CN116519675A - 疑似污染物、对象物的清洗方法及清洗操作的精度管理方法 - Google Patents

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Abstract

本发明旨在提供可直接附着于清洗的对象物、并且能由目测检测的疑似污染物。由含多个分子的标记多肽的疑似污染物解决所述的课题，标记多肽是由共价键附加染料的多肽，并且由下述的式算出的X的值成为100000以上：X＝(1分子的标记多肽具有的染料的数)×(染料的摩尔吸光系数(M‑1cm‑1))。

Description

疑似污染物、对象物的清洗方法及清洗操作的精度管理方法
【技术领域】
本发明涉及疑似污染物。本发明涉及对象物的清洗方法。本发明涉及清洗操作的精度管理方法。
【背景技术】
在外科用小刀、钳子、内视镜等的手术或检查中使用的医疗器具中，附着了体液或微细的组织片。为了能再使用使用的医疗器具，有充分地清洗而除去附着的这些污染物的必要。另外，评价适合地实施了清洗作业与否也是重要的。在评价法中，有直接的方法和间接的方法。作为直接的评价法，知晓例如，作为疑似污染物(也称为测试土)将绵羊血液涂布到医疗器具上之后，清洗所述医疗器具，检测残留在清洗的医疗器具的蛋白质的方法。蛋白质的检测通过例如，使用能对如酰胺黑10B一样的蛋白质进行染色的染料，对残留在清洗的医疗器具的蛋白质进行着色，目测确认进行。
作为间接评价法，知晓将具备疑似污染物的层的指示物与医疗器具一同清洗，评价适合地进行清洗与否的方法。例如，在专利文献1中记载了作为疑似污染物，使用谷蛋白及红色102号(也称为新胭脂红)的混合物的指示物。指示物主要在利用称为清洗消毒器(WD)的自动清洗装置的清洗的评价中使用。
【现有技术文献】
【专利文献】
【专利文献1】特开2009-056030号公报
【发明的概要】
【发明要解决的课题】
在直接的评价法中，由于附着于医疗器具的疑似污染物由清洗除去绝大部分，将残留的疑似污染物用目测检测是困难的。因此，向清洗的医疗器具涂布或喷雾染料溶液，为了再使用所述医疗器具，有必要再清洗。另外，间接评价法由配置于WD内的指示物确认所述WD的性能或动作是目的。因此，难以由指示物评价污染物残留在清洗的医疗器具本身与否。
至今不知晓可直接附着于清洗的对象物，并且能由目测检测的疑似污染物。本发明旨在提供这样的疑似污染物、以及使用其清洗对象物的手段、及管理清洗操作的精度的手段。
【用于解决课题的手段】
本发明提供含多个分子的标记多肽的疑似污染物，标记多肽是由共价键附加染料的多肽，并且由下述的式算出的X的值成为100000以上。
X＝(1分子的标记多肽所具有的染料的数)×(染料的摩尔吸光系数(M-1cm-1))
本发明提供对象物的清洗方法，其包括：将上述的疑似污染物附着于对象物的工序，及清洗附着了疑似污染物的对象物的工序。
本发明提供清洗操作的精度管理方法，包括：将上述的疑似污染物附着于对象物的工序，清洗附着了疑似污染物的对象物的工序，基于染料而评价残留在清洗的对象物的疑似污染物的工序，基于评价结果而判定清洗操作适合与否的工序。
本发明提供清洗操作的精度管理方法，包括：将上述的疑似污染物附着于第1对象物的工序，清洗附着了疑似污染物的第1对象物和附着了来源于生物体的污染物的第2对象物的工序，基于染料而评价残留在清洗的第1对象物的疑似污染物的工序，基于评价结果而判定对于第2对象物的清洗操作适合与否的工序。
【发明的效果】
由本发明，将对于对象物的清洗操作适合与否由目测评价变得可能。
【附图的简单的说明】
【图1】是显示收容在容器的本实施方式的疑似污染物的一例的模式图。
【图2】是显示由赤藓红B(EB)标记白蛋白溶液的吸光度(530nm)的值(S)和作为空白的磷酸缓冲生理盐水(PBS)的吸光度的值(N)算出的S/N比的坐标图。
【图3】是显示1分子的EB标记白蛋白所具有的EB的数和吸光度的S/N比的相关的坐标图。
【图4】是涂布EB标记白蛋白的不锈钢制的板的照片。
【图5】是显示由EB标记酪蛋白溶液的吸光度(530nm)的值(S)和PBS的吸光度的值(N)算出的S/N比的坐标图。
【图6】是涂布EB标记酪蛋白的不锈钢制的板的照片。
【图7】是涂布EB标记白蛋白的不锈钢制的板的清洗前及清洗后的照片。
【具体实施方式】
本实施方式的疑似污染物是含多个分子的标记多肽的组合物。本实施方式的疑似污染物中所含的标记多肽的分子数只要是2分子以上，就不特别限定。本实施方式的疑似污染物是将以多肽作为主要的成分的污染物作为模，人工制作的组合物。
本实施方式的疑似污染物中所含的标记多肽是人为附加染料的多肽。在标记多肽中，染料和多肽共价键合。因此认为，在对象物无由通常进行的清洗从所述标记多肽脱离染料。即，在本实施方式的疑似污染物附着于对象物的状态下难发生脱色。从而，通过在清洗的对象物中检测疑似污染物中所含的标记多肽的染料，可评价所述对象物被充分地清洗与否。
