CN116585447A - 脑卒中联合用药物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了恩利卡生或其药学上可接受的盐联合崁醇类化合物或药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗脑卒中的药物中的应用。本发明还公开了预防和/或治疗脑卒中的联合用药物，其活性成分包括恩利卡生或其药学上可接受盐，以及崁醇类化合物或药学上可接受盐，所述恩利卡生或其药学上可接受盐与所述崁醇类化合物或药学上可接受盐分别成为独立的给药单元，或所述恩利卡生或其药学上可接受盐与所述崁醇类化合物或药学上可接受盐共同形成组合的给药单元。本发明的药物组合物能协同治疗脑卒中，显著降低脑梗死范围。

Description

脑卒中联合用药物及其应用

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种治疗脑卒中的恩利卡生联合用药物及应用。

背景技术

脑卒中(cerebral stroke)又称“中风”、“脑血管意外”(cerebralvascularaccident，CVA)，是一种急性脑血管疾病，是由于脑部血管突然破裂或因血管阻塞导致血液不能流入大脑而引起脑组织损伤的一组疾病，包括缺血性和出血性卒中。脑卒中具有发病率高、死亡率高和致残率高的特点。脑卒中是全球第二大致死性疾病，且其高复发率及高致残率使的存活者约75％留下功能残疾，严重危害了患者身体健康和生活质量。脑卒中具有死亡率高和致残率高的特点。

目前针对急性缺血性脑卒中治疗主要为一般性处理和特异性治疗。特异性治疗是治疗性缺血性脑卒中的关键，主要包括改善脑血液循环和神经保护等。在时间窗内(发病＜6h)开展静脉溶栓治疗及血管内治疗(取栓)等仍是急性缺血性脑卒中最有效的救治措施，但较难符合当下国内国情。通常缺血性脑卒中患者从发病到医院的时间平均为20.1小时，因此实际上脑卒中患者接受溶栓治疗的总比例小于3％。

脑卒中的救治具有高度的时间依赖性，每延迟1分钟救治，将丢失1.9亿神经元及138亿突触。国外获利于可以对脑卒中患者进行及时诊疗和康复护理，使患者得到有效治疗，降低死亡率，同时考虑到国外神经保护剂相关的大型研究较少，因此，对神经保护剂的推荐相对较低。如果脑卒中患者，是广大的农村地区的脑卒中患者，再加上如果医疗水平不足，居民健康意识较弱，道路交通不畅，常错过最佳救治时间，导致死亡率高。因此在脑卒中防治时，必须考虑更多的选择来保护脑卒中患者的神经元，以减少脑卒中死亡及伤残损失，降低社会经济负担。卒中发生时，越早进行神经保护、减轻脑神经死亡进展，越能有效预防有害物质对大脑的损害，为大脑赢取更多时间。

目前国内临床上依达拉奉、丁苯酞是主流的神经保护药物，其他还有胞二磷胆碱、单唾液酸四己糖神经节苷脂钠、桂哌齐特等，但总体上治疗效果并不理想，辅助用药的帽子难以摘去，亟需开发新型有效、安全的抗脑卒中新药或药物组合物来满足临床的迫切需求。

由于脑缺血损伤与自由基过度形成、兴奋性氨基酸毒性作用、细胞内钙超载、炎性反应等多种机制有关，无论何种机制，最终的结局都会导致神经细胞死亡、功能破坏、脑梗死灶形成。细胞死亡的方式主要有凋亡和坏死两条途径。在脑缺血损伤中神经细胞凋亡和坏死同时存在。缺血核心区以细胞坏死为主，而周围明暗带以细胞凋亡为主。

