CN116377069A - Adar1作为预测肺腺癌免疫治疗效果的生物标志物和靶点的应用 - Google Patents

Adar1作为预测肺腺癌免疫治疗效果的生物标志物和靶点的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了ADAR1作为预测肺腺癌免疫治疗效果的生物标志物和靶点的应用。具体公开了生物标志物和/或检测所述生物标志物的物质在制备用于预测或辅助预测肺腺癌免疫单药治疗疗效的产品中的应用。本发明还公开了ADAR1及其抑制剂在肺腺癌免疫治疗中的应用。实验表明，ADAR1抑制剂可以抑制肿瘤的发生和发展，用于预防或治疗肺腺癌，并且ADAR1抑制剂与肺腺癌免疫治疗药物(如免疫检查点抑制剂)协同作用可增强免疫检查点抑制剂的抗肿瘤作用。本发明开发的预测性生物标志物可以使免疫检查点抑制剂的疗效最大化，筛选出能从ICIs治疗中获益的人群，并且通过多靶点联合治疗扩大ICIs治疗的响应人群，为更多患者带来生存获益。

Description

ADAR1作为预测肺腺癌免疫治疗效果的生物标志物和靶点的 应用
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体涉及ADAR1作为预测肺腺癌免疫治疗效果的生物标志物和靶点的应用。
背景技术
肺癌是中国发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，患者生存率亟待提高。按照组织病理学分类，肺腺癌(lung adenocarcinoma，LUAD)占比约为50％-55％，是最常见的组织学类型。近年来，分子靶向和免疫治疗等不断涌现，使肺腺癌患者的生存改善明显。靶向治疗如酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosine kinase inhibitor,TKI)虽能达到很好的疗效，但其仅针对特定的靶点，且很快出现耐药。免疫治疗主要针对肿瘤周围的免疫微环境，通过免疫检查点抑制剂，阻断肿瘤细胞和免疫细胞表面的结合，抑制信号传导，从而激活免疫细胞活性，依靠自身免疫实现杀伤肿瘤的目的。免疫检查点抑制剂治疗(Immune checkpointinhibitors，ICIs)是肿瘤治疗的一次新的突破，如靶向PD-1或PD-L1的单克隆抗体可以解除T细胞的免疫抑制信号，发挥抗肿瘤作用。临床试验和真实世界研究表明免疫治疗能为患者带来长期生存获益，但只是部分患者表现出敏感的治疗反应，目前仍急需可靠的标志物筛选出这部分人群。并且免疫检查点抑制剂的价格极其昂贵，因此，研究和开发能更好的预测免疫治疗疗效的生物标志物，准确地鉴别能够从PD-1/PD-L1抑制剂中受益的患者至关重要。
与靶向治疗相比，肿瘤免疫治疗需要有广泛的生物标志物和检测方法用于指导临床。一是因为不同免疫治疗方法的作用机制不同，如靶向激活或抑制T细胞受体(CTLA-4和PD-1)。二是在肿瘤微环境中存在多种免疫抑制的机制。因此，与靶向药物相比，免疫疗法的生物标志物更为复杂。当前涌现了许多预测免疫治疗效果的热门的标志物，如与肿瘤炎症微环境相关的蛋白质水平的PD-L1，代表新增抗原水平的DNA水平的肿瘤突变负荷(Tumormutation burden，TMB)，但是仍存在不足。PD-L1表达水平是美国FDA唯一批准的一个预测标志物。然而，PD-L1敏感性和特异性有限，用来检测PD-L1的表达水平受多种因素影响、抗体种类多以及cut off值不一致导致PD-L1的定量也存在一定的不准确性，所以单独使用这一个指标不能完全反映免疫微环境。在基因水平，TMB也在一定程度上可以反映体细胞产生的新抗原及肿瘤免疫原性，进而预测患者对免疫治疗的反应性，但是仅仅依靠TMB并不能完全表征抗原产生、提呈并激发免疫反应的过程，单独使用也无法区分出治疗敏感和不敏感的人群。建立预测性生物标志物可以使免疫检查点抑制剂的疗效最大化。
