CN115873000A - 异喹啉酮类及喹唑啉酮类化合物及其组合物和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明属于药物领域，具体涉及式(I)或(II)所示的异喹啉酮类及喹唑啉酮类化合物、或其立体异构体、互变异构体、氘代物、氮氧化物、溶剂化物、或药学上可接受的盐，和包含所述化合物的药物组合物以及使用所述化合物及其药物组合物在制备预防、处理、治疗、和/或减轻PI3‑激酶介导的疾病、病症、和/或病况，或抑制PI3‑激酶活性的药物中的用途。本发明提供的化合物对目标激酶显示出优异的抑制活性和激酶选择性，并且具有良好的药代动力学性质，生物利用度更高。

Description

异喹啉酮类及喹唑啉酮类化合物及其组合物和用途
发明领域
本发明属于药物领域，具体涉及一类新的异喹啉酮类及喹唑啉酮类化合物、其药学上可接受的盐和包含所述化合物的药物组合物以及使用所述化合物及其药物组合物在制备预防、处理、治疗、和/或减轻PI3-激酶异常相关疾病、病症和/或病况的药物中的用途。
发明背景
磷酸肌醇3-激酶(PI3K)通路是一种细胞内信号通路，在细胞存活、增殖和分化中具有调节作用。磷酸肌醇3-激酶(PI3K)酶家族是许多细胞和组织中生长、增殖、迁移和代谢的中心调节剂。PI3K是产生脂质第二信使磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸(PIP3)的脂质激酶，PIP3在细胞表面受体的下游被用来调节生长、代谢、存活和分化。PIP3由四种不同的I类PI3K催化异构体产生，分为两组：IA类(p110α、p110β和p110δ)和IB类(p110γ)。所有I类PI3K都与调节亚基组成性相关，IA类和IB类PI3K之间的主要区别在于它们与独特的调节亚基相关。IA类PI3Ks(PI3Kα,PI3Kβ和PI3Kδ)是由催化亚单位p110(分别是p110α，p110β和p110δ)和调节亚单位p85(例如：p85α，p85β，p55δ，p55α和p50α)组成的异源二聚体复合物)。这些信号响应通常是通过受体酪氨酸激酶(RTKs)传递的。IB类的PI3Kγ的信号是通过G蛋白偶联受体(GPCRs)传递的，由催化亚基p110γ组成。在正常细胞中，PI3K/mTOR通路在细胞存活、增殖和分化中具有调节作用。然而，该途径的异常激活与多种人类疾病有关，包括癌症、免疫缺陷、炎症和发育障碍。针对PI3K通路内关键节点的多种抑制剂处于临床开发的不同阶段，用于治疗多种人类疾病。(“Small-molecule inhibitors of the PI3K signalingnetwork.”Future MedChem.2011,3(5),549-565)。
PI3Kα和PI3Kβ两种亚型的表达方式是普遍存在的，而PI3Kδ和PI3Kγ这两种亚型主要在白细胞中表达。PI3Kδ和PI3Kγ相对受限的表达方式表明这两个亚型在适应性和先天免疫***中的重要作用(J.Med.Chem.2012,55(20),8559–8581)。
PI3Kα亚型与血管生成和葡萄糖稳态有关。PI3K/mTOR通路在癌症中经常失调，通常是因为PIK3CA的激活突变或扩增。PIK3CA(是编码PI3K p110α催化亚基的基因)的功能获得突变是实体瘤中最常见的体细胞改变之一。
PI3Kδ主要在造血谱系细胞中表达，并被细胞因子受体、抗原受体、生长因子受体和共刺激受体激活。PI3Kδ在T和B细胞的发育和激活中很重要。PI3Kδ信号通路的阻断可增加基因不稳定性。PI3Kδ中的功能获得(GOF)突变导致B和T细胞的一系列发育和功能缺陷，从而危及宿主防御。功能丧失(LOF)突变导致更严重的B细胞淋巴细胞减少和无丙种球蛋白血症，但不会导致T细胞衰老。
IB类PI3K催化亚基p110γ是免疫细胞功能的主要调节因子，p110γ在免疫信号传导中起关键作用。p110γ是炎症性疾病的关键因素，由于其免疫调节作用，已被确定为癌症的治疗靶点。PI3Kγ在调节骨髓(巨噬细胞、肥大细胞、中性粒细胞)和淋巴(T细胞、B细胞和自然杀伤细胞)衍生的免疫细胞中发挥重要作用。它调节免疫细胞趋化性、细胞因子释放和活性氧物种的产生。PI3Kγ介导多种免疫细胞功能的能力受其在众多细胞表面受体下游的激活控制，包括G蛋白偶联受体(GPCR)、IgE/抗原受体、受体酪氨酸激酶(RTKs)和Toll样受体(TLRs)。在小鼠模型中，PI3Kγ在遗传或药理学上的缺失对多种炎症性疾病具有保护作用，包括心血管疾病、关节炎、狼疮、哮喘、肺部炎症和纤维化、以及代谢综合征。PI3Kγ也是通过免疫调节作用导致胰腺导管腺癌进展的驱动因素。在免疫***中靶向PI3Kγ与检查点抑制剂联合已在临床癌症治疗研究中显示出前景(Eganelisib，InfinityPharmaceuticals News Release，2021)。(Henau OD,Rausch M,Winkler D et al.Nature539(7629),443–447(2016)；Kaneda MM,Messer KS,Ralainirina N et al.Nature 539(7629),437–442(2016).)
鉴于其在癌症和免疫中的关键作用，PI3K通路一直是过去二十年药物开发研究的重点。2014年，PI3Kδ抑制剂idelalisib(Zydelig；Gilead Sciences)成为第一个被批准用于特定B细胞噁性肿瘤的PI3K抑制剂。随后，泛I类PI3K抑制剂copanlisib(Aliqopa；拜耳)于2017年获批，2018年PI3Kδ/PI3Kγ双重抑制剂duvelisib(Copiktra；Verastem，现为Secura Bio)获批用于相同适应症。PI3Kα抑制剂alpelisib(Piqray；诺华)是第一个也是唯一一个于2019年5月被FDA批准与***受体(ER)下调剂氟维司群联合用于治疗PIK3CA突变型HER2/ER+转移晚期乳腺癌的PI3Kα抑制剂。
需要提供新的，良好的候选药物PI3K抑制剂。具体而言，优选的化合物应当与PI3K受体有力结合，同时对其它受体几乎不显示出亲和性，并且显示出作为激动剂的功能活性。该化合物应由胃肠道充分吸收，代谢稳定且具有良好药代动力学性质。当靶向于中枢神经***中的受体时，它们可自由地穿越血脑屏障，并且当选择性靶向于外周神经***中的受体时，它们应不会穿越血脑屏障。它们应无毒性并且显示极少副作用。此外，所述理想的候选药物应以稳定、非吸湿性和容易配制的物理形式存在。本发明化合物显示出特定水平的针对不同的共生同源(paralogs)的PI3Kα，β，γ和δ的选择性。特别是，显示出特定水平的针对ΡΙ3Kγ的选择性。
本发明描述的化合物、组合物和方法直接对应上述这些需要和其他目的。具体地，本发明提供了一类可抑制、调节和/或调控PI3-激酶活性的化合物，用于治疗和/或预防PI3-激酶异常相关疾病、病症、和/或病况。与已有的同类化合物相比，本发明的化合物具有更好的药理活性，具体而言，本发明化合物对PI3-激酶显示出优异的抑制活性，并对PI3Kγ具有高度选择性，肝微粒体稳定性表现出明显优势，并且具有良好的药代动力学性质，生物利用度更高。因此，本发明化合物具有非常好的开发前景。
发明内容
术语定义
现在详细描述本发明的某些实施方案，其实例由随附的结构式和化学式说明。本发明意图涵盖所有的替代、修改和等同技术方案，它们均包括在所附权利要求定义的本发明范围内。本领域技术人员应认识到，许多与本发明所述类似或等同的方法和材料能够用于实践本发明。本发明绝不限于本发明所述的方法和材料。在所结合的文献、专利和类似材料的一篇或多篇与本申请不同或相矛盾的情况下(包括但不限于所定义的术语、术语应用、所描述的技术，等等)，以本申请为准。
“立体异构体”是指具有相同化学构造，但原子或基团在空间上排列方式不同的化合物。立体异构体包括对映异构体、非对映异构体、构象异构体(旋转异构体)、几何异构体(顺/反)异构体、阻转异构体，等等。
像本发明所描述的，本发明的化合物可以任选地被一个或多个取代基所取代，如本发明的通式化合物，或者像实施例里面特殊的例子、子类，以及本发明所包含的一类化合物。
应了解术语“任选取代的”与术语“取代或未取代的”可以交换使用。一般而言，术语“取代的”表示所给结构中的一个或多个氢原子被具体取代基所取代，无论此氢原子是连在C上或N上或者其他原子上。“任选地”除非其他方面表明，一个任选的取代基团可以在所述基团各个可取代的位置进行取代。当所给出的结构式中不只一个位置能被选自具体基团的一个或多个取代基所取代，那么取代基可以相同或不同地在各个位置取代。
术语“任选地被……所取代”，可以与术语“未取代或被……所取代”交换使用，即所述结构是未取代的或者被一个或多个本发明所述的取代基所取代，本发明所述的取代基包括，但不限于H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-CN、-NO2、-NReRf、-C(＝O)R7、-OC(＝O)R7、-C(＝O)OR7a、-S(＝O)0-2R7、-OS(＝O)1-2R7、-S(＝O)1-2OR7a、-N(R8a)C(＝O)R8、-C(＝O)NR8aR8、-OC(＝O)NR8aR8、-N(R8a)S(＝O)1-2R8、-S(＝O)1-2NR8aR8、-N(R8a)C(＝O)NR8aR8、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、C1-6氰基烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基、C3-8环烷基、C3-8环烷基C1-6烷基、C2-7杂环基、C2-7杂环基C1-6烷基、C6-12芳基、C6-12芳基C1-6烷基、C1-9杂芳基、或C1-9杂芳基C1-6烷基；其中各取代基独立任选地被0、1、2、3或4个独立地选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-6氘代烷基、C1-6烷基和C1-6烷氧基的基团取代等等。其中，Re、Rf、R9、R9a、R10和R10a具有如本发明所述定义。
在本说明书的各部分，本发明公开化合物的取代基按照基团种类或范围公开。特别指出，本发明包括这些基团种类和范围的各个成员的每一个独立的次级组合。例如，术语“C1-C6烷基”特别指独立公开的甲基、乙基、C3烷基、C4烷基、C5烷基和C6烷基。
本发明使用的术语“烷基”或“烷基基团”，表示含有1至20个碳原子，饱和的直链或支链一价烃基基团，其中，所述烷基基团可以任选地被一个或多个本发明描述的取代基所取代。除非另外详细说明，烷基基团含有1-20个碳原子。在一实施方案中，烷基基团含有1-12个碳原子；在另一实施方案中，烷基基团含有1-6个碳原子；在又一实施方案中，烷基基团含有1-4个碳原子；还在一实施方案中，烷基基团含有1-3个碳原子。所述烷基基团可任选地被一个或多个本发明描述的取代基所取代。
烷基基团的实例包含，但并不限于，甲基(Me、-CH3)，乙基(Et、-CH2CH3)，正丙基(n-Pr、-CH2CH2CH3)，异丙基(i-Pr、-CH(CH3)2)，正丁基(n-Bu、-CH2CH2CH2CH3)，异丁基(i-Bu、-CH2CH(CH3)2)，仲丁基(s-Bu、-CH(CH3)CH2CH3)，叔丁基(t-Bu、-C(CH3)3)，正戊基(-CH2CH2CH2CH2CH3)，2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)，3-戊基(-CH(CH2CH3)2)，2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)，3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)，3-甲基-1-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)，2-甲基-1-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)，正己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)，2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)，3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))，2-甲基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)，3-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)，4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)，3-甲基-3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)，2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)，2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)，3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3)，正庚基，正辛基，等等。
术语“烯基”表示含有2-12个碳原子的直链或支链一价烃基，其中至少有一个不饱和位点，即有一个碳-碳sp2双键，其包括“顺”和“反”的定位，或者“E”和“Z”的定位。在一实施方案中，烯基基团包含2-8个碳原子；在另一实施方案中，烯基基团包含2-6个碳原子；在又一实施方案中，烯基基团包含2-4个碳原子。烯基基团的实例包括，但并不限于，乙烯基(-CH＝CH2)、烯丙基(-CH2CH＝CH2)等等。所述烯基基团可以任选地被一个或多个本发明描述的取代基所取代。
术语“炔基”表示含有2-12个碳原子的直链或支链一价烃基，其中至少有一个不饱和位点，即有一个碳-碳sp三键。在一实施方案中，炔基基团包含2-8个碳原子；在另一实施方案中，炔基基团包含2-6个碳原子；在又一实施方案中，炔基基团包含2-4个碳原子。炔基基团的实例包括，但并不限于，乙炔基(-C≡CH)、炔丙基(-CH2C≡CH)、1-丙炔基(-C≡C-CH3)等等。所述炔基基团可以任选地被一个或多个本发明描述的取代基所取代。
术语“烷氧基”表示烷基基团通过氧原子与分子其余部分相连，其中烷基基团具有如本发明所述的定义。除非另外详细说明，所述烷氧基基团含有1-12个碳原子。在一实施方案中，烷氧基基团含有1-6个碳原子；在另一实施方案中，烷氧基基团含有1-4个碳原子；在又一实施方案中，烷氧基基团含有1-3个碳原子。所述烷氧基基团可以任选地被一个或多个本发明描述的取代基所取代。
烷氧基基团的实例包括，但并不限于，甲氧基(MeO、-OCH3)，乙氧基(EtO、-OCH2CH3)，1-丙氧基(n-PrO、n-丙氧基、-OCH2CH2CH3)，2-丙氧基(i-PrO、i-丙氧基、-OCH(CH3)2)，1-丁氧基(n-BuO、n-丁氧基、-OCH2CH2CH2CH3)，2-甲基-l-丙氧基(i-BuO、i-丁氧基、-OCH2CH(CH3)2)，2-丁氧基(s-BuO、s-丁氧基、-OCH(CH3)CH2CH3)，2-甲基-2-丙氧基(t-BuO、t-丁氧基、-OC(CH3)3)，1-戊氧基(n-戊氧基、-OCH2CH2CH2CH2CH3)，2-戊氧基(-OCH(CH3)CH2CH2CH3)，3-戊氧基(-OCH(CH2CH3)2)，2-甲基-2-丁氧基(-OC(CH3)2CH2CH3)，3-甲基-2-丁氧基(-OCH(CH3)CH(CH3)2)，3-甲基-l-丁氧基(-OCH2CH2CH(CH3)2)，2-甲基-l-丁氧基(-OCH2CH(CH3)CH2CH3)，等等。
术语“卤代烷基”或“卤代烷氧基”表示烷基或烷氧基基团被一个或多个卤素原子所取代，此类实例包含，但并不限于，三氟甲基(-CF3)、三氟甲氧基(-OCF3)、二氟乙基(-CH2CHF2,-CF2CH3,-CHFCH2F)、三氟乙基(-CH2CF3,-CF2CH2F,-CFHCHF2)、-CF(CH3)2等。
术语“氘代烷基”、“氘代烷氧基”、“氘代环烷基”、“氘代杂环基”、“氘代芳基”、或“氘代杂芳基”表示烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基基团被一个或多个D原子所取代，此类实例包含，但并不限于，一氘代甲基(-CH2D)、二氘代甲基(-CHD2)、三氘代甲基(-CD3)、一氘代甲氧基(-OCH2D)、二氘代甲氧基(-OCHD2)、三氘代甲氧基(-OCD3)、二氘代乙基(-CH2CHD2,-CD2CH3,-CHDCH2D)、五氘代乙基(-CD2CD3)、氘代环丙基、氘代环己基、五氘代苯基等。
术语“含氘(D)的基团”是指本发明所述的基团或基团部分上的一个或多个H原子被D取代，但不包含单独的D基团，此类基团包含，但不限于，C1-6氘代烷基、C3-8氘代环烷基、C2-9氘代杂环基、C6-10氘代芳基、C1-9氘代杂芳基等，其各自具有本发明所述定义，其中所述各基团独立任选地被一个或多个H、D、F、Cl、Br、I、-OH、-CN、-NO2、-NReRf、C1-6烷基和C1-6氘代烷基的基团所取代，其中Re和Rf均具有本发明所述定义。
术语“羟基烷基”或“羟基取代的烷基”和“羟基烷氧基”或“羟基取代的烷氧基”分别表示烷基或烷氧基基团，视情况而定，被一个或多个羟基基团所取代，其中，“羟基烷基”与“羟烷基”可以交换使用，此类实例包含，但并不限于，羟甲基(-CH2OH)、2-羟乙基(-CH2CH2OH)、1-羟乙基(-CH(OH)CH3)、2-羟基丙-2-基(-COH(CH3)2)、2-羟基-2-甲基丙基(-CH2COH(CH3)2)、3-羟丙基(-CH2CH2CH2OH)、2-羟丙基(-CH2CH(OH)CH3)、2-羟基-2甲基丙基(-CH2CH(OH)(CH3)CH3)、羟基甲氧基(-OCH2OH)等。
术语“氰基取代烷基”或“氰基烷基”包括被一个或多个氰基所取代的C1-10直链或支链烷基基团。其中一些实施例是，氰基烷基是被一个或多个氰基基团所取代的C1-6“较低级的氰基烷基”，另一些实施例是，氰基烷基是被一个或多个氰基基团所取代的C1-4“较低级的氰基烷基”，此类实例包括，但并不限于，CNCH2-、CNCH2CH2-、CNCH2CH2CH2-、CNCH2CHCNCH2-等。
术语“烷氨基”包括“N-烷基氨基”和“N,N-二烷基氨基”，其中氨基基团分别独立地被一个或两个烷基基团所取代。其中一些实施例是，烷基氨基是一个或两个C1-6烷基连接到氮原子上的较低级的烷基氨基基团。另外一些实施例是，烷基氨基是C1-3的较低级的烷基氨基基团。合适的烷基氨基基团可以是单烷基氨基或二烷基氨基，此类实例包括，但并不限于，N-甲氨基，N-乙氨基，N,N-二甲氨基，N,N-二乙氨基等等。
术语“氨基烷基”包括被一个或多个氨基所取代的C1-10直链或支链烷基基团。其中一些实施例是，氨基烷基是被一个或多个氨基基团所取代的C1-6“较低级的氨基烷基”，另一些实施例是，氨基烷基是被一个或多个氨基基团所取代的C1-4“较低级的氨基烷基”，此类实例包括，但并不限于，氨甲基，氨乙基，氨丙基，氨丁基和氨己基。
术语“环烷基”表示含有3-12个碳原子的，单价或多价的饱和单环，双环或三环体系。双环环烷基包含螺双环烷基、稠合双环烷基和桥双环烷基。在一些实施方案，环烷基包含3-12个碳原子；在另一些实施方案中，环烷基包含3-10个碳原子；在另一些实施方案中，环烷基包含3-8个碳原子；在另一些实施方案中，环烷基包含3-7个碳原子；在另一些实施方案中，环烷基包含3-6个碳原子；还在一些实施方案，环烷基为C7-C12环烷基，其包含C7-C12单环烷基、C7-C12双环烷基(如C7-C12螺双环烷基、C7-C12稠合双环烷基和C7-C12桥双环烷基)或C7-C12三环烷基。所述环烷基基团可以独立地未被取代或被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。术语“单环环烷基”或“单环烷基”表示单环体系的环烷基，其中所述环烷基具有如前所述的定义，所述单环环烷基基团可以独立地未被取代或被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。环烷基基团的实例包括，但不限于，环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊基-1-烯基、1-环戊基-2-烯基、1-环戊基-3-烯基、环己基、1-环己基-1-烯基、1-环己基-2-烯基、1-环己基-3-烯基、环己二烯基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一烷基、环十二烷基，等等。
术语“环烷基烷基”包括环烷基取代的烷基基团。在一些实施方案，环烷基烷基基团是指“较低级的环烷基烷基”基团，即环烷基基团连接到C1-6的烷基基团上。在另一些实施方案，环烷基烷基基团是指含C1-3的烷基的“苯烷撑”。其中具体实例包括，但不限于，环丙基甲基、环丁基甲基、环戊基甲基、环己基甲基、环戊基乙基、环己基乙基等。环烷基烷基上的环烷基可进一步被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
术语“杂环基”和“杂环”在此处可交换使用，都是指包含3-12个环原子的，单价或多价的，饱和或部分不饱和的，非芳香性的单环、双环或三环体系，其中至少一个环原子选自氮、氧和硫原子。在一些实施方案，杂环基或杂环包含4-12个环原子。在一些实施方案，杂环基或杂环包含5-12个环原子。在一些实施方案，杂环基或杂环包含4-8个环原子。在一些实施方案，杂环基或杂环包含3-10个环原子。在一些实施方案，杂环基或杂环包含3-8个环原子。在一些实施方案，杂环基或杂环包含3-6个环原子。在一些实施方案，杂环基或杂环包含4-7个环原子。除非另外说明，杂环基可以是碳基或氮基，且-CH2-基团可以任选地被-C(＝O)-替代，环的硫原子可以任选地被氧化成S-氧化物，环的氮原子可以任选地被氧化成N-氧化合物。杂环基包含饱和的杂环基(杂环烷基)和部分不饱和的杂环基。所述的杂环基具有一个或多个连接点与分子的其余部分相连。杂环基的实例包括，但不限于：环氧乙烷基、氮杂环丁基、氧杂环丁基、硫杂环丁基、吡咯烷基、吡咯啉基、吡唑啉基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、二氢噻吩基、1,3-二氧环戊基、二硫环戊基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、四氢噻喃基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、哌嗪基、二噁烷基、二噻烷基、噻噁烷基、高哌嗪基、高哌啶基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基、氮单杂环庚烷、氧氮杂
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基(如，1,4-氧氮杂/>
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基、1,2-氧氮杂/>
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基)、二氮杂/>
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基(如，1,4-二氮杂/>
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基、1,2-二氮杂/>
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基)、二氧杂/>
Figure BDA0003866228850000055
基(如，1,4-二氧杂/>
Figure BDA0003866228850000056
基、1,2-二氧杂/>
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基)、硫氮杂/>
Figure BDA0003866228850000058
基(如1,4-硫氮杂/>
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基、1,2-硫氮杂/>
Figure BDA00038662288500000510
基)、吲哚啉基、1,2,3,4-四氢异喹啉基、1,3-苯并二噁茂基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基、2-氮杂螺[4.4]壬烷基、1,6-二氧杂螺[4.4]壬烷基、2-氮杂螺[4.5]癸烷基、8-氮杂螺[4.5]癸烷基、7-氮杂螺[4.5]癸烷基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、2-氮杂螺[5.5]十一烷基、八氢-1H-异吲哚基、八氢环戊烷并[c]吡咯基、二氢吲哚基、1,2,3,4-四氢异喹啉基、六氢呋喃并[3,2-b]呋喃基和十二氢异喹啉基，等。杂环基中-CH2-基团被-C(＝O)-替代的实例包括，但不限于，2-氧代吡咯烷基、氧代-1,3-噻唑烷基、2-哌啶酮基和3,5-二氧代哌啶基。杂环基中硫原子被氧化的实例包括，但不限于，环丁砜基、1,1-二氧代硫代吗啉基。所述的杂环基基团可以任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
还在一实施方案中，杂环基为4-7个原子组成的杂环基，是指包含4-7个环原子的单价或多价的，饱和或部分不饱和的非芳香性的单环或双环，其中至少一个环原子选自氮、硫和氧原子。除非另外说明，4-7个原子组成的杂环基可以是碳基或氮基，且-CH2-基团可以任选地被-C(＝O)-替代。环的硫原子可以任选地被氧化成S-氧化物。环的氮原子可以任选地被氧化成N-氧化合物。所述4-7个原子组成的杂环基具有一个或多个连接点与分子的其余部分相连。其中，4-7个原子组成的单环杂环基的实例包括，但不限于：氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、吡咯啉基、吡唑啉基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、二氢噻吩基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、四氢噻喃基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、哌嗪基、二噁烷基、二噻烷基、噻噁烷基、1,2-噁嗪基、1,2-噻嗪基、六氢哒嗪基、高哌嗪基、高哌啶基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基、氧氮杂
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基(1,4-氧氮杂/>
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基、1,2-氧氮杂/>
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基)、二氮杂/>
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基(1,4-二氮杂/>
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基、1,2-二氮杂/>
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基)和硫氮杂/>
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基(1,4-硫氮杂/>
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基、1,2-硫氮杂/>
Figure BDA00038662288500000519
基)等；4-7个原子组成的双环杂环基的实例包括，但不限于：3-氮杂双环[3,2,0]庚烷、3-氧代双环[3,2,0]庚烷等；4-7个原子组成的杂环基中-CH2-基团被-C(＝O)-替代的实例包括，但不限于，2-氧代吡咯烷基、氧代-1,3-噻唑烷基、2-哌啶酮基和3,5-二氧代哌啶基；4-7个原子组成的杂环基中硫原子被氧化的实例包括，但不限于，环丁砜基、1,1-二氧代四氢噻吩、1,1-二氧代四氢噻喃、1,1-二氧代硫代吗啉基。所述的4-7个原子组成的杂环基基团可以任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
术语“杂环基烷基”包括杂环基取代的烷基，其中杂环基和烷基均具有如本发明所述的含义，此类实例包括，但并不限于四氢呋喃基甲基、吡咯-2-基甲基、吗啉-4-基乙基、哌嗪-4-基乙基、哌啶-4-基乙基等。
术语“芳基”表示含有6-14个环原子，或6-12个环原子，或6-10个环原子的单环、双环和三环的碳环体系，其中，至少一个环体系是芳香族的，其中每一个环体系包含3-7个原子组成的环，且有一个或多个连接点与分子的其余部分相连。术语“芳基”可以和术语“芳香环”交换使用。芳基基团的实例可以包括苯基、萘基和蒽基。所述芳基基团可以独立任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
术语“芳基烷基”或“芳烷基”包括芳基取代的烷基基团。在一些实施方案，芳基烷基基团是指“较低级的芳基烷基”基团，即芳基基团连接到C1-6的烷基基团上。在另一些实施方案，芳基烷基基团是指含C1-3的烷基的“苯烷撑”。其中具体实例包括，但不限于，苄基、二苯基甲基、苯乙基等。芳基烷基上的芳基可进一步被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
术语“杂芳基”表示含有5-12个环原子，或5-10个环原子，或5-6个环原子的单环、双环和三环体系，其中所有环均是芳香族的，且至少一个芳香环包含一个或多个杂原子，其中每一个环体系包含5-7个原子组成的环，且有一个或多个连接点与分子其余部分相连。术语“杂芳基”可以与术语“杂芳环”或“杂芳族化合物”交换使用。在一实施方案中，杂芳基为包含1，2，3或4个独立选自O，S和N的杂原子的5-12个原子组成的杂芳基。在另一实施案中，杂芳基为包含1，2，3或4个独立选自O，S和N的杂原子的5-10个原子组成的杂芳基。在另一实施方案中，杂芳基为包含1，2，3或4个独立选自O，S和N的杂原子的5-6个原子组成的杂芳基。所述杂芳基基团任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
杂芳基基团的实例包括，但并不限于，2-呋喃基、3-呋喃基、N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、5-咪唑基、3-异噁唑基、4-异噁唑基、5-异噁唑基、2-噁唑基、4-噁唑基、5-噁唑基、N-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、哒嗪基(如3-哒嗪基)、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、四唑基(如5-四唑基)、***基(如2-***基和5-***基)、2-噻吩基、3-噻吩基、吡唑基(如2-吡唑基)、异噻唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,3-***基、1,2,3-硫代二唑基、1,3,4-硫代二唑基、1,2,5-硫代二唑基、吡嗪基、1,3,5-三嗪基；也包括以下的双环，但绝不限于这些双环：苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基(如2-吲哚基)、嘌呤基、喹啉基(如2-喹啉基，3-喹啉基，4-喹啉基)、异喹啉基(如1-异喹啉基、3-异喹啉基或4-异喹啉基)、咪唑并[1,2-a]吡啶基、吡唑并[1,5-a]吡啶基、吡唑并[1,5-a]嘧啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、[1,2,4]***并[4,3-b]哒嗪基、[1,2,4]***并[1,5-a]嘧啶基、[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶基，等等。
术语“杂芳基烷基”表示烷基基团被一个或多个杂芳基所取代，其中杂芳基和烷基基团均具有本发明所述的含义，此类实例包括，但并不限于，吡啶-2-甲基、咪唑-2-甲基、呋喃-2-乙基、吲哚-3-甲基等。
术语“卤素”是指F，Cl，Br或I。
如本发明所描述的，环体系中有两个连接点与分子其余部分相连，如式(a1)所示，表示既可以是E端也可以是E’端与分子其余部分相连，即两端的连接方式可以互换。
E-(CH2)t1-L-E′ (a1)
像本发明所描述的，取代基画一个键连接到中心的环上形成的环体系(如下所示)代表取代基可在任一环上任何可取代的位置取代。例如，式b代表A环或B环上任何可能被取代的位置均可被取代，如式c、d、e、f、g、h、i、j、k、l、m、n、o、p、q等所示。
Figure BDA0003866228850000061
本发明所使用的“药学上可接受的盐”是指本发明的化合物的有机盐和无机盐。药学上可接受的盐在所属领域是为我们所熟知的，如文献：S.M.Berge et al.,describepharmaceutically acceptable salts in detail in J.Pharmaceutical Sciences,1977,66:1-19.所记载的。药学上可接受的无毒的酸形成的盐包括，但并不限于，与氨基基团反应形成的无机酸盐有盐酸盐，氢溴酸盐，磷酸盐，硫酸盐，高氯酸盐，和有机酸盐如乙酸盐，草酸盐，马来酸盐，酒石酸盐，柠檬酸盐，琥珀酸盐，丙二酸盐，或通过书籍文献上所记载的其他方法如离子交换法来得到这些盐。其他药学上可接受的盐包括己二酸盐，藻酸盐，抗坏血酸盐，天冬氨酸盐，苯磺酸盐，苯甲酸盐，重硫酸盐，硼酸盐，丁酸盐，樟脑酸盐，樟脑磺酸盐，环戊基丙酸盐，二葡萄糖酸盐，十二烷基硫酸盐，乙磺酸盐，甲酸盐，反丁烯二酸盐，葡庚糖酸盐，甘油磷酸盐，葡萄糖酸盐，半硫酸盐，庚酸盐，己酸盐，氢碘酸盐，2-羟基-乙磺酸盐，乳糖醛酸盐，乳酸盐，月桂酸盐，月桂基硫酸盐，苹果酸盐，丙二酸盐，甲磺酸盐，2-萘磺酸盐，烟酸盐，硝酸盐，油酸盐，棕榈酸盐，扑酸盐，果胶酸盐，过硫酸盐，3-苯基丙酸盐，苦味酸盐，特戊酸盐，丙酸盐，硬脂酸盐，硫氰酸盐，对甲苯磺酸盐，十一酸盐，戊酸盐，等等。通过适当的碱得到的盐包括碱金属，碱土金属，铵和N+(C1-4烷基)4的盐。本发明也拟构思了任何所包含N的基团的化合物所形成的季铵盐。水溶性或油溶性或分散产物可以通过季铵化作用得到。碱金属或碱土金属盐包括钠，锂，钾，钙，镁，等等。药学上可接受的盐进一步包括适当的、无毒的铵，季铵盐和抗平衡离子形成的胺阳离子，如卤化物，氢氧化物，羧化物，硫酸化物，磷酸化物，硝酸化物，C1-8磺酸化物和芳香磺酸化物。
本发明的“溶剂化物”是指一个或多个溶剂分子与本发明的化合物所形成的缔合物。形成溶剂化物的溶剂包括，但并不限于，水，异丙醇，乙醇，甲醇，二甲亚砜，乙酸乙酯，乙酸和氨基乙醇。术语“水合物”是指溶剂分子是水所形成的缔合物。
本发明化合物的描述
本发明公开了一类新颖的嘧啶胺化合物，可作为PI3-激酶活性，特别是PI3K-γ活性的抑制剂，用于预防、处理、治疗、和/或减轻PI3-激酶异常相关疾病、病症、和/或病况，例如呼吸道疾病，病毒感染，非病毒呼吸道感染，过敏性疾病，自身免疫性疾病，炎性疾病，心血管疾病，恶性血液病，神经退行性疾病，胰腺炎，多器官衰竭，肾病，血小板聚集，癌症，***活力，移植排斥，移植物排斥，肺损伤或疼痛等。与已有的同类化合物相比，本发明的化合物具有更好的药理活性，具体而言，本发明化合物对PI3-激酶显示出优异的抑制活性并对PI3Kγ具有高度选择性，并且在药代动力学方面表现出明显优势。因此，本发明化合物具有非常好的开发前景。
本发明公开化合物可显示对PI3-激酶，特别是PI3K-γ表现出较强的抑制活性。一方面，本发明提供了一种异喹啉酮类及喹唑啉酮类化合物，其具有式(I)所示结构：
Figure BDA0003866228850000071
或其立体异构体、互变异构体、氘代物、氮氧化物、溶剂化物、或药学上可接受的盐；
其中，
X是-C(Rc)-、或N；
Z1和Z2各自独立地为-C(R4d)-或N；
Ra、Rb和Rc各自独立地为H、D、F、Cl、C1-3烷基、C1-6氘代烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷基、C1-3羟基烷基、C1-3氨基烷基、C1-3氰基烷基、C1-6氘代烷氧基、被1至5个氘取代的C1-6卤代烷基、被1至5个氘取代的C1-6羟基烷基、被1至5个氘取代的C3-8环烷基、或被1至5个氘取代的C1-9杂芳基；
R1是H、D、-C1-6烷基-NReRf、-C(＝O)R7、-C(＝O)OR7a、-C(＝O)NR7R7a、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6卤代烷基、C3-8环烷基、C2-9杂环基、C6-10芳基、或C1-9杂芳基；其中R1任选地被0、1、2、3或4个R5取代；
R2在每次出现时，分别独立地为H、D、F、Cl、Br、I、-OH、-CN、-NO2、-NReRf、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、C1-6氰基烷基、C2-9杂环基、C3-8环烷基、C6-10芳基、或C1-9杂芳基；其中R2在每次出现时，独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6烷氧基和C1-6卤代烷基的基团取代；
R3是H、D、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C3-8氘代环烷基、C2-9杂环基、C6-10芳基、或C1-9杂芳基；其中R3任选地被0、1、2、3、4或5个R6取代；
R4a、R4b、R4c和R4d各自独立地为H、D、F、Cl、-CN、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、C1-6氰基烷基、C2-9杂环基、C3-8环烷基、C6-10芳基、或C1-9杂芳基；其中R4a、R4b、R4c和R4d各自独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6烷氧基、C1-6氘代烷氧基、C1-6卤代烷基和C1-6卤代氘代烷基的基团取代；
R5和R6，在每次出现时，分别独立地为H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-CN、-NO2、-NReRf、-C(＝O)R7、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、C1-6氰基烷基、C2-9杂环基、C3-8环烷基、C6-10芳基、或C1-9杂芳基；其中所述各-NReRf、-C(＝O)R7、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、C1-6氰基烷基、C2-9杂环基、C3-8环烷基、C6-10芳基和C1-9杂芳基独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6烷氧基和C1-6卤代烷基的基团取代；
Re、Rf、R7和R7a，在每次出现时，分别独立地为H、D、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷基C1-6烷基、C2-9杂环基、C2-9杂环基C1-6烷基、C6-10芳基、C6-10芳基C1-6烷基、C1-9杂芳基、或C1-9杂芳基C1-6烷基；其中所述各C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷基C1-6烷基、C2-9杂环基、C2-9杂环基C1-6烷基、C6-12芳基、C6-12芳基C1-6烷基、C1-9杂芳基和C1-9杂芳基C1-6烷基独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6烷氧基和C1-6卤代烷基的基团取代；和
n是0、1、2、或3；
条件是：1)当R1是吡唑基时、其中R1任选地被0、1、2、3或4个R5取代，则各R2、R4a、R4b和R4c中的至少一个独立地为F、Cl、-CN、C1-6烷氧基、C1-6氘代烷基、C1-6氘代烷氧基、被1至5个氘取代的C1-6卤代烷基、被1至5个氘取代的C1-6羟基烷基、被1至5个氘取代的C3-8环烷基、或被1至5个氘取代的C1-9杂芳基；或者2)当R1是H、D、-C1-6烷基-NReRf、-C(＝O)R7、-C(＝O)OR7a、-C(＝O)NR7R7a、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6卤代烷基、C3-8环烷基、C2-9杂环基、C6-10芳基、或除吡唑基以外的C1-9杂芳基时、其中R1任选地被0、1、2、3或4个R5取代，则各Ra、Rb、Rc、R2、R3、R4a、R4b、R4c和R4d中的至少一个独立地为D(氘)、C1-6氘代烷基、C1-6氘代烷氧基、被1至5个氘取代的C1-6卤代烷基、被1至5个氘取代的C1-6羟基烷基、被1至5个氘取代的C3-8环烷基、或被1至5个氘取代的C1-9杂芳基。
另一方面，本发明提供了一种异喹啉酮类及喹唑啉酮类化合物，其具有式(Ib)所示结构：
Figure BDA0003866228850000081
或其立体异构体、互变异构体、氘代物、氮氧化物、溶剂化物、或药学上可接受的盐；
其中，
X是-C(Rc)-、或N；
Z1和Z2各自独立地为-C(R4d)-或N；
Ra、Rb和Rc各自独立地为H、D、F、Cl、C1-3烷基、C1-3氘代烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷基、C1-3羟基烷基、C1-3氨基烷基、或C1-3氰基烷基；
R1是H、D、-C1-6烷基-NReRf、-C(＝O)R7、-C(＝O)OR7a、-C(＝O)NR7R7a、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6卤代烷基、C3-8环烷基、C2-9杂环基、C6-10芳基、或C1-9杂芳基；其中R1任选地被0、1、2、3或4个R5取代；
R2在每次出现时，分别独立地为H、D、F、Cl、Br、I、-OH、-CN、-NO2、-NReRf、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、C1-6氰基烷基、C2-9杂环基、C3-8环烷基、C6-10芳基、或C1-9杂芳基；其中各R2独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6烷氧基和C1-6卤代烷基的基团取代；
R3是H、D、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C3-8氘代环烷基、C2-9杂环基、C6-10芳基、或C1-9杂芳基；其中R3任选地被0、1、2、3、4或5个R6取代；
R4a、R4b、R4c和R4d各自独立地为H、D、F、Cl、含氘的基团、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、C1-6氰基烷基、C2-9杂环基、C3-8环烷基、C6-10芳基、或C1-9杂芳基；其中R4a、R4b、R4c和R4d各自独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6烷氧基、C1-6氘代烷氧基、C1-6卤代烷基和C1-6卤代氘代烷基的基团取代；
R5和R6，在每次出现时，分别独立地为H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-CN、-NO2、-NReRf、-C(＝O)R7、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、C1-6氰基烷基、C2-9杂环基、C3-8环烷基、C6-10芳基、或C1-9杂芳基；其中所述各-NReRf、-C(＝O)R7、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、C1-6氰基烷基、C2-9杂环基、C3-8环烷基、C6-10芳基和C1-9杂芳基独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6烷氧基和C1-6卤代烷基的基团取代；
Re、Rf、R7和R7a，在每次出现时，分别独立地为H、D、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷基C1-6烷基、C2-9杂环基、C2-9杂环基C1-6烷基、C6-10芳基、C6-10芳基C1-6烷基、C1-9杂芳基、或C1-9杂芳基C1-6烷基；其中所述各C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷基C1-6烷基、C2-9杂环基、C2-9杂环基C1-6烷基、C6-12芳基、C6-12芳基C1-6烷基、C1-9杂芳基和C1-9杂芳基C1-6烷基独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6烷氧基和C1-6卤代烷基的基团取代；和
n是0、1、2、或3；
条件是：1)当R1是吡唑基时，则R2、R4a、R4b和R4c中的至少一个独立地为F、Cl、或含氘的基团；或者2)当R1是H、D、-C1-6烷基-NReRf、-C(＝O)R7、-C(＝O)OR7a、-C(＝O)NR7R7a、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6卤代烷基、C3-8环烷基、C2-9杂环基、C6-10芳基、或除吡唑基以外的C1-9杂芳基时，Ra、Rb、Rc、R2、R3、R4a、R4b、R4c和R4d中的至少一个独立地为D(氘)、或含氘的基团。
在一些实施方案，式(I)所示化合物具有式(Ia)所示结构：
Figure BDA0003866228850000091
或其立体异构体、互变异构体、氘代物、氮氧化物、溶剂化物、或药学上可接受的盐。
在式(I)或(Ia)的一些实施方案中，R1是苯基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基、噻唑基、咪唑基、噁唑基、噻二唑基、
Figure BDA0003866228850000101
Figure BDA0003866228850000102
其中Y1是O、S、或-NH-；
Y6是O、或-NH-；
t3和t4各自独立地为1、2、3或4；和
其中R1任选地被0、1、2、3或4个R5取代；
条件是：1)R1为
Figure BDA0003866228850000103
时、其中R1任选地被0、1、2、3或4个R5取代，则各R2、R4a、R4b和R4c中的至少一个独立地为F、Cl、-CN、C1-3烷氧基、C1-3氘代烷基、C1-3氘代烷氧基、被1至5个氘取代的C1-3卤代烷基、被1至5个氘取代的C1-3羟基烷基、被1至5个氘取代的C3-6环烷基、或被1至5个氘取代的C1-9杂芳基；2)当R1为苯基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基、噻唑基、咪唑基、噁唑基、噻二唑基、/>
Figure BDA0003866228850000104
时、其中R1任选地被0、1、2、3或4个R5取代，则各Ra、Rb、Rc、R2、R3、R4a、R4b、R4c和R4d中的至少一个独立地为D(氘)、C1-3氘代烷基、C1-3氘代烷氧基、被1至5个氘取代的C1-3卤代烷基、被1至5个氘取代的C1-3羟基烷基、被1至5个氘取代的C3-6环烷基、或被1至5个氘取代的C1-9杂芳基。
在式(I)或(Ib)的一些实施方案中，R1是苯基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基、噻唑基、咪唑基、噁唑基、噻二唑基、
Figure BDA0003866228850000105
Figure BDA0003866228850000106
其中Y1是O、S、或-NH-；
Y6是O、或-NH-；
t3和t4各自独立地为1、2、3或4；和
其中R1任选地被0、1、2、3或4个R5取代；
条件是：1)R1为
Figure BDA0003866228850000107
时，则R2、R4a、R4b和R4c中的至少一个独立地为F、Cl、或含氘的基团；；2)当R1为苯基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基、噻唑基、咪唑基、噁唑基、噻二唑基、/>
Figure BDA0003866228850000108
Figure BDA0003866228850000111
时，则Ra、Rb、Rc、R2、R3、R4a、R4b、R4c和R4d中的至少一个独立地为D(氘)、或含氘的基团。
在式(I)或(Ia)的一些实施方案中，R4a、R4b、R4c和R4d各自独立地为H、D、F、Cl、C1-3烷基、C1-3氘代烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷基、C1-3卤代烷氧基、C1-3羟基烷基、C1-3氨基烷基、C1-3氰基烷基、C3-6杂环基、C3-6氘代杂环基、C3-6环烷基、C3-6氘代环烷基、苯基、或5-6个原子组成的杂芳基；其中R4a、R4b、R4c和R4d各自独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-3烷基、C1-3氘代烷基、C1-3烷氧基、C1-3氘代烷氧基、C1-3卤代烷基和C1-3卤代氘代烷基的基团取代。
在式(I)、(Ia)或(Ib)的一些实施方案中，R4a、R4b、R4c和R4d各自独立地为H，F，Cl，D，-CN，-OCH3，-OCH2CH3，
Figure BDA0003866228850000112
