CN116359389A - 测定醋中乙酸不可交换氢稳定同位素比值的预处理方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提出一种测定醋中乙酸不可交换氢稳定同位素比值的预处理方法，以用于测定醋中乙酸不可交换氢的氢同位素比值，属于食品稳定同位素分析技术领域。该预处理方法包括如下步骤：向醋样品萃取液中加入反应试剂，用该可交换氢替换乙酸原有的羧基氢使之达到同位素交换平衡。本发明可用于简单、快速测定醋类产品中乙酸不可交换氢的同位素比值，可用于醋类产品的真实性或掺假检测研究与应用。

Description

测定醋中乙酸不可交换氢稳定同位素比值的预处理方法
技术领域
本发明属于稳定同位素分析测试领域，涉及一种测定醋中乙酸不可交换氢稳定同位素比值的预处理方法，以用于测定醋样品中乙酸不可交换氢的同位素比值。
背景技术
醋是中国各大菜系中传统的调味品，也是人们日常生活中的必需品。GB 2719-2018《食品安全国家标准食醋》已于2019年12月21日正式实施，规定食醋是“单独或混合使用各种含有淀粉、糖的物料、食用酒精，经微生物发酵酿制而成的液体酸性调味品”，要求“冰乙酸(又名冰醋酸)和冰乙酸(低压羟基化法)不可用于食醋”。而以前的配制类产品将按照GB 31644-2018《食品安全国家标准复合调味料》进行管理。
2021年6月，国家市场监督管理总局发布《关于加强酱油和食醋质量安全监督管理的公告》，将依法查处“使用冰乙酸等原料配制生产食醋、产品标识虚假标注”等违法行为。现阶段，食品检测人员往往基于感官、有机酸挥发性组分等特征分析以及指纹图谱特征等进行食醋真实性鉴别研究，但由于食醋与复合调味料(醋味调味汁)产品间相似的理化和感官特征，现有方法的实际应用效果尚不理想。
国外研究表明，根据乙酸不可交换氢的稳定氢同位素比值差异可检测醋类饮品中是否掺入工业醋酸[Hermann,A.(2001)Determination of D/H isotope ratio in aceticacid from vinegars and pickled products by H-2-NMR spectroscopy.Eur Food ResTechn,212 683-686；Fauhl,C.,Wittkowski,R.(1996)On-line 1H-NMR to facilitatetube preparation in SNIF-NMR analysis.Z Lebensm Unters Forsch(1996),541-545；Hsieh C W,Li P H,Cheng J Y,et al.Using SNIF-NMR method to identify theadulteration of molasses spirit vinegar by synthetic acetic acid in ricevinegar[J].Industrial crops and products,2013,50:904-908；Perini M,Paolini M,Simoni M,et al.Stable isotope ratio analysis for verifying the authenticityof balsamic and wine vinegar[J].Journal of agricultural and food chemistry,2014,62(32):8197-8203]，在此方法中，使用点特异性分馏-核磁共振技术(SNIF-NMR)分析乙酸不可交换氢的稳定氢同位素比值。针对此项技术，欧盟有关机构组织了实验室间方法比对[Thomas F,Jamin E.2H NMR and 13C-IRMS analyses of acetic acid fromvinegar,18O-IRMS analysis of water in vinegar:International collaborativestudy report[J].Analytica chimica acta,2009,649(1):98-105]，验证了测定技术的有效性。