CN115824932A - 一种检测硫酸盐还原菌浓度的方法及试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本申请公开了一种检测硫酸盐还原菌浓度的方法及试剂盒。本申请检测硫酸盐还原菌浓度的方法，包括对待测液施加电压，使待测液中的颗粒经过微孔，产生电压或者电流的脉冲，通过测量电压或者电流的脉冲信号获得待测液中颗粒的粒径和浓度，选取粒径范围500nm～1300nm颗粒的浓度作为硫酸盐还原菌浓度。本申请检测硫酸盐还原菌浓度的方法，利用硫酸盐还原菌经过微孔产生的脉冲信号进行粒径和浓度检测，具有准确度高、检测限低等优点；并且，本申请的检测方法简单、易操作，能够用于各种样品的硫酸盐还原菌浓度检测，尤其适用于水产养殖、油田管道等特殊环境的硫酸盐还原菌检测和监控。
Description
技术领域
本申请涉及硫酸盐还原菌浓度检测技术领域，特别是涉及一种检测硫酸盐还原菌浓度的方法及试剂盒。
背景技术
硫酸盐还原菌(Sulfate-Reducing Bacteria，简称SRB)是一类形态各异、营养类型多样、能利用硫酸盐或者其他氧化态硫化物作为电子受体来异化有机物质的厌氧微生物，SRB的生物腐蚀带来巨大的危害和损失。
目前，对于样品中的SRB细菌的浓度测试，有如下几种方法：(1)平行绝迹稀释法，即对样品进行倍比稀释后，分不同试管进行平行培养，然后采用显微镜观察样品沉淀物，根据沉淀物及其试管的稀释倍数判定SRB细胞的浓度。但是，这种方法通常需要培养14天甚至更长时间。(2)免疫学方法，SRB胞内有一种APS还原酶，是SRB的特征酶；APS还原酶能够催化腺苷-5’-磷酸硫酸盐还原酶发生还原反应，并生产相关特定产物；利用该产物与显色剂发生显色反应的强弱即可判定SRB的细菌浓度。但是，这种方法无法测试比较低浓度的细菌样品。(3)三磷酸腺苷(ATP)法，ATP是所有活的生物细胞中都具有的一种化合物，其含量与细胞浓度成正比。但是，该方法只能检测微生物总数，不能特异性的检测SRB，容易受到其他微生物的干扰，测试不准确。(4)PCR法，即将样品中的细菌进行破裂，对细菌DNA进行PCR扩增，通过PCR测试Ct值反推样品中的细菌浓度。但是，通常SRB细菌的样品中成分复杂，会影响PCR的扩增效果，从而影响测试结果。
因此，目前尚没有比较好的方法对硫酸盐还原菌进行准确的浓度测试。如何快速、准确的检测硫酸盐还原菌浓度，仍然是本领域亟待解决的问题。
发明内容
本申请的目的是提供一种新的检测硫酸盐还原菌浓度的方法及试剂盒。
本申请采用了以下技术方案：
本申请的一方面公开了一种检测硫酸盐还原菌浓度的方法，包括对待测液施加电压，使待测液中的颗粒经过微孔，产生电压或者电流的脉冲，通过测量电压或者电流的脉冲信号获得待测液中颗粒的粒径和浓度，选取粒径范围500nm～1300nm颗粒的浓度作为硫酸盐还原菌浓度。
需要说明的是，本申请创造性的采用电阻抗法，利用库尔特原理，对硫酸盐还原菌的待测液进行浓度检测，并根据研究和分析，将待测液中粒径范围为500nm～1300nm的颗粒的浓度作为硫酸盐还原菌浓度。本申请的检测方法能够快速、准确的检测硫酸盐还原菌的浓度；原则上，只要待测液中含有一个硫酸盐还原菌，在其通过微孔时就会产生一个脉冲信号，就能够被检测到，灵敏度高、检测限低。
还需要说明的是，本申请的待测液通常采用硫酸盐还原菌的培养产物或者培养产物经过离心后的上清液，待测液中一般不会含有除硫酸盐还原菌以外的其他颗粒；因此，待测液中检测到的颗粒一般都是硫酸盐还原菌。但是，为了排除其他可能的干扰，本申请将特定粒径范围的颗粒的浓度作为硫酸盐还原菌浓度；该特定粒径范围是本申请经过大量研究和实践分析获得的能够涵盖大部分硫酸盐还原菌大小的粒径范围，即500nm～1300nm。
