CN116429943A - 一种基于双波长等基线差示融合图谱的中药黄芩质量分析方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于双波长等基线差示融合图谱的中药黄芩质量分析方法，属于中药质量控制技术领域。本发明采用HPLC技术建立黄芩对照药材的双波长等基线差示融合特征图谱，将其与供试药材图谱进行比对来辨别药材的真伪；采用内标物质对特征峰化学成分进行相对定量来区分药材的优劣。在满足中药化学成分“整体性”与“清晰性”的同时减轻了中药复杂体系质量评控成本，可有效解决黄芩有效成分同时快速测定和中药复杂体系质量评控成本高的问题。
Description
技术领域
本发明属于中药质量控制技术领域，具体涉及以黄芩对照药材为基准物质，建立一套不依赖于多种对照品，基于双波长等基线差示融合图谱的较为全面控制中药黄芩药材质量的方法，此方法稳定合理，可以弥补目前黄芩药材质量控制的不足，为黄芩药材质量提升方法提供参考。
背景技术
黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensisGeorgi.的干燥根，收载于《中国药典》2020年版一部。其味苦、性寒，具有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎的功效。黄芩主要分布于我国东北、华北、西南和部分华中的广大地区，遍及黑龙江、吉林、辽宁、河北、内蒙古、山西、山东、河南、陕西、甘肃、宁夏等省份。现代药理学研究表明黄芩具有抗肿瘤、抗病毒、抗炎、抗氧化、护肝及神经保护等药理活性，同时证明黄酮及其苷类是黄芩含量最高成分，也是其药效成分，包括黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素等。
目前，中药质量控制方法主要包括单指标含量测定法、多指标含量测定法、一测多评法和指纹图谱与含量测定结合法等。以上方法具有灵敏度高、重复性好、指标明确的优点，能够为黄芩药材质量控制提供量化数据，但也存在着单一指标不能反映药材整体特征、多指标含量测定依赖于多种对照品且某些指标成分不能反映药效、指纹图谱只能模糊地评价药材相似性不能清晰地判断供试品真伪优劣的不足，且中药复杂体系质量评控技术难度和高额成本给中药企业带来了巨大的压力，因而对中药临床合理用药和临床疗效提升的指导和支持作用一直难以体现。
发明内容
针对上述问题，本发明提供一种基于双波长等基线差示融合图谱的中药黄芩质量分析方法。以黄芩对照药材为定性的基准物质，采用高效液相色谱结合Q-TOF-MS技术，建立一套不依赖于多种对照品，较为全面科学地控制黄芩药材质量的方法。
为了实现上述目的，本发明提供了如下技术方案。
本发明提供了一种基于双波长等基线差示融合图谱的中药黄芩质量分析方法，其特征在于，所述方法为对两个波长下的图谱进行融合的双波长等基线差示融合法。
进一步地，所述双波长等基线差示融合法建立双波长等基线差示融合图谱的具体步骤如下：
（1）取对照药材和供试药材进样检测，每份样品双样双针；
（2）分别从工作站中导出280 nm、300 nm的CSV和AIA格式的数据，将280 nm、300nm的CSV数据选取最大响应值进行全时段等基线融合；
（3）将10~14 min响应较高的数据替换为300 nm响应稍低的数据，最终得到差示融合数据；
（4）AIA格式数据经“中药指纹图谱相似度评价软件”转换为TXT数据，以差示融合数据替换TXT格式中的响应数据，保存TXT数据，即得双波长等基线差示融合图谱。
进一步地，所述方法通过黄芩药材特征图谱中的特征峰作为黄芩药材的定性标准，能够明确鉴定药材的真伪。
进一步地，所述方法通过建立的特征峰相对含量的计算方法确定的各特征峰相对含量的下限，能够区分黄芩的优劣。
本发明还提供了一种基于双波长等基线差示融合图谱的中药黄芩质量分析方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
步骤1 基于对照药材的黄芩药材定性研究；
（1）溶液的制备：取黄芩对照药材粉末或黄芩药材中粉，过四号筛，0.3 g，精密称定，加70%乙醇40 mL，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置100 mL量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀；精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，过0.22 μm微孔滤膜，即得；
