CN116035973A - 一种含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物及在婴童护肤应用 - Google Patents

一种含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物及在婴童护肤应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及婴童护理产品技术领域，具体公开了一种含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物及在婴童护肤应用。组合物由山茶花、金盏花、油橄榄叶提取而成。制备方法包括：1、将山茶花、金盏花粉碎，加入复合糖苷酶，加入水，酶解提取，灭酶，加入油橄榄叶，提取，过滤；2、浓缩，过滤；3、加入金属硫蛋白磁性纳米吸附材料和壳聚糖磁性纳米吸附材料，搅拌吸附；4、交替进行有氧加热磁化老化和无氧冷冻老化；5、分离金属硫蛋白磁性纳米吸附材料和壳聚糖磁性纳米吸附材料；6、超滤；7、加入1，3‑丁二醇，纳滤，得含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物。本发明具有提高具有舒缓抗敏功效的婴童护理产品的安全性和稳定性并降低刺激性的优点。

Description

一种含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物及在婴童护肤应用
技术领域
本发明涉及婴童护理产品领域，尤其是涉及一种含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物及在婴童护肤应用。
背景技术
婴童护理产品是个人护理品领域的特殊分支，消费群体对这一领域的安全性诉求更为严苛，高安全性，高稳定性，低刺激性是这一类产品的核心理念。而配方中多应用天然草本成分，减少防腐剂、乳化剂、香精的使用量，是实现这一理念的成分基础。
然而，一方面由于环境污染或者有些新生的风化土中带有较多的重金属，很多植物原材料富集了土壤重金属带入产品，造成皮肤伤害；另一方面，很多植物成分本身也是不稳定因素，比如常用的具有舒缓作用的药材山茶花、金盏花中含有大量的黄酮类成分，此类成分含有多酚羟基结构，容易氧化形成醌类成分，可以使细胞蛋白质和DNA发生烷基化，从而导致细胞损伤和DNA加合物形成，并可以与相应的对苯二酚和半醌自由基形式氧化还原循环，从而形成刺激性的自由基(ROS)。
相对于食品的产品形式以固体为主，个人护理品大部分是水为主要成分的配方，其溶氧量更高，更容易在货架期内发生上述过程，因此克服植物原料在个人护理品特别是要求更高的婴童护理产品中的使用隐患具有现实的指导意义，因此，还有改善空间。
发明内容
为了进一步提高具有舒缓抗敏功效的婴童护理产品的安全性和稳定性并降低刺激性，本申请提供一种含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物及在婴童护肤应用。
第一方面，本申请提供一种含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物，采用如下的技术方案：
一种含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物，由以下质量比例的组分提取而成：
山茶花：金盏花：油橄榄叶＝1-3：1-3：1-3；
所述含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物的制备方法包括以下步骤：
步骤1)，将山茶花、金盏花粉碎，加入复合糖苷酶，加入山茶花、金盏花总投入量6-8倍水，恒温40-45℃，pH4.5-5.0，外循环酶解提取3-4h，加热灭酶，加入油橄榄叶，外循环提取2-3h，过滤得透过液；
步骤2)，将透过液浓缩，过滤，得浓缩透过液；
步骤3)，向浓缩透过液中加入金属硫蛋白磁性纳米吸附材料和壳聚糖磁性纳米吸附材料，常温搅拌吸附1-2h，得混合液；
步骤4)，将混合液交替进行有氧加热磁化老化和无氧冷冻老化，得处理液；
步骤5)，将金属硫蛋白磁性纳米吸附材料和壳聚糖磁性纳米吸附材料从处理液中分离，得处理液；
步骤6)，将处理液超滤，得超滤液；
步骤7)，向超滤液中加入1，3-丁二醇至1，3-丁二醇在体系中的质量比例为40-60％，纳滤至液体质量等于山茶花、金盏花、油橄榄叶的总投入量，得含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物。
通过采用上述技术方案，选择性的去除重金属和不稳定的天然成分，增加植物提取物产品的稳定性和安全性，降低植物提取物产品的刺激性，制得的含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物应用在婴童护理产品中后，使得婴童护理产品具有舒缓抗敏功效的同时能具有更好地稳定性、安全性，并且刺激性得到进一步下降，更为适合婴童娇嫩的皮肤。