/>
Figure BDA0003866228850000113
另一方面，本发明还提供了式(II)所示化合物：
Figure BDA0003866228850000114
或其立体异构体、互变异构体、氘代物、氮氧化物、溶剂化物、或药学上可接受的盐；
其中，
X是-C(Rc)-、或N；
W是C3-10环烷基、C2-9杂环基、C6-10芳基、或C1-9杂芳基；其中W任选地被0、1、2、3或4个R4取代；
Ra、Rb和Rc各自独立地为H、D、F、Cl、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、或C1-6氰基烷基；
R1是-C1-3羟基烷基-C(＝O)OR7a，-C(＝O)OR7a，-C(＝O)NR7R7a，
Figure BDA0003866228850000115
Figure BDA0003866228850000116
其中Y2和Y3各自独立地为-(CH2)t1-、-(CH2)t1-L-、-(CH2)t1-L-(CH2)t2-、O、或-NH-；
Y4是-(CH2)t1-、-(CH2)t1-L-、-(CH2)t1-L-(CH2)t2-、-C(＝O)-、O、S、或-NH-；
Y5是-CH-、或N；
Y6是O、或-NH-；
Y7是O、或-NH-；
L是-C(＝O)-、O、S、或-NH-；
t1、t2和t3在每次出现时，各自独立地为1、2、3或4；
t4是1；t5是1或2；和
Figure BDA0003866228850000121
代表单键或双键；和
其中R1任选地被0、1、2、3或4个R5取代；
R2在每次出现时，分别独立地为H、D、F、Cl、Br、I、-OH、-CN、-NO2、-NReRf、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、C1-6氰基烷基、C2-9杂环基、C3-8环烷基、C6-10芳基、或C1-9杂芳基；其中R2在每次出现时，独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6烷氧基和C1-6卤代烷基的基团取代；
R3是H、D、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C3-8氘代环烷基、C2-9杂环基、C6-10芳基、或C1-9杂芳基；其中R3任选地被0、1、2、3、4或5个R6取代；
R4在每次出现时，分别独立地为H、D、F、Cl、Br、I、-OH、-CN、-NO2、-NReRf、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、C1-6氰基烷基、C2-9杂环基、C3-8环烷基、C6-10芳基、或C1-9杂芳基；其中R4在每次出现时，独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6烷氧基和C1-6卤代烷基的基团取代；
R5和R6，在每次出现时，分别独立地为H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-CN、-NO2、-NReRf、-C(＝O)R7、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、C1-6氰基烷基、C2-9杂环基、C3-8环烷基、C6-10芳基、或C1-9杂芳基；其中所述各-NReRf、-C(＝O)R7、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、C1-6氰基烷基、C2-9杂环基、C3-8环烷基、C6-10芳基和C1-9杂芳基独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6烷氧基和C1-6卤代烷基的基团取代；
R5a是-C(＝O)R7、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、C1-6氰基烷基、C2-9杂环基、C3-8环烷基、C6-10芳基、或C1-9杂芳基；其中所述各-C(＝O)R7、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、C1-6氰基烷基、C2-9杂环基、C3-8环烷基、C6-10芳基和C1-9杂芳基独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6烷氧基和C1-6卤代烷基的基团取代；
Re、Rf、R7和R7a，在每次出现时，分别独立地为H、D、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷基C1-6烷基、C2-9杂环基、C2-9杂环基C1-6烷基、C6-10芳基、C6-10芳基C1-6烷基、C1-9杂芳基、或C1-9杂芳基C1-6烷基；其中所述各C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷基C1-6烷基、C2-9杂环基、C2-9杂环基C1-6烷基、C6-12芳基、C6-12芳基C1-6烷基、C1-9杂芳基和C1-9杂芳基C1-6烷基独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6烷氧基和C1-6卤代烷基的基团取代；和
n是0、1、2、或3。
在式(II)的一些实施方案中，W是
C3-8环烷基、C3-8杂环基、
Figure BDA0003866228850000122
Figure BDA0003866228850000131
其中Z1、Z2和Z3各自独立地为-CH-、或N；和
其中W任选地被0、1、2、3或4个R4取代。
在一些实施方案，式(II)所示化合物具有式(IIa)所示结构：
Figure BDA0003866228850000132
或其立体异构体、互变异构体、氘代物、氮氧化物、溶剂化物、或药学上可接受的盐；
其中，m是0、1、2或3。
在式(II)或(IIa)的一些实施方案中，R1是
Figure BDA0003866228850000133
Figure BDA0003866228850000134
Figure BDA0003866228850000135
其中R1任选地被0、1、2、3或4个R5取代。
在式(II)或(IIa)的一些实施方案中，R4在每次出现时，分别独立地为H、D、F、Cl、Br、I、-OH、-CN、-NO2、-NH2、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷基、C1-3卤代烷氧基、C1-3羟基烷基、C1-3氨基烷基、C1-3氰基烷基、C3-6杂环基、C3-6环烷基、苯基、或5-6个原子组成的杂芳基；其中R4在每次出现时，分别独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-3烷基、C1-3氘代烷基、C1-3烷氧基和C1-3卤代烷基的基团取代。
在式(II)或(IIa)的一些实施方案中，R4在每次出现时，分别独立地为R4在每次出现时，分别独立地为H、D、F、Cl、Br、I、-OH、-CN、-NO2、-NH2、甲基、乙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、氟代甲基、-CD3、-CHD2、-CH2D、环丙基、苯基、或5-6个原子组成的杂芳基；其中各R4独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-3烷基、C1-3氘代烷基、C1-3烷氧基和C1-3卤代烷基的基团取代。
在式(II)或(IIa)的一些实施方案中，R5a是-C(＝O)R7、C1-4烷基、C1-4氘代烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷氧基、C1-4羟基烷基、C1-4氨基烷基、C1-4氰基烷基、C3-6杂环基、C3-6环烷基、C6-10芳基、或C1-9杂芳基；其中所述各-C(＝O)R7、C1-4烷基、C1-4氘代烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷氧基、C1-4羟基烷基、C1-4氨基烷基、C1-4氰基烷基、C3-6杂环基、C3-6环烷基、C6-10芳基和C1-9杂芳基独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-6烷基、C1-4氘代烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤代烷基的基团取代。
在式(II)或(IIa)的一些实施方案中，R5a是甲基、乙基、异丙基、环丙基、-CF3、-CH2CH2OH、-C(＝O)CH3、-C(＝O)CH2CH3、或-CH2CH2OCH3。
在式(I)、(Ia)、(Ib)、(II)或(IIa)的一些实施方案中，R3是环丙基、吡啶基、或苯基；其中R3任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、F、Cl、Br、I、-OH、-CN、-NO2、-NReRf、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C1-3氘代烷基和C1-3卤代烷基的基团取代。
在式(I)、(Ia)、(Ib)、(II)或(IIa)的一些实施方案中，R5和R6在每次出现时，分别独立地为H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-CN、-NO2、-NReRf、-C(＝O)R7、C1-3烷基、C1-6氘代烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷基、C1-3羟基烷基、C3-6环烷基、苯基、或5-6个原子组成的杂芳基；其中所述各-NReRf、-C(＝O)R7、C1-3烷基、C1-6氘代烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷基、C1-3羟基烷基、C3-6环烷基、苯基和5-6个原子组成的杂芳基独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-3烷基、C1-3氘代烷基、C1-3烷氧基和C1-3卤代烷基的基团取代。
在式(I)、(Ia)、(Ib)、(II)或(IIa)的一些实施方案中，R5和R6在每次出现时，分别独立地为H、D、F、Cl、Br、I、-OH、-CN、-NO2、-NReRf、甲基、乙基、异丙基、环丙基、-CD3、-OCD3、-CF3、-CH2CH2OH、-C(＝O)CH3、-C(＝O)CH2CH3、或-CH2CH2OCH3。
在式(I)、(Ia)、(II)或(IIa)的一些实施方案中，Ra、Rb和Rc各自独立地为H、D、F、-CN、-NO2、-NReRf、甲基、乙基、异丙基、-CD3、-CHD2、-CH2D、甲氧基、乙氧基、卤代甲基、卤代乙基、或-CH2CH2OH。
在式(I)、(Ia)、(Ib)、(II)或(IIa)的一些实施方案中，Re、Rf、R7和R7a，在每次出现时，分别独立地为H、D、C1-4烷基、C1-4氘代烷基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、C3-6环烷基、C3-6环烷基C1-4烷基、C3-6杂环基、C3-6杂环基C1-4烷基、C6-10芳基、C6-10芳基C1-4烷基、C1-9杂芳基、或C1-9杂芳基C1-4烷基；其中所述各C1-4烷基、C1-4氘代烷基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、C3-6环烷基、C3-6环烷基C1-4烷基、C3-6杂环基、C3-6杂环基C1-4烷基、C6-10芳基、C6-10芳基C1-4烷基、C1-9杂芳基和C1-9杂芳基C1-4烷基独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立地选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-4烷基、C1-4氘代烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤代烷基的基团取代。
在式(I)、(Ia)、(Ib)、(II)或(IIa)的一些实施方案中，Re、Rf、R7和R7a，在每次出现时，分别独立地为H、D、C1-2烷基、C1-2氘代烷基、C1-2卤代烷基、苯基、或环丙基。
在式(I)、(Ia)或(Ib)的一些实施方案中，所述化合物为具有以下结构之一的化合物：
Figure BDA0003866228850000141
/>
Figure BDA0003866228850000151
/>
Figure BDA0003866228850000161
或其立体异构体、互变异构体、氘代物、氮氧化物、溶剂化物、或药学上可接受的盐。
在式(II)或(IIa)的一些实施方案中，所述化合物为具有以下结构之一的化合物：
Figure BDA0003866228850000162
/>
Figure BDA0003866228850000171
或其立体异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、或药学上可接受的盐。
除非另有说明，式(I)、(Ia)、(Ib)、(II)或(IIa)所示化合物的立体异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢产物或药学上可接受的盐均包含在本发明范围内。
本发明公开化合物可含有不对称或手性中心，因此可以不同的立体异构体形式存在。本发明旨在使式(I)、(Ia)、(Ib)、(II)或(IIa)所示化合物的所有立体异构体形式，包括但不限于非对映异构体、对映异构体、阻转异构体和几何(或构象)异构体，以及它们的混合物如外消旋混合物，成为本发明的组成部分。
在本发明公开的结构中，当任意特定的手性原子的立体化学未指明时，则该结构的所有立体异构体均考虑在本发明之内，并且作为本发明公开化合物包括在本发明中。当立体化学被表示特定构型的实楔形线(solid wedge)或虚线指明时，则该结构的立体异构体就此明确和定义。
式(I)、(Ia)、(Ib)、(II)或(IIa)所示化合物可以盐的形式存在。在一实施方案，所述盐是指药学上可接受的盐。术语“药学上可接受的”是指物质或组合物必须与包含制剂的其它成分和/或用其治疗的哺乳动物化学上和/或毒理学上相容。在另一实施方案，所述盐不一定是药学上可接受的盐，可以是用于制备和/或提纯式(I)、(Ia)、(Ib)、(II)或(IIa)所示化合物和/或用于分离本式(I)、(Ia)、(II)或(IIa)所示化合物的对映体的中间体。
另一方面，本发明涉及制备式(I)、(Ia)、(Ib)、(II)或(IIa)所示化合物的中间体。
另一方面，本发明涉及式(I)、(Ia)、(Ib)、(II)或(IIa)所示化合物的制备、分离和纯化的方法。
另一方面，本发明提供一种药物组合物，所述药物组合物包含本发明化合物。在一实施方案中，本发明所述药物组合物，更进一步包括药学上可接受的辅料、稀释剂或载体、或其组合。在另一实施方案，所述药物组合物可以是液体、固体、半固体、凝胶或喷雾剂型。
在一些实施方案，本发明所述药物组合物进一步包含附加治疗剂。
另一方面，本发明涉及一种使用本发明所述的化合物或本发明所述的药物组合物在制备用于预防、处理、治疗、和/或减轻PI3-激酶介导的疾病、病症、和/或病况，或抑制PI3-激酶活性的药物中的用途。
在一些实施方案，所述PI3-激酶介导的疾病、病症、和/或病况选自呼吸道疾病，病毒感染，非病毒呼吸道感染，过敏性疾病，自身免疫性疾病，炎性疾病，心血管疾病，恶性血液病，神经退行性疾病，胰腺炎，多器官衰竭，肾病，血小板聚集，癌症，***活力，移植排斥，移植物排斥，肺损伤或疼痛。
在一些实施方案，所述PI3-激酶介导的疾病、病症、和/或病况选自哮喘，慢性阻塞性肺病(COPD)，病毒性呼吸道感染，病毒性呼吸道疾病恶化，曲霉病，利什曼病，过敏性鼻炎，过敏性皮肤炎，风湿性关节炎，多发性硬化，炎性肠病，血栓症，动脉粥样硬化，恶性血液病，神经退行性疾病，胰腺炎，多器官衰竭，肾病，血小板聚集，癌症，***活力，移植排斥，移植物排斥，肺损伤，与类风湿性关节炎或骨关节炎相关的疼痛，背痛，全身炎症性疼痛，肝后神经痛，糖尿病性神经病变，炎症性神经性疼痛(外伤)，三叉神经痛或中枢性疼痛。
在一些实施方案，所述癌症选自急性骨髓性白血病，脊髓发育异常综合征，骨髓增生病，慢性骨髓性白血病，T细胞急性淋巴细胞白血病，B细胞急性淋巴细胞白血病，非霍奇金淋巴瘤，B细胞淋巴瘤，实体瘤，或乳腺癌。
在一些实施方案，其中所述PI3-激酶是PI3K-γ。
本发明化合物的药物组合物、制剂和给药
本发明提供了一种药物组合物，其包含本发明公开化合物，或实施例中所列化合物，或其立体异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物或药学上可接受的盐；和药学上可接受的辅料、稀释剂、载体、溶媒或其组合。本发明公开的药物组合物中化合物的量是指能有效检测到抑制生物样本或患者体内蛋白激酶的量。
也应认识到，本发明的某些化合物可以以游离形式存在用于治疗，或者如果适当可以以其药学上可接受的衍生物的形式存在。药学上可接受衍生物的一些非限制性的实施方案包括药学上可接受的盐、酯、这些酯的盐、或者对有需要的患者给药时能直接或间接提供本发明所述化合物或其代谢产物或残余物的任何另外的加合物或衍生物。
在文献例如Remington:The Science and Practice of Pharmacy,21stedition,2005,ed.D.B.Troy,Lippincott Williams&Wilkins,Philadelphia,andEncyclopedia of Pharmaceutical Technology,eds.J.Swarbrick and J.C.Boylan,1988-1999,Marcel Dekker,New York中披露了用于配置药学上可接受的组合物的各种载体，和用于其制备的公知技术，这些文献各自的内容通过引用并入本发明。除任何诸如因产生任何不期望的生物作用，或以有害方式与药学上可接受组合物中的任何其它成分发生相互作用而与本发明公开化合物不相容的任何常用载体外，关注其应用属于本发明的范围。
本发明提供的药物组合物可以与不会损害预期治疗作用的其它活性成分共同配制，或者与补充预期作用的物质共同配制。
本发明化合物和组合物的用途
本发明化合物是激酶活性的抑制剂，特别是PI3-激酶活性的抑制剂。作为PI3-激酶抑制剂的化合物可用于治疗其中潜在病理(至少有一部分)归因于不当的PI3-激酶活性的紊乱，例如哮喘，慢性阻塞性肺病(COPD)，病毒感染，非病毒呼吸道感染，过敏性疾病，自身免疫性疾病，炎性疾病，心血管疾病，恶性血液病，神经退行性疾病，胰腺炎，多器官衰竭，肾病，血小板聚集，癌症，***活力，移植排斥，移植物排斥，肺损伤或疼痛等。“不当的PI3-激酶活性”指的是与在具体的患者中期望的正常PI3-激酶活性有偏离的任何PI3-激酶活性。不当的PI3-激酶可采取，例如，活性的异常增加，或PI3-激酶畸变或控制失常的形式。这些不当的活性可起因于，例如导致不当的或未受控制被激活的蛋白激酶的过表达或突变。因此，在另一方面，本发明涉及治疗所述疾病或病症的方法。
此类疾病或病症包含，但并不仅仅限于，呼吸***疾病，包括哮喘、慢性阻塞性肺病和特发性肺纤维化(IPF)；病毒感染，包括病毒性呼吸道感染和病毒性呼吸道疾病恶化，例如哮喘和COPD；非病毒性呼吸道感染，包括曲霉病和利什曼病；过敏性疾病，包括过敏性鼻炎和特应性皮炎；自身免疫性疾病，包括类风湿性关节炎和多发性硬化；炎症性疾病，包括炎症性肠病；心血管疾病，包括血栓症和动脉粥样硬化；恶性血液病；神经退行性疾病；胰腺炎；多器官功能衰竭；肾脏疾病；血小板聚集；癌症；***活力；移植排斥；移植物排斥；肺损伤；以及疼痛，包括与类风湿性关节炎或骨关节炎相关的疼痛、背痛、全身炎症性疼痛、肝后神经痛、糖尿病性神经病变、炎症性神经性疼痛(外伤)、三叉神经痛和中枢性疼痛。在一实施例中，此类紊乱包含，呼吸***疾病，包括哮喘和慢性阻塞性肺病(COPD)；过敏性疾病，包括过敏性鼻炎和特应性皮炎；自身免疫性疾病，包括类风湿性关节炎和多发性硬化；炎症性疾病，包括炎症性肠病；心血管疾病，包括血栓症和动脉粥样硬化；恶性血液病；神经退行性疾病；胰腺炎；多器官功能衰竭；肾脏疾病；血小板聚集；癌症；***活力；移植排斥；移植物排斥；肺损伤；以及疼痛，包括与类风湿性关节炎或骨关节炎相关的疼痛、背痛、全身炎症性疼痛、肝后神经痛、糖尿病性神经病变、炎症性神经性疼痛(外伤)、三叉神经痛和中枢性疼痛。
在此类疾病或病症中，所述癌症选自急性骨髓性白血病，脊髓发育异常综合征，骨髓增生病，慢性骨髓性白血病，T细胞急性淋巴细胞白血病，B细胞急性淋巴细胞白血病，非霍奇金淋巴瘤，B细胞淋巴瘤，实体瘤，或乳腺癌。
本发明的治疗方法包括给予有需要的患者以安全和有效量的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐。本发明的各个实施例包括通过给予有需要的患者以安全和有效量的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐，治疗本发明提到的任一种紊乱或疾病的方法。
联合治疗
本发明化合物可作为单独的活性剂给药，或者可与其它治疗剂联合给药，包括具有相同或相似治疗活性并且对于此类联合给药确定为安全且有效的其它化合物。
一方面，本发明提供治疗、预防或改善疾病或病症的方法，包括施用安全有效量的包含本发明公开化合物与一种或多种治疗活性剂的联合药物。在一些实施方案，联合药物包含一种或两种其他治疗剂。
其它治疗剂的实例包括包括但不限于：抗癌剂，包括化疗剂和抗增殖剂；抗炎剂；和免疫调节剂或免疫抑制剂。
另一方面，本发明提供了包括本发明化合物和至少一种其它治疗剂的产品，可制备成在治疗中同时、分别或顺序施用的组合。在一些实施方案，治疗是针对由一种或多种蛋白激酶，如PI3k-激酶活性介导的疾病或病征的治疗。联合制备提供的产品包括存在于同一药物组合物中、并包含本发明公开化合物和其他治疗剂的组合物，或以不同形式存在的本发明公开化合物和其他治疗剂，例如，药盒。
另一方面，本发明提供了一种包含本发明公开化合物和另外一种或多种治疗剂的药物组合物。在一些实施方案，药物组合物可包含如上所述的药学上可接受的辅料。
另一方面，本发明提供了包含两种或两种以上的单独药物组合物的药盒，其中至少一种药物组合物包含本发明公开化合物。在一些实施方案，药盒包括单独保持所述组合物的工具，例如容器、分开的瓶或分开的箔盒。这类药盒的实例是泡罩包装，其通常用于包装片剂、胶囊剂等。
本发明公开化合物可以作为单一活性组分施用或作为例如佐剂，与其它治疗剂共同施用。
在一些实施方案，所述其它治疗剂包括，例如免疫抑制剂、免疫调节剂或其他抗炎剂、用于治疗或预防同种或异种移植急性或慢性排斥反应、或炎症、或自身免疫性疾病的药物，或化学治疗剂，如恶性肿瘤细胞抗增殖剂。
本发明式(I)所示化合物与其他的免疫抑制剂/免疫调节剂，抗炎剂，化学治疗剂或抗感染剂共同用药，其中免疫抑制剂/免疫调节剂，抗炎剂，化学治疗剂或抗感染剂共同用药的剂量取决于联合用药的类型，是甾体类化合物还是钙调磷酸酶抑制剂，及正在用于治疗的具体药物和治疗情况等。
抗炎剂的实例包括非甾体抗炎药物(NSAID)。NSAID的实例包括色甘酸钠，奈多罗米钠(nedocromil sodium)，磷酸二酯酶(PDE)抑制剂(如茶碱、PDE4抑制剂，或混合型PDE3/PDE4抑制剂)，白三烯拮抗剂，白三烯合成抑制剂(如孟鲁司特)，iNOS抑制剂，胰蛋白酶和弹性蛋白酶抑制剂，β-2整联蛋白拮抗剂和腺苷受体激动剂或拮抗剂(如，腺苷2α受体激动剂)，细胞因子拮抗剂(如趋化因子受体拮抗剂，包括CCR3拮抗剂)，细胞因子合成抑制剂，或5-脂氧化酶抑制剂。
式(I)化合物也可有利地用于与其他化合物的组合，或与其他治疗剂，尤其是抗增殖剂的组合中。此类抗增殖剂包括，但不限于，芳香酶抑制剂；抗***；拓扑异构酶I抑制剂；拓扑异构酶II抑制剂；微管活性剂；烷化剂；组蛋白去乙酰化酶抑制剂；诱导细胞分化过程的化合物；环氧合酶抑制剂；MMP抑制剂；mTOR抑制剂；抗肿瘤抗代谢药；铂化合物；靶向/降低蛋白或脂质激酶活性的化合物和其他抗血管生成的化合物；靶向、降低或抑制蛋白或脂质磷酸酯酶活性的化合物；戈那瑞林类激动剂；抗雄激素；蛋氨酸氨肽酶抑制剂；双膦酸盐；生物反应调节剂；抗增殖抗体；乙酰肝素酶抑制剂；Ras致癌亚型抑制剂；端粒酶抑制剂；蛋白酶体抑制剂；治疗血液肿瘤的药剂；靶向、降低或抑制Flt-3活性的化合物；Hsp90抑制剂；替莫唑胺和亚叶酸钙。
“联合”表示在单个剂量单位形式中的固定联合或用于联合给药的部分的药盒，其中本发明公开的化合物和联合伴侣可在同一时间独立施用或者可在一定的时间间隔内分别施用，特别是使联合伴侣表现出合作、例如协同作用。如本发明所用的术语“共同给药”或“联合给药”等意欲囊括将所选的联合伴侣施用于需要其的单个个体(例如患者)，并且意欲包括其中物质不必通过相同给药途径或同时给药的治疗方案。
治疗方法
在一些实施方案，本发明公开的治疗方法包括对有需要的患者施用安全有效量的本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物。本发明公开的各实施方案包括通过对有需要的患者给予安全有效量的本发明公开化合物或包含本发明公开化合物的药物组合物，来治疗本发明所述疾病或病症的方法。
在一些实施方案，本发明公开化合物或包含本发明公开化合物的药物组合物可以一次性给药，或者根据给药方案，在指定时间段内，在不同的时间间隔给药若干次。例如，每天给药一次、两次、三次或四次。在其中一个实施方案，每天给药一次。在又一实施方案，每天给药两次。可以给药直至达到想要的治疗效果或无限期地维持想要的治疗效果。本发明公开化合物或包含本发明公开化合物的药物组合物的合适给药方案取决于所述化合物的药代动力学性质，例如稀释、分布和半衰期，这些可由技术人员测定。此外，本发明公开化合物或包含本发明公开化合物的药物组合物的合适给药方案，包括实施该方案的持续时间，取决于被治疗的疾病、被治疗疾病的严重程度、被治疗患者的年龄和身体状况、被治疗患者的医疗史、同时疗法的性质、想要的治疗效果等那些在技术人员知识和经验范围内的因素。所述领域技术人员还应理解，对于个体患者对给药方案的反应，或随着时间推移个体患者需要变化时，可要求调整适宜的给药方案。
本发明的药物组合物或组合/联合对于约50-70kg的个体可以是约1-1000mg活性成分，或约1-500mg或约1-250mg或约1-150mg或约0.5-100mg、或约1-50mg的活性成分的单位剂量。化合物、药物组合物或其组合的治疗有效剂量取决于个体的物种、体重、年龄和个体疾病、病症或病况或待治疗的严重度。本领域普通技能医师、临床医生或兽医能够很容易地确定用于预防、治疗或抑制疾病或病症进展的各活性成分的有效量。以上所引用的剂量特性已在采用有利的哺乳动物，例如小鼠、大鼠、狗、猴、或离体器官、组织及其标本的体外和体内试验中证实。本发明的化合物能以溶液的形式在体外使用，例如水溶液，也可呈混悬液或水溶液的形式经肠、肠胃外和宜经的静脉在体内使用。体内治疗有效量的范围取决于给药途径，其在约0.01-500mg/kg之间，或约在1-100mg/kg之间。
本发明公开化合物可与一种或多种其它治疗剂同时、或在其之前或之后进行给药。本发明化合物可以与其他治疗剂通过相同或不同给药途径分别进行给药，或与之以同一药物组合物形式给药。
一般合成方案
为描述本发明，以下列出了实施例。但需要理解，本发明不限于这些实施例，只是提供实践本发明的方法。
一般地，本发明的化合物可以通过本发明所描述的方法制备得到，除非有进一步的说明，其中取代基的定义如式(I)、(Ia)、(Ib)、(II)或(IIa)所示。下面的反应方案和实施例用于进一步举例说明本发明的内容。
下面所描述的实施例，除非其他方面表明所有的温度定为摄氏度。试剂购自商品供应商，例如Aldrich Chemical Company，Alfa Chemical Company，上海韶远试剂有限公司，SAIN化学技术(上海)有限公司，上海拜德制药技术有限公司，上海浩宏生物医学技术有限公司，除非另有说明，否则本发明所使用的试剂无需进一步纯化即可使用。常用溶剂购自北京海之源伟业科技有限公司等商品供应商。
无水THF、二氧六环、DCM、甲苯和DMF均购自商品供应商，例如安耐吉公司(Energychemical company)和Aldrich化学公司。EtOAc、PE、CH3CN、NMP和DMSO在使用前均用无水Na2SO4处理。
以下反应一般是在氮气或氩气正压下或在无水溶剂上套一干燥管(除非其他方面表明)，反应瓶都塞上合适的橡皮塞，底物通过注射器打入。玻璃器皿都是干燥过的。
色谱柱是使用硅胶柱。硅胶(300-400目)购于青岛海洋化工厂。
1H NMR谱和13C/2D数据是在Bruker Avance III 400MHz上收集得到。1H NMR谱以CDC13、DMSO-d6、CD3OD或丙酮-d6为溶剂(以ppm为单位)，用TMS(0ppm)或氯仿(7.26ppm)作为参照标准。当出现多重峰的时候，将使用下面的缩写：s(singlet，单峰)、d(doublet，双峰)、t(triplet，三重峰)、m(multiplet，多重峰)、br(broadened，宽峰)、brs(broadenedsinglet，宽单峰)、dd(doublet of doublets，双二重峰)、dt(doublet of triplets，双三重峰)。偶合常数，用赫兹(Hz)表示。
LC/MS是在与Agilent 6120/6125质谱仪耦合的Agilent 1260(二元泵/DAD检测器)上进行。
方法1：
柱：HALO C18 2.7μm，4.6mm×30mm，流动相：MeCN(0.05％HCOOH)-Water(0.05％HCOOH)；梯度：从5％至95％的MeCN，洗脱0.8min，保持0.8min，总运行时间是2.0min；流速：1.8mL/min；柱温：45℃；
方法2：
柱：HALO C18 2.7μm，4.6mm×50mm，流动相：MeCN(0.025％三氟乙酸)-水(0.025％三氟乙酸)；梯度：从5％至95％的MeCN，洗脱1.0min，保持1.0min，总运行时间是2.5min；流速：1.8mL/min；柱温：45℃。
由RP-HPLC进行纯度测试：
在RP-HPLC上进行化合物纯度测试(Shimadzu 2010/2030)
方法1：
柱：Gemini 4.6×150mm 5um；流动相：H2O(0.05％三氟乙酸)-MeCN(0.05％三氟乙酸)。梯度：从10％至100％的MeCN，洗脱8分钟，保持2分钟。流速：1.2mL/min，柱温：35℃/40℃。方法2：
柱：XBRIDGE 2.1×50mm，3.5um；流动相：H2O(0.05％三氟乙酸)-MeCN(0.05％三氟乙酸)。梯度：从10％至100％的MeCN，洗脱7分钟，保持1分钟。流速：0.8mL/min，柱温：35℃/40℃。由SFC进行化合物纯化：
在配备UV检测器的Thar P80上进行SFC纯化。
方法：柱CHIRALPAK AD-H 250mm，20mm，5μm，改性剂：30％EtOH(0.2％NH4OH)。
由RP-HPLC进行化合物纯化：
在Gilson纯化***(322或306泵和GX-281馏分收集器)，Shimadzu LC20Ap和Waters MS触发纯化***上进行RP-HPLC纯化；
方法1：
柱Gemini C18 21x150 mm，5μm Xbrige C18 19x150 mm，5μm，Spolar C18 20x150mm和Ultimate AQ-C18 30x250 mm，10μm
流动相：
1.MeCN的水溶液(0.1％HCOOH)，流速：20ml/min，50ml/min，柱30x250 mm，10μm；波长：210-400nm。将样品注入DMSO(+任选的甲酸和水)中，从10％至95％MeCN的线性梯度，洗脱10分钟。
2.MeCN的水溶液(0.1％三氟乙酸)，流速：20ml/min，50ml/min，柱30x250 mm，10μm；波长：210-400nm。将样品注入DMSO(+任选的甲酸和水)中，从10％至95％MeCN的线性梯度，洗脱10分钟。
3.MeCN的水溶液(0.1％NH3-H2O/10mM NH4AC)，流速：20ml/min，50ml/min，柱30x250 mm，10μm；波长：210-400nm。将样品注入DMSO(+任选的甲酸和水)中，从10％至95％MeCN的线性梯度，洗脱10分钟。
制备本发明公开化合物的典型合成步骤如以下合成方案所示。除非另外说明，R1、R2、R3、R4a、R4b、R4c、Ra、Rb、X、Z1、Z2、W和n均具有如本发明所述的定义。
合成方案1：
Figure BDA0003866228850000221
具有如式(6)所示结构的本发明化合物可以通过合成方案1描述的一般合成方法制备得到，具体步骤可参考实施例。在合成方案1中，化合物(1)可通过购买商用试剂，或者参照文献(WO2016149160A1)合成得到。化合物(1)和带有R1取代的端基炔在合适的钯盐和铜盐催化下偶联得到化合物(3)。在酸性条件下脱除Boc保护基，得到化合物(4)的衍生物。化合物(4)和化合物(5)在合适的碱性条件下，或在缩合剂存在下反应得到目标激酶抑制剂(6)。
合成方案2：
Figure BDA0003866228850000222
具有如式(8)所示结构的本发明化合物可通过合成方案2描述的一般合成方法制备得到，具体步骤可参考实施例。在合成方案2中，胺类衍生物(4)和羧酸衍生物(7)在合适的缩合剂存在下缩合得到目标激酶抑制剂(8)。
片段合成方案1：
Figure BDA0003866228850000231
具有如式(2)所示结构的炔类衍生物可通过片段合成方案1描述的一般合成方法制备得到，具体步骤可参考实施例。在合成方案2中，化合物(2-a)在合适的碱性条件下(如碳酸钾、碳酸铯和磷酸钾等)，和三甲基乙炔基硅在合适的钯盐和铜盐的催化下偶联得到化合物(2-b)。采用TBAF脱去TMS保护基得到炔类衍生物(2)。或者使用R1取代的醛基衍生物(2-c)，在合适的碱性条件下，和(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯在低温下反应得到炔类衍生物(2)。
片段合成方案2：
Figure BDA0003866228850000232
具有如式(5)所示结构的羧酸衍生物可通过片段合成方案2描述的一般合成方法制备得到，具体步骤可参考实施例。在合成方案3中，化合物(5-a)在合适的碱性条件下脱去乙基，得到羧酸衍生物(5-b)。化合物(5-b)和化合物(4)在缩合剂(如EDCI或HATU)存在下缩合得到目标激酶抑制剂(6)。化合物(5-b)和N-羟基丁二酰亚胺在缩合剂存在下缩合得到化合物(5-c)。在合适的碱性条件下，化合物(5-c)和化合物(4)反应得到目标激酶抑制剂(6)。
氘代片段示例1：
本发明合成化合物所使用的带氘合成砌块包括商用试剂，以及可通过参考文献(如WO2017161116A1)合成得到，具体包括但不限于以下结构：
Figure BDA0003866228850000233
实施例
中间体1 2,5-二氧代吡咯-1-基2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸酯-5,7-D2
Figure BDA0003866228850000241
步骤1)2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯-5,7-D2
向3,5-二氨基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯(1g，5.9mmol)的乙酸(30mL)溶液中加入1,1,3,3-四乙氧基丙烷-1,3-D2(1313.3mg，5.9mmol)。混合物升温至120℃搅拌16h，冷却至室温，减压浓缩，残余物用丙酮(30mL)稀释，抽滤后得到2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯-5,7-D2(1.2g，93.21％收率)。MS(ESI):209.1[M+H]+。
步骤2)2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸-5,7-D2
向2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯(1.2g，5.8mmol)的MeOH/H2O(50mL/10mL)溶液中加入LiOH(1.22g，29mmol)。混合物在60℃下搅拌4h，减压除去溶剂，残余物用1N HCl调pH至5。抽滤，滤渣干燥后得到2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸-5,7-D2(785mg，72.41％收率)为黄色固体。MS(ESI):181.0[M+H]+。
步骤3)2,5-二氧代吡咯-1-基2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸酯-5,7-D2
将EDCI(279.8mg，1.46mmol)和1-羟基吡咯烷-2,5-二酮(168mg，1.46mmol)加入到2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(200mg，1.12mmol)的DMF(10mL)溶液中，混合物于室温下搅拌16h。反应完毕后，用水(30ml)稀释，并用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取三次。合并的有机相用饱和食盐水洗(40mL x 2)，经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到2,5-二氧代吡咯烷-1-基2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸酯-5,7-D2(238mg，69.32％收率)为黄色固体。MS(ESI):277.9[M+H]+。
中间体2(S)-3-(1-氨乙基)-8-氯-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮
Figure BDA0003866228850000242
步骤1)(S)-(1-(甲氧基(甲基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
向(叔丁氧基羰基)-L-丙氨酸(8.0g，0.042mol)的DCM(200mL)溶液中加入CDI(8.92g，0.055mmol)。混合物在室温下搅拌1h，然后加入N,O-二甲基羟胺(4.95g，0.051mol)和TEA(17.1g，0.17mol)，混合物在25℃下搅拌16h。混合物用H2O(20mL)稀释，然后用DCM(50mL×3)萃取。合并的有机层用盐水(40mL x 2)洗，经Na2SO4干燥，减压下浓缩。残余物经快速色谱法(DCM/MeOH＝98/2)纯化，得到(S)-(1-(甲氧基(甲基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(6.8g，62.17％收率)为白色固体。MS(ESI):254.9[M+Na]+。
步骤2)2-氯-6-甲基-N-苯基苯甲酰胺
在0℃下，向2-氯-6-甲基苯甲酸(5.0g，0.029mol)和DMF(210mg，0.29mmol)的DCM(50mL)溶液中滴加草酰氯(4.83g，0.038mol)，混合物于0℃下搅拌2h。在0℃下，向苯胺(2.73g，0.029mol)和TEA(8.88g，0.088mol)的DCM(50mL)溶液中加入上述反应混合物。将混合物在室温下搅拌5小时。混合物用H2O(30ml)稀释，用DCM(50mL×3)萃取。合并的有机层用盐水(40mL x 2)洗，经Na2SO4干燥，减压浓缩。残余物经快速色谱法(PE/EA＝3/1)纯化，得到2-氯-6-甲基-N-苯基苯甲酰胺(5.66g，70.65％收率)为黄色固体。MS(ESI):245.9[M+H]+。
步骤3)(S)-(4-(3-氯-2-(苯基氨基甲酰基)苯基)-3-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
在-30℃下，在氮气下，在10分钟内向搅拌的2-氯-6-甲基-N-苯基苯甲酰胺(1g，4.1mmol)的THF(20mL)溶液中滴加n-BuLi(4.3ml，10.2mmol)溶液，反应混合物在-30℃搅拌1小时。在-30℃和氮气下，向搅拌的(S)-(1-(甲氧基(甲基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1.43g，6.15mmol)的THF(20mL)溶液中在10min内滴加i-PrMgCl(9.5ml，12.3mmol)溶液，反应混合物在-30℃下搅拌1h。然后将所得溶液缓慢加入上述反应混合物中。混合物在室温下搅拌3小时。混合物用NH4Cl(30mL)淬灭，然后用EtOAc(30mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(10mL x 2)洗，经Na2SO4干燥，减压浓缩。残余物经快速色谱法(PE/EA＝3/1)纯化，得到(S)-(4-(3-氯-2-(苯基氨基甲酰基)苯基)-3-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1.45g，75.61％收率)为黄色固体。MS(ESI):438.8[M+Na]+。
步骤4)(S)-3-(1-氨乙基)-8-氯-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮
在室温下，向(S)-(4-(3-氯-2-(苯基氨基甲酰基)苯基)-3-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1.4g，3.4mmol)的MeOH(30mL)溶液中加入浓盐酸(2.8mL)，将混合物在80℃下搅拌2小时。混合物减压浓缩，残余物用H2O(10mL)稀释，并用NaHCO3溶液调节pH至7-8。混合物用DCM(30mL x 3)萃取，合并的有机层用盐水(20mL x 2)洗，经Na2SO4干燥，减压浓缩。残余物经快速色谱法(DCM/MeOH＝95/5)纯化，得到(S)-3-(1-氨乙基)-8-氯-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(830mg，73.53％收率)为黄色固体。MS(ESI):298.9[M+H]+。
中间体3 2-氨基-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸
Figure BDA0003866228850000251
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步骤1)2-氨基-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯
向溶于DMF(10mL)的3,5-二氨基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯(1g，6.0mmol)的溶液中加入4,4-二甲氧基-2-丁酮(1.6g，12.0mmol))，将反应在110℃下加热1小时，然后加入CH3COOH(361mg，6.0mmol)，并将反应加热2小时。冷却至室温后，混合物用饱和碳酸氢钠中和，并用水(30mL)稀释。混合物用EtOAc(40mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(60mL x 2)洗，经无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝20/1)纯化，得到2-氨基-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯(940mg，71％)为白色固体。MS(ESI)m/z 224.1[M+H]+。
步骤2)2-氨基-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸
向2-氨基-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯(940mg，4.3mmol)的MeOH/H2O(20mL/4mL)溶液中加入NaOH(854mg，21.4mmol)，然后将混合物在60℃下搅拌16小时。混合物减压浓缩，残余物用水(20mL)稀释。混合物用1N HCl酸化至pH＝3-4，然后混合物用EtOAc(200mL)萃取。分离的有机层用盐水(100mL)洗，经Na2SO4干燥，真空浓缩，得到2-氨基-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(450mg，53％)，为黄色固体。MS(ESI)m/z 196.0[M+H]+。
实施例1(S)-2-氨基-N-(1-(8-((5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-2-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5,7-D2-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000252
步骤1)亚硝基脯氨酸
在0℃下，向吡咯烷-2-羧酸和NaNO2(4.19g，0.061mmol)的水(10mL)溶液中加入浓盐酸(5mL)。混合物于室温下搅拌16h后，加入水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取三次。合并的有机相用食盐水洗(40mL x 2)，无水硫酸钠干燥，浓缩除去溶剂，得到亚硝基脯氨酸(5.5g，83％收率)为白色固体。MS(ESI):145.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO)δ6.50(d,J＝8.6Hz,1H),5.81-5.67(m,1H),5.07-4.90(m,2H),4.64-4.54(m,1H),3.44-3.37(m,1H),2.31-2.19(m,1H),2.07-1.96(m,1H),1.41-1.33(m,9H)。
步骤2)5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-c][1,2,3]噁二唑-7-氮鎓-3-内盐
在0℃下，向亚硝基脯氨酸(2g，0.014mol)的乙腈(6mL)溶液中加入TFAA(3.8g，0.018mol)，继续搅拌3h。混合物用碳酸钾淬灭(3.1g，0.022mol)，加入水稀释(20mL)。混合物用乙酸乙酯萃取三次(20mL x3)。合并的有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物经硅胶柱色谱法纯化(DCM/MeOH＝20/1)，得到5,6-二氢-4H-吡咯[1,2-c][1,2,3]噁二唑-7-氮鎓-3-内盐(1.5g，77％收率)为棕色油状物。MS(ESI):252.8[2M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.44-4.39(m,2H),2.94-2.90(m,2H),2.81-2.74(m,2H)。
步骤3)5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-2-羧酸乙酯
将5,6-二氢-4H-吡咯[1,2-c][1,2,3]噁二唑-7-氮鎓-3-内盐(0.5g，4mmol)和丙-2-炔酸甲酯(1.18g，12mmol)的二甲苯溶液(10mL)升温至140℃并搅拌16h。冷却至室温，浓缩。残余物用EtOAc(30mL)稀释并用饱和食盐水洗(20mL)，有机相用饱和硫酸钠干燥，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱色谱分离，得到5,6-二氢-4H-吡咯[1,2-b]吡唑-2-羧酸乙酯(0.23g，30％收率)为棕色油状物。MS(ESI):181.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.55(s,1H),4.39(q,J＝7.2Hz,2H),4.25-4.16(m,2H),2.99-2.87(m,2H),2.69-2.56(m,2H),1.40(t,J＝7.2Hz,3H)。
步骤4)(5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-2-基)甲醇
在0℃下，向5,6-二氢-4H-吡咯[1,2-b]吡唑-2-羧酸乙酯(230mg，1.27mmol)的四氢呋喃溶液(10mL)中加入LiAlH4(48mg，1.27mmol)，混合物保持在0℃下搅拌2h。混合物用10％NaOH的水溶液(2mL)淬灭，过滤。滤液用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取三次,合并有机相，经无水硫酸钠干燥，减压浓缩除去溶剂，得到(5,6-二氢-4H-吡咯[1,2-b]吡唑-2-基)甲醇(200mg，90％收率)为无色油状物。MS(ESI):139.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.99(s,1H),5.09(s,1H),4.65(d,J＝1.6Hz,2H),4.16-4.12(m,2H),2.88(t,J＝7.2Hz,2H),2.62–2.58(m,2H)。
步骤5)5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-2-甲醛
向(5,6-二氢-4H-吡咯[1,2-b]吡唑-2-基)甲醇(50mg，0.36mmol)的氯仿(20mL)溶液中加入MnO2(157mg，1.8mmol)，混合物升温至60℃，搅拌16h。混合物过滤，滤液浓缩后得到5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-2-甲醛(30mg，58％收率)为无色油状物。MS(ESI):137.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.92(s,1H),6.53(s,1H),4.23(t,J＝7.2Hz,2H),2.99-2.95(m,2H),2.72-2.62(m,2H)。
