CN116323889A - 家族44木葡聚糖酶变体 - Google Patents
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Abstract
本披露涉及木葡聚糖酶变体。本发明还涉及编码这些变体的多核苷酸；包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞；以及使用这些变体的方法。
Description
序列表的引用
本申请含有计算机可读形式的序列表。该计算机可读形式通过引用并入本文。
技术领域
本发明涉及属于糖基水解酶家族44的木葡聚糖酶变体、编码这些变体的多核苷酸和产生这些变体的方法。
背景技术
木葡聚糖是在植物的初生(生长的)细胞壁中主要的结构多糖。在结构上，木葡聚糖由纤维素样β-1,4-连接的葡萄糖骨架组成，该葡萄糖骨架经常被多种侧链取代。据信木葡聚糖在植物初生壁中通过使纤维素微原纤维交联而形成纤维素-木葡聚糖网络从而起作用。
木葡聚糖酶能够催化木葡聚糖溶解为木葡聚糖寡糖。一些木葡聚糖酶仅表现出木葡聚糖酶活性，而其他木葡聚糖酶表现出木葡聚糖酶活性和纤维素酶活性两者。木葡聚糖酶可分类为EC 3.2.1.4或EC.3.2.1.151。具有木葡聚糖酶活性的酶例如在Vincken等人.(1997)Carbohydrate Research[碳水化合物研究]298(4):299-310中描述，其中表征了来自绿色木霉(Trichoderma viride)(类似于里氏木霉(T.reesei))的三种不同的内切葡聚糖酶EndoI、EndoV和EndoVI。EndoI、EndoV和EndoVI分别属于糖基水解酶家族5、7和12，参见Henrissat,B.(1991)Biochem.J.[生物化学杂志]280:309-316以及Henrissat,B.和Bairoch,A.(1993)Biochem.J.[生物化学杂志]293:781-788。WO 94/14953披露了从真菌棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)克隆的家族12木葡聚糖酶(EG II)。WO 99/02663披露了分别从地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)和黏琼脂芽孢杆菌(Bacillusagaradhaerens)克隆的家族12和家族5木葡聚糖酶。WO 01/062903披露了家族44木葡聚糖酶。
特别地，WO 99/02663和WO 01/062903表明木葡聚糖酶可用于洗涤剂中。WO 2009/147210提供了木葡聚糖酶变体。
本发明的目的是提供属于糖基水解酶家族44的木葡聚糖酶变体。
发明内容
本发明涉及分离的木葡聚糖酶变体，这些木葡聚糖酶变体在对应于选自由以下组成的组的位置的一个或多个位置处包含改变：SEQ ID NO:1的多肽的111、123、159、256、294、8、18、20、41、42、76、82、83、87、94、103、104、105、121、125、126、127、136、137、146、147、148、152、153、155、165、168、169、177、184、189、203、206、210、211、214、217、219、220、226、237、238、240、243、244、248、251、252、267、271、276、289、295、298、300、302、322、329、339、347、347、353、383、384、392、394、395、402、414、427、431、445、447、459、473、474、476、482、488、489、491、492、503和505，其中该变体具有木葡聚糖酶活性。优选地，该变体与SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性，并且其中该变体具有木葡聚糖酶活性。
本发明涉及分离的木葡聚糖酶变体，这些变体在对应于SEQ ID NO:2的多肽的位置129T的位置处包含取代，其中该变体具有木葡聚糖酶活性。优选地，该变体与SEQ ID NO:2的多肽具有至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。特别地，本发明涉及分离的木葡聚糖酶变体，这些木葡聚糖酶变体包含SEQ ID NO:3的多肽或由其组成。
本发明还涉及编码这些变体的分离的多核苷酸；包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞；以及产生这些变体的方法。
本发明还涉及包含本发明的变体的清洁方法和组合物。
序列
SEQ ID NO:1从多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)获得的成熟多肽。
SEQ ID NO:2变体多肽。
SEQ ID NO:3变体多肽。
SEQ ID NO:4来自迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)的蛋白酶蛋白序列。
定义
根据此详细描述，以下定义适用。注意，单数形式“一种/个(a/an)”以及“该/这些(the)”包括复数个指示物，除非上下文中另外明确指明。
本文提及“约”值或参数包括针对该值或参数本身的方面。例如，提及“约X”的描述包括方面“X”。
除非另外定义或由上下文明确指示，否则本文所用的全部技术与科学术语具有如本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
等位基因变体：术语“等位基因变体”意指占用同一染色体基因座的基因的两种或更多种替代形式中的任一种。等位基因变异通过突变而自然产生，并且可以导致群体内部的多态性。基因突变可以是沉默的(所编码的多肽无变化)或可以编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位基因变体是由基因的等位基因变体编码的多肽。
氨基酸：如本文所用的术语“氨基酸”是指标准的二十种遗传编码的氨基酸及其对应的处于“d”型(与天然“l”型进行对比)的立体异构体、ω-氨基酸、其他天然存在的氨基酸、非常规氨基酸(例如α,α-双取代的氨基酸、N-烷基氨基酸等)和化学衍生化的氨基酸。可以通过与功能性侧基团反应来实现一个或多个氨基酸的化学衍生物。这样的衍生的分子包括例如，其中游离氨基基团已被衍生化以形成胺盐酸盐、对甲苯磺酰基基团、羧基苯氧基基团、叔丁氧基羰基基团、氯乙酰基基团或甲酰基基团的那些分子。游离羧基基团可被衍生化以形成盐、甲酯和乙酯或其他类型的酯和酰肼。游离羟基基团可被衍生化以形成O-酰基或O-烷基衍生物。作为化学衍生物还包括那些含有二十种标准氨基酸的天然存在的氨基酸衍生物的肽。例如：4-羟脯氨酸可以取代脯氨酸；5-羟赖氨酸可以取代赖氨酸；3-甲基组氨酸可以取代组氨酸；高丝氨酸可以取代丝氨酸并且鸟氨酸可以取代赖氨酸。只要维持必要的活性，衍生物也包括含有一个或多个添加或缺失的肽。其他包括的修饰是酰胺化、氨基末端酰化(例如乙酰化或巯基乙酸酰胺化)、末端羧基酰胺化(例如用氨或甲胺)、和类似的末端修饰。
当明确列举氨基酸如“丙氨酸”或“Ala”或“A”时，除非另有明确说明，否则该术语是指l-丙氨酸和d-丙氨酸两者。其他非常规氨基酸也可以是本发明多肽的合适组分，只要所希望的功能特性由多肽保留即可。对于所示的肽，适当时，每个编码的氨基酸残基由单字母代号表示，对应于常规氨基酸的普通名称。在一个实施例中，本发明的多肽包含l-氨基酸或由其组成
纤维素分解酶或纤维素酶：术语“纤维素分解酶”或“纤维素酶”意指水解纤维素材料的一种或多种(例如，几种)酶。这样的酶包括一种或多种内切葡聚糖酶(例如，EC3.2.1.4)、一种或多种纤维二糖水解酶、一种或多种β-葡糖苷酶、或其组合。用于测量纤维素分解酶活性的两种基本方法包括：(1)测量总纤维素分解酶活性，以及(2)测量单独的纤维素分解酶活性(内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶和β-葡糖苷酶)，如在Zhang等人,2006,Biotechnology Advances[生物技术进展]24:452-481中所综述的。可使用不溶性底物，包括沃特曼(Whatman)№1滤纸、微晶纤维素、细菌纤维素、藻类纤维素、棉花、预处理的木质纤维素等，测量总纤维素分解酶活性。最常见的总纤维素分解活性测定是将沃特曼№1滤纸用作底物的滤纸测定。该测定是由国际纯粹与应用化学联合会(IUPAC)建立的(Ghose,1987,Pure Appl.Chem.[纯粹与应用化学]59:257-68)。
纤维素材料：术语“纤维素材料”意指含有纤维素的任何材料。生物质的初生细胞壁中的主要多糖是纤维素，第二丰富的是半纤维素，而第三丰富的是果胶。细胞停止生长后产生的次生细胞壁也含有多糖，并且它通过与半纤维素共价交联的聚合木质素得到强化。纤维素是脱水纤维二糖的均聚物，并且因此是直链β-(1-4)-D-葡聚糖，而半纤维素包括多种具有一系列取代基处于复杂支链结构的化合物，例如木聚糖、木葡聚糖、***糖基木聚糖、以及甘露聚糖。尽管纤维素通常为多形态的，但发现其在植物组织中主要作为平行葡聚糖链的不溶性晶体基质存在。半纤维素通常氢键结合至纤维素以及其他半纤维素，这有助于稳定细胞壁基质。
cDNA：术语“cDNA”意指可以通过从获得自真核或原核细胞的成熟的、剪接的mRNA分子进行反转录而制备的DNA分子。cDNA缺乏可以存在于对应基因组DNA中的内含子序列。初始的初级RNA转录物是mRNA的前体，通过一系列步骤(包括剪接)对前体进行加工，然后呈现为成熟的剪接的mRNA。
编码序列：术语“编码序列”意指直接规定了变体的氨基酸序列的多核苷酸。编码序列的边界通常由可读框确定，该可读框以起始密码子(例如ATG、GTG、或TTG)开始并且以终止密码子(例如TAA、TAG、或TGA)结束。编码序列可为基因组DNA、cDNA、合成DNA、或其组合。
控制序列：术语“控制序列”意指对于表达编码本发明的变体的多核苷酸所必需的核酸序列。每个控制序列对于编码该变体的多核苷酸来说可以是天然的(即，来自相同基因)或外源的(即，来自不同基因)，或相对于彼此是天然的或外源的。这样的控制序列包括但不限于前导序列、多腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列、以及转录终止子。最少，这些控制序列包括启动子、以及转录和翻译终止信号。出于引入促进控制序列与编码变体的多核苷酸的编码区域连接的特异性限制位点的目的，控制序列可以提供有接头。
餐具洗涤组合物：如本文所用的术语“餐具洗涤组合物”是指用于清洁硬表面的所有形式的组合物。本发明不限于任何特定类型的餐具洗涤组合物或任何特定的洗涤剂。因此，在一个实施例中，餐具洗涤组合物是液体餐具洗涤组合物、粉末餐具洗涤组合物，其中组合物可以任选地呈单位剂量的形式。
洗涤剂组分：术语“洗涤剂组分”在本文中定义为意指可以用于洗涤剂组合物中的化学品的类型。洗涤剂组分的实例是表面活性剂、水溶助剂、助洗剂、共助洗剂、螯合剂(chelator)或螯合试剂(chelating agent)、漂白***或漂白组分、聚合物、织物调色剂、织物调理剂、增泡剂(foam booster)、抑泡剂、分散剂、染料转移抑制剂、荧光增白剂、香料、光学增亮剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、污垢释放聚合物、抗再沉积剂、酶抑制剂或稳定剂、酶活化剂、抗氧化剂和增溶剂。洗涤剂组合物可以包含一种或多种任何类型的洗涤剂组分。
洗涤剂组合物：术语“洗涤剂组合物”是指用于从有待清洁的物品(例如纺织品、餐具和硬表面)去除不希望的化合物的组合物。该洗涤剂组合物可以用于例如清洁纺织品、餐具以及硬表面，用于家用清洁和工业清洁二者和/或用于织物护理。这些术语涵盖针对所希望的特定类型的清洁组合物和产品的形式(例如，液体、凝胶、粉末、颗粒、糊剂或喷雾组合物)选择的任何材料/化合物，并且包括但不限于洗涤剂组合物(例如，液体和/或固体衣物洗涤剂和精细织物洗涤剂；硬表面清洁配制品，例如用于玻璃、木材、塑料、陶瓷以及金属台面和窗户；地毯清洁剂；烤箱清洁剂；织物清新剂；织物柔软剂；以及纺织品和衣物预去污剂，连同餐具洗涤剂)。除了含有本发明的酶，该洗涤剂配制品还可以含有一种或多种另外的酶(例如淀粉酶、蛋白酶、过氧化物酶、纤维素酶、β-葡聚糖酶、木葡聚糖酶、半纤维素酶、黄原胶酶、黄原胶裂解酶、脂肪酶、酰基转移酶、磷脂酶、酯酶、漆酶、过氧化氢酶、芳基酯酶、淀粉酶、α-淀粉酶、葡糖淀粉酶、角质酶、果胶酶、果胶裂解酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂氧合酶、木质酶、角叉菜胶酶、普鲁兰酶、鞣酸酶、***糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、木葡聚糖酶、木聚糖酶、果胶乙酰酯酶、多半乳糖醛酸酶、鼠李半乳糖醛酸酶、内切-β-甘露聚糖酶、外切-β-甘露聚糖酶(GH5和/或GH26)、地衣多糖酶(licheninase)、磷酸二酯酶、果胶甲基酯酶、纤维二糖水解酶、转谷氨酰胺酶、核酸酶、及其组合，或其任何混合物)，和/或组分例如，表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白***或漂白组分、聚合物、织物调理剂、增泡剂、抑泡剂、染料、香料、晦暗抑制剂、光学增亮剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、抗腐蚀剂、酶抑制剂或稳定剂、酶活化剂、一种或多种转移酶、水解酶、氧化还原酶、上蓝剂和荧光染料、抗氧化剂以及增溶剂。
餐具洗涤：术语“餐具洗涤”是指洗涤餐具的所有形式，例如手动餐具洗涤(HDW)或自动餐具洗涤(ADW)。洗涤餐具包括但不限于清洁所有形式的餐用器皿，例如盘子、杯子、玻璃杯、碗、所有形式的刀叉餐具(如匙、刀、叉)、以及上菜用具连同陶瓷、塑料、金属、瓷器、玻璃及丙烯酸酯。
酶洗涤益处：术语“酶洗涤益处”在本文中定义为将酶添加至洗涤剂中与不具有该酶的相同洗涤剂相比的有利效果。可以由酶提供的重要洗涤益处是污渍去除伴随在洗涤和/或清洁之后无可见污垢或可见污垢非常少、防止或减少在洗涤过程中所释放的污垢再沉积(也被称作抗再沉积的效果)、完全或部分地恢复纺织品的白度(也被称作变白的效果)，这些纺织品最初是白色的，但是在反复使用和洗涤后获得淡灰或淡黄色外观。不直接与催化污渍去除或防止污垢再沉积相关的纺织品护理益处对于酶洗涤益处而言也是重要的。这样的纺织品护理益处的实例是防止或减少染料从一织物转移至另一织物或同一织物的另一部分(也被称作染料转移抑制或抗返染的效果)，从织物表面去除突出或断裂的纤维以减少起球倾向或去除已经存在的球或绒毛(也被称作抗起球的效果)，改善织物柔软性，使织物的颜色澄清以及去除陷在织物或服装的纤维中的微粒状污垢。酶漂白是另外的酶洗涤益处，其中通常将催化活性用于催化漂白组分(如过氧化氢或其他过氧化物)的形成。
表达：术语“表达”包括涉及变体产生的任何步骤，包括但不限于转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰、以及分泌。
表达载体：术语“表达载体”意指直链或环状DNA分子，该分子包含编码变体的多核苷酸并且可操作地连接到提供用于其表达的控制序列。
片段：术语“片段”意指在成熟多肽的氨基和/或羧基末端缺失一个或多个(例如，几个)氨基酸的多肽；其中该片段具有木葡聚糖酶活性。在一个方面，片段含有至少445个氨基酸残基、至少471个氨基酸残基或至少497个氨基酸残基。
融合多肽：术语“融合多肽”是其中一种多肽在本发明变体的N-末端或C-末端处融合的多肽。通过将编码另一种多肽的多核苷酸与本发明的多核苷酸融合来产生融合多肽。用于产生融合多肽的技术是本领域已知的，并且包括连接编码多肽的编码序列使得它们符合读框，而且融合多肽的表达处于一个或多个相同的启动子和终止子的控制之下。还可以使用内含肽技术构建融合多肽，其中在翻译后产生融合多肽(Cooper等人,1993,EMBO J.[欧洲分子生物学学会杂志]12:2575-2583；Dawson等人,1994,Science[科学]266:776-779)。融合多肽可进一步包含两个多肽之间的切割位点。在融合蛋白分泌之时，位点被切割，从而释放出这两种多肽。切割位点的实例包括但不限于在以下文献中披露的位点：Martin等人,2003,J.Ind.Microbiol.Biotechnol.[工业微生物学与生物技术杂志]3:568-576；Svetina等人,2000,J.Biotechnol.[生物技术杂志]76:245-251；Rasmussen-Wilson等人,1997,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]63:3488-3493；Ward等人,1995,Biotechnology[生物技术]13:498-503；和Contreras等人,1991,Biotechnology[生物技术]9:378-381；Eaton等人,1986,Biochemistry[生物化学]25:505-512；Collins-Racie等人,1995,Biotechnology[生物技术]13:982-987；Carter等人,1989,Proteins:Structure,Function,and Genetics[蛋白质：结构、功能以及遗传学]6:240-248；以及Stevens,2003,Drug Discovery World[药物发现世界]4:35-48。
硬表面清洁：术语“硬表面清洁”在本文中定义为清洁硬表面，其中硬表面可以包括地板、桌子、墙壁、屋顶等，连同硬物体的表面，如汽车(汽车洗涤)和餐具(餐具洗涤)。餐具洗涤包括但不限于，清洁盘子、杯子、玻璃杯、碗、刀叉餐具(如匙、刀、叉)、上菜用具、陶瓷、塑料、金属、瓷器、玻璃及丙烯酸酯。
宿主细胞：术语“宿主细胞”意指易于用包含本发明的多核苷酸的核酸构建体或表达载体进行转化、转染、转导等的任何细胞类型。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间出现的突变而与亲本细胞不相同的任何亲本细胞子代。
杂合多肽：术语“杂合多肽”意指包含来自不同来源(起源)的两个或更多个多肽的结构域(例如，来自一个多肽的结合模块和来自另一个多肽的催化结构域)的多肽。结构域可以在N-末端或C-末端处融合。本文中特别感兴趣的是包含以下的多肽：来自一个多肽(其可以是天然存在的或进一步经修饰的)的结合模块、工程化的接头区域(例如富含脯氨酸的接头区域(其是合成的构建体))、和来自另一个多肽(其可以是天然存在的或进一步经修饰的)的催化结构域。
杂交：术语“杂交”意指使用标准DNA印迹程序将核酸的基本上互补的链配对。杂交可以在中、中-高、高或非常高严格条件下进行。中严格条件意指在42℃，于5X SSPE、0.3％SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼***DNA和35％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时，随后在55℃使用0.2X SSC、0.2％ SDS洗涤三次，每次15分钟。中-高严格条件意指在42℃，于5X SSPE、0.3％ SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼***DNA和35％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时，随后在60℃使用0.2X SSC、0.2％ SDS洗涤三次，每次15分钟。高严格条件意指在42℃，于5X SSPE、0.3％ SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼***DNA和50％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时，随后在65℃使用0.2X SSC、0.2％ SDS洗涤三次，每次15分钟。非常高严格条件意指在42℃，于5X SSPE、0.3％ SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼***DNA和50％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时，随后在70℃使用0.2X SSC、0.2％ SDS洗涤三次，每次15分钟。
改善的特性：术语“改善的特性”意指与相比于参考酶/亲本酶有改善的变体相关的特征。这样的改善的特性包括但不限于改善的洗涤性能、改善的酶洗涤益处、改善的稳定性、和/或改善的白度。
改善的稳定性：术语“改善的稳定性”意指变体酶在一种或多种天然存在的或合成的、降低亲本酶的酶活性的化学品存在下孵育一段时间之后表现为保留酶活性。改善的稳定性意指相对于参考酶/亲本酶的稳定性，在蛋白酶的存在下变体酶具有更好的稳定性，并且包括例如，蛋白质水解稳定性、洗涤剂内储存稳定性、在螯合剂或螯合试剂存在下的洗涤剂内储存稳定性、在洗涤剂组合物生产期间改善的稳定性、以及洗涤中稳定性。特别地，改善的洗涤剂稳定性是，当将本发明的木葡聚糖酶变体混合到液体洗涤剂配制品或单位剂量洗涤剂配制品中，然后在15℃-50℃的温度储存时，木葡聚糖酶活性的改善的稳定性。
在本发明中，液体洗涤剂作为液体衣物洗涤剂和/或单位剂量衣物洗涤剂是特别有用的。
稳定性的改善可以例如通过如实例3中所述的洗涤剂稳定性测定来定量。
改善的洗涤性能：术语“改善的洗涤性能”在本文中定义为当对新样品和/或将样品在相同条件下储存之后进行评价时，相对于参考酶/亲本酶的洗涤性能，在洗涤剂组合物中酶例如，通过增加的颜色澄清和/或抗起球作用，表现出增加的洗涤性能。术语“改善的洗涤性能”包括在衣物洗涤并且还在例如硬表面清洁如自动化餐具洗涤(ADW)中的洗涤性能。
分离的：术语“分离的”意指多肽、核酸、细胞或其他特定材料或组分，其与在自然界中发现的与其天然相关联的至少一种其他材料或组分(包括但不限于，例如，其他蛋白质、核酸、细胞等)分开。分离的多肽包括但不限于含有分泌的多肽的培养液。
洗涤：术语“洗涤”涉及家用洗涤和工业洗涤两者并且意指用含有本发明的清洁或洗涤剂组合物的溶液处理纺织品的过程。洗涤过程可以例如使用例如家用或工业洗衣机进行或可以手动进行。
成熟多肽：术语“成熟多肽”意指在N-末端加工(例如，信号肽的去除)后处于其成熟形式的多肽。
成熟多肽编码序列：术语“成熟多肽编码序列”意指编码具有木葡聚糖酶活性的成熟多肽的多核苷酸。
突变体：术语“突变体”意指编码变体的多核苷酸。
修饰：在本发明的多肽的上下文中，术语“修饰”意指通过用不同的氨基酸取代、通过***氨基酸、或通过缺失(优选地通过至少一个缺失)而改变在参考氨基酸序列(即SEQID NO:1、2或3)内的一个或多个氨基酸。术语“修饰”、“改变”和“突变”可以互换地使用并且构成相同的含义和目的。
核酸构建体：术语“核酸构建体”意指单链或双链的核酸分子，该核酸分子是从天然存在的基因中分离的，或以原本不存在于自然界中的方式被修饰成含有核酸的区段，或者是合成的，该核酸分子包含一个或多个控制序列。
可操作地连接：术语“可操作地连接”意指如下构型，在该构型中，控制序列被放置在相对于多核苷酸的编码序列适当的位置处，使得该控制序列指导该编码序列的表达。
亲本或亲本木葡聚糖酶：术语“亲本”或“亲本木葡聚糖酶”意指具有木葡聚糖酶活性的任何多肽，对其进行改变(例如，一个或多个取代、一个或多个***、一个或多个缺失和/或一个或多个截短)以产生本发明的木葡聚糖酶变体。亲本可以是天然存在的(野生型)多肽或其变体或片段。亲本可以是天然存在的(野生型)多肽，例如SEQ ID NO:1的酶或与其具有至少60％、更优选地至少65％、更优选地至少70％、更优选地至少75％、更优选地至少80％、更优选地至少85％、甚至更优选地至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性的多肽。亲本多肽还可以是天然存在的多肽的变体，其氨基酸序列经修饰或改变，例如本文的SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的多肽。亲本亦可为等位基因变体，其为由占据同一染色体基因座的基因的两种或更多种替代形式中的任一种所编码的多肽。
纯化的：术语“纯化的”意指基本上不含其他组分的核酸或多肽，如通过本领域熟知的分析技术(例如，在电泳凝胶、色谱洗脱液和/或经过密度梯度离心的培养基中，纯化的多肽或核酸可形成离散的条带)所确定。纯化的核酸或多肽是至少约50％纯的，通常是至少约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％、约99.5％、约99.6％、约99.7％、约99.8％或更加纯的(例如，以摩尔计的重量百分比)。在相关意义上，当在应用纯化或富集技术之后存在分子的浓度的大幅度增加时，组合物富集了分子。术语“富集”是指化合物、多肽、细胞、核酸、氨基酸或其他指定材料或组分以高于起始组合物的相对或绝对浓度存在于组合物中。
重组：当用于提及细胞、核酸、蛋白质或载体时，术语“重组”意指已经从其天然状态经修饰。因此，例如，重组细胞表达在天然(非重组)形式的细胞内未发现的基因，或与在自然界中发现的相比，以不同水平表达或在不同条件下表达天然基因。重组核酸与天然序列的差异在于一个或多个核苷酸和/或与异源序列(例如，表达载体中的异源启动子)可操作地连接。重组蛋白与天然序列的差异可以在于一个或多个氨基酸和/或与异源序列融合。包含编码多肽的核酸的载体是重组载体。术语“重组”与“遗传修饰的”和“转基因的”同义。
序列同一性：两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的关联度通过参数“序列同一性”来描述。
出于本发明的目的，使用尼德曼-翁施算法(Needleman-Wunsch algorithm)(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列同一性，该算法如EMBOSS软件包(EMBOSS：The European MolecularBiology Open Software Suite[欧洲分子生物学开放软件套件],Rice等人,2000,TrendsGenet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选5.0.0版本或更新版本)的尼德尔程序中所实施的。使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5以及EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。使用尼德尔标记的“最长同一性”的输出(使用非简化(-nobrief)选项获得)作为同一性百分比并且如下计算：
(相同的残基x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)
出于本发明的目的，使用尼德曼-翁施算法(Needleman和Wunsch,1970,同上)来确定两个脱氧核糖核苷酸序列之间的序列同一性，该算法如EMBOSS软件包(EMBOSS：TheEuropean Molecular Biology Open Software Suite[欧洲分子生物学开放软件套件],Rice等人,2000,同上)(优选5.0.0版本或更新版本)的尼德尔程序中所实施的。使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5以及EDNAFULL(NCBI NUC4.4的EMBOSS版本)取代矩阵。使用尼德尔标记的“最长同一性”的输出(使用非简化(-nobrief)选项获得)作为同一性百分比并且如下计算：
(相同的脱氧核糖核苷酸x 100)/(比对长度–比对中的空位总数)
子序列：术语“子序列”意指使一个或多个核苷酸从成熟多肽编码序列的5'端和/或3'端缺失的多核苷酸；其中该子序列编码具有木葡聚糖酶活性的片段。
纺织品：术语“纺织品”意指任何纺织品材料，该任何纺织品材料包括纱线、纱线中间体、纤维、非机织材料、天然材料、合成材料、以及任何其他纺织品材料，由这些材料制成的织物和由织物制成的产品(例如，服装和其他制品)。该纺织品或织物可以处于针织品、机织物(woven)、牛仔布(denim)、非机织物、毡、纱线、以及毛巾布的形式。该纺织品可以是基于纤维素的，如天然纤维素制品，包括棉、亚麻/亚麻布、黄麻、苎麻、剑麻或椰壳纤维，或者人造纤维素制品(例如，来源于木浆)，包括粘胶纤维/人造丝、乙酸纤维素纤维(三胞)、莱赛尔纤维(lyocell)或其共混物。纺织品或织物也可以不基于纤维素，如天然聚酰胺，包括羊毛、驼毛、羊绒、马海毛、兔毛和蚕丝，或合成聚合物如尼龙、芳族聚酰胺、聚酯、丙烯酸酯、聚丙烯和氨纶/弹性纤维(spandex/elastane)、或其共混物以及基于纤维素的纤维和不基于纤维素的纤维的共混物。共混物的实例是棉和/或人造丝/粘胶纤维与一种或多种伴随材料的共混物，该伴随材料如羊毛、合成纤维(例如聚酰胺纤维、丙烯酸纤维、聚酯纤维、聚氯乙烯纤维、聚氨酯纤维、聚脲纤维、芳族聚酰胺纤维)和/或含纤维素的纤维(例如人造丝/粘胶纤维、苎麻、亚麻/亚麻布、黄麻、乙酸纤维素纤维、莱赛尔纤维)。织物可以是常规的可洗涤衣物，例如有污渍的家居衣物。当使用术语织物或服装时，旨在还包括广义术语纺织品。
变体：术语“变体”意指具有木葡聚糖酶活性的、在一个或多个(例如，几个)位置处包含改变并且保留亲本的活性的多肽。取代意指用不同的氨基酸替代占据某一位置的氨基酸。本发明的变体具有SEQ ID NO:1的多肽的木葡聚糖酶活性的至少20％，例如至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或至少100％。
洗涤液：术语“洗涤液”是指含有呈稀释形式的洗涤剂组合物的水溶液，例如但不限于含有呈稀释形式的衣物洗涤剂组合物的洗涤剂溶液，例如，在衣物洗涤过程中的洗涤液。
白度：术语“白度”在本文中定义为在不同领域并且针对不同顾客具有不同含义的广义术语。白度的损失可以例如归因于灰化、黄化、或光学增亮剂/调色剂的去除。灰化和黄化可归因于污垢再沉积、身体污垢、来自例如铁和铜离子或染料转移的着色。白度可包括来自以下列表的一个或几个问题：着色剂或染料作用；不完全污渍去除(例如身体污垢、皮脂等)；再沉积(物体的灰化、黄化或其他变色)(去除的污垢与纺织品的其他部分(弄脏的或未弄脏的)再关联)；在应用过程中纺织品的化学变化；以及颜色的澄清或增亮。
野生型：提及氨基酸序列或核酸序列时术语“野生型”意指该氨基酸序列或核酸序列是天然或天然存在的序列。如本文所用，术语“天然存在的”是指在自然界中发现的任何物质(例如蛋白质、氨基酸或核酸序列)。相反，术语“非天然存在的”是指在自然界中未发现的任何物质(例如，在实验室中产生的重组核酸和蛋白质序列、或野生型序列的修饰)。
木葡聚糖酶活性：术语“木葡聚糖酶活性”在本文中定义为酶催化木葡聚糖水解。该反应涉及木葡聚糖酶中1,4-β-D-葡糖苷键的内切水解。出于本发明的目的，木葡聚糖酶活性使用AZCL-木葡聚糖(来自麦格酶公司(Megazyme))作为反应底物来确定。该测定法可以以几种方式进行，例如，如本申请实例2中描述的，或如WO 01/62903中描述的。一个木葡聚糖酶活性单位(XyloU)参考描述于WO 01/62903，第60页，第3-17行的测定方法来定义。
变体命名惯例
出于本发明的目的，披露于SEQ ID NO:1中的木葡聚糖酶的氨基酸序列用于确定在另一木葡聚糖酶中对应的氨基酸残基。将另一木葡聚糖酶的氨基酸序列与在SEQ ID NO:1中披露的木葡聚糖酶的氨基酸序列进行比对，并且基于该比对，使用尼德曼-翁施算法(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)可以确定对应于SEQ ID NO:1中披露的木葡聚糖酶的氨基酸序列中的任何氨基酸残基的氨基酸位置编号，该算法如EMBOSS软件包(EMBOSS：The European Molecular Biology Open SoftwareSuite[欧洲分子生物学开放软件套件],Rice等人,2000,Trends Genet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选5.0.0版本或更新版本)的尼德尔程序中所实施的。使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5以及EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。
在描述本发明的变体时，为了便于参考，以下描述的命名法经过了调整。采用了已接受的IUPAC单字母或三字母的氨基酸缩写。
取代.对于氨基酸取代，使用以下命名法：原始氨基酸、位置、取代的氨基酸。相应地，将在位置226处的苏氨酸被丙氨酸取代表示为“Thr226Ala”或“T226A”。多个突变通过加号(“+”)分开，例如“Gly205Arg+Ser411Phe”或“G205R+S411F”代表在位置205和位置411处的甘氨酸(G)和丝氨酸(S)分别被精氨酸I和苯丙氨酸(F)取代。
缺失.对于氨基酸缺失，使用以下命名法：原始氨基酸、位置、*。相应地，将在位置195处的甘氨酸的缺失表示为“Gly195*”或“G195*”。多个缺失通过加号(“+”)分开，例如“Gly195*+Ser411*”或“G195*+S411*”。
***.对于氨基酸***，使用以下命名法：原始氨基酸、位置、原始氨基酸、***的氨基酸。相应地，将在位置195处的甘氨酸之后***赖氨酸表示为“Gly195GlyLys”或“G195GK”。多个氨基酸的***被表示为[原始氨基酸、位置、原始氨基酸、***的氨基酸#1、***的氨基酸#2；等]。例如，将在位置195处的甘氨酸之后***赖氨酸和丙氨酸表示为“Gly195GlyLysAla”或“G195GKA”。
在这样的情况下，通过将小写字母添加至在所***的一个或多个氨基酸残基之前的氨基酸残基的位置编号处来对所***的一个或多个氨基酸残基进行编号。在以上实例中，该序列因此会是：
| 亲本： | 变体： |
| 195 | 195 195a 195b |
| G | G-K-A |
多个改变.包含多个改变的变体通过加号(“+”)分开，例如，“Arg170Tyr+Gly195Glu”或“R170Y+G195E”代表在位置170处和位置195处的精氨酸和甘氨酸分别被酪氨酸和谷氨酸取代。
不同改变.在可于一个位置处引入不同改变的情况下，不同的改变通过逗号分开，例如，“Arg170Tyr,Glu”代表在位置170处的精氨酸被酪氨酸或谷氨酸取代。因此，“Tyr167Gly,Ala+Arg170Gly,Ala”表示以下变体：
“Tyr167Gly+Arg170Gly”、“Tyr167Gly+Arg170Ala”、“Tyr167Ala+Arg170Gly”、和“Tyr167Ala+Arg170Ala”。
具体实施方式
木葡聚糖酶变体
本发明涉及分离的木葡聚糖酶变体，这些木葡聚糖酶变体在对应于选自由以下组成的组的位置的一个或多个位置处包含改变：SEQ ID NO:1的多肽的111、123、159、256、294、8、18、20、41、42、76、82、83、87、94、103、104、105、121、125、126、127、136、137、146、147、148、152、153、155、165、168、169、177、184、189、203、206、210、211、214、217、219、220、226、237、238、240、243、244、248、251、252、267、271、276、289、295、298、300、302、322、329、339、347、347、353、383、384、392、394、395、402、414、427、431、445、447、459、473、474、476、482、488、489、491、492、503和505，其中该变体具有木葡聚糖酶活性。优选地，该变体与SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性，并且其中该变体具有木葡聚糖酶活性。
本发明涉及分离的木葡聚糖酶变体，这些变体在对应于SEQ ID NO:2的多肽的位置129T的位置处包含取代，其中该变体具有木葡聚糖酶活性。优选地，该变体与SEQ ID NO:2的多肽具有至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。特别地，本发明涉及分离的木葡聚糖酶变体，这些木葡聚糖酶变体包含SEQ ID NO:3的多肽或由其组成。
在实施例中，变体与亲本木葡聚糖酶的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％但小于100％的序列同一性。
在另一实施例中，变体与SEQ ID NO:1的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％但小于100％的序列同一性。
在另一实施例中，变体与SEQ ID NO:2的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％但小于100％的序列同一性。
在另一实施例中，变体与SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％但小于100％的序列同一性。
在一个方面，改变的数目是1-50，例如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个，如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个改变。
在一个方面，取代的数目是1-50，例如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个，如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个取代。
在一个方面，缺失的数目是1-50，例如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个，如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个缺失。
在一个方面，取代的氨基酸残基与该位置处天然存在的氨基酸残基不同。在一个实施例中，取代选自由以下组成的组：A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y，条件是该取代的氨基酸残基与该位置处天然存在的氨基酸残基不同。
在一个实施例中，本发明的木葡聚糖酶变体是分离的变体。
在另一方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的两个或更多个位置处包含改变：SEQ ID NO:1的多肽的111、123、159、256、294、8、18、20、41、42、76、82、83、87、94、103、104、105、121、125、126、127、136、137、146、147、148、152、153、155、165、168、169、177、184、189、203、206、210、211、214、217、219、220、226、237、238、240、243、244、248、251、252、267、271、276、289、295、298、300、302、322、329、339、347、347、353、383、384、392、394、395、402、414、427、431、445、447、459、473、474、476、482、488、489、491、492、503和505，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在另一方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的三个或更多个位置处包含改变：SEQ ID NO:1的多肽的111、123、159、256、294、8、18、20、41、42、76、82、83、87、94、103、104、105、121、125、126、127、136、137、146、147、148、152、153、155、165、168、169、177、184、189、203、206、210、211、214、217、219、220、226、237、238、240、243、244、248、251、252、267、271、276、289、295、298、300、302、322、329、339、347、347、353、383、384、392、394、395、402、414、427、431、445、447、459、473、474、476、482、488、489、491、492、503和505，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在另一方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的四个或更多个位置处包含改变：SEQ ID NO:1的多肽的111、123、159、256、294、8、18、20、41、42、76、82、83、87、94、103、104、105、121、125、126、127、136、137、146、147、148、152、153、155、165、168、169、177、184、189、203、206、210、211、214、217、219、220、226、237、238、240、243、244、248、251、252、267、271、276、289、295、298、300、302、322、329、339、347、347、353、383、384、392、394、395、402、414、427、431、445、447、459、473、474、476、482、488、489、491、492、503和505，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在另一方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的五个或更多个位置处包含改变：SEQ ID NO:1的多肽的111、123、159、256、294、8、18、20、41、42、76、82、83、87、94、103、104、105、121、125、126、127、136、137、146、147、148、152、153、155、165、168、169、177、184、189、203、206、210、211、214、217、219、220、226、237、238、240、243、244、248、251、252、267、271、276、289、295、298、300、302、322、329、339、347、347、353、383、384、392、394、395、402、414、427、431、445、447、459、473、474、476、482、488、489、491、492、503和505，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在另一方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的六个或更多个位置处包含改变：SEQ ID NO:1的多肽的111、123、159、256、294、8、18、20、41、42、76、82、83、87、94、103、104、105、121、125、126、127、136、137、146、147、148、152、153、155、165、168、169、177、184、189、203、206、210、211、214、217、219、220、226、237、238、240、243、244、248、251、252、267、271、276、289、295、298、300、302、322、329、339、347、347、353、383、384、392、394、395、402、414、427、431、445、447、459、473、474、476、482、488、489、491、492、503和505，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在另一方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的七个或更多个位置处包含改变：SEQ ID NO:1的多肽的111、123、159、256、294、8、18、20、41、42、76、82、83、87、94、103、104、105、121、125、126、127、136、137、146、147、148、152、153、155、165、168、169、177、184、189、203、206、210、211、214、217、219、220、226、237、238、240、243、244、248、251、252、267、271、276、289、295、298、300、302、322、329、339、347、347、353、383、384、392、394、395、402、414、427、431、445、447、459、473、474、476、482、488、489、491、492、503和505，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在另一方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的八个或更多个位置处包含改变：SEQ ID NO:1的多肽的111、123、159、256、294、8、18、20、41、42、76、82、83、87、94、103、104、105、121、125、126、127、136、137、146、147、148、152、153、155、165、168、169、177、184、189、203、206、210、211、214、217、219、220、226、237、238、240、243、244、248、251、252、267、271、276、289、295、298、300、302、322、329、339、347、347、353、383、384、392、394、395、402、414、427、431、445、447、459、473、474、476、482、488、489、491、492、503和505，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在另一方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的九个或更多个位置处包含改变：SEQ ID NO:1的多肽的111、123、159、256、294、8、18、20、41、42、76、82、83、87、94、103、104、105、121、125、126、127、136、137、146、147、148、152、153、155、165、168、169、177、184、189、203、206、210、211、214、217、219、220、226、237、238、240、243、244、248、251、252、267、271、276、289、295、298、300、302、322、329、339、347、347、353、383、384、392、394、395、402、414、427、431、445、447、459、473、474、476、482、488、489、491、492、503和505，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在另一方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的十个或更多个位置处包含改变：SEQ ID NO:1的多肽的111、123、159、256、294、8、18、20、41、42、76、82、83、87、94、103、104、105、121、125、126、127、136、137、146、147、148、152、153、155、165、168、169、177、184、189、203、206、210、211、214、217、219、220、226、237、238、240、243、244、248、251、252、267、271、276、289、295、298、300、302、322、329、339、347、347、353、383、384、392、394、395、402、414、427、431、445、447、459、473、474、476、482、488、489、491、492、503和505，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在另一方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的十一个或更多个位置处包含改变：SEQ ID NO:1的多肽的111、123、159、256、294、8、18、20、41、42、76、82、83、87、94、103、104、105、121、125、126、127、136、137、146、147、148、152、153、155、165、168、169、177、184、189、203、206、210、211、214、217、219、220、226、237、238、240、243、244、248、251、252、267、271、276、289、295、298、300、302、322、329、339、347、347、353、383、384、392、394、395、402、414、427、431、445、447、459、473、474、476、482、488、489、491、492、503和505，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在另一方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的十二个或更多个位置处包含改变：SEQ ID NO:1的多肽的111、123、159、256、294、8、18、20、41、42、76、82、83、87、94、103、104、105、121、125、126、127、136、137、146、147、148、152、153、155、165、168、169、177、184、189、203、206、210、211、214、217、219、220、226、237、238、240、243、244、248、251、252、267、271、276、289、295、298、300、302、322、329、339、347、347、353、383、384、392、394、395、402、414、427、431、445、447、459、473、474、476、482、488、489、491、492、503和505，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在另一方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的十三个或更多个位置处包含改变：SEQ ID NO:1的多肽的111、123、159、256、294、8、18、20、41、42、76、82、83、87、94、103、104、105、121、125、126、127、136、137、146、147、148、152、153、155、165、168、169、177、184、189、203、206、210、211、214、217、219、220、226、237、238、240、243、244、248、251、252、267、271、276、289、295、298、300、302、322、329、339、347、347、353、383、384、392、394、395、402、414、427、431、445、447、459、473、474、476、482、488、489、491、492、503和505，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在另一方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的十四个或更多个位置处包含改变：SEQ ID NO:1的多肽的111、123、159、256、294、8、18、20、41、42、76、82、83、87、94、103、104、105、121、125、126、127、136、137、146、147、148、152、153、155、165、168、169、177、184、189、203、206、210、211、214、217、219、220、226、237、238、240、243、244、248、251、252、267、271、276、289、295、298、300、302、322、329、339、347、347、353、383、384、392、394、395、402、414、427、431、445、447、459、473、474、476、482、488、489、491、492、503和505，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在另一方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的十五个或更多个位置处包含改变：SEQ ID NO:1的多肽的111、123、159、256、294、8、18、20、41、42、76、82、83、87、94、103、104、105、121、125、126、127、136、137、146、147、148、152、153、155、165、168、169、177、184、189、203、206、210、211、214、217、219、220、226、237、238、240、243、244、248、251、252、267、271、276、289、295、298、300、302、322、329、339、347、347、353、383、384、392、394、395、402、414、427、431、445、447、459、473、474、476、482、488、489、491、492、503和505，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在另一方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的十六个或更多个位置处包含改变：SEQ ID NO:1的多肽的111、123、159、256、294、8、18、20、41、42、76、82、83、87、94、103、104、105、121、125、126、127、136、137、146、147、148、152、153、155、165、168、169、177、184、189、203、206、210、211、214、217、219、220、226、237、238、240、243、244、248、251、252、267、271、276、289、295、298、300、302、322、329、339、347、347、353、383、384、392、394、395、402、414、427、431、445、447、459、473、474、476、482、488、489、491、492、503和505，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在另一方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的十七个或更多个位置处包含改变：SEQ ID NO:1的多肽的111、123、159、256、294、8、18、20、41、42、76、82、83、87、94、103、104、105、121、125、126、127、136、137、146、147、148、152、153、155、165、168、169、177、184、189、203、206、210、211、214、217、219、220、226、237、238、240、243、244、248、251、252、267、271、276、289、295、298、300、302、322、329、339、347、347、353、383、384、392、394、395、402、414、427、431、445、447、459、473、474、476、482、488、489、491、492、503和505，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在另一方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的十八个或更多个位置处包含改变：SEQ ID NO:1的多肽的111、123、159、256、294、8、18、20、41、42、76、82、83、87、94、103、104、105、121、125、126、127、136、137、146、147、148、152、153、155、165、168、169、177、184、189、203、206、210、211、214、217、219、220、226、237、238、240、243、244、248、251、252、267、271、276、289、295、298、300、302、322、329、339、347、347、353、383、384、392、394、395、402、414、427、431、445、447、459、473、474、476、482、488、489、491、492、503和505，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在另一方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的十九个或更多个位置处包含改变：SEQ ID NO:1的多肽的111、123、159、256、294、8、18、20、41、42、76、82、83、87、94、103、104、105、121、125、126、127、136、137、146、147、148、152、153、155、165、168、169、177、184、189、203、206、210、211、214、217、219、220、226、237、238、240、243、244、248、251、252、267、271、276、289、295、298、300、302、322、329、339、347、347、353、383、384、392、394、395、402、414、427、431、445、447、459、473、474、476、482、488、489、491、492、503和505，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在另一方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的二十个或更多个位置处包含改变：SEQ ID NO:1的多肽的111、123、159、256、294、8、18、20、41、42、76、82、83、87、94、103、104、105、121、125、126、127、136、137、146、147、148、152、153、155、165、168、169、177、184、189、203、206、210、211、214、217、219、220、226、237、238、240、243、244、248、251、252、267、271、276、289、295、298、300、302、322、329、339、347、347、353、383、384、392、394、395、402、414、427、431、445、447、459、473、474、476、482、488、489、491、492、503和505，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在另一方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的每个位置处包含改变：SEQ ID NO:1的多肽的111、123、159、256、294、8、18、20、41、42、76、82、83、87、94、103、104、105、121、125、126、127、136、137、146、147、148、152、153、155、165、168、169、177、184、189、203、206、210、211、214、217、219、220、226、237、238、240、243、244、248、251、252、267、271、276、289、295、298、300、302、322、329、339、347、347、353、383、384、392、394、395、402、414、427、431、445、447、459、473、474、476、482、488、489、491、492、503和505，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在另一方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的每个位置处包含改变：SEQ ID NO:1的多肽的111、123、129、159、256、294、8、18、20、41、42、76、82、83、87、94、103、104、105、121、125、126、127、136、137、146、147、148、152、153、155、165、168、169、177、184、189、203、206、210、211、214、217、219、220、226、237、238、240、243、244、248、251、252、267、271、276、289、295、298、300、302、322、329、339、347、347、353、383、384、392、394、395、402、414、427、431、445、447、459、473、474、476、482、488、489、491、492、503和505，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在另一方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的每个位置处包含改变：SEQ ID NO:2的多肽的111、123、129、159、256、294、8、18、20、41、42、76、82、83、87、94、103、104、105、121、125、126、127、136、137、146、147、148、152、153、155、165、168、169、177、184、189、203、206、210、211、214、217、219、220、226、237、238、240、243、244、248、251、252、267、271、276、289、295、298、300、302、322、329、339、347、347、353、383、384、392、394、395、402、414、427、431、445、447、459、473、474、476、482、488、489、491、492、503和505，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含以下改变中的一个或多个：SEQID NO:1的多肽的P111、S123、V159、S256、I294、K8、K18、R20、A41、A42、S76、Q82、A83、K87、S94、G103、T104、Y105、A118、N121、Q125、E126、S127、N136、Q137、F146、Q147、L148、L152、N153、N155、F165、N168、K169、A177、L184、A189、V203、K206、D210、R211、S214、K217、V219、K220、A226、G237、A238、K240、Q243、T244、W248、V251、K252、R267、Q271、R276、A289、R295、N298、V300、N302、K322、Q329、P339、K347、R347、K353、R353、N383、D384、K392、K394、D395、P395、S402、K414、T427、V431、K445、L447、A459、I473、S474、K476、K482、K488、E489、A491、P492、Y503和V505，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含以下改变中的一个或多个：SEQID NO:1的多肽的P111、S123、V159、S256、I294、K8、K18、R20、A41、A42、S76、Q82、A83、K87、S94、G103、T104、Y105、A118、N121、Q125、E126、S127、K129、N136、Q137、F146、Q147、L148、L152、N153、N155、F165、N168、K169、A177、L184、A189、V203、K206、D210、R211、S214、K217、V219、K220、A226、G237、A238、K240、Q243、T244、W248、V251、K252、R267、Q271、R276、A289、R295、N298、V300、N302、K322、Q329、P339、K347、R347、K353、R353、N383、D384、K392、K394、D395、P395、S402、K414、T427、V431、K445、L447、A459、I473、S474、K476、K482、K488、E489、A491、P492、Y503和V505，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含以下改变中的一个或多个：SEQID NO:2的多肽的P111、S123、V159、S256、I294、K8、K18、R20、A41、A42、S76、Q82、A83、K87、S94、G103、T104、Y105、A118、N121、Q125、E126、S127、A129、N136、Q137、F146、Q147、L148、L152、N153、N155、F165、N168、K169、A177、L184、A189、V203、K206、D210、R211、S214、K217、V219、K220、A226、G237、A238、K240、Q243、T244、W248、V251、K252、R267、Q271、R276、A289、R295、N298、V300、N302、K322、Q329、P339、K347、R347、K353、R353、N383、D384、K392、K394、D395、P395、S402、K414、T427、V431、K445、L447、A459、I473、S474、K476、K482、K488、E489、A491、P492、Y503和V505，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含以下改变中的一个或多个：SEQID NO:1的多肽的P111Q、S123P、V159M、S256E、S256Q、I294E、I294Q、K8E、K8R、K18E、R20K、A41L、A41E、A41R、A42V、S76E、Q82E、A83E、K87E、S94R、G103V、T104G、T104R、Y105E、A118K、N121E、Q125F、Q125K、Q125L、Q125P、Q125S、E126P、S127H、S127L、S127W、S127D、N136D、Q137E、Q137K、F146D、Q147G、Q147K、L148P、L152*、L152D、L152E、L152P、N153E、N155D、N155E、F165H、N168R、K169E、K169R、A177G、L184M、A189G、V203T、K206E、K206R、D210H、D210R、R211K、S214Q、K217R、K217T、V219A、V219T、K220R、A226D、A226K、G237M、A238S、A238T、K240F、K240L、Q243E、T244E、T244R、W248V、V251E、K252E、R267C、R267H、R267K、Q271D、Q271E、R276K、A289T、R295K、N298D、V300L、N302H、K322E、Q329E、P339S、K347E、K347R、K353R、N383E、N383Q、D384G、K392E、K394R、D395P、S402Q、K414E、T427V、V431E、K445E、L447M、A459P、I473T、S474E、K476R、K482R、K488T、E489K、E489R、A491E、A491V、P492D、Y503L、Y503V和V505L，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含以下改变中的一个或多个：SEQID NO:1的多肽的P111Q、S123P、V159M、S256E、S256Q、I294E、I294Q、K8E、K8R、K18E、R20K、A41L、A41E、A41R、A42V、S76E、Q82E、A83E、K87E、S94R、G103V、T104G、T104R、Y105E、A118K、N121E、Q125F、Q125K、Q125L、Q125P、Q125S、E126P、S127H、S127L、S127W、S127D、K129A、K129T、N136D、Q137E、Q137K、F146D、Q147G、Q147K、L148P、L152*、L152D、L152E、L152P、N153E、N155D、N155E、F165H、N168R、K169E、K169R、A177G、L184M、A189G、V203T、K206E、K206R、D210H、D210R、R211K、S214Q、K217R、K217T、V219A、V219T、K220R、A226D、A226K、G237M、A238S、A238T、K240F、K240L、Q243E、T244E、T244R、W248V、V251E、K252E、R267C、R267H、R267K、Q271D、Q271E、R276K、A289T、R295K、N298D、V300L、N302H、K322E、Q329E、P339S、K347E、K347R、K353R、N383E、N383Q、D384G、K392E、K394R、D395P、S402Q、K414E、T427V、V431E、K445E、L447M、A459P、I473T、S474E、K476R、K482R、K488T、E489K、E489R、A491E、A491V、P492D、Y503L、Y503V和V505L，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含以下改变中的一个或多个：SEQID NO:2的多肽的P111Q、S123P、V159M、S256E、S256Q、I294E、I294Q、K8E、K8R、K18E、R20K、A41L、A41E、A41R、A42V、S76E、Q82E、A83E、K87E、S94R、G103V、T104G、T104R、Y105E、A118K、N121E、Q125F、Q125K、Q125L、Q125P、Q125S、E126P、S127H、S127L、S127W、S127D、A129T、N136D、Q137E、Q137K、F146D、Q147G、Q147K、L148P、L152*、L152D、L152E、L152P、N153E、N155D、N155E、F165H、N168R、K169E、K169R、A177G、L184M、A189G、V203T、K206E、K206R、D210H、D210R、R211K、S214Q、K217R、K217T、V219A、V219T、K220R、A226D、A226K、G237M、A238S、A238T、K240F、K240L、Q243E、T244E、T244R、W248V、V251E、K252E、R267C、R267H、R267K、Q271D、Q271E、R276K、A289T、R295K、N298D、V300L、N302H、K322E、Q329E、P339S、K347E、K347R、K353R、N383E、N383Q、D384G、K392E、K394R、D395P、S402Q、K414E、T427V、V431E、K445E、L447M、A459P、I473T、S474E、K476R、K482R、K488T、E489K、E489R、A491E、A491V、P492D、Y503L、Y503V和V505L，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在另一方面，变体在对应于位置8的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置8的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代K8R或K8E或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置18的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置18的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代K18E或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置20的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置20的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代R20K或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置41的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置41的位置处的氨基酸被Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代A41E或A41L或A41R或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置42的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置42的位置处的氨基酸被Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代A42V或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置76的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置76的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代S76E或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置82的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置82的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代Q82E或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置83的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置83的位置处的氨基酸被Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代A83E或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置87的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置87的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代K87E或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置94的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置94的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代S94R或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置103的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置103的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Val取代。在另一方面，变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代G103V或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置104的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置104的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Gly、Arg取代。在另一方面，变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代T104G或T104R或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置105的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置105的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代Y105E或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置111的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置111的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代P111Q或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置118的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置118的位置处的氨基酸被Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代A118K或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置121的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置121的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代N121E或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置123的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置123的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代S123P或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置125的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置125的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Phe、Leu、Ser取代，最优选被Ser取代。在另一方面，变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代Q125F、Q125K、Q125L、Q125P、Q125S、最优选Q125S，或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置126的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置126的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代E126P或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置127的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置127的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代S127H或S127L或S127W或S127D或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置136的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置136的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代N136D或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置137的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置137的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代Q137E或Q137K或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置146的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置146的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代F146D或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置147的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置147的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代Q147G或Q147K或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置148的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置148的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代L148P或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置152的位置处包含取代或缺失或由其组成。在另一方面，在对应于位置152的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代或缺失L152D或L152E或L152P或L152*或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置153的位置处包含取代或由其组成在另一方面，在对应于位置153的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代N153E或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置155的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置155的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代N155D或N155E或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置159的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置159的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代V159M或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置165的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置165的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代F165H或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置168的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置168的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代N168R或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置169的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置169的位置处的氨基酸被Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代K169E或K169R或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置177的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置177的位置处的氨基酸被Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代A177G或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置184的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置184的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代L184M或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置189的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置189的位置处的氨基酸被Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代A189G或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置203的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置203的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代V203T或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置206的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置206的位置处的氨基酸被Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代K206E或K206R或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置210的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置210的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代D210H或D210R或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置211的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置211的位置处的氨基酸被Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代R211K或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置214的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置214的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代S214Q或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置217的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置217的位置处的氨基酸被Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代K217R或K217T或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置219的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置219的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代V219A或V219T或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置220的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置220的位置处的氨基酸被Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代K220R或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置226的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置226的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代A226D或A226K或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置237的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置237的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代G237M或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置238的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置238的位置处的氨基酸被Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或者Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQID NO:1的多肽的取代A238S或A238T或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置240的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置240的位置处的氨基酸被Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代K240L或K240F或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置243的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置243的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代Q243E或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置244的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置244的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代T244E或T244R或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置248的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置248的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代W248V或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置251的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置251的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代V251E或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置252的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置252的位置处的氨基酸被Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代K252E或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置256的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置256的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代S256E或S256Q或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置267的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置267的位置处的氨基酸被Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代R267C或R267H或R267K或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置271的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置271的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代Q271D或Q271E或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置276的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置276的位置处的氨基酸被Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代R276K或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置289的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置289的位置处的氨基酸被Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代A289T或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置294的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置294的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代I294E或I294Q或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置295的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置295的位置处的氨基酸被Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代R295K或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置298的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置298的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代N298D或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置300的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置300的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代V300L或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置302的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置302的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代N302H或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置322的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置322的位置处的氨基酸被Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代K322E或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置329的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置329的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代Q329E或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置339的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置339的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代P339S或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置347的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置347的位置处的氨基酸被Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代K347E或K347R或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置353的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置353的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代K353R或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置383的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置383的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代N383E或N383Q或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置384的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置384的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代D384G或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置392的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置392的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代K392E或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置394的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置394的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代K394R或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置395的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置395的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代D395P或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置402的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置402的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代S402Q或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置414的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置414的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代K414E或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置427的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置427的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代T427V或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置431的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置431的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、或Tyr取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代V431E或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置445的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置445的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代K445E或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置447的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置447的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代L447M或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置459的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置459的位置处的氨基酸被Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代A459P或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置473的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置473的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代I473T或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置474的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置474的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代S474E或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置476的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置476的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代K476R或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置482的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置482的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代K482R或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置488的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置488的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代K488T或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置489的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置489的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代E489K或E489R或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置491的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置491的位置处的氨基酸被Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代A491E或A491V或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置492的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置492的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代P492D或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置503的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置503的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、或Val取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代Y503L或Y503V或由其组成。
在另一方面，变体在对应于位置505的位置处包含取代或由其组成。在另一方面，在对应于位置505的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、或Tyr取代，优选被Pro取代。在另一方面，变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代V505L或由其组成。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的E126P、S127H、T104G、Q125K、Q125P、Q125S、D395P、G103V、T104R、Q125L、A41E、A41R、Q125F、S127L、A226K、A41L、A226D、K394R、S127D、R211K、S123P、K488T、S256Q、K476R、K217R、Q271D、S214Q、L447M、K482R、K169R、L152D、R267K、L152E、D210R、L152*、R295K、N155D、Q137K、N155E、Q147K、R276K、V203T、S94R、K18E、K252E、V219T、Q243E、K414E、K445E、V159M、K392E、Q82E、S76E、A83E、Q271E、S256E、I294E、Q329E、V431E，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的E126P、S127H、T104G、Q125K、Q125P、Q125S、K129T、K129A、D395P、G103V、T104R、Q125L、A41E、A41R、Q125F、S127L、A226K、A41L、A226D、K394R、S127D、R211K、S123P、K488T、S256Q、K476R、K217R、Q271D、S214Q、L447M、K482R、K169R、L152D、R267K、L152E、D210R、L152*、R295K、N155D、Q137K、N155E、Q147K、R276K、V203T、S94R、K18E、K252E、V219T、Q243E、K414E、K445E、V159M、K392E、Q82E、S76E、A83E、Q271E、S256E、I294E、Q329E、V431E，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ IDNO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:2的多肽的E126P、S127H、T104G、Q125K、Q125P、Q125S、A129T、D395P、G103V、T104R、Q125L、A41E、A41R、Q125F、S127L、A226K、A41L、A226D、K394R、S127D、R211K、S123P、K488T、S256Q、K476R、K217R、Q271D、S214Q、L447M、K482R、K169R、L152D、R267K、L152E、D210R、L152*、R295K、N155D、Q137K、N155E、Q147K、R276K、V203T、S94R、K18E、K252E、V219T、Q243E、K414E、K445E、V159M、K392E、Q82E、S76E、A83E、Q271E、S256E、I294E、Q329E、V431E，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的A118K+S123P、R267C+T427V、R20K+S123P、S123P+K206R、S123P+K347R、S123P+D395P、S123P+S127D、E489R+P492D、Y503L+V505L、Y503V+V505L、L184M+V219A，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ IDNO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的A118K+S123P+K129T、R267C+T427V+K129T、R20K+S123P+K129T、S123P+K206R+K129T、S123P+K347R+K129T、S123P+D395P+K129T、S123P+S127D+K129T、E489R+P492D+K129T、Y503L+V505L+K129T、Y503V+V505L+K129T、L184M+V219A+K129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:2的多肽的A118K+S123P+A129T、R267C+T427V+A129T、R20K+S123P+A129T、S123P+K206R+A129T、S123P+K347R+A129T、S123P+D395P+A129T、S123P+S127D+A129T、E489R+P492D+A129T、Y503L+V505L+A129T、Y503V+V505L+A129T、L184M+V219A+A129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的R20K+S123P+R211K、R20K+S123P+K220R、P111Q+S123P+V159M、K8E+P111Q+V159M、S94R+P111Q+V159M、P111Q+Q137K+V159M、P111Q+Q147K+V159M，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的R20K+S123P+R211K+K129T、R20K+S123P+K220R+K129T、P111Q+S123P+V159M+K129T、K8E+P111Q+V159M+K129T、S94R+P111Q+V159M+K129T、P111Q+Q137K+V159M+K129T、P111Q+Q147K+V159M+K129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:2的多肽的R20K+S123P+R211K+A129T、R20K+S123P+K220R+A129T、P111Q+S123P+V159M+A129T、K8E+P111Q+V159M+A129T、S94R+P111Q+V159M+A129T、P111Q+Q137K+V159M+A129T、P111Q+Q147K+V159M+A129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的S123P+K347R+K353R+D395P、R20K+Y105E+S123P+R267K、R20K+Y105E+S123P+N136D、R20K+S123P+Q137K+Q147K、S94R+P111Q+S123P+V159M、K87E+P111Q+S123P+V159M、P111Q+S123P+V159M+S402Q、P111Q+Q147K+V159M+K220R、P111Q+V159M+K206E+I294Q、K8E+P111Q+N155D+V159M、P111Q+Q137K+Q147K+V159M、R20K+S123P+K220R+I294E、R20K+S123P+N155D+K220R、R20K+S123P+V203T+V219T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的S123P+K347R+K353R+D395P+K129T、R20K+Y105E+S123P+R267K+K129T、R20K+Y105E+S123P+N136D+K129T、R20K+S123P+Q137K+Q147K+K129T、S94R+P111Q+S123P+V159M+K129T、K87E+P111Q+S123P+V159M+K129T、P111Q+S123P+V159M+S402Q+K129T、P111Q+Q147K+V159M+K220R+K129T、P111Q+V159M+K206E+I294Q+K129T、K8E+P111Q+N155D+V159M+K129T、P111Q+Q137K+Q147K+V159M+K129T、R20K+S123P+K220R+I294E+K129T、R20K+S123P+N155D+K220R+K129T、R20K+S123P+V203T+V219T+K129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:2的多肽的S123P+K347R+K353R+D395P+A129T、R20K+Y105E+S123P+R267K+A129T、R20K+Y105E+S123P+N136D+A129T、R20K+S123P+Q137K+Q147K+A129T、S94R+P111Q+S123P+V159M+A129T、K87E+P111Q+S123P+V159M+A129T、P111Q+S123P+V159M+S402Q+A129T、P111Q+Q147K+V159M+K220R+A129T、P111Q+V159M+K206E+I294Q+A129T、K8E+P111Q+N155D+V159M+A129T、P111Q+Q137K+Q147K+V159M+A129T、R20K+S123P+K220R+I294E+A129T、R20K+S123P+N155D+K220R+A129T、R20K+S123P+V203T+V219T+A129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的S123P+R211K+K217R+S256Q+K488T、R20K+Y105E+S123P+Q147K+R267K、K87E+P111Q+S123P+V159M+S402Q、K87E+P111Q+V159M+I294Q+I473T、K8E+K18E+P111Q+V159M+K206E、R20K+P111Q+S123P+S127D+V159M、P111Q+V159M+K206E+I294Q+K347E、P111Q+Q137K+Q147K+V159M+K252E、P111Q+Q137K+Q147K+N155D+K252E、P111Q+Q137K+L152D+V203T+K217R、P111Q+S123P+Q137K+V159M+K488T、P111Q+S123P+Q137K+V159M+S256Q、K87E+P111Q+Q147K+L152D+V159M、R20K+A83E+S123P+K220R+S256E、R20K+A83E+S123P+K220R+K252E、R20K+Q82E+S123P+Q147K+K220R、R20K+A83E+S123P+K220R+S256Q、R20K+Q82E+S123P+N155D+K220R、R20K+S123P+V203T+K220R+K252E、R20K+A41L+Q82E+S123P+K220R、R20K+A42V+S76E+S123P+K220R、R20K+A42V+A83E+S123P+K220R、A83E+P111Q+S123P+V159M+K252E，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的S123P+R211K+K217R+S256Q+K488T+K129T、R20K+Y105E+S123P+Q147K+R267K+K129T、K87E+P111Q+S123P+V159M+S402Q+K129T、K87E+P111Q+V159M+I294Q+I473T+K129T、K8E+K18E+P111Q+V159M+K206E+K129T、R20K+P111Q+S123P+S127D+V159M+K129T、P111Q+V159M+K206E+I294Q+K347E+K129T、P111Q+Q137K+Q147K+V159M+K252E+K129T、P111Q+Q137K+Q147K+N155D+K252E+K129T、P111Q+Q137K+L152D+V203T+K217R+K129T、P111Q+S123P+Q137K+V159M+K488T+K129T、P111Q+S123P+Q137K+V159M+S256Q+K129T、K87E+P111Q+Q147K+L152D+V159M+K129T、R20K+A83E+S123P+K220R+S256E+K129T、R20K+A83E+S123P+K220R+K252E+K129T、R20K+Q82E+S123P+Q147K+K220R+K129T、R20K+A83E+S123P+K220R+S256Q+K129T、R20K+Q82E+S123P+N155D+K220R+K129T、R20K+S123P+V203T+K220R+K252E+K129T、R20K+A41L+Q82E+S123P+K220R+K129T、R20K+A42V+S76E+S123P+K220R+K129T、R20K+A42V+A83E+S123P+K220R+K129T、A83E+P111Q+S123P+V159M+K252E+K129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:2的多肽的S123P+R211K+K217R+S256Q+K488T+A129T、R20K+Y105E+S123P+Q147K+R267K+A129T、K87E+P111Q+S123P+V159M+S402Q+A129T、K87E+P111Q+V159M+I294Q+I473T+A129T、K8E+K18E+P111Q+V159M+K206E+A129T、R20K+P111Q+S123P+S127D+V159M+A129T、P111Q+V159M+K206E+I294Q+K347E+A129T、P111Q+Q137K+Q147K+V159M+K252E+A129T、P111Q+Q137K+Q147K+N155D+K252E+A129T、P111Q+Q137K+L152D+V203T+K217R+A129T、P111Q+S123P+Q137K+V159M+K488T+A129T、P111Q+S123P+Q137K+V159M+S256Q+A129T、K87E+P111Q+Q147K+L152D+V159M+A129T、R20K+A83E+S123P+K220R+S256E+A129T、R20K+A83E+S123P+K220R+K252E+A129T、R20K+Q82E+S123P+Q147K+K220R+A129T、R20K+A83E+S123P+K220R+S256Q+A129T、R20K+Q82E+S123P+N155D+K220R+A129T、R20K+S123P+V203T+K220R+K252E+A129T、R20K+A41L+Q82E+S123P+K220R+A129T、R20K+A42V+S76E+S123P+K220R+A129T、R20K+A42V+A83E+S123P+K220R+A129T、A83E+P111Q+S123P+V159M+K252E+A129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的Y105E+A118K+S123P+K206R+K220R+R267K、A41L+P111Q+S123P+Q147K+V159M+V203T、A41L+P111Q+S123P+Q147K+V159M+K217R、P111Q+S123P+Q147K+V159M+I294Q+S402Q、P111Q+Q137K+Q147K+V159M+V203T+K217R、K87E+P111Q+L152D+V159M+V203T+I294Q、R20K+S76E+A83E+S123P+K220R+K252E、R20K+A42V+S123P+K220R+K252E+I294E、R20K+A83E+S123P+V203T+K220R+K252E、R20K+A42V+S76E+S123P+V203T+K220R、A83E+P111Q+S123P+V159M+S256E+I294E、Q82E+P111Q+S123P+V159M+S256E+I294E、Q82E+P111Q+S123P+Q147K+V159M+I294E、K87E+P111Q+S123P+V159M+K217T+I294E、A83E+P111Q+S123P+V159M+K240F+K252E、K87E+P111Q+S123P+V159M+S256Q+I294E、K87E+P111Q+S123P+V159M+K347E+N383E、Q82E+P111Q+S123P+N155D+S256E+I294E，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的Y105E+A118K+S123P+K206R+K220R+R267K+K129T、A41L+P111Q+S123P+Q147K+V159M+V203T+K129T、A41L+P111Q+S123P+Q147K+V159M+K217R+K129T、P111Q+S123P+Q147K+V159M+I294Q+S402Q+K129T、P111Q+Q137K+Q147K+V159M+V203T+K217R+K129T、K87E+P111Q+L152D+V159M+V203T+I294Q+K129T、R20K+S76E+A83E+S123P+K220R+K252E+K129T、R20K+A42V+S123P+K220R+K252E+I294E+K129T、R20K+A83E+S123P+V203T+K220R+K252E+K129T、R20K+A42V+S76E+S123P+V203T+K220R+K129T、A83E+P111Q+S123P+V159M+S256E+I294E+K129T、Q82E+P111Q+S123P+V159M+S256E+I294E+K129T、Q82E+P111Q+S123P+Q147K+V159M+I294E+K129T、K87E+P111Q+S123P+V159M+K217T+I294E+K129T、A83E+P111Q+S123P+V159M+K240F+K252E+K129T、K87E+P111Q+S123P+V159M+S256Q+I294E+K129T、K87E+P111Q+S123P+V159M+K347E+N383E+K129T、Q82E+P111Q+S123P+N155D+S256E+I294E+K129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:2的多肽的Y105E+A118K+S123P+K206R+K220R+R267K+A129T、A41L+P111Q+S123P+Q147K+V159M+V203T+A129T、A41L+P111Q+S123P+Q147K+V159M+K217R+A129T、P111Q+S123P+Q147K+V159M+I294Q+S402Q+A129T、P111Q+Q137K+Q147K+V159M+V203T+K217R+A129T、K87E+P111Q+L152D+V159M+V203T+I294Q+A129T、R20K+S76E+A83E+S123P+K220R+K252E+A129T、R20K+A42V+S123P+K220R+K252E+I294E+A129T、R20K+A83E+S123P+V203T+K220R+K252E+A129T、R20K+A42V+S76E+S123P+V203T+K220R+A129T、A83E+P111Q+S123P+V159M+S256E+I294E+A129T、Q82E+P111Q+S123P+V159M+S256E+I294E+A129T、Q82E+P111Q+S123P+Q147K+V159M+I294E+A129T、K87E+P111Q+S123P+V159M+K217T+I294E+A129T、A83E+P111Q+S123P+V159M+K240F+K252E+A129T、K87E+P111Q+S123P+V159M+S256Q+I294E+A129T、K87E+P111Q+S123P+V159M+K347E+N383E+A129T、Q82E+P111Q+S123P+N155D+S256E+I294E+A129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+S256Q+S402Q、A41L+P111Q+Q137K+V159M+N168R+Q271D+K488T、S76E+Q82E+K87E+P111Q+S123P+V159M+V203T、Q82E+P111Q+S123P+Q147K+V159M+S256E+I294E、K8E+Q82E+P111Q+S123P+V159M+S256E+I294E、Q82E+P111Q+S123P+V159M+K240F+S256E+I294E、Q82E+P111Q+S123P+V159M+G237M+V251E+I294E，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+S256Q+S402Q+K129T、A41L+P111Q+Q137K+V159M+N168R+Q271D+K488T+K129T、S76E+Q82E+K87E+P111Q+S123P+V159M+V203T+K129T、Q82E+P111Q+S123P+Q147K+V159M+S256E+I294E+K129T、K8E+Q82E+P111Q+S123P+V159M+S256E+I294E+K129T、Q82E+P111Q+S123P+V159M+K240F+S256E+I294E+K129T、Q82E+P111Q+S123P+V159M+G237M+V251E+I294E+K129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:2的多肽的P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+S256Q+S402Q+A129T、A41L+P111Q+Q137K+V159M+N168R+Q271D+K488T+A129T、S76E+Q82E+K87E+P111Q+S123P+V159M+V203T+A129T、Q82E+P111Q+S123P+Q147K+V159M+S256E+I294E+A129T、K8E+Q82E+P111Q+S123P+V159M+S256E+I294E+A129T、Q82E+P111Q+S123P+V159M+K240F+S256E+I294E+A129T、Q82E+P111Q+S123P+V159M+G237M+V251E+I294E+A129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+S256Q+S402Q、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+N155D+S256Q+A289T+N302H、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K252E+S256Q+S402Q、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+N155D+S256Q+I294E+S402Q、S76E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+S256Q+S402Q、K8R+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+S256Q+S402Q、S123P+S127D+N136D+Q137K+Q147K+L152E+N153E+N155E、R20K+S123P+K169R+K217T+K240F+S256Q+R267H+I294E、Q82E+P111Q+S123P+V159M+V203T+G237M+S256E+I294E、Q82E+P111Q+S123P+N155D+K169R+G237M+S256E+I294E、Q82E+P111Q+S123P+Q137K+V159M+G237M+S256E+I294E、Q82E+P111Q+S123P+Q137K+V159M+K240F+S256E+I294E、Q82E+P111Q+S123P+Q147K+N155D+K240F+S256E+I294E、A83E+P111Q+S123P+Q147K+V159M+S256E+I294E+Q329E、Q82E+P111Q+S123P+V159M+K169R+S256E+I294E+V431E、A41L+Q82E+P111Q+S123P+V159M+S256E+I294E+N383E，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+S256Q+S402Q+K129T、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+N155D+S256Q+A289T+N302H+K129T、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K252E+S256Q+S402Q+K129T、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+N155D+S256Q+I294E+S402Q+K129T、S76E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+S256Q+S402Q+K129T、K8R+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+S256Q+S402Q+K129T、S123P+S127D+N136D+Q137K+Q147K+L152E+N153E+N155E+K129T、R20K+S123P+K169R+K217T+K240F+S256Q+R267H+I294E+K129T、Q82E+P111Q+S123P+V159M+V203T+G237M+S256E+I294E+K129T、Q82E+P111Q+S123P+N155D+K169R+G237M+S256E+I294E+K129T、Q82E+P111Q+S123P+Q137K+V159M+G237M+S256E+I294E、Q82E+P111Q+S123P+Q137K+V159M+K240F+S256E+I294E+K129T、Q82E+P111Q+S123P+Q147K+N155D+K240F+S256E+I294E+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q147K+V159M+S256E+I294E+Q329E+K129T、Q82E+P111Q+S123P+V159M+K169R+S256E+I294E+V431E+K129T、A41L+Q82E+P111Q+S123P+V159M+S256E+I294E+N383E+K129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:2的多肽的A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+S256Q+S402Q+A129T、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+N155D+S256Q+A289T+N302H+A129T、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K252E+S256Q+S402Q+A129T、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+N155D+S256Q+I294E+S402Q+A129T、S76E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+S256Q+S402Q+A129T、K8R+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+S256Q+S402Q+A129T、S123P+S127D+N136D+Q137K+Q147K+L152E+N153E+N155E+A129T、R20K+S123P+K169R+K217T+K240F+S256Q+R267H+I294E+A129T、Q82E+P111Q+S123P+V159M+V203T+G237M+S256E+I294E+A129T、Q82E+P111Q+S123P+N155D+K169R+G237M+S256E+I294E+A129T、Q82E+P111Q+S123P+Q137K+V159M+G237M+S256E+I294E+A129T、Q82E+P111Q+S123P+Q137K+V159M+K240F+S256E+I294E+A129T、Q82E+P111Q+S123P+Q147K+N155D+K240F+S256E+I294E+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q147K+V159M+S256E+I294E+Q329E+A129T、Q82E+P111Q+S123P+V159M+K169R+S256E+I294E+V431E+A129T、A41L+Q82E+P111Q+S123P+V159M+S256E+I294E+N383E+A129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的S76E+P111Q+S123P+Q137E+Q147K+V159M+K252E+S256Q+S402Q、P111Q+N121E+Q137K+Q147K+V159M+K169R+S256Q+I294E+S402Q、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