CN116508646A - 一种香菇双单杂交装置及方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种香菇双单杂交装置及方法，涉及食用菌双单杂交技术领域，该装置包括培养皿，还包括设置在培养皿中心处的杂交分隔装置，杂交分隔装置内设置有上下贯通的腔体，杂交分隔装置的侧壁下端开设有若干与腔体连通的槽口。本发明的操作及装置的使用，可以省去单孢分离和杂交后的镜检，通过将单核菌丝进行分类，并利用杂交装置进行杂交，可以大大提高育种效率。
Description
技术领域
本发明涉及食用菌双单杂交技术领域，具体来讲是一种香菇双单杂交装置及方法。
背景技术
现有的香菇双单杂交技术，效率极低，同时杂交后容易出现杂交失败现象，需要对所得菌丝进行镜检确定是否杂交成功，同时镜检后的双核菌丝也可能是原亲本菌丝。
发明内容
针对现有技术中存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种香菇双单杂交装置及方法，本发明的操作及装置的使用，可以省去单孢分离和杂交后的镜检，通过将单核菌丝进行分类，并利用杂交装置进行杂交，可以大大提高育种效率。
为达到以上目的，本发明采取的技术方案是：一种香菇双单杂交装置，包括培养皿，还包括设置在培养皿中心处的杂交分隔装置，所述杂交分隔装置内设置有上下贯通的腔体，所述杂交分隔装置的侧壁下端开设有若干与腔体连通的槽口。
在上述技术方案的基础上，所述杂交分隔装置呈圆台形结构，且杂交分隔装置的高度与培养皿内高度相同。
在上述技术方案的基础上，所述培养皿的直径为60mm，所述杂交分隔装置的上下端直径分别为16mm和20mm，槽口的数量为2个、3个或4个。
在上述技术方案的基础上，所述培养皿的直径为90mm，所述杂交分隔装置的上下端直径分别为25mm和30mm，槽口的数量为4个或6个。
在上述技术方案的基础上，所述槽口的宽度为0.5mm±0.1mm、槽口的高度0.5mm±0.1mm。
本发明还提供一种基于上述装置的香菇双单杂交方法，包括以下步骤：
步骤S1.选择无爆发性出菇、出菇较均匀且菇形较好的香菇菌棒；在上述菌棒中选择菇形完整刚开伞的香菇进行孢子收集，收集的孢子制成孢子悬浮液，并稀释到10-4倍，得到育种用孢子液，放于4℃冰箱中暂存；
步骤S2.使用前提前1天取出孢子液放于25℃培养箱中，吸取0.2ml孢子液均匀涂布在高温PDA平板上25℃培养，每12个小时观察一次，待孢子萌发菌丝呈放射状时及时挑取至PDA试管中，25℃培养5-7d，并测量单核菌丝长速；
步骤S3.培养好的单核菌丝根据菌丝长速及长势分成四类：单核菌丝a菌丝生长速度快，菌丝粗壮，气生菌丝旺盛；单核菌丝b菌丝生长速度较快，菌丝较粗壮，气生菌丝较旺盛；单核菌丝c菌丝生长速度快，气生菌丝较少；单核菌丝d菌丝生长速度慢，气生菌丝少；根据分类计算各类单核菌丝的日均长速，并淘汰单核菌丝d；
步骤S4.亲本双核菌丝在育种前半个月开始活化，活化后菌丝接入PDA平板培养基中25℃培养，并测量双核菌丝日均长速；
步骤S5.将培养皿和杂交分隔装置分开包装，在126℃下灭菌30min，灭菌后放入烘箱烘干，超净工作台中将PDA培养基均匀倒入烘干的培养皿中，快速将杂交分隔装置放入平板中心，待培养基冷却成型后完成接种装置的制作；
步骤S6.将准备好的双核菌丝平板培养基表面的气生菌丝和基内菌丝全部用无菌接种铲刮掉，用打孔器取直径10mm菌丝块，穿过杂交分隔装置放于培养皿中心，接种装置封口25℃培养；
步骤S7.待培养皿中心双核菌丝接种块菌丝均匀萌发合要求，进行双单杂交，将单核菌丝试管培养基表面的气生菌丝和基内菌丝全部用无菌接种铲刮掉，用接种针挑取同类型单核菌丝块放于距离杂交分隔装置槽口一定距离的地方，25℃培养直到双核菌丝和单核菌丝长交接处出现明显菌丝***，在双核菌丝与单核菌丝形成直线指向单核菌丝方向，靠近培养皿边缘挑取菌丝，获得杂交菌丝。