步骤6)2-乙炔基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑
向5,6-二氢-4H-吡咯[1,2-b]吡唑-2-甲醛(30mg，0.22mmol)和碳酸钾(61mg，0.44mmol)的甲醇(5mL)溶液中加入(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(63mg，0.33mmol)，混合物在室温下搅拌16h。浓缩除去溶剂，残余物用乙酸乙酯稀释(30mL)。混合物用饱和食盐水洗(20mL)，无水硫酸钠干燥，经硅胶柱色谱分离，得到2-乙炔基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑(22mg，61.8％收率)为无色油状物。MS(ESI):133.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.19(s,1H),4.28-4.17(m,2H),3.13(s,1H),2.96-2.87(m,2H),2.67-2.60(m,2H)。
步骤7)(S)-3-(1-氨乙基)-8-((5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-2-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮
氮气气氛下，向(S)-3-(1-氨乙基)-8-氯-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(40mg，0.13mmol)和2-乙炔基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑(21.2mg，0.16mmol)的乙腈溶液(30mL)中加入X-Phos(31.9mg，0.067mmol)、Pd2(dba)3(30.6mg，0.033mmol)和K3PO4(85.3mg，0.40mmol)，抽真空置换气体三次，混合物升温至80℃并搅拌5h。冷却至室温，减压浓缩除去溶剂。残余物用乙酸乙酯(30mL)稀释。混合物用饱和食盐水(20mL)洗，减压浓缩除去溶剂，残余物经快速硅胶柱色谱分离(DCM/MeOH＝91/9)，得到(S)-3-(1-氨乙基)-8-((5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-2-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(60mg，90.9％收率)为黄色油状物。MS(ESI):395.1[M+H]+。
步骤8)(S)-2-氨基-N-(1-(8-((5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-2-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5,7-D2-3-甲酰胺
在室温下，将DIEA(63.8mg，0.49mmol)加入到(S)-3-(1-氨乙基)-8-((5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-2-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(60mg，0.16mmol)和2,5-二氧代吡咯烷-1-基2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸酯-5,7-D2(59mg，0.21mmol)的乙腈溶液(10mL)中，混合物升温至80℃，搅拌16h。混合物冷却至室温，减压浓缩除去溶剂，用二氯甲烷(30mL)稀释。混合物用饱和食盐水(20mL)洗，经无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂。残余物经制备型HPLC(Gemini-C18 150x21.2mm,5um ACN--H2O(0.1％FA)45-50)纯化，得到(S)-2-氨基-N-(1-(8-((5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-2-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5,7-D2-3-甲酰胺(5.3mg，5.8％收率)为白色固体。MS(ESI):556.8[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.93(dd,J＝6.7,1.6Hz,1H),8.56(dd,J＝4.5,1.6Hz,1H),8.01(d,J＝6.7Hz,1H),7.66(d,J＝4.5Hz,2H),7.63-7.55(m,2H),7.53-7.46(m,3H),7.41-7.36(m,1H),7.02(dd,J＝6.7,4.5Hz,1H),6.76(s,1H),6.44(s,2H),6.17(s,1H),4.56(t,J＝6.8Hz,1H),4.09-4.02(m,2H),2.82(t,J＝7.3Hz,2H),2.54(d,J＝7.7Hz,1H),1.35(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例2(S)-2-氨基-5-甲基-N-(1-(8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000271
步骤1)1-甲基-4-((三甲基硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑
将三甲基乙炔基硅(2.8g，28.8mmol)、CuI(366.24mg，1.923mmol)和二(三苯基膦)二氯化钯(II)(1.3g，1.9mmol)加入到4-碘-1-甲基吡唑(4g，19.2mmol)的三乙胺(30mL)溶液中，升温至90℃搅拌16h。冷却至室温后,减压浓缩除去溶剂。残余物用DCM(300mL)溶解，用水(150mL)稀释，饱和食盐水(150mL x 2)洗。有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，残余物经硅胶柱色谱分离(DCM/MEOH＝10/1)，得到1-甲基-4-((三甲基硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑(2.5g，72.9％收率)为棕色油状物。MS(ESI):179.1[M+H]+。
步骤2)4-乙炔基-1-甲基-1H-吡唑
在室温下，向1-甲基-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑(2.3g，7.291mmol)的THF(20mL)溶液中加入四丁基氟化铵(14.6mL，14.6mmol，1N的THF溶液)。将反应在室温下搅拌1小时。反应用EtOAc(300mL)稀释，然后用盐水(150mL×2)洗。分离的有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经色谱法(PE:EA＝10:1)纯化，得到4-乙炔基-1-甲基-1H-吡唑(0.9g，65％收率)为透明油状物。MS(ESI):107.0[M+H]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.60(s,1H),7.52(s,1H),3.88(s,3H),3.01(s,1H)。
步骤3)(S)-3-(1-氨乙基)-8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮
在室温、氮气氛下，向(S)-3-(1-氨乙基)-8-氯-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(400mg，1.34mmol)和4-乙炔基-1-甲基-1H-吡唑(213.1mg，2.00mmol)的CH3CN(30mL)混合物中加入X-Phos(319.1mg，0.67mmol)、Pd2(dba)3(306.5mg，0.33mmol)和K3PO4(852.5mg，4.02mmol)，将混合物在80℃下搅拌5h。冷却至室温后，将混合物真空浓缩，残余物用EtOAc(130mL)稀释。混合物用盐水(50mL)洗，经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经快速色谱法(DCM/MeOH＝91/9)纯化，得到(S)-3-(1-氨乙基)-8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(460mg，83.93％收率)为黄色油状物。MS(ESI):369.1[M+H]+。
步骤4)(S)-2-氨基-5-甲基-N-(1-(8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向(S)-3-(1-氨乙基)-8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(60mg，0.16mmol)和2-氨基-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(31.31mg，0.16mmol)的DCM(20mL)溶液中加入DIEA(84.1mg，0.65mmol)、EDCI(46.8mg，0.24mmol)、HOAT(39.4mg，0.24mmol)。混合物在40℃下搅拌16小时。混合物用DCM(30mL)稀释，然后用盐水(20mL)洗，经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经制备型HPLC(Gemini-C18 150x21.2mm,5umACN--H2O(0.1％FA)30-70)纯化，得到(S)-2-氨基-5-甲基-N-(1-(8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(28.8mg，32.47％收率)为白色固体。MS(ESI):545.9[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.78(d,J＝6.9Hz,1H),8.17(d,J＝6.6Hz,1H),8.01(s,1H),7.66-7.45(m,8H),7.40(d,J＝7.6Hz,1H),6.91(d,J＝6.9Hz,1H),6.73(s,1H),6.32(s,2H),4.526-4.49(m,1H),3.82(s,3H),2.57(s,3H),1.35(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例3 2-氨基-N-((1S)-1-(1-氧代-8-(2-(5-氧代吡咯烷-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000281
步骤1)1-(2,4-二甲氧基苄基)-5-氧代吡咯烷-3-羧酸
将(2,4-二甲氧基苯基)甲胺(2.0g，11.9mmol)和2-亚甲基丁二酸(1.55g，11.9mmol)的甲苯(50mL)溶液升温至100℃，搅拌16h。混合物加入水(20mL)稀释，然后用EtOAc(150mL)萃取。合并有机相用饱和食盐水洗(40mL x 2)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物经硅胶柱色谱法纯化(DCM/MeOH＝20/1)，得到1-(2,4-二甲氧基苄基)-5-氧代吡咯烷-3-羧酸(3.2g，91％收率)为无色油状液体。MS(ESI):280.1[M+H]+。
步骤2)1-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-4-(羟甲基)吡咯烷-2-酮
在0℃下，向1-(2,4-二甲氧基苄基)-5-氧代吡咯烷-3-羧酸(3.2g，11.4mmol)的THF(50mL)溶液中加入BH3.THF(13mL，1moL/L)，然后升温至常温，搅拌16h。混合物用MeOH(20mL)淬灭，减压浓缩。将残余物溶于EtOAc(200mL)，用饱和食盐水(40mL x 2)洗。有机相经无水Na2SO4干燥，减压浓缩。残余物经硅胶柱色谱法纯化(DCM/MeOH＝20/1)，得到1-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-4-(羟甲基)吡咯烷-2-酮(2.0g，59％收率)为无色油状液体。MS(ESI):266.1[M+H]+。
步骤3)1-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-5-氧代吡咯烷-3-甲醛
在20℃下，向1-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-4-(羟甲基)吡咯烷-2-酮(1.6g，6.03mmol)的DCM(50mL)溶液中加入戴斯-马丁高碘烷(Dess-Martin periodinane，3.1g，6mmol)，保温搅拌16h。向混合物中加入DCM(250mL)，过滤。滤液用Na2SO3水溶液(50mL)和NaHCO3水溶液(50mL)洗。有机相经无水Na2SO4干燥，减压浓缩得到1-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-5-氧代吡咯烷-3-甲醛(1.6g，80％收率)为无色油状液体。MS(ESI):264.1[M+H]+。
步骤4)1-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-4-乙炔基吡咯烷-2-酮
在20℃下，向1-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-5-氧代吡咯烷-3-甲醛(1.6g，6.1mmol)和K2CO3(2.5g，18mmol)的MeOH(100mL)溶液中加入(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(1.38g，7.3mmol)，保温继续搅拌4h。混合物经EtOAc(250mL)稀释后，用饱和食盐水洗(50mL x 2)。有机相经无水Na2SO4干燥，减压浓缩得到1-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-4-乙炔基吡咯烷-2-酮(1.1g，62％收率)为无色油状液体。MS(ESI):260.1[M+H]+。
步骤5)3-((1S)-1-氨基乙基)-8-(2-(1-((2,4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氧代吡咯烷-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1-酮
在氮气气氛下，向1-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-4-乙炔基吡咯烷-2-酮(208mg，0.8mmol)和(S)-3-(1-氨乙基)-8-氯-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(160mg,0.53mmol)的乙腈(50mL)溶液中加入K3PO4(341mg，1.6mmol)、x-Phos(2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯，102mg，0.21mmol)和Pd2(dba)3(98mg，0.1mmol)。混合物升温至80℃并搅拌16h。反应完全后，冷却至室温，减压浓缩。残余物经EtOAc(200mL)稀释后，用饱和食盐水洗(100mL)，有机相经无水Na2SO4干燥，减压浓缩。残余物经硅胶柱色谱法(DCM/MeOH＝20/1)纯化，得到3-((1S)-1-氨基乙基)-8-(2-(1-((2,4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氧代吡咯烷-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1-酮(280mg，89％收率)为棕色固体。MS(ESI):522.2[M+H]+。
步骤6)2-氨基-N-((1S)-1-(8-(2-(1-((2,4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氧代吡咯烷-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
在室温下，向2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(95mg，0.53mmol)、HOAt(109mg，0.8mmol)、3-((1S)-1-氨基乙基)-8-(2-(1-((2,4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氧代吡咯烷-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1-酮(280mg，0.53mmol)和EDCI(154mg，0.80mmol)的DCM(10mL)溶液中加入DIEA(208mg，1.6mmol)。混合物升温至40℃，继续搅拌16h。向混合物中加入DCM(60mL)稀释，再用饱和食盐水洗(50mL)。有机相经无水Na2SO4干燥，减压浓缩，残余物经硅胶柱色谱法纯化(DCM/MeOH＝20/1)，得到2-氨基-N-((1S)-1-(8-(2-(1-((2,4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氧代吡咯烷-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(320mg，78％收率)为棕色固体。MS(ESI):682.3[M+H]+。
步骤7)2-氨基-N-((1S)-1-(1-氧代-8-(2-(5-氧代吡咯烷-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
将2-氨基-N-((1S)-1-(8-(2-(1-((2,4-二甲氧基苯基)甲基)-5-氧代吡咯烷-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(150mg，0.22mmol)加至6N HCl(10mL)中，升温至80℃搅拌1h。减压浓缩，残余物经制备型HPLC(CAN-H2O，0.1％FA，梯度20％至50％)纯化，得到2-氨基-N-((1S)-1-(1-氧代-8-(2-(5-氧代吡咯烷-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(3.7mg，3.1％收率)为白色固体。MS(ESI):532.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.72(d,J＝6.8Hz,1H),8.52(s,1H),8.43(t,J＝6.4Hz,1H),8.26(t,J＝7.2Hz,1H),8.12(d,J＝7.2Hz,1H),8.04(d,J＝8.0Hz,1H),8.00(s,1H),7.93(d,J＝8.0Hz,1H),7.80-7.71(m,3H),7.02-6.98(m,1H),6.72(d,J＝8.8Hz,1H),5.09-5.05(m,1H),3.66-3.52(m,3H),2.56-2.48(m,1H),2.35-2.30(m,1H),1.65-1.57(m,3H)。
实施例4 2-氨基-N-((1S)-1-(8-(2-(1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000291
步骤1)4-(羟甲基)-1-甲基吡咯烷-2-酮
在0℃下，将NaBH4(481mg，12.7mmol)加至1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-羧酸甲酯(1g，6.3mmol)的MeOH(50mL)溶液中。混合物升温至常温，搅拌16h后，减压浓缩，残余物用MeOH/DCM＝1/20(200mL)溶解，再抽滤。滤液经无水Na2SO4干燥，减压浓缩，残余物经柱色谱法分离(MeOH/DCM＝1/20)，得到4-(羟甲基)-1-甲基吡咯烷-2-酮(900mg，98.57％收率)为无色油状液体。MS(ESI):130.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.62-3.57(m,2H),3.50(dd,J＝10.0,8.0Hz,1H),3.26(dd,J＝10.0,5.0Hz,1H),2.84(s,3H),2.63-2.55(m,1H),2.55-2.49(m,1H),2.22(dd,J＝16.4,5.2Hz,1H)。
步骤2)1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-甲醛
在20℃下，向4-(羟甲基)-1-甲基吡咯烷-2-酮(420mg，3.2mmol)的DCM(50mL)溶液中加入戴斯-马丁高碘烷(Dess-Martin periodinane，2.7g，6.5mmol)，保温搅拌16h。向混合物中加入DCM(100mL)，过滤。滤液用Na2SO3水溶液(50mL)和NaHCO3水溶液(50mL)洗。有机相经无水Na2SO4干燥，减压浓缩，残余物经柱色谱法分离(MeOH/DCM＝1/20)，得到1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-甲醛(280mg，67.72％收率)为无色油状液体。MS(ESI):128.1[M+H]+。
步骤3)4-乙炔基-1-甲基吡咯烷-2-酮
在20℃下，向1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-甲醛(400mg，3.1mmol)和K2CO3(1.3g，9.4mmol)的MeOH(30mL)溶液中加入(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(718mg，3.78mmol)，保温继续搅拌4h。混合物经H2O(10mL)稀释后，用饱和食盐水洗(40mL x 2)。有机相经无水Na2SO4干燥，减压浓缩，残余物经柱色谱法分离(MeOH/DCM＝1/30)，得到4-乙炔基-1-甲基吡咯烷-2-酮(180mg，37.17％收率)为无色油状液体。MS(ESI):124.1[M+H]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ3.70-3.55(m,2H),3.27(dd,J＝9.1,6.3Hz,1H),2.71(s,3H),2.56(dd,J＝16.3,8.6Hz,1H),2.22(dd,J＝16.3,7.1Hz,1H)。
步骤4)3-((1S)-1-氨基乙基)-8-(2-(1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1-酮
在氮气气氛下，向4-乙炔基-1-甲基吡咯烷-2-酮(37.1mg，0.3mmol)和(S)-3-(1-氨乙基)-8-氯-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(60mg，0.2mmol)的乙腈(20mL)溶液中加入K3PO4(128mg，0.6mmol)、x-Phos(38mg，0.08mmol)和Pd2(dba)3(37mg，0.04mmol)。混合物升温到80℃并搅拌4h。反应完全后，冷却至室温，减压浓缩。残余物经EtOAc(60mL)稀释后，用饱和食盐水洗(30mL x 2)，有机相经无水Na2SO4干燥，减压浓缩。残余物经硅胶柱色谱法纯化(DCM/MeOH＝20/1)，得到3-((1S)-1-氨基乙基)-8-(2-(1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1-酮(30mg，35.0％收率)为黄色固体。MS(ESI):473.0[M+H]+。
步骤5)2-氨基-N-((1S)-1-(8-(2-(1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
在室温下，向2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(15mg，0.08mmol)、HOAt(16mg，0.12mmol)、3-((1S)-1-氨基乙基)-8-(2-(1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1-酮(30mg，0.08mmol)和EDCI(22mg，0.12mmol)的DCM(10mL)溶液中加入DIEA(30mg，0.23mmol)。混合物升温至40℃，继续搅拌16h。向混合物中加入DCM(60mL)稀释，再用饱和食盐水洗(40mL)。有机相经无水Na2SO4干燥，减压浓缩，残余物经制备型HPLC(CAN-H2O 0.1FA，梯度30％至60％)分离，得到2-氨基-N-((1S)-1-(8-(2-(1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(18.0mg，42.42％收率)为白色固体。MS(ESI):546.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.47(d,J＝6.8Hz,1H),8.42(d,J＝4.5Hz,1H),7.94-7.89(m,1H),7.53(d,J＝1.7Hz,1H),7.51(d,J＝7.5Hz,1H),7.47(d,J＝1.3Hz,3H),7.42(s,1H),7.35(d,J＝8.0Hz,1H),6.82(dd,J＝6.6,4.5Hz,1H),6.62(s,1H),4.84-4.78(m,1H),3.63(dd,J＝12.8,5.0Hz,1H),3.57-3.51(m,1H),3.51-3.43(m,1H),2.84(s,3H),2.78-2.71(m,1H),2.63(s,1H),1.40(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例5(S)-2-氨基-N-(1-(8-((5,6-二氢-4H-吡咯[1,2-b]吡唑-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000301
步骤1)5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-甲醛
在-78℃下，向3-溴-4H,5H,6H-吡咯并[1,2-b]吡唑(200mg，1.07mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中慢慢加入正丁基锂(2.4M的正己烷溶液，0.49mL，1.18mmol)，混合物在-70℃搅拌1小时后加入N,N-二甲基甲酰胺(156mg，2.1mmol)的四氢呋喃(1mL)溶液，将混合物在0℃搅拌2小时。混合物用氯化铵水溶液(10mL)淬灭并用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(10mL x 2)洗，经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗品通过硅胶色谱法(EA/PE＝1/3)纯化，得到5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-甲醛(100mg，65％收率)为白色固体。MS(ESI):137.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.81(s,1H),7.95(s,1H),4.25-4.16(m,2H),3.18-3.10(m,2H),2.75-2.63(m,2H)。
步骤2)3-乙炔基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑
向5,6-二氢-4H-吡咯[1,2-b]吡唑-3-甲醛(100mg，0.73mmol)和碳酸钾(203mg，1.47mmol)的甲醇(10mL)溶液中加入(1-重氮-2-氧丙基)膦酸二甲酯(212mg，1.1mmol)，混合物在25℃下搅拌16小时，减压浓缩，残余物用乙酸乙酯(40mL)稀释。有机层用饱和食盐水(20mL x 2)洗，经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到3-乙炔基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑(80mg，70％收率)为无色油状。MS(ESI):133.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.61(s,1H),4.16-4.11(m,2H),3.03(s,1H),3.00-2.92(m,2H),2.67-2.60(m,2H)。
步骤3)(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮
在氮气环境下，向(S)-3-(1-氨基乙基)-8-氯-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(60mg，0.20mmol)和3-乙炔基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑(40mg，0.30mmol)的乙腈(30mL)溶液中加入X-Phos(48mg，0.10mmol)、Pd2(dba)3(46mg，0.05mmol)和磷酸钾(128mmol，0.60mmol)。将混合物在80℃下加热5小时，降至室温后，减压浓缩混合物，残余物用乙酸乙酯(30mL)稀释，混合物用饱和食盐水(20mL)洗，无水硫酸钠干燥,过滤，滤液减压浓缩。粗品通过硅胶色谱法(DCM/MeOH＝91/9)纯化，得到(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(35mg，39.8％收率)为黄色油状物。MS(ESI):394.9[M+H]+。
步骤4)(S)-2-氨基-N-(1-(8-((5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
在室温下，向(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-吡唑基-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(37mg，0.09mmol)和2-氨基-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(18mg，0.10mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入N,N'-二异丙基乙基胺(36mg，0.28mmol)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(27mg，0.14mmol)和1-羟基-7-氮杂苯并三氮唑(19mg，0.14mmol)。将混合物在40℃下搅拌16小时，然后用二氯甲烷(30mL)稀释，用饱和食盐水(20mL)洗，经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗品通过高效制备液相(Gemini-C18 150x21.2mm,5um ACN-H2O(0.1％FA)30-70)纯化，得到(S)-2-氨基-N-(1-(8-((5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-乙基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(9.3mg，17.70％收率)为白色固体。MS(ESI):554.8[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.93(dd,J＝6.7,1.6Hz,1H),8.55(dd,J＝4.5,1.6Hz,1H),8.00(d,J＝6.7Hz,1H),7.66-7.53(m,5H),7.52-7.46(m,3H),7.42-7.34(m,1H),7.02(dd,J＝6.7,4.5Hz,1H),6.73(s,1H),6.44(s,2H),4.55(q,J＝6.7Hz,1H),4.07(t,J＝7.2Hz,2H),2.93-2.80(m,2H),2.58-2.53(m,1H),1.35(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例6 2-氨基-N-((1S)-1-(1-氧代-8-((5-氧代四氢呋喃-3-基)乙炔基)-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-烷基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000311
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步骤1)4-(1-溴乙烯基)二氢呋喃-2(3H)-酮
在0℃下，向4-乙烯基氧杂环-2-酮(500mg，4.46mmol)的二氯甲烷(40mL)溶液中加入液溴(784mg，4.9mmol)，混合物在0℃下搅拌2小时后，减压浓缩混合物，将残余物溶于乙腈(20mL)。在0℃下，向混合物中加入1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯(1.35g，8.9mmol)，并在25℃搅拌16小时。混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释并用饱和食盐水(30mL x 2)洗。将分离的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品通过硅胶色谱法纯化(EA/PE＝1/4)，得到4-(1-溴乙烯基)二氢呋喃-2(3H)-酮(600mg，31.7％收率)为棕色油状物。MS(ESI):191.0,193.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.80(dd,J＝2.4,0.8Hz,1H),5.58(d,J＝2.4Hz,1H),4.45-4.39(m,1H),4.25-4.20(m,1H),3.55-3.46(m,1H),2.71-2.66(m,2H)。
步骤2)4-乙基二氢呋喃-2(3H)-酮
在-70℃下，向二异丙胺(1.38g，13.6mmol)的四氢呋喃(30mL)溶液中慢慢滴加正丁基锂(2.4N正己烷溶液，5.9mL，14.3mmol)，于-30℃搅拌1小时。然后将混合物冷却至-70℃，加入4-(1-溴乙烯基)二氢呋喃-2(3H)-酮(650mg，3.4mmol)的四氢呋喃(3mL)溶液，在-10℃下搅拌2小时。混合物用氯化铵水溶液(30mL)淬灭，并用乙酸乙酯(30mL x 3)提取。合并的有机层用饱和食盐水(50mL)洗，将分离的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品通过硅胶色谱法纯化(EA/PE＝1/4)，得到4-乙炔基二氢呋喃-2(3H)-酮(250mg，43.4％收率)为无色油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.51(dd,J＝8.8,7.6Hz,1H),4.22(dd,J＝8.8,7.6Hz,1H),3.45-3.33(m,1H),2.81(dd,J＝17.4,8.8Hz,1H),2.63(dd,J＝17.4,8.8Hz,1H),2.25(d,J＝2.4Hz,1H)。
步骤3)3-((S)-1-氨基乙基)-8-((5-氧代四氢呋喃-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮
在氮气环境下，向(S)-3-(1-氨基乙基)-8-氯-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(50mg，0.17mmol)和4-乙炔基二氢呋喃-2(3H)-酮(37mg，0.33mmol)的乙腈(30mL)溶液中加入X-Phos(40mg，0.083mmol)、Pd2(dba)3(38mg，0.042mmol)以及磷酸钾(107mg，0.50mmol)，混合物在80℃加热5小时。降至室温后，混合物减压浓缩，残余物用乙酸乙酯(30mL)稀释。混合物用饱和食盐水(20mL)洗，将分离的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品通过硅胶色谱法(DCM/MeOH＝91/9)纯化得到3-((S)-1-氨基乙基)-8-((5-氧代四氢呋喃-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(48mg，收率69.30％)为黄色油状物。MS(ESI):373.0[M+H]+。
步骤4)2-氨基-N-((1S)-1-(1-氧代-8-((5-氧代四氢呋喃-3-基)乙炔基)-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-烷基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向3-((S)-1-氨基乙基)-8-((5-氧代四氢呋喃-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(48mg，0.13mmol)和2,5-二氧代吡咯烷-1-基2-氨基吡唑并[1.5-a]嘧啶-3-羧酸酯(35.5mg，0.13mmol)的乙腈(10mL)混合物中加入N,N'-二异丙基乙基胺(50mg，0.39mmol)，将混合物在80℃下搅拌16小时。降至室温后，混合物减压浓缩，残余物用二氯甲烷(30mL)稀释，用饱和食盐水(20mL)洗，将分离的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物(Gemini-C18 150x21.2mm.2mm.5um ACN-H2O(0.1％FA)40-55)纯化得到2-氨基-N-((1S)-1-(1-氧代-8-((5-氧代四氢呋喃-3-基)乙炔基)-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(14.8mg，21.1％收率)为白色固体。MS(ESI):532.8[M+H]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.93(dd,J＝6.7,1.6Hz,1H),8.55(dd,J＝4.5,1.6Hz,1H),7.99(d,J＝6.7Hz,1H),7.67-7.42(m,7H),7.37(dd,J＝5.7,3.5Hz,1H),7.01(dd,J＝6.7,4.5Hz,1H),6.74(s,1H),6.43(s,2H),4.59-4.47(m,2H),4.20(dd,J＝8.3,6.9Hz,1H),3.77-3.68(m,1H),2.86(dd,J＝17.0,8.6Hz,1H),2.61(dd,J＝17.0,7.8Hz,1H),1.34(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例7(S)-2-氨基-N-(1-(8-((3-羟基氧杂环丁烷-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-烷基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000321
步骤1)3-乙炔基氧杂环丁烷-3-醇
在-78℃、氮气保护下，向3-氧杂环丁酮(750mg，10.41mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中慢慢滴加乙炔基溴化镁(25mL，12.50mmol，0.5mmol的THF溶液)，混合物在室温下搅拌2小时。反应用氯化铵水溶液(20mL)淬灭，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(50mL)洗，经无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗品通过快速硅胶色谱法(DCM/MeOH＝30/1)纯化，得到3-乙炔基氧杂环丁烷-3-醇(485mg，42.75％收率)为黄色油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.83(dd,J＝6.7,0.9Hz,2H),4.68(dd,J＝6.6,0.9Hz,2H),3.52(s,1H),2.71(s,1H)。
步骤2)3-((S)-1-氨基乙基)-8-((3-羟基氧杂环丁烷-3-基)乙炔基)-2-苯基萘-1(2H)-酮
向(S)-3-(1-氨基乙基)-8-氯-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(60mg，0.20mmol)和3-乙炔氧烷-3-醇(29mg，0.30mmol)的乙腈(10mL)溶液中加入X-Phos(48mg，0.10mmol)、Pd2(dba)3(37mg，0.04mmol)以及磷酸钾(128mg，0.60mmol)，混合物在80℃加热5小时。降至室温后，混合物减压浓缩，残余物用乙酸乙酯(60mL)稀释。混合物用饱和食盐水(40mL)洗，将分离的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品通过硅胶色谱法(DCM/MeOH＝91/9)纯化，得到3-((S)-1-氨基乙基)-8-((3-羟基氧杂环丁烷-3-基)乙炔基)-2-苯基萘-1(2H)-酮(50mg，收率62.20％)为黄色固体。MS(ESI):361.0[M+H]+。
步骤3)(S)-2-氨基-N-(1-(8-((3-羟基氧杂环丁烷-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-烷基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向3-((S)-1-氨基乙基)-8-((3-羟基氧杂环丁烷-3-基)乙炔基)-2-苯基萘-1(2H)-酮(25mg，0.07mmol)和2-氨基吡唑并[1.5-a]嘧啶-3-羧酸(12mg，0.07mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入N,N'-二异丙基乙基胺(27mg，0.21mmol)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(20mg，0.10mmol)和1-羟基-7-氮杂苯并三氮唑(14mg，0.10mmol)。将混合物在40℃下搅拌16小时，然后混合物用二氯甲烷(60mL)稀释，用饱和食盐水(40mL)洗，经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗品通过高效制备液相(-Gemini-C18 150x21.2mm，5um:ACN-H2O(0.1％FA),40-60)纯化，得到(S)-2-氨基-N-(1-(8-((3-羟基氧杂环丁烷-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(4.1mg，11.24％)为黄色固体。MS(ESI):520.9[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.93(dd,J＝6.7,1.6Hz,1H),8.55(dd,J＝4.5,1.6Hz,1H),8.00(d,J＝6.7Hz,1H),7.70-7.63(m,2H),7.60-7.54(m,2H),7.53-7.45(m,3H),7.41-7.35(m,1H),7.02(dd,J＝6.7,4.5Hz,1H),6.75(s,1H),6.58-6.35(m,3H),4.73(d,J＝6.3Hz,2H),4.55(t,J＝6.1Hz,3H),1.35(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例8 2-氨基-N-((1S)-1-(8-(2-(1,2-二甲基-5-氧代吡唑-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000331
步骤1)1,2-二甲基-5-氧代吡唑-3-甲酸甲酯
在0℃下，向2-甲基-5-氧代-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(1g，6.4mmol)的DMF(20mL)溶液中加入NaH(184mg，7.7mmol)，混合物继续搅拌0.5h。然后加入MeI(1.3g，9.6mmol)，随后搅拌4h。混合物用水淬灭，NH4Cl溶液(50mL)稀释，并用EtOAc(50mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(100mL x 2)洗，经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经硅胶色谱法(EA:PE＝1:2)纯化，得到1,2-二甲基-5-氧代吡唑-3-甲酸甲酯(1.05g，91.5％收率)为棕色固体。MS(ESI):171.1[M+H]+。
步骤2)5-(羟甲基)-1,2-二甲基吡唑-3-酮
在0℃下，向1,2-二甲基-5-氧代吡唑-3-甲酸甲酯(1g，5.9mmol)的THF(50mL)溶液中加入LiAlH4(446mg，11.7mmol)，保温搅拌2h。混合物加入10％NaOH(0.5mL)和水(1mL)淬灭，过滤。滤饼用EtOAc(40mL)洗，滤液经Na2SO4干燥，真空浓缩，得到粗制5-(羟甲基)-1,2-二甲基吡唑-3-酮(740mg，收率88％)，为无色油状物。MS(ESI):143.1[M+H]+。
步骤3)1,2-二甲基-5-氧代吡唑-3-甲醛
在20℃下，向5-(羟甲基)-1,2-二甲基吡唑-3-酮(740mg，5.2mmol)的DCM(100mL)溶液中加入戴斯-马丁试剂(4.4g，10.4mmol)，混合物搅拌16小时。混合物用DCM(100mL)稀释，过滤。滤液用水(50mL)和盐水(50mL)洗，经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经硅胶色谱法(EA/PE＝1/1)纯化，得到1,2-二甲基-5-氧代吡唑-3-甲醛(710mg，87.5％收率)为黄色油状物。MS(ESI):141.1[M+H]+。
步骤4)5-乙炔基-1,2-二甲基吡唑-3-酮
向1,2-二甲基-5-氧代吡唑-3-甲醛(710mg，5.1mmol)和K2CO3(2.1g，15mmol)的MeOH(50mL)溶液中加入二甲基(1-重氮-2-氧代丙基)膦酸盐(1.7g，6.1mmol)，混合物常温搅拌16小时。混合物真空浓缩后，用EtOAc(100mL)稀释；然后用盐水(100mL)洗，经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经硅胶色谱法(EA:PE＝1:1)纯化，得到5-乙炔基-1,2-二甲基吡唑-3-酮(540mg，70.4％收率)为无色油状物。MS(ESI):137.1[M+H]+。
步骤5)3-((1S)-1-氨基乙基)-8-(2-(1,2-二甲基-5-氧代吡唑-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1-酮
将5-乙炔基-1,2-二甲基吡唑-3-酮(9.6mg，0.07mmol)、3-[(1S)-1-氨基乙基]-8-氯-2-苯基异喹啉-1-酮(13.1mg，0.044mmol)、K3PO4(28mg，0.13mmol)、X-phos(8.4mg，0.02mmol)和Pd2(dba)3(8.1mg，0.01mmol)的CH3CN(10mL)溶液升温至80℃，搅拌16小时。冷却至室温，真空浓缩，残余物用EtOAc(50mL)稀释。混合物用盐水(20mL)洗，经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经硅胶色谱法(MeOH/DCM＝1/20)纯化，得到3-((1S)-1-氨基乙基)-8-(2-(1,2-二甲基-5-氧代吡唑-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1-酮(120mg，95％收率)为棕色固体。MS(ESI):399.2[M+H]+。
