CN116492395A - 一种保肝的药食同源的组合物、制备方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种保肝的药食同源的组合物、制备方法及其应用，涉及医药技术领域，由以下质量份数的药物原料制备得到：山楂15～25份、葛根15～25份、枳椇子15～25份、灵芝孢子2～4份和黄花倒水莲1～2份，通过提取、冷冻干燥得到保肝的药食同源的组合物。本发明的保肝的药食同源的组合物，能降低酒精性肝损伤小鼠血清中的ALT、AST活性和MDA含量，升高血清中的SOD活性，抑制肝脏中IL‑1β和TNF‑α的表达，缓解肝脏肿大，显示出显著的保肝活性。

Description

一种保肝的药食同源的组合物、制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种保肝的药食同源的组合物、制备方法及其应用。
背景技术
肝脏是人体内脏中最大的实质性器官，是脂肪、蛋白质和糖等能量物质新陈代谢的重要场所，也是摄入体内的绝大多数物质代谢转化的场所，它还有解毒、免疫、造血和凝血等生理功能，在维持有机体的正常生命活动中发挥着十分重要的作用。病毒、酒精、药物和自身免疫异常等因素，可以通过产生肝脏氧化应激胁迫、引发炎症反应等方式，引发肝纤维化、硬化甚至癌化等肝损伤。临床数据表明，国内肝病的发生率逐渐升高，而且患者年龄呈现出低龄化的发展趋势。因此，从天然药物中寻找安全、高效的保肝药物，具有十分重要的应用前景。
复方是中医用药的一大特色，它是在辨证审因决定治法以后，选择合适的药物酌定用量，按照组成原则妥善配伍而成的一组药物。其所含化学成分丰富、具有多层次、多靶点的特点，且许多化学成分间有协同增效的能力，可以降低用药剂量，节约药物资源和治疗成本，例如授权公开号为CN106074662B，公开了一种具有解酒保肝作用的姜黄组合物。药食同源的安全性、药效得到了充分验证。但是仍然需要将药食同源植物进行合理的组合，从中发现更加安全、高效的保肝组合药物，具有十分重要的意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种保肝的药食同源的组合物、制备方法及其应用。目的是提供由山楂、葛根、枳椇子、灵芝孢子和黄花倒水莲五种药食同源的组合物用于制备保肝药物。
本发明为了解决上述技术问题，第一个目的是提供一种保肝的药食同源的组合物，由以下质量份数的药物原料制备得到：山楂15～25份、葛根15～25份、枳椇子15～25份、灵芝孢子2～4份和黄花倒水莲1～2份。
本发明的有益效果是：
(1)本发明所述保肝的药食同源组合物，由山楂、葛根、枳椇子、灵芝孢子和黄花倒水莲五种药食同源植物的功能成分组合而成。其中，山楂酸甘，微温，入脾、胃、肝经，有健脾开胃、消食化滞、活血化痰之功效；葛根，性凉、气平、味甘，具清热、降火、排毒、生津止渴、升阳止泻等功效；枳椇子味甘、性平、无毒，有止渴除烦，去膈上热，润五脏之功效；灵芝孢子有保肝解毒，镇咳去痰等作用；黄花倒水莲味甘、微苦、性平，入肝、肾、脾经，有补益、强壮、祛湿，散瘀之功效。
(2)本发明基于中医理论确定所述的组合物具有保肝健脾养胃的作用。经动物体内的药效学研究证实，本发明的山楂提取物、葛根提取物、枳椇子提取物、灵芝孢子提取物、黄花倒水莲提取物和五种提取物的组合物，均能降低酒精性肝损伤小鼠血清中的ALT、AST活性和MDA含量，升高血清中的SOD活性，抑制肝脏中IL-1β和TNF-α的表达，缓解肝脏肿大，显示出显著的保肝的活性。
在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
进一步，由以下质量份数的药物原料制备得到：山楂18～22份、葛根18～22份、枳椇子18～22份、灵芝孢子2.5～3.5份和黄花倒水莲1～1.8份。
进一步，由以下质量份数的药物原料制备得到：山楂20份、葛根20份、枳椇子20份、灵芝孢子3份和黄花倒水莲1份。
进一步，由以下质量份数的药物原料制备得到：山楂15份、葛根15份、枳椇子15份、灵芝孢子2份和黄花倒水莲1份。
进一步，由以下质量份数的药物原料制备得到：山楂25份、葛根25份、枳椇子25份、灵芝孢子4份和黄花倒水莲1份。
第二个目的是提供一种保肝的药食同源的组合物的制备方法，包括如下步骤：
步骤1，提取：
(1)混合粗粉的提取：取相应质量份数的山楂、葛根、枳椇子进行破碎混合，过5～20目筛，得到混合粗粉，在所述混合粗粉加入5～20倍重量的水后，在95℃加热回流进行提取0.5～1.5h，重复进行至少2次的加水提取(对过滤后得到的滤渣进行再次的加水提取)，每次提取后进行过滤，收集、合并每次过滤得到的所述混合粗粉的滤液Ⅰ；在所述混合粗粉的滤液Ⅰ中加入相当于其体积的3/4～5/4的体积分数为95％的乙醇溶液，过滤，收集所述混合粗粉的滤液Ⅱ，所述混合粗粉的滤液Ⅱ即为所述混合粗粉的提取液；