通过提取和酶解集成技术，在提取的同时，将黄酮类成分和花色素苷水解成溶解度更小的苷元而除去，增加产品的安全性和稳定性，减少变色现象。
通过组合使用金属硫蛋白磁性纳米吸附材料和壳聚糖磁性纳米吸附材料，除去重金属成分，并去除自由基，增加产品的安全性，并可重复使用吸附材料。
通过组合交替有氧加热磁化老化和无氧冷冻老化，使得刺激性的有机酸成分和醇形成酯而去除，多酚或者鞣质成分聚合成大分子而去除，增加产品的安全性和稳定性，降低产品刺激性。
优选的，所述步骤1)中，复合糖苷酶为α葡萄糖苷酶、β葡萄糖苷酶、鼠李糖苷酶、β半乳糖苷酶、β木糖苷酶、α***糖苷酶的复配。
通过采用上述技术方案，通过α葡萄糖苷酶、β葡萄糖苷酶、鼠李糖苷酶、β半乳糖苷酶、β木糖苷酶、α***糖苷酶协同配合，将黄酮类成分和花色素苷水解成溶解度更小的苷元而除去的效果更佳，产品具有更高的安全性和稳定性。
优选的，所述步骤3)中，金属硫蛋白磁性纳米吸附材料由金属硫蛋白、丙烯酸、水、Fe3O4纳米颗粒、N，N-亚甲基双丙烯酰胺、偶氮二异丁腈复配制得。
通过采用上述技术方案，使得金属硫蛋白磁性纳米吸附材料除去重金属成分以及去除自由基的效果更佳，更好地增加产品的安全性。
优选的，所述金属硫蛋白、丙烯酸、水、Fe3O4纳米颗粒、N，N-亚甲基双丙烯酰胺、偶氮二异丁腈的质量比例为90：4：200：10：5：5。
通过采用上述技术方案，制得的金属硫蛋白磁性纳米吸附材料质量更佳，能发挥出更为优异的除去重金属成分以及去除自由基的效果。
优选的，所述金属硫蛋白磁性纳米吸附材料的制备方法如下：
将水、丙烯酸、金属硫蛋白搅拌溶解，然后加入Fe3O4纳米颗粒，搅拌均匀，然后加入N，N-亚甲基双丙烯酰胺和偶氮二异丁腈，搅拌，超声，得到混合均匀的悬浊液，加热反应，过滤，干燥，粉碎，得金属硫蛋白磁性纳米吸附材料。
通过采用上述技术方案，通过特殊的工艺，制得的金属硫蛋白磁性纳米吸附材料的吸附效果更佳，更好地除去重金属成分以及去除自由基，使产品稳定性、安全性均更进一步提高。
优选的，所述步骤3)中，壳聚糖磁性纳米吸附材料由壳聚糖、FeCl3·6H2O、FeCl2、氢氧化钠复配制得。
通过采用上述技术方案，制得的壳聚糖磁性纳米吸附材料更好地与金属硫蛋白磁性纳米吸附材料配合，除去重金属成分以及去除自由基的效果更佳。
优选的，所述壳聚糖、FeCl3·6H2O、FeCl2、氢氧化钠的质量比例为1：1.9：0.6：1.2。
通过采用上述技术方案，制得的壳聚糖磁性纳米吸附材料的吸附效果更佳，具有更好的除去重金属成分以及去除自由基的效果。
优选的，所述壳聚糖磁性纳米吸附材料的制备方法如下：
将水、FeCl3·6H2O、FeCl2搅匀，然后加入壳聚糖，分散成1％的混悬液，加入酸，调节至酸性，搅拌至澄清，滴加碱，生成沉淀，过滤沉淀，加入戊二醛溶液，常温搅拌，再次过滤沉淀，水洗，沉淀加水，分散成混悬液，加热反应，冷却，过滤、干燥、粉碎即得。
通过采用上述技术方案，通过特殊工艺制得的壳聚糖磁性纳米吸附材料能更好地除去重金属成分以及去除自由基，使产品稳定性、安全性均更进一步提高。
优选的，所述步骤4)中，将混合液交替进行有氧加热磁化老化和无氧冷冻老化的具体步骤为：将混合液通入电磁转化罐，50-60℃通氧气磁化24h，通氮气冷冻6h，交替3次，磁感应强度为0.2-0.3T，氧气通入量为2罐体积/h，冷冻前的氮气通入量为3罐体积/h，冷冻后的氮气通入量为1罐体积/h。
通过采用上述技术方案，使得刺激性的有机酸成分和醇形成酯而去除的效果更佳，并且更好地使多酚或者鞣质成分聚合成大分子而去除，更好地增加了产品的安全性和稳定性，以及更进一步地降低了产品的刺激性。
第二方面，本申请提供一种含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物在婴童护肤的应用，采用如下的技术方案：
一种上述的含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物在婴童护肤的应用，所述含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物添加至婴童护理品中用于制备婴童护理品，所述含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物在婴童护理品的添加量为0.5-10％。
通过采用上述技术方案，制得的婴童护理产品具有较好的舒缓、抗敏等功效，并且有效降低了重金属污染带来的危害，降低了产品刺激性，提高了产品安全性和稳定性，产品更为亲肤，十分适合婴童娇嫩的肌肤。
综上所述，本申请具有以下有益效果：
1、由于本申请通过特殊的工艺配合，选择性的去除重金属和不稳定的天然成分，将黄酮类成分和花色素苷水解成溶解度更小的苷元而除去，使得刺激性的有机酸成分和醇形成酯而去除，多酚或者鞣质成分聚合成大分子而去除，去除自由基，增加植物提取物产品的稳定性和安全性，降低植物提取物产品的刺激性，减少变色现象，制得的含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物应用在婴童护理产品中后，使得婴童护理产品具有舒缓抗敏功效的同时能具有更好地稳定性、安全性，并且刺激性得到进一步下降，更为适合婴童娇嫩的皮肤。