步骤6)2-氨基-N-((1S)-1-(8-(2-(1,2-二甲基-5-氧代吡唑-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(54mg，0.3mmol)和HOAT(61.5mg，0.45mmol)、EDCI(86.6mg，0.45mmol)、DIEA(117mg,0.9mmol)的DCM(20mL)溶液中加入3-((1S)-1-氨基乙基)-8-(2-(1,2-二甲基-5-氧代吡唑-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1-酮(120mg，0.30mmol)，混合物升温至40℃搅拌16h。冷却至室温后，混合物用DCM(60mL)稀释。混合物用盐水(50mL)洗，经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经制备型HPLC(ACN-H2O 0.1％FA，梯度30％至50％)纯化，得到2-氨基-N-((1S)-1-(8-(2-(1,2-二甲基)-5-氧代吡唑-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(56mg，32.6％收率)为白色固体。MS(ESI):559.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.49(dd,J＝6.8,1.6Hz,1H),8.44(dd,J＝4.4,1.6Hz,1H),7.97(d,J＝6.8Hz,1H),7.66(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.60-7.56(m,1H),7.55-7.48(m,4H),7.38-7.33(m,1H),6.86-6.82(m,1H),6.67(s,1H),5.88(s,1H),4.86-4.81(m,1H),3.93(s,3H),3.91(s,3H),1.42(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例9(S)-2-氨基-N-(1-(8-((6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-2-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000341
步骤1)2-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑
向2-溴-5H,6H,7H-吡咯并[1,2-a]咪唑(300mg，1.6mmol)、乙炔基三异丙基硅烷(439mg，2.4mmol)、醋酸钯(36mg，0.16mmol)的DMF(10mL)溶液中加入K2CO3(443mg，3.2mmol)和X-phos(76mg，0.16mmol)，混合物升温至80℃，搅拌16h。冷却至室温后，混合物用EtOAc(50mL)稀释，并用盐水(30mL×2)洗。有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝20/1)分离纯化，得到产物(200mg，41％收率)为黄色固体。MS(ESI):289.2[M+H]+。
步骤2)2-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑
向2-(2-(三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-5H,6H,7H-吡咯并[1,2-a]咪唑(150mg，0.52mmol)的THF(5mL)溶液中加入四丁基氟化铵(0.8mL,0.8mmol,1M的THF溶液)，混合物升温至25℃搅拌2小时。混合物用EtOAc(50mL)稀释，并用盐水(30mL)洗。有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱(DCM/MeOH＝15/1)分离，得到2-乙炔基-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑(60mg，收率78％)为白色固体。MS(ESI):133.0[M+H]+。
步骤3)(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-2-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮
在氮气气氛下，向(S)-3-(1-氨基乙基)-8-氯-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(60mg，0.20mmol)和2-乙炔基-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑(34.5mg，0.26mmol)的MeCN(50mL)溶液中加入X-Phos(38mg，0.08mmol)、Pd2(dba)3(37mg，0.04mmol)和K3PO4(128mg，0.60mmol)。混合物升温至80℃，搅拌5h。冷却至室温后，将混合物真空浓缩，残余物用EtOAc(130mL)稀释，并用盐水(50mL×2)洗。有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝91/9)纯化，得到(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-2-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(50mg，57％收率)为黄色油状物。MS(ESI):394.9[M+H]+。
步骤4)(S)-2-氨基-N-(1-(8-((6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-2-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-2-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(50mg，0.13mmol)和2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(25mg，0.14mmol)的DCM(20mL)溶液中加入DIEA(65mg，0.51mmol)、EDCI(36mg，0.19mmol)和HOAT(26mg，0.19mmol)。混合物升温至40℃，搅拌16h。冷却至室温后，混合物用DCM(100mL)稀释，并用盐水(50mL x 2)洗。有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经制备型HPLC(-Xbridge-C18 150x 19mm,5um,ACN-H2O(0.05％NH4OH),15％-40％)纯化，得到(S)-2-氨基-N-(1-(8-((6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-2-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(13.4mg，19.01％收率)为白色固体。MS(ESI):554.8[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.94(dd,J＝6.7,1.6Hz,1H),8.56(dd,J＝4.5,1.6Hz,1H),8.02(d,J＝6.6Hz,1H),7.89(s,1H),7.79-7.65(m,3H),7.61-7.46(m,4H),7.43-7.38(m,1H),7.02(dd,J＝6.7,4.5Hz,1H),6.81(s,1H),6.43(s,2H),4.60-4.52(m,1H),4.17-4.09(m,2H),3.04(t,J＝7.6Hz,2H),2.66-2.55(m,2H),1.36(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例10 2-氨基-5-(氟甲基-d)-N-((S)-1-(8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000351
步骤1)2-氨基-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯
向3,5-二氨基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(2g，11.7mmol)的DMF(20mL)溶液中加入4,4-二甲氧基丁-2-酮(3.1g，23.5mmol)。混合物升温至110℃，搅拌1h，然后加入乙酸(2.8g，47.0mmol)，继续搅拌16h。冷却至室温，真空浓缩。将残余物溶于EtOAc(200mL)和盐水(100mL×3)，分液，有机相经无Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(PE:EA＝3:1)纯化，得到2-氨基-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(2.2g，85％收率)为黄色固体。LCMS:MS(ESI)m/z 221.2[M+H]+。
步骤2)5-甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯
在0℃下，向2-氨基-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(2g，9.0mmol)和DIEA(2.3g，18mmol)的DCM(30mL)溶液中加入三氟乙酸酐(3.8g，18mmol)。混合物转移至室温，搅拌16小时。将混合物用DCM(100mL)稀释，用盐水(50mL x 2)洗。分液，有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝10/1)纯化，得到5-甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(1.5g，47％收率)为黄色固体。LCMS:MS(ESI)m/z 316.9[M+H]+。
步骤3)5-甲酰基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯
向5-甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(600mg，1.9mmol)的1,4-二氧六环(30mL)溶液中加入二氧化硒(421mg，3.8mmol)。将混合物升温至100℃，搅拌36小时。冷却至室温后，过滤，滤液真空浓缩。将残余物溶于EtOAc(200mL)，用盐水(100mL x 2)洗。分液，有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经柱色谱法(PE/EA＝2/1)纯化，得到5-甲酰基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(270mg，43％收率)为黄色固体。LCMS:MS(ESI)m/z 349.0[M+H]+。
步骤4)5-(羟甲基-d)-2-(2,2,2-三氟乙酰胺)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯
在0℃下，向5-甲酰基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(200mg，0.6mmol)的THF(3mL)溶液中加入氘代硼氢化钠(11mg，0.3mmol)。混合物转移至室温，搅拌16小时。将混合物用10％柠檬酸(30mL)淬灭，用EtOAc(50mL×2)萃取。合并的有机层用盐水(30mL x 2)洗，经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经柱色谱法(PE/EA＝5/1)纯化，得到5-(羟甲基-d)-2-(2,2,2-三氟乙酰胺)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(60mg，29％收率)为黄色固体。LCMS:MS(ESI)m/z 334.0[M+H]+。
步骤5)5-(氟甲基-d)-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯
在0℃下，向5-(羟甲基)-2-(2,2,2-三氟乙酰胺)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(50mg，0.15mmol)的DCM(10mL)溶液中加入DAST(48mg，0.3mmol)。将混合物转移至室温，搅拌1小时。混合物用DCM(50mL)稀释，并用盐水(30mL x 2)洗。分液，有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到5-(氟甲基-d)-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(40mg，80％收率)为黄色油状物。LCMS:MS(ESI)m/z 336.1[M+H]+。
步骤6)2-氨基-5-(氟甲基-d)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸
向5-(氟甲基)-2-(2,2,2-三氟乙酰胺)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(40mg，0.12mmol)的EtOH(4mL)和H2O(1mL)溶液中加入氢氧化钠(10mg，0.24mmol)。将混合物转移至室温，搅拌16h。混合物用1M HCl调节至pH＝6-7，用EtOAc(30mL x 3)萃取。合并有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝10/1)纯化，得到2-氨基-5-(氟甲基-d)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(20mg，收率80％)为黄色固体。LCMS:MS(ESI)m/z212.1[M+H]+。
步骤7)2-氨基-5-(氟甲基-d)-N-((S)-1-(8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(20mg，0.05mmol)的DCM(15mL)溶液中加入2-氨基-5-(氟甲基-d)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(14mg，0.06mmol)、HOAt(11mg，0.08mmol)、EDCI(13mg，0.08mmol)和DIEA(21mg，0.16mmol)。混合物升温至40℃，搅拌16h。冷却至室温后，将混合物用DCM(50mL)稀释，并用盐水(30mL x 2)洗。分离的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝15/1)纯化，得到2-氨基-5-(氟甲基-d)-N-((S)-1-(8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(0.8mg，2.6％收率)为白色固体。LCMS:MS(ESI)m/z 562.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.67(d,J＝7.0Hz,1H),7.77(s,1H),7.59(s,1H),7.58-7.48(m,4H),7.47-7.39(m,3H),7.35(d,J＝8.8Hz,1H),7.01(d,J＝7.0Hz,1H),6.80(s,1H),5.39(d,J＝2.3Hz,1H),4.67(d,J＝6.9Hz,1H),3.79(s,3H),1.38(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例11(S)-2-氨基-N-(1-(2-环丙基-8-((5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-2-基)乙炔基)-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000361
步骤1)2-氯-N-环丙基-6-甲基苯甲酰胺
在0℃下，向2-氯-6-甲基苯甲酸(1.0g，5.9mmol)的DCM(50mL)和DMF(40mg)溶液中滴加草酰氯(970mg，7.67mmol)。将混合物在0℃下继续搅拌2h，减压浓缩。向环丙胺(340mg，5.9mmol)和TEA(1.79g，17.7mmol)的DCM(50mL)溶液中加入上述酰氯的DCM(10mL)溶液，混合物在室温下搅拌5小时。将混合物用H2O(30mL)稀释，用DCM(50mL x 3)萃取。合并的有机相用盐水(40mL x 2)洗，经Na2SO4干燥，减压浓缩。残余物经柱色谱法(PE/EA＝3/1)纯化，得到2-氯-N-环丙基-6-甲基苯甲酰胺(1.2g，88％收率)为黄色固体。MS(ESI):210.01[M+H]+。
步骤2)(S)-(4-(3-氯-2-(环丙基氨基甲酰基)苯基)-3-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯
在氮气气氛中，于-30℃下，向2-氯-N-环丙基-6-甲基苯甲酰胺(300mg，1.43mmol)的THF(20mL)溶液中加入n-BuLi(1.6mL，3.72mmol)。将混合物保温搅拌1小时。于氮气气氛中，在-30℃下，向(S)-(1-(甲氧基(甲基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(498mg，2.15mmol)的THF(20mL)溶液中缓慢滴加i-PrMgCl(3.5mL，4.58mmol)溶液，混合物搅拌1小时。然后将该溶液缓慢加至上述混合物中，转移至室温，搅拌3h。混合物用NH4Cl(30mL)的水溶液淬灭，并用EtOAc(50mL x 3)萃取。合并的有机相用盐水(10mL x 2)洗，经Na2SO4干燥，减压浓缩。残余物经柱色谱法(PE/EA＝3/1)纯化，得到(S)-(4-(3-氯-2-(环丙基氨基甲酰基)苯基)-3-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(463mg，收率81％)为黄色固体。MS(ESI):402.9[M+Na]+。
步骤3)(S)-3-(1-氨基乙基)-8-氯-2-环丙基异喹啉-1(2H)-酮
向(S)-(4-(3-氯-2-(环丙基氨基甲酰基)苯基)-3-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.53mmol)的MeOH(10mL)溶液中加入HCl(2.0mL)，混合物升温至80℃搅拌2h。冷却至室温后，将混合物减压浓缩。残余物用H2O(10mL)稀释，用NaHCO3水溶液将pH值调节至7-8，然后用DCM(30mL x 3)萃取，合并有机相用盐水(30mL x 2)洗，经Na2SO4干燥，减压浓缩。残余物经柱色谱法纯化(DCM/MeOH＝95/5)，得到(S)-3-(1-氨基乙基)-8-氯-2-环丙基异喹啉-1(2H)-酮(130mg，85％收率)为黄色固体。MS(ESI):263.0[M+H]+。
步骤4)(S)-3-(1-氨基乙基)-2-环丙基-8-((5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-2-基)乙炔基)异喹啉-1(2H)-酮在氮气气氛下，向(S)-3-(1-氨基乙基)-8-氯-2-环丙基异喹啉-1(2H)-酮(50mg，0.19mmol)和2-乙炔基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑(33mg，0.25mmol)的MeCN(20mL)溶液中加入X-Phos(45mg，0.09mmol),Pd2(dba)3(43mg，0.05mmol)和K3PO4(121mg，0.57mmol)，混合物升温至80℃，搅拌5h。冷却至室温后，将混合物真空浓缩。残余物用EtOAc(100mL)稀释，用盐水(50mL×2)洗。分液，有机相经Na 2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝91/9)纯化，得到(S)-3-(1-氨基乙基)-2-环丙基-8-((5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-2-基)乙炔基)异喹啉-1(2H)-酮(33mg，45.3％收率)为黄色油状物。MS(ESI):359.0[M+H]+。
步骤5)(S)-2-氨基-N-(1-(2-环丙基-8-((5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-2-基)乙炔基)-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向(S)-3-(1-氨基乙基)-2-环丙基-8-((5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-2-基)乙炔基)异喹啉-1(2H)-酮(33mg，0.09mmol)和2-氨基-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸(18mg，0.09mmol)的DCM(20mL)溶液中加入DIEA(36mg，0.28mmol)、EDCI(26mg，0.14mmol)和HOAT(19mg，0.14mmol)，混合物升温至40℃，搅拌16小时。冷却至室温后，将混合物用DCM(100mL)稀释，用盐水(40mL x 2)洗。分液，有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经制备型HPLC(-Gemini-C18 150x 21.2mm,5um:ACN--H2O(0.1％FA),40％-60％)纯化，得到(S)-2-氨基-N-(1-(2-环丙基-8-((5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-2-基)乙炔基)-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(5.5mg，11％收率)为白色固体。MS(ESI):532.9[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.79(d,J＝6.9Hz,1H),8.22(d,J＝7.2Hz,1H),7.60-7.53(m,3H),6.91(d,J＝6.9Hz,1H),6.62(s,1H),6.38(s,2H),6.26(s,1H),5.84-5.78(m,1H),4.22(t,J＝6.6Hz,1H),4.14-4.08(m,2H),3.01(s,1H),2.90-2.84(m,2H),2.56(s,3H),2.54(s,1H),1.58(d,J＝6.7Hz,3H),1.11-1.03(m,2H),0.91(t,J＝7.4Hz,1H),0.86-0.76(m,2H)。
实施例12(S)-2-氨基-N-(1-(8-((6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]***-2-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000371
步骤1)4-氯-N'-(二苯基亚甲基)丁酰肼
在0℃下，向(二苯基亚甲基)肼(3.9g，20mmol)和吡啶(1.58g，20mmol)的DCM(60mL)溶液中滴加4-氯丁酰氯(2.8g，20mmol)，将混合物在室温下搅拌16小时。混合物用DCM(200mL)稀释，并用盐水(100mL x 2)洗，分液，有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到4-氯-N'-(二苯基亚甲基)丁酰肼(6.8g，粗品)为白色固体。MS(ESI):301.0[M+H]+。
步骤2)1-((二苯基亚甲基)氨基)吡咯烷-2-酮
在0℃下，向4-氯-N'-(二苯基亚甲基)丁酰肼(905mg，3.0mmol)的THF(20mL)溶液中缓慢加入NaH(73mg，3.0mmol)，混合物在室温下搅拌16小时。混合物用EtOAc(60mL)稀释，用盐水(30mL×2)洗，分液，有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(PE/EA＝2/1)纯化，得到1-((二苯基亚甲基)氨基)吡咯烷-2-酮(768mg，92％收率)为白色固体。MS(ESI):265.0[M+H]+。
步骤3)1-氨基吡咯烷-2-酮盐酸盐
向1-((二苯基亚甲基)氨基)吡咯烷-2-酮(503mg，1.9mmol)的H2O(10mL)溶液中加入2N HCl(5mL)，转移至室温，搅拌16h。混合物用DCM(30mL)萃取，分液，将水相真空浓缩，得到1-氨基吡咯烷-2-酮盐酸盐(330mg，粗品)为白色固体。MS(ESI):101.1[M+H]+。
步骤4)2-亚氨基-2-((2-氧代吡咯烷-1-基)氨基)乙酸乙酯
向1-氨基吡咯烷-2-酮盐酸盐(330mg，2.4mmol)的EtOH(20mL)溶液中加入2-乙氧基-2-亚氨基乙酸乙酯(351mg，2.4mmol)，混合物在40℃下搅拌16小时。将混合物真空浓缩，得到2-亚氨基-2-((2-氧代吡咯烷-1-基)氨基)乙酸乙酯(450mg，粗品)为白色固体。MS(ESI):200.0[M+H]+。
步骤5)6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]***-2-甲酸乙酯
将2-亚氨基-2-((2-氧代吡咯烷-1-基)氨基)乙酸乙酯(450mg，2.3mmol)和POCl3(10mL)的混合物在110℃搅拌16h。冷却至室温后，真空浓缩。残余物用EtOAc(50mL)和碳酸氢钠水溶液(30mL)稀释。分液，有机相用盐水(30mL x 2)洗，经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝20/1)纯化，得到6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]***-2-甲酸乙酯(100mg，25％收率)为白色固体。MS(ESI):182.0[M+H]+。
步骤6)(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]***-2-基)甲醇
在0℃下，将LiAlH4(21mg，0.55mmol)缓慢加至6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]***-2-甲酸乙酯(100mg，0.55mmol)的THF(10mL)溶液中，混合物在室温下搅拌16h，用10％NaOH(0.1mL)和水(5mL)淬灭，然后用EtOAc(30mL x 2)萃取，合并的有机相用盐水(50mL)洗，经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]***-2-基)甲醇(80mg，粗品)为白色固体。MS(ESI):140.1[M+H]+。
步骤7)6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]***-2-甲醛
向(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]***-2-基)甲醇(50mg，0.36mmol)的CHCl3(20mL)溶液中加入MnO2(157mg，1.8mmol)，混合物升温至70℃，搅拌16h。冷却至室温后，过滤，滤液真空浓缩，得到6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]***-2-甲醛(40mg，粗品)为白色固体。MS(ESI):138.0[M+H]+。
步骤8)2-乙炔基-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]***
向6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]***-2-甲醛(40mg，0.30mmol)的MeOH(10mL)溶液中加入(1-重氮-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(85mg，0.44mmol)和K2CO3(81mg，0.58mmol)，将混合物在室温下搅拌16小时，真空浓缩。残余物用EtOAc(50mL)稀释，用盐水(30mL×2)洗。有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱(DCM/MeOH＝20/1)纯化，得到2-乙炔基-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]***(18mg，45％收率)为白色固体。MS(ESI):156.1[M+Na]+。
步骤9)(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]***-2-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮
在氮气气氛下，向(S)-3-(1-氨基乙基)-8-氯-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(40mg，0.13mmol)的CH3CN(20mL)溶液中加入2-乙炔基-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]***(27mg，0.20mmol)、K3PO4(57mg，0.27mmol)、Pd2(dba)3(31mg，0.03mmol)和X-Phos(32mg，0.07mmol)，混合物升温至80℃，搅拌16h。冷却至室温后，真空浓缩。将残余物用EtOAc(50mL)稀释，用盐水(30mL x 3)洗。分液，有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝20/1)纯化，得到(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]***-2-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(25mg，45％收率)为白色固体。MS(ESI):395.9[M+H]+。
步骤10)(S)-2-氨基-N-(1-(8-((6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]***-2-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]***-2-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(25mg，0.06mmol)的DCM(20mL)溶液中加入2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(12mg，0.06mmol)、EDCI(19mg，0.09mmol)、HOAT(13mg，0.09mmol)和DIEA(25mg，0.19mmol)，混合物升温至40℃，搅拌16h。冷却至室温后，将混合物用DCM(40mL)稀释，用盐水(30mL x 2)洗。分液，有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经制备型HPLC(Gemini-C18 150x 21.2mm，5um,ACN--H2O(0.1％FA)20％-30％)纯化，得到(S)-2-氨基-N-(1-(8-((6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-b][1,2,4]***-2-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(16.1mg，收率45％)为白色固体。MS(ESI):555.9[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.93(dd,J＝6.7,1.6Hz,1H),8.56(dd,J＝4.5,1.6Hz,1H),8.02(d,J＝6.7Hz,1H),7.75-7.66(m,3H),7.58-7.46(m,4H),7.41-7.37(m,1H),7.02(dd,J＝6.7,4.5Hz,1H),6.78(s,1H),6.44(s,2H),4.60-4.55(m,1H),4.11-4.06(m,2H),2.85-2.80(m,2H),2.65-2.58(m,2H),1.36(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例13(S)-2-氨基-N-(1-(8-((2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑-6-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000391
步骤1)2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑-6-甲酸乙酯
向5-羟基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(2g，12.8mmol)的CH3CN(10mL)溶液中加入1,2-二溴乙烷(6g，32mmol)和碳酸钾(2.5g，17.68mmol)，将混合物在65℃搅拌36h。冷却至室温后，将混合物真空浓缩。残余物用EtOAc(200mL)稀释，分别用水(100mL)和盐水(100mL)洗。分液，有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝10/1)纯化，得到2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑-6-甲酸乙酯(1.8g，77％收率)为白色固体。LCMS:MS(ESI)m/z 183.1[M+H]+。
步骤2)(2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑-6-基)甲醇
在0℃下，向2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑-6-甲酸乙酯(100mg，0.55mmol)的THF(10mL)溶液中加入LiAlH4(31mg，0.82mmol)，混合物转移至室温搅拌2h。混合物用10％的NaOH(0.3mL)和水(1mL)淬灭，然后用乙酸乙酯(100mL)稀释，分液，用盐水(50mL)洗，有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到(2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑-6-基)甲醇(60mg，收率78％)为白色固体。LCMS:MS(ESI)m/z141.2[M+H]+。
步骤3)2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑-6-甲醛
向(2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑-6-基)甲醇(50mg，0.36mmol)的氯仿(10mL)溶液中加入MnO2(155mg，1.78mmol)，混合物升温至62℃，搅拌36h。冷却至室温后，过滤。滤饼用DCM(10mL)洗两次，滤液真空浓缩，得到2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑-6-甲醛(40mg，81％收率)为白色固体。LCMS:MS(ESI)m/z 139.1[M+H]+。
步骤4)6-乙炔基-2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑
向2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑-6-甲醛(40mg，0.29mmol)的MeOH(10mL)溶液中加入(1-重氮-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(83mg，0.43mmol)和碳酸钾(81mg，0.58mmol)，混合物于室温下搅拌16h。混合物减压浓缩。将残余物溶于EtOAc(100mL)，用盐水(50mL)洗。分液，有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到6-乙炔基-2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑(20mg，收率52％)为黄色固体。LCMS:MS(ESI)m/z 135.2[M+H]+。
步骤5)(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑-6-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮
向(S)-3-(1-氨基乙基)-8-氯-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(30mg，0.1mmol)的CH3CN(10mL)溶液中加入6-乙炔基-2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑(20mg，0.15mmol)、Pd2(dba)3(9mg，0.01mmol)、X-phos(5mg，0.01mmol)和K3PO4(32mg,0.15mmol)，混合物升温至80℃，搅拌4h。冷却至室温后，混合物真空浓缩。将残余物溶于DCM(50mL)，用盐水(30mL)洗。分液，有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经柱色谱(DCM/MeOH＝10/1)纯化，得到(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑-6-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(20mg，50％收率)为黄色固体。LCMS:MS(ESI)m/z 396.8[M+H]+。
步骤6)(S)-2-氨基-N-(1-(8-((2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑-6-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑-6-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(20mg，0.05mmol)和2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(11mg，0.06mmol)的DCM(20mL)溶液中加入HOAt(10mg，0.07mmol)、EDCI(15mg，0.07mmol)和DIEA(20mg，0.15mmol)，混合物升温至40℃，搅拌16h。冷却至室温后，混合物用DCM(50mL)稀释，并用盐水(30mL)洗。分液，有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经柱色谱(DCM:MeOH＝10:1)纯化，得到(S)-2-氨基-N-(1-(8-((2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑-6-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(9.5mg，33％收率)为白色固体。LCMS:MS(ESI)m/z 556.9[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.69(dd,J＝6.8,1.6Hz,1H),8.50(dd,J＝4.5,1.6Hz,1H),8.21(d,J＝7.0Hz,1H),7.63(dd,J＝14.4,8.2,6.9,2.0Hz,4H),7.53-7.38(m,4H),6.96(dd,J＝6.8,4.5Hz,1H),6.88(s,1H),5.68(s,1H),5.10-5.02(m,2H),4.76(q,J＝6.8Hz,1H),4.32-4.24(m,2H),1.46(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例14(S)-2-氨基-N-(1-(8-((2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑-7-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000401
步骤1)2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑
向1,2-二氢吡唑-3-酮(2.0g，0.02mol)的CH3CN(20mL)溶液中加入1,2-二溴乙烷(19g，0.09mol)和K2CO3(6.58g，0.047mol)，混合物升温至80℃，搅拌16h。冷却至室温后，过滤，滤液真空浓缩。残余物用DCM(100mL)稀释，用盐水(50mL)洗。分液，有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱分离(DCM/MeOH＝20/1)纯化，得到2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑(1.0g，34.45％收率)为黄色油状。MS(ESI):111.2[M+H]+。
步骤2)7-溴-2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑
向2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑(450mg，4.09mmol)的CH3CN(10mL)溶液中加入NBS(873mg，4.9mmol)，混合物搅拌5小时。混合物用水(20mL)稀释，然后用DCM(30mL×3)萃取。合并的有机相用盐水(30mL x 2)洗，经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱分离(PE:EtOAc＝2:1)纯化，得到7-溴-2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑(500mg，51.79％收率)为白色固体。MS(ESI):189.1[M+H]+。
步骤3)7-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑
在氮气气氛下，向7-溴-2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑(600mg，3.17mmol)的CH3CN(20mL)溶液中加入乙炔基三异丙基硅烷(695mg，3.8mmol)、磷酸三钾(2g,9.5mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(581mg，0.64mmol)和X-phos(302mg，0.64mmol)，混合物升温至80℃，搅拌16小时。冷却至室温后，真空浓缩。将残余物用DCM(60mL)稀释，并用盐水(30mL x 2)洗。分液，有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(PE:EtOAc＝2:1)纯化，得到7-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑(300mg，收率26.03％)为黄色油状物。MS(ESI):291.1[M+H]+。
步骤4)7-乙炔基-2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑
向7-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑(300mg，1.03mmol)的THF(20mL)溶液中加入TBAF(1mL，1M THF溶液)，混合物搅拌2h。混合物用EtOAc(30mL)稀释，用盐水(20mL×2)洗。分液，有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM:MeOH＝10:1)纯化，得到7-乙炔基-2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑(60mg,34.64％收率)为无色油状物。MS(ESI):135.1[M+H]+。
步骤5)(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑-7-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮
在氮气气氛下，向(S)-3-(1-氨基乙基)-8-氯-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(30mg，0.1mmol)和7-乙炔基-2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑(20mg，0.15mmol)的乙腈(5mL)溶液中加入三(二亚苄基丙酮)二钯(9mg，0.01mmol)、X-phos(5mg，0.01mmol)和K3PO4(43mg，0.2mmol)，混合物升温至80℃，搅拌16h。冷却至室温后，真空浓缩。残余物用DCM(30mL)稀释，并用盐水(30mL)洗。分液，有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝10:1)纯化，得到(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑-7-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(23mg，60.0％收率)为黄色固体。MS(ESI):398.0[M+H]+。
步骤6)(S)-2-氨基-N-(1-(8-((2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑-7-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑-7-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(20mg，0.05mmol)和2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(11mg，0.06mmol)的DCM(5mL)溶液中加入HOAT(10mg，0.075mmol)、EDCI(14mg，0.075mmol)和DIEA(13mg，0.1mmol)，混合物升温至40℃，搅拌6h。冷却至室温后，混合物用DCM(40mL)稀释，并用盐水(20mL)洗。分液，有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱分离(DCM/MeOH＝10/1)纯化，得到(S)-2-氨基-N-(1-(8-((2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑-7-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(5.3mg，18.49％收率)为黄色固体。MS(ESI):557.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,)δ8.89(dd,J＝6.7,1.6Hz,1H),8.51(dd,J＝4.5,1.6Hz,1H),7.96(d,J＝6.7Hz,1H),7.61-7.51(m,3H),7.49-7.43(m,3H),7.43-7.39(m,2H),7.35-7.30(m,1H),6.98(dd,J＝6.7,4.5Hz,1H),6.68(s,1H),6.40(s,2H),5.14-5.07(m,2H),4.53-4.48(m,1H),4.29-4.22(m,2H),1.30(t,J＝3.4Hz,3H)。
实施例15(S)-2-氨基-N-(1-(5-((5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)乙炔基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000411
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步骤1)(S)-2-(1-氨基乙基)-5-((5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)乙炔基)-3-苯基喹唑啉-4(3H)-酮
在氮气气氛下，向(S)-2-(1-氨基乙基)-5-溴-3-苯基喹唑啉-4(3H)-酮(50mg，0.15mmol)和3-乙炔基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑(29mg，0.22mmol)的CH3CN(20mL)溶液中加入K3PO4(62mg，0.3mmol)、Pd2(dba)3(34mg，0.03mmol)和X-Phos(35mg，0.08mmol)，混合物升温至80℃搅拌16h。冷却至室温后，真空浓缩。残余物用EtOAc(50mL)稀释，用盐水(30mL x 3)洗。分液，有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法分离(DCM/MeOH＝20/1)纯化，得到(S)-2-(1-氨基乙基)-5-((5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)乙炔基)-3-苯基喹唑啉-4(3H)-酮(20mg，35％收率)为白色固体。MS(ESI):395.9[M+H]+。