(2)灵芝孢子的提取：取相应质量份数的灵芝孢子进行破碎，过5～20目筛，得到灵芝孢子粉，在所述的灵芝孢子粉中加入5～20倍重量的体积分数为65％～85％乙醇，在50℃超声波提取0.5～1.5h，重复进行至少2次的加水提取，每次提取后进行过滤，收集、合并每次过滤得到的所述灵芝孢子粉的滤液，进行减压浓缩，得到所述灵芝孢子的提取液；
(3)黄花倒水莲的提取：取上述质量份数的黄花倒水莲的根进行破碎，过5～20目筛，得到黄花倒水莲粗粉，在所述黄花倒水莲粗粉中加入10～20倍重量的水，在95℃加热回流提取0.5～1.5h，重复进行至少2次的加水提取，每次提取后进行过滤，收集、合并每次过滤得到的所述黄花倒水莲粗粉的滤液，所述黄花倒水莲粗粉的滤液经大孔树脂吸附后，依次采用体积分数为10～20％乙醇和体积分数为65～75％乙醇进行洗脱，收集体积分数为65～75％乙醇的洗脱液，进行减压浓缩，得到所述黄花倒水莲的提取液；
步骤2，冷冻干燥：
将得到的所述混合粗粉的提取液、所述灵芝孢子的提取液及所述黄花倒水莲的提取液合并，冷冻干燥，得到保肝的药食同源的组合物。
采用上述方案的有益效果是：本发明提供的保肝的药食同源的组合物的制备方法，制备得到了保肝的药食同源的组合物，其具有非常显著的保肝功效。
进一步，步骤1中灵芝孢子的提取时，所述超声波的功率为200W～300W；步骤1中黄花倒水莲的提取时，所述大孔树脂为DM-130、HP-10、HP-20、HPD-200、HPD-300、ADS-17中任意一种或至少2种的组合，所述黄花倒水莲粗粉的滤液经大孔树脂吸附的流速为0.05倍柱体积/min，所述黄花倒水莲粗粉的滤液与大孔树脂体积质量比为(10～20)mL/g；步骤1中灵芝孢子的提取时和黄花倒水莲的提取时，所述减压浓缩具体为在50℃减压回收乙醇，直至乙醇全部回收。
其中，DM-130、HP-10、HP-20、HPD-200、HPD-300、ADS-17等适宜类型的大孔树脂，能够有效富集黄花倒水莲根粗粉中的皂苷等活性成分。
进一步，步骤2中，冷冻干燥的具体的条件为：在-55℃条件下，直至将合并的所述混合粗粉的提取液、所述灵芝孢子的提取液及所述黄花倒水莲的提取液中的溶剂完全去除。
本发明的第三个目的是提供一种保肝的药食同源的组合物的应用，将上述任一项所述的保肝的药食同源的组合物用于制备保肝的药物。
采用上述方案的有益效果是：本发明开展了药食同源的组合物对小鼠酒精性肝损伤的保护作用研究，研究表明：药食同源的组合物能够降低酒精性肝损伤小鼠血清中的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性和丙二醛(MDA)含量，升高血清中的超氧化物歧化酶(SOD)活性，抑制肝脏中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达，缓解肝脏肿大，证实本发明制备的药食同源的组合物具有保肝护肝的功能。
进一步，所述保肝的药物的剂型为片剂、膏剂、粉剂、汤剂、颗粒剂、胶囊剂或滴丸剂中的任意一种。
具体实施方式
以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1
本实施例涉及一种保肝的药食同源的组合物，由以下质量份数的药物原料制备得到：山楂20份、葛根20份、枳椇子20份、灵芝孢子3份和黄花倒水莲1份。
本实施例涉及的一种保肝的药食同源的组合物的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：
(1)取山楂粗粉、葛根粗粉、枳椇子粗粉各20重量份，与10～20倍重量的水，95℃加热回流提取1h，过滤，收集滤液。滤渣加入5～15倍重量的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，收集滤液。合并2次虑液得到的所述混合粗粉的滤液Ⅰ，再加入等体积95％乙醇，过滤，收集所述混合粗粉的滤液Ⅱ，即为所述混合粗粉的提取液。
(2)取灵芝孢子粉3重量份，用10～20倍重量的75％(v/v)乙醇，于50℃超声波提取1h，超声波提取功率为250W，过滤，收集滤液。滤渣加入5～15倍重量的75％(v/v)乙醇，50℃超声波提取0.5h，超声波提取功率为250W，过滤，收集滤液。合并2次虑液得到的所述灵芝孢子粉的滤液，50℃减压回收乙醇溶剂后，得到所述灵芝孢子的提取液。
