CN116262758A

CN116262758A - 7-甲基噻唑并[5,4-d]嘧啶类化合物、制备方法及其用途

Info

Publication number: CN116262758A
Application number: CN202111534335.8A
Authority: CN
Inventors: 谢军; 姜春阳; 李惠; 李红昌; 周小群
Original assignee: Shanghai Scienpharm Biotechnology Co ltd
Current assignee: Shanghai Scienpharm Biotechnology Co ltd
Priority date: 2021-12-15
Filing date: 2021-12-15
Publication date: 2023-06-16
Also published as: WO2023109158A1

Abstract

本发明公开了一种7‑甲基噻唑并[5,4‑d]嘧啶类化合物、制备方法及其用途；包括式(I)所示化合物或其生理学上可接受的盐：

其中，R₁为氢、取代或未取代的烷基、环烷基、取代或未取代的烷基羰基、取代或未取代的环烷基羰基；R₂为取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的芳杂环基。本发明的PI3K抑制剂化合物结构新颖，对PI3K激酶抑制活性优异，并显著提高了PI3Kα/mTOR的选择性，通过对于mTOR酶活性的调节，可以减弱由于mTOR激酶的强抑制导致的安全性风险，以及对于部分RTK酶诱导致的风险，具有更好的药效、更低毒性。

Description

7-甲基噻唑并[5,4-d]嘧啶类化合物、制备方法及其用途

技术领域

本发明涉及医药化学领域，具体涉及7-甲基噻唑并[5,4-d]嘧啶类化合物、制备方法及其用途。

背景技术

磷酯酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3 kinase，PI3K)家族是一类特异性催化磷酯酰肌醇3位羟基磷酸化，并产生具有第二信使作用的肌醇脂物质的一类激酶。PI3K及其下游分子信号蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)所组成的信号通路是哺乳动物最重要的细胞内信号通路之一，对多种重要生理功能至关重要，包括细胞周期、细胞存活、蛋白质合成和生长、代谢、运动和血管生成。PI3K作为脂质激酶家族，可根据其结构和底物特异性分为三个主要类别(I、II和III类)。I类PI3K又分为IA类和IB类两个主要亚类，其中IA类PI3K包括PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kδ，由其相对应的催化亚基p110(p110α、p110β、p110δ)和调节亚基p85组成；IB类(PI3Kγ)则由催化亚基p110γ和调节亚基p101或p87组成。

2014年7月23日，美国FDA批准艾德拉尼Idelalisib由吉利德科学(GileadSciences)研发上市，2014年9月18日欧洲EMA批准其上市，商品名为

艾德拉尼为PI3Kδ激酶抑制剂，可诱导细胞凋亡，抑制细胞增殖。其用于治疗复发性慢性淋巴细胞白血病(CLL)、复发性滤泡B细胞非霍奇金淋巴瘤(FL)和复发性小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)。

2017年9月14日，美国FDA加速批准Bayer的Copanlisib上市，商品名为

用于治疗罹患复发性滤泡性淋巴瘤，且已经接受了至少两次***疗法的成人患者，Copanlisib是一款PI3K抑制剂，它能抑制PI3K-α和PI3K-δ两种激酶亚型。

Buparlisib(BKM120)是由诺华研发，是一种pan-class I PI3K抑制剂，作用于p110α/β/δ/γ。用于治疗正处于治疗绝经后***受体阳性，人类表皮生长因子受体2(HER2)阴性的局部晚期或转移性乳腺癌的临床研究。该公司也在进行治疗滤泡性淋巴瘤、胃肠道间质瘤、套细胞淋巴瘤、***癌、弥散大B细胞淋巴瘤、非小细胞肺癌、肝细胞癌、骨髓纤维化、晚期子宫内膜癌、黑色素瘤、膀胱癌、胰腺癌和恶性胶质瘤的二期临床研究。此外，获得FDA批准上市的PI3K抑制剂还有duvelisib和alpelisib，磷脂酰肌醇-3-激酶抑制剂(PI3K)具有广阔的应用前景。值得注意的是，目前上市的PI3K抑制剂在临床应用中观察到很大的毒副作用，例如自身免疫功能障碍、机会性感染、皮肤毒性、高血压和高血糖症等，idelalisib和duvelisib均被FDA给予黑框警告。此外，PI3K信号传导的抑制会介导负反馈回路和/或诱导其他增殖信号通路的激活，从而减弱PI3K抑制剂的抗肿瘤功效。为了克服这些主要障碍，很有必要开发结构不同的、具有更好的药效、更低毒性的新型PI3K抑制剂化合物。

