64(m,3H),7.50(s,1H),7.17(dd,J＝8.3,1.5Hz,1H),4.58–4.43(m,2H),4.32–4.10(m,3H),4.02-4.00(m,1H),3.79-3.76(m,1H),3.16-3.14(m,1H),2.81-2.79(m,3H),2.43(s,3H),1.15(dd,J＝6.7,3.3Hz,6H).
实施例13：化合物Z-13的制备
实施例13可参考实施例10的方法，区别在于用化合物V6替代化合物V3，可制备得到化合物Z-13(34mg)。MS m/z(ESI):537.2[M+1] +； 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.74-8.72(m,1H),7.70-7.68(m,3H),7.50(s,1H),7.21–7.16(m,1H),4.59–4.42(m,4H),4.32-4.30(m,1H),4.17-4.14(m,1H),4.07-4.02(m,1H),3.84-3.81(m,1H),3.23-3.20(m,1H),2.80(d,J＝4.5Hz,3H),2.43(s,3H).
实施例14：化合物Z-14的制备
实施例14可参考实施例10的方法，区别在于用化合物V7替代化合物V3，可制备获得化合物Z-14(27.19mg)。MS m/z(ESI):495.2[M+1] +， 1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.75–7.58(m,3H),7.54(s,1H),7.27(d,J＝8.4Hz,1H),4.57(dd,J＝25.9,15.4Hz,2H),4.28(dd,J＝15.5,6.1Hz,2H),4.08(s,1H),3.82(dd,J＝12.2,3.6Hz,1H),3.26–3.18(m,1H),3.09(d,J＝5.9Hz,1H),2.95(s,3H),2.50(s,3H),1.00–0.79(m,4H).
实施例15：化合物Z-15的制备
将中间体V15(35mg)溶于DCM(5mL)中，冷却至0℃，将TEA(0.726M,226.09μL)加入其中，环丙烷碳酰氯(8.58mg,82.07μmol)逐滴加入其中。该反应在室温下搅拌1小时。LC-MS监测反应结束。减压旋干溶剂。制备色谱法纯化(制备柱：21.2X250mm C18柱，体系：10mM NH4HCO3H2O波长：254/214nm，梯度：30％-60％乙腈变化)得到化合物Z-15(6.0mg)。MS m/z(ESI):495.2[M+1] +；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.19(d,J＝7.0Hz,1H),7.45(dd,J＝25.7,10.7Hz,3H),6.71(s,1H),4.33(s,1H),3.85(t,J＝ 7.1Hz,4H),3.57(s,1H),3.40(td,J＝11.8,2.6Hz,1H),3.27–2.93(m,3H),2.83(s,1H),2.65(t,J＝8.1Hz,2H),2.41(s,3H),2.28–2.14(m,2H),1.52(s,1H),0.98–0.87(m,2H),0.77–0.67(m,2H)。
实施例16：化合物Z-16的制备
将中间体V15(粗品30mg)，羟基乙酸(8mg)，HATU(38mg)和TEA(40mg)溶解在DMF(6ml)中，室温搅拌过夜。产物用制备HPLC纯化(制备柱：21.2X250mm C18柱；体系：10mM NH 4HCO 3H 2O；波长：254/214nm；梯度：30％--60％乙腈变化)，得到化合物Z-16(4mg)。MS m/z(ESI):485.1[M+1] +； 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.37-8.35(m,1H),7.57-7.55(m,2H),7.30(s,1H),6.79-6.77(m,1H),4.53-4.52(m,1H),4.08–3.81(m,5H),3.66-3.64(m,1H),3.58–3.37(m,2H),3.17-3.15(m,1H),2.99-2.97(m,2H),2.59(s,1H),2.54-2.52(m,2H),2.34(s,4H),2.09–2.01(m,2H).
实施例17：化合物Z-17的制备
实施例17可参考实施例16的方法，区别在于用2-羟基-2-甲基丙酸替代羟基乙酸，可制备得化合物Z-17(16mg)。MS m/z(ESI):513.2[M+1] +； 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.35-8.33(m,1H),7.57-7.55(m,2H),7.30(s,1H),6.79-6.77(m,1H),5.30(s,1H),4.57(s,1H),4.07(s,1H),3.85-3.83(m,2H),3.67-3.64(m,1H),3.44(s,1H),3.23-3.20(m,2H),3.00-2.98(m,3H),2.54-2.52(m,2H),2.34(s,3H),2.09–2.01(m,2H),1.17(s,6H).