本申请的一种实现方式中，对待测液施加电压的方式包括，采用两个带电极的液槽，将待测液放置于其中一个液槽中，另一个液槽放置电解液，两个液槽由微孔连通，在两个液槽的电极上施加电压，使待测液中的颗粒通过微孔进入另一个液槽中，从而在电极上产生电压或者电流的脉冲信号。
本申请的一种实现方式中，本申请检测硫酸盐还原菌浓度的方法还包括对待测样品进行酸性溶液滴定，直至得到清亮溶液，对清亮溶液进行离心，取上清液作为待测液。
需要说明的是，本申请的待测样品一般是采集样本的硫酸盐还原菌培养产物，在硫酸盐还原菌培养的过程中可能会产生一些沉淀，为了避免这些沉淀影响检测结果，本申请的改进方案中，先对待测样品进行酸性溶液滴定，滴定完成后，离心取上清液作为待测液。可以理解，在硫酸盐还原菌培养的过程中，由于会有沉淀产生，使培养液浑浊，在酸性溶液滴定时培养产物会逐渐清亮。当然，由于硫酸盐还原菌仍然是悬浮于培养液和上清液中；因此，酸性溶液滴定后并不是完全的透亮状态，而是呈相对清亮的状态。
本申请的一种实现方式中，酸性溶液包括盐酸、硝酸中的至少一种。
需要说明的是，本申请的酸性溶液滴定，一方面需要能够溶解沉淀，另一方面要尽量避免对硫酸盐还原菌造成不利影响；因此，优选采用盐酸或硝酸。可以理解，在本申请的发明构思下，还可以采用其他类似功能的酸性溶液，不仅限于盐酸、硝酸。
本申请的一种实现方式中，离心条件为在不超过3000转/分钟的转速下离心5～15分钟。
需要说明的是，本申请离心取上清液的目的主要是去除一些可能的大颗粒沉淀；但是，为了避免硫酸盐还原菌也被离心沉淀，本申请优选的在不超过3000转/分钟的转速下进行离心。
本申请的一种实现方式中，微孔的孔径为2000nm～40000nm。
需要说明的是，微孔主要是为了硫酸盐还原菌能够通过，从而产生电压或者电流的脉冲信号；因此，微孔的孔径取决于本申请的硫酸盐还原菌的大小。
本申请的一种实现方式中，本申请检测硫酸盐还原菌浓度的方法还包括对待测样品进行梯度稀释，分别对梯度稀释的样品进行恒温培养；然后，分别对培养产物进行硫酸盐还原菌浓度检测；根据梯度稀释倍数，对应的硫酸盐还原菌检测浓度，和培养时间，计算待测样品原始硫酸盐还原菌浓度。
需要说明的是，对待测样品进行梯度稀释和恒温培养后再进行硫酸盐还原菌浓度检测，主要是为了确保待测样品中含有足量的硫酸盐还原菌。可以理解，本申请进行恒温培养的对象就是硫酸盐还原菌；因此，可以采用现有的硫酸盐还原菌培养液进行恒温培养，在此不作具体限定。
本申请的一种实现方式中，计算待测样品原始硫酸盐还原菌浓度，包括根据硫酸盐还原菌的生长曲线确定所述培养时间对应的硫酸盐还原菌的培养扩增倍数，根据以下公式计算待测样品原始硫酸盐还原菌浓度，
待测样品原始硫酸盐还原菌浓度＝硫酸盐还原菌检测浓度×稀释倍数÷培养扩增倍数。
本申请的一种实现方式中，计算待测样品原始硫酸盐还原菌浓度，还包括分别根据各梯度稀释样品计算待测样品原始硫酸盐还原菌浓度，取各梯度稀释样品计算结果的平均值作为最终的待测样品原始硫酸盐还原菌浓度。
需要说明的是，原则上，根据任何一个梯度稀释样品即可直接计算出待测样品原始硫酸盐还原菌浓度；但是，为了确保准确性，本申请优选采用各梯度稀释样品计算结果的平均值作为最终的待测样品原始硫酸盐还原菌浓度。
本申请的一种实现方式中，恒温培养的条件为35℃培养12～100小时。
本申请的一种实现方式中，控制恒温培养的条件，使培养产物的培养扩增倍数在10倍以上。
需要说明的是，本申请绘制了硫酸盐还原菌培养0至117小时的生长曲线，结果显示，从培养开始直至约培养100小时这段时间内，随着培养时间增加，培养扩增倍数呈比较良好的增长；培养100小时后，虽然培养扩增倍数也在增长，但是相对缓慢。因此，本申请优选的恒温培养时间为12～100小时。原则上，使培养产物的培养扩增倍数在10倍以上能够得到比较好的检测结果；因此，培养12～100小时基本可以满足该要求。至于培养温度一般为35℃，当然，也可以根据需求进行试验允许范围内的调整。另外，本申请的检测方法，就算对待测样品进行梯度稀释和恒温培养，也只需要较短的培养时间即可满足检测需求，具有培养时间短的优点。