在上述技术方案的基础上，步骤S6中，培养时间以双核菌丝和单核菌丝生长速度而定，当培养皿的直径为90mm，应同时满足下列公式：
公式1：T1×X1＜20
公式2：(10÷X1-T1)×X(a、b、c)＜10
公式3：X(a、b、c)×T2＜(T1+T2)×X1
其中，杂交开始双核菌丝提前培养时间为T1，单核菌丝和双核菌丝共培养时间为T2，双核菌丝日均长速为X1，各类单核菌丝日均长速为Xa、Xb、Xc。
在上述技术方案的基础上，步骤S6中，培养时间以双核菌丝和单核菌丝生长速度而定，当培养皿1的直径为60mm，应同时满足下列公式：
公式1：T1×X1＜20
公式2：(5÷X1-T1)×X(a、b、c)＜5
公式3：X(a、b、c)×T2＜(T1+T2)×X1
其中，杂交开始双核菌丝提前培养时间为T1，单核菌丝和双核菌丝共培养时间为T2，双核菌丝日均长速为X1，各类单核菌丝日均长速为Xa、Xb、Xc。
在上述技术方案的基础上，步骤S2中，所述高温PDA为115—120℃，30min灭菌后所得PDA培养基。
本发明的有益效果在于：本发明的操作及装置的使用，可以省去单孢分离和杂交后的镜检，通过将单核菌丝进行分类，并利用杂交装置进行杂交，可以大大提高育种效率。
附图说明
图1为本发明实施例中香菇双单杂交装置的俯视图；
图2为本发明实施例中杂交分隔装置的俯视图；
图3为本发明实施例中双单杂交过程中的香菇双单杂交装置示意图。
附图标记：
1-培养皿；2-杂交分隔装置；21-槽口。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所述的实施例示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。
在本发明的描述中，需要说明的是，对于方位词，如有术语“中心”，“横向(X)”、“纵向(Y)”、“竖向(Z)”、“长度”、“宽度”、“厚度”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”、“内”、“外”、“顺时针”、“逆时针”等指示方位和位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于叙述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定方位构造和操作，不能理解为限制本发明的具体保护范围。
此外，如有术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或隐含指明技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”特征可以明示或者隐含包括一个或者多个该特征，在本发明描述中，“数个”、“若干”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。
在本发明中，除另有明确规定和限定，如有术语“组装”、“相连”、“连接”术语应作广义去理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；也可以是机械连接；可以是直接相连，也可以是通过中间媒介相连，可以是两个元件内部相连通。对于本领域普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述的术语在本发明中的具体含义。
在发明中，除非另有规定和限定，第一特征在第二特征之“上”或之“下”可以包括第一和第二特征直接接触，也可以包括第一特征和第二特征不是直接接触而是通过它们之间的另外特征接触。而且，第一特征在第二特征“之上”、“之下”和“上面”包括第一特征在第二特征正上方和斜上方，或仅仅是表示第一特征水平高度高于第二特征的高度。第一特征在第二特征“之上”、“之下”和“下面”包括第一特征在第二特征正下方或斜下方，或仅仅表示第一特征水平高度低于第二特征。