然而，此方法在实际操作中存在一些问题：由于氘在自然界中的丰度低(天然丰度为150*10-6左右)，并且氘核的共振频率较低、谱线分散度较低，因此SNIF-NMR法的灵敏度很低，需要较多的样品量(＞300mL)和较长的分析时间(＞8h)才能得到满意的信噪比信号和测定精度，另外由于醋中除乙酸外，还含有水、乙醇等含氢化合物，样品测定前需使用特殊的蒸馏装置(Cadiot Column)对乙醇进行纯化处理，而该蒸馏装置不仅是欧洲Eurofins公司的专利产品，而且整个样品提纯过程耗费的时间长达6h，有使用者也承认乙酸的提纯程序是本技术应用过程中难以逾越的瓶颈[Ko W C,Cheng J Y,Chen P Y,et al.Optimizedextraction method of acetic acid in vinegar and its effect on SNIF-NMRanalysis to control the authenticity of vinegar[J].Food and bioprocesstechnology,2013,6(8):2202-2206.]。
为降低分析难度，也有人研究利用稳定同位素比值质谱开展乙酸的氢同位素分析，但此处要考虑稳定同位素技术分析测试的基本原理和纯度要求，需要消除水对乙酸转化为氢气时的影响，更需消除原溶液中水分对乙酸羧基氢的影响。2009年MilankaGlavanovic和Ivan Samjlovic申请了一项美国专利，其中提到可以将溶液中的乙酸转化为乙酸盐，经干燥除水、有机试剂浸提除去可溶性有机物后得到含乙酸盐的固体样品，用高温裂解/元素分析仪转化成氢气后用稳定同位素比值质谱仪测定，然而，该技术无论从原理上还是技术上均有很大缺陷：食品基质的有机酸除乙酸外，还有甲酸、草酸、乳酸、苹果酸等，将乙酸转化为乙酸盐时，上述有机酸也会同时转化为有机酸盐，此时无论其具有与乙酸盐相同的物理特征，是无法除去的，因此其得到的“固体样品”中乙酸盐是不纯净的。发明人认为该方法测定的是乙酸盐的稳定氢同位素比值，其实是含有其他有机酸的；另外，乙酸盐是极易吸潮的，由于使用高温裂解/元素分析仪进行转化时，包样过程和等待进样时是开发式的，很容易从空气中吸收水分而又引入了另外的氢原子，继而测定不准确，因此本专利在2014年时被撤回/驳回。另有日本的Ryota Hattori等人[Hattori,R.,Yamada,K.,Shibata,H.,Hirano,S.,Tajima,O.,&Yoshida,N.(2010).Measurement of the Isotope Ratio ofAcetic Acid in Vinegar by HS-SPME-GC-TC/C-IRMS.Journal of Agricultural andFood Chemistry,58(12),7115–7118.doi:10.1021/jf100406y]在2010年建立了顶空固相微萃取方式提取醋中乙酸并用气相色谱-裂解-稳定同位素比值质谱测定乙酸氢同位素比值的方法，但该方法使用了顶空固相微萃取技术从而实现乙酸与其他含氢组分的分离，但萃取头对萃取效率和稳定性具有很大影响，有科研人员曾质疑该技术应用于稳定同位素分析的可行性，并且该技术体系下测定的是乙酸整体的氢同位素比值，因而不具有实际应用意义。也正因如此，国内外均不看好稳定同位素比值质谱在乙酸不可交换氢氢同位素比值的分析可行性，该技术近20年来一直未有突破，因此，国际葡萄与葡萄酒组织于2015年选择采用SNIF-NMR技术制定了方法标准[RESOLUTION OIV-OENO 527-2015 Determination ofthe distribution of deuterium in acetic acid extracted from wine vinegarusing nuclear magnetic resonance(NMR)]。
