CN115918509B - 铁皮石斛的培养方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于植物种植栽培领域，提供了一种铁皮石斛的培养方法和应用。其培养方法包括选苗、驯化、返野栽培三个步骤。本发明还提供一种培养基质以及其在栽培铁皮石斛中的应用。培养基质成分包括泥炭、木屑、橡木苔、植物混合发酵原料、蜡样芽孢杆菌和互叶白千层油。本发明通过模拟野生环境的方法来培养铁皮石斛幼苗，然后返野栽培，充分考虑到铁皮石斛的生长特性提高了铁皮石斛的长势和存活率。本发明在返野栽培中无需施肥，不喷洒农药和除菌剂，天然无污染。本发明所获得的铁皮石斛，多糖含量远高于大棚种植的铁皮石斛；具有更好的药用效果。
Description
技术领域
本发明属于植物种植栽培领域，具体涉及铁皮石斛培养方法和应用。
背景技术
铁皮石斛为兰科植物(Dendrobium officinale kimura et Migo)的干燥茎，铁皮石斛是我国传统名贵珍稀中药材；但因其独特的生长环境要求，以及历代采挖，其野生资源日趋稀少，濒临灭绝。现代研究发现铁皮石斛多糖含量明显高于其它石斛且生物碱含量较低，较同属其他石斛相比具有更好的保健功效。2018年国家卫计委首次公布拟将铁皮石斛等九种物质列入药食同源品种；2018年国家卫计委将铁皮石斛花、叶纳入地方特色食品管理。
铁皮石斛是当前市场上销量最大，前景最广的林下中药材；作为一种传统名贵药材，国家二级保护植物，野生资源严禁采挖。目前国内外对野生铁皮石斛资源的保护性开发及可持续利用的研究主要集中在人工栽培及组织培养方面。培养特定组织产次生代谢物虽易获得较高产率，但特定组织在常规生物反应器中难以生长且培养规模难以放大，需开发特定的栽培装置；脱分化细胞相对而言具有明显优势，较适用于工业化生产，是缓解资源短缺的较有希望的途径；但也有铁皮石斛多糖含量较低的问题需要解决。
发明内容
针对我国的铁皮石斛的开发现状，本发明提出了一种铁皮石斛培养方法。
一种铁皮石斛培养方法，包括以下步骤：
(1)选苗：选择3-5条根的铁皮石斛幼苗作为种苗；
(2)驯化：种苗放置在填充有培养基质的培养包中驯化6-10月；
(3)返野栽培：将驯化后的种苗连同培养包捆绑至到附生活树的相应部位或石缝中；栽培至少3年后采收；
所述步骤(2)中，驯化环境为：自然光照，遮光面积40-60％；白天温度20-35℃，夜间温度20-25℃；相对湿度为60-80％；每3-10天内浇一次水；
所述步骤(3)中，栽培环境为：海拔50-800m；相对湿度30-70％；林冠郁闭30-80％、年降雨量在1100-1500mm范围内的林间山地地貌区域。
特别地，所述培养包的材质为10-18个月内开始降解的全降解无纺布。
所述步骤(2)中，所述培养包的底部放置有带有树皮的木片；所述木条选自铁皮石斛野外状态下附生的树种。
特别地，所述步骤(2)中，所述培养基质以质量份计，包含以下组分：
所述植物混合发酵原料中包含菌渣、笋壳、麦麸、棉籽壳、米糠、豆粕中的至少两种；
所述木屑来自铁皮石斛的原生附生树种。
特别地，所述步骤(2)中，培养基质的制备方法为：
植物混合发酵原料与蜡样芽孢杆菌混合密封发酵至少48h，然后高温灭菌，得混合物一；
将橡木苔粉碎后与木屑、互叶白千层油混合，得混合物二；
混合物一、混合物二与泥炭混合均匀。
本发明还提供一种培养基质，以质量份计，包含以下组分：
所述植物混合发酵原料中包含菌渣、笋壳、麦麸、棉籽壳、米糠、豆粕中的至少两种；
所述木屑来自铁皮石斛的原生附生树种。
特别地，植物混合发酵原料与蜡样芽孢杆菌混合密封发酵至少48h，然后高温灭菌，得混合物一；
将橡木苔粉碎后与木屑、互叶白千层油混合，得混合物二；
混合物一、混合物二与泥炭混合均匀。
本发明还提供前述培养基质在栽培铁皮石斛中的应用。
本发明中，铁皮石斛的原生附生树种是指在野外无人工干预的情况下，铁皮石斛天然生长时候会附生的树种，如板栗、杉木、柏树、松树等。
本发明中，培养包为具有单面开口的全降解无纺布，选择10-18个月内开始降解的材料确保在驯化期间正常的发育；并在移植后开始降解保证根系能正常附着在环境中。