下面结合说明书的附图，通过对本发明的具体实施方式作进一步的描述，使本发明的技术方案及其有益效果更加清楚、明确。下面通过参考附图描述实施例是示例性的，旨在解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
参见图1～图2所示，本发明实施例提供了一种香菇双单杂交装置，包括培养皿1，还包括设置在培养皿1中心处的杂交分隔装置2，杂交分隔装置2内设置有上下贯通的腔体，杂交分隔装置2的侧壁下端开设有若干与腔体连通的槽口21。具体的，杂交分隔装置2呈圆台形结构，且杂交分隔装置2的高度与培养皿1内高度相同。
表1香菇双单杂交装置的种类
| 培养皿直径/mm | 杂交分隔装置上、下端直径/mm | 杂交分隔装置下端开槽数 |
| 60 | 16、20 | 2个、3个或4个 |
| 90 | 25、30 | 4个或6个 |
参见表1所示，当培养皿1的直径为60mm，杂交分隔装置2的上下端直径分别为16mm和20mm，槽口21的数量为2个、3个或4个。当培养皿1的直径为90mm，杂交分隔装置2的上下端直径分别为25mm和30mm，槽口21的数量为4个或6个。槽口21的宽度为0.5mm±0.1mm、槽口21的高度0.5mm±0.1mm。
参见图3所示，本发明实施例还提供一种基于上述装置的香菇双单杂交方法，包括以下步骤：
步骤S1.选择无爆发性出菇、出菇较均匀且菇形较好的香菇菌棒；在上述菌棒中选择菇形完整刚开伞的香菇进行孢子收集，收集的孢子制成孢子悬浮液，并稀释到10-4倍，得到育种用孢子液，放于4℃冰箱中暂存；
步骤S2.使用前提前1天取出孢子液放于25℃培养箱中，吸取0.2ml孢子液均匀涂布在高温PDA平板上(直径90mm)25℃培养(高温PDA为115—120℃，30min灭菌后所得PDA培养基)，每12个小时观察一次，待孢子萌发菌丝呈放射状时及时挑取至PDA试管中，25℃培养5-7d，并测量单核菌丝长速；
步骤S3.培养好的单核菌丝根据菌丝长速及长势分成四类：单核菌丝a菌丝生长速度快，菌丝粗壮，气生菌丝旺盛；单核菌丝b菌丝生长速度较快，菌丝较粗壮，气生菌丝较旺盛；单核菌丝c菌丝生长速度快，气生菌丝较少；单核菌丝d菌丝生长速度慢，气生菌丝少；根据分类计算各类单核菌丝的日均长速(mm/d)，并淘汰单核菌丝d；
步骤S4.亲本双核菌丝在育种前半个月开始活化，活化后菌丝接入PDA平板培养基中25℃培养，并测量双核菌丝日均长速(mm/d)；
步骤S5.将培养皿1和杂交分隔装置2分开包装，在126℃下灭菌30min，灭菌后放入烘箱烘干，超净工作台中将PDA培养基均匀倒入烘干的培养皿1中(90mm培养皿中倒入9-10ml培养基，60mm培养皿中倒入6-7ml培养基)，快速将杂交分隔装置2放入平板中心，待培养基冷却成型后完成接种装置的制作；
步骤S6.将准备好的双核菌丝平板培养基表面的气生菌丝和基内菌丝全部用无菌接种铲刮掉，用打孔器取直径10mm菌丝块，穿过杂交分隔装置2放于培养皿1中心，接种装置封口25℃培养；
步骤S7.待培养皿1中心双核菌丝接种块菌丝均匀萌发合要求(萌发不均匀的接种块需要重新进行接种)，进行双单杂交，将单核菌丝试管培养基表面的气生菌丝和基内菌丝全部用无菌接种铲刮掉，用接种针挑取3mm左右同类型单核菌丝块放于距离杂交分隔装置2槽口21 10mm(60mm型号放于槽口5mm处，挑取2mm左右规则的菌丝块)的地方(每个杂交装置中的单核菌丝均为同一类单核菌丝)，25℃培养直到双核菌丝和单核菌丝长交接处出现明显菌丝***，在双核菌丝与单核菌丝形成直线指向单核菌丝方向，靠近培养皿1边缘(非菌丝***处)挑取菌丝，获得杂交菌丝。
具体的，步骤S6中，培养时间以双核菌丝和单核菌丝生长速度而定，当培养皿1的直径为90mm，应同时满足下列公式：
公式1：T1×X1＜20
公式2：(10÷X1-T1)×X(a、b、c)＜10