多肽的氨基酸序列、分子量、向溶剂的溶解性等不特别限定，可任意地选择。优选为分子量20000以上的多肽。多肽也可为例如，推定附着于清洗的对象物的多肽。作为这样的多肽，优选哺乳动物的体液或组织中所含的蛋白质。作为这样的蛋白质，可举出例如白蛋白、酪蛋白、纤维蛋白、球蛋白、血红蛋白等。在它们之中，也优选白蛋白及酪蛋白。白蛋白的种类不特别限定，可举出例如血清白蛋白、卵清蛋白、乳白蛋白、麦白蛋白、豆白蛋白、赖氨酸等。酪蛋白的种类不特别限定，可举出例如酸酪蛋白、酪蛋白钠、αs-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白等。
染料不特别限定，可为天然染料，也可为合成染料。作为染料，可举出例如，呈能目视确认的色彩的染料、发生能检测的信号的染料等。呈能目视确认的色彩的染料是在白色光之下吸收及反射指定的波长的可见光线而呈色的染料。例如，可举出赤藓红(也称为赤藓红B)、焰红、玫瑰红、酒石黄、苋菜红、新胭脂红、诱惑红AC、酸性红等。作为发生能检测的信号的染料，可举出例如荧光染料。具有荧光染料的标记多肽可由激发光的照射、例如黑光(例如波长约315nm以上约380nm以下的UV-A)的照射目视确认。荧光染料例示荧光素系染料、花青苷系染料、若丹明、吖啶橙、Alexa Fluor(注册商标)等。荧光素系染料是指荧光素及其衍生物。作为荧光素的衍生物，可举出例如异硫氰酸荧光素、羧基荧光素、羧基荧光素二乙酸酯、Oregon绿色、苯基磷氧基荧光素(Phospha-fluorescein，POF)等。花青苷系染料是指在聚次甲基骨架的两端具有含氮杂环的结构的染料。作为花青苷系染料，可举出例如Cy(注册商标)3、Cy5、Cy7、TOTO(商标)-1、TOTO-3、TO-PRO(商标)-1、TO-PRO-3、DiOC6(3)等。
标记多肽中的染料从目视确认性的观点来看，优选红色染料。其中，红色是指在白色光之下观察之时，通过染料吸收赤以外的波长的可见光线而反射红的可见光线(波长约610nm以上约780nm以下的光线)，可由观察者目视确认的色彩。作为红色染料，可举出例如赤藓红、焰红、玫瑰红等。在它们之中，也特别优选赤藓红。
本发明人认为，标记多肽的目视确认性与1分子的标记多肽具有的染料的数(以下，也成为“标记数”)和作为染料分子中固有的值的摩尔吸光系数相关。从而，以由下述的式(I)算出的X的值作为表示由标记多肽的标记的强度的指标定义。以下，X的值也称为“色调指数”或“CTI”。
X＝(1分子的标记多肽所具有的染料的数)×(染料的摩尔吸光系数(M-1cm-1))···(I)
标记多肽以由上述的式(I)算出的X的值成为100000以上作为特征。通过X的值是100000以上，变得即使微量的标记多肽，也能由目测检测。X的值越高，标记多肽更强呈色。例如，标记多肽优选X的值成为350000以上，更优选X的值成为1000000以上。
标记数由质谱分析法、或者，标记多肽溶液的染料浓度及多肽浓度的测定确定。质谱分析法是由基质支援激光脱离离子化(MALDI)法离子化标记多肽，将其用飞行时间(TOF)型质谱分析计分析的MALDI-TOF MS法。MALDI-TOF MS法本身是公知的。在标记多肽可由MALDI-TOF MS法分析时，由所述方法确定标记数。仅在标记多肽无法由MALDI-TOF MS法分析时，由标记多肽溶液的染料浓度及多肽浓度的测定确定标记数。标记多肽可由MALDI-TOFMS法分析与否依赖于标记多肽中的多肽的种类。
由MALDI-TOF MS法的标记数的确定通过使用由MALDI-TOF MS法取得的标记多肽的质量、所述标记多肽中的多肽的质量及染料的分子量，从下述的式(II)算出标记数进行。多肽的质量也可与标记多肽同样地用MALDI-TOF MS法测定。或者，也可使用所述多肽的制造业者或销售业者公开的质量的值。染料的分子量可由染料的结构式算出，也可使用染料的制造业者或销售业者公开的分子量。
(标记数)＝[(标记多肽的质量)-(多肽的质量)]/(染料的分子量)···(II)
由标记多肽溶液的染料浓度及多肽浓度的测定的标记数的确定通过使用由测定确定的标记多肽溶液的染料及多肽的浓度，从下述的式(III)算出标记数进行。在式(III)中的“浓度”使用例如摩尔浓度、质量浓度、容量百分率浓度等。
(标记数)＝(标记多肽溶液的染料浓度)/(标记多肽溶液的多肽浓度)···(III)
标记多肽溶液的染料浓度如以下一样测定。首先，制成基于染料溶液的染料浓度和其吸光度的校准曲线。具体而言，首先，调制以各种浓度含染料本身的溶液，对于各溶液而测定能测定所述染料的波长(例如极大吸收波长)的吸光度。吸光度可使用公知的分光光度计测定。进而，对与各染料浓度相对应的吸光度进行标绘而制成校准曲线。接下来，将标记多肽溶液与染料溶液同样地对吸光度进行测定。进而，使用校准曲线，从标记多肽溶液的吸光度的值确定所述溶液的染料浓度。
标记多肽溶液的多肽浓度如以下一样测定。首先，制成基于多肽溶液的多肽浓度和其吸光度的校准曲线。具体而言，调制以各种浓度含多肽本身的溶液，对于各溶液，使用Pierce(商标)660nm Protein Assay Kit(Thermo Fisher Scientific公司)而对多肽浓度进行测定。具体而言，首先，将所述试剂盒中所含的蛋白质定量用试剂和多肽溶液混合，对于混合液而测定660nm的吸光度。进而，对与各多肽浓度相对应的吸光度进行标绘而制成校准曲线。接下来，将标记多肽溶液与多肽溶液同样地对吸光度进行测定。进而，使用校准曲线，从标记多肽溶液的吸光度的值确定所述溶液的多肽浓度。
