CN116042449A - 一种枯草芽孢杆菌及其在中华绒螯蟹病害防治中的应用 - Google Patents

一种枯草芽孢杆菌及其在中华绒螯蟹病害防治中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种枯草芽孢杆菌，具体涉及一种筛选出来的对水产动物致病菌有拮抗效果的枯草芽孢杆菌JK‑2；本发明的枯草芽孢杆菌JK‑2能够应用于拮抗水产动物致病菌；本发明的枯草芽孢杆菌JK‑2能够显著提升中华绒螯蟹的血清和肝胰腺中的溶菌酶的活力，能够增强中华绒螯蟹机体对病原菌的清除能力，可以应用于中华绒螯蟹的病害防治。

Description

一种枯草芽孢杆菌及其在中华绒螯蟹病害防治中的应用
技术领域
本发明涉及一种枯草芽孢杆菌，及其在中华绒螯蟹病害防治中的应用，具体涉及枯草芽孢杆菌JK-2及其微生物菌剂，以及它们在拮抗水产动物致病菌方面的应用，在防治中华绒螯蟹细菌性疾病方面的应用等，属于水产抗菌药物技术领域。
背景技术
近年来，随着集约化养殖的迅速发展，细菌性疾病已经成为中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis)养殖中最常见也是危害最大的一类疾病，其在各年病害暴发病例中比例最大。
例如，水产养殖环境中的点状产气单胞菌、嗜水气单胞菌、弗氏柠檬酸杆菌、维氏气单胞菌等多种病原菌引起的诸如烂鳃病、肠炎病、颤抖病和肝胰腺坏死病等病害对我国中华绒螯蟹养殖造成了巨大的经济损失。总的来说，病原菌种类多、繁殖速度快、致病力强和发病率高等问题，严重影响了我国中华绒螯蟹养殖业的健康发展。
在水产病害的防治领域，过去的激素类药物、化学药物和抗生素类药物，因其毒副作用、耐药性，特别是药物残留对养殖环境的破坏性和对水产品的质量的威胁性，已逐渐被高效且零残留的微生物菌剂所替代；微生物菌剂安全性高，能够改善养殖生态环境，也不易产生耐药性，还可以提高营养物质的利用效率，增强水产养殖动物免疫力，促进机体新陈代谢和生长，并且还拥有价格低廉和来源丰富的优点。
如何利用微生物菌剂增强中华绒螯蟹对细菌性疾病的抗病力成为养殖业亟需解决的问题。
目前，增强中华绒螯蟹机体的抗氧化能力和免疫力，是中华绒螯蟹细菌性疾病防控的最有效的策略之一。例如，目前已公开的解淀粉酶芽孢杆菌、甲基营养型芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌等芽孢杆菌属的一些优良菌株具有良好的抗菌活性，在增强机体抗氧化能力和免疫力方面具有良好的效果，极大地丰富了芽孢杆菌作为中华绒螯蟹细菌性疾病生物防控产品开发的微生物资源。
因此，本领域希望筛选拮抗水产动物致病菌的新菌株，开发有效的防治中华绒螯蟹病害的微生物菌剂。
发明内容
鉴于相关技术的上述问题和/或其他问题，本发明第一方面提供了一种枯草芽孢杆菌JK-2，该枯草芽孢杆菌JK-2保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No：M20221568。
本发明第二方面提供了一种微生物菌剂，其中，所述微生物菌剂包含上述的枯草芽孢杆菌JK-2。
优选的，所述微生物菌剂包含上述的枯草芽孢杆菌JK-2的发酵菌液或所述发酵菌液制得的菌液制剂或所述发酵菌液经干燥制得的菌粉制剂。
本发明第三方面提供了上述的枯草芽孢杆菌JK-2或者上述的微生物菌剂在拮抗水产动物致病菌方面的应用。
具体在本申请中，水产动物致病菌是指淡水水产养殖环境中常见的致病菌。
优选的，所述水产动物致病菌为虾蟹类动物致病菌。
具体在本申请中，虾蟹类动物致病菌是指淡水水产养殖环境中常见的导致虾蟹类动物病害的致病菌，例如，点状产气单胞菌、嗜水气单胞菌、弗氏柠檬酸杆菌、维氏气单胞菌、产碱普罗维登菌等病原菌。
优选的，所述虾蟹类动物致病菌选自维氏气单胞菌、嗜水气单胞菌、点状气单胞菌、产碱普罗维登菌和弗氏柠檬酸杆菌。
本发明第四方面提供了一种拮抗水产动物致病菌的产品，所述产品包含上述的枯草芽孢杆菌JK-2或者上述的微生物菌剂。
本发明第五方面提供了上述的枯草芽孢杆菌JK-2或上述的微生物菌剂在提高中华绒螯蟹的血清溶菌酶活力和/或肝胰腺溶菌酶活力方面的应用。
本发明第六方面提供了一种中华绒螯蟹饲料，所述中华绒螯蟹饲料包含饲料基础组分和上述的枯草芽孢杆菌JK-2。