2、本申请中优选通过α葡萄糖苷酶、β葡萄糖苷酶、鼠李糖苷酶、β半乳糖苷酶、β木糖苷酶、α***糖苷酶协同配合，将黄酮类成分和花色素苷水解成溶解度更小的苷元而除去的效果更佳，产品具有更高的安全性和稳定性。
具体实施方式
以下结合实施例对本申请作进一步详细说明。
实施例1
一种含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物，由以下组分提取而成：
山茶花、金盏花、油橄榄叶，山茶花、金盏花、油橄榄叶的质量比例为3：1：3，即山茶花投入量为3kg、金盏花的投入量为1kg、油橄榄叶的投入量为3kg。
含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物的制备方法如下：
步骤1)，将山茶花、金盏花粉碎成10目粗粉，加入复合糖苷酶，加入山茶花、金盏花总投入量8倍水，恒温40℃，pH4.5，外循环酶解提取4h，加热至90℃，保温0.5h，灭酶，然后加入油橄榄叶，外循环提取2h，4000转离心除去药渣，0.45微米陶瓷膜过滤得透过液。
步骤2)，将透过液浓缩至透过液的质量与药材(山茶花、金盏花、油橄榄叶)总投入质量的比例为1：1，0.2微米陶瓷膜过滤，得浓缩透过液。
步骤3)，向浓缩透过液中加入金属硫蛋白磁性纳米吸附材料和壳聚糖磁性纳米吸附材料，常温搅拌吸附1h，金属硫蛋白磁性纳米吸附材料和壳聚糖磁性纳米吸附材料的投入质量比例为1：5，金属硫蛋白磁性纳米吸附材料和壳聚糖磁性纳米吸附材料的总投入质量为药材总投入质量的5％，得混合液。
步骤4)，将混合液交替进行有氧加热磁化老化和无氧冷冻老化，得处理液，具体的，将混合液通入电磁转化罐，60℃通氧气磁化24h，通氮气冷冻6h，交替3次，磁感应强度为0.2T，氧气通入量为2罐体积/h，氮气通入量在冷冻前为3罐体积/h，冷冻后为1罐体积/h。
步骤5)，通过电磁转化罐将金属硫蛋白磁性纳米吸附材料和壳聚糖磁性纳米吸附材料从处理液中分离，得处理液。
步骤6)，将处理液用截留分子量为10万道尔顿的超滤膜进行超滤，压力3bar，得超滤液。
步骤7)，向超滤液中加入1，3-丁二醇至1，3-丁二醇在超滤液体系中的质量比例为40％，将超滤液通过500道尔顿的滤膜进行纳滤至液体质量等于药材的总投入量，得含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物。
步骤1)中，复合糖苷酶为α葡萄糖苷酶、β葡萄糖苷酶、鼠李糖苷酶、β半乳糖苷酶、β木糖苷酶、α***糖苷酶的复配。α葡萄糖苷酶、β葡萄糖苷酶、鼠李糖苷酶的添加量为1000U/g(相对于山茶花和金盏花的质量总量)；β半乳糖苷酶、β木糖苷酶、α***糖苷酶的添加量为500U/g(相对于山茶花和金盏花的质量总量)。
步骤3)中，金属硫蛋白磁性纳米吸附材料由金属硫蛋白、丙烯酸、水、Fe3O4纳米颗粒、N，N-亚甲基双丙烯酰胺、偶氮二异丁腈复配制得；金属硫蛋白、丙烯酸、水、Fe3O4纳米颗粒、N，N-亚甲基双丙烯酰胺、偶氮二异丁腈的质量比例为90：4：200：10：5：5。
金属硫蛋白磁性纳米吸附材料的制备方法如下：
将水、丙烯酸、金属硫蛋白加入容器中，搅拌溶解，然后加入Fe3O4纳米颗粒，搅拌均匀，然后加入N，N-亚甲基双丙烯酰胺和偶氮二异丁腈，搅拌，超声0.5h，得到混合均匀的悬浊液，加热至70℃，反应2h，过滤，干燥，粉碎，得金属硫蛋白磁性纳米吸附材料。
步骤3)中，壳聚糖磁性纳米吸附材料由壳聚糖、FeCl3·6H2O、FeCl2、氢氧化钠复配制得；壳聚糖、FeCl3·6H2O、FeCl2、氢氧化钠的质量比例为1：1.9：0.6：1.2。
壳聚糖磁性纳米吸附材料的制备方法如下：
将水、FeCl3·6H2O、FeCl2投入容器中，搅匀，然后加入壳聚糖，分散成1％的混悬液，加入乙酸，调节至pH＝3.5，搅拌至澄清，滴加浓度为20％的氢氧化钠溶液，生成沉淀，过滤沉淀，加入浓度为4％的戊二醛溶液，常温搅拌3h，再次过滤沉淀，水洗，沉淀加水，分散成5％的混悬液，加热至85℃，搅拌1h，冷却，过滤、干燥、粉碎即得。
实施例2
一种含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物，与实施例1相比，区别仅在于：
山茶花、金盏花、油橄榄叶的质量比例为1：3：1，即山茶花投入量为1kg、金盏花的投入量为3kg、油橄榄叶的投入量为1kg。
含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物的制备方法如下：
步骤1)，将山茶花、金盏花粉碎成10目粗粉，加入复合糖苷酶，加入山茶花、金盏花总投入量6倍水，恒温45℃，pH5.0，外循环酶解提取3h，加热至90℃，保温0.5h，灭酶，然后加入油橄榄叶，外循环提取3h，4000转离心除去药渣，0.45微米陶瓷膜过滤得透过液。