(3)取黄花倒水莲根粗粉1重量份，与10～20倍重量的水，95℃加热回流提取1h，过滤，收集滤液。滤渣加入5～15倍重量的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，收集滤液。合并2次滤液得到的所述黄花倒水莲粗粉的滤液，经DM-130大孔树脂吸附后，依次以20％乙醇、65％～75％乙醇进行洗脱，收集65％～75％乙醇的洗脱液，50℃减压回收乙醇溶剂后，得到所述黄花倒水莲的提取液。
步骤2：将得到的所述混合粗粉的提取液、所述灵芝孢子的提取液及所述黄花倒水莲的提取液合并，在-55℃条件下冷冻干燥，直至将合并的所述混合粗粉的提取液、所述灵芝孢子的提取液及所述黄花倒水莲的提取液中的溶剂完全去除，得到原料重量比例为20：20：20：3：1的药食同源的组合物。
实施例2
本实施例涉及一种保肝的药食同源的组合物，由以下质量份数的药物原料制备得到：山楂15份、葛根15份、枳椇子15份、灵芝孢子4份和黄花倒水莲1份。
本实施例涉及的一种保肝的药食同源的组合物的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：
(1)取山楂粗粉、葛根粗粉、枳椇子粗粉各15重量份，与10～20倍重量的水，95℃加热回流提取1h，过滤，收集滤液。滤渣加入5～15倍重量的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，收集滤液。合并2次虑液得到的所述混合粗粉的滤液Ⅰ，加入等体积95％乙醇，过滤，收集所述混合粗粉的滤液Ⅱ，即为所述混合粗粉的提取液。
(2)取灵芝孢子粉4重量份，用10～20倍重量的65％(v/v)乙醇，于50℃超声波提取1h，超声波提取功率为300W，过滤，收集滤液。滤渣加入5～15倍重量的65％(v/v)乙醇，50℃超声波提取0.5h，超声波提取功率为300W，过滤，收集滤液。合并2次虑液得到的所述灵芝孢子粉的滤液，50℃减压回收乙醇溶剂后，得到所述灵芝孢子的提取液。
(3)取黄花倒水莲根粗粉1重量份，与10～20倍重量的水，95℃加热回流提取1h，过滤，收集滤液。滤渣加入5～15倍重量的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，收集滤液。合并2次滤液得到的所述黄花倒水莲粗粉的滤液，经HP-20大孔树脂吸附后，依次以15％乙醇、65％～75％乙醇进行洗脱，收集65％～75％乙醇洗脱液，50℃减压回收乙醇溶剂后，得到所述黄花倒水莲的提取液。
步骤2：将得到的所述混合粗粉的提取液、所述灵芝孢子的提取液及所述黄花倒水莲的提取液合并，在-55℃条件下冷冻干燥，直至将合并的所述混合粗粉的提取液、所述灵芝孢子的提取液及所述黄花倒水莲的提取液中的溶剂完全去除，得到原料重量比例为15：15：15：4：1的药食同源的组合物。
实施例3
本实施例涉及一种保肝的药食同源的组合物，由以下质量份数的药物原料制备得到：山楂15份、葛根15份、枳椇子15份、灵芝孢子2份和黄花倒水莲1份。
本实施例涉及的一种保肝的药食同源的组合物的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：
(1)取山楂粗粉、葛根粗粉、枳椇子粗粉各15重量份，与10～20倍重量的水，95℃加热回流提取1h，过滤，收集滤液。滤渣加入5～15倍重量的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，收集滤液。合并2次虑液得到的所述混合粗粉的滤液Ⅰ，加入等体积95％乙醇，过滤，收集所述混合粗粉的滤液Ⅱ，即为所述混合粗粉的提取液。
(2)取灵芝孢子粉2重量份，用10～20倍重量的85％(v/v)乙醇，于50℃超声波提取1h，超声波提取功率为200W，过滤，收集滤液。滤渣加入5～15倍重量的85％(v/v)乙醇，50℃超声波提取0.5h，超声波提取功率为200W，过滤，收集滤液。合并2次虑液得到的所述灵芝孢子粉的滤液，50℃减压回收乙醇溶剂后，得到所述灵芝孢子的提取液。
(3)取黄花倒水莲根粗粉1重量份，与10～20倍重量的水，95℃加热回流提取1h，过滤，收集滤液。滤渣加入5～15倍重量的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，收集滤液。合并2次滤液得到的所述黄花倒水莲粗粉的滤液，经HPD-200大孔树脂吸附后，依次以10％乙醇、65％～75％乙醇进行洗脱，收集65％～75％乙醇洗脱液，50℃减压回收乙醇溶剂后，得到所述黄花倒水莲的提取液。