染料的摩尔吸光系数可使用由测定取得的值。或者，也可使用染料的制造业者或销售业者公开的摩尔吸光系数。染料的摩尔吸光系数(M-1cm-1)可使用染料溶液的吸光度、分光光度计的池的光路长(cm)及染料浓度(M)的测定值，由下述的式(IV)算出。优选为对于染料浓度不同的多个染料溶液而算出摩尔吸光系数，以它们的平均值作为染料的摩尔吸光系数使用。染料溶液的染料浓度是摩尔浓度，如以下一样算出。首先，由精密称或电子天平正确地称量指定量的染料。接下来，向溶剂溶解称量的染料而正确地调制成为指定量的溶液。进而，从称量的染料的重量、溶液量及所述染料的分子量算出摩尔浓度。在染料溶液的调制中使用的溶剂在空白的吸光度的测定中使用。对于染料溶液的吸光度的测定，如上所述。
【数1】
标记多肽可通过将多肽和染料由共价键结合得到。例如，优选利用多肽及染料的各自的官能团，使多肽和染料共价键合。例如，使用缩合剂或交联剂的反应简便且优选。这样的反应本身是公知的。官能团不特别限定，氨基、羧基及巯基因可利用市售的缩合剂及交联剂而优选。
缩合剂不特别限定，例如，在由酰胺化反应使多肽和染料共价键合时，例示4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉氯化物(DMT-MM)、2-氯-1,3-二甲基咪唑啉(DMC)、1H-苯并***-1-基氧基三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐、二苯基磷酰叠氮化物、氯三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐、N,N'-二异丙基碳二酰亚胺等。在这些之中，也优选DMT-MM、DMC及1H-苯并***-1-基氧基三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐，特别优选DMT-MM。由DMT-MM的酰胺化反应是如下所述。
【化1】
交联剂不特别限定，可对应于多肽及染料的各自的官能团适宜选择。例如，作为官能团，具有氨基的化合物可与具有N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯或异硫氰基的化合物结合(参照下图)。例如，在将具有氨基的多肽和具有氨基的染料结合时，作为交联剂，可使用在两端具有NHS酯的二价性试剂。
【化2】
【NHS酯和氨基的反应】
X＝H或SO3Na
【异硫氰基和氨基的反应】
作为官能团，具有羧基的化合物，首先，与具有碳二酰亚胺基(-N＝C＝N-)的化合物反应(参照下图)。在此例中，与1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二酰亚胺盐酸盐反应(第1步骤)。通过使NHS与其反应，使不稳定的NHS酯形成(第2步骤)。通过使具有氨基的化合物与其反应，可与具有羧基的化合物结合(第3步骤)。例如，在将具有羧基的染料(或者多肽)和具有氨基的多肽(或者染料)结合时，可这样交联。另外，在将具有羧基的多肽和具有羧基的染料交联时可使用在两端具有氨基的二价性试剂。
【化3】
(第1步骤)
(第2步骤)
(第3步骤)
作为官能团具有巯基的化合物可与具有马来酰亚胺基或溴(或者碘)乙酰胺基的化合物结合(参照下图)。例如，在将具有巯基的多肽和具有巯基的染料结合时，作为交联剂，可使用在两端具有马来酰亚胺的二价性试剂。另外，在将具有巯基的染料(或者多肽)和具有氨基的多肽(或者染料)结合时，作为交联剂，可使用具有马来酰亚胺和NHS酯的杂二价性试剂。
【化4】
【马来酰亚胺基和巯基的反应】
【溴(碘)乙酰胺基和巯基的反应】
X＝Br或I
在标记多肽中，优选对于1分子的多肽结合了多个分子的染料。从而，进行使多肽和染料结合的反应之时，优选使用比多肽的量更大量的染料。例如，可将多肽和染料以摩尔比表示1:2～100反应。
根据需要，本实施方式的疑似污染物也可含标记多肽以外的成分。作为这样的成分，可举出例如，脂质、糖质、防腐剂、抗氧化剂、pH调制剂、稳定化剂等。作为脂质，可举出例如甘油酯、胆甾醇酯、高级脂肪酸、磷脂、糖脂质等。作为糖质，可举出例如葡萄糖、糖原、葡聚糖、淀粉等。作为防腐剂，可举出例如叠氮化钠、硫柳汞等。作为抗氧化剂，可举出例如抗坏血酸、丁基羟基苯甲醚等。作为pH调整剂，可举出磷酸、柠檬酸、琥珀酸及它们的盐等。作为稳定化剂，可举出例如聚乙二醇、聚乙烯基吡咯烷酮等。
将本实施方式的疑似污染物收容在容器，也可将所述容器捆包到箱中而提供于使用者。疑似污染物可在粉末等的固体的状态下，也可在溶液或悬浮液等的液体的状态下。在箱中，也可同装记载本实施方式的疑似污染物的使用方法、保存方法等的附带文书。在图1显示本实施方式的疑似污染物的例。参照图1，10表示收容本实施方式的疑似污染物的容器，11表示捆包箱，12表示附带文书。