步骤2)(S)-2-氨基-N-(1-(5-((5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)乙炔基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向(S)-2-(1-氨基乙基)-5-((5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)乙炔基)-3-苯基喹唑啉-4(3H)-酮(20mg，0.05mmol)和2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(10mg，0.05mmol)的DCM(20mL)溶液中加入EDCI(15mg，0.07mmol))、HOAT(11mg，0.07mmol)和DIEA(20mg，0.15mmol)，混合物升温至40℃，搅拌16h。混合物用DCM(50mL)稀释，并用盐水(30mLx 2)洗，分液，有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经制备型-HPLC(Gemini-C18 150x 21.2mm，5um,ACN--H2O(0.1％FA),梯度20％-30％)纯化，得到(S)-2-氨基-N-(1-(5-((5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)乙炔基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(6.2mg，收率23％)为白色固体。MS(ESI):555.8[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.92(dd,J＝6.7,1.7Hz,1H),8.72(d,J＝7.4Hz,1H),8.65(dd,J＝4.5,1.6Hz,1H),7.79(d,J＝7.6Hz,1H),7.69(dd,J＝8.1,1.2Hz,1H),7.65-7.58(m,6H),7.53(d,J＝7.5Hz,1H),7.04-7.01(m,1H),6.49-6.42(m,2H),4.74(t,J＝7.0Hz,1H),4.08(t,J＝7.2Hz,2H),2.88(t,J＝7.2Hz,2H),2.57-2.54(m,2H),1.32(d,J＝6.6Hz,3H)。
实施例16(S)-2-氨基-N-(1-(7-氟-8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基))乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000421
步骤1)(S)-3-(1-氨基乙基)-7-氟-8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮
在氮气气氛下，向(S)-3-(1-氨基乙基)-8-氯-7-氟-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(304mg，0.96mmol)和4-乙炔基-1-甲基-1H-吡唑(153mg，1.44mmol)的MeCN(50mL)溶液中加入X-Phos(183mg，0.38mmol)、Pd2(dba)3(176mg，0.20mmol)和K3PO4(611mg，2.88mmol)，混合物升温至80℃，搅拌5h。冷却至室温后，真空浓缩。将残余物用EtOAc(130mL)稀释，用盐水(60mL x 2)洗，分液，有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝91/9)纯化，得到(S)-3-(1-氨基乙基)-7-氟-8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(210mg，53.8％收率)为黄色油状物。MS(ESI):386.9[M+H]+。
步骤2)(S)-2-氨基-N-(1-(7-氟-8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基))乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向(S)-3-(1-氨基乙基)-7-氟-8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(120mg，0.31mmol)和2-氨基-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(61mg，0.34mmol)的DCM(20mL)溶液中加入DIEA(160mg，1.24mmol)、EDCI(89mg，0.47mmol)和HOAT(63mg，0.47mmol)，混合物升温至40℃，搅拌16h。冷却至室温后，将混合物用DCM(100mL)稀释，并用盐水(60mL x 2)洗。分液，有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经制备型HPLC(-Xbridge-C18 150x 19mm,5um,ACN-H2O(0.05％NH4OH),40％-45％)纯化，得到(S)-2-氨基-N-(1-(7-氟-8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基))乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(55mg，32.4％收率)为白色固体。MS(ESI):546.8[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.93(dd,J＝6.7,1.6Hz,1H),8.55(dd,J＝4.5,1.6Hz,1H),8.05(s,1H),7.99(d,J＝6.6Hz,1H),7.75-7.65(m,2H),7.63-7.55(m,2H),7.53-7.46(m,3H),7.41-7.36(m,1H),7.02(dd,J＝6.7,4.5Hz,1H),6.79(s,1H),6.43(s,2H),4.54(t,J＝6.7Hz,1H),3.82(s,3H),1.35(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例17(S)-2-氨基-6-氟-N-(1-(8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000431
步骤1)(E)-2-氟代-3-羟基丙烯醛
向四甲氧基丙烷(2.0g，0.01mol)的水(10mL)溶液中加PTSA(2.1g，0.01mol)，混合物于室温搅拌2h。向混合物中加入选择性氟试剂(Selectflour，5.9g，0.02mol)，继续搅拌16h。所得溶液直接用于下一步骤。MS(ESI):91.1[M+H]+。
步骤2)2-氨基-6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯
向(E)-2-氟代-3-羟基丙烯醛(2mL)的溶液中缓慢加入DMSO(10mL)。混合物搅拌10分钟后，加入3,5-二氨基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(283mg，1.67mmol)。混合物升温至85℃，搅拌4h。冷却至室温后，混合物用EtOAc(30mL x 3)萃取。分液，有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝20:1)纯化，得到2-氨基-6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(100mg，40.3％收率)为黄色固体。MS(ESI):225.0[M+H]+。
步骤3)2-氨基-6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸
向2-氨基-6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(100mg，0.45mmol)的MeOH(5mL)溶液中加入NaOH(89mg，2.23mmol)的H2O(2mL)溶液，混合物升温至40℃，搅拌8h。冷却至室温后，真空浓缩。混合物用1N HCl酸化至pH＝5-6，过滤，滤饼用水(5mL)洗。滤液真空浓缩，得到2-氨基-6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(60mg，54.67％收率)为黄色固体。MS(ESI):197.1[M+H]+。
步骤4)(S)-2-氨基-6-氟-N-(1-(8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向2-氨基-6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸(42mg，0.21mmol)和(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(95mg，0.26mmol)的DCM(5mL)溶液中加入HOAT(5mg，0.32mmol)、EDCI(62mg，0.32mmol)和DIEA(55mg，0.43mmol)，混合物升温至40℃，搅拌16h。混合物用DCM(20mL)稀释，并用盐水(20mL)洗。分液，有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经制备型HPLC(ACN--H2O(0.1％FA)梯度：40％-70％)纯化，得到(S)-2-氨基-6-氟-N-(1-(8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(16mg，14.11％收率)为黄色固体。MS(ESI):547.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.41(dd,J＝4.8,2.6Hz,1H),8.78(d,J＝2.4Hz,1H),8.00(s,1H),7.84(d,J＝6.8Hz,1H),7.68-7.55(m,5H),7.53-7.44(m,3H),7.39-7.35(m,1H),6.75(s,1H),6.50(s,2H),4.59-4.52(m,1H),3.82(s,3H),1.35(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例18(S)-N-(1-(8-((1-乙酰氮杂环丁烷-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)-2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000432
步骤1)3-乙炔基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
向3-甲酰氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(200mg，1.07mmol)的MeOH(10mL)溶液中加入K2CO3(370mg，2.69mmol)和(1-重氮-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(309mg，1.61mmol)，混合物转移至室温，搅拌16h。将混合物真空浓缩，用EtOAc(100mL)稀释，用盐水(40ml×2)洗。分液，有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MEOH＝20/1)分离纯化，得到3-乙炔基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(180mg，83％收率)为棕色油状物。MS(ESI):126.0[M-55]+。
步骤2)3-乙炔基氮杂环丁烷
向3-乙炔基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(180mg，0.99mmol)的DCM(10mL)溶液中加入TFA(5mL)，混合物于室温搅拌2h。将混合物真空浓缩，得到3-乙炔基氮杂环丁烷(100mg，99.8％收率)为棕色油状物。MS(ESI):82.1[M+H]+。
步骤3)1-(3-乙炔基氮杂环丁烷-1-基)乙烷-1-酮
在0℃下，向3-乙炔基氮杂环丁烷(118mg，1.45mmol)和DIEA(1.8g，14.5mmol)的DCM(20mL)溶液中加入乙酰氯(228mg，2.91mmol)，混合物于室温下搅拌3小时。混合物用DCM(50mL)稀释，并用盐水(20mL x 2)洗。分液，有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝20/1)分离纯化，得到1-(3-乙炔基氮杂环丁烷-1-基)乙烷-1-酮(150mg，75.36％收率)为黄色油状物。MS(ESI):124.1[M+H]+。
步骤4)(S)-8-((1-乙酰氮杂环丁烷-3-基)乙炔基)-3-(1-氨基乙基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮
向(S)-3-(1-氨基乙基)-8-氯-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(60mg，0.20mmol)和1-(3-乙炔基氮杂环丁烷-1-基)乙烷-1-酮(37mg，0.30mmol)的MeCN(30mL)溶液中加入X-Phos(38mg，0.08mmol)、Pd2(dba)3(37mg，0.04mmol)和K3PO4(128mg，0.60mmol))，混合物升温至80℃，搅拌5h。冷却至室温后，混合物真空浓缩。将残余物用EtOAc(100mL)稀释，用盐水(50mL×2)洗。分液，有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱分离(DCM/MeOH＝91/9)纯化，得到(S)-8-((1-乙酰氮杂环丁烷-3-基)乙炔基)-3-(1-氨基乙基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(47mg，54.6％收率)为黄色油状物。MS(ESI):386.0[M+H]+。
步骤5)(S)-N-(1-(8-((1-乙酰氮杂环丁烷-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)-2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向(S)-8-((1-乙酰氮杂环丁烷-3-基)乙炔基)-3-(1-氨基乙基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮和2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸(22mg，0.12mmol)的DCM(20mL)溶液中加入DIEA(47mg，0.37mmol)、EDCI(35mg，0.18mmol)和HOAT(25mg，0.18mmol)，混合物升温至40℃，搅拌16h。冷却至室温后，将混合物用DCM(30mL)稀释，用盐水(20mL x 2)洗。分液，有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经制备型HPLC纯化(Gemini-C18 150x21.2mm,5um ACN--H2O(0.1％FA)35％-50％)，得到(S)-N-(1-(8-((1-乙酰氮杂环丁烷-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)-2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(13.1mg，19.7％收率)为白色固体。MS(ESI):546.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.93(dd,J＝6.7,1.6Hz,1H),8.55(dd,J＝4.5,1.6Hz,1H),8.00(d,J＝6.6Hz,1H),7.64(dd,J＝7.0,4.3Hz,2H),7.60-7.53(m,2H),7.53-7.48(m,2H),7.45(d,J＝7.8Hz,1H),7.37(dd,J＝5.7,3.5Hz,1H),7.02(dd,J＝6.7,4.5Hz,1H),6.74(s,1H),6.43(s,2H),4.54(q,J＝6.6Hz,1H),4.38(t,J＝8.4Hz,1H),4.15-4.08(m,2H),3.79(dd,J＝8.8,6.3Hz,1H),3.68(dd,J＝8.9,6.2Hz,1H),1.73(s,3H),1.34(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例19 2-氨基-N-((1S)-1-(2-(2-甲基-5-氧代氧杂环戊烷-2-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000441
步骤1)4-氧代-6-(三甲基甲硅烷基)己-5-炔酸甲酯
在0℃下，向4-氯-4-氧代丁酸甲酯(100mg，0.66mmol)和三甲基(2-(三甲基甲硅烷基)乙炔基)硅烷(113mg，0.66mmol)的DCM(10mL)溶液中加入AlCl3(133mg，0.99mmol)，混合物搅拌1小时。混合物用1NHCl(4mL)淬灭，并用DCM(50mL)稀释。混合物用盐水(30mL x 2)洗，经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法纯化(EA/PE＝1/3)，得到4-氧代-6-(三甲基甲硅烷基)己-5-炔酸甲酯(96.0mg，68.1％收率)为无色油状物。MS(ESI):213.1[M+H]+。
步骤2)5-甲基-5-(2-(三甲基甲硅烷基)乙炔基)氧杂环戊烷-2-酮
在-20℃下，向4-氧代-6-(三甲基甲硅烷基)己-5-炔酸甲酯(120mg，0.56mmol)的THF(10mL)溶液中加入MeMgCl(0.18mL，0.56mmol，3mol/L)，混合物于室温搅拌16h。混合物用NH4Cl溶液(5mL)淬灭，用EtOAc(50mL)萃取。分液，有机相用盐水(30mL)洗，经Na2SO4干燥，真空浓缩，得到粗品5-甲基-5-[2-(三甲基甲硅烷基)乙炔基]氧杂环戊烷-2-酮(105mg，94.62％收率)为无色油状物。MS(ESI):143.1[M+H]+。
步骤3)5-乙炔基-5-甲基氧杂环戊烷-2-酮
在-10℃下，向5-甲基-5-(2-(三甲基甲硅烷基)乙炔基)氧杂环戊烷-2-酮(92mg，0.47mmol)的THF(10mL)溶液中加入TBAF(0.25mL，1M)，混合物于室温搅拌1小时。混合物用EtOAc(50mL)稀释，并用盐水(30mL)洗。分液，有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(EA/PE＝1/1)纯化，得到5-乙炔基-5-甲基氧杂环戊烷-2-酮(25mg，41.25％收率)为棕色油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ2.85-2.75(m,1H),2.63-2.49(m,2H),2.59(s,1H),2.23-2.15(m,1H),1.72(s,3H)。
步骤4)3-((1S)-1-氨基乙基)-8-(2-(2-甲基-5-氧代氧杂环戊烷-2-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1-酮
在氮气气氛下，向3-((1S)-1-氨基乙基)-8-氯-2-苯基异喹啉-1-酮(60mg，0.2mmol)和5-乙炔基-5-甲基氧杂环戊烷-2-酮(30mg，0.24mmol)的CH3CN溶液中加入K3PO4(128mg，0.6mmol)、X-phos(38mg，0.08mmol)和Pd2(dba)3(37mg，0.04mmol)，混合物升温至80℃，搅拌16h。冷却至室温后，将混合物真空浓缩。残余物用EtOAc(100mL)稀释，用盐水(30mLx 2)洗。分液，有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱(MeOH/DCM＝1/20)纯化，得到3-((1S)-1-氨基乙基)-8-(2-(2-甲基-5-氧代氧杂环戊烷-2-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1-酮(37mg，74％收率)为黄色固体。MS(ESI):387.1[M+H]+。
步骤5)2-氨基-N-((1S)-1-(2-(2-甲基-5-氧代氧杂环戊烷-2-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(25mg，0.14mmol)、HOAt(26mg，0.19mmol)、EDCI(37mg，0.19mmol)和DIEA(50mg，0.39mmol)的DCM(10mL)溶液中加入3-((1S)-1-氨基乙基)-8-(2-(1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1-酮(50mg，0.13mmol)，混合物升温至40℃，搅拌16h。冷却至室温后，将混合物用DCM(50mL)稀释，并用盐水(30mL x2)洗。分液，有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经制备型HPLC(ACN–H2O 0.1％FA，梯度30％至60％)纯化，得到2-氨基-N-((1S)-1-(2-(2-甲基-5-氧代氧杂环戊烷-2-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(3.1mg，4.25％收率)为白色固体。MS(ESI):547.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.72(d,J＝6.8Hz,1H),8.53(d,J＝4.1Hz,1H),8.25(s,1H),7.66(d,J＝4.4Hz,2H),7.64(d,J＝1.7Hz,1H),7.61(d,J＝8.6Hz,1H),7.51(d,J＝7.1Hz,1H),7.48(s,1H),7.43(d,J＝8.0Hz,1H),6.99(dd,J＝6.7,4.9Hz,1H),6.90(s,1H),4.79-4.74(m,1H),2.86(d,J＝5.1Hz,1H),2.66-2.56(m,2H),2.28(dd,J＝8.8,2.8Hz,1H),1.77(s,3H),1.48(dd,J＝6.8,1.5Hz,3H)。
实施例20(S)-2-氨基-N-(1-(8-((6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000461
步骤1)6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-3-甲醛
在-78℃下，向6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑(200mg，1.85mmol)的THF(10mL)溶液中加入n-BuLi(0.88mL，2.22mmol)，混合物升温至-5℃，搅拌1小时。将混合物冷却至-75℃，加入N,N-二甲基甲酰胺(202mg，2.77mmol)，升温至20℃，搅拌2小时。冷却至0-5℃，反应用饱和NH4Cl水溶液(40mL)淬灭，用EtOAc(60mL×2)萃取。合并的有机层用盐水(50mL x2)洗，经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经柱色谱(DCM/MeOH＝20/1)纯化，得到6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-3-甲醛(200mg，收率79％)为黄色油状物。LCMS:MS(ESI)m/z 137.0[M+H]+。
步骤2)3-乙炔基-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑
向6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-3-甲醛(200mg，1.47mmol)的MeOH(10mL)溶液中加入(1-重氮-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(423mg，2.2mmol)和碳酸钾(412mg，2.94mmol)，混合物于室温搅拌16h。将混合物真空浓缩，残余物用EtOAc(100mL)稀释，并用盐水(50mL)洗。分液，有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到3-乙炔基-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑(130mg，67％收率)为黄色固体。LCMS:MS(ESI)m/z 133.1[M+H]+。
步骤3)(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮向(S)-3-(1-氨基乙基)-8-氯-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(30mg，0.1mmol)和3-乙炔基-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑(20mg，0.15mmol)的CH3CN(10mL)溶液中加入Pd2(dba)3(9mg，0.01mmol)、X-phos(5mg，0.01mmol)和K3PO4(32mg，0.15mmol)，混合物升温至80℃，搅拌4h。冷却至室温后，真空浓缩。将残余物溶于DCM(50mL)，用盐水(30mL)洗。分液，有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经柱色谱法纯化(DCM/MeOH＝10/1)，得到(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(40mg，99％收率)为黄色固体。LCMS:MS(ESI)m/z 395.2[M+H]+。
步骤4)(S)-2-氨基-N-(1-(8-((6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(40mg，0.1mmol)和2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(18mg，0.1mmol)的DCM(20mL)溶液中加入HOAt(21mg，0.15mmol)、EDCI(24mg，0.15mmol)和DIEA(39mg，0.3mmol)，混合物升温至40℃，搅拌16h。冷却至室温后，将混合物用DCM(50mL)稀释，并用盐水(30mL x 2)洗。分液，有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝10/1)纯化，得到(S)-2-氨基-N-(1-(8-((6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(10.1mg，18％收率)为白色固体。LCMS:MS(ESI)m/z 555.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.93(dd,J＝6.7,1.6Hz,1H),8.55(dd,J＝4.5,1.6Hz,1H),8.01(d,J＝6.7Hz,1H),7.70-7.64(m,2H),7.64-7.55(m,2H),7.54-7.46(m,3H),7.43-7.37(m,1H),7.21(s,1H),7.02(dd,J＝6.7,4.5Hz,1H),6.76(s,1H),6.43(s,2H),4.56(t,J＝6.7Hz,1H),3.97(t,J＝7.0Hz,2H),2.79(t,J＝7.4Hz,2H),2.55(d,J＝7.5Hz,2H),1.35(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例21(S)-2-氨基-5-(甲氧基-d3)-N-(1-(8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000471
向(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(30mg，0.08mmol)和2-氨基-5-(甲氧基-d3)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(17mg，0.08mmol)的DCM(20mL)溶液中加入DIEA(31mg，0.24mmol)、EDCI(23mg，0.12mmol)和HOAT(17mg，0.12mmol)，混合物在40℃搅拌24小时。冷却至室温后，混合物用DCM(100mL)稀释，用盐水(40mL x 2)洗。分液，有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经制备型HPLC(-Xbridge-C18 150x 19mm,5um,ACN-H2O(0.1％TFA)40％-60％)纯化，得到(S)-2-氨基-5-(甲氧基-d3)-N-(1-(8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(19.1mg，41.3％收率)为白色固体。MS(ESI):561.8[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.74-8.64(m,1H),8.01(s,1H),7.88(d,J＝6.4Hz,1H),7.68-7.44(m,8H),7.39(d,J＝6.9Hz,1H),6.79(s,1H),6.47(d,J＝7.3Hz,1H),6.14(s,2H),4.52-4.41(m,1H),3.82(s,3H),1.36(d,J＝6.6Hz,3H)。
实施例22(S)-2-氨基-N-(1-(8-((6,7-二氢-5H-吡唑并[5,1-b][1,3]噁嗪-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000472
步骤1)6,7-二氢-5H-吡唑并[5,1-b][1,3]噁嗪
向2,4-二氢-3H-吡唑-3-酮(2.5g，30mmol)的DMF(50mL)溶液中加入1,3-二溴丙烷(9.1g，45mmol)和K2CO3(6.2g，45mmol)，混合物升温至130℃，搅拌16h。冷却至室温后，混合物用H2O(30mL)稀释，并用EtOAc(50mL x 3)萃取。合并有机相，用盐水(30mL x 2)洗，经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到6,7-二氢-5H-吡唑并[5,1-b][1,3]噁嗪(1.9g，粗品)为白色固体。MS(ESI):125.1[M+H]+。
步骤2)3-溴-6,7-二氢-5H-吡唑并[5,1-b][1,3]噁嗪
在20℃下，向6,7-二氢-5H-吡唑并[5,1-b][1,3]噁嗪(1.9g，15.3mmol)的DCM(40mL)溶液中加入NBS(2.7g，15.3mmol)，混合物搅拌16小时。混合物用DCM(50mL)稀释，并用盐水(20mL x 2)洗。分液，有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经柱色谱法(PE/EA＝1/1)纯化，得到3-溴-6,7-二氢-5H-吡唑并[5,1-b][1,3]噁嗪(1.7g，53％收率)为白色固体。MS(ESI):202.9[M+H]+。
步骤3)3-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[5,1-b][1,3]噁嗪
在氮气气氛下，向3-溴-6,7-二氢-5H-吡唑并[5,1-b][1,3]噁嗪(780mg，3.84mmol)的CH3CN(20mL)溶液中加入乙炔基三异丙基硅烷(1.05g，5.76mmol)、K3PO4(1.6g，7.68mmol)、Pd2(dba)3(880mg，0.96mmol)和X-Phos(916mg，1.92mmol)，混合物升温至80℃，搅拌16h。冷却至室温，真空浓缩。残余物用EtOAc(50mL)稀释，并用盐水(30mL x 3)洗。分液，有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝20/1)纯化，得到3-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[5,1-b][1,3]噁嗪(450mg，38％收率)为白色固体。MS(ESI):305.0[M+H]+。
步骤4)3-乙炔基-6,7-二氢-5H-吡唑并[5,1-b][1,3]噁嗪
向3-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[5,1-b][1,3]噁嗪(450mg，1.48mmol)的THF(10mL)溶液中加入TBAF(3.0mL，1M的THF溶液)，然后将混合物在室温下搅拌1小时。混合物用EtOAc(60mL)萃取，并用盐水(40mL×2)洗。分液，有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经柱色谱法(PE/EA＝1/1)纯化，得到3-乙炔基-6,7-二氢-5H-吡唑并[5,1-b][1,3]噁嗪(200mg，88％收率)为棕色固体。MS(ESI):149.0[M+H]+。
步骤5)(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((6,7-二氢-5H-吡唑并[5,1-b][1,3]噁嗪-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮
在氮气气氛下，向3-乙炔基-6,7-二氢-5H-吡唑并[5,1-b][1,3]噁嗪(37.2mg，0.25mmol)和(S)-3-(1-氨基乙基)-8-氯-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(50mg，0.16mmol)的CH3CN(20mL)溶液中加入K3PO4(72mg，0.34mmol)、Pd2(dba)3(16mg，0.01mmol)和X-Phos(16mg，0.03mmol)，混合物升温至80℃，搅拌16h。冷却至室温后，将混合物真空浓缩。残余物用EtOAc(50mL)稀释，并用盐水(30mL x 3)洗。分液，有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝20/1)纯化，得到(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((6,7-二氢-5H-吡唑并[5,1-b][1,3]噁嗪-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(30mg，43％收率)为白色固体。MS(ESI):410.9[M+H]+。
步骤6)(S)-2-氨基-N-(1-(8-((6,7-二氢-5H-吡唑并[5,1-b][1,3]噁嗪-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((6,7-二氢-5H-吡唑并[5,1-b][1,3]噁嗪-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(30mg，0.07mmol)和2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(14mg，0.07mmol)的DCM(20mL)溶液中加入EDCI(22mg，0.10mmol)、HOAT(15mg，0.10mmol)和DIEA(29mg，0.21mmol)，混合物升温至40℃，搅拌16h。混合物用DCM(50mL)稀释，并用盐水(30mL x 2)洗。分液，有机相用盐水(50mL)洗，经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝20/1)纯化，得到(S)-2-氨基-N-(1-(8-((6,7-二氢-5H-吡唑并[5,1-b][1,3]噁嗪-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(27.8mg，66％收率)为白色固体。MS(ESI):570.8[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.93(dd,J＝6.7,1.6Hz,1H),8.55(dd,J＝4.5,1.6Hz,1H),8.00(d,J＝6.8Hz,1H),7.63-7.55(m,3H),7.52-7.45(m,4H),7.41(s,1H),7.39-7.35(m,1H),7.02(dd,J＝6.7,4.5Hz,1H),6.72(s,1H),6.44(s,2H),4.57-4.52(m,1H),4.38-4.34(m,2H),4.07(t,J＝6.1Hz,2H),2.21-2.13(m,2H),1.35(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例23(S)-2-氨基-5-(甲氧基-d3)-N-(1-(5-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000481
步骤1)(S)-2-(1-氨基乙基)-5-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-3-苯基喹唑啉-4(3H)-酮
在2-((1S)-1-氨基乙基)-5-溴-3-苯基喹唑啉-4-酮(200mg，0.58mmol)和4-乙炔基-1-甲基吡唑(93mg，0.87mmol)的CH3CN(30mL)溶液中加入K3PO4(247mg，1.2mmol)、Pd2(dba)3(53mg，0.058mmol)和X-phos(55mg，0.12mmol)，混合物升温至80℃，加热5h。混合物冷却至室温，真空浓缩。将残余物用EtOAc(60mL)稀释，并用盐水(40mL x 2)洗。分液，有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法纯化(DCM/MeOH＝20/1)，得到(S)-2-(1-氨基乙基)-5-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-3-苯基喹唑啉-4(3H)-酮(130mg，54.5％收率)为黄色固体。MS(ESI):370.1[M+H]+。
步骤2)2-氨基-5-(甲氧基-d3)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸
将Na(29mg，1.24mmol)加至CD3OD(3mL)中，并将混合物在20℃搅拌1小时。然后加入2-氨基-5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(100mg，0.41mmol)。混合物继续搅拌2h。混合物用H2O(1mL)淬灭，升温至40℃，加热16h。将混合物真空浓缩，残余物用水(5mL)稀释，然后用1N HCl酸化至pH＝4-5。过滤，滤饼用水(2mL)洗，滤液减压浓缩，得到2-氨基-5-(甲氧基-d3)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(90mg，92.3％收率)为浅色固体。MS(ESI):237.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.66-8.56(m,1H),6.49-6.37(m,1H),6.15(s,2H)。
步骤3)(S)-2-氨基-5-(甲氧基-d3)-N-(1-(5-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向2-((1S)-1-氨基乙基)-5-(2-(1-甲基吡唑-4-基)乙炔基)-3-苯基喹唑啉-4-酮(30mg，0.08mmol)和2-氨基-5-甲氧基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(17mg，0.08mmol)的DCM(20mL)溶液中加入HOAt(13mg，0.097mmol)、DIEA(32mg，0.24mmol)和EDCI(23mg，0.12mmol)，混合物升温至40℃，加热16h。冷却至室温后，混合物用DCM(30mL)稀释，并用盐水(30mL)洗。分液，有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝15/1)纯化，得到(S)-2-氨基-5-(甲氧基-d3)-N-(1-(5-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(14.1mg，28.7％收率)为白色固体。MS(ESI):563.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.44-8.41(m,1H),7.88(s,1H),7.79(t,J＝8.0Hz,1H),7.69-7.61(m,5H),7.59-7.56(m,1H),7.53-7.50(m,1H),6.45(d,J＝7.2Hz,1H),4.93-4.91(m,1H),3.89(s,3H),1.51(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例24(S)-2-氨基-N-(1-(6-氟-5-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉)-2-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000491
步骤1)2-溴-3-氟-6-硝基苯甲酸
在0℃下，向2-溴-3-氟苯甲酸(3.0g，13.7mmol)的H2SO4(15mL)的溶液中滴加HNO3(3.54g，20.55mmol)，混合物于室温下搅拌3小时。将混合物用冰水(100mL)稀释，并用DCM(100mL x 3)萃取。合并的有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩，得到2-溴-3-氟-6-硝基苯甲酸(3.35g，收率83.21％)为黄色固体。MS(ESI):263.9[M+H]+。
步骤2)2-溴-3-氟-6-硝基-N-苯基苯甲酰胺
将2-溴-3-氟-6-硝基苯甲酸(3.35g，12.7mmol)加至SOCl2(30mL)，混合物升温至80℃，搅拌16小时。然后将混合物减压浓缩，得到酰氯。在0℃下，向苯胺(1.16g，12.5mmol)和TEA(8.1g，62.5mol)的DCM(50mL)溶液中加入上述酰氯。将混合物在室温下搅拌5小时，然后用H2O(100mL)稀释，并用DCM(150mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(70mL x 2)洗，经Na2SO4干燥，减压浓缩。残余物经柱色谱法(PE/EA＝3/1)纯化，得到2-溴-3-氟-6-硝基-N-苯基苯甲酰胺(2.0g，43.2％收率)为黄色固体。MS(ESI):338.8[M+H]+。
步骤3)6-氨基-2-溴-3-氟-N-苯基苯甲酰胺
向2-溴-3-氟-6-硝基-N-苯基苯甲酰胺(400mg，1.2mmol)和饱和氯化铵水溶液(10mL)中加入Fe(660.0mg，12.0mmol)，混合物于室温下搅拌16h。过滤，滤液用H2O(100mL)稀释，并用EtOAc(50mL×3)萃取。合并的有机层用盐水(40mL x 2)洗，经Na2SO4干燥，减压浓缩，得到6-氨基-2-溴-3-氟-N-苯基苯甲酰胺(366mg，90.34％收率)为黄色固体。MS(ESI):310.9[M+H]+。
步骤4)(S)-(1-((3-溴-4-氟-2-(苯基氨基甲酰基)苯基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
向6-氨基-2-溴-3-氟-N-苯基苯甲酰胺(366mg，1.18mmol)的DCM(50mL)溶液中加入(叔丁氧羰基)-L-丙氨酸(224mg，1.18mmol)、DIEA(611mg，4.74mmol)和HATU(675mg，1.78mmol)，混合物于室温下搅拌16h。将混合物用H2O(30mL)稀释，并用DCM(50mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(30mL x 2)洗，经Na2SO4干燥，减压浓缩。残余物经柱色谱法(PE/EA＝3/1)纯化，得到(S)-(1-((3-溴-4-氟-2-(苯基氨基甲酰基)苯基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(448mg，收率70.75％)为黄色固体。MS(ESI):501.8[M+Na]+。
步骤5)(S)-2-(1-氨基乙基)-5-溴-6-氟-3-苯基喹唑啉-4(3H)-酮
向(S)-(1-((3-溴-4-氟-2-(苯基氨基甲酰基)苯基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(448mg，0.93mmol)的DCM(30mL)溶液中加入HMDS(451mg，2.79mmol)和I2(472mg，1.86mmol)，混合物升温至45℃，搅拌16h。冷却至室温后，混合物用Na2SO3(20mL)水溶液稀释，然后用DCM(30mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(50mL x 2)洗，经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝95/5)纯化，得到(S)-2-(1-氨基乙基)-5-溴-6-氟-3-苯基喹唑啉-4(3H)-酮(267mg，71.3％收率)为黄色固体。MS(ESI):361.8[M+H]+。
步骤6)(S)-2-(1-氨基乙基)-6-氟-5-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-3-苯基喹唑啉-4(3H)-酮
向(S)-2-(1-氨乙基)-5-溴-6-氟-3-苯基喹唑啉-4(3H)-酮(60mg，0.17mmol)和4-乙炔基-1-甲基-1H-吡唑(23mg，0.22mmol)的CH3CN(20mL)溶液中的加入X-Phos(39mg，0.083mmol)、Pd2(dba)3(38mg，0.041mmol)和K3PO4(105mg，0.50mmol)，混合物升温至80℃，搅拌5h。冷却至室温后，将混合物真空浓缩。残余物用EtOAc(60mL)稀释，并用盐水(30mL x2)洗，经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法纯化(DCM/MeOH＝91/9)，得到(S)-2-(1-氨基乙基)-6-氟-5-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-3-苯基喹唑啉-4(3H)-酮(49mg，69％收率)为黄色油状物。MS(ESI):388.0[M+H]+。
步骤7)(S)-2-氨基-N-(1-(6-氟-5-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉)-2-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向(S)-2-(1-氨基乙基)-6-氟-5-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-3-苯基喹唑啉-4(3H)-酮(49mg，0.13mmol)和2-氨基-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(25mg，0.14mmol)的DCM(20mL)溶液中加入DIEA(65mg，0.51mmol)、EDCI(36mg，0.19mmol)和HOAT(26mg，0.19mmol)，混合物升温至40℃，搅拌16h。冷却至室温后，将混合物用DCM(70mL)稀释，并用盐水(40mL x 2)洗。分液，有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经制备型HPLC(-Gemini-C18 150x 21.2mm,5um:ACN--H2O(0.1％FA),30％-60％)纯化，得到(S)-2-氨基-N-(1-(6-氟-5-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉)-2-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(2.95mg，4.27％收率)为白色固体。MS(ESI):547.8[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.92(dd,J＝6.7,1.6Hz,1H),8.70(d,J＝7.4Hz,1H),8.64(dd,J＝4.5,1.6Hz,1H),8.09(s,1H),7.85-7.74(m,2H),7.67-7.57(m,5H),7.54(d,J＝7.9Hz,1H),7.03(dd,J＝6.7,4.5Hz,1H),6.45(s,2H),4.79-4.69(m,1H),3.83(s,3H),1.32(d,J＝6.7Hz,3H)。
实施例25(S)-2-氨基-N-(1-(5-((6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-3-基)乙炔基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000501