细胞凋亡主要包括内源性细胞凋亡通路(线粒体介导的凋亡通路)和外源性细胞凋亡通路(死亡受体介导的凋亡通路)。Caspase家族是一大类凋亡的调控因子，是细胞凋亡的启动者和最后的执行者。脑缺血时，死亡受体介导的凋亡通路激活的caspase-8，进一步激活其下游效应蛋白酶caspase-3及激活线粒体凋亡通路导致细胞凋亡。研究表明，抑制caspase酶活性，够阻止神经凋亡的发展，可减轻脑缺血损伤的程度，缩小梗死范围。半胱天冬酶抑制剂恩利卡生(Emricasan)能特异性抑制caspase-8、caspase-3/7，从而具有阻止因缺血脑卒中引起的神经凋亡进展，可减轻脑缺血损伤的程度，缩小梗死范围。

血脑屏障是多样而复杂的动态***，它允许血液循环中脑组织所需的营养物质通过，有效地阻挡有害物质的侵入，又能将代谢产物排出，并根据脑内成分的各种需要作出反应，从而维持脑环境的恒定，保证中枢神经***的正常结构和功能。但血脑屏障同时也阻碍了药物进人大脑，导致药物难以透过血脑屏障达到脑内有效治疗浓度，从而给脑部疾病如脑卒中、脑肿瘤、中枢神经***感染、药物成瘾性等疾病的治疗造成困难。

崁醇也称龙脑、冰片等，是一种常用药物，具有广泛的药理作用，如：镇痛、抗炎、抗菌、抗血栓等，最突出的是促进药物透过血脑屏障的作用。在长期的临床用药中，崁醇自身存在的弱点逐渐显露出来，如药效作用不强、刺激性大、挥发性强，并存在一定毒副作用等特点，这些成为了影响崁醇临床应用的主要因素。大量研究表明，崁醇在体内的吸收速度较快，非常容易穿过血脑屏障，其可以保证脑部的生理稳定，同时还能让血脑屏障开放，对病理性的水肿有着较大的作用，提高其他药物的脑内浓度，因此其对神经***能产生保护作用。

脑缺血时，会引起大脑水肿，进一步加剧了血脑屏障，导致治疗药物无法快速、足量的进入脑部发挥作用。

恩利卡生(Emricasan，1)是一种有效的、口服的半胱天冬酶抑制剂，化学名N-[2-(叔丁基)苯基]-2-氧代甘氨酰-N-[(1S)-1-(羧基甲基)-2-氧代-3-(2，3，5，6-四氟苯氧基)丙基]-L-丙氨酰胺。恩利卡生旨在降低介导炎症和细胞死亡或凋亡的酶的活性，通过降低这些酶的活性，恩利卡生可能阻断整个肝脏疾病的发展。Conatus制药公司宣布恩利卡生(emricasan)用于治疗非酒精性脂肪肝和非酒精性脂肪性肝炎的Ⅱ期临床试验获头条成功结果。

目前，现有技术还没有关于恩利卡生和崁醇联合应用的报道，尤其没有二者联合应用于治疗缺血性脑卒中。

本发明提供了一种恩利卡生和崁醇的联合用药制剂，其中，恩利卡生通过抑制caspase酶活性达到抑制神经细胞凋亡，崁醇能让血脑屏障开放，并对病理性的水肿有着改善作用，同时提高了恩利卡生在脑内的浓度，这种协同作用极大的减轻了脑缺血性损伤。

发明内容

本发明的目的在于提供一种恩利卡生和崁醇的联合用药，用于治疗脑卒中。

为了达到上述目的，本发明包括以下技术方案。

本发明的第一个方面，是提供恩利卡生或其药学上可接受的盐联合崁醇类化合物或药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗脑卒中的药物中的应用。

本发明的第二个方面，是提供一种预防和/或治疗脑卒中的联合用药物，其活性成分包括恩利卡生或其药学上可接受盐，以及崁醇类化合物或药学上可接受盐，所述恩利卡生或其药学上可接受盐与所述崁醇类化合物或药学上可接受盐分别成为独立的给药单元，或所述恩利卡生或其药学上可接受盐与所述崁醇类化合物或药学上可接受盐共同形成组合的给药单元。