本发明的进一步的的实施方式涉及使用疑似污染物的对象物的清洗方法。以下，此方法也称为“本实施方式的清洗方法”。在本实施方式的清洗方法中，首先，将本实施方式的疑似污染物附着于对象物。对象物只要是成为能由清洗再使用的器具，就不特别限定。作为这样的器具，可举出例如医疗器具、餐具、调理器具等。在它们之中，也优选医疗器具，特别优选与患者的身体或生物体试样接触的器具。作为医疗器具，可举出例如外科用小刀、钳子、剪刀、管、导管、注射器、内视镜等。医疗器具不限于医师等直接使用的器具，还包含例如手术支援机器人使用的医疗器具。另外，医疗器具只要是能清洗，就也可为电子机器。对象物可为1个，也可为多个。
在本实施方式的清洗方法中，疑似污染物优选作为溶液或悬浮液使用。溶液或悬浮液中的标记多肽的浓度不特别限定。例如，本实施方式的疑似污染物的溶液或悬浮液可含以多肽的浓度表示例如0.1μg/mL以上、1μg/mL以上、10μg/mL以上、0.1mg/mL以上或0.5mg/mL以上的标记多肽。本实施方式的疑似污染物的溶液或悬浮液可含以多肽的浓度表示例如300mg/mL以下，100mg/mL以下，50mg/mL以下，15mg/mL以下或5mg/mL以下的标记多肽。介质只要是能溶解或分散标记多肽，就不特别限定，优选为水性介质。作为水性介质，可举出例如水、生理盐水、缓冲液等。缓冲液优选在pH6以上8以下具有缓冲作用，可举出例如磷酸缓冲生理盐水(PBS)、Tris-HCl、Good的缓冲液(例示HEPES、MOPS等)等。
疑似污染物向对象物的附着可由例如，向对象物涂布、喷雾、滴下、或者印刷疑似污染物的溶液或悬浮液，或者向疑似污染物的溶液或悬浮液浸渍对象物等的方法进行。使疑似污染物的溶液或悬浮液附着之后，优选由风干或热风等干燥附着溶液或悬浮液的对象物。在对象物中使疑似污染物附着的部位不特别限定。这样的部位可选自例如对象物的外面、内面、内腔等，可附着了实际的污染物的部位。在1个对象物中，使疑似污染物附着的部位可为1个位置，也可为2个位置以上。附着的疑似污染物的量不特别限定，例如，以多肽浓度表示每对象物1cm2例如2μg以上、10μg以上、50μg以上、200μg以上、500μg以上、1000μg以上、1500μg以上或1800μg以上的比例将本实施方式的疑似污染物附着于对象物。再者，在医疗器具清洗的领域中，要求清洗后残留的蛋白质的量不足2μg/cm2。
接下来，在本实施方式的清洗方法中，清洗附着了疑似污染物的对象物。清洗的手段不特别限定，可对应于对象物适宜确定。例如，可举出用手清洗、超声波清洗、由清洗消毒器(WD)的清洗等。在用手清洗中，含向水或清洗剂溶液的浸渍、刷、濯洗等的作业。超声波清洗在向水或清洗剂溶液浸渍对象物的状态下照射超声波而进行清洗。优选使用市售的超声波清洗装置。由WD的清洗向配置于市售的WD内的对象物喷射水或清洗剂溶液而进行清洗。水的温度不特别限定，通常是10℃以上且不足100℃，优选为40℃以上90℃以下。清洗剂不特别限定，可对应于对象物及清洗的手段从公知的清洗剂适宜选择。例如，可举出碱性清洗剂、中性清洗剂等。也可向清洗剂配合蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶等的酶。清洗剂溶液的浓度不特别限定，可对应于清洗剂的种类及清洗的手段适宜确定。例如，在向清洗剂溶液浸渍对象物而进行清洗时，所述溶液的清洗剂浓度通常是0.5重量％以上1重量％以下。
在本实施方式的清洗方法中，残留在清洗的对象物的疑似污染物可成为清洗操作适合与否的指标。例如，在清洗的对象物中不残留有本实施方式的疑似污染物时，提示对于对象物的清洗操作是适合的。另外，在清洗的对象物中残留有本实施方式的疑似污染物时，提示对于对象物的清洗操作不适合。清洗操作的不适合的程度可基于残留在对象物的疑似污染物的量而评价。
清洗的对象物中残留有本实施方式的疑似污染物与否可由目测确认。例如，在使用含结合红色染料的标记多肽的疑似污染物时，清洗操作不适合之时，可由白色光之下的目测观察，在对象物确认到红色的附着物。清洗操作适合之时，即使在白色光之下目测观察，在对象物也确认不到红色的附着物。另外，在使用含结合荧光染料的标记多肽的疑似污染物时，清洗操作不适合之时，可由激发光的照射下的目测观察，在对象物确认到荧光色的附着物。清洗操作适合之时，即使在激发光的照射下目测观察，在对象物也确认不到荧光色的附着物。
本发明的进一步的的实施方式涉及使用本实施方式的疑似污染物的，清洗操作的精度管理方法。以下，此方法也称为“本实施方式的精度管理方法”。在本实施方式的精度管理方法中，首先，将本实施方式的疑似污染物附着于对象物。接下来，清洗附着了疑似污染物的对象物。疑似污染物的附着及对象物的清洗的详细内容与对于本实施方式的清洗方法所述的同样。
在本实施方式的精度管理方法中，基于所述疑似污染物中所含的标记多肽的染料而评价残留在清洗的对象物的疑似污染物。例如，可基于可由目测确认染料与否而评价清洗的对象物中残留有疑似污染物与否。具体而言，在对清洗的对象物进行目测观察之时确认到标记多肽的染料时，可评价为所述对象物中残留有疑似污染物。此时，可判定为对于对象物的清洗操作不适合。一方面，在对清洗的对象物进行目测观察之时确认不到标记多肽的染料时，可评价为从所述对象物除去疑似污染物。此时，可判定为对于对象物的清洗操作是适合的。