发明内容

本发明的目的在于开发一种7-甲基噻唑并[5,4-d]嘧啶类化合物、制备方法及其用途。该7-甲基噻唑并[5,4-d]嘧啶PI3K抑制剂化合物具有不同于现有化合物的全新结构，显示出抗增殖活性，并且因此用于预防或治疗与过度增殖相关的疾病，尤其制备抑制PI3激酶的药物中的用途。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

本发明提供了一种7-甲基噻唑并[5,4-d]嘧啶类化合物，包括式(I)所示化合物或其生理学上可接受的盐：

其中，R₁为氢、取代或未取代的烷基、环烷基、取代或未取代的烷基羰基、取代或未取代的环烷基羰基；

R₂为取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的芳杂环基。

作为本发明的一个实施方案，R₁选自氢、乙酰基、丙酰基、环丙甲酰基、氘代乙酰基、甲基、环丙基中的任意一种；R2选自2,4-二氟取代苯环基、4-氟取代苯环基、甲基、噻吩-2-基、环丙基中的任意一种。

作为本发明的一个实施方案，选自以下化合物中的任意一个：

本发明还提供了一种7-甲基噻唑并[5,4-d]嘧啶类化合物的制备方法，所述方法包括如下步骤：

S1、化合物

与化合物/>

偶联反应得到氨基类目标化合物/>

或S2、氨基类化合物

与R_bX发生酰化反应，得到酰基化目标化合物/>

R_b为烷基酰基，X为卤素原子；

或S3、化合物

与化合物/>

偶联反应得到化合物

进一步与R_a-NH₂发生胺化反应得到烷基或环烷基取代氨基类目标化合物/>

其中，R_a为烷基或环烷基。

作为本发明的一个实施方案，一种7-甲基噻唑并[5,4-d]嘧啶类化合物的制备方法包括如下步骤：

化合物

与化合物/>

偶联反应得到化合物

进一步胺化反应得到化合物/>

或化合物

与R_bX发生酰化反应，得到化合物

其中，R_b为烷基酰基，X为卤素原子。

作为本发明的一个实施方案，所述偶联反应是在碳酸钾、二氧六环和PdCl₂存在的条件下进行的。

作为本发明的一个实施方案，所述酰化反应是以DCM为溶剂，在吡啶存在的条件下进行的。

作为本发明的一个实施方案，所述胺化反应是以NMP为溶剂，与氨水发生反应。

作为本发明的一个实施方案，化合物

是通过如下步骤制备而得：

A1、2-溴-4-氨基-5-甲氧基吡啶与化合物

在DMAP、吡啶存在的条件下反应得到化合物/>

A2、化合物

在醋酸钾、PdCl₂和二氧六环存在的条件下与联硼酸频哪醇酯反应得到化合物/>

作为本发明的一个实施方案，化合物

是通过如下步骤制备而得：

B1、化合物

在铁粉和乙酸存在的条件下反应得到化合物/>

B2、化合物

在硫***和乙酸存在的条件下反应得到化合物

B3、化合物

与亚硝酸异戊酯反应制备得到化合物/>

B4、化合物

在二苯甲胺、BINAP、Pd₂(dba)₃和Cs₂CO₃存在的条件下反应得到化合物/>

B5、化合物

与柠檬酸反应得到化合物/>

B6、化合物

再溴化得到化合物/>

作为本发明的一个实施方案，化合物

是通过如下步骤制备而得：

C1、化合物

在铁粉和乙酸存在的条件下反应得到化合物/>

C2、化合物

在硫***和乙酸存在的条件下反应得到化合物

C3、化合物

在亚硝酸叔丁酯和乙腈存在的条件下发生溴化反应得到化合物/>

本发明还提供了7-甲基噻唑并[5,4-d]嘧啶PI3K抑制剂化合物在制备治疗PI3激酶相关疾病的药物中的应用。尤其是制备***疾病药物中的应用。本发明的化合物在各种肿瘤细胞株中显示了优异的抑制效果，尤其是化合物Id在淋巴癌细胞株DOHH2中IC₅₀值为0.063μm，大大优于对照药BKM120的0.53μm。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

1)本发明的7-甲基噻唑并[5,4-d]嘧啶类PI3K抑制剂化合物结构新颖，对PI3K激酶抑制活性优异，并显著提高了PI3Kα/mTOR的选择性，通过对于mTOR酶活性的调节，可以减弱由于mTOR激酶的强抑制导致的安全性风险，如高血糖症，以及对于部分RTK酶诱导致的风险，具有更好的药效、更低毒性。