本申请的一种实现方式中，恒温培养的培养液为无颗粒物质的培养液，无颗粒物质的培养液由NaCl、K2HPO4、MgSO4、Fe(NH4)2(SO4)2、FeSO4、NH4Cl、Na2SO4、CaCl2、70％乳酸、酵母膏和水组成。
本申请的一种实现方式中，无颗粒物质的培养液中各组分的浓度为NaCl4g/L、K2HPO4 0.5g/L、MgSO4 1.5g/L、Fe(NH4)2(SO4)2 1g/L、FeSO4 1g/L、NH4Cl1g/L、Na2SO4 0.5g/L、CaCl2 0.2g/L、70％乳酸5g/L、酵母膏1g/L。
需要说明的是，原则上，现有的硫酸盐还原菌的培养液都能够适用于本申请；但是，本申请的浓度检测方法要求培养产物中含有尽量少的沉淀，并且培养液本身需要没有颗粒物质；因此，本申请对培养液进行了优化和改进。采用本申请改进配方的无颗粒物质的培养液，能够使得培养产物中的沉淀尽量少，从而减小由此造成的检测干扰，提高检测的准确性。可以理解，以上各组分的具体浓度是本申请的一种实现方式中具体采用的浓度，在不影响培养液性能和培养效果的情况下，可以对各组分浓度进行适当调整。
本申请的一种实现方式中，对待测样品进行梯度稀释采用恒温培养的培养液进行，即优选采用本申请的无颗粒物质的培养液。
本申请的一种实现方式中，梯度稀释的倍数具体包括10倍、100倍、1000倍、10000倍和100000倍。
本申请的一种实现方式中，电解液同样采用恒温培养的培养液，即优选采用本申请的无颗粒物质的培养液。
需要说明的是，电解液的作用是为电阻抗法提供液体环境，同时也是硫酸盐还原菌的检测环境；因此，优选采用恒温培养的培养液，即本申请的无颗粒物质的培养液。
本申请的一种实现方式中，本申请检测硫酸盐还原菌浓度的方法还包括根据各梯度稀释样品的硫酸盐还原菌检测浓度和稀释倍数的线性相关性判断计算获得的待测样品原始硫酸盐还原菌浓度的准确性，线性相关性越好，准确性越高。
需要说明的是，本申请的待测样品原始硫酸盐还原菌浓度是根据硫酸盐还原菌检测浓度、稀释倍数和培养扩增倍数计算获得；因此，如果硫酸盐还原菌检测浓度和稀释倍数的线性相关性越好，证明直接通过公式计算获得的待测样品原始硫酸盐还原菌浓度越准确。
本申请的一种实现方式中，本申请检测硫酸盐还原菌浓度的方法还包括采用阴性参照样品和\或阳性参照样品进行对照试验；其中，阴性参照样品为不含细菌、且与待测液组分相同的溶液；阳性参照样品为已知硫酸盐还原菌浓度、且与待测液组分相同的菌悬液。
需要说明的是，本申请的一种实现方式中，阴性参照样品和阳性参照样品都按照待测样品相同的方法进行梯度稀释、恒温培养、酸性溶液滴定和硫酸盐还原菌浓度检测；因此，阴性参照样品和阳性参照样品的检测结果能够作为整个检测过程的质控和参考。例如，本申请的一种实现方式中，直接根据阴性参照样品的硫酸盐还原菌检测浓度，去除本底浓度。又或者，可以根据阳性参照样品的原始硫酸盐还原菌浓度计算结果，校正待测样品原始硫酸盐还原菌浓度的计算结果。
本申请的另一方面公开了一种检测硫酸盐还原菌浓度的试剂盒，其包括无颗粒物质的培养液，无颗粒物质的培养液由NaCl、K2HPO4、MgSO4、Fe(NH4)2(SO4)2、FeSO4、NH4Cl、Na2SO4、CaCl2、70％乳酸、酵母膏和水组成。
本申请的一种实现方式中，本申请试剂盒的无颗粒物质的培养液中各组分的浓度为NaCl 4g/L、K2HPO4 0.5g/L、MgSO4 1.5g/L、Fe(NH4)2(SO4)2 1g/L、FeSO41g/L、NH4Cl 1g/L、Na2SO4 0.5g/L、CaCl2 0.2g/L、70％乳酸5g/L、酵母膏1g/L。