（2）色谱条件：色谱柱：Agilent Poroshell 120 SB-C18（4.6 mm×100 mm，2.7 μm）；流动相：0.1%甲酸水（A）-乙腈（B），梯度洗脱；洗脱程序：0～10 min，20%→20% B；10～12min，20%→23% B；12～28 min，23%→23% B；28～30 min，23%→40% B；30～40 min，40%→40% B；40～45 min，40%→100% B；45～48 min，100%→100% B；流速：0.8 mL/min；柱温：30℃；DAD检测器波长：280 nm、300 nm；进样量：10 μL；
（3）双波长等基线差示融合图谱的建立：取黄芩对照药材和10批供试药材按（1）和（2）所述方法进样检测，每份样品双样双针；分别从工作站中导出280 nm、300 nm的CSV和AIA格式的数据，将280 nm、300 nm的CSV数据选取最大响应值进行全时段等基线融合，为了使图谱更全面清晰反应药材质量，将10~14min响应较高的数据替换为300 nm响应稍低的数据，最终得到差示融合数据；AIA格式数据经“中药指纹图谱相似度评价软件”转换为TXT数据，以差示融合数据替换TXT格式中的响应数据，保存TXT数据，即得双波长等基线差示融合图谱；
（4）特征图谱的建立：将（3）所得双波长等基线差示融合图谱导入“中药指纹图谱相似度评价软件”，获得10批供试药材的HPLC指纹图谱；以黄芩对照药材的图谱为参照谱图，使用中位数进行自动匹配，加以多点校正，标点特征峰，生成共有模式R，与对照药材特征图谱进行比对；
（5）相似度评价：以特征峰的相似度明确黄芩药材真伪；供试药材与对照药材的相似度均大于0.995；
（6）特征峰化学成分解析：采用Q-TOF-MS技术，通过分析化合物的保留时间、一级离子质荷比以及二级离子碎片信息，并与相关文献报道信息进行匹配，2号峰为黄芩苷，7号峰为汉黄芩苷，8号峰为黄芩素，9号峰为汉黄芩素；
步骤2 基于内标物质的特征峰化学成分相对定量研究；
2号峰“黄芩苷”为《中国药典》2020年版一部黄芩“含量测定”项下规定的指标，该峰分离效果好、保留时间稳定居中、标准品价格低廉，故以其作为内标物质，开展基于内标物质的特征峰化学成分相对定量研究；取“平均数-标准差”作为特征峰化学成分相对于内标物质化学成分的相对含量下限，供试药材根据此方法测得的特征峰相对含量不低于该含量下限为优；
步骤3 方法学考察：
（1）专属性试验：分别取混合对照品溶液、供试品溶液，按上述色谱条件进样分析，结果显示各主峰与杂质峰分离度良好，专属性强；
（2）线性与范围：取黄芩苷对照品溶液，逐级稀释2倍，得黄芩苷6个质量浓度溶液，分别按上述色谱条件进样分析，以质量（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线并进行线性回归，得到线性回归方程（Y=579.96X- 27.552），相关系数r=0.9999，结果表明黄芩苷在0.0784~2.51 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系；
（3）精密度试验：取同一供试品溶液，在上述色谱条件下连续进样6次，测定各色谱峰相对保留时间、相对峰面积，计算RSD值；结果显示各色谱峰相对保留时间、相对峰面积RSD值均小于0.92%，表明仪器精密度良好；
（4）稳定性试验：取同一供试品溶液，在上述色谱条件下，分别于制备后0、2、4、8、12、24 h进样，测定各色谱峰相对保留时间、相对峰面积，计算RSD值；结果显示各色谱峰相对保留时间、相对峰面积RSD值均小于1.6%，表明供试品溶液在24 h内稳定；
（5）重复性试验：取同一批次样品，平行制备6份供试品溶液，在上述色谱条件下进样检测，测定黄芩苷含量及各色谱峰相对保留时间、相对峰面积，计算RSD值；结果显示黄芩苷平均含量为12.34%，RSD为1.3%；各色谱峰相对保留时间、相对峰面积RSD值均小于2.0%，表明方法重复性良好；