2)动物体内抑瘤实验表明本发明的化合物在较低剂量就可以达到优异的抑瘤效果，而且动物体重基本没有变化，具有良好的安全性，同时该类化合物表现出了良好的代谢性能。

3)本发明还提供的7-甲基噻唑并[5,4-d]嘧啶PI3K类抑制剂化合物的简便制备方法。

附图说明

通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显：

图1为化合物Ic和Id对人胃癌HGC27裸小鼠体重变化的作用；

图2为化合物Ic和Id对人胃癌HGC27裸小鼠移植瘤的实验治疗作用。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干调整和改进。这些都属于本发明的保护范围。所有提及到的出版物通过引用的方式以其全文并入。

本发明的一种实施方式包括式(I)化合物：

或其生理学上可接受的盐，其中：

R₁为氢、取代或未取代的烷基、环烷基、取代或未取代的烷基羰基、取代或未取代的环烷基羰基；

所述烷基为C1-C8的烷基，环烷基为C3-C8的环烷基，烷基羰基为C2-C8的烷基羰基，环烷基羰基为C4-C8的环烷基羰基；芳基为苯基、萘基，芳杂环基为噻吩基、噻唑基、吡唑基、吡啶基、呋喃基，取代基为卤素、烷基。

在优选实施方式中，本发明包括式(I)的化合物，其中R₁选自氢、乙酰基、丙酰基、环丙甲酰基、氘代乙酰基、甲基、环丙基中的任意一种。

在又一优选实施方式中，本发明包括式(I)的化合物，其中R2选自2,4-二氟取代苯环基、4-氟取代苯环基、甲基、噻吩-2-基、环丙基中的任意一种。

在又一优选实施方式中，本发明包括如下列式的化合物中的任一化合物或其生理学上可接受的盐。

表1

/>

若化学命名和图示的化学结构有差异，则图示的化学结构优选于给出的化学命名。

不局限于理论或机理，本发明的化合物显示出出乎意料的磷脂酰肌醇-3-激酶抑制活性以及化学和结构稳定性。这出乎意料的活性相信是以所述化合物的结构为基础的，特别是这些化合物的母核(7-甲基噻唑并[5,4-d]嘧啶化合物)。另外，考虑到体内的活性，适当选择R₁和R₂针对适当的同工型提供必要活性。

本发明还提供了一种7-甲基噻唑并[5,4-d]嘧啶PI3K抑制剂化合物的制备方法。

化合物Ic和Id的制备：以化合物1为起始物料制得中间体3，再溴化制得中间体8，偶联制得中间体10，胺化制得目标化合物Ic；由Ic乙酰化制得目标化合物Id。具体反应路线1：

/>

反应路线1

以化合物1为起始物料制得中间体3，进一步制得关键中间体7，具体见反应路线2：

反应路线2

氨基类目标化合物：5-溴-2-甲氧基吡啶-3-胺制得硼酸酯类中间体9，再与中间体7偶联制得氨基类目标化合物，具体见反应路线3。

反应路线3

其中R2为取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的芳杂环基，优选2,4-二氟取代苯环基、4-氟取代苯环基、甲基、噻吩-2-基、环丙基；

所述的氨基类目标化合物如化合物Ic、化合物Ia、化合物Ie和化合物If等。

烷基取代氨基类目标化合物的制备：反应路线4中，5-溴-2-甲氧基吡啶-3-胺制得硼酸酯类中间体9，再与中间体8偶联制得标化合物10，然后进一步制备得到烷基取代氨基类化合物。

反应路线4

其中Ra为烷基、环烷基，优选甲基、环丙基；

R₂为取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的芳杂环基，优选2,4-二氟取代苯环基、4-氟取代苯环基、甲基、噻吩-2-基、环丙基；

所述的烷基取代氨基类化合物，如化合物In、Ip、Im和Io等。

酰基化目标化合物的制备：以氨基类目标化合物为底物，进行酰化反应，制得酰基化目标化合物，具体见反应路线5。

反应路线5

其中R_b为烷基酰基，优选乙酰基、丙酰基、环丙甲酰基、氘代乙酰基；

X为氯、溴或氟，

R₂为取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的芳杂环基，优选2,4-二氟取代苯环基、4-氟取代苯环基、甲基、噻吩-2-基、环丙基等。

所述的酰基化目标化合物，如化合物Ij、化合物Il、化合物Ir、化合物Ib、化合物Ii、化合物Ik、化合物Iq、化合物Ig和化合物Ih等。

实施例1、5-氯-7-甲基噻唑并[5,4-d]嘧啶-2-胺的制备

将化合物1(4.16g，1eq)，溶于100ml乙酸中，冰水浴冷却至5-10℃，分批加铁粉(5g，4.5eq)，继续室温反应2h。后处理：反应液过滤，滤液浓缩。残液溶于水，用乙酸乙酯萃取3次，饱和氯化钠水溶液洗涤一次，有机相减压浓缩得化合物2，收率85.2％。HPLC纯度99.56％；MS[M+1]：178。