本发明第七方面提供了上述的枯草芽孢杆菌JK-2或上述的微生物菌剂或上述的中华绒螯蟹饲料在中华绒螯蟹细菌性疾病防治方面的应用。
本发明涉及一种枯草芽孢杆菌，具体涉及一种筛选出来的对水产动物致病菌有拮抗效果的枯草芽孢杆菌JK-2；本发明的枯草芽孢杆菌JK-2能够应用于拮抗水产动物致病菌；本发明的枯草芽孢杆菌JK-2能够显著提升中华绒螯蟹的血清和肝胰腺中的溶菌酶的活力，能够增强中华绒螯蟹机体对病原菌的清除能力，可以应用于中华绒螯蟹的病害防治。
附图说明
图1为初筛分离的四株菌株(JK-1、JK-2、JK-3和JK-4)和对照菌株对维氏气单胞菌HXH1的拮抗活性；
图2为菌株JK-2对其他四种已知的水产致病菌的拮抗活性；
图3为菌株JK-2在营养琼脂平板上形成的菌落形态照片；
图4为菌株JK-2经革兰氏染色后在100倍光学显微镜下的照片；
图5为菌株JK-2对中华绒螯蟹血清溶菌酶含量的影响；
图6为菌株JK-2对中华绒螯蟹肝胰腺溶菌酶含量的影响；
图7为基于菌株JK2的16S rRNA序列构建的***发育树。
具体实施方式
以下通过具体实施方式对本发明作进一步的说明，但本发明并不限于这些具体实施方式。
下面具体实施方式中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。其中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或按照产品说明书进行。
一、下面介绍本申请发明人从自然环境中分离筛选获得本发明的防治中华绒螯蟹细菌性疾病的新菌株—枯草芽孢杆菌JK-2(Bacillus subtilis JK-2)CCTCC No：M20221568的操作过程。
1)初筛
取养殖淤泥1.0g(取自山东省威海市某养殖池塘)混悬于9mL无菌生理盐水中，振荡混匀后于80℃水浴静置10min，在营养琼脂平板(营养琼脂购自国药集团化学试剂有限公司)上采用稀释涂布平板法和划线平板法进行菌株的分离和纯化。
将纯化后的单菌落分别接至无菌营养肉汤(购自国药集团化学试剂有限公司)，在33℃、180r/min条件下摇床振荡培养24h后，无菌操作吸取0.1mL培养液均匀涂布于营养琼脂平板上，于33℃恒温培养24h后用0.85％无菌生理盐水洗下菌苔制成终浓度为1.0×109CFU/mL的菌悬液，保存备用。
初筛步骤中，从养殖淤泥中成功分离出了4株菌株(分别记名为：JK-1、JK-2、JK-3和JK-4)。
2)进一步筛选
以致病菌“维氏气单胞菌HXH1”(购自国家水生动物病原库)作为筛选指示菌；无菌操作吸取0.1mL维氏气单胞菌HXH1菌悬液均匀涂布于营养琼脂平板上，接着无菌操作在平板上贴上含10μL上述初筛获得的四个菌株的菌悬液(浓度为1.0×109CFU/mL)的滤纸片，于33℃恒温培养24h后测定抑菌圈直径(H)和菌落直径(C)的比值(H/C)。
同时，以已知的解淀粉芽孢杆菌G1和地衣芽孢杆菌PNB3(购自国家水生动物病原库)，作为阳性对照拮抗菌株，测定抑菌圈直径(H)和菌落直径(C)的比值(H/C)。
实验结果参见图1。从图1中可以看出，菌株JK2对致病菌维氏气单胞菌HXH1的拮抗活性最强。具体来说，菌株JK2对维氏气单胞菌HXH1的H/C比值为2.66，分别较菌株JK1、JK3、JK4的H/C高出47.78％(P<0.05)、27.27％(P<0.05)和97.04％(P<0.05)；比阳性对照拮抗菌株(解淀粉芽孢杆菌G1和地衣芽孢杆菌PNB3)对维氏气单胞菌HXH1的H/C分别高出10.83％(P<0.05)、22.02％(P<0.05)。
本文中的实验数据以平均值±标准偏差进行表示，采用SPSS 19.0软件进行统计学分析，P<0.05表示差异具有显著性(以下皆同)。
为进一步验证上述抑菌结果，将菌株JK-2在内的候选菌株，按照上述的操作进一步测定对四种已知的水产动物致病菌“嗜水气单胞菌WS05”、“点状气单胞菌DD5”、“产碱普罗维登菌P3”和“弗氏柠檬酸杆菌C1”(均购自国家水生动物病原库)的抑菌圈直径(H)和菌落直径(C)的比值(H/C)。
实验结果参见图2，可以看出菌株JK2对四种已知的水产动物致病菌“嗜水气单胞菌WS05”、“点状气单胞菌DD5”、“产碱普罗维登菌P3”、“弗氏柠檬酸杆菌C1”也具有良好的拮抗活性，H/C值均大于1.80。