（6）加样回收率：精密称定黄芩药材粉末6份，每份0.15 g，分别精密加入相当于0.15 g药材含量得黄芩苷对照品，按上述方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进样检测，计算得到黄芩苷的平均加样回收率为99.5%（n=6），RSD为1.1 %。
进一步地，所述步骤2的特征峰均为黄芩发挥其功效及药理作用的特征活性化学成分。
进一步地，所述方法通过黄芩药材特征图谱中的特征峰作为黄芩药材的定性标准，能够明确鉴定药材的真伪。
进一步地，所述方法通过建立的特征峰相对含量的计算方法确定的各特征峰相对含量的下限，能够区分黄芩的优劣。
与现有技术相比本发明的有益效果。
（1）本发明紧扣中药多成分、多功效和整合作用的质量内涵和特点，以能够反映其药效的化学成分为指标；采用一种自身参照物对特征峰化学成分进行相对定量，不需要购买大量对照品，尽可能控制供试药材有效化学成分含量。同时，针对单一波长部分成分响应值低以及不同波长主成分响应值均过高，导致图谱反应药材成分信息不全的情况，采用双波长等基线差示融合法对两个波长下的图谱进行融合。在满足中药化学成分“整体性”与“清晰性”的同时减轻了中药复杂体系质量评控成本。本发明以对照药材为基准物质构建特征图谱，并以可代表黄芩药效的有限个代表性成分作为特征峰，评价对照药材和供试药材特征峰的相似度，可以用于判断黄芩的真伪；选用保留时间稳定且价格低廉易获得的内标物质作为定量评价指标，开展基于内标物质的特征峰化学成分相对定量研究，通过内标物质化学成分准确定量，计算供试药材特征峰化学成分的相对含量。此方法可有效解决黄芩有效成分同时快速测定和中药复杂体系质量评控成本高的问题。
（2）本发明首次公开一种基于双波长等基线差示融合图谱的中药黄芩质量分析方法，可以弥补目前黄芩药材质量控制方法中单一指标不能反映药材整体特征、多指标含量测定依赖于多种对照品且某些指标成分不能反映药效、指纹图谱只能模糊地评价药材相似性不能清晰地判断供试品真伪优劣的不足。
（3）本研究选取分离度良好、信噪比大于10的色谱峰作为特征峰，共确定了11个特征峰。采用质谱技术指认出的黄芩特征峰化学成分为黄酮类。有研究表明黄芩黄酮类成分可显著抑制α-葡萄糖苷酶。除此之外，黄芩苷可诱导肿瘤细胞凋亡、阻滞肿瘤细胞周期抑制其增殖；汉黄芩苷具有抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗氧化、心血管保护、神经保护等多种药理活性作用；黄芩素的抗菌效力较强，抗菌谱广；汉黄芩素也显示出良好的抗肿瘤效果。上述化学成分被认为是黄芩中的主要活性成分，能全面科学地反映中药黄芩的内在质量。
附图说明
图1是10批黄芩供试药材的叠加图谱。
图2是黄芩对照药材特征图谱及供试药材共有模式。
图3是黄芩药材正离子模式下总离子流图。
图4是S1批次黄芩283 nm图谱。
图5是S1批次黄芩300 nm图谱。
图6是S1批次黄芩差示融合图谱。
图7是S1批次黄芩全时段等基线融合图谱。
具体实施方式
以下实施例将有助于对本发明的了解，但这些实施例仅为了对本发明加以说明，本发明并不限于这些内容。
实施例1。
Agilent-1260Ⅱ高效液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司）；Agilent 6550 Q-TOF-MS质谱仪（美国安捷伦科技有限公司）；HS6150型超声波清洗器（天津恒奥科技发展有限公司）；ME55十万分之一电子分析天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司）。
十批黄芩供试药材产地分别为内蒙古、山西、甘肃、陕北、黑龙江、辽宁、吉林、陕西、内蒙古、河北，编号为S1~S10，经辽宁中医药大学张慧教授鉴定均为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi.的干燥根；黄芩对照药材（批号：120955-201810，中国药品生物制品检定所）；黄芩苷（批号：110715-201821）、黄芩素（批号：111595-201607）、汉黄芩素（批号：111514-201706）对照品均由中国食品药品检定研究所提供，质量分数≥98%；汉黄芩苷对照品（批号：O0903AS）由大连美仑生物技术有限公司提供，质量分数≥98%；甲醇、乙腈（质谱级，德国Merck公司）；甲酸（色谱纯，天津科密欧化学试剂有限公司）；水（纯净水，杭州娃哈哈集团有限公司）。
1 基于对照药材的黄芩药材定性研究。
1.1 对照品溶液的制备。