将化合物2(3.56g，1eq)，溶于30ml乙酸中，加硫***(1.94g，1eq)，加热回流反应3h。反应结束，反应液冷却至室温、滴加水，逐渐有固体析出；过滤得土色固体，化合物3，收率90.6％。HPLC纯度94.27％；MS[M+1]：201。

实施例2、2-溴-5-氯-7-甲基噻唑并[5,4-d]嘧啶的制备

将化合物3(4.0g，1eq)，溶于10ml乙腈中，冰水浴冷却至0℃，慢慢加亚硝酸叔丁酯(3.0g，1.5eq)，随后分批加溴化铜(5.9g，1.25eq)。在0℃保持30min，自然升温到室温，继续反应2.5h。反应液加水，用乙酸乙酯萃取3次。有机层用饱和氯化钠水溶液洗涤2次。有机相减压浓缩化合物8，收率88.5％。HPLC纯度87.54％；MS[M+1]：264。

实施例3、N-(2-甲氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)吡啶-3-基)磺酰胺(化合物9)的制备

采用磺酸酐或磺酰氯，沿用类似方法制得以下硼酸酯类化合物：

其中R₂为2,4-二氟基、甲基、环丙基、噻吩-2-基，化合物9分别对应于9a、9b、9c和9d，如下表2：

表2

9a：2,4-二氟-N-(2-甲氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)吡啶-3-基)苯磺酰胺的制备

步骤1：三口瓶加2-溴-4-氨基-5-甲氧基吡啶(10.15g，0.05mol)、DMAP(1.22g)、吡啶(7.12g，0.09mol)溶于DCM(61ml)中，降温至-10～0℃，N₂置换3次。滴加2,4-二氟苯磺酰氯(13.8g，0.065mol)的DCM溶液(61mL)，TLC监控反应，直至反应完全；将反应液倒入100ml水中，搅拌分液。有机相依次用水(100ml)、饱和碳酸氢钠(100ml)、水(100ml)洗涤一次。有机相减压浓缩至干，浓缩残余物用乙酸乙酯重结晶。得到中间体S9a，收率82.6％。HPLC：96.86％。¹HNMR(400MHz,DMSO)δ7.92-7.86(m,2H),7.82(m,1H),7.22(s,1H),7.01-6.91(m,2H),3.89(s,3H)。

步骤2：在一三口烧瓶中，加入上一步产物S9a(18.9g)、醋酸钾(14.7g)、联硼酸频哪醇酯(15.6g)、PdCl₂(dppf)(1.24g)、二氧六环(330ml)，搅拌。氮气置换3次。升温至90℃，反应过夜。

反应结束，反应液中加入乙酸乙酯(300ml)、300ml水，搅拌分层，水层用150ml乙酸乙酯萃取一次。合并有机相，有机相用硅藻土过滤，滤液用饱和盐水洗涤一次。加活性炭升温搅拌1h；过滤、减压浓缩，硅胶柱层析纯化、乙腈-水重结晶得到化合物9a，收率77.5％。HPLC：98.37％；¹H NMR(400MHz,DMSO)δ10.19(s,1H),8.19-8.16(m,1H),7.69(m,1H),7.68-7.64(m,1H),7.58-7.52(m,1H),7.20-7.15(m,1H),3.58(s,3H),1.27(s,12H)。

9b：N-(2-甲氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)吡啶-3-基)甲磺酰胺的制备

步骤1：三口瓶加入2-溴-4-氨基-5-甲氧基吡啶(10.15g，0.05mol)、DMAP(1.22g)、吡啶(7.12g，0.09mol)溶于DCM(61ml)中，降温至-10～0℃，氮气置换3次。滴加甲磺酸酐(11.37g，0.065mol)的DCM溶液(61mL)，室温反应，TLC跟踪反应，直至反应完全。

反应结束，将反应液倒入100ml水中，搅拌分液。有机相依次用水(100ml)、饱和碳酸氢钠(100ml)、水(100ml)洗涤。有机相减压浓缩至干，乙酸乙酯重结晶得到化合物S9b，收率81.3％。HPLC：98.69％。¹HNMR(400MHz,DMSO)δ7.97(m,1H),7.89(m,1H),6.76(s,1H),3.99(s,3H),3.04(s,3H)。

步骤2：三口瓶加S9b(28.1g)、醋酸钾(29.4g)、联硼酸频哪醇酯(31.2g)、PdCl₂(dppf)(2.5g)溶于二氧六环(660ml)中。氮气置换3次。升温至90℃，反应过夜。