实施例18：化合物Z-18的制备
将中间体V18(35mg)和2-羟基乙酸(11.98mg)溶于DMF(4mL)中，然后将HATU(29.71mg)，DIPEA(20.36mg)加入其中。该反应在室温下搅拌1小时。LC-MS监测反应结束。制备色谱法纯化(制备柱：21.2X250mm C18柱，体系：10mM NH4HCO3H2O波长：254/214nm，梯度：30％-60％乙腈变化)得到化合物Z-18(4.44mg)。MS m/z(ESI):503.1[M+1] +；1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.64(d,J＝5.6Hz,1H),7.56(d,J＝10.3Hz,2H),7.46(d,J＝7.3Hz,1H),4.52(d,J＝5.2Hz,1H),4.11–3.80(m,5H),3.69–3.59(m,1H),3.57–3.38(m,2H),3.22–3.09(m,1H),2.97(dd,J＝21.3,7.4Hz,2H),2.77–2.59(m,1H),2.53(t,J＝8.1Hz,2H),2.31(s,3H),2.12–1.97(m,2H)。
实施例19：化合物Z-19的制备
将中间体V15(50mg,117.24μmol)加入DCM(10mL)中，加入TEA(35.59mg,351.73μmol,49.06μL)，然后再加入氘代乙酰氯(14.34mg,175.87μmol)。反应液在室温搅拌1小时。减压浓缩。用制备液相色谱(制备柱：21.2X250mm C18柱；体系：10mM NH4HCO3H2O；波长：254/214nm；梯度：30％-60％乙腈变化)纯化所得残余物，得到化合物Z-19(24.61mg)。MS m/z(ESI):472.2[M+1] +； 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.36(dd,J＝11.0,7.1Hz,1H),7.55(d,J＝10.1Hz,2H),7.29(s,1H),6.77(t,J＝5.9Hz,1H),4.03(dd,J＝26.7,12.8Hz,1H),3.84(t,J＝7.1Hz,2H),3.65(d,J＝8.9Hz,1H),3.55–3.31(m,2H),3.17(dd,J＝39.6,9.2Hz,1H),2.97(dd,J＝12.6,7.4Hz,2H),2.76–2.62(m,1H),2.53(t,J＝8.1Hz,2H),2.33(s,3H),2.26–2.14(m,1H),2.09–1.99(m,2H).
实施例20-1：化合物Z-20的制备
将中间体V18(42mg,94.50μmol)加入DCM(10.01mL)中，加入TEA(28.69mg,283.50μmol,39.54μL)，然后再加入氘代乙酰氯(11.55mg,141.75μmol)。反应液在室温搅拌1小时。减压浓缩。用制备液相色谱(制备柱：21.2X250mm C18柱；体系：10mM NH4HCO3H2O；波长：254/214nm；梯度：30％-60％乙腈变化)纯化所得残余物，得到化合物Z-20(19.63mg)。MS m/z(ESI):490.2[M+1] +；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.71–8.62(m,1H),7.58(d,J＝12.0Hz,2H),7.49(d,J＝8.0Hz,1H),4.14-4.00(m,1H),3.87(t,J＝6.9Hz,2H),3.69-3.63(m,2H),3.57–3.44(m,1H),3.37(s,0.5H),3.29–3.20(m,0.5H),3.17–2.92(m,3H),2.80–2.71(m,0.5H),2.55(t,J＝8.0Hz,2H),2.33(s,3H),2.29–2.21(m,0.5H),2.13–2.00(m,2H).
实施例20-2：化合物Z-20的制备
将中间体化合物V13(1g,2.06mmol)和吡咯烷-2-酮(350.72mg,4.12mmol)溶于甲苯(50mL)中，然后将Pd2dba3(188.69mg,206.05μmol)，Xantphos(238.44mg,412.11μmol)，碳酸铯(1.34g,4.12mmol)加入其中。该反应在Ar保护下100℃条件下搅拌16小时。过滤，旋干溶剂用制备液相色谱(制备柱：21.2X250mm C18柱；体系：10mM NH4HCO3H2O；波长：254/214nm；梯度：30％-60％乙腈变化)纯化所得残余物，得到化合物Z-20(492mg)。MS m/z(ESI):490.2[M+1] +； 1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.71–8.62(m,1H),7.58(d,J＝12.0Hz,2H),7.49(d,J＝8.0Hz,1H),4.14-4.00(m,1H),3.87(t,J＝6.9Hz,2H),3.69-3.63(m,2H),3.57–3.44(m,1H),3.37(s,0.5H),3.29–3.20(m,0.5H),3.17–2.92(m,3H),2.80–2.71(m,0.5H),2.55(t,J＝8.0Hz,2H),2.33(s,3H),2.29–2.21(m,0.5H),2.13–2.00(m,2H)。
实施例21：化合物Z-21的制备
将中间体V21(40mg)和1-羟基环丙烷-1-羧酸(32.50mg)溶到DMF(10mL)中，然后依次加入DIPEA(23.31mg)和HATU(51.04mg)，然后在25℃反应2个小时。加入10mL水淬灭反应液，再加入20mL的乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用制备液相色谱(制备柱：21.2X250mm C18柱；体系：10mM NH4HCO3H2O；波长：254/214nm；梯度：30％-60％乙腈变化)纯化所得残余物，得到化合物Z-21(20mg)。MS m/z(ESI):528.2[M+1] +；1H NMR(400MHz,CDCl3)8.37(d,J＝8Hz,1H),7.55-7.51(m,2H),7.49(s,1H),7.32-6.81(m,1H),6.80(br s,1H),4.15-3.55(m,3H),3.12-2.52(m,7H),2.34(s,3H),0.81-0.80(m,2H),0.78-0.62(m,2H).