步骤2)，将透过液浓缩至透过液的质量与药材(山茶花、金盏花、油橄榄叶)总投入质量的比例为1：1，0.2微米陶瓷膜过滤，得浓缩透过液。
步骤3)，向浓缩透过液中加入金属硫蛋白磁性纳米吸附材料和壳聚糖磁性纳米吸附材料，常温搅拌吸附1h，金属硫蛋白磁性纳米吸附材料和壳聚糖磁性纳米吸附材料的投入质量比例为1：5，金属硫蛋白磁性纳米吸附材料和壳聚糖磁性纳米吸附材料的总投入质量为药材总投入质量的3％，得混合液。
步骤4)，将混合液交替进行有氧加热磁化老化和无氧冷冻老化，得处理液，具体的，将混合液通入电磁转化罐，50℃通氧气磁化24h，通氮气冷冻6h，交替3次，磁感应强度为0.3T，氧气通入量为2罐体积/h，氮气通入量在冷冻前为3罐体积/h，冷冻后为1罐体积/h。
步骤5)，通过电磁转化罐将金属硫蛋白磁性纳米吸附材料和壳聚糖磁性纳米吸附材料从处理液中分离，得处理液。
步骤6)，将处理液用截留分子量为10万道尔顿的超滤膜进行超滤，压力2bar，得超滤液。
步骤7)，向超滤液中加入1，3-丁二醇至1，3-丁二醇在超滤液体系中的质量比例为60％，将超滤液通过500道尔顿的滤膜进行纳滤至液体质量等于药材的总投入量，得含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物。
实施例3
一种含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物，与实施例1相比，区别仅在于：
山茶花、金盏花、油橄榄叶的质量比例为1：1：1，即山茶花投入量为1kg、金盏花的投入量为1kg、油橄榄叶的投入量为1kg。
含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物的制备方法如下：
步骤1)，将山茶花、金盏花粉碎成10目粗粉，加入复合糖苷酶，加入山茶花、金盏花总投入量7倍水，恒温42℃，pH4.7，外循环酶解提取3.5h，加热至90℃，保温0.5h，灭酶，然后加入油橄榄叶，外循环提取2.5h，4000转离心除去药渣，0.45微米陶瓷膜过滤得透过液。
步骤2)，将透过液浓缩至透过液的质量与药材(山茶花、金盏花、油橄榄叶)总投入质量的比例为1：1，0.2微米陶瓷膜过滤，得浓缩透过液。
步骤3)，向浓缩透过液中加入金属硫蛋白磁性纳米吸附材料和壳聚糖磁性纳米吸附材料，常温搅拌吸附1.5h，金属硫蛋白磁性纳米吸附材料和壳聚糖磁性纳米吸附材料的投入质量比例为1：5，金属硫蛋白磁性纳米吸附材料和壳聚糖磁性纳米吸附材料的总投入质量为药材总投入质量的4％，得混合液。
步骤4)，将混合液交替进行有氧加热磁化老化和无氧冷冻老化，得处理液，具体的，将混合液通入电磁转化罐，55℃通氧气磁化24h，通氮气冷冻6h，交替3次，磁感应强度为0.25T，氧气通入量为2罐体积/h，氮气通入量在冷冻前为3罐体积/h，冷冻后为1罐体积/h。
步骤5)，通过电磁转化罐将金属硫蛋白磁性纳米吸附材料和壳聚糖磁性纳米吸附材料从处理液中分离，得处理液。
步骤6)，将处理液用截留分子量为10万道尔顿的超滤膜进行超滤，压力2.5bar，得超滤液。
步骤7)，向超滤液中加入1，3-丁二醇至1，3-丁二醇在超滤液体系中的质量比例为50％，将超滤液通过500道尔顿的滤膜进行纳滤至液体质量等于药材的总投入量，得含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物。
对比例1
一种含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物，与实施例1相比，区别仅在于：
山茶花、金盏花、油橄榄叶的质量比例为4：1：4，即山茶花投入量为4kg、金盏花的投入量为1kg、油橄榄叶的投入量为4kg。
对比例2
一种含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物，与实施例1相比，区别仅在于：
山茶花、金盏花、油橄榄叶的质量比例为1：4：1，即山茶花投入量为4kg、金盏花的投入量为1kg、油橄榄叶的投入量为4kg。
对比例3
一种含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物，由以下组分提取而成：
山茶花、金盏花、油橄榄叶，山茶花、金盏花、油橄榄叶的质量比例为3：1：3，即山茶花投入量为3kg、金盏花的投入量为1kg、油橄榄叶的投入量为3kg。
含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物的制备方法如下：
步骤1)，将山茶花、金盏花、油橄榄叶粉碎成10目粗粉，加入山茶花、金盏花、油橄榄叶总投入量10倍水，加热至90℃，外循环提取3h，4000转离心除去药渣，0.45微米陶瓷膜过滤得透过液。