因此寻找更精准并具有临床转化潜能的生物标志物可以指导肺腺癌患者接受ICIs治疗，筛选出能从ICIs治疗中获益的人群以及耐药的人群，并且通过多靶点联合治疗扩大ICIs治疗的响应人群，为更多患者带来生存获益。
发明内容
本发明的目的是提供一种可用于预测或辅助预测肺腺癌免疫单药治疗疗效的生物标志物，和/或，该生物标志物作为靶点在提高肺腺癌免疫单药治疗疗效中的应用。所要解决的技术问题不限于所描述的技术主题，本领域技术人员通过以下描述可以清楚地理解本文未提及的其它技术主题。
为了实现上述目的，本发明首先提供了生物标志物和/或检测所述生物标志物的物质的下述任一种应用：
A1)在制备用于预测或辅助预测肺腺癌免疫单药治疗疗效的产品中的应用；
A2)在制备用于评估或辅助评估肺腺癌免疫单药治疗疗效的产品中的应用；
A3)在制备用于预测或辅助预测肺腺癌免疫单药治疗的无进展生存时间长短的产品中的应用；
所述生物标志物可为ADAR1。
进一步地，所述ADAR1包括ADAR1蛋白或ADAR1基因。
进一步地，所述产品包括但不限于试剂、试剂盒、芯片或试纸。
所述制备包括开发和/或筛选。
所述ADAR1基因mRNA的核苷酸序列可为SEQ ID No.1，所述ADAR1蛋白的氨基酸序列可为SEQ ID No.2，其中SEQ ID No.1的第988-3780位编码SEQ ID No.2所示的ADAR1蛋白。
进一步地，所述检测所述生物标志物的物质可包括通过免疫组织化学(immunohistochemistry，IHC)技术检测所述生物标志物的物质。
进一步地，所述检测所述生物标志物的物质可为检测待测肺腺癌患者的肿瘤组织(如基线肿瘤组织)中的ADAR1表达量的物质。
上述应用中，所述检测所述生物标志物的物质可包括用于检测ADAR1蛋白表达量或ADAR1蛋白含量的试剂。
上述应用中，所述试剂可包括结合ADAR1蛋白的抗体、多肽、蛋白质或核酸分子。
本文所述结合ADAR1蛋白的抗体包括抗ADAR1蛋白的抗体或其功能性片段(如抗体可变区Fv、单链抗体ScFv、抗原结合片段Fab或Fab’、F(ab’)2、Fab’-SH等抗体片段)。
本发明还提供了试剂盒，所述试剂盒可包括本文中任一所述检测所述生物标志物的物质，所述试剂盒可具有下述至少一种用途：
B1)预测或辅助预测肺腺癌免疫单药治疗的疗效；
B2)评估或辅助评估肺腺癌免疫单药治疗的疗效；
B3)预测或辅助预测肺腺癌免疫单药治疗的无进展生存时间长短。
所述试剂盒可为疗效预测试剂盒、疗效评估试剂盒或伴随诊断试剂盒。
所述试剂盒的检测样本可为肿瘤组织样本。
进一步地，所述试剂盒可包括ADAR1单抗或ADAR1多抗，所述试剂盒还可包括免疫组化试剂。
本发明还提供了所述生物标志物ADAR1作为靶点的下述任一种应用：
C1)在制备用于提高肺腺癌免疫单药治疗疗效的产品中的应用；
C2)在制备用于治疗或辅助治疗肺腺癌的产品中的应用；
C3)在制备抑制肺腺癌肿瘤的发生和/或发展的产品中的应用；
C4)在制备用于与肺腺癌免疫单药治疗联用的产品中的应用。
本发明还提供了ADAR1抑制剂的下述任一种应用：
D1)在制备用于提高肺腺癌免疫单药治疗疗效的产品中的应用；
D2)在制备用于治疗或辅助治疗肺腺癌的产品中的应用；
D3)在制备抑制肺腺癌肿瘤的发生和/或发展的产品中的应用；
D4)在制备用于与肺腺癌免疫单药治疗联用的产品中的应用。
进一步地，所述产品可为试剂或药物。
所述ADAR1抑制剂可具有至少如下任一种作用：
E1)抑制或降低ADAR1基因的表达或活性；
E2)抑制或降低ADAR1基因转录为mRNA；
E3)抑制或降低ADAR1基因翻译为蛋白质；
E4)抑制或降低ADAR1蛋白的活性或功能。
上述应用中，所述ADAR1抑制剂可包括降低ADAR1蛋白表达量或ADAR1蛋白含量的物质，或抑制ADAR1基因表达的物质，所述物质可包括核酸分子、碳水化合物、脂、小分子化合物、抗体、多肽、蛋白、基因编辑载体、慢病毒或腺相关病毒中的一种或多种。