需要说明的是，在对待测样品进行硫酸盐还原菌浓度检测时，采用本申请试剂盒中的无颗粒物质的培养液，对待测样品进行恒温培养，不仅能够培养获得足够数量的硫酸盐还原菌，而且培养产物中的沉淀相对较少，能够减小对检测结果的干扰，提高检测准确性。并且，本申请的无颗粒物质的培养液，还能够作为梯度稀释的稀释液，以及电阻抗法的电解液，具有多种功能和用途，使用简单方便。
本申请的有益效果在于：
本申请检测硫酸盐还原菌浓度的方法，利用硫酸盐还原菌经过微孔产生的脉冲信号进行粒径和浓度检测，具有准确度高、检测限低等优点；并且，本申请的检测方法简单、易操作，能够用于各种样品的硫酸盐还原菌浓度检测，尤其适用于水产养殖、油田管道等特殊环境的硫酸盐还原菌检测和监控。
附图说明
图1是本申请实施例检测组件的结构示意图；
图2是本申请实施例中10倍稀释样品培养12小时的SRB粒径浓度分布图；
图3是本申请实施例中100倍稀释样品培养12小时的SRB粒径浓度分布图；
图4是本申请实施例中1000倍稀释样品培养12小时的SRB粒径浓度分布图；
图5是本申请实施例中10000倍稀释样品培养12小时的SRB粒径浓度分布图；
图6是本申请实施例中100000倍稀释样品培养12小时的SRB粒径浓度分布图；
图7是本申请实施例中阳性对照组样品培养12小时的SRB粒径浓度分布图；
图8是本申请实施例中培养12小时各梯度稀释样品的检测浓度线性图；
图9是本申请实施例中10倍稀释样品培养96小时的SRB粒径浓度分布图；
图10是本申请实施例中100倍稀释样品培养96小时的SRB粒径浓度分布图；
图11是本申请实施例中1000倍稀释样品培养96小时的SRB粒径浓度分布图；
图12是本申请实施例中10000倍稀释样品培养96小时的SRB粒径浓度分布图；
图13是本申请实施例中100000倍稀释样品培养96小时的SRB粒径浓度分布图；
图14是本申请实施例中培养96小时各梯度稀释样品的检测浓度线性图；
图15是本申请实施例中硫酸盐还原菌的生长曲线图。
具体实施方式
现有的硫酸盐还原菌浓度检测方法普遍存在检测成本高、灵敏度低、准确度低等缺陷和不足。
因此，本申请采用微孔电阻抗法，设计了一种全新的基于单颗粒检测的硫酸盐还原菌含量的检测方法，即对待测液施加电压，使待测液中的颗粒经过微孔，产生电压或者电流的脉冲，通过测量电压或者电流的脉冲信号获得待测液中颗粒的粒径和浓度，选取粒径范围500nm～1300nm颗粒的浓度作为硫酸盐还原菌浓度。
本申请的一种实现方式中，直接采用库尔特粒度仪及两个带电极的液槽即可进行检测，不仅具有准确度高、检测限低等优点，而且检测成本低、简单、易操作。即便需要进行恒温培养，本申请的检测方法也只需要培养12～100小时即可，培养时间短。本申请的硫酸盐还原菌浓度检测方法，能够用于各种样品的硫酸盐还原菌浓度检测，尤其适用于水产养殖、油田管道监测等的硫酸盐还原菌检测。
下面通过具体实施例和附图对本申请作进一步详细说明。以下实施例仅对本申请进行进一步说明，不应理解为对本申请的限制。
实施例
1.硫酸盐还原菌样本培养
1.1培养液配制
本例配制了硫酸盐还原菌专用培养液，培养液配方如表1所示，各组分按配比溶于水后，用高压灭菌锅灭菌备用。
表1无颗粒物质的培养液
| 成分 | 含量(g/L) | 成分 | 含量(g/L) |
| NaCl | 4 | NH<sub>4</sub>Cl | 1 |
| K<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub> | 0.5 | Na<sub>2</sub>SO<sub>4</sub> | 0.5 |
| MgSO<sub>4</sub>·7H<sub>2</sub>O | 1.5 | CaCl<sub>2</sub> | 0.2 |