分别取黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素对照品适量于10 mL容量瓶中，精密称定，以甲醇定容，分别配制成黄芩苷0.251 mg/mL、汉黄芩苷0.239 mg/mL、黄芩素0.219 mg/mL、汉黄芩素0.298mg/mL的单一对照品溶液。再分别各取适量制成黄芩苷0.179 mg/mL、汉黄芩苷0.0341 mg/mL、黄芩素0.0156 mg/mL、汉黄芩素0.0213 mg/mL的混合对照品溶液。
1.2 对照药材溶液的制备。
取黄芩对照药材粉末约0.3 g，精密称定，加70%乙醇40 mL，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置100 mL量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀。精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，过0.22 μm微孔滤膜，即得。
1.3 供试品溶液的制备。
取黄芩药材中粉（过四号筛）约0.3 g，按“1.1”项下方法制成供试品溶液，即得。
1.4 色谱条件。
色谱柱：Agilent Poroshell 120 SB-C18（4.6 mm×100 mm，2.7 μm）；流动相：0.1%甲酸水（A）-乙腈（B），梯度洗脱；洗脱程序：0～10 min，20%→20% B；10～12 min，20%→23% B；12～28 min，23%→23% B；28～30 min，23%→40% B；30～40 min，40%→40% B；40～45 min，40%→100% B；45～48 min，100%→100% B；流速：0.8 mL/min；柱温：30℃；DAD检测器波长：280 nm、300 nm；进样量：10 μL。
1.5 特征图谱的建立。
取黄芩对照药材和10批供试药材，分别按“1.2”、“1.3”项下方法制备对照药材溶液和供试品溶液，按“1.4”项下色谱条件进样检测，每份样品双样双针。分别从液相色谱工作站中导出280 nm、300 nm的CSV和AIA格式的数据，将280 nm、300 nm的CSV数据选取最大响应值进行全时段等基线融合，为了使图谱更全面清晰反应药材质量，将10~14 min响应较高的数据替换为300 nm响应稍低的数据，最终得到差示融合数据。AIA格式数据经“中药指纹图谱相似度评价软件”转换为TXT数据，以差示融合数据替换TXT格式中的响应数据，保存TXT数据，再次导入“中药指纹图谱相似度评价软件”，获得10批供试药材的HPLC指纹图谱。以黄芩对照药材的图谱为参照谱图，使用中位数进行自动匹配，加以多点校正，标点特征峰。10批供试药材的HPLC指纹图谱见图1，共标定11个特征峰，共有峰面积占图谱的87%以上，其中2号峰稳定性、重复性、分离度良好，故以其为参照峰S；将共有模式R与对照药材指纹图谱进行比对，见图2。供试品色谱中应呈现11个共有峰，并应与对照药材色谱图中的11个共有峰保留时间相对应，见表1。
表1 特征峰保留时间及相对保留时间（
）
1.6 相似度评价。
采用中国药典委员会“中药指纹图谱相似度评价软件”（2012.130723版本）进行数据处理，该软件利用夹角余弦法计算每个色谱图与对照药材图谱相比较的相似度。以黄芩对照药材和供试药材特征峰的相似度明确黄芩药材真伪，按中药色谱指纹图谱相似度评价***计算供试品与对照药材指纹图谱的相似度应不得低于0.900。黄芩供试药材与对照药材的相似度均大于0.990，说明所收集的黄芩供试药材质量相对稳定，相似度计算结果见表2。
表2 供试药材相似度评价结果
1.7 特征峰化学成分解析。
1.7.1 色谱分析条件。
色谱柱：Agilent Poroshell 120 SB-C18色谱柱（2.1 mm×100 mm，2.7 μm）；流动相：0.1%甲酸水（A）-乙腈（B），梯度洗脱；洗脱程序：0～10 min，20%→20% B；10～12 min，20%→23% B；12～28 min，23%→23% B；28～30 min，23%→40% B；30～40 min，40%→40% B；40～45 min，40%→100% B；45～48 min，100%→100% B；流速：0.3 mL/min；柱温：30℃；进样量：2 μL。