步骤1)6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-3-甲醛
在-78℃下，向6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑(200mg，1.85mmol)的THF(10mL)溶液中加入n-BuLi(0.9mL，2.22mmol，2.4M的THF溶液)，混合物升温至-10℃，搅拌1小时。然后将混合物冷却至-75℃，加入N,N-二甲基甲酰胺(203mg，2.8mmol)，转移至室温，搅拌2小时。在0-5℃下，加入饱和NH4Cl水溶液(20mL)淬灭反应。混合物用EtOAc(50mL x 2)萃取，合并的有机层用盐水(50mL x 2)洗，经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经柱色谱(DCM/MeOH＝10/1)纯化，得到6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-3-甲醛(200mg，收率79％)为黄色油状物。LCMS:MS(ESI)m/z 137.0[M+H]+。
步骤2)3-乙炔基-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑
向6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-3-甲醛(200mg，1.47mmol)的MeOH(10mL)溶液中加入(1-重氮-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(423mg，2.2mmol)和K2CO3(412mg，2.94mmol)，混合物于室温下搅拌16小时。将混合物真空浓缩，用EtOAc(100mL)溶解，并用盐水(50mL x 2)洗。分离的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到3-乙炔基-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑(130mg，67％收率)为黄色固体。LCMS:MS(ESI)m/z 133.1[M+H]+。
步骤3)(S)-2-(1-氨基乙基)-5-((6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-3-基)乙炔基)-3-苯基喹唑啉-4(3H)-酮向(S)-2-(1-氨基乙基)-5-溴-3-苯基喹唑啉-4(3H)-酮(50mg，0.15mmol)的CH3CN(10mL)溶液中加入3-乙炔基-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑(38mg，0.29mmol)、Pd2(dba)3(13mg，0.015mmol)、X-phos(7mg，0.015mmol)和K3PO4(46mg，0.22mmol)，混合物升温至70℃，搅拌3h。冷却至室温后，混合物真空浓缩。将残余物溶于DCM(50mL)，并用盐水(30mL x 2)洗。分离的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经柱色谱法纯化(DCM/MeOH＝10/1)，得到(S)-2-(1-氨基乙基)-5-((6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-3-基)乙炔基)-3-苯基喹唑啉-4(3H)-酮(30mg，52％收率)为黄色固体。LCMS:MS(ESI)m/z 396.2[M+H]+。
步骤4)(S)-2-氨基-N-(1-(5-((6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-3-基)乙炔基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向(S)-2-(1-氨基乙基)-5-((6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-3-基)乙炔基)-3-苯基喹唑啉-4(3H)-酮(30mg，0.08mmol)的DCM(15mL)溶液中加入2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(14mg，0.08mmol)、[1,2,3]***并[4,5-b]吡啶-3-醇(16mg，0.11mmol)、EDCI(18mg，0.11mmol)和DIEA(30mg，0.23mmol)，混合物升温至40℃，搅拌16h。冷却至室温后，将混合物用DCM(50mL)稀释，并用盐水(30mL x 2)洗。分离的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝10/1)纯化，得到(S)-2-氨基-N-(1-(5-((6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-a]咪唑-3-基)乙炔基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(6.5mg，15％收率)为白色固体。LCMS:MS(ESI)m/z 556.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.92(dd,J＝6.7,1.6Hz,1H),8.72(d,J＝7.4Hz,1H),8.65(dd,J＝4.5,1.6Hz,1H),7.82(d,J＝7.7Hz,1H),7.74(d,J＝1.2Hz,1H),7.67(dd,J＝7.5,1.2Hz,1H),7.63(s,2H),7.61(s,3H),7.25(s,1H),7.03(dd,J＝6.7,4.5Hz,1H),6.45(s,2H),4.78-4.71(m,1H),3.96(s,2H),2.76(d,J＝7.6Hz,2H),2.54(s,2H),1.32(d,J＝6.7Hz,3H)。
实施例26(S)-2-氨基-N-(1-(7-氟-8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉)-3-基)乙基)-5-(甲氧基-d3)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000511
向(S)-3-(1-氨基乙基)-7-氟-8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(49mg，0.38mmol)和2-氨基-5-(甲氧基-d3)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(20mg，0.10mmol)的DCM(20mL)溶液中加入DIEA(49mg，0.38mmol)、EDCI(27mg，0.14mmol)和HOAT(20mg，0.14mmol)，混合物在40℃搅拌16h。冷却至室温后，将混合物用DCM(50mL)稀释，并用盐水(30mL x 2)洗。分离的有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经制备型HPLC(-Xbridge-C18 150x 19mm,5um,ACN-H2O(0.1％TFA))纯化，得到(S)-2-氨基-N-(1-(7-氟-8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉)-3-基)乙基)-5-(甲氧基-d3)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(27.3mg，50.0％收率)为白色固体。MS(ESI):579.8[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.74-8.67(m,1H),8.05(s,1H),7.88(d,J＝6.5Hz,1H),7.75-7.65(m,2H),7.61-7.46(m,5H),7.39(d,J＝7.5Hz,1H),6.83(s,1H),6.51-6.45(m,1H),6.13(s,2H),4.52-4.41(m,1H),3.83(s,3H),1.35(d,J＝6.7Hz,3H)。
实施例27(S)-2-氨基-N-(1-(7-氟-8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉)-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5,7-d2-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000521
步骤1)N1,N3-二甲氧基-N1,N3-二甲基丙二酰胺
在0℃下，向甲氧基(甲基)胺(1.08g，17.7mmol)和DIEA(4.59g，35.5mmol)的DCM(20mL)溶液中加入丙二酰氯(1g，7.1mmol)，混合物于室温搅拌16h。混合物用DCM(50mL)稀释，并用盐水(30mL x 3)洗。分离的有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(EA/PE＝1/8)纯化，得到N1,N3-二甲氧基-N1,N3-二甲基丙二酰胺(700mg，收率31％)为无色油状物。MS(ESI):191.1[M+H]+。
步骤2)丙二醛-1,3-d2
在0℃下，向N1,N3-二甲氧基-N1,N3-二甲基丙二酰胺(500mg，2.63mmol)的THF(15mL)溶液中分批加入LiAlD4(220mg，5.24mmol)，混合物搅拌2h。然后混合物用1N氘代盐酸(5mmol，溶于D2O(5mL))淬灭，用EtOAc(10mL)萃取，水相不经进一步纯化即可用于下一步骤。MS(ESI):75.2[M+H]+。
步骤3)2-氨基-5,7-d2-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯
向3,5-二氨基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(250mg，0.29mmol)的HOAc(20mL)溶液中加入上一步的丙二醛-1,3-d2水溶液，混合物升温至90℃，搅拌2h。冷却至室温后，将混合物真空浓缩。残余物用EtOAc(60mL)稀释，并分别用NaHCO3水溶液(40mL)和盐水(40mL)洗。分离的有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(EA/PE＝1/1)纯化，得到2-氨基-5,7-d2-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(110mg，34％收率)为黄色固体。MS(ESI):210.2[M+H]+。
步骤4)2-氨基-5,7-d2-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸
向2-氨基-5,7-d2-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(120mg，0.58mmol)的MeOH(20mL)加入NaOH(115mg，2.9mmol)和H2O(5mL)，混合物升温至40℃，搅拌16h。冷却至室温后，将混合物真空浓缩。残余物用水(10mL)稀释，并用1N FA调至pH 5-6。过滤，滤饼用水洗，真空干燥，得到2-氨基-5,7-d2-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(60mg，54.9％收率)为黄色的固体。MS(ESI):180.9[M+H]+。
步骤5)(S)-2-氨基-N-(1-(7-氟-8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉)-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5,7-d2-3-甲酰胺
向3-((1s)-1-氨基乙基)-7-氟-8-(2-(1-甲基吡唑-4-基)乙基乙基)-2-苯基甲喹啉-1-酮(43mg，0.11mmol)和2-氨基-5,7-d2-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(20mg，0.11mmol)的DCM(30mL)溶液中加入HOAt(18mg，0.13mmol)、EDCI(32mg，0.17mmol)和DIEA(43mg，0.33mmol)，混合物升温至40℃，搅拌15h。冷却至室温后，将混合物用DCM(40mL)稀释，并用盐水(30mL x 2)洗。分离的有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝15/1)纯化，得到(S)-2-氨基-N-(1-(7-氟-8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉)-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5,7-d2-3-甲酰胺(26.9mg，44％收率)为淡黄色固体。MS(ESI):549.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.95-8.91(m,1H),8.04(s,1H),7.99(d,J＝6.4Hz,1H),7.74-7.64(m,2H),7.61(s,1H),7.59-7.55(m,1H),7.53-7.45(m,3H),7.40-7.36(m,1H),6.79(s,1H),6.42(s,2H),4.59-4.50(m,1H),3.82(s,1H),1.35(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例28(S)-2-氨基-N-(1-(7-氟-8-((1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000531
步骤1)4-碘-1-(甲基-d3)-1H-吡唑
在0℃下，向4-碘-1H-吡唑(2g，10mmol)的DMF(10mL)溶液中加入氢化钠(297mg，12.3mmol)，混合物搅拌0.5h。然后加入碘甲烷-d3(1.8g，12.3mmol)，转移至室温，搅拌16小时。混合物用冰水(20mL)淬灭，并用EtOAc(50mL×3)萃取。合并的有机层用盐水(50mL x 3)洗，经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经柱色谱法(PE/EA＝2/1)纯化，得到4-碘-1-(甲基-d3)-1H-吡唑(2g，91％收率)为黄色油状物。LCMS:MS(ESI)m/z 212.0[M+H]+。
步骤2)1-(甲基-d3)-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑
向4-碘-1-(甲基-d3)-1H-吡唑(2g，9.6mmol)的TEA(30mL)溶液中加入乙炔基三甲基硅烷(1.4g，14.4mmol)、CuI(183mg，0.96mmol)、双(三苯基膦)氯化钯(II)(675mg，0.96mmol)和三乙胺(9.7g，96mmol)，混合物升温至90℃，搅拌4h。冷却至室温后，真空浓缩。将残余物溶于DCM(50mL)，用水(30mL)和盐水(30mL)洗。分离的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经柱色谱法纯化(PE/EA＝3/1)，得到1-(甲基-d3)-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑(1.2g，收率70％)为棕色油状物。LCMS:MS(ESI)m/z182.1[M+H]+。
步骤3)4-乙炔基-1-(甲基-d3)-1H-吡唑
向1-(甲基-d3)-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑(2.3g，12.7mmol)的THF(20mL)溶液中加入TBAF(13mL，12.7mmol，1N的THF溶液)，混合物于室温搅拌0.5h。将反应混合物用EtOAc(100mL)稀释，并用盐水(30mL x 2)洗。分离的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经柱色谱法(PE/EA＝10/1)纯化，得到4-乙炔基-1-(甲基-d3)-1H-吡唑(800mg，收率87％)为黄色固体。LCMS:MS(ESI)m/z110.1[M+H]+。
步骤4)(S)-3-(1-氨基乙基)-7-氟-8-((1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮
向(S)-3-(1-氨基乙基)-7-氟-8-((1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(150mg，0.47mmol)和4-乙炔基-1-(甲基-d3)-1H-吡唑(77mg，0.71mmol)的CH3CN(20mL)溶液中加入Pd2(dba)3(87mg，0.095mmol)、X-phos(90mg，0.19mmol)和K3PO4(150mg，0.71mmol)，混合物升温至80℃，搅拌4h。冷却至室温后，真空浓缩。将残余物溶于DCM(50mL)，并用盐水(30mL x 2)洗。分离的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经柱色谱法纯化(DCM/MeOH＝10/1)，得到(S)-3-(1-氨基乙基)-7-氟-8-((1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(120mg，65％收率)为棕色油状物。LCMS:MS(ESI)m/z 390.1[M+H]+。
步骤5)(S)-2-氨基-N-(1-(7-氟-8-((1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向(S)-3-(1-氨基乙基)-7-氟-8-((1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(90mg，0.23mmol)和2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(41mg，0.23mmol)的DCM(15mL)溶液中加入[1,2,3]***[4,5-b]吡啶-3-醇(47mg，0.34mmol)、EDCI(54mg，0.34mmol)和DIEA(90mg，0.69mmol)，混合物升温至40℃，搅拌16h。冷却至室温后，将混合物用DCM(50mL)稀释，并用盐水(30mL x 2)洗。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经制备型HPLC(DCM/MeOH＝10/1)纯化，得到(S)-2-氨基-N-(1-(7-氟-8-((1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(48.5mg，38％收率)为白色固体。LCMS:MS(ESI)m/z 550.0[M+H]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.93(dd,J＝6.7,1.6Hz,1H),8.55(dd,J＝4.5,1.6Hz,1H),8.05(d,J＝0.6Hz,1H),7.99(d,J＝6.6Hz,1H),7.72-7.68(m,2H),7.64-7.55(m,2H),7.55-7.45(m,3H),7.41-7.36(m,1H),7.02(dd,J＝6.7,4.5Hz,1H),6.79(s,1H),6.43(s,2H),4.54(q,J＝6.8Hz,1H),1.35(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例29：2-氨基-N-((1S)-1-(8-(2-(1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；和实施例30：6-(3-((S)-1-(2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)乙基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-8-基)-4-羟基-己-5-炔酸甲酯
Figure BDA0003866228850000541
步骤1)4-羟基-6-(三甲基甲硅烷基)己-5-炔酸甲酯
在-20℃下，向4-氧代-6-(三甲基甲硅烷基)己-5-炔酸甲酯(300mg，1.4mmol)的MeOH(10mL)溶液中加入NaBH4(59mg，1.55mmol)，混合物于室温搅拌16h。然后用NH4Cl溶液(5mL)淬灭反应，真空浓缩。残余物用EtOAc(50mL)稀释，并用盐水(30mL x 2)洗。分离的有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩，得到4-羟基-6-(三甲基甲硅烷基)己-5-炔酸甲酯(270mg，收率89％)为无色油状物。MS(ESI):215.2[M+H]+。
步骤2)4-羟基-己-5-炔酸甲酯
在-10℃下，向4-羟基-6-(三甲基甲硅烷基)己-5-壬酸甲酯(250mg，1.17mmol)的THF(10mL)溶液中加入TBAF(1.2mL，1M/L)，混合物于室温搅拌1h。混合物用EtOAc(50mL)稀释，并用盐水(30mL×2)洗。分离的有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(EA:PE＝1:4)纯化，得到4-羟基-己-5-炔酸甲酯(125mg，60％收率)为无色油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.50(td,J＝6.1,2.1Hz,1H),3.70(s,3H),2.65-2.53(m,2H),2.49(d,J＝2.1Hz,1H),2.09-2.04(m,2H)。
步骤3)3-((1S)-1-氨基乙基)-8-(2-(5-氧代氧杂环戊烷-2-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1-酮；6-(3-((S)-1-氨基乙基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-8-基)-4-羟基-己-5-炔酸甲酯
向3-((1S)-1-氨基乙基)-8-氯-2-苯基异喹啉-1-酮(60mg，0.2mmol)和4-羟基-己-5-炔酸甲酯(28mg，0.2mmol)的CH3CN(10mL)溶液中加入K3PO4(128mg，0.6mmol)、X-phos(38mg，0.08mmol)和Pd2(dba)3(37mg，0.04mmol)，混合物升温至80℃，搅拌16h。冷却至室温后，真空浓缩。将残余物用DCM(100mL)稀释，并用盐水(30mL)洗。分离的有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(MeOH/DCM＝1/20)纯化，得到3-((1S)-1-氨基乙基)-8-(2-(5-氧代氧杂环戊烷-2-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1-酮，MS(ESI):373.1[M+H]+；和6-(3-((S)-1-氨基乙基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-8-基)-4-羟基-己-5-炔酸甲酯的混合物(60mg，60.16％收率)为黄色固体，MS(ESI):405.2[M+H]+。
步骤4)2-氨基-N-((1S)-1-(8-(2-(1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；6-(3-((S)-1-(2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)乙基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-8-基)-4-羟基-己-5-炔酸甲酯
向3-((1S)-1-氨基乙基)-8-(2-(5-氧代氧杂环戊烷-2-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1-酮和6-(3-((S)-1-氨基乙基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-8-基)-4-羟基-己-5-炔酸甲酯的混合物(60mg，0.16mmol)和2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(29mg，0.16mmol)的DCM(10mL)溶液中加入HOAT(33mg，0.24mmol)、EDCI(46mg，0.24mmol)和DIEA(62mg，0.48mmol)，混合物升温至40℃，搅拌16h。混合物用DCM(150mL)稀释，用盐水(50mL x2)洗。分液，有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经制备型HPLC(ACN-H2O 0.1％FA,梯度30％至60％)纯化，得到2-氨基-N-((1S)-1-(8-(2-(1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(8.0mg，11.30％收率)为白色固体，和6-(3-((S)-1-(2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)乙基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-8-基)-4-羟基-己-5-炔酸甲酯(3.4mg，3.74％收率)为白色固体。
2-氨基-N-((1S)-1-(8-(2-(1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺：MS(ESI):533.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.71(dd,J＝6.8,1.6Hz,1H),8.54-8.51(m,1H),7.67-7.35(m,8H),6.98(dd,J＝6.8,4.5Hz,1H),6.90(d,J＝4.1Hz,1H),5.47(t,J＝6.4Hz,1H),4.80-4.74(m,1H),4.56(s,1H),2.66-2.41(m,4H),1.48(d,J＝6.7Hz,3H)。
6-(3-((S)-1-(2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺基)乙基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-8-基)-4-羟基-己-5-炔酸甲酯：MS(ESI):565.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.72(dd,J＝6.8,1.6Hz,1H),8.53(dd,J＝4.5,1.6Hz,1H),7.63-7.61(m,4H),7.54-7.47(m,4H),6.99(dd,J＝6.8,4.5Hz,1H),6.89(s,1H),4.83-4.77(m,1H),4.63-4.60(m,1H),3.64(s,3H),2.56(t,J＝7.7Hz,2H),2.06–2.02(m,2H),1.48(d,J＝6.8Hz,3H)。实施例31(S)-2-氨基-N-(1-(8-((6,7-二氢-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁嗪-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000551
步骤1)4-溴-1-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙基)-1H-吡唑
向4-溴-1H-吡唑(2.0g，13.6mmol)和(2-溴乙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(3.58g，149.6mmol)的MeCN(100mL)溶液中加入碳酸铯(8.86g，27.2mmol)，混合物于室温下搅拌16h。将混合物真空浓缩，残余物用EtOAc(130mL)稀释，用盐水(50mL x 2)洗，分离的有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝50/1)纯化，得到4-溴-1-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙基)-1H-吡唑(2.5g,70％收率)为黄色油状物。MS(ESI):304.9[M+H]+。
步骤2)4-溴-1-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙基)-1H-吡唑-5-甲醛
在-78℃下，向4-溴-1-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙基)-1H-吡唑(300mg，0.98mmol)的THF(30mL)溶液中加入LDA(0.6mL，1.18mmol)，混合物搅拌1h。然后加入DMF(144mg，1.96mmol)，混合物转移至室温，搅拌1h。混合物用NH4Cl(20mL)水溶液淬灭，并用EtOAc(50mL x 2)萃取，用盐水(40mL x 2)洗。合并的有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝50/1)纯化，得到4-溴-1-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙基)-1H-吡唑-5-甲醛(200mg，66％收率)为黄色油状物。MS(ESI):333.1[M+H]+。
步骤3)3-溴-6,7-二氢-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁嗪
在氮气气氛下，在-78℃下，向4-溴-1-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙基)-1H-吡唑-5-甲醛(200mg，0.60mmol)的DCM(20mL)溶液中滴加Et3SiH(209mg，1.80mmol)和TMSOTf(800mg，3.60mmol)，混合物转移至室温，搅拌15h。将混合物用NaHCO3水溶液(20mL)淬灭，并用DCM(50mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(50mL x 2)洗，经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝40/1)纯化，得到3-溴-6,7-二氢-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁嗪(100mg，74％收率)为黄色油状物。MS(ESI):203.1[M+H]+。
步骤4)3-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-6,7-二氢-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁嗪
在氮气气氛下，向3-溴-6,7-二氢-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁嗪(100mg，0.49mmol)的MeCN(20mL)溶液中加入X-Phos(117mg，0.25mmol)、Pd2(dba)3(71mg，0.12mmol)和K3PO4(313mg，1.48mmol)，混合物升温至80℃，搅拌5h。冷却至室温后，真空浓缩。将残余物用EtOAc(60mL)稀释，并用盐水(40mL x 2)洗。分离的有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝50/1)纯化，得到3-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-6,7-二氢-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁嗪(150mg，90％收率)为黄色油状物。MS(ESI):305.2[M+H]+。
步骤5)3-乙炔基-6,7-二氢-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁嗪
在0℃下，向3-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-6,7-二氢-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁嗪(150mg，0.49mmol)的THF(10mL)溶液中加入TBAF(1mL，1mmol)，混合物搅拌2h。将混合物用H2O(30mL)稀释，并用EtOAc(30mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(20mL)洗，经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝30/1)纯化，得到3-乙炔基-6,7-二氢-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁嗪(114mg，78％收率)为黄色油状物。MS(ESI):149.0[M+H]+。
步骤6)(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((6,7-二氢-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁嗪-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮
向(S)-3-(1-氨基乙基)-8-氯-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(65mg，0.22mmol)和3-乙炔基-6,7-二氢-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁嗪(113mg，0.76mmol)的MeCN(20mL)溶液中加入X-Phos(52mg，0.11mmol)、Pd2(dba)3(31mg，0.05mmol)和K3PO4(138mg，0.65mmol)，混合物升温至80℃，搅拌5h。冷却至室温后，将混合物真空浓缩。残余物用EtOAc(70mL)稀释，并用盐水(50mL x 2)洗，经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝20/1)纯化，得到(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((6,7-二氢-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁嗪-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(20mg，21％收率)为黄色油状物。MS(ESI):411.1[M+H]+。
步骤7)(S)-2-氨基-N-(1-(8-((6,7-二氢-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁嗪-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((6,7-二氢-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁嗪-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(20mg，0.05mmol)和2-氨基-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(7mg，0.05mmol)的DCM(10mL)溶液中加入DIEA(17mg，0.15mmol)、EDCI(14mg，0.07mmol)和HOAt(10mg，0.07mmol)，混合物升温至40℃，搅拌16h。混合物用DCM(50mL)稀释，并用盐水(30mL x 2)洗。分离的有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经制备型HPLC纯化(-Gemini-C18 150x 19mm,5um:ACN--H2O(0.05％NH3),20-50)，得到(S)-2-氨基-N-(1-(8-((6,7-二氢-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁嗪-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(6.59mg，23％收率)为黄色固体。MS(ESI):570.8[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.92(dd,J＝6.8,1.6Hz,1H),8.55(dd,J＝4.4,1.6Hz,1H),8.00(d,J＝6.8Hz,1H),7.67-7.55(m,5H),7.55-7.45(m,3H),7.41-7.36(m,1H),7.01(dd,J＝6.8,4.4Hz,1H),6.74(s,1H),6.42(s,2H),4.84(s,2H),4.56(q,J＝6.4Hz,1H),4.13-4.02(m,4H),1.35(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例32(S)-2-氨基-N-(1-(5-((2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑-6-基)乙炔基)-6-氟-4-氧代-3-苯基)-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000561
步骤1)(S)-2-(1-氨基乙基)-5-((2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑-6-基)乙炔基)-6-氟-3-苯基喹唑啉-4(3H)-酮
在氮气气氛下，向6-乙炔基-2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑(50mg，0.14mmol)和2-乙炔基-5H,6H-吡唑并[3,2-b][1,3]噁唑(18.5mg，0.14mmol)的乙腈(20mL)溶液中加入Pd2(dba)3(32mg，0.034mmol)、X-phos(33mg，0.07mmol)和K3PO4(88mg，0.41mmol)，混合物升温至80℃，搅拌4h。冷却至室温后，真空浓缩。将残余物溶于DCM(50mL)，用水(30ml)和盐水(30mL)洗，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MEOH＝10/1)纯化，得到(S)-2-(1-氨基乙基)-5-((2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑-6-基)乙炔基)-6-氟-3-苯基喹唑啉-4(3H)-酮(20mg，30％收率)为白色固体。LCMS:MS(ESI)m/z 416.1[M+H]+。
步骤2)(S)-2-氨基-N-(1-(5-((2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑-6-基)乙炔基)-6-氟-4-氧代-3-苯基)-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向(S)-2-(1-氨基乙基)-5-((2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑-6-基)乙炔基)-6-氟-3-苯基喹唑啉-4(3H)-酮(20mg，0.048mmol)和2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(8.6mg，0.048mmol)的DCM(15mL)溶液中加入HOAt(10mg，0.072mmol)、EDCI(11mg，0.072mmol)和DIEA(18.6mg，0.14mmol)，混合物升温至40℃，搅拌16h。冷却至室温后，将混合物加入水(30mL)稀释，并用DCM(30mL x 2)萃取。合并的有机层用盐水(30mL x 2)洗，经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MEOH＝10/1)纯化，得到(S)-2-氨基-N-(1-(5-((2,3-二氢吡唑并[5,1-b]噁唑-6-基)乙炔基)-6-氟-4-氧代-3-苯基)-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(4.14mg，14％收率)为白色固体。LCMS:MS(ESI)m/z 576.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.78(d,J＝6.2Hz,1H),8.54(dd,J＝4.4,1.7Hz,1H),8.42(dd,J＝6.8,1.7Hz,1H),8.29(s,
1H),7.72(d,J＝7.4Hz,1H),7.68-7.63(m,1H),7.60-7.58(m,1H),7.56-7.51(m,1H),7.35-7.28(m,1H),6.81(dd,J＝6.8,4.4Hz,1H),5.65(s,1H),5.06-4.99(m,2H),4.88-4.82(m,1H),4.34-4.27(m,2H),1.71(d,J＝6.9Hz,3H)。
实施例33 2-氨基-N-((S)-1-(8-(((R)-5-羟基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000571
步骤1)(2S,4R)-4-(苄氧基)吡咯烷-2-羧酸
向(2S,4R)-4-(苄氧基)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-甲酸(4g，12.4mmol)的DCM(20mL)溶液中加入TFA(4mL)，混合物搅拌2h。将混合物真空浓缩，得到(2S,4R)-4-(苄氧基)吡咯烷-2-羧酸(3g，98.4％收率)为黄色油状物。MS(ESI):222.1[M+H]+。
步骤2)(2S,4R)-4-(苄氧基)-1-亚硝基吡咯烷-2-羧酸
在0℃下，向(2S,4R)-4-(苄氧基)吡咯烷-2-羧酸(3g，13.6mmol)的H2O(10mL)溶液中加入NaNO2(1.41g，20.4mmol)的H2O(5mL)溶液，然后加入HOAc(3mL)，将混合物在室温下搅拌16h。过滤，滤饼用水(10mL)洗，真空干燥，得到产物(3.5g，98％收率)为白色固体。MS(ESI):251.1[M+H]+。
步骤3)(R)-5-(苄氧基)-3-氧代-5,6-二氢-3H-吡咯并[1,2-c][1,2,3]噁二唑-7(4H)-铵-3a-内鎓盐
在0℃下，向(2S,4R)-4-(苄氧基)-1-亚硝基吡咯烷-2-羧酸(3.5g，14mmol)的THF(50mL)溶液中加入TFAA(4.41g，21mmol)，混合物于室温搅拌16h。混合物用EtOAc(80mL)稀释，并用盐水(50mL×2)洗。分离的有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(EA/PE＝1/2)纯化，得到(R)-5-(苄氧基)-3-氧代-5,6-二氢-3H-吡咯并[1,2-c][1,2,3]噁二唑-7(4H)-铵-3a-内鎓盐(1.5g，41.4％收率)为黄色油状物。MS(ESI):233.1[M+H]+。
步骤4)(R)-5-(苄氧基)-2-(三甲基甲硅烷基)-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑
将(R)-5-(苄氧基)-3-氧代-5,6-二氢-3H-吡咯并[1,2-c][1,2,3]噁二唑-7(4H)-铵-3a-内鎓盐(1g，4.3mmol)和乙炔基三甲基硅烷(0.84g，8.6mmol)的二甲苯(10mL)混合溶液升温至130℃，加热16h。冷却至室温后，真空浓缩。残余物经柱色谱法(EA/PE＝1/3)纯化，得到(R)-5-(苄氧基)-2-(三甲基甲硅烷基)-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑(600mg，46.5％收率)为黄色油状物。MS(ESI):287.1[M+H]+。
步骤5)(R)-5-(苄氧基)-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑
向(R)-5-(苄氧基)-2-(三甲基甲硅烷基)-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑(700mg，2.44mmol)的THF(5mL)溶液中加入TBAF(24.4mL，24.4mmol)，混合物升温至60℃，加热48h。冷却至室温后，混合物用EtOAc(40mL)稀释，并用盐水(30mL×2)洗。分离的有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(EA/PE＝1/2)纯化，得到(R)-5-(苄氧基)-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑(330mg,56.7％收率)为黄色固体。MS(ESI):215.1[M+H]+。
步骤6)(R)-5-(苄氧基)-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-甲醛
向(R)-5-(苄氧基)-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑(330mg，1.54mmol)的DCM(20mL)溶液中加入(氯亚甲基)二甲基铵氯化物(296mg，2.31mmol)，混合物升温至40℃，加热48h。向混合物中加入1N HCl(3mL)，升温至40℃，加热2h。然后真空浓缩，将残余物用水(5mL)稀释，并用NaHCO3水溶液(10mL)洗。混合物用EtOAc(30mL x 3)萃取，合并的有机层用盐水(20mL)洗，经Na2SO4干燥，真空浓缩，得到(R)-5-(苄氧基)-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-甲醛(350mg，收率84％)为黄色油状物。MS(ESI):243.1[M+H]+。步骤7)(R)-5-羟基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-甲醛
将(R)-5-(苄氧基)-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-甲醛(200mg，0.82mmol)溶于浓HCl(10mL)，升温至70℃，搅拌16h。冷却至室温后，真空浓缩。将残余物用水(3mL)稀释，用碳酸氢钠水溶液(10mL)洗，然后用EtOAc(20mL x 3)萃取，合并的有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(EA/PE＝1/3)纯化，得到(R)-5-羟基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-甲醛(140mg，89％收率)为黄色固体。MS(ESI):153.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.82(s,1H),7.97(s,1H),5.21-5.17(m,1H),4.40(dd,J＝12.4,6.0Hz,1H),4.16(dd,J＝12.4,2.4Hz,1H),3.46(dd,J＝17.6,6.4Hz,1H),3.15(dd,J＝17.6,2.4Hz,1H)。
步骤8)(R)-3-乙炔基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-5-醇
向(R)-5-羟基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-甲醛(50mg，0.33mmol)和(1-重氮-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(95mg，0.49mmol)的MeOH(20mL)溶液中加入K2CO3(91mg，0.66mmol)，混合物于室温搅拌16h。将混合物真空浓缩，用EtOAc(60mL)稀释，并用盐水(20mL×2)洗。分离的有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩，得到(R)-3-乙炔基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-5-醇(45mg，83％收率)为黄色油状物。MS(ESI):148.9[M+H]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.62(s,1H),5.15-5.07(m,1H),4.35(dd,J＝12.0,6.0Hz,1H),4.09(dd,J＝12.0,2.8Hz,1H),3.77(d,J＝10.8Hz,1H),3.30(dd,J＝16.8,6.4Hz,1H),3.02(s,1H),2.93(dd,J＝16.8,2.8Hz,1H)。