本发明中，在培养包的底部设置有带有树皮的木片，是为了让铁皮石斛的根系提前附着，减少移植后不适应的概率。
本发明中，培养基质由泥炭、木屑、橡木苔、植物混合发酵原料、蜡样芽孢杆菌、互叶白千层油组成；其中植物混合发酵原料由菌渣、笋壳、麦麸、棉籽壳、米糠、豆粕中选取组成；这些原料均属于低廉价格的农业生产废弃物，经过蜡样芽孢杆菌发酵后具有丰富的氨基酸、氮源、维生素等必要营养元素。
本发明中，菌渣是指可食用菌采摘后被剔除的不可使用部分。
橡木苔、木屑具有强大的吸水能力，同时本发明还发现，橡木苔相比其他种类的苔藓，对铁皮石斛的生长有着明显的促进作用；互叶白千层油是一种植物来源的有效光谱杀菌杀虫剂，而木屑吸收了互叶白千层油后可以长久保持效果，等互叶白千层油挥发完全后铁皮石斛已经生长到足够的健壮。
本发明驯化阶段，是为了模拟铁皮石斛的野生生存环境。
本发明的有益效果：
本发明通过模拟野生环境的方法来培养铁皮石斛幼苗，然后返野栽培，充分考虑到铁皮石斛的生长特性提高了铁皮石斛的长势和存活率。
本发明在返野栽培中无需施肥，不喷洒农药和除菌剂，天然无污染。
本发明所获得的铁皮石斛，多糖含量远高于大棚种植的铁皮石斛；具有更好的药用效果。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细的阐述，下述实施例不用于限制本发明，仅用于说明本发明。以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
在下列实施例中，木屑和带有树皮的木片来源于铁皮石斛的原生附生树种。
培养基质的制备：包括以下步骤：
(1)按下表1准备好各原料；
(2)植物混合发酵原料与蜡样芽孢杆菌混合密封发酵至少48h，然后高温灭菌，得混合物一；
(3)将橡木苔粉碎后与木屑、互叶白千层油混合，得混合物二；
(4)混合物一、混合物二与泥炭混合均匀。
制备好的培养基质放入底部放置有带有树皮的木片的培养包中，沿用其序号，封口备用。
培养包由10-18个月内开始降解的全降解植物纤维无纺布构成。
表1培养基质的原料配比
| 序号一 | 序号二 | 序号三 | 序号四 | 序号五 | 序号六 | |
| 泥炭 | 40 | 40 | 40 | 40 | 40 | 40 |
| 木屑 | 8 | 8 | 12 | 12 | 12 | 12 |
| 橡木苔 | 3 | 3 | 4 | 4 | 5 | 5 |
| 蜡样芽孢杆菌 | 0.10 | 0.12 | 0.10 | 0.12 | 0.10 | 0.12 |
| 互叶白千层油 | 0.1 | 0.1 | 0.15 | 0.15 | 0.15 | 0.15 |
| 菌渣 | 10 | 10 | 10 | |||
| 笋壳 | 10 | 10 | 5 | |||
| 麦麸 | 5 | 5 | 10 | |||
| 棉籽壳 | 5 | 10 | 5 | 10 | ||
| 米糠 | 5 | 5 | 5 | |||
| 豆粕 | 5 | 5 | 5 |
表1中，各原料的单位为质量份。
实施例一
广西壮族自治区贵港市桂平市，2019年1月。
(1)选苗：选择3-5条根的铁皮石斛幼苗作为种苗；
(2)驯化：种苗放置在序号一的培养包中驯化8月；
驯化环境为：
自然光照，遮光面积40-60％；白天温度20-35℃，夜间温度20-25℃；相对湿度为60-80％；每3-10天内浇一次水；每3-10天内浇一次水。
(3)返野栽培：
将驯化后的种苗连同培养包捆绑至到附生活树的相应部位或石缝中；2019年9月栽培，3年后采收；在2022年9月采收。
在栽培后7天内，每天浇1次水；第8-28天内，2天浇1次水。
栽培环境为：海拔50-800m；相对湿度30-70％；林冠郁闭30-80％、年降雨量在1100-1500mm范围内的林间山地地貌区域。
实施例二
广西壮族自治区贵港市桂平市，2018年5月。
(1)选苗：选择3-5条根的铁皮石斛幼苗作为种苗；
(2)驯化：种苗放置在序号二的培养包中驯化10月；
驯化环境为：
自然光照，遮光面积40-60％；白天温度20-35℃，夜间温度20-25℃；相对湿度为60-80％；每3-10天内浇一次水；每3-10天内浇一次水。