步骤2，将得到的所述混合粗粉的提取液、所述灵芝孢子的提取液及所述黄花倒水莲的提取液合并，在-55℃条件下冷冻干燥，直至将合并的所述混合粗粉的提取液、所述灵芝孢子的提取液及所述黄花倒水莲的提取液中的溶剂完全去除，得到原料重量比例为15：15：15：2：1的药食同源的组合物。
实施例4
本实施例涉及一种保肝的药食同源的组合物，由以下质量份数的药物原料制备得到：山楂25份、葛根25份、枳椇子25份、灵芝孢子2份和黄花倒水莲1份。
本实施例涉及的一种保肝的药食同源的组合物的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：
(1)取山楂粗粉、葛根粗粉、枳椇子粗粉各25重量份，与10～20倍重量的水，95℃加热回流提取1h，过滤，收集滤液。滤渣加入5～15倍重量的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，收集滤液。合并2次虑液得到的所述混合粗粉的滤液Ⅰ，加入等体积95％乙醇，过滤，收集所述混合粗粉的滤液Ⅱ，即为所述混合粗粉的提取液。
(2)取灵芝孢子粉3重量份，用10～20倍重量的75％(v/v)乙醇，于50℃超声波提取1h，超声波提取功率为250W，过滤，收集滤液。滤渣加入5～15倍重量的75％(v/v)乙醇，50℃超声波提取0.5h，超声波提取功率为250W，过滤，收集滤液。合并2次虑液得到的所述灵芝孢子粉的滤液，50℃减压回收乙醇溶剂后，得到所述灵芝孢子的提取液。
(3)取黄花倒水莲根粗粉1重量份，与10～20倍重量的水，95℃加热回流提取1h，过滤，收集滤液。滤渣加入5～15倍重量的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，收集滤液。合并2次滤液得到的所述黄花倒水莲粗粉的滤液，经DM-130大孔树脂吸附后，依次以20％乙醇、65％～75％乙醇进行洗脱，收集65％～75％乙醇洗脱液，50℃减压回收乙醇溶剂后，得到所述黄花倒水莲的提取液。
步骤2：将得到的所述混合粗粉的提取液、所述灵芝孢子的提取液及所述黄花倒水莲的提取液合并，在-55℃条件下冷冻干燥，直至将合并的所述混合粗粉的提取液、所述灵芝孢子的提取液及所述黄花倒水莲的提取液中的溶剂完全去除，得到原料重量比例为25：25：25：2：1的药食同源的组合物。
实施例5
本实施例涉及一种保肝的药食同源的组合物，由以下质量份数的药物原料制备得到：山楂25份、葛根25份、枳椇子25份、灵芝孢子4份和黄花倒水莲1份。
本实施例涉及的一种保肝的药食同源的组合物的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：
(1)取山楂粗粉、葛根粗粉、枳椇子粗粉各25重量份，与10～20倍重量的水，95℃加热回流提取1h，过滤，收集滤液。滤渣加入5～15倍重量的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，收集滤液。合并2次虑液得到的所述混合粗粉的滤液Ⅰ，加入等体积95％乙醇，过滤，收集所述混合粗粉的滤液Ⅱ，即为所述混合粗粉的提取液。
(2)取灵芝孢子粉3重量份，用10～20倍重量的75％(v/v)乙醇，于50℃超声波提取1h，超声波提取功率为250W，过滤，收集滤液。滤渣加入5～15倍重量的75％(v/v)乙醇，50℃超声波提取0.5h，超声波提取功率为250W，过滤，收集滤液。合并2次虑液得到的所述灵芝孢子粉的滤液，50℃减压回收乙醇溶剂后，得到所述灵芝孢子的提取液。
(3)取黄花倒水莲根粗粉1重量份，与10～20倍重量的水，95℃加热回流提取1h，过滤，收集滤液。滤渣加入5～15倍重量的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，收集滤液。合并2次滤液得到的所述黄花倒水莲粗粉的滤液，经DM-130大孔树脂吸附后，依次以20％乙醇、65％～75％乙醇进行洗脱，收集65％～75％乙醇洗脱液，50℃减压回收乙醇溶剂后，得到所述黄花倒水莲的提取液。
步骤2：将得到的所述混合粗粉的提取液、所述灵芝孢子的提取液及所述黄花倒水莲的提取液合并，在-55℃条件下冷冻干燥，直至将合并的所述混合粗粉的提取液、所述灵芝孢子的提取液及所述黄花倒水莲的提取液中的溶剂完全去除，得到原料重量比例为25：25：25：4：1的药食同源组合物。
实施例6
本实施例涉及一种保肝的药食同源的组合物，由以下质量份数的药物原料制备得到：山楂20份、葛根20份、枳椇子20份、灵芝孢子3份和黄花倒水莲2份。
本实施例涉及的一种保肝的药食同源的组合物的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：