步骤9)3-((S)-1-氨基乙基)-8-(((R)-5-羟基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮
在氮气气氛下，向3-((1S)-1-氨基乙基)-8-氯-2-苯基异喹啉-1-酮(50mg，0.17mmol)和4-乙炔基-1-甲基吡唑(37mg，0.25mmol)的CH3CN(20mL)溶液中加入Pd2(dba)3(31mg，0.033mmol)、K3PO4(71mg，0.33mmol)和X-phos(32mg，0.067mmol)，混合物升温至80℃，搅拌5h。冷却至室温后，混合物用EtOAc(60mL)稀释，并用盐水(40mL×2)洗。分离的有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝20/1)纯化，得到3-((S)-1-氨基乙基)-8-(((R)-5-羟基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(40mg，61％)为黄色固体。MS(ESI):394.0[M+H]+。
步骤10)2-氨基-N-((S)-1-(8-(((R)-5-羟基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向3-((S)-1-氨基乙基)-8-(((R)-5-羟基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(40mg，0.1mmol)和2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(19.5mg，0.1mmol)的DCM(20mL)溶液中加入EDCI(31.5mg，0.16mmol)、HOAt(18mg，0.13mmol)和DIEA(43mg，0.32mmol)，混合物升温至40℃，搅拌16h。冷却至室温后，将混合物用DCM(40mL)稀释，并用盐水(20mL x 2)洗。分离的有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经制备型HPLC(ACN-H2O，0.1％FA，梯度20％至50％)纯化，得到2-氨基-N-((S)-1-(8-(((R)-5-羟基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(14.6mg，23％收率)为淡黄色固体。MS(ESI):571.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.62(dd,J＝6.8,1.6Hz,1H),8.43(dd,J＝4.4,1.6Hz,1H),8.14(d,J＝6.8Hz,1H),7.61(s,1H),7.57-7.54(m,2H),7.52-7.48(m,2H),7.45-7.33(m,4H),6.89(dd,J＝6.8,4.4Hz,1H),6.80(s,1H),4.93-4.90(m,1H),4.72-4.65(m,1H),4.24(dd,J＝11.6,5.6Hz,1H),3.88(dd,J＝11.6,2.4Hz,1H),3.19(d,J＝6.4Hz,1H),2.82(dd,J＝16.8,2.4Hz,1H),1.39(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例34(S)-2-氨基-N-(1-(7-氟-8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-(苯基-d5)-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000591
步骤1)2-氯-3-氟-6-甲基-N-(苯基-d5)苯甲酰胺
在0℃下，向2-氯-3-氟-6-甲基苯甲酸(1.0g，5.3mmol)和DMF(40mg，0.53mmol)的DCM(25mL)溶液中滴加草酰氯(810mg，6.36mmol)，滴毕，混合物搅拌2h。将混合物减压浓缩，得到酰氯混合物。在0℃下，向苯-d5-胺(550mg，5.3mmol)和TEA(1.61g，15.9mol)的DCM(25mL)溶液中加入上述酰氯的DCM(10mL)溶液，混合物升温至室温，搅拌5h。混合物用H2O(30mL)稀释，并用DCM(30mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(50mL x 2)洗，经Na2SO4干燥，减压浓缩。残余物经柱色谱法(PE/EA＝3/1)纯化，得到2-氯-3-氟-6-甲基-N-(苯基-d5)苯甲酰胺(1.01g，64％收率)为黄色固体。MS(ESI):269.1[M+H]+。
步骤2)(S)-(4-(3-氯-4-氟-2-((苯基-d5)氨基甲酰基)苯基)-3-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯
在氮气气氛下，将2-氯-3-氟-6-甲基-N-(苯基-d5)苯甲酰胺(1.01g，3.8mmol)的THF(25mL)溶液降温至-30℃，加入n-BuLi(4.0mL，9.5mmol)，搅拌1h，得到黄色液体。在-30℃下，向(S)-(1-(甲氧基(甲基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1.32g，5.7mmol)的THF(25mL)溶液中加入异丙基氯化镁(8.8mL，11.4mmol)溶液，搅拌1h。然后将混合物缓慢加入到上述黄色混合物中，转移至室温，搅拌3小时。将混合物用NH4Cl(30mL)水溶液稀释，并用EtOAc(50mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(40mL x 2)洗，经Na2SO4干燥，减压浓缩。残余物经柱色谱法(PE/EA＝3/1)纯化，得到(S)-(4-(3-氯-4-氟-2-((苯基-d5)氨基甲酰基)苯基)-3-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.63g，37％收率)为黄色固体。MS(ESI):462.1[M+Na]+。
步骤3)(S)-3-(1-氨基乙基)-8-氯-7-氟-2-(苯基-d5)异喹啉-1(2H)-酮
向(S)-(4-(3-氯-4-氟-2-((苯基-d5)氨基甲酰基)苯基)-3-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.63g，1.43mmol)的MeOH(30mL)溶液中加入浓HCl(15mL)，混合物升温至80℃，搅拌24h。冷却至室温后，将混合物减压浓缩。残余物用H2O(10mL)稀释，并用NaHCO3水溶液将pH值调节至7-8。混合物用DCM(60mL x 3)萃取，并用盐水(50mL x 2)洗。分离的有机层经Na2SO4干燥，并减压浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝95/5)纯化，得到(S)-3-(1-氨基乙基)-8-氯-7-氟-2-(苯基-d5)异喹啉-1(2H)-酮(160mg，33％收率)为黄色固体。MS(ESI):321.9[M+H]+。
步骤4)(S)-3-(1-氨基乙基)-7-氟-8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-2-(苯基-d5)异喹啉-1(2H)-酮
向(S)-3-(1-氨基乙基)-8-氯-7-氟-2-(苯基-d5)异喹啉-1(2H)-酮(160mg，0.50mmol)和4-乙炔基-1-甲基-1H-吡唑(79mg，0.75mmol)的MeCN(10mL)溶液中加入X-Phos(118mg，0.25mmol)、Pd2(dba)3(72mg，0.12mmol)和K3PO4(317mg，1.50mmol)，混合物升温至80℃，搅拌5h。冷却至室温后，真空浓缩。将残余物用EtOAc(80mL)稀释，并用盐水(50mL x2)洗。分离的有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝20/1)纯化，得到(S)-3-(1-氨基乙基)-7-氟-8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-2-(苯基-d5)异喹啉-1(2H)-酮(110mg，53％收率)为黄色油状物。MS(ESI):391.9[M+H]+。
步骤5)(S)-2-氨基-N-(1-(7-氟-8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-(苯基-d5)-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向(S)-3-(1-氨基乙基)-7-氟-8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-2-(苯基-d5)异喹啉-1(2H)-酮(110mg，0.28mmol)和2-氨基-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸(55mg，0.31mmol)的DCM(30mL)溶液中加入DIEA(109mg，0.84mmol)、EDCI(81mg，0.42mmol)和HOAt(57mg，0.42mmol)，混合物升温至40℃，搅拌16h。冷却至室温后，将混合物用DCM(60mL)稀释，并用盐水(40mL x 2)洗。分离的有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经制备型HPLC(-Gemini-C18 150x 19mm,5um:ACN--H2O(0.05％NH3),20-50)纯化，得到(S)-2-氨基-N-(1-(7-氟-8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-(苯基-d5)-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(31.8mg，20％收率)为黄色固体。MS(ESI):552.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.93(dd,J＝6.8,1.6Hz,1H),8.55(dd,J＝4.4,1.6Hz,1H),8.05(s,1H),8.00(d,J＝6.8Hz,1H),7.70(ddd,J＝21.2,13.2,7.2Hz,2H),7.61(s,1H),7.02(dd,J＝6.8,4.4Hz,1H),6.79(s,1H),6.43(s,2H),4.58-4.50(m,1H),3.82(s,3H),1.34(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例35(S)-2-氨基-N-(1-(7-氟-8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基-5-d)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000601
步骤1)1-甲基-1H-吡唑-5-d
在-15℃下，向5-溴-1-甲基-1H-吡唑(2g，12.42mmol)的THF(10mL)溶液中加入i-PrMgCl.LiCl(2.16mg，14.9mmol；1.3M的THF溶液)。混合物升温至-10～0℃，搅拌1h。在-10℃下，向反应混合物中加入甲醇-d4(0.5mL)，室温下搅拌16h。混合物用NH4Cl水溶液(5mL)和MTBE(50mL)淬灭；分液，有机相用盐水(20mL x 2)洗。分离的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到1-甲基-1H-吡唑-5-d(500mg，48％收率)为无色油状物。LCMS:MS(ESI)m/z 84.1[M+H]+。
步骤2)4-碘-1-甲基-1H-吡唑-5-d
向1-甲基-1H-吡唑-5-d(500mg，6mmol)的水(10mL)溶液中加入单质碘(763mg，3mmol)，混合物于室温搅拌0.5h，然后加入H2O2(3mL)，升温至60℃，搅拌1h。冷却至室温后，用亚硫酸钠水溶液(30mL)淬灭反应。混合物用EtOAc(50mL x 2)萃取，合并的有机层用盐水(50mL x 2)洗，经无水Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(PE:EA＝3:1)纯化，得到4-碘-1-甲基-1H-吡唑-5-d(1g，79％收率)为黄色固体。LCMS:MS(ESI)m/z 210.1[M+H]+。
步骤3)1-甲基-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑-5-d
在0℃下，向4-碘-1-甲基-1H-吡唑-5-d(1g，4.78mmol)和乙炔基三甲基硅烷(705mg，7.18mmol)的THF(100mL)溶液中加入CuI(91mg，0.48mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(168mg，0.24mmol)和三乙胺(968mg，9.57mmol)，混合物于室温搅拌2小时。残余物用EtOAc(300mL)稀释，并用盐水(200mL x 2)洗。分离的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经柱色谱法纯化(PE:EA＝3:1))，得到1-甲基-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑-5-d(700mg，81％收率)为黄色油状物。LCMS:MS(ESI)m/z 180.2[M+H]+。
步骤4)4-乙炔基-1-甲基-1H-吡唑-5-d
向1-甲基-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑-5-d(700mg，3.9mmol)的THF(20mL)溶液中加入TBAF(4mL，4mmol，1M的THF溶液)，混合物于室温搅拌1h。然后混合物用EtOAc(50mL)稀释，并用盐水(30mL x 2)洗。分离的有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(PE:EA＝3:1)纯化，得到4-乙炔基-1-甲基-1H-吡唑-5-d(200mg，47％收率)为黄色油状。LCMS:MS(ESI)m/z 108.0[M+H]+。
步骤5)(S)-3-(1-氨基乙基)-7-氟-8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基-5-d)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮
将(S)-3-(1-氨基乙基)-8-氯-7-氟-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(50mg，0.16mmol)和4-乙炔基-1-甲基-1H-吡唑-5-d(25mg，0.24mmol)的MeCN(20mL)溶液中加入Pd2(dba)3(29mg，0.032mmol)、X-phos(30mg，0.063mmol)和K3PO4(67mg，0.32mmol)，混合物升温至80℃，搅拌4h。冷却至室温后，真空浓缩。残余物用DCM(50mL)稀释，并用盐水(30mL x 2)洗。分离的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经柱色谱法纯化(DCM:MeOH＝10:1)，得到(S)-3-(1-氨基乙基)-7-氟-8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基-5-d)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(20mg，32％收率)为黄色固体。LCMS:MS(ESI)m/z 388.1[M+H]+。
步骤6)(S)-2-氨基-N-(1-(7-氟-8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基-5-d)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向(S)-3-(1-氨基乙基)-7-氟-8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基-5-d)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(20mg，0.052mmol)和2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(9mg，0.052mmol)的DCM(15mL)溶液中加入HOAt(10mg，0.078mmol)、EDCI(12mg，0.078mmol)和DIEA(20mg，0.155mmol)，混合物升温至40℃，搅拌16h。冷却至室温后，将混合物用DCM(50mL)稀释，并用盐水(30mL x 2)洗。分离的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM:MeOH＝10:1)纯化，得到(S)-2-氨基-N-(1-(7-氟-8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基-5-d)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(7.3mg，25％收率)为白色固体。LCMS:MS(ESI)m/z 548.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.72(dd,J＝6.8,1.6Hz,1H),8.53(dd,J＝4.4,1.6Hz,1H),7.69(s,1H),7.67-7.60(m,2H),7.59-7.42(m,5H),6.99(dd,J＝6.8,4.4Hz,1H),6.91(s,1H),4.77(q,J＝6.8Hz,1H),3.89(s,3H),1.48(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例36(S)-2-氨基-N-(1-(5-氟-8-((1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000611
步骤1)6-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸
在0℃下，向2-氯-6-甲基苯甲酸(10g，0.0586mol)的硫酸(100mL)溶液中滴加硝酸(4.1g，0.064mol，2.6mL)，混合物搅拌30分钟后，转移至室温，搅拌16h。将混合物缓慢倒入冰水(260mL)中，继续搅拌1h。过滤，滤饼用水(50mL)洗，真空干燥，得到6-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸(12.5g，收率98％)为白色固体。LCMS:MS(ESI)m/z 214.4[M-H]-。
步骤2)6-氯-2-甲基-3-硝基-N-苯基苯甲酰胺
在0℃下，向6-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸(11.5g，0.053mol)的DCM(60mL)溶液中加入DMF(1mL)和草酰氯(8.2g，0.064mol)，混合物转移至室温，搅拌2h；将混合物真空浓缩，得到白色固体(13g)。在0℃下，将上述白色固体(13g)溶于DCM(20mL)，加入苯胺(7.5g，0.08mol)、三乙胺(5.4g，0.0533mol)和DCM(60mL)，混合物于室温搅拌16小时。将混合物用水(200mL)淬灭，并用DCM(200mL x 2)萃取。合并的有机层用盐水(200mL x 2)洗，经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到6-氯-2-甲基-3-硝基-N-苯基苯甲酰胺(14g，89％收率)为黄色固体。LCMS:MS(ESI)m/z 291.0[M+H]+。
步骤3)3-氨基-6-氯-2-甲基-N-苯基苯甲酰胺
向6-氯-2-甲基-3-硝基-N-苯基苯甲酰胺(15g，0.051mol)的MeOH(200mL)溶液中加入SnCl2(29.7g，0.155mol)，混合物升温至回流，搅拌24h。冷却至室温后，真空浓缩。残余物用NaHCO3水溶液(200mL)淬灭，并用EtOAc(300mL x 2)萃取。合并的有机层用盐水(200mLx 2)洗，经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经柱色谱法(PE/EA＝3/1))纯化，得到3-氨基-6-氯-2-甲基-N-苯基苯甲酰胺(7g，51％收率)为白色固体。LCMS:MS(ESI)m/z 261.1[M+H]+。
步骤4)6-氯-3-氟-2-甲基-N-苯基苯甲酰胺
在0℃下，向3-氨基-6-氯-2-甲基-N-苯基苯甲酰胺(2g，7.67mmol)的四氟硼酸(48mass％,20mL)溶液中缓慢滴加硝酸钠(1g，15.34mmol)水溶液(5mL)，滴毕，混合物转移至常温，搅拌1h。过滤，用冷水(5mL x 2)冲洗滤饼，真空干燥，得到白色固体状的重氮盐(2g)。将重氮盐在120℃下加热30分钟，冷却至室温后，倒入冰水(50mL)中，然后用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。合并的有机层用盐水(50mL x 2)洗，经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经柱色谱法(PE/EA＝10/1))纯化，得到6-氯-3-氟-2-甲基-N-苯基苯甲酰胺(800mg，收率35％)为白色固体。LCMS:MS(ESI)m/z 264.1[M+H]+。
步骤5)(S)-(4-(3-氯-6-氟-2-(苯基氨基甲酰基)苯基)-3-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯
在-30℃下，向6-氯-3-氟-2-甲基-N-苯基苯甲酰胺(400mg，1.52mmol)的THF(5mL)溶液中加入n-BuLi(3.8mmol，2.4M/L＝1.58mL)，混合物搅拌2h，得到黄色液体。于氮气气氛下，在-30℃，向N-((1S)-1-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(528mg，2.27mmol)的THF(10mL)溶液中加入i-PrMgCl.LiCl(4.55mmol，1.3M/L,3.5mL)，混合物搅拌2h。在-40℃向该混合物中加入上述黄色液体，转移至室温，搅拌16h。混合物用NH4Cl溶液(50mL)淬灭，并用EtOAc(50mL×2)萃取。合并的有机层用盐水(50mL x 2)洗，经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经柱色谱法(PE/EA＝3/1)纯化，得到(S)-(4-(3-氯-6-氟-2-(苯基氨基甲酰基)苯基)-3-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(160mg，24％收率)为黄色固体。LCMS:MS(ESI)m/z457.0[M+Na]+。
步骤6)(S)-3-(1-氨基乙基)-8-氯-5-氟-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮
向(S)-(4-(3-氯-6-氟-2-(苯基氨基甲酰基)苯基)-3-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(150mg，0.345mmol)的MeOH(6mL)溶液中加入浓盐酸(3mL)，混合物升温至70℃，搅拌3h。冷却至室温后，真空浓缩。将残余物倒入水(50mL)中，所得溶液用碳酸氢钠水溶液中和至pH＝8。混合物用EtOAc(50mL x 3)萃取，合并的有机层用盐水(50mL)洗，经无Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝95/5)纯化，得到(S)-3-(1-氨基乙基)-8-氯-5-氟-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(50mg，45％收率)为白色固体。LCMS:MS(ESI)m/z 317.0[M+H]+。
步骤7)(S)-3-(1-氨基乙基)-5-氟-8-((1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮
在氮气气氛下，向(S)-3-(1-氨基乙基)-8-氯-5-氟-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(50mg，0.23mmol)和4-乙炔基-1-甲基吡唑(26mg，0.23mmol)的乙腈(20mL)溶液中加入Pa2(dba)3(36mg，0.039mmol)、X-phos(38mg，0.039mmol)和K3PO4(67mg，0.32mmol)，混合物升温至80℃，搅拌4h。冷却至室温后，真空浓缩。将残余物溶于DCM(50mL)，并用盐水(30mL)洗。分离的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝10/1)纯化，得到(S)-3-(1-氨基乙基)-5-氟-8-((1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(50mg，80％收率)为黄色固体。LCMS:MS(ESI)m/z 390.1[M+H]+。
步骤8)(S)-2-氨基-N-(1-(5-氟-8-((1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向(S)-3-(1-氨基乙基)-5-氟-8-((1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(50mg，0.13mmol)和2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(23mg，0.13mmol)的DCM(15mL)溶液中加入HOAt(26mg，0.19mmol)、EDCI(30mg，0.19mmol)和DIEA(50mg，0.39mmol)，混合物升温至40℃，搅拌16h。冷却至室温后，将混合物用DCM(50mL)稀释，并用盐水(30mL x 2)洗。分离的有机层经无水Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM:MeOH＝15:1)纯化，得到(S)-2-氨基-N-(1-(5-氟-8-((1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(24.5mg，34％收率)为白色固体。LCMS:MS(ESI)m/z 550.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.94(dd,J＝6.8,1.6Hz,1H),8.56(dd,J＝4.4,1.6Hz,1H),8.08(d,J＝6.8Hz,1H),8.00(d,J＝0.8Hz,1H),7.62-7.49(m,7H),7.43(d,J＝7.2Hz,1H),7.03(dd,J＝6.8,4.4Hz,1H),6.75(s,1H),6.45(s,2H),4.55(t,J＝6.8Hz,1H),1.36(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例37(S)-2-氨基-5-(甲氧基-d3)-N-(1-(8-((1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000621
步骤1)(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮
向3-((1S)-1-氨基乙基)-8-氯-2-苯基异喹啉-1-酮(100mg，0.33mmol)和4-乙炔基-1-甲基吡唑(55mg，0.5mmol)的CH3CN(20mL)溶液中加入Pd2(dba)3(61mg，0.067mmol)、K3PO4(142mg，0.67mmol)和X-phos(64mg，0.13mmol)，混合物升温至80℃，搅拌5小时。冷却至室温后，混合物用EtOAc(60mL)稀释，并用盐水(40mL×2)洗。分离的有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝20/1)纯化，得到(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-基))乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(80mg，61％)为黄色固体。MS(ESI):371.9[M+H]+。
步骤2)(S)-2-氨基-5-(甲氧基-d3)-N-(1-(8-((1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
向(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(40mg，0.1mmol)和2-氨基-5-甲氧基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(23mg，0.1mmol)的DCM(20mL)溶液中加入EDCI(31mg，0.16mmol)、HOAt(18mg，0.13mmol)和DIEA(42mg，0.32mmol)，混合物升温至40℃，搅拌16h。冷却至室温后，将混合物用DCM(40mL)稀释，并用盐水(30mL x 2)洗。分离的有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经制备型HPLC(DCM/MeOH＝15/1)纯化，得到(S)-2-氨基-5-(甲氧基-d3)-N-(1-(8-((1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(19mg，30％收率)为白色固体。MS(ESI):564.8[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.72-8.66(m,1H),8.01(d,J＝0.8Hz,1H),7.88(d,J＝6.8Hz,1H),7.68-7.61(m,2H),7.60(s,1H),7.59-7.50(m,4H),7.46(d,J＝7.6Hz,1H),7.39(d,J＝7.6Hz,1H),6.79(s,1H),6.49-6.44(m,1H),6.14(s,2H),4.49-4.43(m,1H),1.36(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例38(S)-2-氨基-5-氰基-N-(1-(8-((1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000631
步骤1)1-氨基-4-溴吡啶-1-鎓
向4-溴吡啶(1g，6.3mmol)的DCM(10mL)溶液中分批加入氨基二苯基次膦酸盐(4.41g，18.9mmol)，混合物于室温搅拌48h。然后加入氢碘酸(1mL，55％的H2O溶液)，过滤沉淀，滤饼用DCM(10mL)洗，真空干燥，得到1-氨基-4-溴吡啶-1-鎓(1g，46％收率)为棕色固体。MS(ESI):173.0,175.0[M+H]+。
步骤2)5-溴吡唑并[1,5-a]吡啶-2,3-二羧酸二甲酯
向1-氨基-4-溴吡啶-1-鎓(800mg，4.6mmol)的DMF(20mL)溶液中加入1,4-二甲基丁二酸(784mg，5.5mmol)和K2CO3(953mg，6.89mmol)，混合物于室温搅拌16h。混合物用EtOAc(80mL)稀释，并用盐水(40mL×2)洗。分离的有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(EA/PE＝1/5)纯化，得到5-溴吡唑并[1,5-a]吡啶-2,3-二羧酸二甲酯(200mg，13％收率)为黄色固体。MS(ESI):313.0,315.0[M+H]+。
步骤3)5-溴-3-(甲氧基羰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-2-羧酸
向5-溴吡唑并[1,5-a]吡啶-2,3-二羧酸二甲酯(200mg，0.19mmol)的THF(10mL)溶液中加入NaOH(26mg，0.64mmol)的H2O(3mL)溶液，混合物于室温搅拌16h。将混合物真空浓缩，残余物用水(10mL)稀释，并用1N HCl酸化至pH为4-5。过滤沉淀，滤饼用水洗，真空干燥，得到5-溴-3-(甲氧基羰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-2-甲酸(180mg，收率89％)为白色固体。MS(ESI):299.0,301.0[M+H]+。
步骤4)5-溴-2-((叔丁氧基羰基)氨基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸甲酯
向5-溴-3-(甲氧基羰基)吡唑并[1,5-a]吡啶-2-羧酸(230mg，0.77mmol)的二氧六环(20mL)溶液中加入三乙胺(233mg，2.3mmol)和DPPA(254mg，0.92mmol)，混合物于室温搅拌1h。然后加入t-BuOH(114mg，1.53mmol)，升温至100℃，搅拌16h。冷却至室温后，真空浓缩。将残余物用EtOAc(60mL)稀释，并用盐水(40mL x 2)洗。分离的有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(EA/PE＝1/5)纯化，得到5-溴-2-((叔丁氧基羰基)氨基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸甲酯(150mg,53％收率)和2-氨基-5-溴吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸甲酯(50mg，17.5％收率)，均为白色固体。MS(ESI):392.0,394.0[M+H]+,270.0,272.0[M+H]+。步骤5)2-氨基-5-溴吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸
向2-氨基-5-溴吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸甲酯(50mg，0.18mmol)的MeOH(10mL)溶液中加入NaOH(22mg，0.55mmol)水溶液(2mL)，混合物升温至50℃，搅拌3h。冷却至室温后，将混合物真空浓缩。残余物用水(5mL)稀释，并用1N HCl酸化至pH＝4-5。然后用EtOAc(20mL x 3)萃取，合并的有机层用盐水(20mL x 2)洗，经Na2SO4干燥，真空浓缩，得到2-氨基-5-溴吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸(45mg，90％收率)为浅色固体。MS(ESI):255.9,257.9[M+H]+。
步骤6)(S)-2-氨基-5-溴-N-(1-(8-((1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
向(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(65mg，0.18mmol)和2-氨基-5-溴吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸(45mg，0.18mmol)的DCM(30mL)溶液中加入HOAt(32mg，0.23mmol)、EDCI(56mg，0.29mmol)和DIEA(75mg，0.59mmol)，混合物升温至40℃，搅拌16h。冷却至室温后，将混合物用DCM(30mL)稀释，并用盐水(30mL x 2)洗。分离的有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(DCM/MeOH＝20/1)纯化，得到(S)-2-氨基-5-溴-N-(1-(8-((1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺(100mg，76％收率)为黄色固体。MS(ESI):609.0[M+H]+。
步骤7)(S)-2-氨基-5-氰基-N-(1-(8-((1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
在氮气气氛下，向(S)-2-氨基-5-溴-N-(1-(8-((1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺(50mg，0.08mmol)的DMF(5mL)溶液中加入Zn(CN)2(19mg，0.16mmol)、Zn(11mg,0.16mmol)和Pd(dppf)Cl2.DCM(7mg，0.008mmol)，混合物升温至100℃，搅拌16h。冷却至室温后，混合物用EtOAc(60mL)稀释，并用盐水(30mL×3)洗。分离的有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经制备型HPLC(ACN-H2O,0.1FA,梯度40％-60％)纯化，得到(S)-2-氨基-5-氰基-N-(1-(8-((1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺(7.8mg，17％收率)为黄色固体。MS(ESI):556.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.48(dd,J＝6.8,0.8Hz,1H),8.18(d,J＝0.8Hz,1H),7.87(s,1H),7.69(s,1H),7.67-7.52(m,7H),7.44(d,J＝7.6Hz,1H),7.04(dd,J＝7.2,1.6Hz,1H),6.94(s,1H),4.76(q,J＝6.8Hz,1H),1.50(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例39(S)-2-氨基-5-甲氧基-N-(1-(8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
Figure BDA0003866228850000641
步骤1)2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸甲酯
向5-溴-2-((叔丁氧基羰基)氨基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸甲酯(100mg，0.27mmol)和甲醇钠(44mg，0.81mmol)的二氧六环(10mL)和MeOH(5mL)溶液中加入Pd2(dba)3(25mg，0.027mmol)和X-phos(26mg，0.054mmol)，混合物升温至70℃，搅拌16h。冷却至室温后，真空浓缩。残余物用EtOAc(50mL)稀释，用盐水(30mL x 2)洗。分离的有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经柱色谱法(EA/PE＝1/2)纯化，得到2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸甲酯(80mg，73.7％收率)为黄色固体。MS(ESI):344.1[M+Na]+。
步骤2)2-氨基-5-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸甲酯
向2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酸甲酯(80mg，0.25mmol)的DCM(3mL)溶液中加入TFA(1mL)，混合物于室温搅拌2h。将混合物真空浓缩，得到2-氨基-5-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸甲酯(60mg，收率87％)为黄色油状物。MS(ESI):222.1[M+H]+。
步骤3)2-氨基-5-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸
向2-氨基-5-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸甲酯(60mg，0.27mmol)的MeOH(10mL)溶液中加入NaOH(32mg，0.81mmol)水溶液(3mL)，混合物升温至65℃，搅拌48h。冷却至室温后，真空浓缩。残余物用水(3mL)稀释，并用1N HCl酸化至pH＝4-5，过滤收集沉淀。滤饼用水(2mL)洗，真空干燥，得到2-氨基-5-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酸(50mg，收率53％)为黄色固体。MS(ESI):208.1[M+H]+。
步骤4)(S)-2-氨基-5-甲氧基-N-(1-(8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺
向(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((1-(甲基-d3)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-2-苯基异喹啉-1(2H)-酮(89mg，0.24mmol)和2-氨基-5-甲氧基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸(50mg，0.24mmol)的DCM(40mL)溶液中加入EDCI(69mg，0.36mmol)、HOAt(49mg，0.36mmol)和DIEA(93mg，0.72mmol)，混合物升温至40℃，搅拌16h。冷却至室温后，将混合物用DCM(50mL)稀释，并用盐水(30mL x 2)洗。分离的有机层经Na2SO4干燥，真空浓缩。残余物经制备型HPLC(ACN-H2O，0.1FA，梯度40％-60％)纯化，得到(S)-2-氨基-5-甲氧基-N-(1-(8-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-3-基)乙基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺(6.5mg，5％收率)为白色固体。MS(ESI):561.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.15(d,J＝7.6Hz,1H),7.86(s,1H),7.69(d,J＝3.2Hz,1H),7.67–7.53(m,7H),7.43(d,J＝7.6Hz,1H),7.10(d,J＝2.4Hz,1H),6.94(s,1H),6.55(dd,J＝7.6,2.7Hz,1H),4.74(q,J＝6.8Hz,1H),3.90(s,3H),1.47(d,J＝6.8Hz,3H)。
生物试验
激酶活性试验本发明化合物作为PI3K和mTOR激酶抑制剂的活性可以通过下述试验来进行评价的。激酶试验的一般性描述激酶试验通过检测掺入γ-33P-ATP的髓磷脂碱基蛋白(MBP)来完成的。制备20μg/mL的MBP(Sigma#M-1891)三羟甲基氨基甲烷缓冲盐溶液(TBS；50mM Tris pH 8.0,138mM NaCl,2.7mM KCl)，包被高结合性的白384孔板(Greiner)，每孔60μL。4℃，孵育24小时。之后用100μL TBS洗板3次。激酶反应在总体积为34μL的激酶缓冲液(5mM Hepes pH 7.6,15mM NaCl,0.01％牛血清白蛋白(Sigma#I-5506),10mM MgCl2,1mM DTT,0.02％TritonX-100)中进行。将化合物溶解在DMSO中，加入各孔中，DMSO的最终浓度为1％。每个数据测定两遍，每个化合物的测定至少进行两次试验。比如，酶的最终浓度为10nM或20nM。加入没有标记的ATP(10μM)和γ-33P标记的ATP(每孔2×106cpm，3000Ci/mmole)开始反应。反应在室温下震荡进行1个小时。384孔板用7x的PBS清洗，然后加入每孔50μL的闪烁液。用Wallac Trilux计亦可。
上述试验方法可以得到抑制的IC50和/或抑制常数Ki。IC50定义为在试验条件下，抑制50％酶活性时的化合物浓度。利用1/2log的稀释倍数做出包含10个浓度点的曲线，估算IC50值(例如，通过以下化合物浓度做出一条典型的曲线：10μM,3μM,1μM,0.3μM,0.1μM,0.03μM,0.01μM,0.003μM,0.001μM和0μM)。
PI3激酶的一般试验方案
PI3K(p110α/p85α)(h)[非放射性试验]
PI3K(p110α/p85α)(h)在含有10μM磷酸酰肌醇-4,5-二磷酸和MgATP(浓度根据需求确定)的缓冲溶液中孵育。加入ATP溶液后，开始反应。室温下孵育30分钟之后，向其中加入含有EDTA和生物素磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸的终止液来终止反应。最后，加入检测缓冲液，包括铕标记的抗GST单抗，GST标记的GRP1PH结构域和链亲和素-别藻蓝蛋白。孔板在时间分辨荧光模式下读数，均相时间分辨荧光(HTRF)信号由方程式HTRF＝10000×(Em665nm/Em620 nm)确定。
PI3K(p110β/p85α)(h)[非放射性试验]
PI3K(p110β/p85α)(h)在含有10μM磷酸酰肌醇-4,5-二磷酸和MgATP(浓度根据需求确定)的缓冲溶液中孵育。加入ATP溶液后，开始反应。室温下孵育30分钟之后，向其中加入含有EDTA和生物素磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸的终止液来终止反应。最后，加入检测缓冲液，包括铕标记的抗GST单抗，GST标记的GRP1PH结构域和链亲和素-别藻蓝蛋白。孔板在时间分辨荧光模式下读数，均相时间分辨荧光(HTRF)信号由方程式HTRF＝10000×(Em665nm/Em620 nm)确定。
PI3K(p110δ/p85α)(h)[非放射性试验]
PI3K(p110δ/p85α)(h)在含有10μM磷酸酰肌醇-4,5-二磷酸和MgATP(浓度根据需求确定)的缓冲溶液中孵育。加入ATP溶液后，开始反应。室温下孵育30分钟之后，向其中加入含有EDTA和生物素磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸的终止液来终止反应。最后，加入检测缓冲液，包括铕标记的抗GST单抗，GST标记的GRP1PH结构域和链亲和素-别藻蓝蛋白。孔板在时间分辨荧光模式下读数，均相时间分辨荧光(HTRF)信号由方程式HTRF＝10000×(Em665nm/Em620 nm)决定。
PI3K(p120γ)(h)[非放射性试验]
PI3K(p120γ)(h)在含有10μM磷酸酰肌醇-4,5-二磷酸和MgATP(浓度根据需求确定)的缓冲溶液中孵育。加入ATP溶液后，开始反应。室温下孵育30分钟之后，向其中加入含有EDTA和生物素磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸的终止液来终止反应。最后，加入检测缓冲液，包括铕标记的抗GST单抗，GST标记的GRP1PH结构域和链亲和素-别藻蓝蛋白。孔板在时间分辨荧光模式下读数，均相时间分辨荧光(HTRF)信号由方程式HTRF＝10000×(Em665 nm/Em620 nm)确定。
本发明中的激酶试验是由法国Eurofins公司来完成的(Eurofins Cerep SA,LeBois L'Evêque,86600Celle L'Evescault,France)，测试结果如表1所示，其中，+：>100nM；++：50-100nM；+++：10-50nM；++++：＜10nM。
表1.本发明化合物的激酶抑制数据
Figure BDA0003866228850000661
Figure BDA0003866228850000671
试验结果表明，本发明化合物对PI3Kγ激酶很好的抑制活性，并且针对其他亚型具有高的选择性。
细胞活性试验
本发明化合物作为PI3K激酶抑制剂的细胞活性可以通过下述试验来进行评价的。
细胞试验的一般性描述：
PI3K-α,γ亚型：首先化合物从储藏浓度用100％的DMSO稀释到5mM。第二步将5mM的化合物作为第一个点用100％DMSO 4倍稀释10个点。第三步用不含有血清的培养基250倍稀释，此时DMSO的浓度是0.4％。然后转50μL已经用培养基稀释好的化合物到50μL的细胞板里，此时DMSO的浓度是0.2％，化合物的最终浓度是10000nM,2500nM,625nM,156.25nM,39.06nM,9.77nM,2.44nM,0.61nM,0.15nM,0.04nM。
PI3K-β，δ亚型：首先将化合物从储藏浓度用100％的DMSO稀释到1.25mM。第二步将1.25mM的化合物作为第一个点用100％DMSO 4倍稀释10个点。第三步用不含有血清的培养基35.714倍稀释，然后转2.5μL已经用培养基稀释好的化合物到30μL的细胞板里，培养箱里孵育1个小时，再加入2.5μLanti-IgM这个时候DMSO的浓度是0.2％，化合物的最终浓度是2500nM,625nM,156.25nM,39.06nM,9.77nM,2.44nM,0.61nM,0.15nM,0.04nM,0.01nM.