进一步地，所述抑制ADAR1基因表达可通过本领域技术人员所熟知的基因突变、基因沉默、基因敲除、基因编辑或基因敲减技术实现。如利用RNA干扰(RNAi)技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达；利用基因编辑技术的工具可以是CRISPR/Cas9技术、锌指核酸酶(ZFNs)或转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)技术等，但不限于此。利用基因敲减(基因敲低，gene knock-down)技术从转录后水平或翻译水平使ADAR1基因表达失活或基因沉默的技术为本领域技术人员所熟知。所述基因敲减技术包括RNA干扰、Morpholino干扰、反义核酸、核酶或显性负抑制突变但不限于此。
利用病毒(如慢病毒、腺相关病毒)表达的shRNA或siRNA抑制基因的表达，进行基因的沉默是本领域技术人员所熟知的。
所述核酸分子可包括shRNA、microRNA、siRNA和/或反义寡核苷酸。
进一步地，所述shRNA(短发夹RNA)、microRNA(微小RNA)、siRNA(小干扰RNA)和/或反义寡核苷酸(如反义RNA)用于抑制ADAR1基因的表达。
上述应用中，所述核酸分子可包括shRNA，所述shRNA可包括下述任一种：
F1)所述shRNA靶向干扰ADAR1基因的表达；
F2)所述shRNA的编码DNA序列为SEQ ID No.3。
所述ADAR1抑制剂还可为抗体，所述抗体可为抗ADAR1蛋白的抗体或其功能性片段。
所述ADAR1抑制剂还可为慢病毒或腺相关病毒，所述慢病毒或腺相关病毒可为表达用于敲低ADAR1基因的shRNA(如SEQ ID No.3所示的shRNA)的重组慢病毒或重组腺相关病毒。
本文中，所述免疫单药治疗可为免疫检查点抑制剂治疗。
本文中，所述免疫单药治疗可包括抗PD-1免疫治疗或抗PD-L1免疫治疗。
本文中，所述免疫单药治疗采用的药物可为PD-1抑制剂和/或PD-L1抑制剂。
本发明还提供了用于预防或治疗肺腺癌的联合用药物，所述联合用药物可包括本文中任一所述的ADAR1抑制剂和肺腺癌免疫治疗药物。
进一步地，所述肺腺癌免疫治疗药物可为免疫检查点抑制剂，所述免疫检查点抑制剂包括PD-1抑制剂(如抗PD-1抗体)和/或PD-L1抑制剂(如抗PD-L1抗体)。
进一步地，所述肺腺癌免疫治疗药物包括但不限于帕博利珠单抗、纳武利尤单抗、信迪利单抗、特瑞普利单抗或德瓦鲁单抗。
上述应用的目的可以是疾病诊断目的、疾病预后目的和/或疾病治疗目的，它们的目的也可以是非疾病诊断目的、非疾病预后目的和非疾病治疗目的；它们的直接目的可以是获取疾病诊断结果、疾病预后结果和/或疾病治疗结果的中间结果的信息，它们的直接目的可以是非疾病诊断目的、非疾病预后目的和/或非疾病治疗目的。
本发明利用免疫组织化学的方法检测来自肺腺癌患者的肿瘤组织的ADAR1表达水平，并发现ADAR1表达水平与接受ICIs治疗的肺腺癌患者的无进展生存期(progression-free survival，PFS)显著相关，并以此开发了用于预测或辅助预测肺腺癌免疫单药治疗疗效2的生物标志物，进一步以ADAR1为靶点研究了ADAR1及其抑制剂在提高肺腺癌免疫单药治疗疗效中的应用。本发明的实验证明：1、ADAR1可以作为生物标志物用于预测或辅助预测免疫单药治疗疗效，可以通过检测待测肺腺癌患者肿瘤组织中ADAR1的表达量来预测或辅助预测待测肺腺癌患者免疫单药治疗疗效，判断标准可为：ADAR1低表达组中的待测患者的免疫单药治疗疗效好于或候选好于ADAR1高表达组中的待测患者；免疫单药治疗疗效体现在无进展生存率或无进展生存时间；在相同随访时间下，ADAR1高表达组中的待测患者的无进展生存率少于或候选少于低表达组中的待测患者，或无进展生存时间少于或候选少于低表达组中的待测患者。2、降低ADAR1的表达可以抑制肿瘤生长，实现治疗肺腺癌，即ADAR1抑制剂可以抑制肿瘤生长，进而抑制肿瘤的发生和/或发展，用于预防或治疗肺腺癌。3、降低ADAR1的表达协同免疫单药治疗(如抗PD-L1免疫治疗)可以显著抑制肿瘤生长，提高免疫单药治疗疗效，增强免疫治疗抗肿瘤的作用，即ADAR1抑制剂与肺腺癌免疫治疗药物(如免疫检查点抑制剂)联用可以显著提高免疫单药治疗疗效，增强免疫治疗抗肿瘤的作用。