在其中的一些实施例中，所述联合用药物中的活性成分恩利卡生或其药学上可接受盐，以及崁醇类化合物或药学上可接受盐，，这些盐是药学上常用的盐，例如盐酸盐，硫酸盐，磷酸盐，乙酸盐，苯甲酸盐，富马酸盐，马来酸盐，柠檬酸盐，酒石酸盐，甲磺酸盐，乙磺酸盐，苯磺酸盐，月佳基磺酸盐，氢醌磺酸盐和对甲苯磺酸盐。

所述治疗脑卒中的药物组合物的活性成分由恩利卡生和崁醇按重量比1:(0.05～0.25)组成，这两种成分均以游离状态或药学上可接受盐的形式或光学异构体、衍生物等存在。以药学可接受盐的形式适用恩利卡生以光学异构体、衍生物的形式适用于崁醇，光学异构体可以是右旋、左旋，以及两者的混合物。

在其中的一些实施例中，所述药物组合的活性成分由恩利卡生和崁醇按重量比1:(0.05～0.15)构成，进一步为按重量比1:0.08-0.1构成。

更优选地，所述药物组合的活性成分由恩利卡生和崁醇按重量比1:0.1构成。

本发明所述的联合用药物，其剂型不限，可以按照已知技术制备成任意一种药剂学上可以接受的剂型，只要能够使活性成分有效达到体内的剂型都可以，包括：注射剂、片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、***剂、颗粒剂、冲剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、丸剂、粉剂、喷雾剂、滴剂、栓剂、霜剂、贴剂等；优选注射剂型，如：液体注射剂、粉针剂、注射用浓溶液等；注射形式包括但不限于原药形式、载药纳米粒等；注射部位包括但不限于皮内注射、皮下注射、肌肉注射、静脉注射以及脊椎腔注射等。优选为静脉给药。

在其中的一些实施例中，所述脑卒中包括缺血性脑卒中、出血性脑卒中、急性脑卒中、轻中度脑卒中。优选地，所述脑卒中是指急性缺血性脑卒中。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

(1)协同性治疗脑卒中，特别是能降低脑组织梗死范围，提高患者的长期生存率和降低致残率，可适用于急性缺血性脑卒中；

(2)降低了药物的不良反应；

(3)提高了药物在脑内的浓度；

本发明的动物实验证实恩利卡生、崁醇以及两者的组合物均具有治疗脑卒中的效果，其中两者的组合物疗效最佳。

总之，本发明的药物组合物中，恩利卡生通过抑制caspase酶活性达到抑制神经细胞凋亡，崁醇能让血脑屏障开放，并对病理性的水肿有着改善作用，同时提高了恩利卡生在脑内的浓度，这种协同作用极大的减轻了脑缺血性损伤引起的脑梗死范围。

附图说明

图1实施例1中各组脑梗死TCC染色图。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述。本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明公开内容的理解更加透彻全面。

下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂，均为市售产品。

除非另有定义，本发明所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本发明。本发明所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

定义为了便于理解本技术，下面定义了一些术语和短语。

在整个说明书和权利要求书中，以下术语具有与本文明确相关的含义，除非上下文另有明确规定。在本发明中使用的短语“在一个实施方案中”不一定指代相同的实施方案，尽管其可能是。此外，在本发明中使用的短语“在另一实施方案中”不一定指代不同的实施方案，尽管其可能是。因此，如下所述，可以容易地组合本发明的各个实施方案，而不脱离本发明的范围或精神。

在本发明中提及的“多个”是指两个或两个以上。“和/或”，描述关联对象的关联关系，表示可以存在三种关系，例如，A和/或B，可以表示：单独存在A，同时存在A和B，单独存在B这三种情况。字符“/”一般表示前后关联对象是一种“或”的关系。以下结合具体实施例对本发明作进一步详细的说明。