PI3K-α抑制活性检测方法
SKOV-3细胞以60000个/50μL/孔的密度种入细胞培养级别的96孔板中，细胞培养基是不加血清的RPMI-1640.在37℃，5％CO2培养箱中培养过夜。在细胞里加入50μL/孔的待测化合物在37℃，5％CO2培养箱中培养60分钟，最终DMSO浓度为0.2％，吸出培养基，每孔加入50μL 1x裂解液。室温震荡45分钟。将16μL裂解物转入384板，加入4μL Cisbio公司的Phospho-AKT(Ser473)试剂盒的预混抗体。1000rpm/min离心一分钟，在22℃孵育4小时后用Spark读数(665nm/615nm)。
PI3K-β抑制活性检测方法
786-O细胞以30000个/50μL/孔的密度种入细胞培养级别的96孔板中，细胞培养基是不加血清的RPMI-1640.在37℃，5％CO2培养箱中培养过夜。在细胞里加入50μL/孔的待测化合物在37℃，5％CO2培养箱中培养60分钟，最终DMSO浓度为0.2％，吸出培养基，每孔加入50μL 1x裂解液。室温震荡45分钟。将16μL裂解物转入384板，加入4μL Cisbio公司的Phospho-AKT(Ser473)试剂盒的预混抗体。1000rpm/min离心一分钟，22℃孵育4小时后用Envision读数(665nm/615nm)。
PI3K-δ抑制活性检测方法
Raji细胞以每孔30μL，50,000个细胞种在96孔板中培养，细胞培养基是不加血清的RPMI-1640。细胞在5％CO2和37℃培养箱中孵育过夜。无血清饥饿18小时后，在细胞中加入2.5μL化合物(14X)，在培养箱中孵育60分钟。然后加入2.5μL(14X，用血清培养基稀释)的anti-human IgM(Jackson Immuno Research)，放入培养箱内刺激30分钟(终浓度为10μg/mL)。每孔加入11.5μL的4x裂解液。室温震荡45分钟。将16μL裂解物加入转入384板，加入4μLCisbio公司的Phospho-AKT(Ser473)试剂盒的预混抗体。1000rpm/min离心一分钟，22℃孵育4小时后用Spark读数(665nm/615nm)。
PI3K-γ抑制活性检测方法
用无血清DMEM培养基重悬RAW264.7细胞，在96孔板中每孔加入60000个/45μL的细胞悬液。细胞置于5％CO2，37℃培养箱中孵育过夜。无血清饥饿18小时后，加入50μL化合物，在培养箱中培养60min。然后加入5μL的25nM的C5a(R&D Systems，用血清培养基稀释)刺激5min。吸出培养基每孔加入50μL 1x裂解液。室温震荡45分钟。将16μL裂解物转入384板，加入4μL Cisbio公司的Phospho-AKT(Ser473)试剂盒的预混抗体。1000rpm/min离心一分钟，22℃.孵育4小时后用Spark读数(665nm/615nm)。
本发明中的激酶试验是由保诺生物科技(江苏)有限公司完成的，测试结果如表2所示，其中，+：>500nM；++：100-500nM；+++：50-100nM；++++：＜50nM。
阳性药IPI-549的合成参照专利WO2015143012A1。其化学结构式如下所示：
Figure BDA0003866228850000681
表2本发明化合物的细胞活性数据
Figure BDA0003866228850000682
试验结果表明，本发明化合物对PI3Kγ具有显著的抑制活性，并对其他PI3K亚型具有非常明显的选择性。本发明化合物相对阳性药IPI-549具有更高的选择性。
本发明化合物在人肝微粒体中代谢稳定性研究
本发明化合物作为PI3K激酶抑制剂的代谢稳定性可以通过下述试验来进行评价。
肝微粒体稳定性试验的一般性描述：
将受试化合物与人肝微粒体进行共孵育，加入NADPH，反应启动。在0，5，15，30和60分钟分别取出30微升并转移至300微升含有内标的乙腈中终止反应。随后剧烈涡旋1分钟，再在4℃以下以4000rpm的转速离心15分钟。蛋白沉淀后，取出100微升上层清液，加入100微升蒸馏水稀释后由LC-MS/MS方法分析。根据受试化合物在孵育体系中的清除半衰期算出体外内在清除率。维拉帕米作为对照化合物，均平行孵育5分钟。
数据分析：
剩余百分比(％Remaining)由非零时间点样品与零时刻样品中受试化合物的峰面积之比计算出。受试化合物清除半衰期(T1/2，min)以及体外内在清除率(CLint,μL.min-1.mg-1)由以下方程式得出：
Figure BDA0003866228850000691
/>
Figure BDA0003866228850000692
Figure BDA0003866228850000693
本发明实施例化合物与IPI-549的人肝微粒体稳定性的相关参数如表3所示。
表3本发明化合物的人肝微粒体稳定性的相关参数
化合物 半衰期(T<sub>1/2</sub>，min)
IPI-549 122.6
实施例13 63.7
实施例16 154.7
实施例21 77.2
实施例28 656.9
实施例37 94.7
试验结果表明，与IPI-549相比，本发明实施例16和实施例28的半衰期明显延长，人肝微粒体稳定性显著提高。对比本发明实施例16和实施例28，当吡唑上甲基的氢被氘取代后，人肝微粒体稳定性均显著提高；同样，对比本发明实施例21和实施例37，吡唑上甲基的氢被氘取代后，人肝微粒体稳定性亦均显著提高。本发明化合物CD-1小鼠口服药代动力学研究
本发明化合物作为PI3K激酶抑制剂的药代动力学研究可以通过下述试验来进行评价。
药代动力学试验的一般性描述：
以CD-1小鼠为受试动物，采用LC-MS/MS方法测定灌胃给予本发明化合物，测定其不同时刻血浆中的药物浓度。静脉注射给药剂量及配方：2mg/kg，5％NMP/40％PEG400/55％PBS；口服剂量给药及配方：10.0mg/kg，0.5％(w/v)羟甲基纤维素和0.05％Tween 80的水溶液。称取适量待测化合物，加入到适量的0.5％(w/v)羟甲基纤维素和0.05％Tween 80的水溶液，涡旋和超声，最终配置成浓度为1mg/mL的待测溶液。静脉注射组采样时间为：给药后0.0833,0.25,0.5,1,2,4,8,24h。口服组采样时间为：0.25,0.5,1,2,4,8,24h。最后采用LC-MS/MS法测定不同的化合物静脉注射和口服给药后CD-1小鼠血浆中的待测化合物的含量。
表4本发明化合物的药代动力学参数
Figure BDA0003866228850000694
试验结果表明，本发明实施例16和实施例37在CD-1小鼠中的药代吸收良好，半衰期较长，生物利用度高，均具有良好的药代动力学性质。
最后，需要注意的是，还有其他方式用来实施本发明。相应地，本发明的实施例是将作为例证进行说明，但并不限于本发明所描述的内容，还可能是在本发明范围内所作的修改或在权利要求中所添加的等同内容。本发明所引用的所有出版物或专利都将作为本发明的参考文献。

Claims (25)

1.化合物，其具有式(I)所示结构：
Figure FDA0003866228840000011
或其立体异构体、互变异构体、氘代物、氮氧化物、溶剂化物、或药学上可接受的盐；
其中，
X是-C(Rc)-、或N；
Z1和Z2各自独立地为-C(R4d)-或N；
Ra、Rb和Rc各自独立地为H、D、F、Cl、C1-3烷基、C1-6氘代烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷基、C1-3羟基烷基、C1-3氨基烷基、C1-3氰基烷基、C1-6氘代烷氧基、被1至5个氘取代的C1-6卤代烷基、被1至5个氘取代的C1-6羟基烷基、被1至5个氘取代的C3-8环烷基、或被1至5个氘取代的C1-9杂芳基；
R1是H、D、-C1-6烷基-NReRf、-C(＝O)R7、-C(＝O)OR7a、-C(＝O)NR7R7a、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6卤代烷基、C3-8环烷基、C2-9杂环基、C6-10芳基、或C1-9杂芳基；其中R1任选地被0、1、2、3或4个R5取代；
R2在每次出现时，分别独立地为H、D、F、Cl、Br、I、-OH、-CN、-NO2、-NReRf、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、C1-6氰基烷基、C2-9杂环基、C3-8环烷基、C6-10芳基、或C1-9杂芳基；其中R2在每次出现时，独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6烷氧基和C1-6卤代烷基的基团取代；
R3是H、D、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C3-8氘代环烷基、C2-9杂环基、C6-10芳基、或C1-9杂芳基；其中R3任选地被0、1、2、3、4或5个R6取代；
R4a、R4b、R4c和R4d各自独立地为H、D、F、Cl、-CN、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、C1-6氰基烷基、C2-9杂环基、C3-8环烷基、C6-10芳基、或C1-9杂芳基；其中R4a、R4b、R4c和R4d各自独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6烷氧基、C1-6氘代烷氧基、C1-6卤代烷基和C1-6卤代氘代烷基的基团取代；
R5和R6，在每次出现时，分别独立地为H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-CN、-NO2、-NReRf、-C(＝O)R7、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、C1-6氰基烷基、C2-9杂环基、C3-8环烷基、C6-10芳基、或C1-9杂芳基；其中所述各-NReRf、-C(＝O)R7、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、C1-6氰基烷基、C2-9杂环基、C3-8环烷基、C6-10芳基和C1-9杂芳基独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6烷氧基和C1-6卤代烷基的基团取代；
Re、Rf、R7和R7a，在每次出现时，分别独立地为H、D、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷基C1-6烷基、C2-9杂环基、C2-9杂环基C1-6烷基、C6-10芳基、C6-10芳基C1-6烷基、C1-9杂芳基、或C1-9杂芳基C1-6烷基；其中所述各C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷基C1-6烷基、C2-9杂环基、C2-9杂环基C1-6烷基、C6-12芳基、C6-12芳基C1-6烷基、C1-9杂芳基和C1-9杂芳基C1-6烷基独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6烷氧基和C1-6卤代烷基的基团取代；和
n是0、1、2、或3；
条件是：1)当R1是吡唑基时、其中R1任选地被0、1、2、3或4个R5取代，则各R2、R4a、R4b和R4c中的至少一个独立地为F、Cl、-CN、C1-6烷氧基、C1-6氘代烷基、C1-6氘代烷氧基、被1至5个氘取代的C1-6卤代烷基、被1至5个氘取代的C1-6羟基烷基、被1至5个氘取代的C3-8环烷基、或被1至5个氘取代的C1-9杂芳基；或者2)当R1是H、D、-C1-6烷基-NReRf、-C(＝O)R7、-C(＝O)OR7a、-C(＝O)NR7R7a、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6卤代烷基、C3-8环烷基、C2-9杂环基、C6-10芳基、或除吡唑基以外的C1-9杂芳基时、其中R1任选地被0、1、2、3或4个R5取代，则各Ra、Rb、Rc、R2、R3、R4a、R4b、R4c和R4d中的至少一个独立地为D(氘)、C1-6氘代烷基、C1-6氘代烷氧基、被1至5个氘取代的C1-6卤代烷基、被1至5个氘取代的C1-6羟基烷基、被1至5个氘取代的C3-8环烷基、或被1至5个氘取代的C1-9杂芳基。
2.根据权利要求1所述的化合物，其具有式(Ia)所示结构：
Figure FDA0003866228840000021
或其立体异构体、互变异构体、氘代物、氮氧化物、溶剂化物、或药学上可接受的盐。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中，R1是苯基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基、噻唑基、咪唑基、噁唑基、噻二唑基、
Figure FDA0003866228840000022
Figure FDA0003866228840000023
其中Y1是O、S、或-NH-；
Y6是O、或-NH-；
t3和t4各自独立地为1、2、3或4；和
其中R1任选地被0、1、2、3或4个R5取代；
条件是：1)当R1为
Figure FDA0003866228840000024
时、其中R1任选地被0、1、2、3或4个R5取代，则各R2、R4a、R4b和R4c中的至少一个独立地为F、Cl、-CN、C1-3烷氧基、C1-3氘代烷基、C1-3氘代烷氧基、被1至5个氘取代的C1-3卤代烷基、被1至5个氘取代的C1-3羟基烷基、被1至5个氘取代的C3-6环烷基、或被1至5个氘取代的C1-9杂芳基；2)当R1为苯基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基、噻唑基、咪唑基、噁唑基、噻二唑基、
Figure FDA0003866228840000031
时、其中R1任选地被0、1、2、3或4个R5取代，则各Ra、Rb、Rc、R2、R3、R4a、R4b、R4c和R4d中的至少一个独立地为D(氘)、C1-3氘代烷基、C1-3氘代烷氧基、被1至5个氘取代的C1-3卤代烷基、被1至5个氘取代的C1-3羟基烷基、被1至5个氘取代的C3-6环烷基、或被1至5个氘取代的C1-9杂芳基。
4.根据权利要求1-3任一项所述的化合物，其中，R4a、R4b、R4c和R4d各自独立地为H、D、F、Cl、C1-3烷基、C1-3氘代烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷基、C1-3卤代烷氧基、C1-3羟基烷基、C1-3氨基烷基、C1-3氰基烷基、C3-6杂环基、C3-6氘代杂环基、C3-6环烷基、C3-6氘代环烷基、苯基、或5-6个原子组成的杂芳基；其中R4a、R4b、R4c和R4d各自独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-3烷基、C1-3氘代烷基、C1-3烷氧基、C1-3氘代烷氧基、C1-3卤代烷基和C1-3卤代氘代烷基的基团取代。
5.根据权利要求1-3任一项所述的化合物，其中，R4a、R4b、R4c和R4d各自独立地为H，F，Cl，D，-CN，-OCH3，-OCH2CH3，
Figure FDA0003866228840000032
Figure FDA0003866228840000033
6.化合物，其具有式(II)所示结构：
Figure FDA0003866228840000034
或其立体异构体、互变异构体、氘代物、氮氧化物、溶剂化物、或药学上可接受的盐；
其中，
X是-C(Rc)-、或N；
W是C3-10环烷基、C2-9杂环基、C6-10芳基、或C1-9杂芳基；其中W任选地被0、1、2、3或4个R4取代；
Ra、Rb和Rc各自独立地为H、D、F、Cl、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、或C1-6氰基烷基；
R1是-C1-3羟基烷基-C(＝O)OR7a，-C(＝O)OR7a，-C(＝O)NR7R7a，
Figure FDA0003866228840000035
Figure FDA0003866228840000041
其中Y2和Y3各自独立地为-(CH2)t1-、-(CH2)t1-L-、-(CH2)t1-L-(CH2)t2-、O、或-NH-；
Y4是-(CH2)t1-、-(CH2)t1-L-、-(CH2)t1-L-(CH2)t2-、-C(＝O)-、O、S、或-NH-；
Y5是-CH-、或N；
Y6是O、或-NH-；
Y7是O、或-NH-；
L是-C(＝O)-、O、S、或-NH-；
t1、t2和t3在每次出现时，各自独立地为1、2、3或4；
t4是1；t5是1或2；和
Figure FDA0003866228840000042
代表单键或双键；和
其中R1任选地被0、1、2、3或4个R5取代；
R2在每次出现时，分别独立地为H、D、F、Cl、Br、I、-OH、-CN、-NO2、-NReRf、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、C1-6氰基烷基、C2-9杂环基、C3-8环烷基、C6-10芳基、或C1-9杂芳基；其中R2在每次出现时，独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6烷氧基和C1-6卤代烷基的基团取代；
R3是H、D、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、C3-8氘代环烷基、C2-9杂环基、C6-10芳基、或C1-9杂芳基；其中R3任选地被0、1、2、3、4或5个R6取代；
R4在每次出现时，分别独立地为H、D、F、Cl、Br、I、-OH、-CN、-NO2、-NReRf、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、C1-6氰基烷基、C2-9杂环基、C3-8环烷基、C6-10芳基、或C1-9杂芳基；其中R4在每次出现时，独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6烷氧基和C1-6卤代烷基的基团取代；
R5和R6，在每次出现时，分别独立地为H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-CN、-NO2、-NReRf、-C(＝O)R7、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、C1-6氰基烷基、C2-9杂环基、C3-8环烷基、C6-10芳基、或C1-9杂芳基；其中所述各-NReRf、-C(＝O)R7、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、C1-6氰基烷基、C2-9杂环基、C3-8环烷基、C6-10芳基和C1-9杂芳基独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6烷氧基和C1-6卤代烷基的基团取代；
R5a是-C(＝O)R7、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、C1-6氰基烷基、C2-9杂环基、C3-8环烷基、C6-10芳基、或C1-9杂芳基；其中所述各-C(＝O)R7、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C1-6羟基烷基、C1-6氨基烷基、C1-6氰基烷基、C2-9杂环基、C3-8环烷基、C6-10芳基和C1-9杂芳基独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6烷氧基和C1-6卤代烷基的基团取代；
Re、Rf、R7和R7a，在每次出现时，分别独立地为H、D、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷基C1-6烷基、C2-9杂环基、C2-9杂环基C1-6烷基、C6-10芳基、C6-10芳基C1-6烷基、C1-9杂芳基、或C1-9杂芳基C1-6烷基；其中所述各C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷基C1-6烷基、C2-9杂环基、C2-9杂环基C1-6烷基、C6-12芳基、C6-12芳基C1-6烷基、C1-9杂芳基和C1-9杂芳基C1-6烷基独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6烷氧基和C1-6卤代烷基的基团取代；和
n是0、1、2、或3。
7.根据权利要求6所述的化合物，其中，W是
C3-8环烷基、C3-8杂环基、
Figure FDA0003866228840000051
Figure FDA0003866228840000052
其中Z1、Z2和Z3各自独立地为-CH-、或N；和
其中W任选地被0、1、2、3或4个R4取代。
8.根据权利要求6所述的化合物，其具有式(IIa)所示结构：
Figure FDA0003866228840000053
或其立体异构体、互变异构体、氘代物、氮氧化物、溶剂化物、或药学上可接受的盐；
其中，m是0、1、2或3。
9.根据权利要求6-8任一项所述的化合物，其中，R1是
Figure FDA0003866228840000054
/>
Figure FDA0003866228840000055
Figure FDA0003866228840000056
其中R1任选地被0、1、2、3或4个R5取代。
10.根据权利要求6-8任一项所述的化合物，其中，R4在每次出现时，分别独立地为H、D、F、Cl、Br、I、-OH、-CN、-NO2、-NH2、C1-3烷基、C1-3氘代烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷基、C1-3卤代烷氧基、C1-3羟基烷基、C1-3氨基烷基、C1-3氰基烷基、C3-6杂环基、C3-6环烷基、苯基、或5-6个原子组成的杂芳基；其中R4在每次出现时，分别独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-3烷基、C1-3氘代烷基、C1-3烷氧基和C1-3卤代烷基的基团取代。
11.根据权利要求6-8任一项所述的化合物，其中，R5a是-C(＝O)R7、C1-4烷基、C1-4氘代烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷氧基、C1-4羟基烷基、C1-4氨基烷基、C1-4氰基烷基、C3-6杂环基、C3-6环烷基、C6-10芳基、或C1-9杂芳基；其中所述各-C(＝O)R7、C1-4烷基、C1-4氘代烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷氧基、C1-4羟基烷基、C1-4氨基烷基、C1-4氰基烷基、C3-6杂环基、C3-6环烷基、C6-10芳基和C1-9杂芳基独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-6烷基、C1-4氘代烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤代烷基的基团取代。
12.根据权利要求1-3和6-8任一项所述的化合物，其中，R3是环丙基、吡啶基、或苯基；其中R3任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、F、Cl、Br、I、-OH、-CN、-NO2、-NReRf、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C1-3氘代烷基和C1-3卤代烷基的基团取代。
13.根据权利要求1-3和6-8任一项所述的化合物，其中，R5和R6在每次出现时，分别独立地为H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-CN、-NO2、-NReRf、-C(＝O)R7、C1-3烷基、C1-3氘代烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷基、C1-3羟基烷基、C3-6环烷基、苯基、或5-6个原子组成的杂芳基；其中所述各-NReRf、-C(＝O)R7、C1-3烷基、C1-3氘代烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷基、C1-3羟基烷基、C3-6环烷基、苯基和5-6个原子组成的杂芳基独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-3烷基、C1-3氘代烷基、C1-3烷氧基和C1-3卤代烷基的基团取代。
14.根据权利要求1-3和6-8任一项所述的化合物，其中，R5和R6在每次出现时，分别独立地为H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-CN、-NO2、-NReRf、甲基、乙基、环丙基、-CD3、-OCD3、-CF3、-CH2CH2OH、-C(＝O)CH3、-C(＝O)CH2CH3、或-CH2CH2OCH3。
15.根据权利要求1-3和6-8任一项所述的化合物，其中，Ra、Rb和Rc各自独立地为H、D、F、-CN、-NO2、-NReRf、甲基、乙基、异丙基、-CD3、-CHD2、-CH2D、甲氧基、乙氧基、卤代甲基、卤代乙基、或-CH2CH2OH。
16.根据权利要求1-3和6-8任一项所述的化合物，其中，Re、Rf、R7和R7a，在每次出现时，分别独立地为H、D、C1-4烷基、C1-4氘代烷基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、C3-6环烷基、C3-6环烷基C1-4烷基、C3-6杂环基、C3-6杂环基C1-4烷基、C6-10芳基、C6-10芳基C1-4烷基、C1-9杂芳基、或C1-9杂芳基C1-4烷基；其中所述各C1-4烷基、C1-4氘代烷基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、C3-6环烷基、C3-6环烷基C1-4烷基、C3-6杂环基、C3-6杂环基C1-4烷基、C6-10芳基、C6-10芳基C1-4烷基、C1-9杂芳基和C1-9杂芳基C1-4烷基独立任选地被0、1、2、3、4或5个独立地选自H、D、氧代(＝O)、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN、-NO2、C1-4烷基、C1-4氘代烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤代烷基的基团取代。
17.根据权利要求1所述的化合物，其为具有以下结构之一的化合物：
Figure FDA0003866228840000061
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或其立体异构体、互变异构体、氘代物、氮氧化物、溶剂化物、或药学上可接受的盐。
18.根据权利要求6所述的化合物，其为具有以下结构之一的化合物：
Figure FDA0003866228840000082
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或其立体异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、或药学上可接受的盐。
19.药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1-18任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、或药学上可接受的盐，以及药学上可接受的辅料、稀释剂或载体、或其组合。
20.根据权利要求19所述的药物组合物，其进一步包含附加治疗剂。
21.使用根据权利要求1-18任一项所述的化合物或权利要求19-20任一项所述的药物组合物在制备用于预防、处理、治疗、和/或减轻PI3-激酶介导的疾病、病症、和/或病况，或抑制PI3-激酶活性的药物中的用途。
22.根据权利要求21所述的用途，其中所述PI3-激酶介导的疾病、病症、和/或病况选自呼吸道疾病，病毒感染，非病毒呼吸道感染，过敏性疾病，自身免疫性疾病，炎性疾病，心血管疾病，恶性血液病，神经退行性疾病，胰腺炎，多器官衰竭，肾病，血小板聚集，癌症，***活力，移植排斥，移植物排斥，肺损伤或疼痛。
23.根据权利要求21所述的用途，其中所述PI3-激酶介导的疾病、病症、和/或病况选自哮喘，慢性阻塞性肺病(COPD)，病毒性呼吸道感染，病毒性呼吸道疾病恶化，曲霉病，利什曼病，过敏性鼻炎，过敏性皮肤炎，风湿性关节炎，多发性硬化，炎性肠病，血栓症，动脉粥样硬化，恶性血液病，神经退行性疾病，胰腺炎，多器官衰竭，肾病，血小板聚集，癌症，***活力，移植排斥，移植物排斥，肺损伤，与类风湿性关节炎或骨关节炎相关的疼痛，背痛，全身炎症性疼痛，肝后神经痛，糖尿病性神经病变，炎症性神经性疼痛(外伤)，三叉神经痛或中枢性疼痛。
24.根据权利要求22或23所述的用途，其中所述癌症选自急性骨髓性白血病，脊髓发育异常综合征，骨髓增生病，慢性骨髓性白血病，T细胞急性淋巴细胞白血病，B细胞急性淋巴细胞白血病，非霍奇金淋巴瘤，B细胞淋巴瘤，实体瘤，或乳腺癌。
25.根据权利要求21所述的用途，其中所述PI3-激酶是PI3K-γ。
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