CN115820488A - 可调节幼鼠Th1/Th2平衡及IgA合成的长双歧杆菌婴儿亚种及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了可调节幼鼠Th1/Th2平衡及IgA合成的长双歧杆菌婴儿亚种及其应用，属于微生物技术领域。本发明提供的长双歧杆菌婴儿亚种可调节幼鼠Th1/Th2平衡及IgA含量，具体体现在：(1)提高生命早期哺乳动物肠系膜***中B细胞、T细胞、Th细胞百分含量；提高结肠中IFN‑γ、IgG2a、IgA、sIgA的含量，IgG2a/IgE的比值；(3)提高生命早期哺乳动物血清中IFN‑γ的含量，IgG2a/IgE的比值；(4)降低生命早期哺乳动物结肠IL‑4、IgE含量、提高结肠中T‑bet mRNA表达水平；(5)提高生命早期哺乳雄性动物粪便IgA结合态Alistipes相对丰度。
Description
技术领域
本发明涉及可调节幼鼠Th1/Th2平衡及IgA合成的长双歧杆菌婴儿亚种及其应用，属于微生物技术领域。
背景技术
随着各种非传染性疾病发病率的上升，人们对发现疾病的原因产生了浓厚的兴趣，并关注早期免疫建立以降低后期疾病发生风险。尤其是在婴幼儿可塑性较强的时期，合理补充营养，可以最大程度地减少生长过程中疾病的发生。婴儿出生后由于激素和孕酮等因素而表现出对T辅助细胞2型免疫型的偏好，这是导致儿童时期过敏、哮喘和其他疾病的风险增加的主要原因。此外，婴儿肠道菌群失衡在现代社会很普遍，可能是免疫介导疾病发病率增加的一个因素。母乳喂养的婴儿可能会抵抗腹泻、过敏和哮喘以及炎症性肠病。母乳不仅为婴儿提供了基本的营养，而且还促进了肠道菌群的建立。因此，有必要挖掘能够对抗过敏、哮喘和其他可能的免疫疾病的发生和促进免疫***的微生物群。
长双歧杆菌婴儿亚种是婴儿肠道主要的双歧杆菌定殖者，在促进生命早期健康方面表现出优势。目前研究已确定生命早期双歧杆菌的丧失与几种免疫疾病和肠道炎症的风险增加有关，但其机制尚不清楚。生命早期微生物群暴露可能提供机会预防由Th1/Th2失衡引起的过敏风险。在给予长双歧杆菌婴儿亚种EVC001的母乳喂养婴儿体内，肠道T辅助细胞2(Th2)和Th17细胞因子被沉默。EVC001对成年小鼠的给药通过促进Th1和沉默Th2免疫反应对过敏性哮喘具有治疗作用。此外，引入长双歧杆菌婴儿亚种通过稳定和持续地重塑母乳喂养婴儿的肠道微生物群来减少肠道炎症。
近年来，有研究表明长双歧杆菌婴儿亚种EVC001可以促进婴儿体内T0细胞向Th1分化，调节婴儿Th1/Th2平衡。因此，急需找到一株可调节Th1/Th2平衡及促进促进IgA产生的益生菌。
发明内容
本发明提供了长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longumsubsp.infantis)，所述长双歧杆菌婴儿亚种为长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269、长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1270、长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1271或长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1272；
所述长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269，分类学命名为Bifidobacterium longumsubsp.infantis，已于2022年9月26日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：62839，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼；
所述长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1270，分类学命名为Bifidobacterium longumsubsp.infantis，已于2022年9月26日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：62840，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼；
所述长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1271，分类学命名为Bifidobacterium longumsubsp.infantis，已于2022年9月26日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：62841，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼；
所述长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1272，分类学命名为Bifidobacterium longumsubsp.infantis，已于2022年9月26日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：62842，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