反应结束，加入乙酸乙酯(600ml)、600ml水，搅拌分层，水层用300ml乙酸乙酯萃取。有机相用硅藻土过滤，滤液用饱和盐水洗涤。加活性炭升温搅拌1h；过滤、浓缩。残液过柱、乙腈-水重结晶。60℃干燥。得到化合物9b，收率75.8％。HPLC：97.43％。¹HNMR(400MHz,DMSO)δ9.25(s,1H),8.18(m,1H),7.75(m,1H),3.92(s,3H),2.99(s,3H),1.28(s,12H)。

9c：N-(2-甲氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)吡啶-3-基)环丙磺酰胺的制备

将环丙磺酰氯代替2,4-二氟苯磺酰氯，其余同实施例9a的步骤1和2，得到化合物9c，两步收率61.6％。HPLC：97.79％。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.27(s,1H),8.19(m,1H),7.77(m,1H),3.92(s,3H),2.65-2.58(m,1H),1.27(s,12H),0.92-0.81(m,4H)。

9d：N-(2-甲氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)吡啶-3-基)噻吩-2-磺酰胺的制备

将噻吩-2-磺酰氯代替2,4-二氟苯磺酰氯，其余同实施例9a的步骤1和2，得到化合物9d，两步收率58.8％。HPLC：97.48％。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ10.02(s,1H),8.18(m,1H),7.90-7.88(m,1H),7.75(m,1H),7.41-7.40(m,1H),7.12-7.09(m,1H),3.65(s,3H),1.27(s,12H)。

实施例4、N-(5-(5-氯-7-甲基噻唑并[5,4-d]嘧啶-2-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)-2,4-二氟苯磺酰胺的制备

4-1化合物10a的制备

将化合物8(0.265g，1eq)、化合物9a(0.511g，1.2eq)、碳酸钾(0.553g，4eq)，加水(2ml)、二氧六环(6ml)，搅拌使固体溶解，氮气置换3次。加PdCl₂(dppf)(0.074g，0.1eq)，氮气置换3次。升温至80℃，保温反应8小时。反应结束，加水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取3次，有机层用饱和食盐水洗涤一次。有机相减压浓缩至干，硅胶柱层析纯化得到固体化合物10a，收率45.3％。HPLC纯度95.62％；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.63(s,1H),8.72(s,1H),8.23(s,1H),7.80(m，1H),7.60(m，1H)，7.24(m，1H)，3.33(s，3H)，2.86(s,3H)。MS[M+1]：484。

4-2化合物10b的制备

将化合物8(0.265g，1eq)、化合物9b(0.393g，1.2eq)、碳酸钾(0.553g，4eq)，加水(2ml)、二氧六环(6ml)，搅拌，氮气置换3次。加PdCl₂(dppf)(0.074g，0.1eq)，氮气置换3次。升温至80℃，保温反应8小时。反应结束，加水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取3次，有机层用饱和食盐水洗涤一次，有机相减压浓缩至干，硅胶柱层析纯化得固体化合物10b，收率52.1％。HPLC纯度96.44％；MS[M+1]：386。

实施例5、N-(5-(5-氨基-7-甲基噻唑并[5,4-d]嘧啶-2-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)-2,4-二氟苯磺酰胺(化合物Ic)的制备

化合物10a(7.02g，14.5mmol)溶于NMP(50ml)中，加入28％氨水(10ml)，升温70℃，反应3h。反应结束，降温至室温，有固体析出，过滤，滤饼用水洗涤，用PE：EA(2:1)为流动相，经硅胶柱层析得到化合物Ic(收率85％)。¹H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ9.06(s,1H),8.54(s,1H),8.34(s，1H),7.95(m，1H)，7.35(m，1H)，7.20(m，1H)，6.32(s，2H)，3.86(s,3H)，2.76(s,3H)。MS[M+1]：465。

实施例6、N-(2-(5-((2,4-二氟苯基)磺酰氨基)-6-甲氧基吡啶-3-基)-7-甲基噻唑并[5,4-d]嘧啶-5-基)乙酰胺(化合物Id)的制备

化合物Ic(0.929g，1eq)、吡啶(0.475g，3eq)溶于DCM(5ml)中，冷却至0℃，滴加乙酰氯(0.172g，1.2eq)的DCM(2ml)溶液。保持温度0-5℃，反应6-8h。反应结束，反应液依次用10％盐酸、饱和碳酸氢钠、水各洗涤一次。有机相减压浓缩至干，用PE：EA(2:1)为流动相，经硅胶柱层析纯化得到化合物Id，收率60.5％。¹H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ9.03(s,1H),8.51(s,1H),8.36(s，1H),7.94(m，1H)，7.34(m，1H)，7.22(m，1H)，6.30(s，1H)，3.88(s,3H)，2.73(s,3H),2.31(s,3H)。MS[M+1]：507。