+S256Q+I294E+S402Q、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V219T+S256Q+S402Q、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+S256Q+S402Q、Q82E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K252E+S256Q+S402Q、S123P+S127D+N136D+Q137K+Q147K+L152E+N153E+N155E+A491E、Q82E+P111Q+S123P+V159M+A177G+K240F+S256E+I294E+D384G、K8R+Q82E+P111Q+S123P+V159M+K169R+K240F+S256E+I294E、R20K+S123P+Q137K+K169R+K217T+K240F+S256Q+R267H+I294E、R20K+S123P+N155D+K169R+K217T+K240F+S256Q+R267H+I294E、R20K+S123P+Q147K+K169R+V219T+K240F+S256Q+R267H+I294E、Q82E+P111Q+S123P+V159M+V203T+G237M+K252E+S256E+I294E、S76E+Q82E+P111Q+S123P+V159M+V203T+G237M+S256E+I294E、Q82E+P111Q+S123P+Q147K+V159M+V203T+G237M+S256E+I294E、Q82E+P111Q+S123P+V159M+V203T+G237M+T244R+S256E+I294E，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的S76E+P111Q+S123P+Q137E+Q147K+V159M+K252E+S256Q+S402Q+K129T、P111Q+N121E+Q137K+Q147K+V159M+K169R+S256Q+I294E+S402Q+K129T、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+S256Q+I294E+S402Q+K129T、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V219T+S256Q+S402Q+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+S256Q+S402Q+K129T、Q82E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K252E+S256Q+S402Q+K129T、S123P+S127D+N136D+Q137K+Q147K+L152E+N153E+N155E+A491E+K129T、Q82E+P111Q+S123P+V159M+A177G+K240F+S256E+I294E+D384G+K129T、K8R+Q82E+P111Q+S123P+V159M+K169R+K240F+S256E+I294E+K129T、R20K+S123P+Q137K+K169R+K217T+K240F+S256Q+R267H+I294E+K129T、R20K+S123P+N155D+K169R+K217T+K240F+S256Q+R267H+I294E、R20K+S123P+Q147K+K169R+V219T+K240F+S256Q+R267H+I294E+K129T、Q82E+P111Q+S123P+V159M+V203T+G237M+K252E+S256E+I294E+K129T、S76E+Q82E+P111Q+S123P+V159M+V203T+G237M+S256E+I294E+K129T、Q82E+P111Q+S123P+Q147K+V159M+V203T+G237M+S256E+I294E+K129T、Q82E+P111Q+S123P+V159M+V203T+G237M+T244R+S256E+I294E+K129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:2的多肽的S76E+P111Q+S123P+Q137E+Q147K+V159M+K252E+S256Q+S402Q+A129T、P111Q+N121E+Q137K+Q147K+V159M+K169R+S256Q+I294E+S402Q+A129T、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+S256Q+I294E+S402Q+A129T、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V219T+S256Q+S402Q+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+S256Q+S402Q+A129T、Q82E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K252E+S256Q+S402Q+A129T、S123P+S127D+N136D+Q137K+Q147K+L152E+N153E+N155E+A491E+A129T、Q82E+P111Q+S123P+V159M+A177G+K240F+S256E+I294E+D384G+A129T、K8R+Q82E+P111Q+S123P+V159M+K169R+K240F+S256E+I294E+A129T、R20K+S123P+Q137K+K169R+K217T+K240F+S256Q+R267H+I294E+A129T、R20K+S123P+N155D+K169R+K217T+K240F+S256Q+R267H+I294E、R20K+S123P+Q147K+K169R+V219T+K240F+S256Q+R267H+I294E+A129T、Q82E+P111Q+S123P+V159M+V203T+G237M+K252E+S256E+I294E+A129T、S76E+Q82E+P111Q+S123P+V159M+V203T+G237M+S256E+I294E+A129T、Q82E+P111Q+S123P+Q147K+V159M+V203T+G237M+S256E+I294E+A129T、Q82E+P111Q+S123P+V159M+V203T+G237M+T244R+S256E+I294E+A129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+S256Q+I294E+S402Q、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+N155D+L184M+S256Q+I294E+S402Q、R20K+S123P+Q147K+N155D+K169R+K217T+K240F+S256Q+R267H+I294E、R20K+S123P+N155D+K169R+K217T+K240F+S256Q+R267H+I294E+S474E、R20K+A41L+S123P+L152P+K169R+K217T+K240F+S256Q+R267H+I294E、K8R+R20K+S123P+K169R+D210H+K217T+K240F+S256Q+R267H+I294E、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+G237M+T244R+S256Q+I294E+S402Q、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+V203T+S256Q+I294E+S402Q、Q82E+P111Q+S123P+Q137K+V159M+V203T+D210H+G237M+S256E+I294E、Q82E+P111Q+S123P+V159M+K169R+V203T+G237M+T244R+S256E+I294E，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ IDNO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+S256Q+I294E+S402Q+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+N155D+L184M+S256Q+I294E+S402Q+K129T、R20K+S123P+Q147K+N155D+K169R+K217T+K240F+S256Q+R267H+I294E+K129T、R20K+S123P+N155D+K169R+K217T+K240F+S256Q+R267H+I294E+S474E+K129T、R20K+A41L+S123P+L152P+K169R+K217T+K240F+S256Q+R267H+I294E+K129T、K8R+R20K+S123P+K169R+D210H+K217T+K240F+S256Q+R267H+I294E+K129T、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+G237M+T244R+S256Q+I294E+S402Q+K129T、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+V203T+S256Q+I294E+S402Q+K129T、Q82E+P111Q+S123P+Q137K+V159M+V203T+D210H+G237M+S256E+I294E+K129T、Q82E+P111Q+S123P+V159M+K169R+V203T+G237M+T244R+S256E+I294E+K129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:2的多肽的A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+S256Q+I294E+S402Q+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+N155D+L184M+S256Q+I294E+S402Q+A129T、R20K+S123P+Q147K+N155D+K169R+K217T+K240F+S256Q+R267H+I294E+A129T、R20K+S123P+N155D+K169R+K217T+K240F+S256Q+R267H+I294E+S474E+A129T、R20K+A41L+S123P+L152P+K169R+K217T+K240F+S256Q+R267H+I294E+A129T、K8R+R20K+S123P+K169R+D210H+K217T+K240F+S256Q+R267H+I294E+A129T、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+G237M+T244R+S256Q+I294E+S402Q+A129T、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+V203T+S256Q+I294E+S402Q+A129T、Q82E+P111Q+S123P+Q137K+V159M+V203T+D210H+G237M+S256E+I294E+A129T、Q82E+P111Q+S123P+V159M+K169R+V203T+G237M+T244R+S256E+I294E+A129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的Q82E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+A238S+S256Q+I294E+S402Q、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+N155D+L184M+G237M+S256Q+I294E+S402Q、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+G237M+S256E+I294E+S402Q、R20K+S123P+N155D+K169R+K217T+K240F+S256Q+R267H+I294E+D384G+E489R、R20K+S123P+K169R+K217T+K240F+S256Q+R267H+I294E+Q329E+V431E+E489R、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+K252E+S256Q+I294E+K322E+S402Q、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+K240F+S256Q+I294E+K322E+S402Q、S76E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+G237M+S256Q+I294E+S402Q、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+G237M+T244R+S256Q+I294E+S402Q、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+V219T+K240F+S256Q+I294E+S402Q、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+V251E+S256E+Q271E+I294E+Q329E+S402Q、Q82E+P111Q+S123P+L152P+V159M+K169R+V203T+G237M+T244R+S256E+I294E，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的Q82E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+A238S+S256Q+I294E+S402Q+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+N155D+L184M+G237M+S256Q+I294E+S402Q+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+G237M+S256E+I294E+S402Q+K129T、R20K+S123P+N155D+K169R+K217T+K240F+S256Q+R267H+I294E+D384G+E489R+K129T、R20K+S123P+K169R+K217T+K240F+S256Q+R267H+I294E+Q329E+V431E+E489R+K129T、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+K252E+S256Q+I294E+K322E+S402Q+K129T、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+K240F+S256Q+I294E+K322E+S402Q+K129T、S76E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+G237M+S256Q+I294E+S402Q+K129T、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+G237M+T244R+S256Q+I294E+S402Q+K129T、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+V219T+K240F+S256Q+I294E+S402Q+K129T、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+V251E+S256E+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+K129T、Q82E+P111Q+S123P+L152P+V159M+K169R+V203T+G237M+T244R+S256E+I294E+K129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:2的多肽的Q82E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+A238S+S256Q+I294E+S402Q+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+N155D+L184M+G237M+S256Q+I294E+S402Q+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+G237M+S256E+I294E+S402Q+A129T、R20K+S123P+N155D+K169R+K217T+K240F+S256Q+R267H+I294E+D384G+E489R+A129T、R20K+S123P+K169R+K217T+K240F+S256Q+R267H+I294E+Q329E+V431E+E489R+A129T、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+K252E+S256Q+I294E+K322E+S402Q+A129T、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+K240F+S256Q+I294E+K322E+S402Q+A129T、S76E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+G237M+S256Q+I294E+S402Q+A129T、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+G237M+T244R+S256Q+I294E+S402Q+A129T、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+V219T+K240F+S256Q+I294E+S402Q+A129T、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+V251E+S256E+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+A129T、Q82E+P111Q+S123P+L152P+V159M+K169R+V203T+G237M+T244R+S256E+I294E+A129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的A83E+P111Q+S123P+Q137K+F146D+Q147G+L148P+V159M+L184M+S256Q+I294E+S402Q、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+S256Q+I294E+N298D+V300L+S402Q、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+L184M+K240L+S256Q+I294E+S402Q、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+G237M+S256Q+I294E+S402Q+K488T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V203T+K240F+S256Q+I294E+S402Q、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+K240F+S256Q+I294E+S402Q+E489R、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+F165H+L184M+S256Q+I294E+S402Q+V431E、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+Q271E+I294E+Q329E+S402Q、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+D210H+K240F+S256E+I294E+S402Q+K488T、S76E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+V203T+G237M+S256Q+I294E+S402Q、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+G237M+S256Q+I294E+P339S+S402Q+K488T、S76E+Q82E+P111Q+S123P+V159M+V203T+G237M+S256E+I294E+S474E+E489R+P492D、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+A238T+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+S256E+Q271D+I294E+Q329E+S402Q、Q82E+P111Q+S123P+Q137K+V159M+K169R+A189G+V203T+G237M+T244R+S256E+I294E、Q82E+P111Q+S123P+Q137K+V159M+K169R+V203T+G237M+T244R+V251E+S256E+I294E、Q82E+P111Q+S123P+V159M+K169R+V203T+G237M+T244R+S256E+I294E+N383Q+V431E、S76E+Q82E+S94R+P111Q+S123+V159M+K169R+V203T+G237M+T244R+S256E+I294E，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ IDNO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的A83E+P111Q+S123P+Q137K+F146D+Q147G+L148P+V159M+L184M+S256Q+I294E+S402Q+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+S256Q+I294E+N298D+V300L+S402Q+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+L184M+K240L+S256Q+I294E+S402Q+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+G237M+S256Q+I294E+S402Q+K488T+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V203T+K240F+S256Q+I294E+S402Q+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+K240F+S256Q+I294E+S402Q+E489R+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+F165H+L184M+S256Q+I294E+S402Q+V431E+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+Q271E+I294E+Q329E+S402Q、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+D210H+K240F+S256E+I294E+S402Q+K488T+K129T、S76E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+V203T+G237M+S256Q+I294E+S402Q+K129T、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+G237M+S256Q+I294E+P339S+S402Q+K488T+K129T、S76E+Q82E+P111Q+S123P+V159M+V203T+G237M+S256E+I294E+S474E+E489R+P492D+K129T、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+A238T+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+S256E+Q271D+I294E+Q329E+S402Q+K129T、Q82E+P111Q+S123P+Q137K+V159M+K169R+A189G+V203T+G237M+T244R+S256E+I294E+K129T、Q82E+P111Q+S123P+Q137K+V159M+K169R+V203T+G237M+T244R+V251E+S256E+I294E+K129T、Q82E+P111Q+S123P+V159M+K169R+V203T+G237M+T244R+S256E+I294E+N383Q+V431E+K129T、S76E+Q82E+S94R+P111Q+S123+V159M+K169R+V203T+G237M+T244R+S256E+I294E+K129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:2的多肽的A83E+P111Q+S123P+Q137K+F146D+Q147G+L148P+V159M+L184M+S256Q+I294E+S402Q+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+S256Q+I294E+N298D+V300L+S402Q+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+L184M+K240L+S256Q+I294E+S402Q+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+G237M+S256Q+I294E+S402Q+K488T+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V203T+K240F+S256Q+I294E+S402Q+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+K240F+S256Q+I294E+S402Q+E489R+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+F165H+L184M+S256Q+I294E+S402Q+V431E+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+Q271E+I294E+Q329E+S402Q、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+D210H+K240F+S256E+I294E+S402Q+K488T+A129T、S76E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+V203T+G237M+S256Q+I294E+S402Q+A129T、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+G237M+S256Q+I294E+P339S+S402Q+K488T+A129T、S76E+Q82E+P111Q+S123P+V159M+V203T+G237M+S256E+I294E+S474E+E489R+P492D+A129T、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+A238T+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+S256E+Q271D+I294E+Q329E+S402Q+A129T、Q82E+P111Q+S123P+Q137K+V159M+K169R+A189G+V203T+G237M+T244R+S256E+I294E+A129T、Q82E+P111Q+S123P+Q137K+V159M+K169R+V203T+G237M+T244R+V251E+S256E+I294E+A129T、Q82E+P111Q+S123P+V159M+K169R+V203T+G237M+T244R+S256E+I294E+N383Q+V431E+A129T、S76E+Q82E+S94R+P111Q+S123+V159M+K169R+V203T+G237M+T244R+S256E+I294E+A129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+K252E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q、Q82E+P111Q+S123P+V159M+K169R+V203T+G237M+T244R+S256E+Q271E+I294E+Q329E+N383E、Q82E+P111Q+S123P+Q137K+N155D+V159M+K169R+V203T+G237M+T244R+S256E+I294E+K445E、K8E+A41L+S76E+Q82E+P111Q+S123P+V159M+K169R+V203T+G237M+T244R+S256E+I294E，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+K252E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+K129T、Q82E+P111Q+S123P+V159M+K169R+V203T+G237M+T244R+S256E+Q271E+I294E+Q329E+N383E+K129T、Q82E+P111Q+S123P+Q137K+N155D+V159M+K169R+V203T+G237M+T244R+S256E+I294E+K445E+K129T、K8E+A41L+S76E+Q82E+P111Q+S123P+V159M+K169R+V203T+G237M+T244R+S256E+I294E+K129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:2的多肽的A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+K252E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+A129T、Q82E+P111Q+S123P+V159M+K169R+V203T+G237M+T244R+S256E+Q271E+I294E+Q329E+N383E+A129T、Q82E+P111Q+S123P+Q137K+N155D+V159M+K169R+V203T+G237M+T244R+S256E+I294E+K445E+A129T、K8E+A41L+S76E+Q82E+P111Q+S123P+V159M+K169R+V203T+G237M+T244R+S256E+I294E+A129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的S76E+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+L184M+K252E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V203T+A238S+S256E+Q271E+I294E+Q329E+S402Q、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+V431E、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+K347E+S402Q、A83E+P111Q+S123P+Q137K+L152P+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+V431E、K8E+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+N155D+L184M+G237M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q、A41L+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383Q+S402Q、R20K+S76E+Q82E+P111Q+S123P+V159M+K169R+V203T+G237M+T244R+S256E+I294E+Q329E+P492D、S76E+Q82E+P111Q+S123P+V159M+K169R+V203T+G237M+T244R+S256E+I294E+Q329E+E489R+P492D，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的S76E+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+L184M+K252E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V203T+A238S+S256E+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+V431E+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+K347E+S402Q+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+L152P+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+V431E+K129T、K8E+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+N155D+L184M+G237M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+K129T、A41L+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383Q+S402Q+K129T、R20K+S76E+Q82E+P111Q+S123P+V159M+K169R+V203T+G237M+T244R+S256E+I294E+Q329E+P492D+K129T、S76E+Q82E+P111Q+S123P+V159M+K169R+V203T+G237M+T244R+S256E+I294E+Q329E+E489R+P492D+K129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:2的多肽的S76E+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K169R+L184M+K252E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V203T+A238S+S256E+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+V431E+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+K347E+S402Q+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+L152P+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+V431E+A129T、K8E+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+N155D+L184M+G237M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+A129T、A41L+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383Q+S402Q+A129T、R20K+S76E+Q82E+P111Q+S123P+V159M+K169R+V203T+G237M+T244R+S256E+I294E+Q329E+P492D+A129T、S76E+Q82E+P111Q+S123P+V159M+K169R+V203T+G237M+T244R+S256E+I294E+Q329E+E489R+P492D+A129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V219T+G237M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q、S76E+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V203T+A238S+S256E+Q271E+I294E+Q329E+S402Q、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+D210H+T244R+K252E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+T244E+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+V431E、K8E+A83E+S94R+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+V431E+K445E、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+D210H+K240F+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q、A41L+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+K240F+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q、Q82E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V203T+D210H+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q、A41L+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383Q+S402Q、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+T244R+W248V+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V203T+T244R+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+R295K+N298D+Q329E+S402Q+L447M、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+S256E+Q271E+I294E+Q329E+P339S+N383E+S402Q+V431E，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V219T+G237M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+K129T、S76E+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V203T+A238S+S256E+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+D210H+T244R+K252E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+T244E+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+V431E+K129T、K8E+A83E+S94R+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+V431E+K445E+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+D210H+K240F+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+K129T、A41L+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+K240F+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+K129T、Q82E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V203T+D210H+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+K129T、A41L+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383Q+S402Q+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+T244R+W248V+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V203T+T244R+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+R295K+N298D+Q329E+S402Q+L447M+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+S256E+Q271E+I294E+Q329E+P339S+N383E+S402Q+V431E+K129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:2的多肽的A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V219T+G237M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+A129T、S76E+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V203T+A238S+S256E+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+D210H+T244R+K252E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+T244E+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+V431E+A129T、K8E+A83E+S94R+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+V431E+K445E+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+D210H+K240F+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+A129T、A41L+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+K240F+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+A129T、Q82E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V203T+D210H+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+A129T、A41L+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383Q+S402Q+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+T244R+W248V+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V203T+T244R+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+R295K+N298D+Q329E+S402Q+L447M+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+S256E+Q271E+I294E+Q329E+