本发明还提供含有所述长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271、CCFM1272中一种或多种的益生菌剂。
在一种实施方式中，所述益生菌剂中长双歧杆菌婴儿亚种的活菌数不低于1×109CFU/mL或1×109CFU/g。
在一种实施方式中，所述益生菌剂是长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271或CCFM1272的菌悬液。
本发明还提供含有所述长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271或CCFM1272的发酵剂。
在一种实施方式中，所述发酵剂的制备方法为：将长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271或CCFM1272接种到培养基中，于37℃下培养24～48h，得到培养液；将培养液离心，得到菌体；将菌体用生理盐水重悬，得到发酵剂。
在一种实施方式中，所述培养基为MRS培养基。
本发明还提供含有所述长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271或CCFM1272中至少一种菌株的药物。
在一种实施方式中，所述药物中长双歧杆菌婴儿亚种的活菌数不低于1×109CFU/mL或1×109CFU/g。
在一种实施方式中，所述药物含有所述长双歧杆菌婴儿亚种和药学上可接受的载体。
在一种实施方式中，所述药物用于调节调节Th1/Th2平衡和/或促进IgA合成。
本发明还提供所述长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271或CCFM1272在制备有助于增强免疫力的保健品中的应用。
本发明还提供所述长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271或CCFM1272中的一种或多种在调节Th1/Th2平衡及IgA合成的益生菌产品的应用。
在一种实施方式中，所述产品用于提高生命早期哺乳动物结肠Th1/Th2相关细胞因子及免疫球蛋白水平。
在一种实施方式中，所述产品用于调节生命早期哺乳动物肠道菌群。
在一种实施方式中，所述调节Th1/Th2平衡及IgA合成包括如下至少一种作用：
(1)提高生命早期哺乳动物肠系膜***中B细胞、T细胞、Th细胞百分含量；
(2)提高生命早期哺乳动物结肠中IFN-γ、IgG2a、IgA、sIgA的含量，IgG2a/IgE的比值；
(3)提高生命早期哺乳动物血清中IFN-γ的含量，IgG2a/IgE的比值；
(4)降低生命早期雄性哺乳动物结肠IL-4、IgE含量；
(5)提高生命早期哺乳动物结肠中T-bet mRNA表达水平；
(6)提高生命早期雄性哺乳动物粪便IgA结合态Alistipes相对丰度。
本发明还提供所述长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271或CCFM1272中的一种或多种在制备有助于调节肠道菌群的保健品中的应用。
有益效果：
1、本发明筛选出了具有调节Th1/Th2平衡及IgA分泌作用的长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp.infantis)CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271、CCFM1272，具体体现在：
(1)提高雌、雄幼鼠肠系膜***中B细胞、T细胞、Th细胞百分含量；
(2)提高雌、雄幼鼠结肠中IFN-γ、IgG2a、IgA、sIgA的含量，IgG2a/IgE的比值；
(3)提高雌、雄幼鼠血清中IFN-γ的含量，IgG2a/IgE的比值；
(4)降低雄幼鼠结肠IL-4、IgE含量；
(5)提高雌、雄幼鼠结肠中T-bet mRNA表达水平；
(6)提高雄幼鼠粪便IgA结合态Alistipes相对丰度。
2、本发明筛选的长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271、CCFM1272为食品安全菌株，可用于制备调节Th1/Th2平衡及IgA含量的产品，具有巨大的应用前景。
3、本发明的长双歧杆菌婴儿亚种的培育过程仅需培养基以及一些培养条件的控制，成本相对低廉，易于实现工业化生产。
生物材料保藏