实施例22：化合物Z-22的制备
将中间体V21(90mg)溶于DMF(4mL)，加入1-氟环丙烷-1-羧酸(18.78mg)，HATU(68.06mg)和TEA(27.38mg)，室温搅拌2小时。减压浓缩，通过pre-HPLC得到化合物Z-22(15.87mg)。MS m/z(ESI):530.1[M+1] +； 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.34(s,1H),8.40-8.38(d,J＝8Hz,1H),7.55-7.53(d,J＝8Hz,2H),7.33(s,1H),6.82-6.80(m,1H),3.92-3.89(m,2H),3.72-3.69(m,1H),3.54-3.52(m,1H),3.26-3.25(m,2H),3.07-3.05(m,3H),2.29(s,3H),1.06-1.04(m,4H).
实施例23：化合物Z-23的制备
将中间体V21(31mg)，2-羟基乙酸(10.63mg)和HATU(52.74mg)加入DMF(5mL)中，然后加入TEA(21.22mg)。反应液在室温搅拌16小时。减压浓缩，用制备液相色谱(制备柱：21.2X250mm C18柱；体系：10mM NH 4HCO 3H 2O；波长：254/214nm；梯度：30％-60％乙腈变化)纯化所得残余物，得到化合物Z-23(13.99mg)。MS m/z(ESI):502.2[M+1] +； 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.39(d,J＝7.1Hz,1H),7.52(d,J＝7.9Hz,2H),7.32(s,1H),6.80(d,J＝7.2Hz,1H),4.55-4.52(m,2H),4.09-3.89(m,3H),3.64-3.54(m,3H),3.25-3.20(m,2H),3.03-3.00(m,1H),2.84–2.60(m,2H),2.34(s,3H).
实施例24：化合物Z-24的制备
将中间体V21(31mg)，2-羟基-2-甲基丙酸(14.55mg)和HATU(52.74mg)加入DMF(971.58μL)中，然后加入TEA(21.22mg)。反应液在室温搅拌16小时。减压浓缩。用制备液相色谱(制备柱：21.2X250mm C18柱；体系：10mM NH 4HCO 3H 2O；波长：254/214nm；梯度：30％-60％乙腈变化)纯化所得残余物，得到化合物Z-24(20.12mg)。MS m/z(ESI):530.2[M+1] +； 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.37(d,J＝6.7Hz,1H),7.53(d,J＝7.8Hz,2H),7.32(s,1H),6.80(dd,J＝7.2,1.6Hz,1H),3.72–3.56(m,2H),3.45(s,1H),3.21(d,J＝26.8Hz,3H),3.02(d,J＝6.1Hz,3H),2.63(s,1H),2.34(s,3H),1.17(s,6H).
实施例25：化合物Z-25的制备
将中间体V25(50mg)和2-羟基乙酸(8.24mg)溶解DMF(10mL)中，然后依次加入DIPEA(28.01mg)和HATU(61.32mg)，然后在室温搅拌反应12个小时。反应液减压浓缩，用制备液相色谱(制备柱：21.2X250mm C18柱；体系：10mM NH 4HCO 3H 2O；波长：254/214nm；梯度：30％-60％乙腈变化)纯化所得残余物，得到化合物Z-25(5mg)。MS m/z(ESI):520.1[M+1] +；1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ8.27(d,J＝4.9Hz,1H),7.55(s,1H),7.31(t,J＝8.4Hz,2H),4.34(t,J＝12.8Hz,1H),4.23–3.78(m,3H),3.53(d,J＝67.3Hz,3H),3.37–3.08(m,2H),2.99(d,J＝7.3Hz,2H),2.85(d,J＝12.9Hz,1H),2.66–2.49(m,1H),2.40(s,3H).
实施例26：化合物Z-26的制备
将中间体V26和1-氟环丙烷羧酸(3.52mg)溶于DMF(5mL)中，然后将HATU(19.14mg),TEA(6.83mg)加入其中。该反应在室温下搅拌2小时，LCMS显示反应完全。粗品经制备色谱法纯化(制备柱：21.2X250mm C18柱，体系：10mM NH 4HCO 3H 2O波长：254/214nm，梯度：30％--60％乙腈变化)制备得到化合物Z-26(1.64mg)。MS m/z(ESI):530.1[M+1] +；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.41(d,J＝6.9Hz,1H),7.69(d,J＝8.1Hz,2H),7.33(s,1H),6.86(d,J＝6.9Hz,1H),4.10(d,J＝12.9Hz,2H),3.82(d,J＝10.4Hz,1H),3.64(s,1H),3.41(t,J＝11.7Hz,2H),3.12(s,3H),2.43(s,3H),1.13(s,4H).