公式3：X(a、b、c)×T2＜(T1+T2)×X1
其中，杂交开始双核菌丝提前培养时间为T1，单核菌丝和双核菌丝共培养时间为T2，双核菌丝日均长速为X1，各类单核菌丝日均长速为Xa、Xb、Xc。
具体的，步骤S6中，培养时间以双核菌丝和单核菌丝生长速度而定，当培养皿1的直径为60mm，应同时满足下列公式：
公式1：T1×X1＜20
公式2：(5÷X1-T1)×X(a、b、c)＜5
公式3：X(a、b、c)×T2＜(T1+T2)×X1
其中，杂交开始双核菌丝提前培养时间为T1，单核菌丝和双核菌丝共培养时间为T2，双核菌丝日均长速为X1，各类单核菌丝日均长速为Xa、Xb、Xc。
接种装置适合的使用时间：90mm培养皿4槽口和60mm培养皿2、3、4槽口适合全年使用(7-8月应尽量在上午10点前及下午5点以后使用)，如遇到长时间极端高温高湿天气，可使用60mm培养皿2槽口装置进行育种；90mm培养皿6槽口适合在1-4月、10-12月使用。
本发明的操作及装置的使用，可以省去单孢分离和杂交后的镜检，通过将单核菌丝进行分类，并利用杂交装置进行杂交，可以大大提高育种效率，具体数据如表2所示。
表2对比表
下面通过几个实施例对本发明作进一步说明
实施例1
以香菇为例，使用90mm，4槽口杂交装置进行杂交分离并收集单核菌丝：选择无爆发性出菇、出菇较均匀且菇形较好的香菇菌棒；在上述菌棒中选择菇形完整刚开伞的香菇进行孢子收集，收集的孢子职称孢子悬浮液，并稀释到10-4倍，得到育种用孢子液，放于4℃冰箱中暂存，使用前提前1天取出放于25℃培养箱中，吸取0.2ml孢子液均匀涂布在高温PDA平板上25℃培养，每12个小时观察一次，待孢子萌发菌丝呈放射状时及时挑取至PDA试管中，25℃培养7d，并测量单核菌丝长速，培养好的单核菌丝根据菌丝长速及长势分成四类：单核菌丝a菌丝生长速度快，菌丝粗壮，气生菌丝旺盛；单核菌丝b菌丝生长速度较快，菌丝较粗壮，气生菌丝较旺盛；单核菌丝c菌丝生长速度快，气生菌丝较少；单核菌丝d菌丝生长速度慢，气生菌丝少。根据分类计算各类单核菌丝的日均长速(mm/d)，并淘汰单核菌丝d。亲本双核菌丝在育种前半个月开始活化，活化后菌丝接入PDA平板培养基中25℃培养，并测量双核菌丝日均长速(mm/d)。
双单杂交：将准备好的双核菌丝平板培养基表面的气生菌丝和基内菌丝全部用无菌接种铲刮掉，用打孔器取直径10mm菌丝块，穿过杂交分隔装置放于接种装置培养皿中心，接种装置封口25℃培养(培养时间以双核菌丝和单核菌丝生长速度而定，计算公式应符合公式1和公式2)，待接种装置中心双核菌丝接种块菌丝均匀萌发符合要求，进行双单杂交，将单核菌丝试管培养基表面的气生菌丝和基内菌丝全部用无菌接种铲刮掉，用接种针挑取3mm左右规则的同类型单核菌丝块放于距离接种分隔装置槽口10mm的地方(每个杂交装置中的单核菌丝均为同一类单核菌丝)，每个平板中对应按要求放4个单核菌丝，25℃培养直到双核菌丝和单核菌丝长交接处出现明显菌丝***，在双核菌丝与单核菌丝形成直线指向单核菌丝方向，靠近培养皿边缘(非菌丝***处)挑取菌丝，获得杂交菌丝。
本实施例可在全年进行(7-8月应尽量在上午10点前及下午5点以后使用)。杂交成功率可达99％
实施例2
以香菇为例，使用90mm，6槽口杂交装置进行杂交
分离并收集单核菌丝：选择无爆发性出菇、出菇较均匀且菇形较好的香菇菌棒；在上述菌棒中选择菇形完整刚开伞的香菇进行孢子收集，收集的孢子职称孢子悬浮液，并稀释到10-4倍，得到育种用孢子液，放于4℃冰箱中暂存，使用前提前1天取出放于25℃培养箱中，吸取0.2ml孢子液均匀涂布在高温PDA平板上25℃培养，每12个小时观察一次，待孢子萌发菌丝呈放射状时及时挑取至PDA试管中，25℃培养7d，并测量单核菌丝长速，培养好的单核菌丝根据菌丝长速及长势分成四类：单核菌丝a菌丝生长速度快，菌丝粗壮，气生菌丝旺盛；单核菌丝b菌丝生长速度较快，菌丝较粗壮，气生菌丝较旺盛；单核菌丝c菌丝生长速度快，气生菌丝较少；单核菌丝d菌丝生长速度慢，气生菌丝少。根据分类计算各类单核菌丝的日均长速(mm/d)，并淘汰单核菌丝d。亲本双核菌丝在育种前半个月开始活化，活化后菌丝接入PDA平板培养基中25℃培养，并测量双核菌丝日均长速(mm/d)。