例如，在使用含结合红色染料的标记多肽的疑似污染物时，在白色光下目测观察清洗的对象物而确认到红色的附着物之时，可评价为残留有疑似污染物。在白色光下目测观察清洗的对象物而确认不到红色的附着物之时，可评价为除去疑似污染物。另外，在使用含结合荧光染料的标记多肽的疑似污染物时，向清洗的对象物照射激发光，目测观察而确认到荧光色的附着物之时，可评价为残留有疑似污染物。向清洗的对象物照射激发光，目测观察而确认不到荧光色的附着物之时，可评价为除去疑似污染物。
在本实施方式的精度管理方法中，清洗附着疑似污染物的对象物的同时，即使附着了来源于生物体的污染物的别的对象物，也可同样地清洗。从而，本发明的进一步的的实施方式涉及通过清洗附着了疑似污染物的第1对象物和附着了来源于生物体的污染物的第2对象物的清洗操作的精度管理方法。以下，此方法也称为“进一步的的实施方式的精度管理方法”。
在进一步的的实施方式的精度管理方法中，首先，将疑似污染物附着于第1对象物。第1对象物是变得附着疑似污染物的对象物。对象物的种类本身与本实施方式的清洗方法中的对象物同样。第1对象物优选为医疗器具，更优选为未使用或清洗完成的医疗器具。向第1对象物附着疑似污染物的详细内容与对于本实施方式的清洗方法所述的同样。
第2对象物是与第1对象物不同的对象物，是指通过使用附着了来源于生物体的污染物的对象物。对象物的种类本身与本实施方式的清洗方法中的对象物同样。优选的第2对象物是使用后并且未清洗的医疗器具。第2对象物可为与第1对象物相同的种类的器具，也可为与第1对象物不同的种类的器具。
来源于生物体的污染物只要是通过在生物体中使用第2对象物，附着于所述第2对象物的物质，就不特别限定。作为这样的污染物，可举出例如体液、皮肤片、脂肪片、细胞、组织片、骨片、咳痰、呕吐物、尿、粪便等。作为体液，可举出例如血液、淋巴液、脑脊髓液、唾液、消化液、腹水、鼻涕、脓等。附着于第2对象物的来源于生物体的污染物可处于含有水分的状态，也可处于干燥的状态。来源于生物体的污染物不限于1种，可附着了2种以上的污染物及它们的混合物。
在进一步的的实施方式的精度管理方法中，清洗附着了疑似污染物的第1对象物和附着了来源于生物体的污染物的第2对象物。清洗手段的详细与对于本实施方式的清洗方法所述的同样。在在进一步的的实施方式的精度管理方法中的清洗工序中，也可将第1对象物和第2对象物一同清洗。例如，在由浸渍于清洗剂溶液清洗时，通过向积蓄清洗剂溶液的一个清洗槽放入第1对象物及第2对象物，可将第1对象物和第2对象物一同清洗。另外，在由超声波清洗或WD清洗时，通过向一台的超声波清洗装置或WD放入第1对象物及第2对象物，可将第1对象物和第2对象物一同清洗。
或者，在进一步的的实施方式的精度管理方法中的清洗工序中，只要是清洗的手段及条件相同，就也可将第1对象物及第2对象物个别地、实质上同时或依次清洗。例如，在用手清洗时，对第1对象物进行刷及濯洗之后，也可同样对第2对象物进行刷及濯洗。在由多个人进行用手清洗时，某者对第1对象物进行刷及濯洗，也可别者同样对第2对象物进行刷及濯洗。另外，在由超声波清洗或WD清洗时，首先，将第1对象物由超声波清洗或WD清洗。其后，将装置的设定及第2对象物的配置场所与第1对象物的清洗相同地将第2对象物由超声波清洗或WD清洗。也可使用二台的超声波清洗装置或WD，将装置的设定相同地，将第1对象物及第2对象物个别地、实质上同时清洗。
在进一步的的实施方式的精度管理方法中，基于染料而评价残留在清洗的第1对象物的疑似污染物。在所述精度管理方法中，由于同样地清洗附着了疑似污染物的第1对象物和附着了来源于生物的污染物的第2对象物，残留在清洗的第1对象物的疑似污染物成为对于第2对象物的清洗操作的精度的指标。基于染料的，残留的疑似污染物的评价的详细与对于本实施方式的精度管理方法所述的同样。
例如，在对清洗的第1对象物进行目测观察之时确认到标记多肽的染料时，可评价为所述第1对象物中残留有疑似污染物。此时，由于可判定为对于第1对象物的清洗操作不适合，从而同样地判定为对于清洗的第2对象物的清洗操作也不适合。一方面，在对清洗的第1对象物进行目测观察之时确认不到标记多肽的染料时，可评价为从所述第1对象物除去疑似污染物。此时，由于可判定为对于第1对象物的清洗操作是适合的，从而同样地判定为对于清洗的第2对象物的清洗操作也适合。
也可基于染料而定量清洗的第1对象物中的疑似污染物的残留量。例如，全部剥取残留在清洗的第1对象物的疑似污染物，溶解或悬浮于指定量的水性溶剂。将得到的溶液或悬浮液中的染料用例如分光光度计测定。进而，基于吸光度的测定值而算出溶液或悬浮液中的染料浓度。可以所述染料浓度的值作为疑似污染物的残留量使用。
在进一步的的实施方式的精度管理方法中，也可基于清洗的第1对象物中的疑似污染物的残留量而评价对于第2对象物的清洗操作适合与否。例如，在第1对象物中的疑似污染物的残留量被评价为在指定的值以上时，可判定为对于第2对象物的清洗操作不适合。另外，在第1对象物中的疑似污染物的残留量被评价为不足指定的值，或者被评价为不残留疑似污染物时，可判定为对于第2对象物的清洗操作是适合的。上述的指定的值不特别限定，也可对应于第1及第2对象物的种类适宜确定。