实施例27：化合物Z-27的制备
将中间体V26(100mg)和1-羟基环丙烷-1-羧酸(23.02mg)溶到DMF(10mL)中，然后依次加入DIPEA(58.29mg)和HATU(127.61mg)，然后在室温搅拌反应12个小时。加入10mL水淬灭反应液，再加入20mL的乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用制备液相色谱(制备柱：21.2X250mm C18柱；体系：10mM NH 4HCO 3H 2O；波长：254/214nm；梯度：30％-60％乙腈变化)纯化所得残余物，得到化合物Z-27(25mg)。MS m/z(ESI):528.1[M+1] +；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)8.38(d,J＝4Hz,1H),7.72(d,J＝8Hz,2H),7.32(s,1H),6.81(d,J＝8Hz,1H),6.21(s,1H),4.1(br s,1H),3.68(d,J＝12Hz,1H),3.51-3.35(m,6H),3.04-3.01(m,2H),2.34(s,3H),0.83-0.63(m,4H).
实施例28：化合物Z-28的制备
将中间体V28(50mg,107.78μmol)，1-羟基环丙烷羧酸(13.20mg,129.34μmol)，HATU(61.00mg,161.68μmol)和DIPEA(41.79mg,323.35μmol)溶解在DMF(10mL)中，室温下搅拌16小时。减压浓缩得到棕色粗产品。用制备液相色谱(制备柱：21.2X250mm C18柱；体系：10mM NH 4HCO 3H 2O；波长：254/214nm；梯度：30％-60％乙腈变化)纯化所得残余物，冷冻干燥得到化合物Z-28(18.39mg)。MS m/z(ESI):548.0[M+1] +； 1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ8.54(d,J＝7.2Hz,1H),7.69(d,J＝8.0Hz,2H),7.60(s,1H),7.01(d,J＝7.3Hz,1H),4.57(s,2H),4.29(s,2H),3.80(d,J＝8.7Hz,1H),3.66(d,J＝19.4Hz,1H),3.42–3.33(m,1H),3.14(d,J＝5.2Hz,2H),0.95(d,J＝9.4Hz,2H),0.78(s,2H).
实施例29：化合物Z-29的制备
将中间体化合物V13(120mg,247.26μmol)和(2R)-5-氧吡咯烷-2-羧酸甲酯(70.79mg,494.53μmol)溶于二氧六环(10mL)中，然后将Pd2dba3(22.64mg,24.73μmol)，Xantphos(28.61mg,49.45μmol)，碳酸铯(161.22mg,494.53μmol)加入其中。该反应在Ar保护下100℃条件下搅拌16小时.过滤，旋干溶剂用制备液相色谱(制备柱：21.2X250mm C18柱；体系：10mM NH4HCO3H2O；波长：254/214nm；梯度：30％-60％乙腈变化)纯化所得残余物，得到化合物Z-29(64.61mg)。MS m/z(ESI):548.2[M+1] +； 1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.70(t,J＝6.0Hz,1H),7.61–7.35(m,3H),5.21(d,J＝9.0Hz,1H),4.10(dd,J＝51.1,13.2Hz,1H),3.77–3.46(m,6H),3.26–2.96(m,4H),2.84–2.54(m,3H),2.41–2.11(m,5H).
实施例30：化合物Z-30的制备
实施例30可参考实施例29的方法，区别在于用(2S)-5-氧吡咯烷-2-羧酸甲酯替代(2R)-5-氧吡咯烷-2-羧酸甲酯，可制备得化合物Z-30(18mg)。MS m/z(ESI):548.3[M+1] +；1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.71(t,J＝6.3Hz,1H),7.48(dd,J＝22.1, 8.5Hz,3H),5.21(dd,J＝9.1,2.6Hz,1H),4.09(dd,J＝52.8,13.1Hz,1H),3.85–3.49(m,4H),3.46–3.22(m,3H),3.14–2.92(m,2H),2.81–2.50(m,5H),2.45–1.99(m,4H).
实施例31：化合物Z-31的制备
将中间体化合物V13(50mg,103.03μmol)和(4R)-4-羟基吡咯烷酮-2-酮(20.83mg,206.05μmol)溶于二氧六环(10mL)中，然后将Pd2dba3(9.43mg,10.30μmol)，Xantphos(11.92mg,20.61μmol)，碳酸铯(67.17mg,206.05μmol)加入其中。该反应在Ar保护下100℃条件下搅拌16小时。过滤，旋干溶剂用制备液相色谱(制备柱：21.2X250mm C18柱；体系：10mM NH4HCO3H2O；波长：254/214nm；梯度：30％-60％乙腈变化)纯化所得残余物，得到化合物Z-31(8.59mg)。MS m/z(ESI):506.2[M+1] +； 1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.74–8.62(m,1H),7.61(d,J＝10.0Hz,2H),7.51(d,J＝8.0Hz,1H),5.46(d,J＝4Hz,1H),4.42(s,1H),4.19–3.99(m,2H),3.80–3.45(m,5H),3.27–3.11(m,1H),3.02(t,J＝8.3Hz,2H),2.94–2.76(m,1H),2.41–2.21(m,5H).