双单杂交：将准备好的双核菌丝平板培养基表面的气生菌丝和基内菌丝全部用无菌接种铲刮掉，用打孔器取直径10mm菌丝块，穿过杂交分隔装置放于接种装置培养皿中心，接种装置封口25℃培养(培养时间以双核菌丝和单核菌丝生长速度而定，计算公式应符合公式1和公式2)，待接种装置中心双核菌丝接种块菌丝均匀萌发符合要求，进行双单杂交，将单核菌丝试管培养基表面的气生菌丝和基内菌丝全部用无菌接种铲刮掉，用接种针挑取3mm左右规则的同类型单核菌丝块放于距离接种分隔装置槽口10mm的地方(每个杂交装置中的单核菌丝均为同一类单核菌丝)，每个平板中对应按要求放6个单核菌丝，25℃培养直到双核菌丝和单核菌丝长交接处出现明显菌丝***，在双核菌丝与单核菌丝形成直线指向单核菌丝方向，靠近培养皿边缘(非菌丝***处)挑取菌丝，获得杂交菌丝。
本实施例适合在1-4月、10-12月使用。杂交成功率可达99％。
对比例
以香菇为例，进行常规双单杂交
分离并收集单核菌丝：选择无爆发性出菇、出菇较均匀且菇形较好的香菇菌棒；在上述菌棒中选择菇形完整刚开伞的香菇进行孢子收集，收集的孢子职称孢子悬浮液，并稀释到10-4倍，得到育种用孢子液，放于4℃冰箱中暂存，使用前提前1天取出放于25℃培养箱中，吸取0.2ml孢子液均匀涂布在PDA平板上25℃培养，每12个小时观察一次，待孢子萌发及时挑取至PDA试管或平板中，25℃培养3-4d待有明显菌丝后进行镜检，镜检无索状联合的菌丝即为单核菌丝，并对其进行纯化培养7d(25℃)，获得单核菌丝。
双单杂交：挑取准备好的双核菌丝放于PDA试管培养基的中部，在双核菌丝朝向试管口的方向2cm左右放入单核菌丝，待菌丝刚刚长满试管顶部，挑取顶部菌丝进行镜检，有索状联合的菌丝即为杂交成功，将菌丝转入新的试管进行培养7d，获得双核菌丝。
对比例未对单核菌丝进行分类，可能出现试管顶端均为单核菌丝或均为亲本双核菌丝导致杂交失败，同时多次挑取容易造成污染。如果操作不规范，且设施设备不完善，在6-9月份均不适合开展杂交。当进行大规模杂交试验时，镜检时间过长会导致镜检效率下降，同时容易出现双核菌丝误认为单核菌丝，单核菌丝误认为双核菌丝的失误，导致育种效率不高。一般杂交成功率在70％左右。
另外，申请人进行了下列实验，验证了本发明三个公式的准确性，具体请参见表3：
表3具体实施例
在说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“优选地”、“示例”、“具体示例”或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点，包含于本发明的至少一个实施例或示例中，在本说明书中对于上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或者示例中以合适方式结合。
本发明不局限于上述实施方式，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围之内。本说明书中未作详细描述的内容属于本领域专业技术人员公知的现有技术。
Claims (9)
1.一种香菇双单杂交装置，包括培养皿(1)，其特征在于：还包括设置在培养皿(1)中心处的杂交分隔装置(2)，所述杂交分隔装置(2)内设置有上下贯通的腔体，所述杂交分隔装置(2)的侧壁下端开设有若干与腔体连通的槽口(21)。
2.如权利要求1所述的香菇双单杂交装置，其特征在于：所述杂交分隔装置(2)呈圆台形结构，且杂交分隔装置(2)的高度与培养皿(1)内高度相同。