因此，将菌株JK-2作为筛选出来的优良菌株。
维氏气单胞菌HXH1、嗜水气单胞菌WS05、点状气单胞菌DD5、产碱普罗维登菌P3、弗氏柠檬酸杆菌C1，都是较为常见的虾蟹类动物致病菌。基于上述结果，本领域技术人员可以想到将筛选出来的菌株JK-2应用于拮抗水产动物致病菌，特别是应用于拮抗虾蟹类动物致病菌；可以想到将筛选出来的菌株JK-2用于拮抗水产动物致病菌的产品。
二、关于筛选获得的菌株JK-2的鉴定过程如下：
(1)分子生物学鉴定
根据细菌16S rRNA序列，采用***发育分析对筛选获得的菌株JK-2进行分子生物学的鉴定。
具体的，将筛选获得的菌株JK-2，接种到100mL无菌营养肉汤中，在33℃、180r/min条件下培养24h后，于4℃、12000r/min离心1min，弃上清，然后采用Ezup柱式基因组DNA抽提试剂盒提取菌株JK-2的基因组DNA。
然后以获得的基因组DNA为模板，对其16S rRNA进行PCR扩增。其中，正向引物为27F：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′，反向引物为1492R：5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′；PCR扩增体系(20μL)为Premix Taq 10μL、上下游引物各1μL、模板1μL、ddH2O 7μL；PCR的扩增条件为：94℃3min；94℃1min，60℃1min，72℃1min，共35个循环。由上海迈浦生物科技有限公司对扩增获得的16S rRNA基因测序。
测定的菌株JK-2的16S rRNA对应的DNA序列如下(SEQ ID NO.1)：
ACTTTTTGTTCACTTCGGGCGGCTGGCTCCTAAAGGTTACCTCACCGACTTCGGGTGTTACAAACTCTCGTGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCAGCTTCACGCAGTCGAGTTGCAGACTGCGATCCGAACTGAGAACAGATTTGTGGGATTGGCTTAACCTCGCGGTTTCGCTGCCCTTTGTTCTGTCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCACCTTAGAGTGCCCAACTGAATGCTGGCAACTAAGATCAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTCACTCTGCCCCCGAAGGGGACGTCCTATCTCTAGGATTGTCAGAGGATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGTCTTGCGACCGTACTCCCCAGGCGGAGTGCTTAATGCGTTAGCTGCAGCACTAAGGGGCGGAAACCCCCTAACACTTAGCACTCATCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTCCCCACGCTTTCGCTCCTCAGCGTCAGTTACAGACCAGAGAGTCGCCTTCGCCACTGGTGTTCCTCCACATCTCTACGCATTTCACCGCTACACGTGGAATTCCACTCTCCTCTTCTGCACTCAAGTTCCCCAGTTTCCAATGACCCTCCCCGGTTGAGCCGGGGGCTTTCACATCAGACTTAAGAAACCGCCTGCGAGCCCTTTACGCCCAATAATTCCGGACAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGGCTTTCTGGTTAGGTACCGTCAAGGTACCGCCCTATTCGAACGGTACTTGTTCTTCCCTAACAACAGAGCTTTACGATCCGAAAACCTTCATCACTCACGCGGCGTTGCTCCGTCAGACTTTCGTCCATTGCGGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAGTGTGGCCGATCACCCTCTCAGGTCGGCTACGCATCGTTGCCTTGGTGAGCCGTTACCTCACCAACTAGCTAATGCGCCGCGGGTCCATCTGTAAGTGGTAGCCGAAGCCACCTTTTATGTTTGAACCATGCGGTTCAAACAAGCATCCGGTATTAGCCCCGGTTTCCCGGAGTTATCCCAGTCTTACAGGCAGGTTACCCACGTGTTACTCACCCGTCCGCCGCTAACATCAGGGAGCAAGCTCCCATCTGTCCGCTCGACTGCATTATAGCAGGCCCCCCCGCCC。
利用NCBI的BLAST对菌株JK-2的16S rRNA序列进行同源性比较，从比对结果看，菌株JK-2的16S rRNA序列与GenBank数据库中枯草芽孢杆菌的16S rRNA序列自然聚类，同源性达99％以上。
再利用MEGA 5.0软件采用邻接法(Neighbor-joining，重复度F1000)构建***发育树，进一步证明菌株JK-2与枯草芽孢杆菌A65.1(GenBank登录号：ON366398)的亲缘关系最近；具体参见图7。
(2)形态学鉴定
菌株JK-2在营养琼脂平板上形成的菌落形态参见图3，其菌落特征为白色、边缘不整齐、光滑、易挑取。
菌株JK-2为革兰氏染色阳性菌，其经革兰氏染色后，在100倍光学显微镜下的照片参见图4，可以看出其形态为杆状。在形态上与常见的枯草芽孢杆菌类似。
(3)生理生化鉴定
参照东秀珠等编订的《常见细菌***鉴定手册》(第一版)中相应属、种鉴定的有关内容选择生理生化试验性状，采用细菌微量生化鉴定管，对菌株JK-2进行生理生化鉴定。
鉴定结果参见下表1：
从上表1可以看出，菌株JK-2与枯草芽孢杆菌B25(文献：林宝英，枯草芽孢杆菌B25抗真菌活性物质的部分特性分析及分离纯化，海南大学，2013)的生理生化特征完全一致。
综上，结合16S rRNA分子鉴定、形态学观察和生理生化鉴定的结果，可以判定本发明筛选获得的菌株JK-2为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。
三、关于菌株的保藏
本发明的菌株JK-2，属于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址：中国武汉，保藏日期为2022年10月14日，其保藏编号为CCTCC No：M 20221568。
四、本发明的菌株JK-2的发酵培养方法
将本发明的菌株JK-2的单菌落接种至20mL营养肉汤或其他芽孢杆菌发酵培养基，于33℃、180r/min摇床振荡培养24小时，使其菌液浓度大于108CFU/mL；再将其以10％接种量转接至200mL营养肉汤或其他芽孢杆菌发酵培养基，于33℃、180r/min摇床振荡培养24小时，获得的发酵液为本发明的菌株JK-2的发酵液。经检测，该发酵液的菌浓度大约为109-1010CFU/mL。
本发明的菌株JK-2的生长速度快，并且发酵培养的操作条件较为简单，在好氧、无菌发酵培养基环境下进行快速高密度发酵，节省能源，减少杂菌污染，获得的发酵产品质量可控。综上，本发明的菌株JK-2是一种可以适用于产业化的发酵生产的优良菌株。
五、本发明的枯草芽孢杆菌JK-2对中华绒螯蟹的安全性试验
试验设1个对照组和5个实验组，每组3个平行，分别在盛有60L曝气自来水的塑料水族缸(76cm×45cm×55cm)中放入健康中华绒螯蟹10只，水温控制在28℃。试验组中华绒螯蟹分别在第三步足基部注射0.2mL终浓度为1.0×105、1.0×106、1.0×107、1.0×108、1.0×109CFU/mL的枯草芽孢杆菌JK-2菌悬液(在无菌生理盐水中形成的菌悬液)；对照组注射等量的无菌生理盐水。试验周期为7d。试验期间每天记录试验中华绒螯蟹的死亡数量，并采用Bliss法计算枯草芽孢杆菌JK-2对中华绒螯蟹的半数致死浓度(LC50)。
枯草芽孢杆菌JK-2对中华绒螯蟹的安全性试验结果表明：浓度1.0×105～1.0×109CFU/mL的菌株JK2注射健康中华绒螯蟹，中华绒螯蟹均活力正常，未出现附肢无力、打斗和死亡现象，而且对照组也未出现任何死亡与不正常现象，说明枯草芽孢杆菌JK-2对中华绒螯蟹的LC50>1.0×109CFU/mL。