长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp.infantis)CCFM1269，分类学命名为Bifidobacterium longum subsp.infantis，已于2022年9月26日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：62839，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp.infantis)CCFM1270，分类学命名为Bifidobacterium longum subsp.infantis，已于2022年9月26日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：62840，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp.infantis)CCFM1271，分类学命名为Bifidobacterium longum subsp.infantis，已于2022年9月26日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：62841，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp.infantis)CCFM1272，分类学命名为Bifidobacterium longum subsp.infantis，已于2022年9月26日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：62842，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
附图说明
图1：不同组雌幼鼠肠系膜***B细胞变化情况；图中，*：p<0.05。
图2：不同组雌幼鼠肠系膜***T细胞变化情况；图中，*：p<0.05。
图3：不同组雌幼鼠肠系膜***Th细胞变化情况；图中，*：p<0.05
图4：不同组雌幼鼠结肠IFN-γ变化情况；图中，*：p<0.05。
图5：不同组雌幼鼠结肠IgG2a变化情况；图中，*：p<0.05。
图6：不同组雌幼鼠结肠IgA变化情况；图中，*：p<0.05。
图7：不同组雌幼鼠结肠sIgA变化情况；图中，*：p<0.05。
图8：不同组雌幼鼠结肠IgG2a/IgE变化情况；图中，*：p<0.05。
图9：不同组雌幼鼠血清IFN-γ变化情况；图中，*：p<0.05。
图10：不同组雌幼鼠血清IgG2a/IgE变化情况；图中，*：p<0.05。
图11：不同组雌幼鼠结肠T-bet mRNA变化情况；图中，*：p<0.05。
图12：不同组雄幼鼠肠系膜淋巴B细胞百分含量变化情况；图中，*：p<0.05。
图13：不同组雄幼鼠肠系膜淋巴T细胞百分含量变化情况；图中，*：p<0.05。
图14：不同组雄幼鼠肠系膜淋巴Th细胞百分含量变化情况；图中，*：p<0.05。
图15：不同组雄幼鼠结肠IgA变化情况；图中，*：p<0.05。
图16：不同组雄幼鼠结肠IgE；图中，*：p<0.05。
图17：不同组雄幼鼠结肠IL-4；图中，*：p<0.05。
图18：不同组雄幼鼠结肠IgG/IgE变化情况；图中，*：p<0.05。
图19：不同组雄幼鼠血清IgG2a变化情况；图中，*：p<0.05。
图20：不同组雄幼鼠血清IgG2a/2aIgE变化情况；图中，*：p<0.05。
图21：不同组雄幼鼠结肠T-bet mRNA变化情况；图中，*：p<0.05。
图22：不同组雄幼鼠粪便sIgA结合态Alistipes；图中，*：p<0.05。
具体实施方式
下面结合具体实施例和附图对本发明进行进一步的阐述。
下述实施例中涉及的BALB/C小鼠购自浙江维通利华公司；下述实施例中涉及的长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp.infantis)CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271、CCFM1272由江南大学食品学院生物技术中心分离得到；
下述实施例中涉及的检测试剂如下：
IFN-γ、IgG2a、IgE、IgA、sIgA、IL-4的ELISA试剂盒购自福麦斯。
下述实施例中涉及的培养基如下：
MRS固体培养基：蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、葡萄糖20g/L、乙酸钠2g/L、酵母粉5g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、K2PO4·3H2O 2.6g/L、MgSO4·7H2O 0.1g/L、MnSO4 0.05g/L、吐温80 1mL/L、琼脂15g/L。
MRS液体培养基：蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、葡萄糖20g/L、乙酸钠2g/L、酵母粉5g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、K2PO4·3H2O 2.6g/L、MgSO4·7H2O 0.1g/L、MnSO4 0.05g/L、吐温80 1mL/L。
实施例1：长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271、CCFM1272的筛选及菌种鉴定
1、筛选
以来源于江苏省无锡市母乳样本，取0.5mL保存于30％(v/v)甘油中的样本在无菌环境下加入装有4.5mL生理盐水的10mL离心管中，得到10-1稀释液，重复上述稀释步骤，依次得到10-2、10-3、10-4、10-5、10-6稀释液；分别吸取100μL不同梯度的梯度稀释液涂布于MRS固体培养基上，37℃培养72h，得到稀释涂布平板；挑取稀释涂布平板上的典型菌落分别在MRS固体培养基上划线，37℃培养48h，得到纯化菌落；挑取纯化菌落接种至MRS液体培养基中，37℃培养48h，得到菌株FJSWXI4MI,FJSWXI8TI,FJSWXI10TI,BJSWXB6MNIM1，分别命名为、CCFM1270、CCFM1271、CCFM1272、CCFM1269。