综上，ADAR1可以作为疗效标志物用于预测或辅助预测肺腺癌免疫单药治疗疗效。ADAR1抑制剂可以抑制肿瘤的发生和/或发展，用于预防或治疗肺腺癌，并且ADAR1抑制剂与免疫检查点抑制剂协同作用可增强免疫检查点抑制剂的抗肿瘤作用。
附图说明
图1为高表达ADAR1与更差的肺腺癌免疫治疗疗效相关。其中，图1中A为PR、SD、PD患者的ADAR1表达水平；图1中B为ADAR1表达水平与接受免疫治疗的肺腺癌患者无进展生存率分析；图1中C为ADAR1高、低表达组与CD8+T细胞浸润百分比；图1中D为ADAR1高、低表达组的PD-L1水平。(*表示差异达到显著水平(p＜0.05)，**表示差异达到显著水平(p＜0.01))。
图2为肺腺癌动物模型中联合抑制ADAR1表达协同增强免疫治疗效果。其中，图2中A为肿瘤体积；图2中B为同型对照组、抗PD-L1单抗组小鼠肿瘤生长情况。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中的ADAR1基因mRNA的核苷酸序列为SEQ ID No.1，ADAR1蛋白的氨基酸序列为SEQ ID No.2，其中SEQ ID No.1的第988-3780位编码SEQ IDNo.2所示的ADAR1蛋白。
使用SPSS Statistics(25.0版)、GraphPad Prism 8(GraphPad Software,Inc.)和R(3.6.2版)软件进行统计分析。学生t检验用于比较两组之间的数据，卡方检验用于分析肿瘤微环境。使用Kaplan–Meier方法绘制生存曲线。*：P<0.05，**：P<0.01，***：P<0.001，****：P<0.0001。
实施例1、ADAR1在预测肺腺癌免疫单药治疗的疗效中的应用
本实施例中病例选择：本实施例为回顾性、非干预性临床研究。本研究已通过中国医学科学院肿瘤医院伦理委员会批准(审批号：20/242-2438)，按照赫尔辛基宣言的原则进行，并已获得所有受试者的知情同意。
本实施例主要纳入自2016年4月到2019年12月在中国医学科学院肿瘤医院接受抗PD-1/PD-L1抗体治疗的肺腺癌的患者。入组标准为：1)临床诊断局限晚期或晚期的肺腺癌患者；2)首次接受免疫治疗，但不限治疗线数。排除标准为：1)胸腺癌、胸膜间皮瘤等其他类型胸部肿瘤；2)无基线治疗标本。纳入研究的患者是每两周/三周接受抗PD-1抗体治疗一次(纳武利尤单抗是3mg/kg/次或240mg/次，每两周治疗一次；帕博利珠单抗、信迪利单抗和特瑞普利单抗均是200mg/次，每三周治疗一次)。通常患者是每六周进行一次颈胸腹部增强CT评估治疗效果，必要时增加头颅增强MRI完善疗效评价。
本实施例纳入患者的一般情况包括初诊年龄、性别、ECOG PS评分、吸烟状态、病理类型、基因突变类型。临床资料包括免疫治疗线数和抗生素治疗史。抗生素治疗史限定于接受免疫治疗前1周至免疫治疗疾病进展期间的使用情况。
患者在治疗期间的疗效评价是根据实体瘤疗效评估标准1.1版本(ResponseEvaluation Criteria in Solid Tumors,RECIST version 1.1)进行评估的。疗效评价指标包括完全缓解(complete response,CR)、部分缓解(partial response,PR)、疾病稳定(stable disease,SD)和疾病进展(progressive disease,PD)。