(3)返野栽培：
将驯化后的种苗连同培养包捆绑至到附生活树的相应部位或石缝中；2019年3月栽培，3年后采收；在2022年3月采收。
在栽培后7天内，每天浇1次水；第8-28天内，2天浇1次水。
栽培环境为：海拔50-800m；相对湿度30-70％；林冠郁闭30-80％、年降雨量在1100-1500mm范围内的林间山地地貌区域。
实施例三
广西壮族自治区贵港市桂平市，2018年9月。
(1)选苗：选择3-5条根的铁皮石斛幼苗作为种苗；
(2)驯化：种苗放置在序号三的培养包中驯化6月；
驯化环境为：
自然光照，遮光面积40-60％；白天温度20-35℃，夜间温度20-25℃；相对湿度为60-80％；每3-10天内浇一次水；每3-10天内浇一次水。
(3)返野栽培：
将驯化后的种苗连同培养包捆绑至到附生活树的相应部位或石缝中；2019年3月栽培，3年后采收；在2022年3月采收。
在栽培后7天内，每天浇1次水；第8-28天内，2天浇1次水。
栽培环境为：海拔50-800m；相对湿度30-70％；林冠郁闭30-80％、年降雨量在1100-1500mm范围内的林间山地地貌区域。
实施例四
广西壮族自治区贵港市桂平市，2018年7月。
(1)选苗：选择3-5条根的铁皮石斛幼苗作为种苗；
(2)驯化：种苗放置在序号四的培养包中驯化10月；
驯化环境为：
自然光照，遮光面积40-60％；白天温度20-35℃，夜间温度20-25℃；相对湿度为60-80％；每3-10天内浇一次水；每3-10天内浇一次水。
(3)返野栽培：
将驯化后的种苗连同培养包捆绑至到附生活树的相应部位或石缝中；2019年5月栽培，3年后采收；在2022年5月采收。
在栽培后7天内，每天浇1次水；第8-28天内，2天浇1次水。
栽培环境为：海拔50-800m；相对湿度30-70％；林冠郁闭30-80％、年降雨量在1100-1500mm范围内的林间山地地貌区域。
实施例五
广西壮族自治区贵港市桂平市，2018年7月。
(1)选苗：选择3-5条根的铁皮石斛幼苗作为种苗；
(2)驯化：种苗放置在序号五的培养包中驯化8月；
驯化环境为：
自然光照，遮光面积40-60％；白天温度20-35℃，夜间温度20-25℃；相对湿度为60-80％；每3-10天内浇一次水；每3-10天内浇一次水。
(3)返野栽培：
将驯化后的种苗连同培养包捆绑至到附生活树的相应部位或石缝中；2019年3月栽培，3年后采收；在2022年3月采收。
在栽培后7天内，每天浇1次水；第8-28天内，2天浇1次水。
栽培环境为：海拔50-800m；相对湿度30-70％；林冠郁闭30-80％、年降雨量在1100-1500mm范围内的林间山地地貌区域。
实施例六
广西壮族自治区贵港市桂平市，2018年3月。
(1)选苗：选择3-5条根的铁皮石斛幼苗作为种苗；
(2)驯化：种苗放置在序号六的培养包中驯化6月；
驯化环境为：
自然光照，遮光面积40-60％；白天温度20-35℃，夜间温度20-25℃；相对湿度为60-80％；每3-10天内浇一次水；每3-10天内浇一次水。
(3)返野栽培：
将驯化后的种苗连同培养包捆绑至到附生活树的相应部位或石缝中；2019年9月栽培，3年后采收；在2022年9月采收。
在栽培后7天内，每天浇1次水；第8-28天内，2天浇1次水。
栽培环境为：海拔50-800m；相对湿度30-70％；林冠郁闭30-80％、年降雨量在1100-1500mm范围内的林间山地地貌区域。
多糖测定
检测采收后，按照药典一部中铁皮石斛所记载的含量测定方法测试其多糖。
多糖对照品溶液的制备：取无水葡萄糖对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含90μg的溶液，即得。