实施例32：化合物Z-32的制备
将化合物Z-29(50mg,91.32μmol)溶于MeOH(3mL)和H2O(3mL)中，然后将LiOH(10.94mg,456.59μmol)加入其中。该反应在室温条件下搅拌5小时.旋干溶剂用制备液相色谱(制备柱：21.2X250mm C18柱；体系：10mM甲酸/H2O；波长：254/214nm；梯度：30％-60％乙腈变化)纯化所得残余物，得到化合物Z-32(17.80mg)。MS m/z(ESI):534.2[M+1] +； 1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.70(t,J＝6.0Hz,1H),7.58–7.37(m,3H),4.96(s,1H),4.18-4.01(m,1H),3.73-3.53(m,2H),3.13-3.02(m,4H),2.66-2.50(m,3H),2.44–2.04(m,6H).
实施例33：化合物Z-33的制备
将化合物Z-30(50mg,91.32μmol)溶到四氢呋喃(6mL)，水(2mL)和甲醇(2mL)中，然后加入氢氧化锂(21.87mg,913.18μmol)，室温搅拌2小时。反应液用2N的盐酸调PH到6，减压浓缩，用制备液相色谱(制备柱：21.2X250mm C18柱；体系：10mM甲酸/H2O；波长：254/214nm；梯度：30％-60％乙腈变化)纯化所得残余物，得到化合物Z-33(20mg)。MS m/z(ESI):534.2[M+1] +；1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.37(s,1H),8.71(dd,J＝8.0,5.5Hz,1H),7.49(dd,J＝23.3,8.6Hz,3H),5.04(dd,J＝9.2,2.6Hz,1H),4.10(dd,J＝56.9,13.2Hz,1H),3.76–3.45(m,3H),3.25(td,J＝11.6,2.6Hz,1H),3.19–2.92(m,3H),2.83–2.54(m,3H),2.38–2.24(m,4H),2.21–2.06(m,1H).
实施例34：化合物Z-34的制备
实施例34可参考实施例31的方法，区别在于用(4S)-4-羟基吡咯烷酮-2-酮替代(4R)-4-羟基吡咯烷酮-2-酮，可制备得化合物Z-34(23mg)。MS m/z(ESI):506.2[M+1] +；1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.70(t,J＝6.4Hz,1H),7.56(dd,J＝42.4,8.7Hz,3H),5.45(d,J＝3.9Hz,1H),4.41(d,J＝5.1Hz,1H),4.20–3.93(m,2H),3.75–3.61(m,2H),3.59–3.44(m,1H),3.32–2.69(m,5H),2.45–2.12(m,4H),1.19(dd,J＝55.6,6.7Hz,2H).
实施例35：化合物Z-35的制备
将化合物Z-33(20mg,37.49μmol)和氯化铵(4.01mg,74.97μmol)溶到DMF(5mL)中，分别加入HATU(14.14mg,37.49μmol)和N,N-二异丙基乙胺(4.84mg,37.49μmol,6.53μL)，室温搅拌12小时。反应液减压浓缩，用制备液相色谱(制备柱：21.2X250mm C18柱；体系：10mM NH4HCO3H2O；波长：254/214nm；梯度：30％-60％乙腈变化)纯化所得残余物，得到化合物Z-35(8mg)。MS m/z(ESI):533.2[M+1] +；1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.68(dd,J＝9.4,5.5Hz,1H),7.86(s,1H),7.60–7.24(m,4H),4.76(d,J＝8.5Hz,1H),4.08(dd,J＝56.6,13.2Hz,1H),3.74–3.35(m,3H),3.28–2.91(m,4H),2.84–2.53(m,2H),2.46–2.16(m,5H),1.97(dd,J＝12.5,9.5Hz,1H).
实施例36：化合物Z-36的制备
实施例36可参考实施例29的方法，区别在于用恶唑烷丁-2-酮替代(2R)-5-氧吡咯烷-2-羧酸甲酯，可制备得化合物Z-36(13.32mg)。MS m/z(ESI):492.2[M+1] +； 1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.70(dd,J＝9.0,6.0Hz,1H),7.49(dd,J＝16.0,8.0Hz,3H),4.49(t,J＝8.0Hz,2H),4.21–3.96(m,3H),3.76–3.38(m,3H),3.31–3.11(m,1H),3.07–2.75(m,3H),2.42–2.22(m,4H).