无进展生存时间(progression-free survival,PFS)定义为患者自开始接受免疫单药治疗到疾病进展或死亡的时间。
以上资料均通过查询住院病历及电话随访获得。本研究的末次随访时间是2022年9月27日。本研究收集患者免疫单药治疗前的手术组织标本，标本离体后立即按操作规范取材，进行蜡块包埋。所有组织标本均得到病理组织切片证实为肺腺癌。标本获取及操作过程获得中国医学科学院肿瘤医院伦理委员会批准。标本的提供者均知情同意。
本研究共纳入20例肺腺癌免疫治疗患者，基线资料情况具体见表1。
表1、肺腺癌免疫治疗患者基线资料情况
Figure BDA0004126647630000071
1、20名肺腺癌患者的组织中ADAR1蛋白表达水平的检测
通过Human anti-ADAR1 monoclonal antibody(Abcam公司产品，Cat#ab88574)，采用免疫组织化学(IHC)技术检测20名肺腺癌患者的穿刺组织(基线肿瘤组织)中ADAR1蛋白的表达，其中ADAR1抗体的使用浓度为1:200，用ADAR1染色评分表示表达量，评分高的表达量高。
按照以下原则对ADAR1蛋白表达进行评分：染色评分(ADAR1染色评分)＝染色强度×阳性肿瘤细胞百分比×100。其中，染色强度评分为：无显色为0(阴性)，浅黄色为1(弱阳性)，黄色为2(中等阳性)，棕黄色为3(强阳性)；阳性肿瘤细胞百分比为在高倍显微镜(×400)下检查十个随机选择的视野，通过计算视野内染色阳性的肿瘤细胞(弱阳性+中等阳性+强阳性)占该视野内所有肿瘤细胞的百分比，得到该视野阳性肿瘤细胞百分比，再使用十个视野阳性肿瘤细胞的百分比的平均值记作阳性肿瘤细胞百分比。
结果如图1中A和表2所示，疾病进展组(PD)患者的ADAR1表达明显偏高。
表2、20名肺腺癌患者肿瘤组织中ADAR1的染色评分及无进展生存期
Figure BDA0004126647630000072
Figure BDA0004126647630000081
上表中，第3列中进展状态的1表示第4列随访时间内复发，0表示第4列随访时间内无复发或者失访。
2、生存曲线
根据最佳界值(ADAR1染色评分为6)，将入组患者分为基线ADAR1表达水平高组(高于6)和基线ADAR1表达水平低组(低于或等于6)。
根据进展状态和无进展生存时间绘制生存曲线，结果如图1中B所示，分析结果提示，相同随访时间下，ADAR1表达水平低组的无进展生存率明显增加(p＜0.001)。
3、ADAR1表达与肿瘤免疫微环境之间的关系
PD-L1比例和CD8+T细胞比例根据免疫组织化学染色的结果进行评估。肿瘤比例评分(TPS)>1％的样本定义为PD-L1+样本；CD8+T细胞浸润>10％的样本定义为CD8TIL+样本。结果表明，基线ADAR1表达水平低组的CD8+T细胞浸润比例(图1中C)以及PD-L1表达水平(图1中D)更高。
上述肿瘤组织中ADAR1的表达量是通过染色评分体现的。
综上结果可知，可以通过检测待测肺腺癌患者肿瘤组织中ADAR1的表达量来预测或辅助预测待测肺腺癌患者免疫单药治疗疗效，判断标准如下：
ADAR1低表达组中的待测患者的免疫单药治疗疗效好于或候选好于ADAR1高表达组中的待测患者；
免疫单药治疗疗效体现在无进展生存率或无进展生存时间；在相同随访时间下，ADAR1高表达组中的待测患者的无进展生存率少于或候选少于低表达组中的待测患者。
因此，ADAR1可以作为生物标志物用于评估或辅助评估免疫单药治疗疗效。
实施例2、ADAR1抑制剂联合免疫单药治疗可以协同增强免疫治疗的抗肿瘤作用
ADAR1抑制剂可以是抑制ADAR1基因表达、沉默或敲除ADAR1基因的物质，也可以是抑制或降低ADAR1蛋白含量和/或活性的物质。
1、细胞系及动物的选择
本研究所用的小鼠LLC细胞系来源于美国ATCC细胞资源中心。