步骤2)，将透过液浓缩至透过液的质量与药材(山茶花、金盏花、油橄榄叶)总投入质量的比例为1：1，0.2微米陶瓷膜过滤，得浓缩透过液。
步骤3)，将浓缩透过液在8℃老化36h，0.45微米滤膜过滤得滤液。
步骤6)，将滤液用截留分子量为10万道尔顿的超滤膜进行超滤，压力3bar，得超滤液。
步骤7)，向超滤液中加入1，3-丁二醇至1，3-丁二醇在超滤液体系中的质量比例为40％，将超滤液通过500道尔顿的滤膜进行纳滤至液体质量等于药材的总投入量，得含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物。
应用例1-2
一种舒缓抗敏护肤乳，具体组分及添加量(kg)详见表1。
表1
Figure BDA0004045966680000081
Figure BDA0004045966680000091
舒缓抗敏护肤乳的制备方法如下：
步骤01)，将A相预混1配好后加入去离子水，在搅拌状态升温至85℃，搅拌至溶解完全。
步骤02)，A相加热同时，将B相预混2加入油锅，升温搅拌至90℃至完全溶解，加入丙烯酸(酯)类共聚物钠、卵磷脂，搅拌分散均匀后加入主锅，中速均质5min后加入聚二甲基硅氧烷，聚二甲基硅氧烷醇，继续均质3-5min，开始降温。
步骤03)，降温至45℃加入C相原料，搅拌至分散均匀出料，得舒缓抗敏护肤乳。
本应用例中，含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物采用实施例1的含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物，其他应用例中还可以采用其他实施例及对比例的含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物。
应用例3-4
一种舒缓抗敏护肤水，具体组分及添加量(kg)详见表2。
表2
Figure BDA0004045966680000092
Figure BDA0004045966680000101
舒缓抗敏护肤水的制备方法如下：
步骤01)，将A相预混1配好后加入去离子水，在搅拌状态升温至85℃，搅拌至溶解完全，加入氯苯甘醚，溶解后降温。
步骤02)，降温至45℃加入B相原料，搅拌至分散均匀出料，得舒缓抗敏护肤水。
本应用例中，含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物采用实施例1的含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物，其他应用例中还可以采用其他实施例及对比例的含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物。
应用例5-6
一种舒缓抗敏精华，具体组分及添加量(kg)详见表3。
表3
Figure BDA0004045966680000102
Figure BDA0004045966680000111
舒缓抗敏精华的制备方法如下：
步骤01)，丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物加入去离子水，搅拌状态下15min后开始加热，加入预混1在搅拌状态升温至85℃，搅拌至溶解完全，降温；加入B相搅拌溶解。
步骤02)，降温至45℃加入C相原料，搅拌至分散均匀出料，得舒缓抗敏精华。
本应用例中，含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物采用实施例1的含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物，其他应用例中还可以采用其他实施例及对比例的含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物。
应用例7-8
一种舒缓抗敏洗发水，具体组分及添加量(kg)详见表4。
表4
Figure BDA0004045966680000112
Figure BDA0004045966680000121
舒缓抗敏洗发水的制备方法如下：
步骤01)，主锅加入去离子水和聚季铵盐-10，搅拌状态下加入柠檬酸，至溶解透明后加热升温至80℃，加入月桂醇硫酸酯铵和月桂醇醚硫酸钠,搅拌至溶解透明后加入A相剩余原料，搅拌至完全溶解降温。
步骤02)，温度降至60℃，加入B相原料，低速搅拌至溶解分散完全。
步骤03)，降温至45℃，依次加入C相原料，慢速搅拌至溶解完全。
本应用例中，含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物采用实施例1的含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物，其他应用例中还可以采用其他实施例及对比例的含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物。
实验1
理化测试。
测试方法如下：