六、本发明的枯草芽孢杆菌JK-2对防治中华绒螯蟹细菌性疾病的应用效果
选取无病伤、体质健壮、规格均匀的健康中华绒螯蟹置于水族箱，箱内放入瓦片作为隐蔽物，并用基础饲料对中华绒螯蟹进行驯化，待蟹摄食正常无死亡，状态稳定后开始进行试验。
试验设3个试验组和1个对照组，每组各有3个平行水族箱，每个水族箱各40只。
试验组：投喂饲料中添加本发明的枯草芽孢杆菌JK-2；具体来说，在基础饲料(购自江苏洪祥饲料科技有限公司的穆墩岛牌的河蟹配合饲料)中，分别加入枯草芽孢杆菌JK-2的菌悬液(在无菌水中形成的菌悬液)，使得饲料中的枯草芽孢杆菌JK-2的终含量为1.0×105、1.0×106、1.0×107CFU/g饲料，作为3个试验组的投喂饲料。
对照组：投喂基础饲料(不添加微生物菌)。
每天于8:00、18:00各投喂1次，投喂量为蟹体质量的3％。试验周期为20d。试验期间保持水温为28℃，pH≤8.0，氨氮≤0.20mg/L，亚硝酸盐≤0.01mg/L，溶解氧≥5.5mg/L，每天换水一次，换水量为水容量的1/3，采用40W日光灯为光源，光照与黑暗时长分别12h。
试验结束后，分别从各组中随机选取5只蟹采集其血淋巴和肝胰腺，按照试剂盒(南京建成生物工程研究所的溶菌酶(LZM)测试盒)说明书操作测定血清和肝胰腺中的溶菌酶的含量，结果参见图5和图6。
附注：图5和图6中，T0组表示投喂基础饲料(不添加微生物菌)的对照组；T1组表示投喂添加了终含量为1.0×105CFU/g饲料的枯草芽孢杆菌JK-2的饲料的试验组1；T2组表示投喂添加了终含量为1.0×106CFU/g饲料的枯草芽孢杆菌JK-2的饲料的试验组2；T3组表示投喂添加了终含量为1.0×107CFU/g的枯草芽孢杆菌JK-2的饲料的试验组3。
从图5的实验结果可以看出，T1-3组(采用菌株JK2终含量分别为1.0×105～1.0×107CFU/g的饲料连续投喂中华绒螯蟹20d)，中华绒螯蟹的血清溶菌酶活力明显增强，具体来说，分别较T0组(投喂基础饲料)的结果提高了5.91％～10.97％(P<0.05)。
从图6的实验结果可以看出，T1-3组(采用菌株JK2终含量分别为1.0×105～1.0×107CFU/g的饲料连续投喂中华绒螯蟹20d)，中华绒螯蟹的肝胰腺溶菌酶活力显著增强，具体来说，分别较T0组(投喂基础饲料)的结果提高了71.77％～132.26％(P<0.05)；并且肝胰腺溶菌酶活力随菌株JK2的含量的增加而显著提升。
这说明，在基础饲料中添加本发明的枯草芽孢杆菌JK-2能够提升中华绒螯蟹的血清和肝胰腺中的溶菌酶的活力，特别是显著提升肝胰腺中的溶菌酶的活力，能够增强中华绒螯蟹机体对病原菌的清除能力。
基于上述结果，本领域技术人员可以想到将本发明的枯草芽孢杆菌JK-2应用于提高中华绒螯蟹的血清溶菌酶活力和/或肝胰腺溶菌酶活力，应用于提高中华绒螯蟹机体对病原菌的清除能力，应用于防治中华绒螯蟹细菌性疾病。
基于上述结果，本领域技术人员可以想到将本发明的枯草芽孢杆菌JK-2添加到中华绒螯蟹的饲料中。鉴于枯草芽孢杆菌JK-2对中华绒螯蟹的LC50>1.0×109CFU/mL，以及血清溶菌酶和肝胰腺溶菌酶活力随菌株JK2的含量的增加(基于图5和图6中结果的合理推测)，因此，中华绒螯蟹饲料中枯草芽孢杆菌JK-2的浓度可以为1.0×105～1.0×109CFU/g饲料，例如1.0×105、1.0×106、1.0×107、1.0×108或1.0×109CFU/g饲料。
为进一步验证“本发明的枯草芽孢杆菌JK-2能够增强中华绒螯蟹机体对病原菌的清除能力”，分别从各组中随机选取10只蟹进行人工感染试验，分别对对照组和试验组中的中华绒螯蟹投喂基础饲料中添加含浓度为1.0×107CFU/g饲料的维氏气单胞菌HXH1的病菌饲料。病菌饲料于每日8:00、18:00各投喂1次，投喂量为蟹体质量的3％，连续投喂7天后观察并记录各组中华绒螯蟹的死亡情况，计算死亡率(％)；并根据下述公式(1)计算抗病保护率(％)。
统计结果参见下表2：
从表2中的结果可以看出，试验组(投喂过含有本发明枯草芽孢杆菌JK-2的饲料)的中华绒螯蟹拮抗致病菌(维氏气单胞菌HXH1)感染的能力显著增强。T1-T3试验组的中华绒螯蟹的死亡率，相较于对照组T0组的死亡率降低了43.34％～66.67％(P<0.05)。