(1)取山楂粗粉、葛根粗粉、枳椇子粗粉各20重量份，与10～20倍重量的水，95℃加热回流提取1h，过滤，收集滤液。滤渣加入5～15倍重量的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，收集滤液。合并2次虑液得到的所述混合粗粉的滤液Ⅰ，加入等体积95％乙醇，过滤，收集所述混合粗粉的滤液Ⅱ，即为所述混合粗粉的提取液。
(2)取灵芝孢子粉3重量份，用10～20倍重量的75％(v/v)乙醇，于50℃超声波提取1h，超声波提取功率为250W，过滤，收集滤液。滤渣加入5～15倍重量的75％(v/v)乙醇，50℃超声波提取0.5h，超声波提取功率为250W，过滤，收集滤液。合并2次虑液得到的所述灵芝孢子粉的滤液，50℃减压回收乙醇溶剂后，得到所述灵芝孢子的提取液。
(3)取黄花倒水莲根粗粉1重量份，与10～20倍重量的水，95℃加热回流提取1h，过滤，收集滤液。滤渣加入5～15倍重量的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，收集滤液。合并2次滤液得到的所述黄花倒水莲粗粉的滤液，经DM-130大孔树脂吸附后，依次以20％乙醇、65％～75％乙醇进行洗脱，收集65％～75％乙醇洗脱液，50℃减压回收乙醇溶剂后，得到所述黄花倒水莲的提取液。
步骤2：将得到的所述混合粗粉的提取液、所述灵芝孢子的提取液及所述黄花倒水莲的提取液合并，在-55℃条件下冷冻干燥，直至将合并的所述混合粗粉的提取液、所述灵芝孢子的提取液及所述黄花倒水莲的提取液中的溶剂完全去除，得到原料重量比例为20：20：20：3：2的药食同源组合物。
对比例1
本对比例取山楂粗粉，与10～20倍重量的水，95℃加热回流提取1h，过滤，收集滤液。滤渣加入5～15倍重量的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，收集滤液。合并2次虑液，加入等体积95％乙醇，过滤，收集滤液，冷冻干燥即得到山楂提取物。
对比例2
本对比例取葛根粗粉，与10～20倍重量的水，95℃加热回流提取1h，过滤，收集滤液。滤渣加入5～15倍重量的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，收集滤液。合并2次虑液，加入等体积95％乙醇，过滤，收集滤液，冷冻干燥即得到葛根提取物。
对比例3
本对比例取枳椇子粗粉，与10～20倍重量的水，95℃加热回流提取1h，过滤，收集滤液。滤渣加入5～15倍重量的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，收集滤液。合并2次虑液，加入等体积95％乙醇，过滤，收集滤液，冷冻干燥即得到枳椇子提取物。
对比例4
本对比例取灵芝孢子粉，用10～20倍重量的75％(v/v)乙醇，于50℃超声波提取1h，超声波提取功率为250W，过滤，收集滤液。滤渣加入5～15倍重量的75％(v/v)乙醇，50℃超声波提取0.5h，超声波提取功率为250W，过滤，收集滤液。合并2次虑液，50℃减压回收乙醇溶剂后，冷冻干燥得到灵芝孢子提取物。
对比例5
本对比例取黄花倒水莲根粗粉，与10～20倍重量的水，95℃加热回流提取1h，过滤，收集滤液。滤渣加入5～15倍重量的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，收集滤液。合并2次滤液，经DM-130大孔树脂吸附后，依次以20％乙醇、65％～75％乙醇进行洗脱，收集65％～75％乙醇洗脱液，50℃减压回收乙醇溶剂后，冷冻干燥得黄花倒水莲提取物。
对比例6
本对比例涉及一种保肝的药食同源的组合物，由以下质量份数的药物原料制备得到：山楂20份、葛根20份、枳椇子20份、灵芝孢子3份。
本实施例涉及的一种保肝的药食同源的组合物的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：
(1)取山楂粗粉、葛根粗粉、枳椇子粗粉各20重量份，与10～20倍重量的水，95℃加热回流提取1h，过滤，收集滤液。滤渣加入5～15倍重量的水，95℃加热回流提取0.5h，过滤，收集滤液。合并2次虑液得到的所述混合粗粉的滤液Ⅰ，加入等体积95％乙醇，过滤，收集所述混合粗粉的滤液Ⅱ，即为所述混合粗粉的提取液。
(2)取灵芝孢子粉3重量份，用10～20倍重量的75％(v/v)乙醇，于50℃超声波提取1h，超声波提取功率为250W，过滤，收集滤液。滤渣加入5～15倍重量的75％(v/v)乙醇，50℃超声波提取0.5h，超声波提取功率为250W，过滤，收集滤液。合并2次虑液得到的所述灵芝孢子粉的滤液，50℃减压回收乙醇溶剂后，得到所述灵芝孢子的提取液。