| Fe(NH<sub>4</sub>)<sub>2</sub>(SO<sub>4</sub>)<sub>2</sub>·6H<sub>2</sub>O | 1 | 70％乳酸 | 5 |
| FeSO<sub>4</sub> | 1 | 酵母膏 | 1 |
1.2梯度稀释
本例取待测样品SRB，用配置好的培养液分别进行10倍、100倍、1000倍、10000倍、100000倍5个梯度稀释，终体积都控制在100mL。
1.3接种
将5个浓度梯度稀释的SRB菌液分别接种至5个100mL培养瓶中。另取一个100mL培养瓶，加入灭菌好的空白培养液100mL，作为阴性对照组，即阴性参照样品。取已经培养10天的SRB菌液100mL到另一个100mL培养瓶中，作为阳性对照组，即阳性参照样品。
1.4培养
将7个培养瓶密封好，放入35℃恒温培养箱培养，在培养12小时和96小时分别取出培养产物1mL，用于测定SRB颗粒浓度。
2.硫酸盐还原菌样本处理
2.1取样
本例分别在培养12小时和96小时后，取5个梯度稀释培养的菌液实验组、阴性对照组、阳性对照组各1mL，分别装于7个1.5mL离心管中。
2.2滴定
采用1mol/L的盐酸，缓慢滴加至已取样的7个离心管中，滴定至溶液清亮。
2.3离心
将酸性溶液滴定后的样品，放入离心机中，以3000转/分钟的转速离心10分钟，取上清，作为待测液。
3.硫酸盐还原菌(SRB)浓度测定
3.1测试仪器
本例采用瑞芯智造(深圳)科技有限公司研发生产的纳米库尔特粒度仪，使用微孔电阻抗法进行检测，检测原理：在硅基芯片上刻蚀一个孔径约3000nm的微孔，芯片装入检测组件，检测组件两侧有两枚电极与两个液体槽，两侧加入电解液，加上电压后，当颗粒通过微孔时会产生一个电位脉冲，仪器采集分析电位脉冲信号，得到过孔颗粒的粒径、浓度数据。检测组件如图1所示，其由样本槽1、电解液槽2、样本槽电极11、电解液槽电极21、硅基芯片3组成，硅基芯片3上具有微孔31。
3.2上样
本例具体的，取200μL电解液加入至检测组件的一个液槽，200μL待测液加入至另一液槽，即检测卡样本槽。
3.2检测
在操作软件上输入200mv电压，颗粒通过微孔，软件自动测量样本中SRB的粒径分布与浓度。
4.数据分析
4.1浓度修正
根据阴性对照组浓度测试数据，去除本底浓度，排除因培养和滴定过程带来的浓度误差。
4.2粒径修正
根据SRB的理论粒径，判定500-1300nm的颗粒为真实的SRB，剔除范围外的颗粒，结合4.1得到SRB的真实浓度。
4.3培养12小时测试结果
培养12小时后，实验组、阴性对照组、阳性对照组的测试结果如表2和图2至图7所示，浓度线性图如图8所示。
表2培养12小时的SRB粒径和浓度测试结果
| 样本名称 | SRB平均粒径(nm) | SRB浓度(particles/mL) |
| 10倍稀释 | 788 | 1.26E+09 |
| 100倍稀释 | 800 | 1.32E+08 |
| 1000倍稀释 | 790 | 1.09E+07 |
| 10000倍稀释 | 768 | 1.24E+06 |
| 100000倍稀释 | 801 | 1.16E+05 |
| 阴性对照 | / | 0 |
| 阳性对照 | 797 | 3.32E+11 |
图2是10倍稀释样品的SRB粒径浓度分布图，图3是100倍稀释样品的SRB粒径浓度分布图，图4是1000倍稀释样品的SRB粒径浓度分布图，图5是10000倍稀释样品的SRB粒径浓度分布图，图6是100000倍稀释样品的SRB粒径浓度分布图，图7是阳性对照组样品的SRB粒径浓度分布图。
4.4培养96小时测试结果
培养96小时后，实验组、阴性对照组、阳性对照组的测试结果如表3和图9至图13所示，浓度线性图如图14所示。
表3培养60小时的SRB粒径和浓度测试结果