1.1重金属总量＝铅+汞+砷+镉+铜，检测方法：《化妆品安全技术规范》2015版P177。
1.2杂质总量＝总黄酮+总酸+总酚+花色苷总量+总蛋白。
总酸：草酸、酒石酸、苹果酸、乳酸、甲酸、乙酸、马来酸和柠檬酸，高效液相色谱法。
色谱柱为Xselect HSS T3(250mm×4.6mm，5μm，Waters)，以40mnol/L磷酸二氢钾-磷酸缓冲溶液(pH＝2.4)作流动相，流速1.0ml/min，柱温25℃，检测波长205nm。
花色苷总量：标准品为矢车菊素-3-O-β-葡萄糖苷(Cy3G)和矢车菊素-3-O-β-半乳糖苷(Cy3Ga)。高效液相色谱法，色谱柱为TSK gel ODS-100Z(150mm×4.6mm，5μm，Tosoh)。分析条件：柱温40℃，流速1.0ml/min，检测波长525nm。流动相A为水:磷酸(体积比98.5:1.5)；流动相B为水：乙腈：甲酸：四氢呋喃：磷酸(体积比48.5:25:20:5:1.5)。梯度洗脱程序：0～15min，B浓度从22％上升至28％；15～35min，B从28％上升至68％。
总黄酮测试方法：亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠显色法(紫外分光光度法)。
总酚测试方法：福林酚法。
总蛋白测试方法：凯氏定氮法。
1.3电导率测试：DDS-11A电导率仪(上海仪电科学仪器股份有限公司)。
实验1的具体检测数据详见表5。
表5
组别 重金属总量ppm 杂质总量mg/ml 颜色 电导率μS/cm
实施例1 未检出 0.12 浅棕黄 25.6
实施例2 未检出 0.15 浅棕黄 21.4
实施例3 未检出 0.10 浅黄 24.2
对比例3 17.2 22.52 深棕 3522.4
从理化指标对比可以看出，实施例所得产品颜色明显浅于传统工艺，电导率和杂质总量显著＜传统工艺，并且将重金属去除干净。引起电导率升高的主要成分是有机酸和氨基酸类成分，属于外用刺激源之一，降低电导率和杂质总量，对产品的稳定性和安全性有重要贡献，去除重金属可以有效提高产品的安全性。
实验2
稳定性测试。
测试方法如下：
2.1原料稳定性测试(d)：待测样品4℃、48℃、常温光照各条件下无严重变色、无肉眼可见析出、总成分含量减少≤10％的最长时间。
2.2配方稳定性测试(d)：待测样品添加10％制备的配方：水、精华、乳液、香波，在4℃、48℃、常温光照、高低温交替各条件下无严重变色、降粘、PH值变化＜0.5，无肉眼可见析出、总成分含量减少≤10％的最长时间。
具体配方为应用例1、3、5、7的配方，通过采用应用例1、3、5、7的配方并分别添加实施例1-3及对比例3的含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物以测试实施例1-3及对比例3的含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物分别在水、精华、乳液、香波的稳定性，将在水、精华、乳液、香波中的稳定性数据取平均值。
总成分＝总皂苷+总糖。
总糖测试方法：苯酚-硫酸法(紫外分光光度法)。
总皂苷测试方法：香草醛-硫酸法(紫外分光光度法)。
2.3DPPH自由基清除试验方法：依照表6.1中反应体系加入各试剂，摇匀，静置30min。在紫外分光光度计516nm处读取吸光度，重复测量3次结果，按照清除率公式计算抑制率。
表6.1
添加溶液 Ai(mL) Aj(mL) Ac(mL)
待测样品溶液 1 1 0
DPPH标准溶液 4 0 4
无水乙醇 0 4 0
去离子水 0 0 1
DPPH自由基清除率(SR)＝(1-(Ai-Aj)/Ac)×100％。
其中，Ai：加入待测样品和DPPH溶液的反应体系；Aj：加入待测样品和无水乙醇的对照。
Ac：加入DPPH溶液和去离子水的空白对照。
初始DPPH清除率为新制备的测试样品的DPPH清除率；加速试验后DPPH清除率为样品在48℃加速3个月后再测试的DPPH清除率。样品测试浓度均为1％。
实验2的具体检测数据详见表6.2。
表6.2
组别 原料稳定性 配方稳定性 初始DPPH清除率 加速试验后DPPH清除率
维生素C 0.05％ / / 93.45±1.52 /
实施例1 ≥90d ≥90d 93.57±2.67 89.24±2.88
实施例2 ≥90d ≥90d 95.16±0.25 85.96±1.21
实施例3 ≥90d ≥90d 94.20±1.33 86.33±0.92
对比例3 14d 21d 71.75±0.45 37.94±3.35
实施例所得产品的本身稳定性和在最高建议添加量下的配方中的稳定性，都显著高于传统方案；通过测试产品初始的DPPH清除率可以看出，实施例的效果优于传统工艺方案，而通过测试加速试验后的样品的DPPH清除率可以看出，在长时间放置后，对比例3的自由基清除率大幅下降，而实施例的下降幅度很小，说明长期放置过程对比例3的物质基础发生了比较大的改变。
实验3
安全性测试。