P339S+N383E+S402Q+V431E+A129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+G237M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+E489R+V505L、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+K252E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383E+S402Q+V431E+A491V、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V203T+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383Q+S402Q+V431E、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V219T+G237M+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+V431E+S474E、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383E+S402Q+V431E+P492D、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+A189G+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383Q+S402Q+V431E、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271D+I294E+Q329E+N383E+S402Q+V431E+A459P、K8R+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+V431E+E489K、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383E+S402Q+V431E+A491V，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+G237M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+E489R+V505L+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+K252E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383E+S402Q+V431E+A491V+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V203T+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383Q+S402Q+V431E+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V219T+G237M+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+V431E+S474E+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383E+S402Q+V431E+P492D+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+A189G+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383Q+S402Q+V431E+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271D+I294E+Q329E+N383E+S402Q+V431E+A459P+K129T、K8R+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+V431E+E489K+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383E+S402Q+V431E+A491V+K129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:2的多肽的A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+G237M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+E489R+V505L+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+K252E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383E+S402Q+V431E+A491V+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V203T+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383Q+S402Q+V431E+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V219T+G237M+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+V431E+S474E+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383E+S402Q+V431E+P492D+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+A189G+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383Q+S402Q+V431E+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271D+I294E+Q329E+N383E+S402Q+V431E+A459P+A129T、K8R+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+V431E+E489K+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383E+S402Q+V431E+A491V+A129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+D210H+G237M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+E489R+P492D、S76E+Q82E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V203T+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383Q+S402Q+V431E、K8E+A41L+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+K394R+S402Q+V431E、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+K347E+N383E+S402Q+V431E+A491V、K8E+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383E+S402Q+V431E+A491V，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+D210H+G237M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+E489R+P492D+K129T、S76E+Q82E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V203T+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383Q+S402Q+V431E+K129T、K8E+A41L+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+K394R+S402Q+V431E+K129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+K347E+N383E+S402Q+V431E+A491V+K129T、K8E+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383E+S402Q+V431E+A491V+K129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:2的多肽的A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+D210H+G237M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+E489R+P492D+A129T、S76E+Q82E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V203T+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383Q+S402Q+V431E+A129T、K8E+A41L+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+K394R+S402Q+V431E+A129T、A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+K347E+N383E+S402Q+V431E+A491V+A129T、K8E+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383E+S402Q+V431E+A491V+A129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V203T+K240F+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383E+S402Q+V431E+A491V、S76E+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+N155D+L184M+G237M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383E+S402Q+V431E+A491V，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:1的多肽的A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V203T+K240F+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383E+S402Q+V431E+A491V+K129T、S76E+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+N155D+L184M+G237M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383E+S402Q+V431E+A491V+K129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含改变：SEQID NO:2的多肽的A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V203T+K240F+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383E+S402Q+V431E+A491V+A129T、S76E+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+N155D+L184M+G237M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383E+S402Q+V431E+A491V+A129T，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
在一个方面，变体包含选自由以下组成的组的改变或改变的组合：
SEQ ID NO:1的多肽的K394R、
S127D、
R211K、
S123P、
K488T、
S256Q、
K476R、
K217R、
Q271D、
S214Q、
L447M、
K482R、
K169R、
L152D、
R267K、
L152E、
D210R、
L152*、
R295K、
S127W、
E126P、
S127H、
T104G、
Q125K、
Q125P、
Q125S、
D395P、
G103V、
T104R、
Q125L、
A41E、
A41R、
Q125F、
S127L、
A226K、
A41L、
A226D、
A118K+S123P、
N155D、
Q137K、
N155E、
Q147K、
R276K、
V203T、
S94R、
K18E、
K252E、
V219T、
R267C+T427V、
Q243E、
K414E、
K445E、
R20K+S123P、
S123P+K206R、
R20K+S123P+R211K、
S123P+K347R、
S123P+K347R+K353R+D395P、
S123P+D395P、
S123P+S127D、
V159M、
K392E、
E489R+P492D、
Y503L+V505L、
Y503V+V505L、
L184M+V219A、
S123P+R211K+K217R+S256Q+K488T、
Q82E、
S76E、
A83E、
Q271E、
S256E、
I294E、
Q329E、
V431E、
R20K+Y105E+S123P+Q147K+R267K、
R20K+Y105E+S123P+R267K、
R20K+S123P+K220R、
R20K+Y105E+S123P+N136D、
R20K+S123P+Q137K+Q147K、
Y105E+A118K+S123P+K206R+K220R+R267K、
P111Q+S123P+V159M、
S94R+P111Q+S123P+V159M、
K87E+P111Q+S123P+V159M+S402Q、
K87E+P111Q+S123P+V159M、
P111Q+S123P+V159M+S402Q、
K87E+P111Q+V159M+I294Q+I473T、
K8E+P111Q+V159M、
K8E+K18E+P111Q+V159M+K206E、
R20K+P111Q+S123P+S127D+V159M、
P111Q+Q147K+V159M+K220R、S94R+P111Q+V159M、P111Q+V159M+K206E+I294Q、P111Q+V159M+K206E+I294Q+K347E、P111Q+Q137K+Q147K+V159M+K252E、P111Q+Q137K+Q147K+N155D+K252E、P111Q+Q137K+L152D+V203T+K217R、P111Q+Q137K+V159M、K8E+P111Q+N155D+V159M、A41L+P111Q+S123P+Q147K+V159M+V203T、A41L+P111Q+S123P+Q147K+V159M+K217R、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+S256Q+S402Q、P111Q+S123P+Q147K+V159M+I294Q+S402Q、A41L+P111Q+Q137K+V159M+N168R+Q271D+K488T、P111Q+Q137K+Q147K+V159M+V203T+K217R、P111Q+Q147K+V159M、P111Q+Q137K+Q147K+V159M、P111Q+S123P+Q137K+V159M+K488T、P111Q+S123P+Q137K+V159M+S256Q、K87E+P111Q+L152D+V159M+V203T+I294Q、K87E+P111Q+Q147K+L152D+V159M、R20K+A83E+S123P+K220R+S256E、R20K+S76E+A83E+S123P+K220R+K252E、R20K+A83E+S123P+K220R+K252E、R20K+A42V+S123P+K220R+K252E+I294E、R20K+Q82E+S123P+Q147K+K220R、R20K+A83E+S123P+K220R+S256Q、R20K+Q82E+S123P+N155D+K220R、R20K+S123P+V203T+K220R+K252E、R20K+S123P+K220R+I294E、R20K+A83E+S123P+V203T+K220R+K252E、R20K+A41L+Q82E+S123P+K220R、
R20K+S123P+N155D+K220R、
R20K+A42V+S76E+S123P+K220R、
R20K+S123P+V203T+V219T、
R20K+A42V+A83E+S123P+K220R、
R20K+A42V+S76E+S123P+V203T+K220R、
A83E+P111Q+S123P+V159M+S256E+I294E、
Q82E+P111Q+S123P+V159M+S256E+I294E、
Q82E+P111Q+S123P+Q147K+V159M+I294E、
S76E+Q82E+K87E+P111Q+S123P+V159M+V203T、
A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+S256Q+S402Q、
P111Q+S123P+Q137K+Q147K+N155D+S256Q+A289T+N302H、
S76E+P111Q+S123P+Q137E+Q147K+V159M+K252E+S256Q+S402Q、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+K252E+S256Q+S402Q、
P111Q+S123P+Q137K+Q147K+N155D+S256Q+I294E+S402Q、
Q82E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+A238S+S256Q+I294E+S402Q、
A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+S256Q+I294E+S402Q、
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A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383E+S402Q+V431E+P492D、
S76E+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+N155D+L184M+G237M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383E+S402Q+V431E+A491V、
A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+A189G+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383Q+S402Q+V431E、
K8E+A41L+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+K394R+S402Q+V431E、
A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271D+I294E+Q329E+N383E+S402Q+V431E+A459P、
A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+K347E+N383E+S402Q+V431E+A491V、
K8E+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383E+S402Q+V431E+A491V、
K8R+A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+S402Q+V431E+E489K、
A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383E+S402Q+V431E+A491V，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
变体可以进一步包含在一个或多个其他位置处的取代，例如在WO 2009/147210中描述的那些。
氨基酸改变可以具有微小性质，即，不会显著地影响蛋白质的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或***；典型地为1-30个氨基酸的小缺失；小的氨基末端或羧基末端延伸，如氨基末端的甲硫氨酸残基；多达20-25个残基的小接头肽；或小的延伸，其通过改变净电荷或另一功能(如聚组氨酸段、抗原表位或结合结构域)来促进纯化。
保守取代的实例在下组之内：碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸和组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸)、芳族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)、以及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸和甲硫氨酸)。一般不会改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且例如由H.Neurath和R.L.Hill,1979,于The Proteins[蛋白质],Academic Press[学术出版社],纽约中描述。常见取代为Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu、和Asp/Gly。
可替代地，这些氨基酸变化具有使多肽的物理化学特性改变的这样一种性质。例如，氨基酸变化可以改善多肽的热稳定性、改变底物特异性、改变最适pH，等等。
可以根据本领域中已知的程序，如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham和Wells,1989,Science[科学]244:1081-1085)来鉴定多肽中的必需氨基酸。在后一项技术中，在该分子中的每一残基处引入单个丙氨酸突变，并且对所得突变体分子的木葡聚糖酶活性进行测试以鉴定对于该分子的活性至关重要的氨基酸残基。还参见，Hilton等人,1996,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]271:4699-4708。酶或其他生物学相互作用的活性位点还可通过对结构的物理分析来确定，如由下述技术确定：核磁共振、晶体学(crystallography)、电子衍射、或光亲和标记，连同对推定的接触位点氨基酸进行突变。参见例如，de Vos等人,1992,Science[科学]255:306-312；Smith等人,1992,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]224:899-904；Wlodaver等人,1992,FEBS Lett.[欧洲生化学会联合会快报]309:59-64。也可以从与相关多肽的比对推断必需氨基酸的身份并且描述于例如WO 2009/147210中。
这些变体可以由445至524个氨基酸，例如471至524个氨基酸、497至524个氨基酸组成。
在实施例中，与亲本酶相比，该变体具有改善的洗涤性能。
在实施例中，与亲本酶相比，该变体具有改善的酶洗涤益处。
在实施例中，与亲本酶相比，该变体具有改善的稳定性。
在实施例中，与亲本酶相比，该变体具有改善的热稳定性。
在实施例中，与亲本酶相比，该变体具有改善的洗涤剂内储存稳定性。
在实施例中，与亲本酶相比，该变体具有改善的白度。
亲本木葡聚糖酶
亲本木葡聚糖酶可以是与SEQ ID NO:1的多肽具有至少60％序列同一性的多肽。
在一方面，亲本与SEQ ID NO:1的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，该亲本具有木葡聚糖酶活性。在一个方面，亲本的氨基酸序列与SEQ ID NO:1的多肽相差多达10个氨基酸，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另一方面，亲本包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或由其组成。在另一方面，亲本是SEQ ID NO:1的多肽的、含有至少445个氨基酸残基例如至少471个氨基酸残基以及至少497个氨基酸残基的片段。
在一方面，亲本与SEQ ID NO:2的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，该亲本具有木葡聚糖酶活性。在一个方面，亲本的氨基酸序列与SEQ ID NO:2的多肽相差多达10个氨基酸，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另一方面，亲本包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或由其组成。在另一方面，亲本是SEQ ID NO:2的多肽的、含有至少445个氨基酸残基例如至少471个氨基酸残基以及至少497个氨基酸残基的片段。
在一方面，亲本与SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，该亲本具有木葡聚糖酶活性。在一个方面，亲本的氨基酸序列与SEQ ID NO:3的多肽相差多达10个氨基酸，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另一方面，亲本包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或由其组成。在另一方面，亲本是SEQ ID NO:3的多肽的、含有至少445个氨基酸残基例如至少471个氨基酸残基以及至少497个氨基酸残基的片段。
亲本多肽可以是杂合多肽，其中一种多肽的区域在另一种多肽的区域的N-末端或C-末端处融合。
亲本可以是融合多肽或可切割的融合多肽，其中另一种多肽在本发明的多肽的N-末端或C-末端处融合。通过将编码另一种多肽的多核苷酸与本发明的多核苷酸融合来产生融合多肽。用于产生融合多肽的技术是本领域已知的，并且包括连接编码多肽的编码序列使得它们符合读框，而且融合多肽的表达处于一个或多个相同的启动子和终止子的控制之下。还可以使用内含肽技术构建融合多肽，其中在翻译后产生融合多肽(Cooper等人,1993,EMBO J.[欧洲分子生物学学会杂志]12:2575-2583；Dawson等人,1994,Science[科学]266:776-779)。
融合多肽可进一步包含两个多肽之间的切割位点。在融合蛋白分泌之时，位点被切割，从而释放出这两种多肽。切割位点的实例包括但不限于在以下文献中披露的位点：Martin等人,2003,J.Ind.Microbiol.Biotechnol.[工业微生物学与生物技术杂志]3:568-576；Svetina等人,2000,J.Biotechnol.[生物技术杂志]76:245-251；Rasmussen-Wilson等人,1997,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]63:3488-3493；Ward等人,1995,Biotechnology[生物技术]13:498-503；和Contreras等人,1991,Biotechnology[生物技术]9:378-381；Eaton等人,1986,Biochemistry[生物化学]25:505-512；Collins-Racie等人,1995,Biotechnology[生物技术]13:982-987；Carter等人,1989,Proteins:Structure,Function,and Genetics[蛋白质：结构、功能以及遗传学]6:240-248；以及Stevens,2003,Drug Discovery World[药物发现世界]4:35-48。
亲本可以从任何属的微生物中获得。出于本发明的目的，如本文中与给定来源结合所用的术语“从……获得”应当意指由多核苷酸编码的亲本是由该来源或由其中已经***来自该来源的多核苷酸的菌株产生的。在一个方面，亲本是胞外分泌的。
在另外的方面，该亲本木葡聚糖酶可为细菌木葡聚糖酶。例如，木葡聚糖酶可以是***多肽，例如芽孢杆菌属(Bacillus)，优选来自芽孢杆菌属/乳杆菌属(Lactobacillus)亚门，优选来自类芽孢杆菌属(Paenibacillus)的物种、尤其是多粘类芽孢杆菌，例如多粘类芽孢杆菌ATCC 832，优选该木葡聚糖酶是家族44木葡聚糖酶，例如，如WO 01/62903中所述。
应理解的是，对于前述物种，本发明涵盖完全和不完全阶段以及其他分类学等同物，例如无性型，而与它们已知的物种名无关。本领域的技术人员会容易地识别适当等同物的身份。
这些物种的菌株可容易地在许多培养物保藏中心为公众所获得，这些保藏中心例如美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)、德国微生物菌种保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH，DSMZ)、荷兰菌种保藏中心(Centraalbureau Voor Schimmelcultures，CBS)、和美国农业研究服务专利培养物保藏中心北方地区研究中心(Agricultural Research Service PatentCulture Collection,Northern Regional Research Center，NRRL)。
可以使用上述探针，从其他来源(包括从自然界(例如，土壤、堆肥、水等)分离的微生物或从天然材料(例如，土壤、堆肥、水等)直接获得的DNA样品)中鉴定亲本并获得亲本。用于从天然生境中直接分离微生物和DNA的技术是本领域熟知的。然后可以通过类似地筛选另一种微生物的基因组DNA或cDNA文库或混合DNA样品来获得编码亲本的多核苷酸。一旦已经用一种或多种探针检测到编码亲本的多核苷酸，则可以通过利用对本领域的普通技术人员来说已知的技术来分离或克隆该多核苷酸(参见例如，Sambrook等人,1989,同上)。
变体的制备
本发明还涉及用于获得具有木葡聚糖酶活性的变体的方法，这些方法包括：(a)在对应于选自由以下组成的组的位置的一个或多个位置处向亲本木葡聚糖酶引入改变：SEQID NO:1的多肽的111、123、159、256、294、8、18、20、41、42、76、82、83、87、94、103、104、105、121、125、126、127、136、137、146、147、148、152、153、155、165、168、169、177、184、189、203、206、210、211、214、217、219、220、226、237、238、240、243、244、248、251、252、267、271、276、289、295、298、300、302、322、329、339、347、347、353、383、384、392、394、395、402、414、427、431、445、447、459、473、474、476、482、488、489、491、492、503和505，其中该变体具有木葡聚糖酶活性；以及(b)回收该变体。
可以使用本领域已知的任何诱变程序，如定点诱变、合成基因构建、半合成基因构建、随机诱变、改组等制备变体。
定点诱变是在编码该亲本的多核苷酸中的一个或多个限定位点处引入一个或多个(例如，几个)突变的技术。
通过涉及使用含有所希望的突变的寡核苷酸引物的PCR可以体外实现定点诱变。也可以通过盒式诱变进行体外定点诱变，该盒式诱变涉及由限制酶在包含编码亲本的多核苷酸的质粒中的位点处切割并且随后将含有突变的寡核苷酸连接在多核苷酸中。通常，消化质粒和寡核苷酸的限制酶是相同的，从而允许质粒和***物的粘性末端彼此连接。参见例如，Scherer和Davis,1979,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]76:4949-4955；和Barton等人,1990,Nucleic Acids Res.[核酸研究]18:7349-4966。
还可以通过本领域中已知的方法在体内实现定点诱变。参见例如，美国专利申请公开号2004/0171154；Storici等人,2001,Nature Biotechnol.[自然生物技术]19:773-776；Kren等人,1998,Nat.Med.[自然医学]4:285-290；以及Calissano和Macino,1996,Fungal Genet.Newslett.[真菌遗传学时事通讯]43:15-16。
可以在本发明中使用任何定点诱变程序。存在可用于制备变体的许多可商购的试剂盒。
合成基因构建需要设计的多核苷酸分子的体外合成以编码目的多肽。基因合成可以利用多种技术来进行，例如由Tian等人(2004,Nature[自然]432:1050-1054)所述的基于多路微芯片的技术、以及其中在光可编程的微流芯片上合成并组装寡核苷酸的类似技术。
可以使用已知的诱变、重组和/或改组方法，随后进行相关的筛选程序做出单氨基酸或多氨基酸取代、缺失和/或***并对其进行测试，该相关的筛选程序例如由Reidhaar-Olson和Sauer,1988,Science[科学]241:53-57；Bowie和Sauer,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]86:2152-2156；WO 95/17413；或WO 95/22625披露的那些。其他可以使用的方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如Lowman等人,1991,Biochemistry[生物化学]30:10832-10837；美国专利号5,223,409；WO 92/06204)以及区域定向诱变(Derbyshire等人,1986,Gene[基因]46:145；Ner等人,1988,DNA 7:127)。
诱变/改组方法可以与高通量、自动化的筛选方法组合以检测由宿主细胞表达的克隆的、诱变的多肽的活性(Ness等人,1999,Nature Biotechnology[自然生物技术]17:893-896)。可从宿主细胞回收编码活性多肽的诱变的DNA分子，并使用本领域的标准方法快速测序。这些方法允许快速确定多肽中各个氨基酸残基的重要性。
通过组合合成基因构建、和/或定点诱变、和/或随机诱变、和/或改组的多方面来实现半合成基因构建。半合成构建典型地是利用合成的多核苷酸片段的过程与PCR技术组合。因此，基因的限定区域可以从头合成，而其他区域可以使用位点特异性诱变引物来扩增，而还有其他区域可以进行易错PCR或非易错PCR扩增。然后可以对多核苷酸子序列进行改组。
多核苷酸
本发明还涉及编码本发明的变体的多核苷酸。
核酸构建体
本发明还涉及包含编码本发明的变体的、可操作地连接至一个或多个控制序列上的多核苷酸的核酸构建体，该一个或多个控制序列在与控制序列相容的条件下指导编码序列在合适的宿主细胞中表达。
可以按多种方式来操纵多核苷酸以提供变体的表达。取决于表达载体，在多核苷酸***载体之前对其进行操纵可能是希望的或必需的。用于利用重组DNA方法修饰多核苷酸的技术是本领域熟知的。
控制序列可以是启动子，即多核苷酸，其由宿主细胞识别用于表达该多核苷酸。启动子含有介导变体的表达的转录控制序列。启动子可以是在宿主细胞中显示转录活性的任何多核苷酸，包括突变启动子、截短启动子和杂合启动子，并且可以从编码与宿主细胞同源或异源的胞外或胞内多肽的基因获得。
用于在细菌宿主细胞中指导本发明核酸构建体的转录的合适启动子的实例是从以下基因中获得的启动子：解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)α-淀粉酶基因(amyQ)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyL)、地衣芽孢杆菌青霉素酶基因(penP)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)产麦芽糖淀粉酶基因(amyM)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)果聚糖蔗糖酶基因(sacB)、枯草芽孢杆菌xylA和xylB基因、苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)cryIIIA基因(Agaisse和Lereclus,1994,MolecularMicrobiology[分子微生物学]13:97-107)、大肠杆菌(E.coli)lac操纵子、大肠杆菌trc启动子(Egon等人,1988,Gene[基因]69:301-315)、天蓝链霉菌(Streptomyces coelicolor)琼脂水解酶基因(dagA)和原核β-内酰胺酶基因(Villa-Kamaroff等人,1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]75:3727-3731)以及tac启动子(DeBoer等人,1983,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]80:21-25)。另外的启动子描述于Gilbert等人,1980,Scientific American[科学美国人]242:74-94的“Useful proteinsfrom recombinant bacteria[来自重组细菌的有用蛋白质]”；和Sambrook等人,1989,同上。串联启动子的实例披露于WO 99/43835中。
用于指导本发明的核酸构建体在丝状真菌宿主细胞中的转录的合适启动子的实例是从以下酶的基因获得的启动子：构巢曲霉(Aspergillus nidulans)乙酰胺酶、黑曲霉(Aspergillus niger)中性α-淀粉酶、黑曲霉酸稳定性α-淀粉酶、黑曲霉或泡盛曲霉(Aspergillus awamori)葡糖淀粉酶(glaA)、米曲霉(Aspergillus oryzae)TAKA淀粉酶、米曲霉碱性蛋白酶、米曲霉丙糖磷酸异构酶、尖孢镰孢(Fusarium oxysporum)胰蛋白酶样蛋白酶(WO 96/00787)、镶片镰孢(Fusarium venenatum)淀粉葡糖苷酶(WO 00/56900)、镶片镰孢Daria(WO 00/56900)、镶片镰孢Quinn(WO 00/56900)、米黑根毛霉(Rhizomucormiehei)脂肪酶、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶IV、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶II、里氏木霉β-木糖苷酶，以及NA2-tpi启动子(一种修饰的启动子，其来自曲霉属(Aspergillus)中性α-淀粉酶基因，其中未翻译的前导序列由曲霉属丙糖磷酸异构酶基因的未翻译的前导序列替代；非限制性实例包括来自黑曲霉中性α-淀粉酶基因的经修饰的启动子，其中已经用来自构巢曲霉或米曲霉丙糖磷酸异构酶基因的未翻译的前导序列替代未翻译的前导序列)；及其突变启动子、截短启动子和杂合启动子。
在酵母宿主中，有用的启动子从以下的基因中获得：酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)烯醇酶(ENO-1)、酿酒酵母半乳糖激酶(GAL1)、酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH1、ADH2/GAP)、酿酒酵母丙糖磷酸异构酶(TPI)、酿酒酵母金属硫蛋白(CUP1)、以及酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶。酵母宿主细胞的其他有用的启动子由Romanos等人,1992,Yeast[酵母]8:423-488描述。
控制序列也可为由宿主细胞识别以终止转录的转录终止子。终止子序列可操作地连接至编码该变体的多核苷酸的3’-末端。可以使用在宿主细胞中有功能的任何终止子。
细菌宿主细胞的优选终止子从以下的基因中获得：克劳氏芽孢杆菌(Bacillusclausii)碱性蛋白酶(aprH)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶(amyL)、和大肠杆菌核糖体RNA(rrnB)。
丝状真菌宿主细胞的优选终止子从以下的基因中获得：构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶、以及尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶。
酵母宿主细胞的优选终止子从以下的基因中获得：酿酒酵母烯醇酶、酿酒酵母细胞色素C(CYC1)以及酿酒酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶。酵母宿主细胞的其他有用的终止子由Romanos等人(1992,同上)描述。
控制序列还可以是启动子下游和基因的编码序列上游的mRNA稳定子区域，其增加该基因的表达。
合适的mRNA稳定子区域的实例从以下中获得：苏云金芽孢杆菌cryIIIA基因(WO94/25612)和枯草芽孢杆菌SP82基因(Hue等人,1995,Journal of Bacteriology[细菌学杂志]177:3465-3471)。
控制序列也可以是前导序列，即对宿主细胞翻译很重要的mRNA的非翻译区域。前导序列可操作地连接至编码该变体的多核苷酸的5’-末端。可以使用在宿主细胞中有功能的任何前导序列。
丝状真菌宿主细胞的优选前导序列从以下的基因中获得：米曲霉TAKA淀粉酶和构巢曲霉丙糖磷酸异构酶。
酵母宿主细胞的合适的前导序列从以下的基因中获得：酿酒酵母烯醇酶(ENO-1)、酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶、酿酒酵母α-因子和酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH2/GAP)。
控制序列还可以是多腺苷酸化序列，即被可操作地连接至变体编码序列的3’-末端并且当转录时由宿主细胞识别为将聚腺苷酸残基添加到转录的mRNA上的信号的序列。可以使用在宿主细胞中有功能的任何多腺苷酸化序列。
用于丝状真菌宿主细胞的优选多腺苷酸化序列从以下酶的基因中获得：构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶以及尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶。
酵母宿主细胞的有用的多腺苷酸化序列由Guo和Sherman,1995,Mol.CellularBiol.[分子细胞生物学]15:5983-5990描述。
控制序列还可以是信号肽编码区域，该编码区域编码与变体的N-末端连接的信号肽，并且指导该变体进入细胞的分泌途径。多核苷酸的编码序列的5'-端可以固有地含有信号肽编码序列，该信号肽编码序列在翻译阅读框中与编码该变体的编码序列的区段天然地连接在一起。可替代地，编码序列的5'-端可以含有对编码序列而言外源的信号肽编码序列。在编码序列不天然地含有信号肽编码序列的情况下，可能需要外源信号肽编码序列。可替代地，外源信号肽编码序列可以简单地替代天然信号肽编码序列，以便增强变体的分泌。然而，可以使用指导表达的变体进入宿主细胞的分泌途径的任何信号肽编码序列。
细菌宿主细胞的有效信号肽编码序列是从以下的基因中获得的信号肽编码序列：芽孢杆菌NCIB 11837产麦芽糖淀粉酶、地衣芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶、地衣芽孢杆菌β-内酰胺酶、嗜热脂肪芽孢杆菌α-淀粉酶、嗜热脂肪芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT、nprS、nprM)和枯草芽孢杆菌prsA。另外的信号肽由Simonen和Palva,1993,Microbiological Reviews[微生物评论]57:109-137描述。
丝状真菌宿主细胞的有效信号肽编码序列是从以下的基因中获得的信号肽编码序列：黑曲霉中性淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、米曲霉TAKA淀粉酶、特异腐质霉(Humicolainsolens)纤维素酶、特异腐质霉内切葡聚糖酶V、疏棉状腐质霉(Humicola lanuginosa)脂肪酶和米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶。