步骤2：将得到的所述混合粗粉的提取液及所述灵芝孢子的提取液合并，冷冻干燥，得得到原料重量比例为20：20：20：3的药食同源的组合物。
动物实验
1、实验材料
实验动物：从湖南斯莱克景达实验动物有限公司购买SPF级雄性昆明小鼠90只，6～8周龄，适应性饲养7天。
动物模型：将小鼠随机分为15组，每组6只，即空白对照组，模型组，联苯双酯组(浙江万邦德制药集团股份有限公司，100mg/kg/d)、实施例1～6组(100mg/kg/d)和对比例1～6组(100mg/kg/d)。连续灌胃给药7d，每天1次，空白对照组和模型组小鼠灌胃等量的生理盐水。从给药6d起，至给药结束，除空白对照组小鼠外，立即用50％食用酒精给小鼠灌胃，灌胃3次，两次间隔12h，单次给予酒精剂量为5g/kg，建立小鼠酒精性肝损伤模型。
2、实验方法
2.1组合物对酒精性肝损伤小鼠血清中SOD和MDA的影响
将空白对照组，模型组，联苯双酯组、实施例1～6组和对比例1～6组，共15组的小鼠最后一次给药4h后，通过眼底静脉采血制备血清，按照南京建成生物工程研究所的SOD检测试剂盒(货号：A001-3)和MDA检测试剂盒(货号：A003-1)说明书，测定各组小鼠血清中的SOD活性和MDA含量。
2.2组合物对酒精性肝损伤小鼠肝脏中IL-1β和TNF-α表达的影响
将空白对照组，模型组，联苯双酯组、实施例1～6组和对比例1～6组，共15组的小鼠最后一次给药4h后，利用二氧化碳窒息法处死小鼠，取肝脏，称重，按1:9(g/mL)比例加入生理盐水，于冰上充分匀浆。离心10分钟(13000g,4℃)，取上清液。用武汉酶免生物科技有限公司生产的白细胞介素IL-1β检测试剂盒(货号：MM-0040M1)和TNF-α检测试剂盒(货号：MM-0132M1)，测定上清液中的IL-1β和TNF-α浓度。
2.3组合物对酒精性肝损伤小鼠肝脏指数的影响
将空白对照组，模型组，联苯双酯组、实施例1～6组和对比例1～6组，共15组的小鼠最后一次给药4h后，利用二氧化碳窒息法处死小鼠，称小鼠体重；取肝脏，称肝脏重量，计算肝脏指数，公式为：肝脏指数＝肝脏重量/体重×100％。
2.4组合物对酒精性肝损伤小鼠血清中ALT和AST活性的影响
将空白对照组，模型组，联苯双酯组、实施例1～6组和对比例1～6组，共15组的小鼠最后一次给药4h后，通过眼底静脉采血制备血清，按照长春汇力生物技术有限公司的ALT检测试剂盒(货号：C001-a)和AST检测试剂盒(货号：C002-a)说明书，测定各组小鼠血清中的ALT和AST活性。
3、实验结果
3.1组合物对酒精性肝损伤小鼠血清中SOD和MDA的影响
酒精在代谢过程中会产生大量活性氧，引起脂质过氧化作用，从而破坏机体氧化还原平衡和线粒体功能，诱发氧化应激胁迫及脂质代谢紊乱，最后导致肝损伤。如表1所示，模型组小鼠SOD活性显著降低，MDA含量显著升高(p<0.01)，表明酒精代谢产生的活性氧消耗了大量SOD，引起脂质过氧化，产生大量MDA。用100mg/kg/d的山楂、葛根、枳椇子、灵芝孢子、黄花倒水莲提取物和组合物处理后，血清中SOD活性升高，MDA含量降低(p<0.05)，表明所述提取物和组合物可以缓解酒精性肝损伤小鼠肝脏中的氧化应急胁迫，达到保护肝脏的功效。其中，所述优选方案的药食同源组合物(实施例1)，效果最为显著。
表1组合物对酒精性肝损伤小鼠血清中SOD和MDA的影响(n＝6)
组别 SOD(U/mg蛋白) MDA(nmol/mg蛋白)
空白对照组 107.8±7.8 0.60±0.13
模型组 25.7±5.6## 2.74±0.39##
联苯双酯组 82.3±5.8** 1.20±0.12**
实施例1组 71.2±5.4** 1.39±0.14**
实施例2组 54.1±4.8** 1.98±0.21**
实施例3组 64.7±5.1** 1.54±0.16**
实施例4组 51.1±4.9** 2.06±0.20**
实施例5组 69.8±5.1** 1.47±0.14**
实施例6组 68.5±5.2** 1.45±0.13**
对比例1组 43.0±5.7** 2.19±0.19*
对比例2组 41.6±5.2** 2.23±0.15*
对比例3组 45.8±4.9** 2.17±0.21*
对比例4组 39.7±4.7* 2.26±0.18*
对比例5组 39.5±4.6* 2.29±0.19*
对比例6组 48.9±5.3** 2.15±0.17*
注：与空白对照组比较，##p<0.01；与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01