1.7.2 质谱分析条件。
电喷雾离子源（ESI），正离子模式，毛细管电压3500 V，干燥气体流速11 L/min，干燥气体温度150℃，雾化器压力25 psi，鞘气温度350℃，鞘气流速10 L/min，质量扫描范围100-1000 m/z。采用auto MS/MS模式，利用对照品比对及数据库查询等方法对特征峰化学成分进行解析。
1.7.3 成分解析。
在初步采用Agilent-1260Ⅱ高效液相色谱仪利用相对保留时间与对照品比对的基础上，采用Agilent 6550 Q-TOF-MS质谱仪，进行质谱分析，运用Agilent MassHunterQualitativeAnalysis软件，通过对照品比对的方法对正离子模式进行化学成分解析，进一步明确共有峰的准确化学成分。利用对照品比对及数据库查询等方法对特征峰化学成分进行解析。正离子模式鉴定出11个共有峰中的4个化学成分，总离子流图见图3。其中，2号峰为黄芩苷、7号峰为汉黄芩苷、8号峰为黄芩素、9号峰为汉黄芩素，鉴定结果见表3。
表3 正离子模式特征峰化学成分解析结果
本发明所述的一种基于双波长等基线差示融合图谱的中药黄芩质量分析方法，得到的黄芩药材特征图谱可以用于判断黄芩药材的真伪。
2 基于内标物质的特征峰化学成分相对定量研究。
取黄芩药材，按“1.3”项下方法制备供试品溶液，按“1.4”项下色谱条件进样分析。2号峰“黄芩苷”为《中国药典》2020年版一部黄芩“含量测定”项下规定的指标，该峰分离效果好、保留时间稳定居中、标准品价格低廉，故以其作为内标物质进行特征峰的相对定量，每个供试品中特征峰化学成分的相对含量计算方法为特征峰化学成分相对含量%=特征峰峰面积×（内标物含量%/内标物峰面积），黄芩苷准确定量结果见表4。每个供试品中特征峰化学成分的相对含量见表5。取“平均数-标准差”作为特征峰化学成分相对于内标物质化学成分的相对含量下限，供试药材根据此方法测得的特征峰相对含量不低于该含量下限为优。
表4 内标物质黄芩苷的准确定量结果
表5 基于内标物质的特征峰相对定量结果
本发明所述的一种基于双波长等基线差示融合图谱的中药黄芩质量分析方法，得到的黄芩特征峰相对定量结果可以用于判断黄芩药材的优劣。
3 方法学考察。
3.1 专属性试验。
分别取混合对照品溶液、供试品溶液，按“1.4”项色谱条件进样分析，结果显示各主峰与杂质峰分离度良好，专属性强。
3.2 线性与范围。
取黄芩苷对照品溶液，逐级稀释2倍，得黄芩苷6个质量浓度溶液，分别按上述色谱条件进样分析，以质量（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线并进行线性回归，得到线性回归方程（Y=579.96X - 27.552），相关系数r=0.9999，结果表明黄芩苷在0.0784~2.51 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
3.3 精密度试验。
取同一供试品溶液，在“1.4”项色谱条件下连续进样6次，测定各色谱峰相对保留时间、相对峰面积，计算RSD值。结果显示各色谱峰相对保留时间、相对峰面积RSD值均小于0.92%，表明仪器精密度良好。
3.4 稳定性试验。
取同一供试品溶液，在“1.4”项色谱条件下，分别于制备后0、2、4、8、12、24 h进样，测定各色谱峰相对保留时间、相对峰面积，计算RSD值。结果显示各色谱峰相对保留时间、相对峰面积RSD值均小于1.6%，表明供试品溶液在24 h内稳定。
3.5 重复性试验。
取同一批次样品，平行制备6份供试品溶液，在“1.4”项色谱条件下进样检测，测定黄芩苷含量及各色谱峰相对保留时间、相对峰面积，计算RSD值。结果显示黄芩苷平均含量为12.34%，RSD为1.3%。各色谱峰相对保留时间、相对峰面积RSD值均小于2.0%，表明方法重复性良好。
3.6 加样回收率。
精密称定黄芩药材粉末6份，每份0.15 g，分别精密加入相当于0.15 g药材含量的黄芩苷对照品，按上述方法制备供试品溶液，在“1.4”项色谱条件下进样检测，计算得到黄芩苷的平均加样回收率为99.5%（n=6），RSD为1.1%。
实施例2示差融合与未融合比较试验。