实施例37：化合物Z-37的制备
实施例37可参考实施例19的方法，区别在于用乙酰氯替代氘代乙酰氯，可制备得化合物Z-37。MS m/z(ESI):469.2[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ8.14(d,J＝7.0Hz,1H),7.47–7.33(m,3H),6.66(dd,J＝17.9,6.7Hz,1H),4.33(t,J＝13.0Hz,1H),3.92–3.75(m,3H),3.49(dd,J＝21.4,7.4Hz,2H),3.36(dd,J＝15.8,6.8Hz,1H),3.21–2.92(m,3H),2.77(dd,J＝12.9,10.8Hz,1H),2.65(td,J＝8.0,4.8Hz,2H),2.43–2.36(m,3H),2.21(dt,J＝14.2,7.2Hz,2H),1.98(d,J＝35.8Hz,3H).
实施例38：化合物Z-38的制备
实施例38可参考实施例29的方法，区别在于用氯甲酸甲酯替代氘代乙酰氯，可制备得化合物Z-38。MS m/z(ESI):485.2[M+H] +.
测试例1：FLIPR测定法筛选化合物对hP2X 3/hP2X 2/3受体的拮抗活性
材料：
细胞准备：用Versene消化液将细胞1321N1/hP2X3和细胞1321N1/hP2X2/3(供应商Chempartner)稳定转染，离心后用铺板培养基(DMEM+10％DFBS)重悬并计数，调整细胞到3*10 5个细胞/mL，在384孔测试板中每孔铺50μL细胞，置于5％CO 2，37℃培养箱中培养16-24h。
细胞培养培养基配方:
hP2X3 工作液浓度 储备液浓度 稀释倍数 所需体积(ml)
DMEM 1* 1* 1 447.006
FBS 10％ 100％ 10 50
G418二硫酸盐 300μg/ml 50mg/ml 167 2.994012
配样量 500
hP2X2/3 工作液浓度 储备液浓度 稀释倍数 所需体积(ml)
DMEM 1* 1* 1 447.7489
FBS 10％ 100％ 10 50
G418二硫酸盐 150μg/ml 50mg/ml 333 1.501502
Hygromycin B 75μg/ml 50mg/ml 667 0.749625
配样量 500
实验Dye配方:
hP2X3 工作液浓度 储备液浓度 稀释倍数 所需体积(ml)
10*dye stock 0.5* 10* 20 0.7
Probenecid 1.25 0.25 200 0.07
测试缓冲液 1* 1* 1 13.23
ATP hydrolytic enzyme 0.5U/ml 10μl＝1U 200 0.07
配样量 14
hP2X2/3 工作液浓度 储备液浓度 稀释倍数 所需体积(ml)
10*dye stock 0.5* 10* 20 0.7
Probenecid 1.25 0.25 200 0.07
测试缓冲液 1* 1* 1 13.23
配样量 14
化合物准备：1、供试品：在符合Echo标准的384孔聚丙烯微孔板中，用DMSO配制180倍所需浓度供试化合物(54mM DMSO储备液)，每孔取500nL加到384孔化合物板中，补充30μL测试缓冲液(含1.26mM Ca 2+的1*HBSS+2mM CaCl 2+20mM HEPES)，振摇20-40min以混匀。
2、激动剂：用测试缓冲液配制3倍所需浓度激动剂(α，β-meATP)(hP2X 3和hP2X 2/3细胞均需终浓度3000nM)，每孔加45μL激动剂到384孔化合物板中。
染料孵育：取出细胞板，吸去细胞上清，每孔加入30uL Dye( Calcium 4Assay Kit，测试缓冲液稀释)，孵育1h。
FLIPR检测：向细胞板中每孔加15uL化合物(FLIPR仪器加样)，15分钟后，每孔加22.5μL激动剂，检测荧光信号(激发光波长470nm-495nm，发射波长515nm-575nm)。
数据处理：取信号峰值和谷值的差值作为基础数据，以阳性药最高浓度数据作为100％抑制率，DMSO数据作为0％抑制率，在软件Graphpad prism 6上通过(log(inhibitor)vs.response--Variable slope)拟合化合物的抑制效应曲线并计算IC 50值。
实验均一性标准：每块板做≥12个max值(DMSO作用结果)和≥12个min值(最高浓度阳性药作用结果)，计算Z值，如果Z≥0.5，则认为平行孔均一，数据可信。Z值的计算公式：Z＝1-3*(SDmax+SDmin)/(MEANmax-MEANmin)。
表1
由表1可知，本发明实施例化合物对P2X3具有较高的抑制活性，对P2X2/3抑制活性较低，具有明显的抑制选择性。
测试例2：大鼠体内药代试验
应用LC/MS/MS法测定了大鼠分别静脉注射和灌胃给药本发明化合物后不同时刻血浆中的药物浓度，研究本发明化合物在大鼠体内的药代动力学行为，评价其药动学特征。
实验方案：
试验动物：健康成年雄性SD大鼠(体重200-300g，6只，静脉注射组大鼠自由饮水和饮食，灌胃给药组禁食整晚，给药4h后自由饮水和饮食)，由Vital River Laboratory Animal Co.LTD提供。