3.2组合物对酒精性肝损伤小鼠肝脏中IL-1β和TNF-α表达的影响
研究表明，酒精诱导的肝损伤以及酒精代谢产生的内毒素会引发肝炎，进一步加重肝损伤。如表2所示，酒精性肝损伤模型组小鼠肝脏中IL-1β和TNF-α两种促炎症因子的表达显著增加(p<0.01)，表明模型小鼠产生了肝炎。用100mg/kg/d的山楂、葛根、枳椇子、灵芝孢子、黄花倒水莲提取物提取物和组合物处理后，小鼠肝脏中的IL-1β和TNF-α表达显著降低(p<0.05)，表明所述提取物和组合物可以抑制酒精性肝损伤小鼠肝脏中的炎症反应，达到保护肝脏的功效。其中，所述优选方案的药食同源组合物(实施例1)，效果最为显著。
表2组合物抑制酒精性肝损伤小鼠肝脏中IL-1β和TNF-α的表达(n＝6)
组别 IL-1β(ng/L) TNF-α(ng/L)
空白对照组 50.4±4.2 352.6±32.8
模型组 130.6±3.5## 1013.1±68.5##
联苯双酯组 78.2±8.6** 557.1±25.9**
实施例1组 82.9±5.8** 590.2±29.3**
实施例2组 97.3±4.6** 803.2±47.6**
实施例3组 87.5±5.3** 673.4±33.1**
实施例4组 100.3±6.5** 854.7±41.4**
实施例5组 84.0±6.1** 637.2±49.2**
实施例6组 85.9±5.7** 650.3±47.0**
对比例1组 110.3±6.9* 904.5±48.6*
对比例2组 113.1±7.2* 902.3±47.5*
对比例3组 107.6±7.0** 893.4±45.2*
对比例4组 117.2±6.1* 911.3±39.5*
对比例5组 114.5±6.4* 908.7±38.7*
对比例6组 103.7±6.8** 872.5±43.8**
注：与正常对照组比较，##p<0.01；与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01
3.3组合物对酒精性肝炎小鼠肝脏指数的影响
肝损伤通常会伴随肝脏充血、水肿、增生肥大或萎缩等症状，导致肝脏指数偏离正常值。因此，肝脏指数可以反映肝脏的损伤程度。如表3所示，酒精性肝损伤模型组小鼠的肝脏指数显著增大(p<0.01)，表明模型小鼠的肝脏产生了损伤。用100mg/kg/d的山楂、葛根、枳椇子、灵芝孢子、黄花倒水莲提取物和组合物处理后，肝脏指数显著降低(p<0.05)，表明所述提取物和组合物可以减轻酒精性诱发的小鼠肝损伤。其中，所述优选方案的药食同源组合物(实施例1)，效果最为显著。
表3组合物对酒精性肝炎小鼠肝脏指数的影响(n＝6)
组别 肝脏指数(％)
空白对照组 4.08±0.14
模型组 4.88±0.09##
联苯双酯组 4.19±0.05**
实施例1组 4.25±0.09**
实施例2组 4.51±0.11**
实施例3组 4.33±0.12**
实施例4组 4.55±0.10**
实施例5组 4.29±0.11**
实施例6组 4.40±0.08**
对比例1组 4.67±0.07*
对比例2组 4.64±0.10*
对比例3组 4.60±0.13**
对比例4组 4.69±0.08*
对比例5组 4.72±0.06*
对比例6组 4.59±0.12**
注：与正常对照组比较，##p<0.01；与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01
3.4组合物对酒精性肝炎小鼠血清中ALT和AST活性的影响
血液中的ALT和AST是反映肝脏损伤的重要指标。如表4所示，酒精性肝损伤模型组小鼠血清中的ALT和AST活性显著升高(p<0.01)，表明模型小鼠的肝脏产生了损伤。用100的山楂、葛根、枳椇子、灵芝孢子、黄花倒水莲提取物和组合物处理后，小鼠血清中的ALT和AST活性显著降低(p<0.01)，表明所述提取物和组合物可以减轻酒精性诱发的小鼠肝损伤。其中，所述优选方案的药食同源组合物(实施例1)，效果最为显著。
表4组合物降低酒精性肝炎小鼠血清中ALT和AST的活性(n＝6)
/>
注：与正常对照组比较，##p<0.01；与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01