用于酵母宿主细胞的有用的信号肽从酿酒酵母α-因子和酿酒酵母转化酶的基因中获得。其他的有用的信号肽编码序列由Romanos等人(1992，同上)描述。
控制序列还可以是编码位于变体的N-末端处的前肽的前肽编码序列。所得的多肽被称为前体酶(proenzyme)或多肽原(或在一些情况下被称为酶原(zymogen))。多肽原通常是无活性的并且可通过催化切割或自身催化切割来自多肽原的前肽而转化为活性多肽。前肽编码序列可以从以下的基因中获得：枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprE)、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT)、嗜热毁丝霉(Myceliophthora thermophila)漆酶(WO 95/33836)、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶和酿酒酵母α-因子。
在信号肽序列和前肽序列二者都存在的情况下，该前肽序列定位成紧邻该变体的N-末端并且该信号肽序列定位成紧邻该前肽序列的N-末端。
还令人希望的可以是添加相对于宿主细胞的生长来调节变体的表达的调节序列。调节***的实例是响应于化学或物理刺激而引起基因的表达开启或关闭的那些，包括调节化合物的存在。原核***中的调节***包括lac、tac和trp操纵子***。在酵母中，可以使用ADH2***或GAL1***。在丝状真菌中，可以使用黑曲霉葡糖淀粉酶启动子、米曲霉TAKAα-淀粉酶启动子、以及米曲霉葡糖淀粉酶启动子。调节序列的其他实例是使基因扩增的那些序列。在真核***中，这些调节序列包括在甲氨蝶呤存在下扩增的二氢叶酸还原酶基因以及用重金属扩增的金属硫蛋白基因。在这些情况下，编码变体的多核苷酸将与调节序列可操作地连接。
表达载体
本发明还涉及包含编码本发明的变体的多核苷酸、启动子、以及转录和翻译终止信号的重组表达载体。各种核苷酸和控制序列可以连接在一起以产生重组表达载体，该重组表达载体可以包括一个或多个合宜的限制位点以允许在这样的位点处***或取代编码变体的多核苷酸。可替代地，可以通过将多核苷酸或包含该多核苷酸的核酸构建体***用于表达的适当载体中而表达该多核苷酸。在产生表达载体时，编码序列如此位于载体中，使得编码序列与用于表达的适当控制序列可操作地连接。
重组表达载体可以是可以方便地经受重组DNA程序并且可以引起多核苷酸表达的任何载体(例如，质粒或病毒)。载体的选择将典型地取决于载体与待引入载体的宿主细胞的相容性。载体可以是直链或闭合环状质粒。
载体可以是自主复制载体，即作为染色体外实体存在的载体，其复制独立于染色体复制，例如质粒、染色体外元件、微染色体或人工染色体。载体可以含有用于确保自我复制的任何工具。可替代地，载体可以是这样的载体，当它引入宿主细胞中时整合入基因组中并与其中已整合了它的一个或多个染色体一起复制。此外，可以使用单个的载体或质粒或两个或更多个载体或质粒，其共同含有待引入宿主细胞基因组的总DNA，或可以使用转座子。
载体优选地含有允许方便地选择转化细胞、转染细胞、转导细胞等细胞的一个或多个选择性标记。选择性标记是一种基因，其产物提供了杀生物剂抗性或病毒抗性、对重金属抗性、对营养缺陷型的原养型等。
细菌选择性标记的实例是地衣芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌dal基因、或赋予抗生素抗性(如氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、新霉素、壮观霉素、或四环素抗性)的标记。酵母宿主细胞的合适的标记包括但不限于：ADE2、HIS3、LEU2、LYS2、MET3、TRP1和URA3。用于在丝状真菌宿主细胞中使用的选择性标记包括但不限于amdS(乙酰胺酶)、argB(鸟氨酸氨甲酰基转移酶)、bar(草胺膦乙酰转移酶)、hph(潮霉素磷酸转移酶)、niaD(硝酸还原酶)、pyrG(乳清苷-5’-磷酸脱羧酶)、sC(硫酸腺苷基转移酶)、以及trpC(邻氨基苯甲酸合酶)，连同其等同物。优选的用于在曲霉属细胞中使用的是构巢曲霉或米曲霉amdS和pyrG基因以及吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)bar基因。
载体优选地含有允许载体整合到宿主细胞的基因组中或载体在细胞中独立于基因组自主复制的一个或多个元件。
为了整合到宿主细胞基因组中，载体可以依赖于编码变体的多核苷酸序列或用于借助同源或非同源重组整合到基因组中的任何其他载体元件。可替代地，载体可以含有用于指导通过同源重组而整合到宿主细胞基因组中的一个或多个染色体中的一个或多个精确位置处的另外的多核苷酸。为了提高在精确位置处整合的可能性，整合元件应当含有足够数目的核酸，例如100至10,000个碱基对、400至10,000个碱基对、和800至10,000个碱基对，这些核酸与对应的靶序列具有高度序列同一性以增强同源重组的概率。整合元件可以是与宿主细胞基因组内的靶序列同源的任何序列。此外，整合元件可以是非编码或编码的多核苷酸。另一方面，载体可以通过非同源重组整合到宿主细胞的基因组中。
为了自主复制，载体可以进一步包含复制起点，该复制起点使得载体在讨论中的宿主细胞中自主复制成为可能。复制起点可以是在细胞中发挥作用的介导自主复制的任何质粒复制子。术语“复制起点”或“质粒复制子”意指使质粒或载体能够在体内复制的多核苷酸。
细菌复制起点的实例是允许在大肠杆菌中复制的质粒pBR322、pUC19、pACYC177、和pACYC184的复制起点，以及允许在芽孢杆菌属中复制的质粒pUB110、pE194、pTA1060、和pAMβ1的复制起点。
用于酵母宿主细胞中的复制起点的实例是2微米复制起点、ARS1、ARS4、ARS1与CEN3的组合、及ARS4与CEN6的组合。
在丝状真菌细胞中有用的复制起点的实例是AMA1和ANS1(Gems等人,1991,Gene[基因]98:61-67；Cullen等人,1987,Nucleic Acids Res.[核酸研究]15:9163-9175；WO00/24883)。可根据WO 00/24883中披露的方法完成AMA1基因的分离和包含该基因的质粒或载体的构建。
可以将多于一个拷贝的本发明的多核苷酸***宿主细胞中以增加变体的产生。通过将序列的至少一个另外的拷贝整合到宿主细胞基因组中或者通过包括与该多核苷酸一起的可扩增的选择性标记基因可以获得多核苷酸的增加的拷贝数量，其中通过在适当的选择性试剂的存在下培养细胞可以选择含有选择性标记基因的经扩增的拷贝以及由此该多核苷酸的另外的拷贝的细胞。
用于连接上述的元件以构建本发明的重组表达载体的程序是本领域的普通技术人员熟知的(参见例如，Sambrook等人,1989,同上)。
宿主细胞
本发明还涉及重组宿主细胞，这些重组宿主细胞包含编码本发明的变体的、可操作地连接至一个或多个控制序列的多核苷酸，该一个或多个控制序列指导本发明的变体的产生。将包含多核苷酸的构建体或载体引入宿主细胞中，这样使得该构建体或载体作为染色体整合体或作为自我复制的染色体外载体维持，如较早前所述。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间出现的突变而与亲本细胞不相同的任何亲本细胞子代。宿主细胞的选择在很大程度上将取决于编码变体的基因及其来源。
宿主细胞可以是在变体的重组产生中有用的任何细胞，例如原核生物或真核生物。
原核宿主细胞可以是任何革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌。***包括但不限于：芽孢杆菌属、梭菌属(Clostridium)、肠球菌属(Enterococcus)、土芽孢杆菌属(Geobacillus)、乳杆菌属、乳球菌属(Lactococcus)、大洋芽孢杆菌属(Oceanobacillus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、链球菌属(Streptococcus)以及链霉菌属(Streptomyces)。革兰氏阴性细菌包括但不限于：弯曲杆菌属(Campylobacter)、大肠杆菌、黄杆菌属(Flavobacterium)、梭杆菌属(Fusobacterium)、螺杆菌属(Helicobacter)、泥杆菌属(Ilyobacter)、奈瑟氏菌属(Neisseria)、假单胞菌属(Pseudomonas)、沙门氏菌属(Salmonella)以及脲原体属(Ureaplasma)。
细菌宿主细胞可以是任何芽孢杆菌属细胞，包括但不限于嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alkalophilus)、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌(Bacillus brevis)、环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、坚硬芽孢杆菌(Bacillus firmus)、灿烂芽孢杆菌(Bacillus lautus)、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌以及苏云金芽孢杆菌细胞。
细菌宿主细胞还可以是任何链球菌属细胞，包括但不限于类马链球菌(Streptococcus equisimilis)、酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、***链球菌(Streptococcus uberis)以及马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equisubsp.Zooepidemicus)细胞。
细菌宿主细胞还可以是任何链霉菌属细胞，包括但不局限于产色链霉菌(Streptomyces achromogenes)、除虫链霉菌(Streptomyces avermitilis)、天蓝链霉菌、灰色链霉菌(Streptomyces griseus)、以及浅青紫链霉菌(Streptomyces lividans)细胞。
将DNA引入芽孢杆菌属细胞中可以通过以下来实现：原生质体转化(参见例如，Chang和Cohen,1979,Mol.Gen.Genet.[分子遗传学与基因组学]168:111-115)、感受态细胞转化(参见例如，Young和Spizizen,1961,J.Bacteriol.[细菌学杂志]81:823-829；或Dubnau和Davidoff-Abelson,1971,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]56:209-221)、电穿孔(参见例如，Shigekawa和Dower,1988,Biotechniques[生物技术]6:742-751)、或接合(参见例如，Koehler和Thorne,1987,J.Bacteriol.[细菌学杂志]169:5271-5278)。将DNA引入大肠杆菌细胞中可通过以下来实现：原生质体转化(参见例如，Hanahan,1983,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]166:557-580)或电穿孔(参见例如，Dower等人,1988,Nucleic AcidsRes.[核酸研究]16:6127-6145)。将DNA引入链霉菌属细胞中可以通过以下来实现：原生质体转化、电穿孔(参见例如，Gong等人,2004,Folia Microbiol.(Praha)[叶线形微生物学(布拉格)]49:399-405)、接合(参见例如，Mazodier等人,1989,J.Bacteriol.[细菌学杂志]171:3583-3585)、或转导(参见例如，Burke等人,2001,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]98:6289-6294)。将DNA引入假单胞菌属细胞中可以通过以下来实现：电穿孔(参见例如，Choi等人,2006,J.Microbiol.Methods[微生物学方法杂志]64:391-397)或接合(参见例如，Pinedo和Smets,2005,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]71:51-57)。将DNA引入链球菌属细胞中可以通过以下来实现：天然感受态(参见例如，Perry和Kuramitsu,1981,Infect.Immun.[感染与免疫]32:1295-1297)、原生质体转化(参见例如，Catt和Jollick,1991,Microbios[微生物学]68:189-207)、电穿孔(参见例如，Buckley等人,1999,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]65:3800-3804)、或接合(参见例如，Clewell,1981,Microbiol.Rev.[微生物学评论]45:409-436)。然而，可以使用本领域已知的将DNA引入宿主细胞中的任何方法。
宿主细胞还可以是真核生物，如哺乳动物、昆虫、植物或真菌细胞。
宿主细胞可以是真菌细胞。如本文所用的“真菌”包括子囊菌门(Ascomycota)、担子菌门(Basidiomycota)、壶菌门(Chytridiomycota)和接合菌门(Zygomycota)以及卵菌门(Oomycota)和所有有丝***孢子真菌(如由Hawksworth等人在以下文献中所定义：Ainsworth and Bisby’sDictionary of The Fungi[安斯沃思和拜斯比真菌字典],第8版,1995,CAB International[国际应用生物科学中心],University Press[大学出版社],英国剑桥)。
真菌宿主细胞可以为酵母细胞。如本文所用的“酵母”包括产子囊酵母(ascosporogenous yeast)(内孢霉目(Endomycetales))、产担子酵母(basidiosporogenous yeast)和属于半知菌类(Fungi Imperfecti)(芽孢纲(Blastomycetes))的酵母。由于酵母的分类可能在将来变化，出于本发明的目的，酵母应当如Biology and Activities of Yeast[酵母的生物学与活性](Skinner,Passmore和Davenport编辑,Soc.App.Bacteriol.Symposium SeriesNo.9[应用细菌学学会专题论文集系列9],1980)中所述的那样定义。
酵母宿主细胞可以是假丝酵母属(Candida)、汉逊酵母属(Hansenula)、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、毕赤酵母属(Pichia)、酵母属(Saccharomyces)、裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)或耶氏酵母属(Yarrowia)细胞，如乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、卡尔酵母(Saccharomyces carlsbergensis)、酿酒酵母、糖化酵母(Saccharomyces diastaticus)、道格拉氏酵母(Saccharomyces douglasii)、克鲁弗酵母(Saccharomyces kluyveri)、诺地酵母(Saccharomyces norbensis)、卵形酵母(Saccharomyces oviformis)或解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)细胞。
真菌宿主细胞可以是丝状真菌细胞。“丝状真菌”包括真菌门(Eumycota)和卵菌门的亚门的所有丝状形式(如由Hawksworth等人,1995,同上所定义的)。丝状真菌一般的特征在于由几丁质、纤维素、葡聚糖、壳聚糖、甘露聚糖和其他复杂多糖构成的菌丝体壁。营养生长是通过菌丝延伸来进行的，而碳分解代谢是专性需氧的。相反，酵母(如酿酒酵母)的营养生长是通过单细胞菌体的出芽(budding)来进行的，而碳分解代谢可以是发酵性的。
丝状真菌宿主细胞可以是枝顶孢霉属(Acremonium)、曲霉属、短梗霉属(Aureobasidium)、烟管霉属(Bjerkandera)、拟腊菌属(Ceriporiopsis)、金孢子菌属(Chrysosporium)、鬼伞属(Coprinus)、革盖菌属(Coriolus)、隐球菌属(Cryptococcus)、线黑粉菌科(Filibasidium)、镰孢属(Fusarium)、腐质霉属(Humicola)、梨孢菌属(Magnaporthe)、毛霉属(Mucor)、毁丝霉属(Myceliophthora)、新美鞭菌属(Neocallimastix)、脉胞菌属(Neurospora)、拟青霉属(Paecilomyces)、青霉属(Penicillium)、平革菌属(Phanerochaete)、射脉菌属(Phlebia)、瘤胃壶菌属(Piromyces)、侧耳属(Pleurotus)、裂褶菌属(Schizophyllum)、篮状菌属、嗜热子囊菌属(Thermoascus)、梭孢壳属(Thielavia)、弯颈霉属(Tolypocladium)、栓菌属(Trametes)、或木霉属细胞。
例如，丝状真菌宿主细胞可以是泡盛曲霉、臭曲霉(Aspergillus foetidus)、烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、日本曲霉(Aspergillus japonicus)、构巢曲霉、黑曲霉、米曲霉、黑刺烟管菌(Bjerkandera adusta)、干拟蜡菌(Ceriporiopsis aneirina)、卡内基拟蜡菌(Ceriporiopsis caregiea)、浅黄拟蜡孔菌(Ceriporiopsis gilvescens)、潘诺希塔拟蜡菌(Ceriporiopsis pannocinta)、环带拟蜡菌(Ceriporiopsis rivulosa)、微红拟蜡菌(Ceriporiopsis subrufa)、虫拟蜡菌(Ceriporiopsis subvermispora)、狭边金孢子菌(Chrysosporium inops)、嗜角质金孢子菌(Chrysosporium keratinophilum)、卢克诺文思金孢子菌(Chrysosporium lucknowense)、粪状金孢子菌(Chrysosporium merdarium)、毡金孢子菌(Chrysosporium pannicola)、昆士兰金孢子菌(Chrysosporiumqueenslandicum)、热带金孢子菌(Chrysosporium tropicum)、褐薄金孢子菌(Chrysosporium zonatum)、灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)、毛革盖菌(Coriolushirsutus)、杆孢状镰孢(Fusarium bactridioides)、谷类镰孢(Fusarium cerealis)、库威镰孢(Fusarium crookwellense)、大刀镰孢(Fusarium culmorum)、禾谷镰孢(Fusariumgraminearum)、禾赤镰孢(Fusarium graminum)、异孢镰孢(Fusarium heterosporum)、合欢木镰孢(Fusarium negundi)、尖孢镰孢、多枝镰孢(Fusarium reticulatum)、粉红镰孢(Fusarium roseum)、接骨木镰孢(Fusarium sambucinum)、肤色镰孢(Fusariumsarcochroum)、拟分枝孢镰孢(Fusarium sporotrichioides)、硫色镰孢(Fusariumsulphureum)、圆镰孢(Fusarium torulosum)、拟丝孢镰孢(Fusarium torulosum)、镶片镰孢、特异腐质霉、疏棉状腐质霉、米黑毛霉(Mucor miehei)、嗜热毁丝霉、粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)、产紫青霉(Penicillium purpurogenum)、黄孢平革菌(Phanerochaete chrysosporium)、辐射射脉菌(Phlebia radiata)、刺芹侧耳(Pleurotuseryngii)、土生梭孢壳霉(Thielavia terrestris)、长绒毛栓菌(Trametes villosa)、变色栓菌(Trametes versicolor)、哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、康宁木霉(Trichoderma koningii)、长枝木霉(Trichoderma longibrachiatum)、里氏木霉、或绿色木霉细胞。
可以将真菌细胞通过涉及原生质体形成、原生质体转化、以及细胞壁再生的工艺以本身已知的方式转化。用于转化曲霉属和木霉属宿主细胞的合适程序在EP 238023和Yelton等人,1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]81:1470-1474，以及Christensen等人,1988,Bio/Technology[生物/技术]6:1419-1422中描述。用于转化镰孢属物种的合适方法由Malardier等人,1989,Gene[基因]78:147-156和WO 96/00787描述。可以使用由以下文献描述的程序转化酵母：Becker和Guarente,在Abelson,J.N.和Simon,M.I.编辑,Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology[酵母遗传学与分子生物学指南],Methods in Enzymology[酶学方法],第194卷,第182-187页,Academic Press,Inc.[学术出版社有限公司],纽约；Ito等人,1983,J.Bacteriol.[细菌学杂志]153:163；以及Hinnen等人,1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]75:1920。
生产方法
本发明还涉及产生变体的方法，这些方法包括：(a)在适合于该变体的表达的条件下培养本发明的重组宿主细胞；以及任选地(b)回收该变体。
使用本领域已知的方法在适合于产生变体的营养培养基中培养重组宿主细胞。例如，可以通过摇瓶培养，或者在合适的培养基中并在允许变体表达和/或分离的条件下在实验室或工业发酵罐中进行小规模或大规模发酵(包括连续发酵、分批发酵、分批给料发酵或固态发酵)来培养细胞。使用本领域中已知的程序，培养发生在包含碳和氮来源及无机盐的合适的营养培养基中。合适的培养基可从商业供应商获得或可以根据公开的组成(例如，在美国典型培养物保藏中心的目录中)制备。如果变体被分泌到营养培养基中，则变体可以直接从培养基回收。如果变体没有分泌，则它可以从细胞裂解液中回收。
可以使用本领域已知的对变体特异的方法检测该变体。这些检测方法包括但不限于：特异性抗体的使用、酶产物的形成或酶底物的消失。例如，可以使用酶测定来确定变体的活性。
可以使用本领域已知的方法回收变体。例如，可以通过常规程序从营养培养基中回收变体，这些常规程序包括但不限于收集、离心、过滤、提取、喷雾干燥、蒸发或沉淀。
可以通过本领域中已知的多种程序来纯化变体以获得基本上纯的变体，这些程序包括但不限于色谱法(例如，离子交换色谱法、亲和色谱法、疏水作用色谱法、色谱聚焦、以及尺寸排阻色谱法)、电泳程序(例如，制备型等电点聚焦)、差别溶解度(例如，硫酸铵沉淀)、SDS-PAGE或提取(参见例如，Protein Purification[蛋白质纯化]，Janson和Ryden编辑,VCH Publishers[VCH出版社],纽约,1989)。
在可替代的方面，没有回收变体，而是将表达变体的本发明的宿主细胞用作变体的来源。
发酵液配制品或细胞组合物
本发明还涉及包含本发明的变体的发酵液配制品或细胞组合物。发酵液产物进一步包含在发酵工艺中使用的另外的成分，例如像，细胞(包括含有编码本发明的变体的基因的宿主细胞，这些宿主细胞被用于产生目的变体)、细胞碎片、生物质、发酵培养基和/或发酵产物。在一些实施例中，组合物是含有一种或多种有机酸、杀灭的细胞和/或细胞碎片以及培养基的细胞杀灭的全培养液。
如本文所用，术语“发酵液”是指由细胞发酵生产的、不经历或经历最少的回收和/或纯化的制剂。例如，当微生物培养物在使得蛋白质合成(例如，由宿主细胞表达酶)并且将蛋白质分泌到细胞培养基中的碳限制条件下孵育生长到饱和时，生产发酵液。发酵液可以含有在发酵结束时衍生的发酵材料的未分级的或分级的内容物。典型地，发酵液是未分级的并且包含用过的培养基以及例如通过离心去除微生物细胞(例如，丝状真菌细胞)之后存在的细胞碎片。在一些实施例中，发酵液含有用过的细胞培养基、胞外酶以及有活力的和/或无活力的微生物细胞。
在实施例中，发酵液配制品和细胞组合物包含第一有机酸组分(包含至少一种1-5个碳的有机酸和/或其盐)和第二有机酸组分(包含至少一种6个或更多个碳的有机酸和/或其盐)。在特定的实施例中，第一有机酸组分是乙酸、甲酸、丙酸、其盐、或前述两种或更多种的混合物；并且第二有机酸组分是苯甲酸、环己烷羧酸、4-甲基戊酸、苯乙酸、其盐、或前述两种或更多种的混合物。
在一个方面，组合物含有一种或多种有机酸，并且任选地进一步含有杀灭的细胞和/或细胞碎片。在一个实施例中，从细胞杀灭的全培养液中去除这些杀灭的细胞和/或细胞碎片，以提供不含这些组分的组合物。
这些发酵液配制品或细胞组合物可以进一步包含防腐剂和/或抗微生物(例如，抑菌)剂，包括但不限于山梨醇、氯化钠、山梨酸钾、以及本领域已知的其他试剂。
细胞杀灭的全培养液或组合物可以含有在发酵结束时衍生的发酵材料的未分级的内容物。典型地，细胞杀灭的全培养液或组合物含有用过的培养基以及在微生物细胞(例如，丝状真菌细胞)在允许蛋白质合成的碳限制条件下孵育生长到饱和之后存在的细胞碎片。在一些实施例中，细胞杀灭的全培养液或组合物含有用过的细胞培养基、胞外酶和杀灭的丝状真菌细胞。在一些实施例中，可以使用本领域已知的方法来使细胞杀灭的全培养液或组合物中存在的微生物细胞透性化和/或裂解。
如本文所述的全培养液或细胞组合物典型地是液体，但是可以含有不溶性组分，例如杀灭的细胞、细胞碎片、培养基组分和/或一种或多种不溶性酶。在一些实施例中，可以去除不溶性组分以提供澄清的液体组合物。
本发明的全培养液配制品和细胞组合物可以通过WO 90/15861或WO 2010/096673中描述的方法来生产。
组合物
在一个实施例中，本发明涉及清洁组合物，例如洗涤剂组合物，这些洗涤剂组合物包含与一种或多种另外的清洁组合物组分以及优选如本文所述的洗涤剂佐剂成分组合的本发明的木葡聚糖酶变体。另外的组分的选择处于技术人员的能力范围内并且包括常规的成分，包括下文所阐述的示例性非限制性组分。洗涤剂组合物可以用于清洁待清洁的物品，例如纺织品、餐具、和硬表面，用于预处理该物品上的污渍，用于在洗涤周期期间防止、减少或去除污垢的再沉积，用于维持或改善物品的白度。
优选地，这些组合物富含这样的变体。术语“富含”指示该组合物的木葡聚糖酶活性已经增加，例如，以至少1.1的富集因子增加。
这些组合物可以包含本发明的变体作为主要酶组分，例如，单组分组合物。可替代地，这些组合物可以包含多种酶活性，如一种或多种选自由以下组成的组的酶：水解酶、异构酶、连接酶、裂解酶、氧化还原酶、或转移酶，例如，α-半乳糖苷酶、α-葡糖苷酶、氨肽酶、淀粉酶、β-半乳糖苷酶、β-葡糖苷酶、β-木糖苷酶、糖酶、羧肽酶、过氧化氢酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、几丁质酶、角质酶、环糊精葡萄糖基转移酶、脱氧核糖核酸酶、内切葡聚糖酶、酯酶、葡糖淀粉酶、转化酶、漆酶、脂肪酶、甘露糖苷酶、变聚糖酶、核酸酶、氧化酶、果胶分解酶、过氧化物酶、植酸酶、多酚氧化酶、蛋白水解酶、核糖核酸酶、转谷氨酰胺酶、或木聚糖酶。
可以根据本领域中已知的方法来制备组合物，并且组合物可以呈液体或干组合物的形式。可以根据本领域中已知的方法将组合物稳定化。
下面给出了本发明的组合物的优选的用途的实例。组合物的剂量以及使用组合物的其他条件可以基于本领域中已知的方法进行确定。
对于纺织品护理，组分的选择可以包括以下考虑：待清洁的纺织品的类型、污垢的类型和/或程度、进行清洁时的温度以及洗涤剂产品的配制。尽管根据特定的功能性对以下提及的组分由通用标题进行分类，但是这并不被解释为限制，因为如将被普通技术人员所理解，组分可以包含另外的功能性。
在本发明的一个实施例中，组合物(例如洗涤剂组合物)包含如本文所披露的木葡聚糖酶变体和洗涤剂佐剂。
在本发明的一个实施例中，该洗涤剂佐剂成分选自由以下组成的组：表面活性剂、助洗剂、絮凝助剂、螯合试剂、染料转移抑制剂、酶、酶稳定剂、酶抑制剂、催化材料、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、预形成的过酸、聚合的分散试剂、粘土去污剂/抗再沉积剂、增亮剂、抑泡剂、染料、香料、结构弹力剂、织物柔软剂、载剂、水溶助剂、助洗剂和共助洗剂、织物调色剂、消泡剂、分散剂、加工助剂、和/或色素。
洗涤剂佐剂成分可以是表面活性剂。在包含木葡聚糖酶变体的洗涤剂组合物中包括表面活性剂的一个优点是洗涤性能得以改善。在一个实施例中，该洗涤剂佐剂成分是助洗剂或粘土去污剂/抗再沉积剂。
在一个实施例中，洗涤剂佐剂成分是酶。该洗涤剂组合物可以包含一种或多种酶，如以下指定的。该一种或多种酶可以选自由以下组成的组：蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、***糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、核酸酶、和氧化酶。以下描述了适用于本发明洗涤剂组合物的特定酶。
该洗涤剂组合物可以被配制为条，均匀的片剂，以及具有两层或更多层的片剂，具有一个或多个室的袋，规则的或压缩的粉末，颗粒，糊剂，凝胶，或规则的、压缩的或浓缩的液体。该洗涤剂组合物可以是液体洗涤剂、粉末洗涤剂或颗粒洗涤剂。
本发明的木葡聚糖酶适用于在清洁例如衣物洗涤中使用。本发明进一步涉及用于洗涤物品的方法，该方法包括以下步骤：
a.将物品暴露于洗涤液，该洗涤液包含具有木葡聚糖酶活性的变体多肽或含有该多肽的洗涤剂组合物；
b.完成至少一个洗涤周期；以及
c.任选地冲洗该物品，
其中该物品是纺织品。
该液体溶液的pH在1至11的范围内、如在5.5至11的范围内、如在7至9的范围内、在7至8的范围内或在7至8.5的范围内。
洗涤液可以具有在5℃至95℃范围内、或在10℃至80℃范围内、在10℃至70℃范围内、在10℃至60℃范围内、在10℃至50℃范围内、在15℃至40℃范围内或在20℃至30℃范围内的温度。在一个实施例中，洗涤液的温度是30℃。
在本发明的一个实施例中，用于洗涤物品的方法进一步包括在完成洗涤周期后排掉洗涤液或部分洗涤液。然后可以将洗涤液在后续洗涤周期中或在后续冲洗周期中重复使用。在第一个和任选地第二个或第三个洗涤周期期间，可以将该物品暴露于洗涤液。在一个实施例中，在暴露于洗涤液后，冲洗该物品。可以将该物品用水或用包括调理剂的水进行冲洗。本发明进一步涉及根据本发明方法洗涤的物品。可以将本发明的木葡聚糖酶变体添加至洗涤液中。
因此，本发明的一个实施例涉及洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物包含一种或多种阴离子型表面活性剂；选自由以下组成的组的酶：蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、***糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、核酸酶、和氧化酶；以及本发明的木葡聚糖酶变体。
一个实施例进一步涉及用于纺织品的洗涤方法，该方法包括：
a.将纺织品暴露于洗涤液，该洗涤液包含木葡聚糖酶变体或含有这些木葡聚糖酶变体中的至少一种的洗涤剂组合物，
b.完成至少一个洗涤周期；以及
c.任选地冲洗该纺织品，
其中木葡聚糖酶变体在对应于选自由以下组成的组的位置的一个或多个位置处包含改变：SEQ ID NO:1的多肽的111、123、159、256、294、8、18、20、41、42、76、82、83、87、94、103、104、105、121、125、126、127、136、137、146、147、148、152、153、155、165、168、169、177、184、189、203、206、210、211、214、217、219、220、226、237、238、240、243、244、248、251、252、267、271、276、289、295、298、300、302、322、329、339、347、347、353、383、384、392、394、395、402、414、427、431、445、447、459、473、474、476、482、488、489、491、492、503和505。
另一实施例涉及根据本发明方法洗涤的纺织品。
洗涤液中木葡聚糖酶变体的浓度典型地为在0.00004-100ppm酶蛋白范围内，如在0.00008-100范围内、在0.0001-100范围内、在0.0002-100范围内、在0.0004-100范围内、在0.0008-100范围内、在0.001-100ppm酶蛋白的范围内，0.01-100ppm酶蛋白、优选地0.05-50ppm酶蛋白、更优选地0.1-50ppm酶蛋白、更优选地0.1-30ppm酶蛋白、更优选地0.5-20ppm酶蛋白、并且最优选地0.5-10ppm酶蛋白。
可以将本发明的木葡聚糖酶变体以一定量添加到洗涤剂组合物中，该量对应于至少0.002mg的木葡聚糖酶蛋白，例如至少0.004mg的木葡聚糖酶蛋白、至少0.006mg的木葡聚糖酶蛋白、至少0.008mg的木葡聚糖酶蛋白、至少0.01mg的木葡聚糖酶蛋白、至少0.1mg的蛋白，优选地至少1mg的蛋白，更优选地至少10mg的蛋白，甚至更优选地至少15mg的蛋白，最优选地至少20mg的蛋白，并且甚至最优选地至少25mg的蛋白。因此，该洗涤剂组合物可以包含至少0.00008％木葡聚糖酶蛋白，优选地至少0.002％、0.003％、0.004％、0.005％、0.006％、0.008％、0.01％、0.02％、0.03％、0.05％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％或1.0％的木葡聚糖酶蛋白。
包括存在于本发明的洗涤剂中的酶可以使用常规的稳定剂，例如多元醇如丙二醇或甘油、糖或糖醇以及不同的盐如NaCl和KCl进行稳定化。存在于本发明的洗涤剂中的蛋白酶可以使用以下稳定化：乳酸、甲酸、硼酸、或者硼酸衍生物(例如芳族硼酸酯)、或者苯基硼酸衍生物(例如4-甲酰基苯基硼酸)、或者肽醛(例如二肽醛、三肽醛或四肽醛或醛类似物)(或者具有形式B1-B0-R，其中R是H、CH3、CX3、CHX2、或CH2X(X＝卤素)，B0是单个氨基酸残基(优选地具有任选地经取代的脂肪族或芳族侧链)；并且B1由一个或多个氨基酸残基(优选一个、两个或三个)组成，任选地包含N-末端保护基团，或者如在WO 09118375、WO 98/13459中描述的)或者蛋白质类型的蛋白酶抑制剂，例如RASI、BASI、WASI(水稻、大麦和小麦的双功能α-淀粉酶/枯草杆菌蛋白酶抑制剂)或CI2或SSI。可以如在例如WO 92/19709、WO 92/19708和US 6,472,364中描述的配制该组合物。在一些实施例中，本文所使用的这些酶由存在于为这些酶提供这样的离子的成品组合物中的锌(II)、钙(II)和/或镁(II)离子的水溶性来源，连同其他金属离子(例如，钡(II)、钪(II)、铁(II)、锰(II)、铝(III)、锡(II)、钴(II)、铜(II)、镍(II)以及氧钒(IV))稳定化。
在一个实施例中，使用肽醛或酮来稳定该多肽。合适的肽醛描述在WO 94/04651、WO 95/25791、WO 98/13458、WO 98/13459、WO 98/13460、WO 98/13461、WO 98/13462、WO07/141736、WO 07/145963、WO 09/118375、WO 10/055052以及WO 11/036153中。本发明的多肽还可以掺入到WO 97/07202中所披露的洗涤剂配制品中，特此通过引用将其并入。
在另一实施例中，使用苯基硼酸衍生物来稳定多肽，该苯基硼酸衍生物是具有以下式的4-甲酰基苯基硼酸(4-FPBA)：
洗涤剂组合物可以包含两种或更多种稳定剂，例如像选自由以下组成的组的那些：丙二醇、甘油、4-甲酰基苯基硼酸和硼酸盐。
洗涤剂组合物可以包含两种或更多种稳定剂，例如像选自由以下组成的组的那些：丙二醇、甘油、4-甲酰基苯基硼酸和硼酸盐。
优选存在于洗涤剂组合物中的一种或多种稳定剂的量为从0.001至约5.0wt％、从0.01至约2.0wt％、从0.1至约3wt％或从0.5％至约1.5wt％。
表面活性剂
洗涤剂组合物可以包含一种或多种表面活性剂，它们可以是阴离子型和/或阳离子型和/或非离子型和/或半极性型和/或兼性离子型、或其混合物。在特定的实施例中，洗涤剂组合物包括一种或多种非离子型表面活性剂和一种或多种阴离子型表面活性剂的混合物。一种或多种表面活性剂典型地以按重量计从约5％至60％(例如约5％至约50％、或约10％至约50％、或约20％至约50％)的水平存在。基于所希望的清洁应用来选择一种或多种表面活性剂，并且该一种或多种表面活性剂可以包括本领域中已知的任何一种或多种常规表面活性剂。
当被包括在其中时，洗涤剂将通常含有按重量计从约5％至约60％(如从约5％至约40％，包括从约10％至约25％)的一种或多种阴离子型表面活性剂。阴离子型表面活性剂的非限制性实例包括硫酸盐和磺酸盐，特别地，直链烷基苯磺酸盐(LAS)、LAS的异构体、支链烷基苯磺酸盐(BABS)、苯基链烷磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烯烃磺酸盐、链烯烃磺酸盐、链烷-2,3-二基双(硫酸盐)、羟基链烷磺酸盐以及二磺酸盐、烷基硫酸盐(AS)(如十二烷基硫酸钠(SDS))、脂肪醇硫酸盐(FAS)、伯醇硫酸盐(PAS)、醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES，也被称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)、仲链烷磺酸盐(SAS)、石蜡磺酸盐(PS)、酯磺酸盐、磺化的脂肪酸甘油酯、α-磺基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)(包括甲酯磺酸盐(MES))、烷基琥珀酸或烯基琥珀酸、十二烯基/十四烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺基琥珀酸的二酯和单酯或脂肪酸盐(皂)或脂肪酸、及其组合。
当被包括在其中时，洗涤剂将通常含有按重量计从约0.1％至约10％(例如从约0,1％至约5％)的阳离子型表面活性剂。阳离子型表面活性剂的非限制性实例包括烷基二甲基乙醇季胺(ADMEAQ)、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、二甲基二硬脂酰氯化铵(DSDMAC)、以及烷基苄基二甲基铵、烷基季铵化合物、烷氧基化季铵(AQA)化合物、酯季铵、及其组合。
当被包括在其中时，洗涤剂将通常含有按重量计从约0.2％至约60％(例如从约1％至约40％，特别是从约5％至约20％、从约3％至约15％)的非离子型表面活性剂。非离子型表面活性剂的非限制性实例包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化的脂肪醇(PFA)、烷氧基化的脂肪酸烷基酯(例如乙氧基化的和/或丙氧基化的脂肪酸烷基酯)、烷基酚乙氧基化物(APE)、壬基酚乙氧基化物(NPE)、烷基多糖苷(APG)、烷氧基化的胺、脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)、多羟基烷基脂肪酸酰胺、或葡萄糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺(GA)、或脂肪酸葡糖酰胺(FAGA))、甲酯乙氧基化物(MEE)、连同在SPAN和TWEEN商品名下可获得的产品、及其组合。
当被包括在其中时，洗涤剂将通常含有按重量计从约0,1％至约10％的半极性型表面活性剂。半极性型表面活性剂的非限制性实例包括氧化胺(AO)，如烷基二甲胺氧化物、N-(椰油基烷基)-N,N-二甲胺氧化物和N-(牛油-烷基)-N,N-双(2-羟乙基)胺氧化物、及其组合。
当包括在其中时，洗涤剂将通常含有按重量计从约0,1％至约10％的兼性离子型表面活性剂。兼性离子型表面活性剂的非限制性实例包括甜菜碱，如烷基二甲基甜菜碱、磺基甜菜碱、及其组合。
溶剂***：为了溶解表面活性剂和其他洗涤剂成分，需要溶剂***。溶剂典型地是水、醇、多元醇、糖和/或其混合物。优选的溶剂是水、甘油、山梨醇、丙二醇(MPG、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇)、二丙二醇(DPG)、聚乙二醇家族(PEG300-600)、己二醇、肌醇、甘露醇、乙醇、异丙醇、正丁氧基丙氧丙醇、乙醇胺(单乙醇胺、二乙醇胺和三乙醇胺)、蔗糖、右旋糖、葡萄糖、核糖、木糖以及相关的单和二吡喃糖苷和呋喃糖苷。
溶剂***典型地按重量计以总计5％-90％、5％-60％、5％-40％、10％-30％存在。
包在PVA膜中的单位剂量的含水量典型地在1％-15％、2％-12％、3％-10％、5％-10％的范围内。
包在PVA膜中的单位剂量的多元醇含量典型地在5％-50％、10％-40％、或20％-30％的范围内。
在实施例中，表面活性剂是非天然存在的表面活性剂。
水溶助剂
水溶助剂是如下化合物，该化合物在水溶液中溶解疏水化合物(或相反地，在非极性环境中溶解极性物质)。典型地，水溶助剂同时具有亲水的和疏水的特征(如从表面活性剂已知的所谓两亲特性)，然而水溶助剂的分子结构一般并不有利于自发自聚集，参见例如Hodgdon和Kaler(2007),Current Opinion in Colloid&Interface Science[胶体及界面科学新见]12:121-128的综述。水溶助剂并不表现如在形成胶束、薄层或其他明确限定的中间相(meso-phase)的表面活性剂和脂质中所见的临界浓度(高于此浓度则发生自聚集)。相反，许多水溶助剂示出了连续类型的聚集过程，在该过程中聚集物的大小随着浓度增加而增长。然而，许多水溶助剂改变了含有极性和非极性特征的物质的***(包括水、油、表面活性剂、和聚合物的混合物)的相行为、稳定性、和胶体特性。水溶助剂常规地在从药学、个人护理、食品到技术应用的各个产业中使用。水溶助剂在洗涤剂组合物中的使用允许例如更浓的表面活性剂配制品(如在通过去除水而压缩液体洗涤剂的过程中)而不引起不希望的现象，如相分离或高粘度。
洗涤剂可以含有按重量计0-10％，例如按重量计0-5％，例如约0.5％至约5％、或约3％至约5％的水溶助剂。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何水溶助剂。水溶助剂的非限制性实例包括苯磺酸钠、对甲苯磺酸钠(STS)、二甲苯磺酸钠(SXS)、枯烯磺酸钠(SCS)、伞花烃磺酸钠、氧化胺、醇和聚乙二醇醚、羟基萘甲酸钠、羟基萘磺酸钠、乙基己基磺酸钠、及其组合。
助洗剂和共助洗剂
洗涤剂组合物可以含有约0-65％、0-20％、或0.5％-5％的洗涤剂助洗剂或共助洗剂、或其混合物。在餐具洗涤剂中，助洗剂的水平典型地是10％-65％、特别是20％-40％。助洗剂和/或共助洗剂可以特别是与Ca和Mg形成水溶性复合物的螯合试剂。可以利用本领域中已知的用于在衣物洗涤剂中使用的任何助洗剂和/或共助洗剂。非限制性实例是柠檬酸盐、碳酸钠、碳酸氢钠、和柠檬酸钠。膦酸盐的实例包括1-羟基亚乙基-1,1-二膦酸(HEDP，依替膦酸)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTPMP)、乙二胺四(亚甲基膦酸)(EDTMPA)、氨基三(亚甲基膦酸)(ATMP)、次氮基三亚甲基膦酸(NTMP)、2-氨乙基膦酸(AEPn)、二甲基甲基膦酸酯(DMPP)、四亚甲基二胺四(亚甲基膦酸)(TDTMP)、六亚甲基二胺四(亚甲基膦酸)(HDTMP)、膦酸丁烷-三羧酸(PBTC)、N-(膦酰甲基)亚氨基二乙酸(PMIDA)、2-羧乙基膦酸(CEPA)、2-羟基膦酰羧酸(HPAA)、和氨基-三-(亚甲基-膦酸)(AMP)。L-谷氨酸N,N-二乙酸四钠盐(GLDA)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)。助洗剂的非限制性实例包括聚丙烯酸酯的均聚物或其共聚物，例如聚(丙烯酸)(PAA)或共聚(丙烯酸/马来酸)(PAA/PMA)。另外的非限制性实例包括柠檬酸盐、螯合剂(例如氨基羧酸盐、氨基聚羧酸盐、和膦酸盐)、以及烷基琥珀酸、或烯基琥珀酸。另外的特别的实例包括2,2’,2”-次氮基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、亚氨基二丁二酸(IDS)、乙二胺-N,N’-二琥珀酸(EDDS)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)、1-羟基乙烷-1,1-二膦酸(HEDP)、乙二胺四(亚甲基膦酸)(EDTMPA)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTMPA或DTPMPA)、N-(2-羟乙基)亚氨基二乙酸(EDG)、天冬氨酸-N-单乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N,N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-单丙酸(ASMP)、亚氨基二琥珀酸(IDA)、N-(2-磺甲基)-天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺乙基)-天冬氨酸(SEAS)、N-(2-磺甲基)-谷氨酸(SMGL)、N-(2-磺乙基)-谷氨酸(SEGL)、N-甲基亚氨基二乙酸(MIDA)、α-丙氨酸-N,N-二乙酸(α-ALDA)、丝氨酸-N,N-二乙酸(SEDA)、异丝氨酸-N,N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N,N-二乙酸(PHDA)、邻氨基苯甲酸-N,N-二乙酸(ANDA)、磺胺酸-N,N-二乙酸(SLDA)、牛磺酸-N,N-二乙酸(TUDA)以及磺甲基-N,N-二乙酸(SMDA)、N-(2-羟乙基)-亚乙基二胺-N,N’,N”-三乙酸盐(HEDTA)、二乙醇甘氨酸(DEG)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTPMP)、氨基三(亚甲基膦酸)(ATMP)、及其组合和盐。另外的示例性助洗剂和/或共助洗剂描述于例如WO 09/102854、US 5977053中