测试方法如下：
3.1鸡胚试验：SNT2329-2009-化妆品眼刺激性-腐蚀性的鸡胚绒毛***试验，IS＜1为无刺激；1≤IS＜5为轻度刺激；5≤IS＜9为中度刺激；样品(48℃加速3个月后)测试浓度5％。
3.2斑贴试验：参照《化妆品安全技术规范》2007版P277封闭型斑贴试验方法和评价标准，0级为阴性反应；1级为微弱红斑、皮肤干燥、皱褶；2级为红斑、水肿、丘疹、风团、脱屑、裂隙。样品(48℃加速3个月后)测试浓度5％，30人。
3.3入眼刺激性自愿者测试：样品(48℃加速3个月后)测试浓度5％+2％的甘油，20人，0级为阴性反应；1级为感觉到轻微刺痛、瘙痒、涩；2级为明显刺痛、瘙痒、眼睛轻度发红、轻度充血。
实验3的具体检测数据详见表7。
表7
Figure BDA0004045966680000151
安全性测试结果比对可以看出，实施例的安全性大幅优于传统工艺方案(对比例3)。
实验4
功效测试。
检测方法如下：
4.1重金属抗逆实验：采用人永生化角质形成细胞(编号CC-Y1177)，通过MTT实验评价样品是否能够在重金属Hg存在下对细胞存活率有显著提升作用，模型对照氯化氨基汞34μM。
4.2CaN-NF-AT通路测试：
本测试采用K562细胞系，以PMA(蛋白激酶C PKC激活剂)和Calcimycin(A23187，钙通道激活剂)刺激K562细胞，检测转录因子NFAT驱动的荧光素酶基因表达水平，从而评价样品对钙调磷酸酶(CaN)通路的活化水平的影响。本次测试所用细胞为稳定转染NFAT-luc荧光素酶报告基因的K562细胞(货号：CTCC-001-0670)，购自浙江美森细胞科技有限公司。选择细胞存活率大于90％的测试浓度进行实验。
1.细胞接种：将处于对数增长期的K562细胞按2×105/孔接种于96孔板，每孔100μl细胞悬液。
2.给药：按照4.1CCK-8实验所得最佳浓度加入相应待测样品(阳性对照Tacrolimus，5μM)；空白对照组加入等体积培养液，在37℃、5％CO2培养箱中孵育1小时。
3.刺激：每孔加入PMA(10ng/ml，DMSO溶解后相应培养基稀释)和Calcimycin(0.5μM，DMSO溶解后相应培养基稀释)，在培养箱中刺激孵育18h。
4.检测：每孔加入10μL荧光素酶分析试剂，加入试剂后3-30分钟内测定荧光强度lum值。
5.CaN通路的活化水平计算：根据公式计算。CaN-NF-AT通路抑制率(％)＝(Lum对照组-Lum测试组)/(Lum对照组-Lum空白组)×100％。
4.3TRPV1抑制实验：按1.8×105个/孔的接种密度接种角质形成细胞至6孔板，培养箱(37℃、5％ CO2)中孵育过夜。待6孔板中细胞铺板率达到40％～50％时，进行分组给药(同时用辣椒素15μM刺激)，每孔给药量为2mL，每组设3个复孔。给药完成后将6孔板放置在培养箱(37℃、5％ CO2)中孵育培养24h。用4％的多聚甲醛进行固定处理，固定30min后，进行辣椒素受体(TRPV1)的免疫荧光检测，显微镜下拍照观察，采集图片并分析。应用GraphPad Prism作图，结果表示为Mean±SD。各组间比较采用t-test统计分析(双尾)。与模型组比，P<0.05认为具有显著差异，表示为*，P<0.01认为具有极显著差异，表示为**。与空白组比，P<0.01认为具有极显著差异，表示为##。
实验4的具体检测数据详见表8.1-8.3。
表8.1重金属处理细胞存活结果汇总表
Figure BDA0004045966680000161
采用t-test方法进行统计分析，对照组和样品组与Hg组相比，显著性以*表示，P-value＜0.05表示为*，P-value＜0.001表示为***，ns表示没有显著性差异。
表8.2CaN通路抑制结果汇总表
Figure BDA0004045966680000162
Figure BDA0004045966680000171
采用t-test方法进行统计分析，Tacrolimus组相比，显著性以*表示，P-value＜0.001表示为***，与对照组相比，显著性以#表示，P-value＜0.001表示为###。
表8.3TRPV1蛋白免疫荧光分析结果汇总表
Figure BDA0004045966680000172
备注：积分光密度(IOD)/细胞数，其数值反映TRPV1蛋白的相对含量。用t-test方法进行统计分析时，与BC组相比，显著性以#表示，P-value＜0.05表示为#，P-value＜0.01表示为##；与NC组相比，显著性以*表示，P-value＜0.05表示为*，P-value＜0.01表示为**。
上述功效测试数据对比可以看出，实施列与对比例1、2相比本发明的组方范围内效果最佳；实施列与对比例3相比本发明的工艺制备的产品功效显著优于传统方案。
本具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。

Claims (10)