| 样本名称 | SRB平均粒径(nm) | SRB浓度(particles/mL) |
| 10倍稀释 | 805 | 6.18E+09 |
| 100倍稀释 | 799 | 5.94E+08 |
| 1000倍稀释 | 786 | 5.67E+07 |
| 10000倍稀释 | 810 | 5.70E+06 |
| 100000倍稀释 | 786 | 6.10E+05 |
| 阴性对照 | / | 0 |
| 阳性对照 | 801 | 1.51E+12 |
图9是10倍稀释样品的SRB粒径浓度分布图，图10是100倍稀释样品的SRB粒径浓度分布图，图11是1000倍稀释样品的SRB粒径浓度分布图，图12是10000倍稀释样品的SRB粒径浓度分布图，图13是100000倍稀释样品的SRB粒径浓度分布图。
5.测试判定
首先，根据SRB细菌生长状况，绘制扩增倍数随培养时间变化的生长曲线。本例根据10倍稀释样品的生长情况，分别测试了其培养0至117小时的生长情况，根据各时间段相对于培养0小时的倍数，即培养扩增倍数，绘制生长曲线。结果如图15所示。
由生长曲线可得出，培养12小时对应的培养扩增倍数为11.41，培养96小时对应的培养扩增倍数为52.03。
根据公式计算待测样品原始硫酸盐还原菌浓度，
待测样品原始硫酸盐还原菌浓度＝硫酸盐还原菌检测浓度×稀释倍数÷培养扩增倍数
培养12小时10倍、100倍、1000倍、10000倍、100000倍5个梯度稀释样本计算结果依序为：1.10E+09、1.16E+09、9.55E+08、1.09E+09、1.02E+09，5个浓度梯度稀释计算结果的平均值为1.06E+09。
培养96小时10倍、100倍、1000倍、10000倍、100000倍5个梯度稀释样本计算结果依序为：1.19E+09、1.14E+09、1.09E+09、1.10E+09、1.17E+09，5个浓度梯度稀释计算结果的平均值为1.14E+09。
以上结果显示，培养12小时和培养96小时，最终计算获得的待测样品原始硫酸盐还原菌浓度数据相当，说明测试结果准确，本例的浓度测试和计算方法能够准确稳定的测量待测样品中SRB的浓度和粒径。并且，根据图8和图14也可以看出，各梯度稀释样品的测定浓度值与稀释倍数的线性关系良好，培养12小时的测定浓度值与稀释倍数的线性相关稀释R2＝0.9999，培养96小时的测定浓度值与稀释倍数的线性相关稀释R2＝0.9991，这也说明通过公式计算获得的待测样品原始硫酸盐还原菌浓度准确性高。
以上内容是结合具体的实施方式对本申请所作的进一步详细说明，不能认定本申请的具体实施只局限于这些说明。对于本申请所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换。
Claims (10)
1.一种检测硫酸盐还原菌浓度的方法，其特征在于：包括对待测液施加电压，使待测液中的颗粒经过微孔，产生电压或者电流的脉冲，通过测量电压或者电流的脉冲信号获得待测液中颗粒的粒径和浓度，选取粒径范围500nm～1300nm颗粒的浓度作为硫酸盐还原菌浓度。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：对待测液施加电压的方式包括，采用两个带电极的液槽，将待测液放置于其中一个液槽中，另一个液槽放置电解液，两个液槽由微孔连通，在两个液槽的电极上施加电压，使待测液中的颗粒通过微孔进入另一个液槽中，从而在电极上产生电压或者电流的脉冲信号。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：还包括对待测样品进行酸性溶液滴定，直至得到清亮溶液，对清亮溶液进行离心，取上清液作为所述待测液；
优选的，所述酸性溶液包括盐酸、硝酸中的至少一种；