在下文中，恩利卡生的量和右崁醇的量以等量的没有成盐的游离形式的恩利卡生和右崁醇表示。

动物实验：恩利卡生和右崁醇组合物对缺血性脑卒中的保护作用

实施药品：

恩利卡生购于上海皓元生物医药科技有限公司。

右崁醇购于武汉绿景丰华生物科技有限公司。

依达拉奉右崁醇注射液(规格:5ml(10mg:2.5mg))购于先声药业有限公司。

将恩利卡生与右崁醇组合物，用100mM磷酸盐缓冲液(pH 7.4)作为溶媒制成注射给药药液。

实施例1

实验动物：

50只雄性SD大鼠，体重为250-300g，动物饲养于屏障***中，动物房环境条件控制为室温20℃～26℃，湿度40％～70％，饲养人员每天上下午各记录一次，房间内每小时空气更换10至20次，动物房内照明12/12小时明暗循环交替(实验活动进行中必须的中断除外)，任何中断都将记录下来。动物需进行合笼饲养，入组实验后，动物保持合笼饲养。动物笼具为聚砜材质的塑料笼具，带有玉米芯垫料，笼具中有供啃咬或遮蔽的玩具给每笼动物作为环境丰富措施。每个笼具放置一个识别组别的笼卡。

建模方法：

采用2.5％异氟烷呼吸麻醉维持动物麻醉深度，按如下操作建立脑缺血再灌注模型：

①剃除动物脖颈部毛发；

②对手术区域进行消毒处理；

③剪开脖颈部表皮暴露左侧颈总动脉；

④结扎近心端的颈总动脉、翼腭动脉、颈外动脉；

⑤在距颈内、颈外动脉分叉2mm位置的颈总动脉处剪一小口；

⑥使用尼龙线(3-0)从颈总动脉小口处***(深度18mm～20mm)进入颈内动脉到达左侧大脑中动脉；

⑦固定线栓；

⑧120min后拔出线栓，打开颈外动脉实现缺血再灌注；

模型成功标准：

1：术后30min～80min内按照Longa法评分，将评分为2～3分的大鼠入组，4分或者1分以下的动物将剔除。

分组与给药：

造模结束后，本试验根据动物体重分为5个组，每组10只动物，分别为：

Group 1-模型组(N＝10)，拔出线栓再灌时即刻给予溶媒，注射体积按5mL/kg，单次给予，观察1天；

Group 2-依达拉奉右崁醇注射液阳性药组(N＝10)，依达拉奉12mg/kg+右崁醇3mg/kg，拔出线栓再灌时即刻给予，注射体积按5mL/kg，单次给予，观察1天；

Group 3-组合物组(N＝10)，恩利卡生(5mg/kg)+右崁醇(0.5mg/kg)，拔出线栓再灌时即刻给予，注射体积按5mL/kg，单次给予，观察1天；

Group 4-恩利卡生单用组(N＝10)，5mg/kg，拔出线栓再灌时即刻给予，注射体积按5mL/kg，单次给予，观察1天；

Group 5-右崁醇单用组(N＝10)，0.5mg/kg，拔出线栓再灌时即刻给予，注射体积按5mL/kg，单次给予，观察1天；

脑梗死评价：

脑缺血再灌注后1天(再灌24小时)对动物进行安乐死，采集大脑组织，冠状切，每片3mm厚度，2％ TTC染色，染色后梗死区域将呈现白色，非梗死区域呈现红色。使用Canon扫描仪双面扫描后，根据正反两面平均后的面积计算脑梗死情况，计算公式为：梗死百分比＝[1-(左脑面积-左脑梗死面积)/右脑面积]*100％。脑组织随后使用10％中性***固定保存。所有模型成功建立的动物的数据将会被纳入统计，本次实验模型成功的标准为脑梗死百分比在20％-60％之间，梗死百分比小于20％的动物会被认为未成模，而梗死百分比大于60％的动物会被认为再灌失败导致梗死面积过大。