在判断为对于第2对象物的清洗操作适合时，清洗后的第2对象物能再使用。在判断为对于第2对象物的清洗操作不适合时，清洗后的第2对象物优选不再使用。另外，优选使清洗操作变得更适合，再依次清洗2种对象物。
接下来，将本发明由实施例详细地说明，本发明不限定于这些实施例。
【实施例】
【实施例1：疑似污染物的调制及评价】
通过使用各种缩合剂而将赤藓红B(EB)和牛血清白蛋白(BSA)结合，调制EB标记BSA。为了探讨使用何种缩合剂好，对EB标记BSA的吸光度(530nm)及1分子的EB标记BSA所具有的EB数进行测定。将调制的EB标记BSA涂布到对象物上而评价可作为疑似污染物使用与否。
【1.EB标记BSA的调制】
将EB(东京化成工业株式会社)用PBS溶解而得到EB溶液。向二甲基亚砜(DMSO)各自溶解表1中记载的缩合剂1～9而得到各缩合剂的溶液。将BSA用PBS溶解而得到BSA溶液。将EB溶液和缩合剂溶液以1:1.5的摩尔比混合，于室温静置10分钟。进而，将含EB及缩合剂的溶液和BSA溶液以100:1的摩尔比混合，于室温静置1小时。由此，得到含EB和BSA共价键合的EB标记BSA的溶液。为了比较，不使用缩合剂溶液而将EB溶液和BSA溶液混合而得到含由物理吸附的EB和BSA的复合体(以下，也称为对照)的溶液。使得到的各溶液通过脱盐柱而纯化。分取各溶液的一部分，由使用Pierce(商标)660nm Protein Assay Kit(Thermo FisherScientific公司)的660nm的吸光度测定确定各溶液的BSA浓度。再者，缩合剂1、4及7从东京化成工业株式会社购入，缩合剂2、3、5、6、8及9从富士胶卷和光纯药株式会社购入。
【表1】
【2.EB标记BSA所具有的EB数的评价】
(2.1)EB标记BSA的吸光度(530nm)的测定
以各EB标记BSA溶液的BSA浓度成为1.6μg/mL的方式用PBS调整。取这些溶液的一部分，用分光光度计测定530nm的吸光度。以使用缩合剂1～9调制的EB标记BSA溶液的吸光度作为信号值(S)，以作为空白的PBS的吸光度作为噪声值(N)，算出各溶液的S/N比。结果示于图2。
(2.2)由MALDI-TOF MS的EB标记BSA所具有的EB数的确定
使乙腈及三氟醋酸在超纯水中混合，调制含30％乙腈及0.10％三氟醋酸的溶液(以下，称为TA30溶液)。向芥子酸(1.0mg)加TA30溶液(0.10mL)，进行超声波处理10分钟。对得到的溶液进行离心分离，以回收的上清作为基质使用。取10μL上述(2.1)的EB标记BSA的溶液，用0.20％三氟醋酸水溶液稀释为2倍。在微移液器安装ZipTip U-C18(MerckMillipore公司)，用TA30溶液(10μL)清洗尖端的树脂。进而，在清洗的树脂吸附EB标记BSA的溶液。吸取基质(3.0μL)，在MALDI板(Bruker公司)上使EB标记BSA溶出。在板上干燥样品之后，使用Ultraflex MALDI-TOF MS(Bruker公司)，对各EB标记BSA的每1分子的质量进行测定。为了比较，使用含对照的溶液同样地进行测定。从取得的EB标记BSA的质量、BSA的质量(66463Da)及EB的分子量(879.86)，从下述的式算出1分子的EB标记多肽所具有的EB数(以下，也称为EB标记数)。结果示于表2。在表2中，以其调制中使用的缩合剂表示EB标记BSA。再者，由于对照中EB和BSA不共价键合，在MALDI-TOF MS测定中EB和BSA解离，EB标记数成为0。
(EB标记数)＝[(取得的EB标记BSA的质量)-(BSA的质量)]/(EB的分子量)
【表2】
EB标记BSA EB标记数
缩合剂1 24.9
缩合剂2 17.3
缩合剂3 15.0
缩合剂4 3.1
缩合剂5 2.9
缩合剂6 1.4
缩合剂7 0.2
缩合剂8 0.1
缩合剂9 0.1
对照 0.0
(2.3)结果
如图2所示，在使用缩合剂1及2调制的EB标记BSA中，S/N比显著地高。另外，在使用缩合剂3～5调制的EB标记BSA中，确认到比较良好的S/N比。由于530nm是EB水溶液的吸光波长的峰，530nm的吸光度的S/N比高提示与BSA结合的EB数多。参照表2，表示在使用缩合剂1～6调制的EB标记BSA中，每个所述BSA1分子结合了至少1分子的EB。特别是，在使用缩合剂1～3时，EB标记数显著地多。探讨EB标记数和530nm的吸光度的S/N比的相关。结果示于图3。如从图3得知表示，EB标记数越多，吸光度的S/N比越变高。
【3.作为疑似污染物的EB标记BSA的使用】
将在不锈钢制的板(以下，称为不锈钢板)的表面(约1cm2)使用缩合剂1～6调制的EB标记BSA溶液及对照的溶液以各自2μg/cm2的量(基于BSA浓度)涂布而进行干燥。在医疗器具清洗的领域中，由于要求残留的蛋白质的量不足2μg/cm2，涂布EB标记BSA的不锈钢板以清洗后的医疗器具作为模。涂布各EB标记BSA的不锈钢板的照片示于图4。在图4中，以其调制中使用的缩合剂表示EB标记BSA。参照图4，使用缩合剂1～6调制的EB标记BSA可由目测确认存在。特别是，使用缩合剂1～3调制的EB标记BSA可明确地确认到来源于EB的红色的附着物。一方面，对照由目测的存在的确认是困难的。