钟其顶等申请的国家发明专利《2020100815968醋类饮品中乙酸不可交换氢的稳定氢同位素比值的测定方法》,采用：向醋中加入碱性试剂形成以乙酸盐为主体的有机酸盐体系，通过冷冻或加热干燥形式除去大部分水分和可挥发性的醇醛酯类有机物，得到固体残渣，最后向固体残渣中加入强酸溶液以此酸化各有机酸，此时溶液中含有水、乙酸、有机酸和硫酸，通过筛选合适的色谱柱将水、乙酸等分开并用气相色谱-裂解-稳定同位素比值质谱测定乙酸的稳定氢同位素比值(4个氢的平均特征)，最终通过标准品校正实现了利用稳定同位素比值质谱测定乙酸不可交换氢稳定氢同位素比值。该技术相较于前人的研究，包括相对OIV的方法标准来说都是质的突破：样品可批量前处理、测试时间由5h缩减为20min以内，分析测试成本大大降低，效率得到极大提升，尤其是避免了方法推广时对OIV中国外专利微蒸馏装置的依赖。但是，该前处理过程由于涉及碱化-除水-酸化三个关键步骤，尤其是除水的过程需要很长时间(冷冻干燥需24h以上，烘干操作需6h以上)；并且，由于待测样品中含有大量水分的缘故，需要专用的可分离水与乙酸的聚合性填料的色谱柱，普通的极性柱存在因分离水分不完全而影响乙酸氢同位素测定的风险。为进一步提高分析效率，本发明基于稳定同位素分析的基本原理和要求，提出了另一种关键思路，据此开发了一种新的预处理方法。
发明内容
为克服现有技术缺陷，本发明开发了一种醋样品的预处理方法，以测定醋中乙酸不可交换氢位点的同位素比值。该发明操作更简单，安全系数高，适合大批量样品的分析测试，有利于推动稳定同位素技术在醋领域的进一步研究与应用。本发明提供了测定醋中乙酸不可交换氢位点同位素比值的方法，本发明的方法能够消除溶液醋中水分对乙酸可交换氢的同位素特征测定的影响，进而能够利用气相色谱-裂解-稳定同位素比值质谱技术准确、稳定分析乙酸不可交换氢的同位素比值，其包括如下步骤：
通过液液萃取方式从醋样品中提取乙酸，并用反应试剂中的可交换氢离子与乙酸中的可交换氢离子反应，实现替代的目的，由此得到样品溶液。
进一步地，在本发明中，所述试剂是甲醇或乙醇。
进一步地，在本发明中，所述试剂的体积分数是萃取溶液中乙酸5倍以上，优选5-100倍，更优选30倍。
进一步地，在本发明的方法还包括如下步骤中之一、之二、之三、之四或之五：
1)测定醋样的总酸含量；
2)通过液液萃取方式提取乙酸得到萃取液，向萃取液中加入反应试剂得到样品溶液；
3)用气相色谱-裂解-稳定同位素比值质谱测定样品溶液中乙酸的稳定氢同位素比值；
4)取乙酸标品溶液，使用与样品相同的有机试剂和反应试剂以相同或相近的比例进行处理，使其与样品溶液具有相同或相近的成分特征，并用气相色谱-裂解-稳定同位素比值质谱测定标品溶液中乙酸的稳定氢同位素比值；
5)根据乙酸标准品不可交换氢的给定值和标品溶液乙酸氢同位素测定值构建标准曲线，校正得出醋样品中乙酸不可交换氢的同位素比值。
进一步地，在本发明中，液液萃取时使用有机试剂从醋样品中提取乙酸，所述有机试剂是乙酸乙酯、正己烷、石油醚、氯仿、四氯化碳和***等，优选***。
进一步地，在本发明中，为了便于批量样品操作，醋样测定总酸含量后用水将醋样和乙酸标准品至稀释相同酸度，然后再进行同样的萃取、加入同样的反应试剂，酸度优选3.5g/100mL。
进一步地，在本发明中，用气相色谱-裂解-稳定同位素比值质谱测定时，醋样溶液和标品溶液用有机试剂进一步稀释至合适进样浓度，或直接进样。
进一步地，在本发明中，所述气相色谱-裂解-稳定同位素比值质谱仪测定各溶液中乙酸的稳定氢同位素比值，该值是乙酸分子4个氢原子的同位素特征平均值，包括不可交换氢和可交换氢。
进一步地，在本发明中，所述气相色谱-裂解-稳定同位素比值质谱仪中配备毛细管色谱柱。
进一步地，在本发明中，其中所述醋样品为陈醋、米醋、果醋、白醋，或具有醋样品特征的酸性调味液。
示例性地，本发明使用反应试剂替换醋样乙酸中原有的可交换氢，使可交换氢达到氢同位素交换平衡，其特征在于可以直接向醋样中加入反应试剂，如甲醇、乙醇等；也可以先通过液液萃取形式提取乙酸，然后用反应试剂进行同位素交换。优选萃取后再加入反应试剂达到氢同位素交换平衡。
在本发明的方法中，对于标品，使用与样品用相同的有机试剂和反应试剂以相同或相近的比例进行处理，使其与样品溶液具有相同或相近的成分特征，并用气相色谱-裂解-稳定同位素比值质谱测定标品溶液中乙酸的稳定氢同位素比值，其特征在于样品溶液和标品溶液中可交换氢的同位素特征应一致。在本发明的方法中，用气相色谱-裂解-稳定同位素比值质谱测定时，醋样品和标品溶液使用有机试剂或水稀释至合适进样浓度，或直接进样。