实施例7、化合物4的制备

将化合物3(4g，20mmol，1.0eq)在乙腈(30mL)中的混合物加入亚硝酸异戊酯(7.0g，60mmol，3.0eq)，并在室温下搅拌3h。LCMS显示反应完全。用乙酸乙酯稀释混合物，用水和盐水洗涤，在Na₂SO₄上干燥，浓缩。通过柱层析纯化残余物，得到黄色固体形式的化合物4(2g，50％产率)。

实施例8、化合物5的制备

将化合物4(2g，10.8mmol，1.0eq)、二苯甲胺(2.4g，12.9mmol，1.2eq)在甲苯(20.0ml)中的混合物添加到BINAP(684mg，1.1mmol，0.1eq)、Pd₂(dba)₃(1g，1.1mmol，0.1eq)和Cs₂CO₃(7g，21.6mmol，2.0eq)。将混合物在120℃下搅拌16小时。LCMS显示反应完全。用EA稀释混合物，用水和盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，浓缩。通过预TLC纯化残余物，得到黄色固体形式的化合物5(1g，36％产率)。

实施例9、2-溴-7-甲基噻唑并[5,4-d]嘧啶-5-胺(化合物7)的制备

向化合物5(1g，3mmol，1.0eq)与乙腈(3ml)的混合物中加入柠檬酸(1.2g，6mmol，2.0eq)，在室温下搅拌该混合物5h。LCMS显示反应完全。在减压下蒸馏混合物。残渣用DCM和洗涤盐水稀释，在Na2SO4上干燥，浓缩。通过柱层析纯化残余物，得到黄色固体化合物6(400mg，80％产率)。

将化合物6(400mg，2.4mmol，1.0eq)、NBS(854mg，4.8mmol，2.0eq)在DMF(15ml)中的混合物在室温下搅拌5h。LCMS显示反应完全。所得产物用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤，在Na₂SO₄上干燥，浓缩。通过预TLC纯化残余物，得到黄色固体形式的化合物7(165mg，35％产率)。¹HNMR(400mhz，DMSO)：2.55(s，3H)，7.06(s，2H)。LCMS:Rt:1.287分钟；MS[M+1]：245，247。

实施例10、氨基类目标化合物的制备

其中R₂为2,4-二氟苯基、甲基、环丙基和2-噻吩基，化合物9对应为9a、9b、9c和9d，分别与化合物7反应后制备得到化合物Ic、Ia、Ie、If。

化合物Ic的制备

三口瓶加化合物7(0.66g，1eq)、化合物9a(1.28g,1.2eq)、碳酸钾(1.4g，4eq)、水(2.5ml)、二氧六环(5ml)，氮气置换3次。加PdCl2(dppf)(0.09g)。N2置换3次。85-95℃反应4-6h。

将反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取3次；饱和食盐水洗涤一次；有机相用适量无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩。粗品过柱提纯得产品化合物Ic，收率50.7％，HPLC：97.16％，MS[M+1]：465。

化合物Ia的制备

以化合物9b为反应物，制备方法同本实施例中Ic的制备方法，得到化合物Ia，收率43.2％。HPLC：95.65％，MS[M+1]：367。

化合物Ie的制备

以化合物9c为反应物，制备方法同本实施例中Ic的制备方法，得到化合物Ie，收率45.1％。HPLC：95.10％，1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ7.57(m,1H),7.47(s，1H),4.04(m,2H),3.84(s,3H)，2.89(s,3H),1.41(m,1H),1.04(m,2H),0.86(m,2H)。MS[M+1]：393。

化合物If的制备

以化合物9d为反应物，制备方法同本实施例中Ic的制备方法，得到化合物If，收率39.8％。HPLC：96.59％，1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ8.51(s,1H),8.41(s，1H),7.90(m，1H)，7.66(m，1H)，7.17(m，1H)，6.30(s，2H)，3.86(s,3H)，2.71(s,3H)。MS[M+1]：435。

实施例11、氨基酰化类目标化合物的制备

11-1、化合物Ij、化合物Il和化合物Ir的制备

其中R_b为丙酰基、环丙酰基、氘代乙酰基，分别制备得到化合物Ij、Il和Ir。

参考实施例6，以Ic为底物，将乙酰氯替换成丙酰氯，制备方法同化合物Id，得到化合物Ij，收率57.7％。HPLC：95.10％，MS[M+1]：521。

参考实施例6，以Ic为底物，将乙酰氯替换成环丙酰氯，制备方法同化合物Id，得到化合物Il，收率54.4％。HPLC：96.32％，¹H NMR(400MHz,Acetone-d6)8.54(s,1H),8.36(s，1H),7.95(m，1H)，7.35(m，1H)，7.21(m，1H)，3.85(s,3H)，2.82(s,3H),2.39(m,1H),1.30(m,1H),1.00(m,2H),0.91(m,2H)。MS[M+1]：533。