【4.表征疑似污染物的指标的确定】
探讨不基于在调制中使用的缩合剂的种类、而是基于EB标记BSA本身的指标评价作为EB标记BSA的疑似污染物的性能。本发明人认为，疑似污染物的目视确认性与EB的摩尔吸光系数和EB标记数相关。从而，确定基于EB的摩尔吸光系数及EB标记数的色调指数。
(4.1)EB的摩尔吸光系数的确定
正确地称量660.0mg的EB(分子量879.86)，以正确地成为50mL的方式溶解于超纯水。将得到的EB水溶液(15mM)用超纯水稀释而调制37.5μM、18.75μM及9.375μM的EB水溶液。将各浓度的EB水溶液和作为空白的超纯水(EB浓度0μM)用分光光度计测定530nm的吸光度。分光光度计的池的光路长是1cm。使用吸光度、光路长(cm)及EB浓度(μM)的值，从下述的式算出摩尔吸光系数(M-1cm-1)。结果示于表3。
(EB的摩尔吸光系数)＝[(EB水溶液的吸光度)-(空白的吸光度)]/[(EB浓度)×10-6×1]
【表3】
EB浓度(μM) 530nm Abs 摩尔吸光系数
37.5 2.8530 75895
18.75 1.4603 77524
9.375 0.7221 76319
0 0.0065 -
算出37.5μM、18.75μM及9.375μM的EB水溶液的摩尔吸光系数的平均值。平均值是76579。以下，以此平均值作为EB的摩尔吸光系数使用。
(4.2)EB标记BSA的色调指数(CTI)的算出
使用上述(2.2)中确定的EB标记数和上述(4.1)中确定的EB的摩尔吸光系数的值，由下述的式算出使用缩合剂1～6调制的EB标记BSA的CTI。对于各EB标记BSA，含CTI，至此得的数据示于表4。表中，目测判定的项目的“-”可表示难以由目测确认不锈钢板上的EB标记BSA的存在，“+”表示可由目测确认不锈钢板上的EB标记BSA的存在，“++”表示由目测不锈钢板上的EB标记BSA的存在，比“+”的情况更短时间或瞬时确认。
(CTI)＝(1分子的EB标记多肽所具有的EB的数)×(EB的摩尔吸光系数)
【表4】
表4显示，CTI的值是100,000以上的EB标记BSA可作为疑似污染物使用。特别显示，CTI的值是1,000,000以上的EB标记BSA是目视确认性优良的疑似污染物。
【实施例2：疑似污染物的调制及评价(2)】
作为多肽，使用酪蛋白，由DMT-MM共价键合EB调制EB标记酪蛋白。对EB标记酪蛋白的吸光度(530nm)及标记数进行测定。将调制的EB标记酪蛋白涂布到对象物上而评价可作为疑似污染物使用与否。
【1.EB标记酪蛋白的调制】
与实施例1同样地得到EB溶液、及DMT-MM溶液(10mM)。将酪蛋白(富士膜和光纯药株式会社)用PBS溶解而得到酪蛋白溶液。将EB溶液和DMT-MM溶液以表5中所示的摩尔比(条件1～6)混合，于室温静置10分钟。进而，将含EB及缩合剂的溶液和酪蛋白溶液以100:1的摩尔比混合，于室温静置1小时。由此，得到含EB和酪蛋白共价键合的EB标记酪蛋白的溶液。使得到的各溶液通过脱盐柱而纯化。分取各溶液的一部分，作为蛋白质定量试剂，使用Pierce(商标)660nm Protein Assay Kit(Thermo Fisher Scientific公司)测定660nm的吸光度，确定各溶液的酪蛋白浓度。在所述浓度的确定中使用的校准曲线基于酪蛋白的干燥重量而制成。
【表5】
摩尔比(EB/DMT-MM)
条件1 6.25
条件2 1.56
条件3 0.39
条件4 0.10
条件5 0.02
条件6 0.006
【2.EB标记酪蛋白所具有的EB数的评价】
(2.1)EB标记酪蛋白的吸光度(530nm)的测定
对于EB标记酪蛋白溶液(酪蛋白浓度1.6μg/mL)，用分光光度计测定530nm的吸光度。以含在条件1～6调制的EB标记酪蛋白的溶液的吸光度作为信号值(S)，以作为空白的PBS的吸光度作为噪声值(N)，算出各溶液的S/N比。结果示于图5。
(2.2)1分子的EB标记酪蛋白所具有的EB数的确定
EB标记酪蛋白在MALDI-TOF MS中测定是困难的。从而，从在条件1～6调制的EB标记酪蛋白溶液的EB浓度及酪蛋白浓度算出EB标记数。具体而言，如以下。首先，将上述的EB溶液用PBS稀释而调制以各种浓度含EB的EB溶液的稀释系列。对所述稀释系列的吸光度(530nm)进行测定，对与各EB浓度相对应的吸光度进行标绘而制成校准曲线。使用所述校准曲线，从上述(2.1)中取得的信号值(S)确定在条件1～6调制的EB标记酪蛋白溶液的EB浓度。各溶液的EB浓度的值除以酪蛋白浓度的值(1.6μg/mL)。以得到的值作为EB标记酪蛋白的EB标记数。使用所述EB标记数及EB的摩尔吸光系数，从实施例1的式算出EB标记酪蛋白的CTI。结果示于表6。在表6中，将EB标记酪蛋白以在其调制中使用的条件显示。
【表6】