在本发明中用于萃取的所述有机试剂为无水的、且与乙酸具有互溶性的烷烃类、酯类、醇类、醚类等试剂中的一种或多种，优选***。
示例性地，所述的用反应试剂替换醋样乙酸中原有的可交换氢，该试剂与原样品中具有可交换氢的分子的倍数为5-100倍，优选5-50倍，更优选稀释30倍，例如为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、60、70、80、90、100倍。例如，可以将用有机试剂萃取乙酸，然后加入反应试剂，其中反应试剂与乙酸的体积分数倍数为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、60、70、80、90、100倍，优选5-50倍，最优选30倍。
示例性地，醋样测定总酸含量后用水将醋样和乙酸标准品至稀释相同酸度，例如为0.2g/100mL、0.5g/100mL、1g/100mL、1.2g/100mL、1.4g/100mL、1.6g/100mL、1.8g/100mL、2.0g/100mL、2.5g/100mL、3.0g/100mL、3.5g/100mL，优选3.5g/100mL。
在本发明中，所述气相色谱-裂解-稳定同位素比值质谱仪测定各溶液中乙酸的稳定氢同位素比值，该值是乙酸分子4个氢原子的同位素特征平均值，包括不可交换氢和可交换氢。
显而易见地，所述气相色谱-裂解-稳定同位素比值质谱仪中配备毛细管色谱柱。
在本发明中所述醋例如为醋样品为标签标注为食醋或果醋的产品，如陈醋、米醋、苹果醋、白醋、山楂醋等。
进一步地，在本发明中的方法中，调整气相色谱-裂解-稳定同位素比值质谱仪的条件参数：进样口温度270℃，进样体积2uL，气相色谱流速为恒流1.2mL/mi n，气相色谱进样口分流比20:1，柱温箱程序为180℃恒温；裂解模块保证1420℃恒温。
任选地，确认稳定同位素比值质谱仪的工作环境、气密性、离子室的真空度均符合分析要求，然后检验仪器测定H2中δD的精密度和线性，必要时调整离子源参数值。
更具体地，本发明提供了一种测定醋中乙酸不可交换氢的同位素比值的方法，包括如下步骤：
1)测定醋样的总酸含量；
2)通过液液萃取从醋中分离提取乙酸得到萃取液，向萃取液中加入反应试剂样品溶液，其中，加入反应试剂可使样品溶液中的可交换氢达到氢同位素交换平衡；
3)用气相色谱-裂解-稳定同位素比值质谱测定样品溶液中乙酸的稳定氢同位素比值；
4)取乙酸标品溶液，使用与样品用相同的有机试剂和反应试剂以相同或相近的比例进行处理，使其与样品溶液具有相同或相近的成分特征，并用气相色谱-裂解-稳定同位素比值质谱测定标品溶液中乙酸的稳定氢同位素比值；
5)根据乙酸标准品不可交换氢的给定值和标品溶液乙酸氢同位素测定值构建标准曲线，校正得出醋样品中乙酸不可交换氢的同位素比值。
其中所述反应试剂为甲醇，萃取溶剂为***。
本发明所提供的操作方案，为醋中乙酸不可交换氢的同位素分析及其在掺假检测/真实性保障提供了快速、稳定的方法。
具体实施方式
需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
试验例1方法稳定性研究
a)分别取陈醋、米醋、白醋、甜醋和冰乙酸各一个，其中冰乙酸模拟普通食醋的酸度稀释20倍得到乙酸溶液，按照GB 12456-2021的第三法测定上述5个样品的总酸含量，结果分别为6.71g/100mL、5.37g/100mL、4.52g/100mL，3.73g/100mL和4.83g/100mL；
b)将上述4个醋样和乙酸溶液，各取30mL，分别用水稀释至3.5g/100mL。
c)分别取稀释后的各溶液10mL，分别加入10mL***，涡旋混匀后，取出上层溶液待用，每个样品处理3次。
d)取萃取后的各样品溶液1mL，以甲醇作为反应试剂，各加入反应试剂0.3mL，涡旋混匀后，待测。