这说明，投喂在基础饲料中添加本发明的枯草芽孢杆菌JK-2的饲料能够显著提升中华绒螯蟹对致病菌(维氏气单胞菌HXH1)的抗感染能力。
综上，基于上述的本发明枯草芽孢杆菌JK-2的抑菌实验结果(图1和图2的拮抗致病菌维氏气单胞菌HXH1、嗜水气单胞菌WS05、点状气单胞菌DD5、产碱普罗维登菌P3和弗氏柠檬酸杆菌C1的实验结果)，生理生化鉴定结果，以及第五和六部分的对中华绒螯蟹的安全性试验和防治中华绒螯蟹细菌性疾病的应用实验结果，本领域技术人员可以将本发明枯草芽孢杆菌JK-2用作生防菌剂，应用于拮抗水产动物致病菌，特别是拮抗虾蟹类致病菌。可以将其作为生防菌剂添加到中华绒螯蟹的饲料中，增强中华绒螯蟹机体的抗感染能力(对病原菌的清除能力)，应用于防治中华绒螯蟹细菌性疾病。
本领域技术人员可以通过常规的枯草芽孢杆菌发酵方法(例如上述第四部分)发酵生产本发明枯草芽孢杆菌JK-2，可以按照常规的微生物工业化生产方法获得枯草芽孢杆菌JK-2发酵菌液或所述发酵菌液制得的菌液制剂或所述发酵菌液经干燥制得的菌粉制剂。
应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施方式中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本发明的可行性实施方式的具体说明，它们并非用以限制本发明的保护范围，凡未脱离本发明技艺精神所作的等效实施方式或变更均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种枯草芽孢杆菌JK-2，该枯草芽孢杆菌JK-2保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No：M 20221568。
2.一种微生物菌剂，其特征在于：所述微生物菌剂包含如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌JK-2。
3.如权利要求2所述的微生物菌剂，其特征在于：所述微生物菌剂包含如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌JK-2的发酵菌液或所述发酵菌液制得的菌液制剂或所述发酵菌液经干燥制得的菌粉制剂。
4.如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌JK-2或者如权利要求2所述的微生物菌剂在拮抗水产动物致病菌方面的应用。
5.如权利要求4所述应用，其特征在于：所述水产动物致病菌为虾蟹类动物致病菌。
6.如权利要求5所述应用，其特征在于：所述虾蟹类动物致病菌选自维氏气单胞菌、嗜水气单胞菌、点状气单胞菌、产碱普罗维登菌和弗氏柠檬酸杆菌。
7.一种拮抗水产动物致病菌的产品，其特征在于：所述产品包含如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌JK-2或者如权利要求2所述的微生物菌剂。
8.如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌JK-2或如权利要求2所述的微生物菌剂在提高中华绒螯蟹的血清溶菌酶活力和/或肝胰腺溶菌酶活力方面的应用。
9.一种中华绒螯蟹饲料，其特征在于：所述中华绒螯蟹饲料包含饲料基础组分和如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌JK-2。
10.如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌JK-2或如权利要求2所述的微生物菌剂或如权利要求9所述的中华绒螯蟹饲料在中华绒螯蟹细菌性疾病防治方面的应用。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN117683687A (zh) * 2023-12-19 2024-03-12 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 一株芽孢杆菌Bacillus-W2Z及其应用和饲料

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