【3.作为疑似污染物的EB标记酪蛋白的使用】
将在不锈钢板的表面(约1cm2)在条件1～6调制的EB标记酪蛋白溶液以各自2μg/cm2的量(基于酪蛋白浓度)涂布而进行干燥。涂布各EB标记酪蛋白的不锈钢板的照片示于图6。图中，将EB标记酪蛋白以在其调制中使用的条件显示。参照图6，在条件1及2调制的EB标记酪蛋白可由目测明确地确认来源于EB的红色的附着物。一方面，在条件3～6调制的EB标记酪蛋白可由目测确认存在，但确认不到来源于EB的红色。为了比较，对于在条件1～4调制的EB标记酪蛋白的数据示于表7。表中，目测判定的项目的“-”表示难以由目测确认不锈钢板上的EB标记酪蛋白的存在，“+”表示可由目测确认不锈钢板上的EB标记酪蛋白的存在。
【表7】
表7显示，CTI的值是350,000以上的EB标记酪蛋白是目视确认性优良的疑似污染物。
【实施例3：附着了疑似污染物的对象物的清洗】
将附着了作为疑似污染物的EB标记BSA的不锈钢板用超纯水或清洗剂的溶液清洗而评价残留有疑似污染物与否。
【1.疑似污染物向对象物的附着及清洗】
作为缩合剂，使用DMT-MM，与实施例1同样地调制EB标记BSA。将含EB标记BSA的溶液(BSA浓度5mg/mL)各500μL涂布到2个不锈钢板的各自上而进行风干。为了再现不充分的清洗，向超纯水(25℃)浸渍一方面的不锈钢板10分钟之后，将表面用流水清洗1分钟。为了再现充分的清洗，向碱性清洗剂(1重量％十二烷基硫酸钠(富士胶卷和光纯药株式会社)及0.1M氢氧化钠(岸田化学株式会社))(25℃)浸渍另一方的不锈钢板10分钟之后，将表面用流水清洗1分钟。将EB标记BSA残留在清洗后的各不锈钢板上与否用目测确认。
【2.清洗的不锈钢板的清洁度的评价】
清洗前及清洗后的不锈钢板的照片示于图7。从图7之左侧照片显示，清洗前，充分的量的疑似污染物附着于不锈钢板上。如从图7的中央的照片得知，在不使用清洗剂而仅用水清洗时，在不锈钢板上确认到红色的附着物。这显示，在清洗后残留有EB标记BSA。如从图7之右的照片得知，在使用清洗剂清洗时，在不锈钢板上确认不到附着物。这显示，在清洗后不残留有EB标记BSA，完全地除去。这样显示，通过将EB标记BSA作为疑似污染物附着于对象物而进行清洗，将疑似污染物残留在所述对象物与否用目测确认，可评价对于对象物的清洗操作适合与否。
【符号的说明】
10：收容疑似污染物的容器
11：捆包箱
12：附带文书

Claims (15)

1.含多个分子的标记多肽的疑似污染物，其中
所述标记多肽是由共价键附加染料的多肽，并且
由下述的式算出的X的值成为100000以上：
X＝(1分子的标记多肽具有的染料的数)×(所述染料的摩尔吸光系数(M-1cm-1))。
2.权利要求1所述的疑似污染物，其中所述X的值成为350000以上。
3.权利要求1或2所述的疑似污染物，其中所述X的值成为1000000以上。
4.权利要求1～3之任一项所述的疑似污染物，其中所述多肽是选自下列的至少1种蛋白质或其片段：白蛋白、酪蛋白及纤维蛋白。
5.权利要求1～4之任一项所述的疑似污染物，其中所述染料是选自下列的至少1种：赤藓红、荧光素系染料及花青苷系染料。
6.权利要求1～5之任一项所述的疑似污染物，其中所述染料是红色染料。
7.权利要求1～6之任一项所述的疑似污染物，其中所述染料是赤藓红。
8.对象物的清洗方法，其包括：
将权利要求1～7之任一项所述的疑似污染物附着于对象物的工序，及
清洗所述附着了疑似污染物的对象物的工序。
9.权利要求8所述的方法，其中残留在清洗的所述对象物的所述疑似污染物成为清洗操作适合与否的指标。
10.清洗操作的精度管理方法，其包括：
将权利要求1～7之任一项所述的疑似污染物附着于对象物的工序，
清洗所述附着了疑似污染物的对象物的工序，
基于所述染料评价残留在清洗的所述对象物的所述疑似污染物的工序，及
基于所述评价结果，判定清洗操作适合与否的工序。
11.清洗操作的精度管理方法，其包括：
将权利要求1～7之任一项所述的疑似污染物附着于第1对象物的工序，
清洗所述附着了疑似污染物的第1对象物和附着了来源于生物体的污染物的第2对象物的工序，
基于所述染料评价残留在清洗的所述第1对象物的所述疑似污染物的工序，及
基于所述评价结果，判定对于所述第2对象物的清洗操作适合与否的工序。
12.权利要求8～11之任一项所述的方法，其中在所述附着的工序中，以多肽浓度表示每1cm2至少2μg以上的比例将所述疑似污染物附着于所述对象物。
13.权利要求8～12之任一项所述的方法，其中所述对象物是医疗器具。
14.权利要求11所述的方法，其中在所述评价工序中所述第1对象物中的所述疑似污染物的残留量被评价为在指定的值以上时，在所述判定工序中判定为对于所述第2对象物的清洗操作不适合。
15.权利要求11所述的方法，其中在所述评价工序中所述第1对象物中的所述疑似污染物的残留量被评价为不足指定的值或者被评价为不残留有所述疑似污染物时，在所述判定工序中判定为对于所述第2对象物的清洗操作是适合的。
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