本研究用到的5至6周龄的雄性C57小鼠购买于北京华阜康公司。实验所用的小鼠均饲养在SPF级环境中。研究中所有的操作均严格遵守动物伦理委员会制定的规章制度。
2、构建敲降ADAR1基因的LLC细胞
根据小鼠ADAR1基因序列和RNAi原理，利用短发卡RNA(shRNA)序列，在LLC细胞中敲减ADAR1基因，来抑制ADAR1基因的表达。设计的shRNA的编码DNA序列为：5’-CCGGCCTCAGTGCTGATTGACTTCTCAAGAGAAAGTCAATCAGCACTGAGGTTTTTTG-3’(SEQ ID No.3)。
将上述设计的shRNA的编码DNA(SEQ ID No.3)构建到慢病毒克隆载体中，得到重组慢病毒载体，命名为shADAR1，该重组载体由和元生物技术(上海)股份有限公司提供。
将重组慢病毒载体shADAR1与包装质粒共转染HEK293T细胞，在HEK293T细胞中进行包装。包装后得到表达干扰人ADAR1基因的shRNA的重组慢病毒，即RNAi病毒，将RNAi病毒转染LLC细胞后，得到敲降ADAR1基因的LLC细胞。
3、小鼠肺腺癌皮下移植瘤模型
采用5至6周龄的雄性C57小鼠皮下移植小鼠肺腺癌细胞系野生型LLC细胞以及敲降ADAR1基因的LLC细胞来源的肿瘤块建立荷瘤小鼠模型，每组10只，共20只。其中野生型LLC细胞来源的肿瘤块建立的荷瘤小鼠(10只)简称为野生组荷瘤小鼠，敲降ADAR1基因的LLC细胞来源的肿瘤块建立的荷瘤小鼠(10只)简称为敲降组荷瘤小鼠。
每三天使用游标卡尺测量肿瘤的大小，构建小鼠模型的具体方法可参照文献“Chengming Liu,Sufei Zheng,Runsen Jin,et al.The superior efficacy of anti-PD-1/PD-L1immunotherapy in KRAS-mutant non-small cell lung cancer thatcorrelates with an inflammatory phenotype and increased immunogenicity.CancerLett.2020；470:95-105.”)。
肿瘤的体积计算公式为：体积＝长径×短径2/2
4、荷瘤小鼠的抗肿瘤处理
当小鼠肿瘤最大径约0.5cm后，根据小鼠肿瘤大小将野生组荷瘤小鼠和敲降组荷瘤小鼠分别随机分为两组，共四组，每组5只，并接受不同的处理方式：
(1)对照组(5只野生组荷瘤小鼠)：分别于开始给药的第1，4，7，10天，给每只小鼠腹腔注射100ul的磷酸盐缓冲盐溶液(江苏凯基生物技术股份有限公司产品，1×PBS(0.1M，pH7.4))。
(2)ADAR1敲降组(5只敲降组荷瘤小鼠)：分别于开始给药的第1，4，7，10天，给每只小鼠腹腔注射100ul的磷酸盐缓冲盐溶液(江苏凯基生物技术股份有限公司产品，1×PBS(0.1M，pH7.4)))。
(3)抗PD-L1单抗组(5只野生组荷瘤小鼠)：分别于开始给药的第1，4，7，10天，给每只小鼠腹腔注射100ul的抗PD-L1单抗(美国BioXell公司的产品，InVivoMab anti-mousePD-L1，Cat#BE0101)。
(4)抗PD-L1单抗联合ADAR1敲降组(5只敲降组荷瘤小鼠)：分别于开始给药的第1，4，7，10天，给每只小鼠腹腔注射100ul的抗PD-L1单抗(美国BioXell公司的产品，InVivoMabanti-mouse PD-L1，Cat#BE0101)。
上述每组5只，采用腹腔注射给药方式，具体的药量为抗PD-L1单抗(美国BioXell公司的产品，InVivoMab anti-mouse PD-L1，Cat#BE0101)10mg/kg/只。
每隔两天使用游标卡尺测量小鼠皮下肿瘤的长径和短径，计算体积＝长径×短径2/2，并用肿瘤体积绘制生长曲线并观察各组小鼠的生存情况。将肿瘤生长到最大径2cm、小鼠体重下降大于2g或者死亡定为终点事件。实验结束时采用二氧化碳麻醉处死后解剖取材，减轻动物痛苦。