e)建立气相色谱-裂解-稳定同位素比值质谱测定乙醇氢同位素比值的方法：进样口温度270℃，气相色谱(极性键合二乙烯基苯/乙二醇二甲基丙烯酸酯柱30m×0.32mm×10μm)流速为恒流1.2mL/min，气相色谱进样口分流比20:1，柱温箱程序为180℃恒温；裂解反应管温度1420℃；测定结果见表1。
表1各类样品乙酸δD测定结果(‰)
样品类型 重复-1 重复-2 重复-3 平均值 标准偏差
陈醋样品 -252.3 -254.4 -256.0 -254.2 1.8
米醋样品 -273.1 -271.5 -271.3 -272.0 1.0
白醋样品 -221.1 -220.5 -222.7 -221.5 1.1
甜醋样品 -288.7 -290.2 -292.0 -290.3 1.6
乙酸溶液 -167.3 -170.2 -168.4 -168.6 1.5
由上表可知，本方法研究的是前处理过程的重复性，各样品同时处理3次后测定结果的标准偏差均小于3‰，符合稳定同位素比值质谱仪测定氢同位素的要求。
试验例2方法准确性验证
a)相对于试验例1中的冰乙酸(记作冰乙酸1#)，另选两个具有同位素梯度的冰乙酸样品(分别记作冰乙酸2#和冰乙酸3#)；
b)用核磁共振技术按照OIV RESOLUTION OIV-OENO 527-2015的方法标准测定3个冰乙酸的D/H值，经换算后乙酸不可交换氢的δDCH3值分别为-225.6‰、-41.7‰和+163.4‰；
c)将冰乙酸2#和冰乙酸3#分别用水稀释20倍得到两个乙酸溶液(2#和3#)，按照GB12456-2021的第三法测定乙酸溶液总酸含量分别为4.91g/100mL和4.84g/100mL；
d)乙酸溶液各取30mL，分别用水稀释至3.5g/100mL。
e)分别取稀释后的各溶液10mL，分别加入10mL***，涡旋混匀后，取出上层溶液待用，每个样品处理3次。取萃取后的各样品溶液1mL，各加入反应试剂甲醇0.3mL，涡旋混匀后，待测。
f)建立气相色谱-裂解-稳定同位素比值质谱测定乙醇氢同位素比值的方法：进样口温度270℃，气相色谱(极性键合二乙烯基苯/乙二醇二甲基丙烯酸酯柱30m×0.32mm×10μm)流速为恒流1.2mL/min，气相色谱进样口分流比20:1，柱温箱程序为180℃恒温；裂解反应管温度1420℃；测定结果见表2。
表2冰乙酸样品中乙酸δD测定结果(‰)
样品类型 重复-1 重复-2 重复-3 平均值 标准偏差
冰乙酸1# -167.3 -170.2 -168.4 -168.6 1.5
冰乙酸2# -23.7 -21.5 -24.5 -23.2 1.6
冰乙酸3# 128.9 129.1 126.1 128.0 1.7
由上表可知，表2与表1具有相似的重复性特征，标准偏差均小于3‰，符合稳定同位素的测定要求。以3个冰乙酸δD的测定均值与OIV方法测定的乙酸不可交换氢的δDCH3值进行线性拟合(δDCH3＝1.3176*δD-7.1564)，可知R2＝0.9997，由此可以表明该方法具有与OIV方法同样的准确度特征。因此，该方法测得的乙酸δD可以用于乙酸不可交换氢同位素比值δDCH3的分析计算。
实施例1
a)取试验例1中的表1所得的数据，结合试验例2中根据表2所得的标准曲线，可得到试验例1中醋样的乙酸δDCH3值，结果见表3。
表3各样品乙酸δDCH3分析测试结果(‰)
样品类型 陈醋样品 米醋样品 白醋样品 甜醋样品 乙酸溶液
δD值 -254.2 -272.0 -221.5 -290.3 -168.6
δDCH3值 -342.1 -365.5 -298.9 -389.7 -227.6
由表3可知，乙酸溶液根据标准曲线校正得到的结果为-227.6‰，与OIV方法测定的结果-225.6‰之间的差异小于3‰，因此，本方法可以用于测定各类醋样品乙酸不可交换氢的δDCH3值。
实施例2
a)分别取试验例1中的陈醋、米醋和冰乙酸样品，以及试验例2中的2个冰乙酸样品；
b)取试验例1和试验例2中各样品萃取后的样品，待测；