在实施例中，助洗剂或共助洗剂是非天然存在的助洗剂或共助洗剂。
漂白***
洗涤剂可以含有按重量计0-30％，例如约1％至约20％的漂白***。可以利用本领域中已知的用于在衣物洗涤剂中使用的任何漂白***。合适的漂白***组分包括漂白催化剂、光漂白剂、漂白活化剂、过氧化氢源如过碳酸钠、过硼酸钠和过氧化氢―脲(1:1)、预成型过酸、及其混合物。合适的预成型过酸包括但不限于过氧羧酸及盐、二过氧二羧酸、过亚氨酸(perimidic acid)及盐、过氧单硫酸及盐(例如过硫酸氢钾(Oxone(R)))、及其混合物。漂白***的非限制性实例包括与过酸形成漂白活化剂组合的基于过氧化物的漂白***，其可以包含例如无机盐，包括碱金属盐如过硼酸盐的钠盐(通常为单水合物或四水合物)、过碳酸盐、过硫酸盐、过磷酸盐、过硅酸盐。术语漂白活化剂在本文中意指与过氧化氢反应以经由过水解形成过酸的化合物。由此形成的过酸构成活化的漂白剂。本文待使用的合适的漂白活化剂包括属于酯、酰胺、酰亚胺或酸酐类别的那些。合适的实例是四乙酰乙二胺(TAED)、4-[(3,5,5-三甲基己酰基)氧基]苯-1-磺酸钠(ISONOBS)、4-(十二酰基氧基)苯-1-磺酸盐(LOBS)、4-(癸酰基氧基)苯-1-磺酸盐、4-(癸酰基氧基)苯甲酸盐(DOBS或DOBA)、4-(壬酰氧基)苯-1-磺酸盐(NOBS)和/或披露于WO 98/17767中的那些。目的漂白活化剂的特定的家族披露于EP 624154中并且该家族中特别优选的是乙酰柠檬酸三乙酯(ATC)。ATC或短链甘油三酸酯(像三醋汀)具有以下优点，它是环境友好的。此外，乙酰柠檬酸三乙酯和三醋汀在储存时在产品中具有良好的水解稳定性，并且是高效的漂白活化剂。最后，ATC是多功能的，因为在过水解反应中释放的柠檬酸盐可以作为助洗剂起作用。可替代地，漂白***可以包含例如酰胺、酰亚胺、或砜类型的过氧酸。漂白***还可以包含如6-(苯二甲酰亚氨基)过氧己酸(PAP)的过酸。漂白***还可以包括漂白催化剂。在一些实施例中，漂白组分可以是选自由具有下式的有机催化剂组成的组的有机催化剂：
(iii)及其混合物，
其中每个R1独立地是含有从9至24个碳的支链烷基基团或含有从11至24个碳的直链烷基基团，优选地每个R1独立地是含有从9至18个碳的支链烷基基团或含有从11至18个碳的直链烷基基团，更优选地每个R1独立地选自由以下组成的组：2-丙基庚基、2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、异壬基、异癸基、异十三烷基以及异十五烷基。其他示例性漂白***描述于例如WO 2007/087258、WO 2007/087244、WO 2007/087259、EP 1867708(维生素K)以及WO 2007/087242中。合适的光漂白剂可以例如是磺化的酞菁锌或酞菁铝。
优选地，除了漂白催化剂，特别是有机漂白催化剂以外，漂白组分还包含过酸源。过酸源可以选自(a)预形成的过酸；(b)过碳酸盐、过硼酸盐或过硫酸盐(过氧化氢源)，优选与漂白活化剂组合；和(c)过水解酶以及酯，用于在纺织品或硬表面处理步骤中在水的存在下原位形成过酸。
在实施例中，漂白***是非天然存在的漂白***。
聚合物
洗涤剂可以含有按重量计0-10％(例如0.5％-5％、2％-5％、0.5％-2％、或0.2％-1％)的聚合物。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何聚合物。该聚合物可以作为如以上提及的共助洗剂起作用，或可以提供抗再沉积、纤维保护、污垢释放、染料转移抑制、油脂清洁、和/或消泡特性。一些聚合物可以具有多于一种的以上提及的特性和/或多于一种的下文提及的基序。示例性聚合物包括(羧甲基)纤维素(CMC)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚(乙烯吡咯烷酮)(PVP)、聚(乙二醇)或聚(环氧乙烷)(PEG)、乙氧基化的聚(亚乙基亚胺)、羧甲基菊粉(CMI)、和聚羧酸酯(如PAA、PAA/PMA、聚-天冬氨酸、和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物)、疏水修饰的CMC(HM-CMC)和硅酮、对苯二甲酸和低聚乙二醇的共聚物、聚(对苯二甲酸乙二酯)和聚(氧乙烯对苯二甲酸酯)的共聚物(PET-POET)、PVP、聚(乙烯基咪唑)(PVI)、聚(乙烯吡啶-N-氧化物)(PVPO或PVPNO)以及聚乙烯吡咯烷酮-乙烯基咪唑(PVPVI)。另外的示例性聚合物包括磺化的聚羧酸酯、聚环氧乙烷和聚环氧丙烷(PEO-PPO)、以及乙氧基硫酸二季铵盐。其他示例性聚合物披露于例如WO 2006/130575中。还考虑了以上提及的聚合物的盐。
在实施例中，聚合物是非天然存在的聚合物。
织物调色剂
本发明的洗涤剂组合物还可以包括织物调色剂，如染料或色素，当配制在洗涤剂组合物中时，当所述织物与包含所述洗涤剂组合物的洗涤液接触时织物调色剂可以沉积在织物上，并且因此通过可见光的吸收/反射改变所述织物的色彩。荧光增白剂发射至少一些可见光。相反，当织物调色剂吸收至少部分可见光谱时，它们改变表面的色彩。合适的织物调色剂包括染料和染料-粘土缀合物，并且还可以包括色素。合适的染料包括小分子染料和聚合物染料。合适的小分子染料包括选自由落入颜色索引(Colour Index，C.I.)分类的以下染料组成的组的小分子染料：直接蓝、直接红、直接紫、酸性蓝、酸性红、酸性紫、碱性蓝、碱性紫和碱性红、或其混合物，例如于WO 2005/03274、WO 2005/03275、WO 2005/03276和EP1876226中所描述的(特此通过引用将其并入)。洗涤剂组合物优选地包含从约0.00003wt％至约0.2wt％、从约0.00008wt％至约0.05wt％、或甚至从约0.0001wt％至约0.04wt％的织物调色剂。该组合物可以包含从0.0001wt％至0.2wt％的织物调色剂，当该组合物呈单位剂量袋的形式时，这可以是尤其优选的。合适的调色剂还披露于例如WO 2007/087257和WO2007/087243中。
另外的酶
洗涤剂添加剂连同洗涤剂组合物可包含一种或多种[另外的]酶，例如水解酶(EC3.-.-.-)，例如作用在酯键上的水解酶(EC 3.1.-.-)，糖苷酶(EC 3.2.-.-)，和作用在肽键上的水解酶(EC 3.4.-.-)，氧化还原酶(EC 1.-.-.-)，例如漆酶(EC 1.10.-.-)或过氧化物酶(EC 1.11.-.-)，或裂解酶(EC 4.-.-.-)，例如碳-氧裂解酶(EC 4.2.-.-)。在特定实施例中，该洗涤剂组合物可包含一种或多种[另外的]酶，例如蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、***糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、核酸酶、氧化酶(例如漆酶)、和/或过氧化物酶。
通常，选择的一种或多种酶的特性应当与所选择的洗涤剂相容(即，最适pH，与其他酶成分或非酶成分的相容性等)，并且该一种或多种酶应当以有效量存在。
纤维素酶
合适的纤维素酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。合适的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、腐质霉属、镰孢属、梭孢壳霉属、枝顶孢霉属的纤维素酶，例如披露于US 4,435,307、US 5,648,263、US 5,691,178、US 5,776,757以及WO 89/09259中的由特异腐质霉、嗜热毁丝霉和尖孢镰孢产生的真菌纤维素酶。
尤其合适的纤维素酶是碱性纤维素酶或中性纤维素酶，这些纤维素酶提供或维持白度并预防再沉积或具有颜色护理益处。此类纤维素酶的实例是描述于EP 0 495 257、EP0 531 372、WO 96/11262、WO 96/29397、WO 98/08940中的纤维素酶。其他实例是例如描述于WO 94/07998、EP 0 531 315、US 5,457,046、US 5,686,593、US 5,763,254、WO 95/24471、WO 98/12307以及WO 99/001544中的那些纤维素酶变体。
其他纤维素酶是具有以下序列的内切-β-1,4-葡聚糖酶，该序列与WO 2002/099091的SEQ ID NO:2的位置1至位置773的氨基酸序列具有至少97％的同一性，或具有以下序列的家族44木葡聚糖酶，该序列与WO 2001/062903的SEQ ID NO:2的位置40-559具有至少60％的同一性。
可商购的纤维素酶包括CelluzymeTM和CarezymeTM(诺维信公司(Novozymes A/S))、Carezyme PremiumTM(诺维信公司)、CellucleanTM(诺维信公司)、CellucleanClassicTM(诺维信公司)、CellusoftTM(诺维信公司)、WhitezymeTM(诺维信公司)、ClazinaseTM和Puradax HATM(杰能科国际有限公司(Genencor International Inc.))以及KAC-500(B)TM(花王株式会社(Kao Corporation))。
甘露聚糖酶
合适的甘露聚糖酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学或遗传修饰的突变体。甘露聚糖酶可以是家族5或26的碱性甘露聚糖酶。它可以是来自芽孢杆菌属或腐质霉属的野生型，特别是来自黏琼脂芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、耐盐芽孢杆菌(B.halodurans)、克劳氏芽孢杆菌、或特异腐质霉。合适的甘露聚糖酶描述于WO 1999/064619中。可商购的甘露聚糖酶是Mannaway(诺维信公司)。
蛋白酶
合适的蛋白酶包括细菌、真菌、植物、病毒或动物来源的那些，例如植物或微生物来源。优选微生物来源。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。它可以是碱性蛋白酶，如丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶。丝氨酸蛋白酶可以例如是S1家族(如胰蛋白酶)或S8家族(如枯草杆菌蛋白酶)的丝氨酸蛋白酶。金属蛋白酶可以例如是来自例如M4家族的嗜热菌蛋白酶或其他金属蛋白酶，如来自M5、M7或M8家族的那些。
术语“枯草杆菌酶”是指根据Siezen等人,Protein Eng.[蛋白质工程]4(1991)719-737和Siezen等人Protein Science[蛋白质科学]6(1997)501-523的丝氨酸蛋白酶亚组。丝氨酸蛋白酶是特征为在活性位点具有与底物形成共价加合物的丝氨酸的蛋白酶的亚组。枯草杆菌酶可以被划分为6个亚类，即，枯草杆菌蛋白酶家族、嗜热蛋白酶家族、蛋白酶K家族、羊毛硫氨酸抗生素肽酶家族、Kexin家族和Pyrolysin家族。
枯草杆菌酶的实例是衍生自芽孢杆菌属的那些，例如，US 7262042和WO 09/021867中所述的迟缓芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和吉氏芽孢杆菌(Bacillus gibsonii)；和描述于WO 89/06279中的迟缓枯草杆菌蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶Novo、枯草杆菌蛋白酶Carlsberg、地衣芽孢杆菌、枯草杆菌蛋白酶BPN’、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168以及描述于(WO 93/18140)中的蛋白酶PD138。其他有用的蛋白酶可以是描述于WO 92/175177、WO 01/016285、WO 02/026024和WO 02/016547中的那些。胰蛋白酶样蛋白酶的实例是胰蛋白酶(例如猪或牛来源的)和镰孢属蛋白酶(描述于WO 89/06270、WO 94/25583和WO 05/040372中)，以及衍生自纤维单胞菌(Cellumonas)的胰凝乳蛋白酶(描述于WO 05/052161和WO 05/052146中)。
另外的优选的蛋白酶是来自迟缓芽孢杆菌DSM 5483的碱性蛋白酶(如描述于例如WO 95/23221中)及其变体(描述于WO 92/21760、WO 95/23221、EP 1921147以及EP 1921148中)。
金属蛋白酶的实例是如WO 07/044993(杰能科国际有限公司)中所描述的中性金属蛋白酶，例如衍生自解淀粉芽孢杆菌的那些。
有用的蛋白酶的实例是描述于以下中的变体：WO 92/19729、WO 96/034946、WO98/20115、WO 98/20116、WO 99/011768、WO 01/44452、WO 03/006602、WO 04/03186、WO 04/041979、WO 07/006305、WO 11/036263、WO 11/036264，尤其是在以下位置中的一个或多个处具有取代的变体：3、4、9、15、27、36、57、68、76、87、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、106、118、120、123、128、129、130、160、167、170、194、195、199、205、206、217、218、222、224、232、235、236、245、248、252和274，使用BPN’进行编号。更优选的枯草杆菌酶变体可以包含以下突变：S3T、V4I、S9R、A15T、K27R、*36D、V68A、N76D、N87S,R、*97E、A98S、S99G,D,A、S99AD、S101G,M,R、S103A、V104I,Y,N、S106A、G118V,R、H120D,N、N123S、S128L、P129Q、S130A、G160D、Y167A、R170S、A194P、G195E、V199M、V205I、L217D、N218D、M222S、A232V、K235L、Q236H、Q245R、N252K、T274A(使用BPN’进行编号)。
合适的可商购蛋白酶包括以下列商品名出售的那些：
DuralaseTm、DurazymTm、/>
Ultra、/>
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和Progress/>
(诺维信公司)，以下列商品名出售的那些：/>
Purafect/>
PreferenzTm、Purafect/>
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和
(丹尼斯克/杜邦公司(Danisco/DuPont))、AxapemTM(吉斯特布罗卡德斯公司(Gist-Brocades N.V.))、BLAP(序列示于US 5352604的图29中)及其变体(汉高股份(Henkel AG))以及来自花王株式会社的KAP(嗜碱芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶)。
脂肪酶和角质酶
合适的脂肪酶和角质酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体酶或蛋白质工程化的突变体酶。实例包括来自嗜热丝孢菌属(Thermomyces)，例如来自如EP258068和EP 305216中描述的疏棉状嗜热丝孢菌(T.lanuginosus)(早先命名为疏棉状腐质霉)的脂肪酶；来自腐质霉属，例如特异腐质霉(WO 96/13580)的角质酶；来自假单胞菌属的菌株(这些中的一些现在改名为伯克霍尔德菌属(Burkholderia))，例如产碱假单胞菌(P.alcaligenes)或假产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligenes)(EP 218272)、洋葱假单胞菌(P.cepacia)(EP 331376)、假单胞菌属物种菌株SD705(WO 95/06720和WO 96/27002)、威斯康星假单胞菌(P.wisconsinensis)(WO 96/12012)的脂肪酶；GDSL-型链霉菌属脂肪酶(WO10/065455)；来自稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)的角质酶(WO 10/107560)；来自门多萨假单胞菌(Pseudomonas mendocina)的角质酶(US 5,389,536)；来自褐色嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的脂肪酶(WO 11/084412)；嗜热脂肪土芽孢杆菌(Geobacillusstearothermophilus)脂肪酶(WO 11/084417)；来自枯草芽孢杆菌的脂肪酶(WO 11/084599)；以及来自灰色链霉菌(WO 11/150157)和始旋链霉菌(S.pristinaespiralis)(WO12/137147)的脂肪酶。
其他实例是脂肪酶变体，例如EP 407225、WO 92/05249、WO 94/01541、WO 94/25578、WO 95/14783、WO 95/30744、WO 95/35381、WO 95/22615、WO 96/00292、WO 97/04079、WO 97/07202、WO 00/34450、WO 00/60063、WO 01/92502、WO 07/87508以及WO 09/109500中描述的那些。
优选的商业脂肪酶产品包括LipolaseTM、LipexTM；LipolexTM和LipocleanTM(诺维信公司)、Lumafast(最初来自杰能科公司(Genencor))、以及Lipomax(最初来自吉斯特布罗卡德斯公司)。
仍其他实例是有时称为酰基转移酶或过水解酶的脂肪酶，例如与南极假丝酵母(Candida antarctica)脂肪酶A具有同源性的酰基转移酶(WO 10/111143)、来自耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)的酰基转移酶(WO 05/56782)、来自CE 7家族的过水解酶(WO 09/67279)以及耻垢分枝杆菌过水解酶的变体(特别是来自亨斯迈纺织品染化有限公司(Huntsman Textile Effects Pte Ltd)的商业产品Gentle Power Bleach中所用的S54V变体)(WO 10/100028)。
淀粉酶
可以与本发明的变体一起使用的合适的淀粉酶可以是α-淀粉酶或葡糖淀粉酶并且可以是细菌或真菌来源的。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。淀粉酶包括例如从芽孢杆菌属、例如地衣芽孢杆菌的特定菌株(更详细地描述于GB 1,296,839中)获得的α-淀粉酶。
合适的淀粉酶包括具有WO 95/10603中的SEQ ID NO:2的淀粉酶或与SEQ ID NO:3具有90％序列同一性的其变体。优选的变体描述于WO 94/02597、WO 94/18314、WO 97/43424中以及WO 99/019467的SEQ ID NO:4中，如在以下位置的一个或多个处具有取代的变体：15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408和444。
不同的合适的淀粉酶包括具有WO 02/010355中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或与SEQID NO:6具有90％序列同一性的其变体。SEQ ID NO:6的优选的变体是在位置181和182中具有缺失并且在位置193中具有取代的那些。
其他合适的淀粉酶是包含示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中的衍生自解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:4中的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的残基36-483的杂合α-淀粉酶或具有90％序列同一性的其变体。此杂合α-淀粉酶的优选的变体是在以下位置中的一个或多个位置处具有取代、缺失或***的那些：G48、T49、G107、H156、A181、N190、M197、I201、A209和Q264。包含示于WO 2006/066594的SEQ IDNO:6中的衍生自解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和SEQ ID NO:4的残基36-483的杂合α-淀粉酶的最优选的变体是具有以下取代的那些：
M197T；
H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S；或
G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S。
另外的合适的淀粉酶是具有WO 99/019467中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或与SEQ IDNO:6具有90％序列同一性的其变体。SEQ ID NO:6的优选的变体是在以下位置中的一个或多个位置中具有取代、缺失、或***的那些：R181、G182、H183、G184、N195、I206、E212、E216和K269。特别优选的淀粉酶是在位置R181和G182、或位置H183和G184中具有缺失的那些。
可以使用的另外的淀粉酶是具有WO 96/023873的SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQID NO:2或SEQ ID NO:7的那些或与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7具有90％序列同一性的其变体。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、或SEQ ID NO:7的优选的变体是在以下位置中的一个或多个位置处具有取代、缺失或***的那些：140、181、182、183、184、195、206、212、243、260、269、304和476(使用WO 96/023873的SEQ ID 2进行编号)。更优选的变体是在选自181、182、183、和184的两个位置(如181和182、182和183、或位置183和184)中具有缺失的那些。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:7的最优选的淀粉酶变体是在位置183和184中具有缺失并且在位置140、195、206、243、260、304、和476中的一个或多个位置处具有取代的那些。
可以使用的其他淀粉酶是具有WO 08/153815的SEQ ID NO:2、WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的淀粉酶，或与WO 08/153815的SEQ ID NO:2具有90％序列同一性的其变体，或与WO 01/66712中的SEQ ID NO:10具有90％序列同一性的其变体。WO 01/66712中的SEQID NO:10的优选的变体是在以下位置中的一个或多个位置处具有取代、缺失或***的那些：176、177、178、179、190、201、207、211和264。
另外的合适的淀粉酶是具有WO 09/061380的SEQ ID NO:2的淀粉酶或与SEQ IDNO:2具有90％序列同一性的其变体。SEQ ID NO:2的优选的变体是在以下位置中的一个或多个位置处具有C-末端截短、和/或取代、缺失或***的那些：Q87、Q98、S125、N128、T131、T165、K178、R180、S181、T182、G183、M201、F202、N225、S243、N272、N282、Y305、R309、D319、Q320、Q359、K444和G475。SEQ ID NO:2的更优选的变体是在以下位置中的一个或多个位置处具有取代的那些：Q87E,R、Q98R、S125A、N128C、T131I、T165I、K178L、T182G、M201L、F202Y、N225E,R、N272E,R、S243Q,A,E,D、Y305R、R309A、Q320R、Q359E、K444E以及G475K，和/或在位置R180和/或S181或T182和/或G183中具有缺失的那些。SEQ ID NO:2的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些：
N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；
N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K；
S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；或
S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K，其中这些变体是C-末端截短的，并且任选地进一步包含在位置243处的取代和/或在位置180和/或位置181处的缺失。
其他合适的淀粉酶是具有WO 01/66712中的SEQ ID NO:12的α-淀粉酶或与SEQ IDNO:12具有至少90％序列同一性的变体。优选的淀粉酶变体是在WO 01/66712中的SEQ IDNO:12的以下位置中的一个或多个位置处具有取代、缺失或***的那些：R28、R118、N174；R181、G182、D183、G184、G186、W189、N195、M202、Y298、N299、K302、S303、N306、R310、N314；R320、H324、E345、Y396、R400、W439、R444、N445、K446、Q449、R458、N471、N484。特别优选的淀粉酶包括具有D183和G184的缺失并且具有取代R118K、N195F、R320K和R458K的变体，以及另外在一个或多个选自下组的位置处具有取代的变体：M9、G149、G182、G186、M202、T257、Y295、N299、M323、E345和A339，最优选的是另外地在所有这些位置处具有取代的变体。
其他实例是淀粉酶变体，例如WO 2011/098531、WO 2013/001078和WO 2013/001087中所述的那些。
可商购的淀粉酶是DuramylTM、TermamylTM、FungamylTM、Stainzyme TM、StainzymePlusTM、NatalaseTM和BANTM(来自诺维信公司)、以及RapidaseTM、PurastarTM/EffectenzTM、PoweraseTM、Preferenz S1000TM、Preferenz S110TM和Preferenz S100TM(来自杰能科国际有限公司/杜邦公司)。
过氧化物酶/氧化酶
过氧化物酶是由国际生物化学与分子生物学联合会(IUBMB)命名委员会(Nomenclature Committee of the International Union of Biochemistry andMolecular Biology)所阐述的酶分类EC 1.11.1.7所包含的过氧化物酶，或衍生自其中的表现出过氧化物酶活性的任何片段。
合适的过氧化物酶包括植物、细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自拟鬼伞属(Coprinopsis)，例如来自灰盖拟鬼伞(C.cinerea)的过氧化物酶(EP 179,486)，及其变体，如WO 93/24618、WO95/10602以及WO 98/15257中所述的那些。
过氧化物酶还可以包括卤代过氧化物酶，如氯过氧化物酶、溴过氧化物酶以及表现出氯过氧化物酶或溴过氧化物酶活性的化合物。根据其对卤素离子的特异性将卤代过氧化物酶进行分类。氯过氧化物酶(E.C.1.11.1.10)催化从氯离子形成次氯酸盐。
在实施例中，卤代过氧化物酶是氯过氧化物酶。优选地，卤代过氧化物酶是钒卤代过氧化物酶，即含钒酸盐的卤代过氧化物酶。在本发明的优选的方法中，将含钒酸盐的卤代过氧化物酶与氯离子来源组合。
已从许多不同真菌，特别是从暗色丝孢菌(dematiaceous hyphomycete)真菌组中分离出了卤代过氧化物酶，如卡尔黑霉属(Caldariomyces)(例如，煤卡尔黑霉(C.fumago))、链格孢属(Alternaria)、弯孢属(Curvularia)(例如，疣枝弯孢(C.verruculosa)和不等弯孢(C.inaequalis))、内脐蠕孢属(Drechslera)、细基格孢属(Ulocladium)以及葡萄孢属(Botrytis)。
还已从细菌如假单胞菌属(例如吡咯假单胞菌(P.pyrrocinia))和链霉菌属(例如，金色链霉菌(S.aureofaciens))中分离出了卤代过氧化物酶。
在优选的实施例中，卤代过氧化物酶可衍生自弯孢属物种，特别是疣枝弯孢或不等弯孢，如描述于WO 95/27046中的不等弯孢CBS 102.42；或如描述于WO 97/04102中的疣枝弯孢CBS 147.63或疣枝弯孢CBS 444.70；或衍生自如描述于WO 01/79459中的哈特乐比内脐蠕孢(Drechslera hartlebii)、如描述于WO 01/79458中的盐沼小树状霉(Dendryphiella salina)、如描述于WO 01/79461中的Phaeotrichoconis crotalarie、或如描述于WO 01/79460中的Geniculosporium属物种。
氧化酶特别地可包括由酶分类EC 1.10.3.2所包含的任何漆酶或衍生自其的表现出漆酶活性的任何片段、或表现出类似活性的化合物，如儿茶酚氧化酶(EC 1.10.3.1)、邻氨基苯酚氧化酶(EC 1.10.3.4)或胆红素氧化酶(EC 1.3.3.5)。
优选的漆酶是微生物来源的酶。这些酶可以衍生自植物、细菌或真菌(包括丝状真菌和酵母)。
来自真菌的合适的实例包括可衍生自以下的菌株的漆酶：曲霉属，脉孢菌属(例如，粗糙脉孢菌)，柄孢壳菌属(Podospora)，葡萄孢属，金钱菌属(Collybia)，层孔菌属(Fomes)，香菇属(Lentinus)，侧耳属，栓菌属(例如，长绒毛栓菌和变色栓菌)，丝核菌属(Rhizoctonia)(例如，立枯丝核菌(R.solani))，拟鬼伞属(例如，灰盖拟鬼伞、毛头拟鬼伞(C.comatus)、弗瑞氏拟鬼伞(C.friesii)及褶纹鬼伞(C.plicatilis))，小脆柄菇属(Psathyrella)(例如，白黄小脆柄菇(P.condelleana))，斑褶菇属(Panaeolus)(例如，蝶形斑褶菇(P.papilionaceus))，毁丝霉属(例如，嗜热毁丝霉)，柱顶孢霉属(Schytalidium)(例如，嗜热柱顶孢霉(S.thermophilum))，多孔菌属(Polyporus)(例如，匹斯特斯多孔菌(P.pinsitus))，射脉菌属(例如，辐射射脉菌)(WO 92/01046)或革盖菌属(例如，毛革盖菌)(JP 2238885)。
来自细菌的合适的实例包括可衍生自芽孢杆菌属的菌株的漆酶。
优选的是衍生自拟鬼伞属或毁丝霉属的漆酶；特别是衍生自灰盖拟鬼伞的漆酶，如披露于WO 97/08325中；或衍生自嗜热毁丝霉，如披露于WO 95/33836中。
核酸酶
合适的核酸酶包括脱氧核糖核酸酶(DNA酶)和核糖核酸酶(RNA酶)，它们是分别催化DNA或RNA主链中磷酸二酯键的水解切割从而降解DNA和RNA的任何酶。根据活性的位点有两种主要的分类。外切核酸酶从末端消化核酸。内切核酸酶作用于靶分子中间的区域。核酸酶优选为DNA酶，其优选可获自微生物，优选真菌或细菌。特别地，可获自芽孢杆菌属的物种的DNA酶是优选的；特别地，可获自食物芽孢杆菌(Bacillus cibi)、枯草芽孢杆菌或地衣芽孢杆菌的DNA酶是优选的。这样的DNA酶的实例在WO 2011/098579、WO 2014/087011和WO2017/060475中描述。还特别优选的是可获自曲霉属物种的DNA酶；特别是可获自米曲霉的DNA酶，如WO 2015/155350中描述的DNA酶。
地衣多糖酶
合适的地衣多糖酶(地衣聚糖酶)包括催化β-1,4-糖苷键的水解以产生β-葡聚糖的酶。地衣多糖酶(或地衣聚糖酶)(例如EC 3.2.1.73)水解含有(1,3)-和(1,4)-键的β-D-葡聚糖中的(1,4)-β-D-糖苷键并且可以作用于地衣淀粉和谷类β-D-葡聚糖，但不作用于仅含有1,3-键或1,4-键的β-D-葡聚糖。这样的地衣多糖酶的实例描述于专利申请WO 2017/097866和WO 2017/129754中。
可以通过添加含有一种或多种酶的单独添加剂、或通过添加包含所有这些酶的组合添加剂而将一种或多种洗涤剂酶包括在洗涤剂组合物中。本发明的洗涤剂添加剂，即单独的添加剂或组合的添加剂，可以配制成例如颗粒、液体、浆液等。优选的洗涤剂添加剂配制品是颗粒，特别是无粉尘颗粒；液体，特别是稳定化液体；或浆液。
无粉尘颗粒例如可以如在US 4,106,991和4,661,452中所披露地产生并且可以任选地通过本领域已知的方法包衣。蜡状包衣材料的实例是平均分子量为1000至20000的聚(环氧乙烷)产品(聚乙二醇，PEG)；具有16至50个环氧乙烷单元的乙氧基化壬基酚；乙氧基化脂肪醇，其中该醇含有12至20个碳原子，并且其中存在15至80个环氧乙烷单元；脂肪醇；脂肪酸；以及脂肪酸的甘油单酯、和甘油二酯、和甘油三酯。合适的用于通过流化床技术应用的成膜包衣材料的实例在GB 1483591中给出。液体酶制剂可以例如通过根据已确立的方法添加多元醇(如丙二醇)、糖或糖醇、乳酸或硼酸而稳定化。受保护的酶可以根据EP 238,216中披露的方法来制备。
佐剂材料-还可以利用本领域中已知的用于在衣物洗涤剂中使用的任何洗涤剂组分。其他任选的洗涤剂组分包括抗腐蚀剂、防缩剂、抗污垢再沉积剂、抗皱剂、杀细菌剂、黏合剂、腐蚀抑制剂、崩解剂/崩解试剂、染料、酶稳定剂(包括硼酸、硼酸盐、CMC、和/或多元醇，如丙二醇)、织物调理剂(包括粘土)、填充剂/加工助剂、荧光增白剂/光学增亮剂、增泡剂、泡沫(泡)调节剂、香料、污垢悬浮剂、软化剂、抑泡剂、晦暗抑制剂、以及芯吸剂，单独或组合使用。可以利用本领域中已知的用于在衣物洗涤剂中使用的任何成分。这样的成分的选择完全在技术人员的技术范围内。
分散剂-本发明的洗涤剂组合物还可以含有分散剂。特别地，粉末洗涤剂可以包含分散剂。合适的水溶性有机材料包括均聚的或共聚的酸或其盐，其中聚羧酸包含被不多于两个碳原子彼此分开的至少两个羧基。合适的分散剂例如描述于Powdered Detergents[粉末洗涤剂],Surfactant science series[表面活性剂科学系列]第71卷,Marcel Dekker,Inc.[马塞尔德克尔公司]中。
染料转移抑制剂-本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种染料转移抑制剂。合适的聚合物染料转移抑制剂包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮聚合物、多胺N-氧化物聚合物、N-乙烯吡咯烷酮和N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯噁唑烷酮和聚乙烯咪唑、或其混合物。当在主题组合物中存在时，染料转移抑制剂可以按该组合物的重量计以从约0.0001％至约10％、从约0.01％至约5％或甚至从约0.1％至约3％的水平存在。
荧光增白剂-本发明的洗涤剂组合物还将优选地含有另外的组分，这些组分可以给正清洁的制品着色，例如荧光增白剂或光学增亮剂。当存在时，增亮剂的水平优选为约0.01％至约0.5％。在本发明的组合物中可以使用合适用于在衣物洗涤剂组合物中使用的任何荧光增白剂。最常用的荧光增白剂是属于以下类别的那些：二氨基芪-磺酸衍生物、二芳基吡唑啉衍生物和二苯基-联苯乙烯基衍生物。荧光增白剂的二氨基芪-磺酸衍生类型的实例包括以下的钠盐：4,4′-双-(2-二乙醇氨基-4-苯胺-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2,4-二苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2.2'-二磺酸盐、4,4′-双-(2-苯胺基-4-(N-甲基-N-2-羟基-乙基氨基)-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4′-双-(4-苯基-1,2,3-***-2-基)芪-2,2'-二磺酸盐以及5-(2H-萘并[1,2-d][1,2,3]***-2-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]苯磺酸钠。优选的荧光增白剂是可从汽巴–嘉基股份有限公司(Ciba-Geigy AG)(巴塞尔，瑞士)获得的天来宝(Tinopal)DMS和天来宝CBS。天来宝DMS是4,4'-双-(2-吗啉代-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐的二钠盐。天来宝CBS是2,2'-双-(苯基-苯乙烯基)-二磺酸盐的二钠盐。还优选的是荧光增白剂，其是可商购的Parawhite KX，由印度孟买的派拉蒙矿物与化学品公司(Paramount Minerals andChemicals)供应。合适的用于本发明中使用的其他荧光剂包括1-3-二芳基吡唑啉和7-氨烷基香豆素。
合适的荧光增亮剂水平包括从约0.01、从0.05、从约0.1或甚至从约0.2wt％的较低水平至0.5或甚至0.75wt％的较高水平。
污垢释放聚合物-本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种污垢释放聚合物，这些污垢释放聚合物帮助从织物，例如棉或聚酯基织物上去除污垢，特别是从聚酯基织物上去除疏水污垢。污垢释放聚合物可以例如是基于非离子型或阴离子型对苯二甲酸酯的聚合物、聚乙烯基己内酰胺和相关共聚物、乙烯基接枝共聚物、聚酯聚酰胺，参见例如Powdered Detergents[粉末洗涤剂],Surfactant science series[表面活性剂科学系列],第71卷,第7章，马塞尔·德克尔公司。另一种类型的污垢释放聚合物是包含核芯结构和附接至该核芯结构的多个烷氧基化基团的两亲性烷氧基化油脂清洁聚合物。核芯结构可以包含聚烷基亚胺结构或聚烷醇胺结构，如WO 2009/087523中详细所述的(特此通过引用并入)。此外，随机接枝共聚物是合适的污垢释放聚合物。合适的接枝共聚物更详细地描述于WO 2007/138054、WO 2006/108856以及WO 2006/113314(特此通过引用并入)中。其他污垢释放聚合物是取代的多糖结构，尤其是取代的纤维素结构，如修饰的纤维素衍生物，如EP1867808或WO 2003/040279中所述的那些(特此将二者通过引用并入)。合适的纤维素聚合物包括纤维素、纤维素醚、纤维素酯、纤维素酰胺、及其混合物。合适的纤维素聚合物包括阴离子修饰的纤维素、非离子修饰的纤维素、阳离子修饰的纤维素、兼性离子修饰的纤维素、及其混合物。合适的纤维素聚合物包括甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、酯羧甲基纤维素、及其混合物。
抗再沉积剂-本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种抗再沉积剂，例如羧甲基纤维素(CMC)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚氧乙烯和/或聚乙二醇(PEG)、丙烯酸的均聚物、丙烯酸与马来酸的共聚物以及乙氧基化聚乙亚胺。以上在污垢释放聚合物下所描述的基于纤维素的聚合物还可以作为抗再沉积剂起作用。
流变改性剂-是结构剂或增稠剂，不同于降粘剂。流变改性剂选自由以下组成的组：非聚合物结晶、羟基功能材料、聚合物流变改性剂，它们为液体洗涤剂组合物的水性液体基质赋予剪切稀化特征。可以通过本领域已知的方法修饰和调整洗涤剂的流变学和粘度，例如，如在EP 2169040中所示。
其他合适的佐剂材料包括但不限于防缩剂、抗皱剂、杀细菌剂、黏合剂、载剂、染料、酶稳定剂、织物柔软剂、填充剂、泡沫调节剂、水溶助剂、香料、色素、抑泡剂、溶剂、用于液体洗涤剂的结构剂和/或结构弹力剂。
共颗粒中酶的配制品
木葡聚糖酶变体可以被配制为颗粒，例如，配制为组合一种或多种酶的共颗粒。然后，每种酶将存在于多种颗粒中，这些颗粒确保酶在洗涤剂中的分布更均匀。这还减少了由于不同的粒度而导致的不同酶的物理隔离。用于生产针对洗涤剂工业的多酶共颗粒的方法披露于IP.com披露内容IPCOM000200739D中。
通过使用共颗粒的酶的配制品的另一个实例披露于WO 2013/188331中，其涉及包含以下的洗涤剂组合物：(a)多酶共颗粒；(b)小于10wt沸石(无水的基础上)；和(c)小于10wt磷酸盐(无水的基础上)，其中所述酶共颗粒包含从10至98wt％的水分汇组分(sinkcomponent)，并且该组合物另外还包含从20至80wt％的洗涤剂水分汇组分。WO 2013/188331还涉及处理和/或清洁表面(优选织物表面)的方法，该方法包括以下步骤：(i)将所述表面在水性洗涤液中与如本文要求保护的并且描述的洗涤剂组合物接触，(ii)将该表面冲洗和/或干燥。
洗涤剂产品的配制
本发明的洗涤剂组合物可以呈任何方便形式，例如条，均匀的片剂，具有两层或更多层的片剂，单位剂量产品例如具有一个或多个室的袋，规则的或压缩的粉末，颗粒，糊剂，凝胶，或规则的、压缩的或浓缩的液体。
洗涤剂成分可以通过水可溶的袋中的室彼此物理性地分开。因此，可以避免组分间的不良的储存相互作用。在洗涤溶液中，每个室的不同溶解曲线还可以引起所选择的组分的延迟溶解。
洗涤剂组合物可以采用单位剂量产品的形式。单位剂量产品是不可重复使用的容器中的单一剂量的包装。它越来越多地用于针对衣物的洗涤剂中。洗涤剂单位剂量产品是在单次洗涤中所用的洗涤剂的量的包装(例如，在由水溶性膜制得的袋中)。
袋可以被配置为单一室或多室。它可以具有合适的用于容持组合物的任何形式、形状和材料，例如在与水接触之前，不使组合物从袋中释放出来。该袋由水溶性膜制成，它包含内部体积。可以将所述内部体积分成袋的室。优选的膜是聚合物材料，优选地形成膜或薄片的聚合物。优选的聚合物、共聚物或其衍生物选自聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯，最优选地是聚乙烯醇共聚物以及羟丙基甲基纤维素(HPMC)。优选地，聚合物在膜例如PVA中的水平是至少约60％。优选的平均分子量将典型地是约20,000至约150,000。膜还可以是共混组合物，这些共混组合物包含可水解降解并且可水溶的聚合物共混物，如聚乳酸和聚乙烯醇(已知在贸易参考号M8630下，如由美国印第安纳州的MonoSol有限责任公司(MonoSol LLC)销售)加增塑剂，像甘油、乙二醇、丙二醇、山梨醇、及其混合物。袋可以包含固体衣物清洁组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或由水溶性膜分开的部分组分。用于液体组分的室在组成上可以与含有固体的室不同。参考：(US 2009/0011970 A1)。
可以由水溶性袋中的或片剂的不同层中的室来将洗涤剂成分彼此物理分开。因此，可以避免组分间的不良的储存相互作用。在洗涤溶液中，每个室的不同溶解曲线还可以引起所选择的组分的延迟溶解。
非单位剂量的液体或凝胶洗涤剂可以是水性的，典型地含有按重量计至少20％并且多达95％的水，如多达约70％的水、多达约65％的水、多达约55％的水、多达约45％的水、多达约35％的水。包括但不限于烷醇、胺、二醇、醚、以及多元醇的其他类型的液体可以被包括在水性液体或凝胶中。水性液体或凝胶洗涤剂可以含有从0-30％的有机溶剂。
液体或凝胶洗涤剂可以是非水性的。
通过以下实例进一步描述本发明，这些实例不应理解为对本发明的范围进行限制
实例
材料与方法
核苷酸的PCR、克隆、连接等的一般方法是本领域技术人员熟知的，并且可以例如在以下文献中发现：“Molecular cloning:A laboratory manual[分子克隆：实验室手册]”,Sambrook等人(1989),Cold Spring Harbor lab.[冷泉港实验室],Cold SpringHarbor[冷泉港],纽约州；Ausubel,F.M.等人(编辑)；“Current protocols in MolecularBiology[分子生物学现代方法]”,John Wiley and Sons[约翰威利父子出版公司],(1995)；Harwood,C.R.,和Cutting,S.M.(编辑)；“DNA Cloning:A Practical Approach[DNA克隆：一种实用的方法],第I和II卷”,D.N.Glover编辑(1985)；“OligonucleotideSynthesis[寡核苷酸合成]”,M.J.Gait编辑(1984)；“Nucleic Acid Hybridization[核酸杂交]”,B.D.Hames和S.J.Higgins编辑(1985)；“A Practical Guide To MolecularCloning[分子克隆实用指南]”,B.Perbal,(1984)。
标准洗涤剂A的组合物(液体)
洗涤剂A的组合物(液体)：成分：12％ LAS、11％ AEO Biosoft N25-7(NI)、7％AEOS(SLES)、6％ MPG(单丙二醇)、3％乙醇、3％ TEA、2.75％可可皂、2.75％大豆皂、2％甘油、2％氢氧化钠、2％柠檬酸钠、1％甲酸钠、0.2％ DTMPA和0.2％ PCA、水至100％(所有的百分比都是w/w)。