取实施例1中S1批次黄芩药材图谱分别做如下处理：（1）导出280 nm的AIA数据，经中药指纹图谱相似度评价软件可视化处理；（2）导出300 nm的AIA数据，经中药指纹图谱相似度评价软件可视化处理；（3）分别导出280nm和300 nm的AIA数据，按实施例1中示差融合方法得到示差融合图谱；（4）分别导出280 nm和300 nm的AIA数据，进行全时段等基线融合，得到全时段等基线融合图谱。结果见附图4~7。结果可见，本方法所得图谱较单一波长图谱及常规全时段等基线融合图谱显示信息较多，能更全面的评价黄芩药材质量。
本发明所提出的黄芩药材质量控制方法能够有效判断药材的真伪优劣，形成了一个科学、可控的中药质量控制体系，旨在为中药质量控制和中药产业持续发展提供探索性解决方案。
Claims (8)
1.一种基于双波长等基线差示融合图谱的中药黄芩质量分析方法，其特征在于，所述方法为对两个波长下的图谱进行融合的双波长等基线差示融合法。
2.根据权利要求1所述的一种基于双波长等基线差示融合图谱的中药黄芩质量分析方法，其特征在于，所述双波长等基线差示融合法建立双波长等基线差示融合图谱的具体步骤如下：
（1）取对照药材和供试药材进样检测，每份样品双样双针；
（2）分别从工作站中导出280 nm、300 nm的CSV和AIA格式的数据，将280 nm、300 nm的CSV数据选取最大响应值进行全时段等基线融合；
（3）将10~14 min响应较高的数据替换为300 nm响应稍低的数据，最终得到差示融合数据；
（4）AIA格式数据经“中药指纹图谱相似度评价软件”转换为TXT数据，以差示融合数据替换TXT格式中的响应数据，保存TXT数据，即得双波长等基线差示融合图谱。
3.根据权利要求1所述的一种基于双波长等基线差示融合图谱的中药黄芩质量分析方法，其特征在于，所述方法通过黄芩药材特征图谱中的特征峰作为黄芩药材的定性标准，能够明确鉴定药材的真伪。
4.根据权利要求1所述的一种基于双波长等基线差示融合图谱的中药黄芩质量分析方法，其特征在于，所述方法通过建立的特征峰相对含量的计算方法确定的各特征峰相对含量的下限，能够区分黄芩的优劣。
5.一种基于双波长等基线差示融合图谱的中药黄芩质量分析方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
步骤1 基于对照药材的黄芩药材定性研究；
（1）溶液的制备：取黄芩对照药材粉末或黄芩药材中粉，过四号筛，0.3 g，精密称定，加70%乙醇40 mL，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置100 mL量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀；精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，过0.22 μm微孔滤膜，即得；
（2）色谱条件：色谱柱：Agilent Poroshell 120 SB-C18（4.6 mm×100 mm，2.7 μm）；流动相：0.1%甲酸水（A）-乙腈（B），梯度洗脱；洗脱程序：0～10 min，20%→20% B；10～12 min，20%→23% B；12～28 min，23%→23% B；28～30 min，23%→40% B；30～40 min，40%→40% B；40～45 min，40%→100% B；45～48 min，100%→100% B；流速：0.8 mL/min；柱温：30℃；DAD检测器波长：280 nm、300 nm；进样量：10 μL；
（3）双波长等基线差示融合图谱的建立：取黄芩对照药材和10批供试药材按（1）和（2）所述方法进样检测，每份样品双样双针；分别从工作站中导出280 nm、300 nm的CSV和AIA格式的数据，将280 nm、300 nm的CSV数据选取最大响应值进行全时段等基线融合，为了使图谱更全面清晰反应药材质量，将10~14 min响应较高的数据替换为300 nm响应稍低的数据，最终得到差示融合数据；AIA格式数据经“中药指纹图谱相似度评价软件”转换为TXT数据，以差示融合数据替换TXT格式中的响应数据，保存TXT数据，即得双波长等基线差示融合图谱；
（4）特征图谱的建立：将（3）所得双波长等基线差示融合图谱导入“中药指纹图谱相似度评价软件”，获得10批供试药材的HPLC指纹图谱；以黄芩对照药材的图谱为参照谱图，使用中位数进行自动匹配，加以多点校正，标点特征峰，生成共有模式R，与对照药材特征图谱进行比对；