标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、l.0ml，分别置10ml具塞试管中，各加水补至1.0ml，精密加入5％苯酚溶液1ml(临用配制)，摇匀，再精密加硫酸5ml，摇匀，置沸水浴中加热20分钟，取出，置冰浴中冷却5分钟，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在488nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.3g，精密称定，加水200ml，加热回流2小时，放冷，转移至250ml量瓶中，用少量水分次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置15ml离心管中，精密加入无水乙醇10ml，摇匀，冷藏1小时，取出，离心(转速为每分钟4000转)20分钟，弃去上清液(必要时滤过)，沉淀加80％乙醇洗涤2次，每次8ml，离心，弃去上清液，沉淀加热水溶解，转移至25ml量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，即得。
测定法：精密量取供试品溶液1ml，置10ml具塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“精密加入5％苯酚溶液1ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的量，计算，如下表2所示。
形态测定
对收获后的铁皮石斛(鲜)植株进行茎长、茎粗、节数的测量，取每个实施例20个个体测量，取平均数；结果如下表2所示。
表2多糖含量以及形态特征
| 多糖含量(％) | 茎长(cm) | 茎粗(mm) | 节数(节) | |
| 实施例一 | 36.21 | 35.6 | 3.4 | 8.9 |
| 实施例二 | 37.42 | 32.3 | 3.6 | 8.7 |
| 实施例三 | 38.98 | 34.7 | 3.4 | 8.4 |
| 实施例四 | 35.81 | 31.2 | 3.2 | 8.2 |
| 实施例五 | 37.11 | 32.1 | 3.2 | 8.3 |
| 实施例六 | 36.26 | 31.4 | 3.2 | 8.4 |
上述详细说明是针对本发明其中之一可行实施例的具体说明，该实施例并非用以限制本发明的专利范围，凡未脱离本发明所为的等效实施或变更，均应包含于本发明技术方案的范围内。
Claims (1)
1.铁皮石斛培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）选苗：选择3-5条根的铁皮石斛幼苗作为种苗；
（2）驯化：种苗放置在填充有培养基质的培养包中驯化6-10月；
（3）返野栽培：将驯化后的种苗连同培养包捆绑至到附生活树的相应部位或石缝中；栽培至少3年后采收；
所述步骤（2）中，驯化环境为：自然光照，遮光面积40-60%；白天温度20-35℃，夜间温度20-25℃；相对湿度为60-80%；每3-10天内浇一次水；
所述步骤（3）中，栽培环境为：海拔50-800m；相对湿度30-70%；林冠郁闭30-80%、年降雨量在1100-1500mm范围内的林间山地地貌区域；
所述步骤（2）中，所述培养包的材质为10-18个月内开始降解的全降解无纺布；
所述步骤（2）中，所述培养包的底部放置有带有树皮的木片；所述木片选自铁皮石斛野外状态下附生的树种；
所述步骤（2）中，所述培养基质以质量份计，包含以下组分：
泥炭 40
木屑 8-12
橡木苔 3-5
植物混合发酵原料 20-25
蜡样芽孢杆菌 0.1-0.12
互叶白千层油 0.1-0.15
所述植物混合发酵原料中包含菌渣、笋壳、麦麸、棉籽壳、米糠、豆粕中的至少两种；
所述木屑来自铁皮石斛的原生附生树种；
所述步骤（2）中，培养基质的制备方法为：
植物混合发酵原料与蜡样芽孢杆菌混合密封发酵至少48h，然后高温灭菌，得混合物一；
将橡木苔粉碎后与木屑、互叶白千层油混合，得混合物二；
混合物一、混合物二与泥炭混合均匀。
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| GR01 | Patent grant | ||
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