标准洗涤剂A2的组合物(液体)
洗涤剂A2的组合物(液体)：成分：12％ LAS、12％ AEO Biosoft N25-7(NI)、4％AEOS(SLES)、2％ MPG(单丙二醇)、3％乙醇、2％ TEA(三乙胺)、3％皂、0.5％氢氧化钠、3.9％柠檬酸钠、1.5％ DTMPA,Na7(二亚乙基三胺五(亚甲基)五(膦酸),七钠盐)、0.5％苯氧乙醇、水至100％(所有的百分比都是w/w)。
洗涤测定
Launder-O-Meter(LOM)标准洗涤***
Launder-O-Meter(LOM)是中等规模标准洗涤***，它可以应用于同时测试多达20种不同洗涤条件。LOM基本上是大型温控水浴，具有20个封闭金属烧杯在其中旋转。每个烧杯构成一个小的洗衣机并且在实验期间，每个烧杯将含有待测试的特定洗涤剂/酶***的溶液连同在其上进行测试的弄脏的和未弄脏的织物。机械应力由在水浴中旋转的烧杯并且由包括在烧杯中的金属球实现。
LOM标准洗涤***主要用于欧洲洗涤条件下进行洗涤剂和酶的中等规模测试。在LOM实验中，因素如压载物与污垢的比率和织物与洗涤液的比率可以变化。因此，LOM提供了在小规模实验(如AMSA和微型洗涤)与在前装式洗衣机中的更费时的全规模实验之间的联系。
迷你Launder-O-Meter(迷你LOM)标准洗涤***
迷你LOM是Launder-O-Meter(LOM)的修饰的迷你洗涤***，其是中等规模标准洗涤***，它可以应用于同时测试多达20种不同洗涤条件。LOM基本上是大型温控水浴，具有20个封闭金属烧杯在其中旋转。每个烧杯构成一个小的洗衣机并且在实验期间，每个烧杯将含有待测试的特定洗涤剂/酶***的溶液连同在其上进行测试的弄脏的和未弄脏的织物。机械应力由在水浴中旋转的烧杯并且由包括在烧杯中的金属球实现。
LOM标准洗涤***主要用于欧洲洗涤条件下进行洗涤剂和酶的中等规模测试。在LOM实验中，因素如压载物与污垢的比率和织物与洗涤液的比率可以变化。因此，LOM提供了在小规模实验(如AMSA和微型洗涤)与在前装式洗衣机中的更费时的全规模实验之间的联系。
在迷你LOM中，洗涤是在置于斯图尔特(Stuart)旋转器中的50ml试管中进行的。
Terg-O-Tometer(TOM)洗涤测定
Tergo-To-Meter(TOM)是中等规模标准洗涤***，它可以应用于同时测试12种不同洗涤条件。TOM基本上是大型温控水浴，最多可浸入12个开口金属烧杯。每个烧杯构成一个小的顶装式洗衣机并且在实验期间，每个烧杯将含有特定洗涤剂/酶***的溶液并且在弄脏的和未弄脏的织物上测试其性能。通过旋转搅拌臂获得机械应力，该旋转搅拌臂搅拌在每个烧杯内的液体。因为TOM烧杯没有盖子，所以能够在TOM实验期间收回样品并且在洗涤期间在线测定以获取信息。
TOM标准洗涤***主要用于在US或LA/AP洗涤条件下进行洗涤剂和酶的中等规模测试。在TOM实验中，因素如压载物与污垢的比率和织物与洗涤液的比率可以变化。因此，TOM提供了在小规模实验(如AMSA和微型洗涤)与在顶装式洗衣机中的更费时的全规模实验之间的联系。
设备：水浴具有12个钢制烧杯并且每个烧杯1个旋转臂，每个烧杯的容量是500或1200mL的洗涤剂溶液。温度范围是从5℃至80℃。水浴必须用去离子水充满。转速可以设定为70至120rpm/min。
设定Terg-O-Tometer中的温度并且启动在水浴中旋转。等待温度调整(公差是+/-0,5℃)。应该对所有烧杯进行清洁并且使得烧杯不含先前测试物质的痕迹。
在桶中制备具有所希望的量的洗涤剂、温度和水硬度的洗涤溶液。在磁体搅拌10min期间使洗涤剂溶解。洗涤溶液应在制备后30至60min内使用。
将800ml洗涤溶液添加到TOM烧杯中。将洗涤溶液在120rpm下进行搅拌，并且任选地将一种或多种酶添加到该烧杯中。将小块布样撒到烧杯中并且然后是压载加载物。当将小块布样和压载物添加到烧杯中时开始时间测量。将小块布样洗涤20分钟，此后，停止搅拌。随后，将洗涤加载物从TOM烧杯转移到筛，并且用冷自来水冲洗。将弄脏的小块布样从压载加载物中分离。在流动的水下，将污垢小块布样转移到含冷自来水的5L烧杯，持续5分钟。针对即将到来的灭活，分开存放压载加载物。用手轻轻压出小块布样中的水，并且置于铺有纸的托盘上。将另一张纸置于小块布样的顶部。在小块布样经受分析之前，允许小块布样干燥过夜，例如，使用Color Eye测量颜色强度。
实例1–木葡聚糖酶变体的产生和纯化
本发明的木葡聚糖酶变体通过标准程序制备，简言之：将随机和/或定点突变引入基因，用突变的基因转化枯草芽孢杆菌宿主细胞，对经转化的宿主细胞进行发酵，并从发酵液获得木葡聚糖酶变体。
在摇瓶培养物中在37℃下进行发酵，持续3天，添加300ml TB-Gly培养基(含有13.3g/L胰蛋白胨、26.6g/L酵母提取物(Bacto)和4.4g/L山梨醇(0.44％)，其中添加0.6ml微量元素溶液(含有0.7％ FeCl2.2H2O、0.1％ MnCl2.4H2O、和1.5％ MgSO4.7H2O))进行振荡。
在发酵之后，通过离心(13000x g，20min)收获培养液。然后将上清液通过0.2μ截留中空纤维过滤器(CFP-2-E-4MA)切向流过滤***(GE QuixStandTM台式***)过滤以去除任何宿主细胞。然后通过添加1M(NH4)2SO4提高过滤样品的电导率，然后将该样品施加到在25mM Tris/HCl、1M(NH4)2SO4、1mM CaCl2(pH 8.0)中平衡的Butyl Toyopearl 650M(东曹生命科学(Tosoh Biosciences))上。在用平衡缓冲液洗涤该柱之后，接着在含有25mM Tris/HCl、0.85M(NH4)2SO4、1mM CaCl2(pH 8.0)的洗涤缓冲液中进行另一轮广泛洗涤，通过用25mM Tris/HCl、0.3M NaCl、1mM CaCl2(pH 8.0)等度洗脱来洗脱蛋白质，对应于UV峰的洗脱级分通过Sephadex G25柱(默克公司(Merck))在柱上缓冲液交换至25mM Tris/HCl、1mMCaCl2(pH 8.0)中。然后将经缓冲液交换的样品施加到用25mM Tris/HCl、1mM CaCl2(pH8.0)平衡的Nuvia Q Resin(伯乐公司(Bio-Rad))上，在用平衡缓冲液洗涤该柱后，然后在25mM Tris/HCl、150mM NaCl、1mM CaCl2(pH 8.0)中洗脱蛋白质。收集对应于色谱图上的UV洗脱峰的洗脱级分，汇集为纯化的蛋白质。
实例2–木葡聚糖酶测定
在AZCL-木葡聚糖测定法中测量酶样品(例如，来自纯化)的木葡聚糖酶活性。
将AZCL-木葡聚糖(麦格酶公司)与木葡聚糖酶孵育，并在650nm处测量释放出的蓝色。木葡聚糖酶活性计算为孵育期间蓝色减去适当的空白值之后的增加。
AZCL-木葡聚糖底物：4mg/ml AZCL-木葡聚糖(麦格酶公司)，通过搅拌均匀地悬于0.01％ Triton X-100中。
测定温度： 37℃。
测定缓冲液： 50mM琥珀酸/NaOH，0.01％ Triton X-100，pH 5.0。
将500μl AZCL-木葡聚糖底物悬液在艾本德(Eppendorf)管中置于冰上。添加500μl测定缓冲液，并使混合物变得冰冷。添加20μl酶样品(稀释于0.01％ Triton X-100中)。通过将艾本德管转移至设定为测定温度的艾本德热混合器来启动测定。将管在艾本德热混合器上在最高振摇速率(1400rpm)下孵育15分钟。通过将管转移回冰浴中终止孵育。当管变得冰冷时，将管在冰冷的离心机中短暂离心以沉淀未反应的底物。将200μl上清液转移至微量滴定板中，并读取A650。将缓冲液空白(用20μl 0.01％ Triton X-100替代酶)包括在该测定法中，并将酶样品与缓冲液空白之间的A650差作为木葡聚糖酶活性的量度。
实例3–木葡聚糖酶变体的稳定性
本发明的木葡聚糖酶变体的洗涤剂稳定性通过在42℃或45℃的升高的温度下，在含有蛋白酶的标准A2液体洗涤剂中孵育限定的时间，使它们经受应激后测量它们的活性来评估。在规定的孵育时间后，测定这些应激样品的酶活性，并与在4℃下储存相同时间段的等同样品的活性进行比较。稳定性是从在升高的温度下储存的应激样品中发现的残余活性推断的，表示为在无应激的冷储存样品中发现的活性的百分比。将木葡聚糖酶变体的％残余活性(％RA)结果与在相同条件下测试的亲本木葡聚糖酶的结果进行比较。两个稳定性结果之间的比率为稳定性改进因子(Stability Improvement Factor，SIF)。此外，我们确定了变体半衰期(T1/2)或变体基于它们在洗涤剂中的孵育时间和％残余活性减少至它们的初始活性的50％所需的时间。变体和亲本木葡聚糖酶的半衰期之间的比率是半衰期改进因子(HIF)。在测试条件下，具有SIF或HIF>1的变体比亲本木葡聚糖酶更稳定。优选的变体是在该测试中具有高SIF或HIF的那些。
材料与试剂
(A)稀释缓冲液：含有0.01％ Triton X-100的100mM MOPS，pH 8.0
·通过添加在1L Milli-Q水中的209.06g MOPS(西格玛公司(Sigma)，M1254)并且使用5M NaOH溶液将pH调节至8.0来制备1M MOPS。通过添加10ml Triton-X100(西格玛公司，T8787)、90ml的Milli-Q水制备10％Triton-X100储备溶液。
·为了制备稀释缓冲液，添加100ml的1M MOPS和1ml的10％Triton-X100，并且使用量筒用Milli-Q水将体积补足至1L。
(B)洗涤剂混合物：标准A2洗涤剂(如上)+1％具有以下突变的SEQ ID NO:4的蛋白酶：S9E+N42R+N74D+V199I+Q200L+Y203W+S253D+N255W+L256E
·在玻璃瓶中，添加100ml标准A2洗涤剂和1ml蛋白酶。添加磁力搅拌棒并使其在磁力搅拌器上混合30min或直至其均匀混合。
(C)底物：1.3％ Cellazyme T(1个Cellazyme T片剂/5ml稀释缓冲液)
·Cellazyme T片剂(麦格酶公司，T-CTZ-1000T)是含有天青精(azurine)交联的染色的木葡聚糖的片剂。这是对木葡聚糖酶和内切纤维素酶的测定高度敏感的不溶性底物。在测定当天，通过将20个Cellazyme T片剂添加到在烧杯中的100ml稀释缓冲液中来新鲜制备1.3％底物。添加磁力搅拌棒并使其搅拌10min。
(D)纯化的蛋白质：纯化SEQ ID NO:2的木葡聚糖酶，并将其用作亲本木葡聚糖酶参考。如在上面实例1中，对木葡聚糖酶变体进行发酵并纯化。使用稀释缓冲液将所有蛋白质浓度归一化为200ppm。
(E)消耗品：96孔板(Nunc，260836)、384孔板(Nunc，262160)、50μl MCA96嵌套吸头(Tecan，30038609)、100μl MCA 96嵌套吸头(Tecan，30038614)、200μl MCA 96嵌套吸头(Tecan，30038619)、宽口吸头(爱思进科学公司(Axygen Scientific)，T-205-WB-C)、槽(爱思进科学公司，RES-SW96-HP)
(F)样品孵育器：将应激样品在温控的Liconic孵育器(设定在42℃)中孵育，并且将无应激样品在4℃下在冰箱(三星集团(Samsung))中孵育
(G)用于测定的热混合器：艾本德热混合器C
(H)用于自动化样品处理的Tecan Evo Freedom 150液体处理器和用于测量吸光度的Magellan 200Pro
程序
(A)在96孔板中将100μl归一化的200ppm纯化的蛋白质分配为4个重复。还包括缓冲液空白，其中添加稀释缓冲液，作为4个重复。
(B)将洗涤剂混合物倒入槽中，并在Tecan中在96孔板中分配90μl/孔。
(C)在Tecan中将来自酶板的10μl添加至90μl洗涤剂板中。将板密封并且使用热混合器在1400rpm、25℃下混合30min。
(D)将板在4℃(用于无应激)和42℃(用于应激)下储存15小时。
(E)在测定当天在烧杯中制备新鲜的1.3％ Cellazyme T底物。在磁力搅拌器上连续搅拌的同时，使用宽口吸头在96孔板中分配180μl底物/孔。底物的连续搅拌有助于不溶性底物颗粒保持运动并防止沉降，从而确保底物被均匀地分配在96孔板中。
(F)通过以1400rpm、25℃混合10min使无应激板和应激板达到室温。在Tecan中将20μl无应激和应激样品添加至180μl底物板中，使得最终测定内蛋白质浓度是2ppm。将板放置在热混合器上并在800rpm、25℃下混合45min。
(G)使测定板静置10min，使得未反应的底物颗粒沉降下来，并且然后在Tecan中将50μl上清液从96孔板转移到384孔板中。在590nm处读取吸光度。
数据分析
(A)每种样品有两个OD590测量值：
OD(US)：4℃下，无应激酶样品在590nm处的吸光度
OD(S)：42℃下，应激酶样品在590nm处的吸光度
类似地，缓冲液空白样品在无应激和应激条件下有两个OD590测量值[OD(空白_US)和OD(空白_S)]，这些空白样品具有等同量的洗涤剂但没有酶，这些测量值将在四个空白重复中进行平均。
(B)通过减去缓冲液空白样品的吸光度并且取四个酶重复的平均值来计算酶样品的空白OD值。
BOD(US)＝OD(US)-OD(空白_US)
BOD(S)＝OD(S)-OD(空白_S)
对于每种酶，BOD(US)的下限设定为0.3，并且B(OD)的下限设定为0.05，低于下限时，这些值在噪声范围内并因此不用于任何稳定性计算。
(C)稳定性表示为残余活性百分比(％RA)
(D)稳定性改进因子(SIF)是通过取变体和参考(在此，SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的木葡聚糖酶)的残余活性的比率来计算的
(E)基于残余活性和在洗涤剂中样品孵育的总持续时间(Tdet，在此为15小时)计算酶半衰期(T1/2)或酶损失其初始活性的50％所花费的时间(以小时计)
(F)半衰期改进因子(HIF)是通过取变体和参考的半衰期的比率来计算的
表1.在42℃下储存16小时的样品(与SEQ ID NO:2的参考木葡聚糖酶相比的HIF)
*在给定条件下不稳定
表2.在42℃下储存16小时的样品(与SEQ ID NO:3的参考木葡聚糖酶相比的HIF)
表3.在45℃下储存16小时的样品(与SEQ ID NO:3的参考木葡聚糖酶相比的HIF)
序列表
<110> 诺维信公司（NOVOZYMES A/S）
<120> 家族44木葡聚糖酶变体
<130> 15228-WO-PCT
<160> 4
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 524
<212> PRT
<213> 多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa）
<400> 1
Val Val His Gly Gln Thr Ala Lys Thr Ile Thr Ile Lys Val Asp Thr
1 5 10 15
Phe Lys Asp Arg Lys Pro Ile Ser Pro Tyr Ile Tyr Gly Thr Asn Gln
20 25 30
Asp Leu Ala Gly Asp Glu Asn Met Ala Ala Arg Arg Leu Gly Gly Asn
35 40 45
Arg Met Thr Gly Tyr Asn Trp Glu Asn Asn Met Ser Asn Ala Gly Ser
50 55 60
Asp Trp Gln Gln Ser Ser Asp Asn Tyr Leu Cys Ser Asn Gly Gly Leu
65 70 75 80
Thr Gln Ala Glu Cys Glu Lys Pro Gly Ala Val Thr Thr Ser Phe His
85 90 95
Asp Gln Ser Leu Lys Leu Gly Thr Tyr Ser Leu Val Thr Leu Pro Met
100 105 110
Ala Gly Tyr Val Ala Lys Asp Gly Asn Gly Ser Val Gln Glu Ser Glu
115 120 125
Lys Ala Pro Ser Ala Arg Trp Asn Gln Val Val Asn Ala Lys Asn Ala
130 135 140
Pro Phe Gln Leu Gln Pro Asp Leu Asn Asp Asn Arg Val Tyr Val Asp
145 150 155 160
Glu Phe Val His Phe Leu Val Asn Lys Tyr Gly Thr Ala Ser Thr Lys
165 170 175
Ala Gly Val Lys Gly Tyr Ala Leu Asp Asn Glu Pro Ala Leu Trp Ser
180 185 190
His Thr His Pro Arg Ile His Gly Glu Lys Val Gly Ala Lys Glu Leu
195 200 205
Val Asp Arg Ser Val Ser Leu Ser Lys Ala Val Lys Ala Ile Asp Ala
210 215 220
Gly Ala Glu Val Phe Gly Pro Val Leu Tyr Gly Phe Gly Ala Tyr Lys
225 230 235 240
Asp Leu Gln Thr Ala Pro Asp Trp Asp Ser Val Lys Gly Asn Tyr Ser
245 250 255
Trp Phe Val Asp Tyr Tyr Leu Asp Gln Met Arg Leu Ser Ser Gln Val
260 265 270
Glu Gly Lys Arg Leu Leu Asp Val Phe Asp Val His Trp Tyr Pro Glu
275 280 285
Ala Met Gly Gly Gly Ile Arg Ile Thr Asn Glu Val Gly Asn Asp Glu
290 295 300
Thr Lys Lys Ala Arg Met Gln Ala Pro Arg Thr Leu Trp Asp Pro Thr
305 310 315 320
Tyr Lys Glu Asp Ser Trp Ile Ala Gln Trp Asn Ser Glu Phe Leu Pro
325 330 335
Ile Leu Pro Arg Leu Lys Gln Ser Val Asp Lys Tyr Tyr Pro Gly Thr
340 345 350
Lys Leu Ala Met Thr Glu Tyr Ser Tyr Gly Gly Glu Asn Asp Ile Ser
355 360 365
Gly Gly Ile Ala Met Thr Asp Val Leu Gly Ile Leu Gly Lys Asn Asp
370 375 380
Val Tyr Met Ala Asn Tyr Trp Lys Leu Lys Asp Gly Val Asn Asn Tyr
385 390 395 400
Val Ser Ala Ala Tyr Lys Leu Tyr Arg Asn Tyr Asp Gly Lys Asn Ser
405 410 415
Thr Phe Gly Asp Thr Ser Val Ser Ala Gln Thr Ser Asp Ile Val Asn
420 425 430
Ser Ser Val His Ala Ser Val Thr Asn Ala Ser Asp Lys Glu Leu His
435 440 445
Leu Val Val Met Asn Lys Ser Met Asp Ser Ala Phe Asp Ala Gln Phe
450 455 460
Asp Leu Ser Gly Ala Lys Thr Tyr Ile Ser Gly Lys Val Trp Gly Phe
465 470 475 480
Asp Lys Asn Ser Ser Gln Ile Lys Glu Ala Ala Pro Ile Thr Gln Ile
485 490 495
Ser Gly Asn Arg Phe Thr Tyr Thr Val Pro Pro Leu Thr Ala Tyr His
500 505 510
Ile Val Leu Thr Thr Gly Asn Asp Thr Ser Pro Val
515 520
<210> 2
<211> 524
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 合成构建体
<400> 2
Val Val His Gly Gln Thr Ala Lys Thr Ile Thr Ile Lys Val Asp Thr
1 5 10 15
Phe Lys Asp Arg Lys Pro Ile Ser Pro Tyr Ile Tyr Gly Thr Asn Gln
20 25 30
Asp Leu Ala Gly Asp Glu Asn Met Ala Ala Arg Arg Leu Gly Gly Asn
35 40 45
Arg Met Thr Gly Tyr Asn Trp Glu Asn Asn Met Ser Asn Ala Gly Ser
50 55 60
Asp Trp Gln His Ser Ser Asp Asn Tyr Leu Cys Ser Asn Gly Gly Leu
65 70 75 80
Thr Gln Ala Glu Cys Glu Lys Pro Gly Ala Val Val Thr Ser Phe His
85 90 95
Asp Gln Ser Leu Lys Leu Gly Thr Tyr Ser Leu Val Thr Leu Pro Met
100 105 110
Ala Gly Tyr Val Ala Ala Asp Gly Asn Gly Ser Val Gln Glu Ser Glu
115 120 125
Ala Ala Pro Ser Ala Arg Trp Asn Gln Val Val Asn Ala Lys Asn Ala
130 135 140
Pro Phe Gln Leu Gln Pro Asp Leu Asn Asp Asn Tyr Val Tyr Val Asp
145 150 155 160
Glu Phe Val His Phe Leu Val Asn Lys Tyr Gly Thr Ala Ser Thr Lys
165 170 175
Ala Gly Val Lys Gly Tyr Ala Leu Asp Asn Glu Pro Ala Leu Trp Ser
180 185 190
His Thr His Pro Arg Ile His Pro Glu Lys Val Gly Ala Lys Glu Leu
195 200 205
Val Asp Arg Ser Val Ser Leu Ser Lys Ala Val Lys Ala Ile Asp Ala
210 215 220
Gly Ala Glu Val Phe Gly Pro Val Leu Tyr Gly Phe Gly Ala Tyr Lys
225 230 235 240
Asp Leu Gln Thr Ala Pro Asp Trp Asp Ser Val Lys Gly Asn Tyr Ser
245 250 255
Trp Phe Val Asp Tyr Tyr Leu Asp Gln Met Arg Leu Ser Ser Gln Val
260 265 270
Glu Gly Lys Arg Leu Leu Asp Val Phe Asp Val His Trp Tyr Pro Glu
275 280 285
Ala Met Gly Gly Gly Ile Arg Ile Thr Asn Glu Val Gly Asn Asp Glu
290 295 300
Thr Lys Lys Ala Arg Met Gln Ala Pro Arg Thr Leu Trp Asp Pro Thr
305 310 315 320
Tyr Lys Glu Asp Ser Trp Ile Ala Gln Trp Phe Ser Glu Phe Leu Pro
325 330 335
Ile Leu Pro Arg Leu Lys Gln Ser Val Asp Lys Tyr Tyr Pro Gly Thr
340 345 350
Lys Leu Ala Met Thr Glu Tyr Ser Tyr Gly Gly Glu Asn Asp Ile Ser
355 360 365
Gly Gly Ile Ala Met Thr Asp Val Leu Gly Ile Leu Gly Lys Asn Asp
370 375 380
Val Tyr Met Ala Asn Tyr Trp Lys Leu Lys Asp Gly Val Asn Asn Tyr
385 390 395 400
Val Ser Ala Ala Tyr Lys Leu Tyr Arg Asn Tyr Asp Gly Lys Asn Ser
405 410 415
Thr Phe Gly Asp Thr Ser Val Ser Ala Gln Thr Ser Asp Ile Val Asn
420 425 430
Ser Ser Val His Ala Ser Val Thr Asn Ala Ser Asp Lys Glu Leu His
435 440 445
Leu Val Val Met Asn Lys Ser Met Asp Ser Ala Phe Asp Ala Gln Phe
450 455 460
Asp Leu Ser Gly Ala Lys Thr Tyr Ile Ser Gly Lys Val Trp Gly Phe
465 470 475 480
Asp Lys Asn Ser Ser Gln Ile Lys Glu Ala Ala Pro Ile Thr Gln Ile
485 490 495
Ser Gly Asn Arg Phe Thr Tyr Thr Val Pro Pro Leu Thr Ala Tyr His
500 505 510
Ile Val Leu Thr Thr Gly Asn Asp Thr Ser Pro Val
515 520
<210> 3
<211> 524
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 3
Val Val His Gly Gln Thr Ala Lys Thr Ile Thr Ile Lys Val Asp Thr
1 5 10 15
Phe Lys Asp Arg Lys Pro Ile Ser Pro Tyr Ile Tyr Gly Thr Asn Gln
20 25 30
Asp Leu Ala Gly Asp Glu Asn Met Ala Ala Arg Arg Leu Gly Gly Asn
35 40 45
Arg Met Thr Gly Tyr Asn Trp Glu Asn Asn Met Ser Asn Ala Gly Ser
50 55 60
Asp Trp Gln His Ser Ser Asp Asn Tyr Leu Cys Ser Asn Gly Gly Leu
65 70 75 80
Thr Gln Ala Glu Cys Glu Lys Pro Gly Ala Val Val Thr Ser Phe His
85 90 95
Asp Gln Ser Leu Lys Leu Gly Thr Tyr Ser Leu Val Thr Leu Pro Met
100 105 110
Ala Gly Tyr Val Ala Ala Asp Gly Asn Gly Ser Val Gln Glu Ser Glu
115 120 125
Thr Ala Pro Ser Ala Arg Trp Asn Gln Val Val Asn Ala Lys Asn Ala
130 135 140
Pro Phe Gln Leu Gln Pro Asp Leu Asn Asp Asn Tyr Val Tyr Val Asp
145 150 155 160
Glu Phe Val His Phe Leu Val Asn Lys Tyr Gly Thr Ala Ser Thr Lys
165 170 175
Ala Gly Val Lys Gly Tyr Ala Leu Asp Asn Glu Pro Ala Leu Trp Ser
180 185 190
His Thr His Pro Arg Ile His Pro Glu Lys Val Gly Ala Lys Glu Leu
195 200 205
Val Asp Arg Ser Val Ser Leu Ser Lys Ala Val Lys Ala Ile Asp Ala
210 215 220
Gly Ala Glu Val Phe Gly Pro Val Leu Tyr Gly Phe Gly Ala Tyr Lys
225 230 235 240
Asp Leu Gln Thr Ala Pro Asp Trp Asp Ser Val Lys Gly Asn Tyr Ser
245 250 255
Trp Phe Val Asp Tyr Tyr Leu Asp Gln Met Arg Leu Ser Ser Gln Val
260 265 270
Glu Gly Lys Arg Leu Leu Asp Val Phe Asp Val His Trp Tyr Pro Glu
275 280 285
Ala Met Gly Gly Gly Ile Arg Ile Thr Asn Glu Val Gly Asn Asp Glu
290 295 300
Thr Lys Lys Ala Arg Met Gln Ala Pro Arg Thr Leu Trp Asp Pro Thr
305 310 315 320
Tyr Lys Glu Asp Ser Trp Ile Ala Gln Trp Phe Ser Glu Phe Leu Pro
325 330 335
Ile Leu Pro Arg Leu Lys Gln Ser Val Asp Lys Tyr Tyr Pro Gly Thr
340 345 350
Lys Leu Ala Met Thr Glu Tyr Ser Tyr Gly Gly Glu Asn Asp Ile Ser
355 360 365
Gly Gly Ile Ala Met Thr Asp Val Leu Gly Ile Leu Gly Lys Asn Asp
370 375 380
Val Tyr Met Ala Asn Tyr Trp Lys Leu Lys Asp Gly Val Asn Asn Tyr
385 390 395 400
Val Ser Ala Ala Tyr Lys Leu Tyr Arg Asn Tyr Asp Gly Lys Asn Ser
405 410 415
Thr Phe Gly Asp Thr Ser Val Ser Ala Gln Thr Ser Asp Ile Val Asn
420 425 430
Ser Ser Val His Ala Ser Val Thr Asn Ala Ser Asp Lys Glu Leu His
435 440 445
Leu Val Val Met Asn Lys Ser Met Asp Ser Ala Phe Asp Ala Gln Phe
450 455 460
Asp Leu Ser Gly Ala Lys Thr Tyr Ile Ser Gly Lys Val Trp Gly Phe
465 470 475 480
Asp Lys Asn Ser Ser Gln Ile Lys Glu Ala Ala Pro Ile Thr Gln Ile
485 490 495
Ser Gly Asn Arg Phe Thr Tyr Thr Val Pro Pro Leu Thr Ala Tyr His
500 505 510
Ile Val Leu Thr Thr Gly Asn Asp Thr Ser Pro Val
515 520
<210> 4
<211> 269
<212> PRT
<213> 迟缓芽孢杆菌（Bacillus lentus）
<400> 4
Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Ser Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala
1 5 10 15
His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp
20 25 30
Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Asn Ile Arg Gly Gly Ala Ser
35 40 45
Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr
50 55 60
His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Leu
65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
85 90 95
Ser Gly Ser Gly Ser Val Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser
115 120 125
Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Gly Ser Ile Ser
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Asn Val Gln Ser Thr Tyr Pro Gly Ser Thr Tyr
195 200 205
Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Ser Thr Asn Leu
245 250 255
Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg
260 265
Claims (19)
1.一种木葡聚糖酶变体，该木葡聚糖酶变体在对应于选自由以下组成的组的位置的一个或多个位置处包含改变：SEQ ID NO:1的多肽的111、123、159、256、294、8、18、20、41、42、76、82、83、87、94、103、104、105、121、125、126、127、136、137、146、147、148、152、153、155、165、168、169、177、184、189、203、206、210、211、214、217、219、220、226、237、238、240、243、244、248、251、252、267、271、276、289、295、298、300、302、322、329、339、347、347、353、383、384、392、394、395、402、414、427、431、445、447、459、473、474、476、482、488、489、491、492、503和505，其中该变体具有木葡聚糖酶活性。
2.如权利要求1所述的变体，其中该变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
3.如前述权利要求中任一项所述的变体，其中所述变体在对应于以下位置的位置处包含以下改变中的一个或多个：SEQ ID NO:1的多肽的P111、S123、V159、S256、I294、K8、K18、R20、A41、A42、S76、Q82、A83、K87、S94、G103、T104、Y105、A118、N121、Q125、E126、S127、N136、Q137、F146、Q147、L148、L152、N153、N155、F165、N168、K169、A177、L184、A189、V203、K206、D210、R211、S214、K217、V219、K220、A226、G237、A238、K240、Q243、T244、W248、V251、K252、R267、Q271、R276、A289、R295、N298、V300、N302、K322、Q329、P339、K347、R347、K353、R353、N383、D384、K392、K394、D395、P395、S402、K414、T427、V431、K445、L447、A459、I473、S474、K476、K482、K488、E489、A491、P492、Y503和V505，其中该变体具有木葡聚糖酶活性。
4.如前述权利要求中任一项所述的变体，其中所述变体在对应于以下位置的位置处包含以下改变中的一个或多个：SEQ ID NO:1的多肽的P111Q、S123P、V159M、S256E、S256Q、I294E、I294Q、K8E、K8R、K18E、R20K、A41L、A41E、A41R、A42V、S76E、Q82E、A83E、K87E、S94R、G103V、T104G、T104R、Y105E、A118K、N121E、Q125F、Q125K、Q125L、Q125P、Q125S、E126P、S127H、S127L、S127W、S127D、N136D、Q137E、Q137K、F146D、Q147G、Q147K、L148P、L152*、L152D、L152E、L152P、N153E、N155D、N155E、F165H、N168R、K169E、K169R、A177G、L184M、A189G、V203T、K206E、K206R、D210H、D210R、R211K、S214Q、K217R、K217T、V219A、V219T、K220R、A226D、A226K、G237M、A238S、A238T、K240F、K240L、Q243E、T244E、T244R、W248V、V251E、K252E、R267C、R267H、R267K、Q271D、Q271E、R276K、A289T、R295K、N298D、V300L、N302H、K322E、Q329E、P339S、K347E、K347R、K353R、N383E、N383Q、D384G、K392E、K394R、D395P、S402Q、K414E、T427V、V431E、K445E、L447M、A459P、I473T、S474E、K476R、K482R、K488T、E489K、E489R、A491E、A491V、P492D、Y503L、Y503V和V505L，其中该变体具有木葡聚糖酶活性。
5.如前述权利要求中任一项所述的变体，其中所述变体包含选自由以下组成的组的改变或改变的组合：
SEQ ID NO:1的多肽的K394R、
S127D、
R211K、
S123P、
K488T、
S256Q、
K476R、
K217R、
Q271D、
S214Q、
L447M、
K482R、
K169R、
L152D、
R267K、
L152E、
D210R、
L152*、
R295K、S127W、E126P、S127H、T104G、Q125K、Q125P、Q125S、D395P、G103V、T104R、Q125L、A41E、A41R、Q125F、S127L、A226K、A41L、A226D、A118K+S123P、N155D、Q137K、N155E、Q147K、R276K、V203T、S94R、K18E、K252E、V219T、R267C+T427V、Q243E、
K414E、
K445E、
R20K+S123P、
S123P+K206R、
R20K+S123P+R211K、
S123P+K347R、
S123P+K347R+K353R+D395P、S123P+D395P、
S123P+S127D、
V159M、
K392E、
E489R+P492D、
Y503L+V505L、
Y503V+V505L、
L184M+V219A、
S123P+R211K+K217R+S256Q+K488T、Q82E、
S76E、
A83E、
Q271E、
S256E、
I294E、
Q329E、
V431E、
R20K+Y105E+S123P+Q147K+R267K、R20K+Y105E+S123P+R267K、R20K+S123P+K220R、
R20K+Y105E+S123P+N136D、R20K+S123P+Q137K+Q147K、Y105E+A118K+S123P+K206R+K220R+R267K、P111Q+S123P+V159M、
S94R+P111Q+S123P+V159M、
K87E+P111Q+S123P+V159M+S402Q、K87E+P111Q+S123P+V159M、
P111Q+S123P+V159M+S402Q、
K87E+P111Q+V159M+I294Q+I473T、
K8E+P111Q+V159M、
K8E+K18E+P111Q+V159M+K206E、
R20K+P111Q+S123P+S127D+V159M、P111Q+Q147K+V159M+K220R、
S94R+P111Q+V159M、
P111Q+V159M+K206E+I294Q、
P111Q+V159M+K206E+I294Q+K347E、P111Q+Q137K+Q147K+V159M+K252E、P111Q+Q137K+Q147K+N155D+K252E、P111Q+Q137K+L152D+V203T+K217R、P111Q+Q137K+V159M、
K8E+P111Q+N155D+V159M、
A41L+P111Q+S123P+Q147K+V159M+V203T、A41L+P111Q+S123P+Q147K+V159M+K217R、P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+S256Q+S402Q、P111Q+S123P+Q147K+V159M+I294Q+S402Q、A41L+P111Q+Q137K+V159M+N168R+Q271D+K488T、P111Q+Q137K+Q147K+V159M+V203T+K217R、P111Q+Q147K+V159M、
P111Q+Q137K+Q147K+V159M、
P111Q+S123P+Q137K+V159M+K488T、P111Q+S123P+Q137K+V159M+S256Q、K87E+P111Q+L152D+V159M+V203T+I294Q、K87E+P111Q+Q147K+L152D+V159M、R20K+A83E+S123P+K220R+S256E、
R20K+S76E+A83E+S123P+K220R+K252E、
R20K+A83E+S123P+K220R+K252E、
R20K+A42V+S123P+K220R+K252E+I294E、
R20K+Q82E+S123P+Q147K+K220R、
R20K+A83E+S123P+K220R+S256Q、
R20K+Q82E+S123P+N155D+K220R、
R20K+S123P+V203T+K220R+K252E、
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A83E+P111Q+S123P+Q137K+Q147K+V159M+L184M+V251E+S256Q+Q271E+I294E+Q329E+N383E+S402Q+V431E+A491V，其中该变体具有木葡聚糖酶活性并且其中所述变体与SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ IDNO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
6.一种木葡聚糖酶变体，该木葡聚糖酶变体在对应于SEQ ID NO:2的多肽的位置129T的位置处包含取代，其中该变体具有木葡聚糖酶活性。
7.如权利要求6所述的变体，其中该变体与SEQ ID NO:2的多肽具有至少99％的序列同一性但小于100％的序列同一性。
8.如权利要求6-7中任一项所述的变体，该变体包含SEQ ID NO:3的多肽或由其组成。
9.如权利要求1-8中任一项所述的变体，该变体相对于亲本具有改善的特性，例如改善的热稳定性、改善的洗涤剂内储存稳定性、在螯合剂或螯合试剂存在下的洗涤剂内储存稳定性、改善的洗涤性能和/或改善的酶洗涤益处。
10.如权利要求1-9中任一项所述的变体，与SEQ ID NO:2或SEQ IDNO:3的参考多肽相比，该变体具有至少1.1，例如至少1.2、至少1.3、至少1.4、至少1.5的半衰期改进因子(HIF)和/或稳定性改进因子(SIF)。
11.一种洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物包含如权利要求1-10中任一项所述的变体。
12.如权利要求11所述的洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物处于以下形式：条，均匀的片剂，具有两层或更多层的片剂，单位剂量产品例如具有一个或多个室的袋，规则的或压缩的粉末，颗粒，糊剂，凝胶，或规则的、压缩的或浓缩的液体。
13.一种分离的多核苷酸，该分离的多核苷酸编码如权利要求1-10中任一项所述的变体。
14.一种核酸构建体或表达载体，该核酸构建体或表达载体包含如权利要求13所述的多核苷酸。
15.一种重组宿主细胞，该重组宿主细胞用如权利要求13所述的多核苷酸转化。
16.一种产生变体的变体的方法，该方法包括：
a.在适合于表达该变体的条件下培养如权利要求15所述的重组宿主细胞；以及
b.回收该变体。
17.如权利要求1-10中任一项所述的变体或如权利要求11-12所述的洗涤剂组合物用于清洁物品，用于预处理该物品上的污渍，用于在洗涤周期期间防止、减少或去除污垢的再沉积，和/或用于维持或改善物品的白度的用途。
18.如权利要求17所述的用途，其中该物品是纺织品或硬表面，例如餐具。
19.一种用于洗涤物品的洗涤方法，该洗涤方法包括：
c.将物品暴露于洗涤液，该洗涤液包含如权利要求1-10中任一项所述的变体或如权利要求11-12中任一项所述的洗涤剂组合物；
d.完成至少一个洗涤周期；以及
e.任选地冲洗该物品，其中该物品是纺织品。
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