参考实施例6，以Ic为底物，将乙酰氯替换成氘代乙酰氯，制备方法同化合物Id，得到化合物Ir，收率55.6％。HPLC：95.83％，MS[M+1]：510。

11-2、化合物Ib、化合物Ii、化合物Ik和化合物Iq的制备

参考实施例6，以Ia为底物，分别与乙酰氯、丙酰氯、环丙酰氯、氘代乙酰氯反应，制备方法同化合物Id，依次得到化合物Ib(收率50.8％，HPLC：95.33％，MS[M+1]：409)，化合物Ii(收率55.3％，HPLC：96.26％，MS[M+1]：423)，化合物Ik(收率46.5％，HPLC：96.11％，¹HNMR(400MHz,Acetone-d6)δ9.93(s,1H),8.59(s,1H),8.45(s，1H),4.05(s,3H)，3.16(s,3H),2.81(s,3H),2.41(m,1H),1.30(m,1H),1.00(m,2H),0.90(m,2H)。MS[M+1]：435)，化合物Iq(收率48.3％，HPLC：94.88％，MS[M+1]：412)。

11-3、化合物Ig和化合物Ih的制备

参考实施例6，以Ie和If为底物，分别与乙酰氯反应，制备方法同化合物Id，依次得到化合物Ig(收率52.7％，HPLC：96.37％，MS[M+1]：435)，Ih(收率48.8％，HPLC：95.89％，¹HNMR(400MHz,Acetone-d6)δ8.56(s,1H),8.43(s，1H),7.88(m，1H)，7.64(m，1H)，7.15(m，1H)，6.28(s，1H)，3.82(s,3H)，2.73(s,3H),2.37(s,3H)。MS[M+1]：477)。

实施例12、烷基取代氨基类目标化合物的制备

12-1、化合物In、Ip的制备

其中Ra＝甲基、环丙基，分别制备得到化合物In和Ip。

化合物10a(4.83g，10mmol)溶于NMP(50ml)中，加入甲胺水溶液(10ml)，升温70℃，反应3h。过滤析出的固体，用水洗涤，柱层析纯化得化合物In，收率60.2％，HPLC：96.53％。MS[M+1]：479。

将甲胺换成环丙胺，同样的方法制得化合物Ip，收率57.8％，HPLC：95.76％。MS[M+1]：505。

12-2、化合物Im、Io的制备

其中Ra＝甲基、环丙基，分别制备得到化合物Im和Io

化合物10b(3.85g，10mmol)溶于NMP(50ml)中，加入甲胺水溶液(10ml)，升温70℃，反应3h。过滤析出的固体，用水洗涤，柱层析纯化得化合物Im，收率55.1％，HPLC：95.74％。MS[M+1]：381。

将甲胺换成环丙胺，同样的方法制得化合物Io，收率53.8％，HPLC：94.92％。MS[M+1]：407。

实施例13、激酶活性测试

通过ADP-Glo荧光检测法针对激酶筛选化合物，ATP浓度为25μM。通过Lance UltraAssay测试法针对mTOR筛选化合物，ATP浓度为Km，并使用BKM120和PI103作为对照化合物。

激酶PI3Ks

1、化合物系列稀释和制备源板：1)用100％DMSO将化合物稀释至反应中最终所需的最高抑制剂浓度100x。将100μl的这种化合物稀释液转移到384孔板的孔中。例如，如果需要的最高抑制剂浓度为10μM，则在此步骤中制备1000μM的复合DMSO溶液。2)对于所有化合物，将管中的化合物转移到96孔储存板上的一个孔中，并通过转移10μl到30μl的100％DMSO到下一孔中连续稀释化合物，依此类推，总共10个浓度。3)在同一个384孔板中，无化合物对照和无酶对照的两个空孔中加入50μl 100％DMSO。将该板标记为源板。

2、准备检测板：通过Echo在100％DMSO中将50nl化合物转移到测定板。

3、准备2x激酶溶液：1)在1x激酶缓冲液中制备PI3Kα和PI3Kγ溶液，浓度为检测中每种试剂终浓度的2倍。2)在检测板的每个孔中加入2.5μl激酶溶液，不含酶的对照孔除外(加入2.5μl 1x激酶缓冲液)。3)摇动盘子。

4、准备2x底物溶液：1)在1x激酶反应缓冲液中制备PIP2底物和ATP的底物溶液，浓度是检测中所需的每种试剂最终浓度的2倍。2)在检测板的每个孔中加入2.5μl底物溶液开始反应。3)摇动盘子。