给药方式与剂量：SD大鼠尾静脉给药(1mg/kg,5％DMSO in 0.9％saline)和灌胃给药(5mg/kg,5％DMSO in 0.9％saline)。
血样采集：给药前挑选符合实验要求的动物，称重标记。采集血样前，绑定大鼠，每一只给药的大鼠在预定的采血时间点(静脉给药：分别于给药后的0.083,0.25,0.5,1,2,4,7,24h采血,共8个时间点；灌胃给药：分别于给药后的0.083,0.25,0.5,1,2,4,7,24h采血,共8个时间点)，通过眼眶采血约200μL。血液转移至预先加入K 2EDTA的1.5mL试管中，离心6min(8000rpm,4℃)，取出血浆，整个过程在采血后15min内完成。所有的样品都需要存放于-20℃冰箱直至样品分析。应用LC/MS/MS法测定药物浓度。
本发明部分实施例化合物在相同剂量的静脉给药方式下，大鼠体内的药代动力学性质参数如表2所示：
表2
本发明部分实施例化合物在相同剂量的灌胃给药方式下，大鼠体内的药代动力学性质参数如表3所示：
表3
阳性化合物D1
从上表可知，化合物结构对药代动力学性质参数有较大影响，本发明所保护的化合物具有更高的体内暴露量和更低的清除率。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (18)

  1. 一种式(I)化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体：
    其中，Q为-C(O)NHCH 3、
    R 1为氢、C 1-6烷基(优选为C 1-3烷基，更优选为甲基)或卤素(优选为氟或氯)；
    R 2为氢或卤素(优选为氟)；
    R 3、R 4定义如下：
    (i)R 3为氢；R 4为-C(O)R 4a或3至6元杂环烷基，其中所述3至6元杂环烷基为未取代的或被1、2或3个独立地选自下组的取代基取代：C 1-3烷基(优选为甲基)、羟基、羧基、氰基、卤素(优选为氟)、C 1-3烷氧基、卤代C 1-3烷基、卤代C 1-3烷氧基、-NR a0R b0、-SO 2C 1-3烷基、-C(O)NR a0R b0、-C(O)C 1-3烷基、-C(O)OC 1-3烷基、-OC(O)C 1-3烷基、C 3-6环烷基、C 3-6环烷基氧基、3至6元杂环烷基；
    其中R 4a为取代的C 1-6烷基(优选C 1-3烷基)、取代或未取代的C 3-8环烷基(优选为C 3-6环烷基，更优选为环丙基)、或取代或未取代的3至6元杂环烷基；其中所述取代的C 1-6烷基(优选C 1-3烷基)为被1个或多个独立地选自下组的取代基取代：氘、羟基、羧基、氰基、卤素(优选为氟)、C 1-3烷氧基、卤代C 1-3烷基、卤代C 1-3烷氧基、-NR a0R b0、-SO 2C 1-3烷基、-C(O)NR a0R b0、-C(O)C 1-3烷基、-C(O)OC 1-3烷基、-OC(O)C 1-3烷基、C 3-6环烷基、C 3-6环烷基氧基或3至6元杂环烷基；所述C 3-8环烷基(优选为C 3-6环烷基，更优选为环丙基)、3至6元杂环烷基(优选为环氧丙烷)为未取代的或被1个或多个独立地选自下组的取代基取代：氘、C 1-3烷基(优选为甲基)、羟基、羧基、氰基、卤素(优选为氟)、C 1-3烷氧基、卤代C 1-3烷基、卤代C 1-3烷氧基、-NR a0R b0、-SO 2C 1-3烷基、-C(O)NR a0R b0、-C(O)C 1-3烷基、-C(O)OC 1-3烷基、-OC(O)C 1-3烷基、C 3-6环烷基、C 3-6环烷基氧基或3至6元杂环烷基；
    或者
    (ii)R 3、R 4相连接，与所连接的碳和氮原子共同形成3至6元杂环烷基环、5至6元杂环烯基环、5至6元杂芳基环；其中所述3至6元杂环烷基环具有1、2或3个氮原子和0、1或2个氧原子作为环原子；其中所述5至6元杂环烯基环具有2、3或4个氮原子和0、1或2个氧原子作为环原子；所述5至6元杂芳基环具有2、3或4个氮原子和0或1个氧原子作为环原子；所述3至6元杂环烷基环、5至6元的杂环烯基环和5至6元杂芳基环为未取代的或被1、2或3个独立地选自下组的取代基取代：C 1-3烷基、羟基、羧基、氰基、卤素、C 1-3烷氧基、卤代C 1-3烷基、卤代C 1-3烷氧基、-NR a0R b0、-SO 2C 1-3烷基、-C(O)NR a0R b0、-C(O)C 1-3烷基、-C(O)OC 1-3烷基、-OC(O)C 1-3烷基、C 3-6环烷基、C 3-6环烷基氧基或3至6元杂环烷基；
    Z 1、Z 2、Z 3、Z 4代表环原子，各自独立地为C或N(优选Z 1为C，Z 2为C或N，Z 3为为C或N，Z 4为N)；
    Z 5为CH 2或O；
    Z 6、Z 7各自独立地为O、S或NR a0；
    (R 5) n代表环 上的氢被n个R 5取代，n为0、1、2、3或4，每个R 5相同或不同，各自独立地为C 1-3烷基、羟基、羧基、氰基、卤素(优选为氟或氯)、C 1-3烷氧基、卤代C 1-3烷基、卤代C 1-3烷氧基、-NR a0R b0、-SO 2C 1-3烷基、-C(O)NR a0R b0、-C(O)C 1-3烷基、-C(O)OC 1-3烷基、-OC(O)C 1-3烷基、C 3-6环烷基、C 3-6环烷基氧基或3至6元杂环烷基；以及