（5）相似度评价：以特征峰的相似度明确黄芩药材真伪；供试药材与对照药材的相似度均大于0.995；
（6）特征峰化学成分解析：采用Q-TOF-MS技术，通过分析化合物的保留时间、一级离子质荷比以及二级离子碎片信息，并与相关文献报道信息进行匹配，2号峰为黄芩苷，7号峰为汉黄芩苷，8号峰为黄芩素，9号峰为汉黄芩素；
步骤2 基于内标物质的特征峰化学成分相对定量研究；
2号峰“黄芩苷”为《中国药典》2020年版一部黄芩“含量测定”项下规定的指标，该峰分离效果好、保留时间稳定居中、标准品价格低廉，故以其作为内标物质，开展基于内标物质的特征峰化学成分相对定量研究；取“平均数-标准差”作为特征峰化学成分相对于内标物质化学成分的相对含量下限，供试药材根据此方法测得的特征峰相对含量不低于该含量下限为优；
步骤3 方法学考察：
（1）专属性试验：分别取混合对照品溶液、供试品溶液，按上述色谱条件进样分析，结果显示各主峰与杂质峰分离度良好，专属性强；
（2）线性与范围：取黄芩苷对照品溶液，逐级稀释2倍，得黄芩苷6个质量浓度溶液，分别按上述色谱条件进样分析，以质量（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线并进行线性回归，得到线性回归方程（Y=579.96X - 27.552），相关系数r=0.9999，结果表明黄芩苷在0.0784~2.51 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系；
（3）精密度试验：取同一供试品溶液，在上述色谱条件下连续进样6次，测定各色谱峰相对保留时间、相对峰面积，计算RSD值；结果显示各色谱峰相对保留时间、相对峰面积RSD值均小于0.92%，表明仪器精密度良好；
（4）稳定性试验：取同一供试品溶液，在上述色谱条件下，分别于制备后0、2、4、8、12、24h进样，测定各色谱峰相对保留时间、相对峰面积，计算RSD值；结果显示各色谱峰相对保留时间、相对峰面积RSD值均小于1.6%，表明供试品溶液在24 h内稳定；
（5）重复性试验：取同一批次样品，平行制备6份供试品溶液，在上述色谱条件下进样检测，测定黄芩苷含量及各色谱峰相对保留时间、相对峰面积，计算RSD值；结果显示黄芩苷平均含量为12.34%，RSD为1.3%；各色谱峰相对保留时间、相对峰面积RSD值均小于2.0%，表明方法重复性良好；
（6）加样回收率：精密称定黄芩药材粉末6份，每份0.15 g，分别精密加入相当于0.15 g药材含量的黄芩苷对照品，按上述方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进样检测，计算得到黄芩苷的平均加样回收率为99.5%（n=6），RSD为1.1 %。
6.根据权利要求1所述的一种基于双波长等基线差示融合图谱的中药黄芩质量分析方法，其特征在于，所述步骤2的特征峰均为黄芩发挥其功效及药理作用的特征活性化学成分。
7.根据权利要求1所述的一种基于双波长等基线差示融合图谱的中药黄芩质量分析方法，其特征在于，所述方法通过黄芩药材特征图谱中的特征峰作为黄芩药材的定性标准，能够明确鉴定药材的真伪。
8.根据权利要求1所述的一种基于双波长等基线差示融合图谱的中药黄芩质量分析方法，其特征在于，所述方法通过建立的特征峰相对含量的计算方法确定的各特征峰相对含量的下限，能够区分黄芩的优劣。
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Cited By (2)
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| CN116973478A (zh) * | 2023-07-31 | 2023-10-31 | 中国人民解放军联勤保障部队第九六四医院 | 一种白及复方补脾中药的质量标准分析方法 |
| CN117686691A (zh) * | 2024-02-01 | 2024-03-12 | 江苏嘉通能源有限公司 | 一种基于张力分析的涤锦复合丝质量检测方法及*** |
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Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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