5、激酶反应：盖上检测板并在室温下孵育1小时。

6、激酶检测：1)将ADP-Glo试剂平衡至室温。2)每孔加入5μl ADP-Glo试剂终止反应3)用离心机短暂混匀，在摇床上缓慢摇动，平衡120分钟4)每孔加入10ul激酶检测试剂，摇晃1分钟，平衡30分钟，然后在读板仪上读取发光。

7、在Envision上收集数据并计算IC50值。

激酶mTOR反应

1、准备1x激酶缓冲液用于测试激酶mTOR

2、制备用于测试激酶mTOR的化合物：

1)化合物系列稀释

a)用100DMSO将化合物稀释至反应中最终所需最高抑制剂浓度100x。将100μl的这种化合物稀释液转移到384孔板的孔中。例如，如果需要的最高抑制剂浓度为10μM，则在此步骤中制备1000μM的复合DMSO溶液。

b)对于所有化合物，通过在下一个孔中转移10μl到30μl的100DMSO来连续稀释化合物，依此类推，总共10个浓度。

c)将50μl 100％DMSO添加到同一384孔板中的两个空孔中，用于无化合物对照和无酶对照。将该板标记为源板。

2)准备检测板

通过Echo将100nl化合物从源板转移到检测板。

3、激酶mTOR反应

1)准备2x激酶溶液：在1x激酶缓冲液中制备mTOR溶液，浓度为检测中每种试剂最终浓度的2倍。在检测板的每个孔中加入5μl激酶溶液，不含酶的对照孔除外(加入5μl的1x激酶缓冲液)。摇动盘子。

2)准备2x底物溶液：在1x激酶反应缓冲液中制备ULight-4E-BP1肽底物和ATP的底物溶液，浓度是检测中所需的每种试剂最终浓度的2倍。在检测板的每个孔中加入5μl底物溶液开始反应。摇动盘子。

3)激酶mTOR反应：在测定板上并在室温下孵育30分钟。

4、激酶检测

1)在Lance检测缓冲液中以每种试剂所需终浓度的2倍制备激酶淬灭缓冲液(EDTA)和Eu-anti-phospho-4E-BP1抗体的检测溶液。

2)在检测板的每个孔中加入10μl检测溶液缓冲液。

3)用离心机短暂混合。盖住检测板，让板在室温下平衡60分钟，然后在读板器上读数。

5、在Envision上收集数据并计算IC50值。

激酶活性测试结果见下表3：

表3

实施例14、体内抑瘤效果

方法：

将1×10⁷个人胃癌HGC27细胞注射入裸小鼠腋下，传三代后，剖取HGC27种鼠瘤块，放入盛有生理盐水的玻璃皿内，剥弃表面血管，切开去除坏死区域后，将瘤块切成1～2mm³，用套管针接入瘤块于裸小鼠左腋下。待肿瘤生长至平均体积100～300mm³后，将动物按瘤体积随机分组后每天灌胃给予Ic和Id。在给药过程中，每周称重和测量肿瘤体积2次，给药17天，于第18天称量体重，测量肿瘤体积，处死裸小鼠取瘤块称重，计算相对肿瘤体积(RTV)、相对肿瘤增值率(T/C)，并用SPSS 19.0进行统计学分析。

计算公式如下：

(1)TV(tumor volume)＝1/2×a×b²，其中a、b分别表示肿瘤的长和宽；

(2)RTV(relative tumor volume)＝V_t/V₀，其中V0为分组给药时(即d0)所测得的肿瘤体积，Vt为每一次测量时的肿瘤体积；

(3)T/C(％)＝T_RTV/C_RTV×100％，其中T_RTV为治疗组的RTV，C_RTV为溶剂对照组的RTV；

(4)IR(％)＝(1-TWt/TWc)×100％，其中TWt为治疗组的瘤重，TWc为溶剂对照组的瘤重。

结果：

本实验条件下，化合物Ic和Id 10mg/kg灌胃给药均能明显抑制人胃癌HGC27裸小鼠移植瘤的生长，且未见明显毒性,裸小鼠体重变化如图1。二者对人胃癌HGC27裸小鼠移植瘤体积及肿瘤体积影响见表4，对肿瘤重量的影响如表5和图2所示：

表4化合物Ic和Id对人胃癌HGC27裸小鼠移植瘤的实验治疗作用

t-test，与Vehicle相比，***：P<0.001，**：P<0.01，*：P<0.05。

表5：化合物Ic和Id对人胃癌HGC27裸小鼠移植瘤的肿瘤重量的影响

t-test，与Vehicle相比，***：P<0.001，**：P<0.01，*：P<0.05。

以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改，这并不影响本发明的实质内容。