    R a0、R b0各自独立地为氢或C 1-3烷基。
  2. 如权利要求1所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体，其中，R 1为甲基；R 2为氢。
  3. 如权利要求1所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体，其中，R 1为甲基；R 2为氟。
  4. 如权利要求1所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体，其中， 为
  5. 如权利要求1所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体，其中，R 4a为C 1-3烷基、C 3-6环烷基(优选为环丙基)、或3至6元杂环烷基，其中所述C 1-3烷基被1个或多个独立地选自下组的取代基取代：氘、羟基、卤素(优选为氟)；所述C 3-6环烷基(优选为环丙基)、或3至6元杂环烷基为未取代的或被1个或多个独立地选自下组的取代基取代：氘、C 1-3烷基(优选为甲基)、羟基、卤素(优选为氟)。
  6. 如权利要求1所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体，其中，所述式(I)化合物结构具有式(Ⅱ)所示结构：
    其中，R 3、R 4相连接，与所连接的碳和氮原子共同形成如下结构：3至6元杂环烷基环 5至6元杂环烯基环 5至6元杂芳基环 其中3至6元杂环烷基环、5至6元杂环烯基环、5至6元杂芳基环为未取代的或被1、2或3个独立地选自下组的取代基取代：C 1-3烷基、羟基、羧基、氰基、卤素、C 1-3烷氧基、卤代C 1-3烷基、卤代C 1-3烷氧基、-NR a0R b0、-SO 2C 1-3烷基、-C(O)NR a0R b0、-C(O)C 1-3烷基、-C(O)OC 1-3烷基、-OC(O)C 1-3烷基、C 3-6环烷基、C 3-6环烷基氧基或3至6元杂环烷基。
  7. 如权利要求6所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体，其中，R 3、R 4相连接，与所连接的碳和氮原子共同形成如下结构：
  8. 如权利要求1所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体，其中，所述式(I)化合物结构具有式(Ⅲ)所示结构：
  9. 如权利要求8所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体，其中，R 4a为羟基取代C 1-6烷基(优选为羟基取代C 1-3烷基，更优选为羟基取代甲基)。
  10. 如权利要求8所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体，其中，Z 5为CH 2。
  11. 如权利要求8所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体，其中，n为0。
  12. 如权利要求1所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体，其中，所述式(I)化合物结构具有式(Ⅳ)所示结构：
  13. 如权利要求12所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体，其中，R 4a为C 1-3烷基、C 3-6环烷基(优选为环丙基)、或3至6元杂环烷基，其中所述C 1-3烷基被1个或多个独立地选自下组的取代基取代：氘、羟基、卤素(优选为氟)；所述C 3-6环烷基(优选为环丙基)、3至6元杂环烷基为未取代的或被1个或多个独立地选自下组的取代基取代：氘、C 1-3烷基(优选为甲基)、羟基、卤素(优选为氟)。
  14. 如权利要求12所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体，其中，Z 6为NH，Z 7为S；或者Z 6为S，Z 7为NH。
  15. 如权利要求1所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体，其中，所述式(I)化合物为下列化合物中的任意一个：
  16. 一种药物组合物，包括：
    1)权利要求1-15中任一项所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体；和
    2)药学上可接受的载体。
  17. 一种权利要求1-15中任一所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体，或权利要求16所述的药物组合物在制备治疗与P2X3活性或与P2X2/3活性相关的疾病的药物中的应用。
  18. 根据权利要求17所述的应用，其中，所述与P2X3活性或与P2X2/3活性相关的疾病为疼痛、泌尿道病症、胃肠疾病、癌症、免疫相关的疾病、咳嗽、抑郁症、焦虑或应激相关病症。
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