综上可知，本发明开展了药食同源的组合物对小鼠酒精性肝损伤的保护作用研究，研究表明：本发明的药食同源的组合物能够降低酒精性肝损伤小鼠血清中的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性和丙二醛(MDA)含量，升高血清中的超氧化物歧化酶(SOD)活性，抑制肝脏中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达，缓解肝脏肿大，证实本发明制备的药食同源的组合物具有保肝护肝的功能。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (10)

1.一种保肝的药食同源的组合物，其特征在于，由以下质量份数的药物原料制备得到：山楂15～25份、葛根15～25份、枳椇子15～25份、灵芝孢子2～4份和黄花倒水莲1～2份。
2.根据权利要求1所述一种保肝的药食同源的组合物，其特征在于，由以下质量份数的药物原料制备得到：山楂18～22份、葛根18～22份、枳椇子18～22份、灵芝孢子2.5～3.5份和黄花倒水莲1～1.8份。
3.根据权利要求1所述一种保肝的药食同源的组合物，其特征在于，由以下质量份数的药物原料制备得到：山楂20份、葛根20份、枳椇子20份、灵芝孢子3份和黄花倒水莲1份。
4.根据权利要求1所述一种保肝的药食同源的组合物，其特征在于，由以下质量份数的药物原料制备得到：山楂15份、葛根15份、枳椇子15份、灵芝孢子2份和黄花倒水莲1份。
5.根据权利要求1所述一种保肝的药食同源的组合物，其特征在于，由以下质量份数的药物原料制备得到：山楂25份、葛根25份、枳椇子25份、灵芝孢子4份和黄花倒水莲1份。
6.基于权利要求1至5任一项所述一种保肝的药食同源的组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1，提取：
(1)混合粗粉的提取：取相应质量份数的山楂、葛根、枳椇子进行破碎混合，过5～20目筛，得到混合粗粉，在所述混合粗粉加入5～20倍重量的水后，在95℃加热回流进行提取0.5～1.5h，重复进行至少2次的加水提取，每次提取后进行过滤，收集、合并每次过滤得到的所述混合粗粉的滤液Ⅰ；在所述混合粗粉的滤液Ⅰ中加入相当于其体积的3/4～5/4的体积分数为95％的乙醇溶液，过滤，收集所述混合粗粉的滤液Ⅱ，所述混合粗粉的滤液Ⅱ即为所述混合粗粉的提取液；
(2)灵芝孢子的提取：取相应质量份数的灵芝孢子进行破碎，过5～20目筛，得到灵芝孢子粉，在所述的灵芝孢子粉中加入5～20倍重量的体积分数为65％～85％乙醇，在50℃超声波提取0.5～1.5h，重复进行至少2次的加水提取，每次提取后进行过滤，收集、合并每次过滤得到的所述灵芝孢子粉的滤液，进行减压浓缩，得到所述灵芝孢子的提取液；
(3)黄花倒水莲的提取：取上述质量份数的黄花倒水莲的根进行破碎，过5～20目筛，得到黄花倒水莲粗粉，在所述黄花倒水莲粗粉中加入10～20倍重量的水，在95℃加热回流提取0.5～1.5h，重复进行至少2次的加水提取，每次提取后进行过滤，收集、合并每次过滤得到的所述黄花倒水莲粗粉的滤液，所述黄花倒水莲粗粉的滤液经大孔树脂吸附后，依次采用体积分数为10～20％乙醇和体积分数为65～75％乙醇进行洗脱，收集体积分数为65～75％乙醇的洗脱液，进行减压浓缩，得到所述黄花倒水莲的提取液；
步骤2，冷冻干燥：
将得到的所述混合粗粉的提取液、所述灵芝孢子的提取液及所述黄花倒水莲的提取液合并，冷冻干燥，得到保肝的药食同源的组合物。
7.根据权利要求6所述一种保肝的药食同源的组合物的制备方法，其特征在于，步骤1中灵芝孢子的提取时，所述超声波的功率为200W～300W；步骤1中黄花倒水莲的提取时，所述大孔树脂为DM-130、HP-10、HP-20、HPD-200、HPD-300、ADS-17中任意一种或至少2种的组合，所述黄花倒水莲粗粉的滤液经大孔树脂吸附的流速为0.05倍柱体积/min，所述黄花倒水莲粗粉的滤液与大孔树脂体积质量比为(10～20)mL/g；步骤1中灵芝孢子的提取时和黄花倒水莲的提取时，所述减压浓缩具体为在50℃减压回收乙醇，直至乙醇全部回收。
8.根据权利要求6所述一种保肝的药食同源的组合物的制备方法，其特征在于，步骤2中，冷冻干燥的具体的条件为：在-55℃条件下，直至将合并的所述混合粗粉的提取液、所述灵芝孢子的提取液及所述黄花倒水莲的提取液中的溶剂完全去除。
9.一种保肝的药食同源的组合物的应用，其特征在于，将权利要求1至5任一项所述的保肝的药食同源的组合物用于制备保肝的药物。
10.根据权利要求9所述一种保肝的药食同源的组合物的应用，其特征在于，所述保肝的药物的剂型为片剂、膏剂、粉剂、汤剂、颗粒剂、胶囊剂或滴丸剂中的任意一种。
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