3.如权利要求2所述的香菇双单杂交装置，其特征在于：所述培养皿(1)的直径为60mm，所述杂交分隔装置(2)的上下端直径分别为16mm和20mm，槽口(21)的数量为2个、3个或4个。
4.如权利要求2所述的香菇双单杂交装置，其特征在于：所述培养皿(1)的直径为90mm，所述杂交分隔装置(2)的上下端直径分别为25mm和30mm，槽口(21)的数量为4个或6个。
5.如权利要求1所述的香菇双单杂交装置，其特征在于：所述槽口(21)的宽度为0.5mm±0.1mm、槽口(21)的高度0.5mm±0.1mm。
6.基于权利要求1～5任一所述装置的香菇双单杂交方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤S1.选择无爆发性出菇、出菇较均匀且菇形较好的香菇菌棒；在上述菌棒中选择菇形完整刚开伞的香菇进行孢子收集，收集的孢子制成孢子悬浮液，并稀释到10-4倍，得到育种用孢子液，放于4℃冰箱中暂存；
步骤S2.使用前提前1天取出孢子液放于25℃培养箱中，吸取0.2ml孢子液均匀涂布在高温PDA平板上25℃培养，每12个小时观察一次，待孢子萌发菌丝呈放射状时及时挑取至PDA试管中，25℃培养5-7d，并测量单核菌丝长速；
步骤S3.培养好的单核菌丝根据菌丝长速及长势分成四类：单核菌丝a菌丝生长速度快，菌丝粗壮，气生菌丝旺盛；单核菌丝b菌丝生长速度较快，菌丝较粗壮，气生菌丝较旺盛；单核菌丝c菌丝生长速度快，气生菌丝较少；单核菌丝d菌丝生长速度慢，气生菌丝少；根据分类计算各类单核菌丝的日均长速，并淘汰单核菌丝d；
步骤S4.亲本双核菌丝在育种前半个月开始活化，活化后菌丝接入PDA平板培养基中25℃培养，并测量双核菌丝日均长速；
步骤S5.将培养皿(1)和杂交分隔装置(2)分开包装，在126℃下灭菌30min，灭菌后放入烘箱烘干，超净工作台中将PDA培养基均匀倒入烘干的培养皿(1)中，快速将杂交分隔装置(2)放入平板中心，待培养基冷却成型后完成接种装置的制作；
步骤S6.将准备好的双核菌丝平板培养基表面的气生菌丝和基内菌丝全部用无菌接种铲刮掉，用打孔器取直径10mm菌丝块，穿过杂交分隔装置(2)放于培养皿(1)中心，接种装置封口25℃培养；
步骤S7.待培养皿(1)中心双核菌丝接种块菌丝均匀萌发合要求，进行双单杂交，将单核菌丝试管培养基表面的气生菌丝和基内菌丝全部用无菌接种铲刮掉，用接种针挑取同类型单核菌丝块放于距离杂交分隔装置(2)槽口(21)一定距离的地方，25℃培养直到双核菌丝和单核菌丝长交接处出现明显菌丝***，在双核菌丝与单核菌丝形成直线指向单核菌丝方向，靠近培养皿(1)边缘挑取菌丝，获得杂交菌丝。
7.如权利要求6所述的香菇双单杂交装置，其特征在于：步骤S6中，培养时间以双核菌丝和单核菌丝生长速度而定，当培养皿(1)的直径为90mm，应同时满足下列公式：
公式1：T1×X1＜20
公式2：(10÷X1-T1)×X(a、b、c)＜10
公式3：X(a、b、c)×T2＜(T1+T2)×X1
其中，杂交开始双核菌丝提前培养时间为T1，单核菌丝和双核菌丝共培养时间为T2，双核菌丝日均长速为X1，各类单核菌丝日均长速为Xa、Xb、Xc。
8.如权利要求6所述的香菇双单杂交装置，其特征在于：步骤S6中，培养时间以双核菌丝和单核菌丝生长速度而定，当培养皿(1)的直径为60mm，应同时满足下列公式：
公式1：T1×X1＜20
公式2：(5÷X1-T1)×X(a、b、c)＜5
公式3：X(a、b、c)×T2＜(T1+T2)×X1
其中，杂交开始双核菌丝提前培养时间为T1，单核菌丝和双核菌丝共培养时间为T2，双核菌丝日均长速为X1，各类单核菌丝日均长速为Xa、Xb、Xc。
9.如权利要求6所述的香菇双单杂交装置，其特征在于：步骤S2中，所述高温PDA为115—120℃，30min灭菌后所得PDA培养基。
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