结果如下：
在小鼠肺腺癌皮下移植瘤模型中，与对照组相比，ADAR1敲降组可以降低肿瘤生长速率，且敲降ADAR1联合抗PD-L1单抗(简称双抗治疗组)处理之后，其肿瘤生长速度和大小较单药治疗组(抗PD-L1单抗组)和单独的敲降组(ADAR1敲降组)均显著降低(图2中A和B)。
上述结果表明，敲降ADAR1可以抑制肿瘤生长，实现治疗肺腺癌，且敲降ADAR1或抑制ADAR1表达协同抗PD-L1单抗可以显著抑制肿瘤生长，提高免疫单药治疗疗效，增强免疫治疗抗肿瘤的作用。
综上，ADAR1抑制剂可以抑制肿瘤生长，进而抑制肿瘤的发生和/或发展，用于预防或治疗肺腺癌，与肺腺癌免疫治疗药物联用可以显著提高免疫单药治疗疗效，增强免疫治疗抗肿瘤的作用。
以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。

Claims (10)

1.生物标志物和/或检测所述生物标志物的物质的下述任一种应用：
A1)在制备用于预测或辅助预测肺腺癌免疫单药治疗疗效的产品中的应用；
A2)在制备用于评估或辅助评估肺腺癌免疫单药治疗疗效的产品中的应用；
A3)在制备用于预测或辅助预测肺腺癌免疫单药治疗的无进展生存时间长短的产品中的应用；
所述生物标志物为ADAR1。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测所述生物标志物的物质包括用于检测ADAR1蛋白表达量或ADAR1蛋白含量的试剂。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂包括结合ADAR1蛋白的抗体、多肽、蛋白质或核酸分子。
4.试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-3中任一所述检测所述生物标志物的物质，所述试剂盒具有下述至少一种用途：
B1)预测或辅助预测肺腺癌免疫单药治疗的疗效；
B2)评估或辅助评估肺腺癌免疫单药治疗的疗效；
B3)预测或辅助预测肺腺癌免疫单药治疗的无进展生存时间长短。
5.权利要求1中所述生物标志物作为靶点的下述任一种应用：
C1)在制备用于提高肺腺癌免疫单药治疗疗效的产品中的应用；
C2)在制备用于治疗或辅助治疗肺腺癌的产品中的应用；
C3)在制备抑制肺腺癌肿瘤的发生和/或发展的产品中的应用；
C4)在制备用于与肺腺癌免疫单药治疗联用的产品中的应用。
6.ADAR1抑制剂的下述任一种应用：
D1)在制备用于提高肺腺癌免疫单药治疗疗效的产品中的应用；
D2)在制备用于治疗或辅助治疗肺腺癌的产品中的应用；
D3)在制备抑制肺腺癌肿瘤的发生和/或发展的产品中的应用；
D4)在制备用于与肺腺癌免疫单药治疗联用的产品中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述ADAR1抑制剂包括降低ADAR1蛋白表达量或ADAR1蛋白含量的物质，或抑制ADAR1基因表达的物质，所述物质包括核酸分子、碳水化合物、脂、小分子化合物、抗体、多肽、蛋白、基因编辑载体、慢病毒或腺相关病毒中的一种或多种。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述核酸分子包括shRNA，所述shRNA包括下述任一种：
F1)所述shRNA靶向干扰ADAR1基因的表达；
F2)所述shRNA的编码DNA序列为SEQ ID No.3。
9.根据权利要求1-3或5-8中任一所述应用，或权利要求4所述试剂盒，其特征在于，所述免疫单药治疗包括抗PD-1免疫治疗或抗PD-L1免疫治疗。
10.用于预防或治疗肺腺癌的联合用药物，其特征在于，所述联合用药物包括权利要求6-8中任一所述的ADAR1抑制剂和肺腺癌免疫治疗药物。
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