c)建立气相色谱-裂解-稳定同位素比值质谱测定乙醇氢同位素比值的方法：进样口温度270℃，气相色谱(键合/交联聚乙醇固定相的极性wax柱50m×0.25mm×0.20μm)流速为恒流1.2mL/min，气相色谱进样口分流比20:1，柱温箱程序升温：起始120℃，保持1min，以15℃/min升温至200℃，保持2min；裂解反应管温度1420℃；乙酸δD测定结果见表4。
表4各样品乙酸δD测定结果(‰)
样品类型 陈醋样品 米醋样品 冰乙酸1# 冰乙酸2# 冰乙酸3#
δD值 -266.1 -280.3 -177.6 -36.9 115.1
由表4可知，对比表1和表2的数据，同一样品在不同的色谱柱条件下测得的结果是不同的。而将冰乙酸的测定值和OIV方法测定结果进行线性拟合，可得拟合曲线δDCH3＝1.3291*δD+9.4197与试验例2中所得的线性方差略有不同，但拟合系数R2＝0.9999，与试验例2一致。将该拟合曲线用于数据计算，得到陈醋和米醋样品乙酸的δDCH3值，结果见表5。
表5各样品乙酸δDCH3分析测试结果(‰)
样品类型 陈醋样品 米醋样品
δDCH3值 -344.3 -363.1
对比表5和表3可知，两种色谱条件下，相同样品的δDCH3结果的绝对偏差均小于3‰，符合测定要求，这说明不同的测试条件并不影响最终结果。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种测定醋中乙酸不可交换氢稳定同位素比值的预处理方法，以用于测定醋中乙酸不可交换氢的同位素比值，其特征在于，包括如下步骤：
通过醋样品中提取乙酸，并加入反应试剂，得到样品溶液。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述反应试剂是甲醇或乙醇。
3.根据权利要求1所述的方法，所述试剂的体积分数是萃取溶液中乙酸5倍以上，优选5-100倍，更优选30倍。
4.根据权利要求1所述的方法，其还包括如下步骤中之一、之二、之三、之四或之五：
1)测定醋样的总酸含量；
2)通过液液萃取方式提取乙酸，向萃取液中加入反应试剂后得到样品溶液；
3)用气相色谱-裂解-稳定同位素比值质谱测定样品溶液中乙酸的稳定氢同位素比值；
4)取乙酸标品溶液，使用与样品相同的有机试剂和反应试剂以相同或相近的比例进行处理，使其与样品溶液具有相同或相近的成分特征，并用气相色谱-裂解-稳定同位素比值质谱测定标品溶液中乙酸的稳定氢同位素比值；
5)根据乙酸标准品不可交换氢的给定值和标品溶液乙酸氢同位素测定值构建标准曲线，校正得出醋样品中乙酸不可交换氢的同位素比值。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于液液萃取时使用有机试剂从醋样品中提取乙酸，所述有机试剂是乙酸乙酯、正己烷、石油醚、氯仿、四氯化碳和***等，优选***。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，为了便于批量样品操作，醋样测定总酸含量后用水将醋样和乙酸标准品至稀释相同酸度，然后再进行同样的萃取、同位素交换处理，酸度优选3.5g/100mL。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，用气相色谱-裂解-稳定同位素比值质谱测定时，醋样溶液和标品溶液用有机试剂进一步稀释，或直接进样。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于，所述气相色谱-裂解-稳定同位素比值质谱仪测定各溶液中乙酸的稳定氢同位素比值，该值是乙酸分子4个氢原子的同位素特征平均值，包括不可交换氢和可交换氢。
9.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于，所述气相色谱-裂解-稳定同位素比值质谱仪中配备毛细管色谱柱。
10.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述醋样品为陈醋、米醋、果醋、白醋，或具有醋样品特征的酸性调味液，任选地，通过液液萃取方式从醋样品中提取乙酸。
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