实验结果：

具体见表1、图1。

模型组有明显的白色梗死灶，而各给药组大鼠脑梗死灶均呈现不同幅度的缩小，表明各给药组均存在临床改善潜力。其中恩利卡生+右崁醇的组合物对大鼠脑梗死的缩小范围效果最佳，与模型组相比具有极显著性的差异(P<0.01)，与恩利卡生组、右崁醇组相比具有显著差异(P<0.05)，表明恩利卡生与右崁醇联用组成的药物组合物对缺血性脑卒中有明显的治疗与改善作用，并显著优于两者单用。

表1各组动物脑梗死面积百分比情况

组别(N＝8)	脑梗死面积百分比(％)
		模型组，单次静脉给予溶媒	49.51±5.86
依达拉奉右崁醇组，12mg/kg，单次静脉给药	39.38±12.05*
		恩利卡生5mg/kg+右崁醇0.5mg/kg，单次静脉给药	21.18±9.32**#
恩利卡生，5mg/kg，单次静脉给药	35.16±13.02*
		右崁醇，0.5mg/kg，单次静脉给药	46.82±12.13

One-way ANOVA:**p<0.01vs.模型组；*p<0.05vs.模型组；^#p<0.05vs.恩利卡生组、右崁醇组。

图1中，各组对应如下：

1M001：模型组；

2M009：依达拉奉右崁醇注射液阳性组；

3M001：恩利卡生5mg/kg+右崁醇0.5mg/kg组；

4M002：恩利卡生5mg/kg组；

5M008：右崁醇0.5mg/kg组。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (11)

1.恩利卡生或其药学上可接受的盐联合崁醇类化合物或药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗脑卒中的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药学上可接受的盐是盐酸盐，硫酸盐，磷酸盐，乙酸盐，苯甲酸盐，富马酸盐，马来酸盐，柠檬酸盐，酒石酸盐，甲磺酸盐，乙磺酸盐，苯磺酸盐，月佳基磺酸盐，氢醌磺酸盐或对甲苯磺酸。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，崁醇类化合物是右旋崁醇。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述恩利卡生与右旋崁醇的用量配比是质量比1:0.05～0.25，优选是1:0.05～0.1。

5.一种预防和/或治疗脑卒中的联合用药物，其特征是，其活性成分包括恩利卡生或其药学上可接受盐，以及崁醇类化合物或药学上可接受盐，所述恩利卡生或其药学上可接受盐与所述崁醇类化合物或药学上可接受盐分别成为独立的给药单元，或所述恩利卡生或其药学上可接受盐与所述崁醇类化合物或药学上可接受盐共同形成组合的给药单元。

6.根据权利要求5所述的联合用药物，其特征在于，所述药学上可接受的盐是盐酸盐，硫酸盐，磷酸盐，乙酸盐，苯甲酸盐，富马酸盐，马来酸盐，柠檬酸盐，酒石酸盐，甲磺酸盐，乙磺酸盐，苯磺酸盐，月佳基磺酸盐，氢醌磺酸盐或对甲苯磺酸。

7.根据权利要求5所述的联合用药物，其特征在于，崁醇类化合物是右旋崁醇。

8.根据权利要求7所述的联合用药物，其特征在于，所述恩利卡生与右旋崁醇的用量配比是质量比1:0.05～0.25。

9.根据权利要求8所述的联合用药物，其特征在于，所述恩利卡生与右旋崁醇的用量配比是质量比是1:0.05～0.1。

10.根据权利要求5所述的联合用药物，其特征在于，所述脑卒中为缺血性脑卒中或出血性脑卒中。

11.根据权利要求5所述的联合用药物，其特征在于，所述联合用药物是恩利卡生与右旋崁醇共同形成组合的给药单元，所述给药单元的剂型是注射剂型。