优选的，所述离心条件为在不超过3000转/分钟的转速下离心5～15分钟；
优选的，所述微孔的孔径为2000nm～40000nm。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：还包括对待测样品进行梯度稀释，分别对梯度稀释的样品进行恒温培养；然后，分别对培养产物进行硫酸盐还原菌浓度检测；根据梯度稀释倍数，对应的硫酸盐还原菌检测浓度，和培养时间，计算待测样品原始硫酸盐还原菌浓度；
优选的，所述计算待测样品原始硫酸盐还原菌浓度，包括根据硫酸盐还原菌的生长曲线确定所述培养时间对应的硫酸盐还原菌的培养扩增倍数，根据以下公式计算待测样品原始硫酸盐还原菌浓度，
待测样品原始硫酸盐还原菌浓度＝硫酸盐还原菌检测浓度×稀释倍数÷培养扩增倍数；
优选的，所述计算待测样品原始硫酸盐还原菌浓度，还包括分别根据各梯度稀释样品计算待测样品原始硫酸盐还原菌浓度，取各梯度稀释样品计算结果的平均值作为最终的待测样品原始硫酸盐还原菌浓度；
优选的，所述恒温培养的条件为35℃培养12～100小时；
优选的，控制所述恒温培养的条件，使所述培养产物的培养扩增倍数在10倍以上。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述恒温培养的培养液为无颗粒物质的培养液，所述无颗粒物质的培养液由NaCl、K2HPO4、MgSO4、Fe(NH4)2(SO4)2、FeSO4、NH4Cl、Na2SO4、CaCl2、70％乳酸、酵母膏和水组成；
优选的，所述无颗粒物质的培养液中各组分的浓度为NaCl 4g/L、K2HPO40.5g/L、MgSO41.5g/L、Fe(NH4)2(SO4)2 1g/L、FeSO4 1g/L、NH4Cl 1g/L、Na2SO40.5g/L、CaCl2 0.2g/L、70％乳酸5g/L、酵母膏1g/L；
优选的，所述梯度稀释采用所述无颗粒物质的培养液；
优选的，所述梯度稀释的倍数包括10倍、100倍、1000倍、10000倍和100000倍；
优选的，所述电解液采用所述无颗粒物质的培养液。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：还包括根据各梯度稀释样品的硫酸盐还原菌检测浓度和稀释倍数的线性相关性判断计算获得的所述待测样品原始硫酸盐还原菌浓度的准确性，线性相关性越好，准确性越高。
7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于：还包括采用阴性参照样品和\或阳性参照样品进行对照试验；所述阴性参照样品为不含细菌、且与所述待测液组分相同的溶液；所述阳性参照样品为已知硫酸盐还原菌浓度、且与所述待测液组分相同的菌悬液。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：还包括根据所述阴性参照样品的硫酸盐还原菌检测浓度，去除本底浓度。
9.一种检测硫酸盐还原菌浓度的试剂盒，其特征在于：包括无颗粒物质的培养液，所述无颗粒物质的培养液由NaCl、K2HPO4、MgSO4、Fe(NH4)2(SO4)2、FeSO4、NH4Cl、Na2SO4、CaCl2、70％乳酸、酵母膏和水组成。
10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于：所述无颗粒物质的培养液中各组分的浓度为NaCl 4g/L、K2HPO4 0.5g/L、MgSO4 1.5g/L、Fe(NH4)2(SO4)21g/L、FeSO4 1g/L、NH4Cl1g/L、Na2SO4 0.5g/L、CaCl2 0.2g/L、70％乳酸5g/L、酵母膏1g/L。
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