1.一种含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物，其特征在于：由以下质量比例的组分提取而成：
山茶花：金盏花：油橄榄叶=1-3：1-3：1-3；
所述含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物的制备方法包括以下步骤：
步骤1），将山茶花、金盏花粉碎，加入复合糖苷酶，加入山茶花、金盏花总投入量6-8倍水，恒温40-45℃，pH4.5-5.0，外循环酶解提取3-4h，加热灭酶，加入油橄榄叶，外循环提取2-3h，过滤得透过液；
步骤2），将透过液浓缩，过滤，得浓缩透过液；
步骤3），向浓缩透过液中加入金属硫蛋白磁性纳米吸附材料和壳聚糖磁性纳米吸附材料，常温搅拌吸附1-2h，得混合液；
步骤4），将混合液交替进行有氧加热磁化老化和无氧冷冻老化，得处理液；
步骤5），将金属硫蛋白磁性纳米吸附材料和壳聚糖磁性纳米吸附材料从处理液中分离，得处理液；
步骤6），将处理液超滤，得超滤液；
步骤7），向超滤液中加入1，3-丁二醇至1，3-丁二醇在体系中的质量比例为40-60%，纳滤至液体质量等于山茶花、金盏花、油橄榄叶的总投入量，得含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物。
2.根据权利要求1所述的一种含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物，其特征在于：所述步骤1）中，复合糖苷酶为α葡萄糖苷酶、β葡萄糖苷酶、鼠李糖苷酶、β半乳糖苷酶、β木糖苷酶、α***糖苷酶的复配。
3.根据权利要求1所述的一种含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物，其特征在于：所述步骤3）中，金属硫蛋白磁性纳米吸附材料由金属硫蛋白、丙烯酸、水、Fe3O4 纳米颗粒、N，N-亚甲基双丙烯酰胺、偶氮二异丁腈复配制得。
4.根据权利要求3所述的一种含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物，其特征在于：所述金属硫蛋白、丙烯酸、水、Fe3O4 纳米颗粒、N，N-亚甲基双丙烯酰胺、偶氮二异丁腈的质量比例为90：4：200：10：5：5。
5.根据权利要求3或4所述的一种含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物，其特征在于：所述金属硫蛋白磁性纳米吸附材料的制备方法如下：
将水、丙烯酸、金属硫蛋白搅拌溶解，然后加入Fe3O4纳米颗粒，搅拌均匀，然后加入N，N-亚甲基双丙烯酰胺和偶氮二异丁腈，搅拌，超声，得到混合均匀的悬浊液，加热反应，过滤，干燥，粉碎，得金属硫蛋白磁性纳米吸附材料。
6.根据权利要求1所述的一种含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物，其特征在于：所述步骤3）中，壳聚糖磁性纳米吸附材料由壳聚糖、FeCl3·6H2O、FeCl2、氢氧化钠复配制得。
7.根据权利要求6所述的一种含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物，其特征在于：所述壳聚糖、FeCl3·6H2O、FeCl2、氢氧化钠的质量比例为1：1.9：0.6：1.2。
8.根据权利要求6或7所述的一种含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物，其特征在于：所述壳聚糖磁性纳米吸附材料的制备方法如下：
将水、FeCl3·6H2O、FeCl2搅匀，然后加入壳聚糖，分散成1%的混悬液，加入酸，调节至酸性，搅拌至澄清，滴加碱，生成沉淀，过滤沉淀，加入戊二醛溶液，常温搅拌，再次过滤沉淀，水洗，沉淀加水，分散成混悬液，加热反应，冷却，过滤、干燥、粉碎即得。
9.根据权利要求1所述的一种含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物，其特征在于：所述步骤4）中，将混合液交替进行有氧加热磁化老化和无氧冷冻老化的具体步骤为：将混合液通入电磁转化罐，50-60℃通氧气磁化24h，通氮气冷冻6h，交替3次，磁感应强度为0.2-0.3T，氧气通入量为2罐体积/h，冷冻前的氮气通入量为3罐体积/h，冷冻后的氮气通入量为1罐体积/h。
10.一种根据权利要求1-9任一所述的含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物在婴童护肤的应用，其特征在于：所述含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物添加至婴童护理品中用于制备婴童护理品，所述含山茶花提取物的舒缓抗敏组合物在婴童护理品的添加量为0.5-10%。
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