2、鉴定
提取CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271、CCFM1272的基因组，进行16S扩增，16SrDNA扩增条件：95℃5min；35个循环(95℃30s,55℃30s,72℃2min)；72℃10min。扩增引物：27F：(5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’)，1492R：(5’-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3’)扩增产物纯化和序列比对过程按文献(Turroni F et al.Exploring the Diversitym of theBifidobacterial Population in the Human Intestinal Tract[J].Appl EnvironMicrob.2009；75(6):1534–45)记载的方法进行。将CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271、CCFM1272的16S rDNA进行扩增和测序(由苏州金唯智生物科技有限公司)，将测序分析得到的CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271、CCFM1272的16S rDNA序列在GenBank中进行比对，结果显示此菌株均为长双歧杆菌婴儿亚种，命名为长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacteriumlongum subsp.infantis)CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271、CCFM1272。
实施例2：长双歧杆菌婴儿亚种菌悬液的制备
长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271、CCFM1272菌液按如下方法制备：
蘸取长双歧杆菌婴儿亚种菌液在MRS固体培养基上划线，37℃培养48h，得到单菌落；
挑取单菌落接入MRS液体培养基中，于37℃培养24h，得到活化液；将活化液按照1％(v/v)的接种量接入MRS液体培养基中，于37℃培养24h，得到一级种子液；
将一级种子液按照1％(v/v)的接种量接入MRS液体培养基中，于37℃培养24h，得到二级种子液；
将二级种子液按照1％(v/v)的接种量接入MRS液体培养基中，于37℃培养24h，得到菌液；将菌液6000g离心15min，收集沉淀；将沉淀用生理盐水缓冲液洗涤两次后，6000g再次离心10min，得到菌体；用生理盐水将乳酸菌菌体重悬至细胞浓度为1×109CFU/mL，得到长双歧杆菌婴儿亚种菌液。
实施例3：长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269、CCFM1270、CCFM1272对雌幼鼠肠系膜***淋巴细胞含量的影响
取6周龄的雄性无病原体(SPF)BALB/C雌鼠8只，雄鼠4只，于饲养室温为22～24℃，湿度为40～60％，12h/12h昼夜交替，自由进食及饮水的条件下饲养1周后，按照雌雄2：1合笼，待雌鼠怀孕后，拿出雄鼠，妊娠期3周，幼鼠出生1周龄开始灌胃，分为Control组(灌胃生理盐水)，CCFM1269、CCFM1270、CCFM1272(分别灌胃长双歧杆菌婴儿亚种Bifidobacteriumlongum subsp.infantis CCFM1269、CCFM1270、CCFM1272)。
动物适应性饲养1周后开始实验，实验共8周。具体处理如下：
对照组(Control)：出生后1周开始灌胃200μL生理盐水；
长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269组、CCFM1270组、CCFM1272组：出生后1周开始灌胃10μL对应菌悬液，使灌胃剂量为1×109CFU/只/天。
灌胃至3周龄，实验结束后，取雌幼鼠肠系膜***，置于D-PBS中，制备单细胞悬液，通过流式细胞术测定，测定肠系膜***T细胞、B细胞、Th细胞，测定结果分别见图1-3。
肠系膜***T细胞、B细胞细胞、Th细胞数量通常能够反映菌株是否能够刺激个体产生适应性免疫。由图1可知，正常组肠系膜***中B细胞含量为13.16％，CCFM1270组为22.6％，CCFM1272组为19.51％，CCFM1269组为18.3％，CCFM1270、CCFM1272、CCFM1269组雌幼鼠肠系膜***中B细胞百分含量显著高于正常组(p<0.05)；
由图2可知，正常组肠系膜***中T细胞含量为60.44％，CCFM1270组为68.73％，CCFM1272组为70.61％，CCFM1270组及CCFM1272组雌幼鼠肠系膜***中T细胞百分含量显著高于正常组(p<0.05，p<0.05)；
由图3可知，正常组肠系膜***中Th细胞含量为68.7％，CCFM1269组为71.86％，CCFM1269组雌幼鼠肠系膜***中Th细胞百分含量显著高于正常组(p<0.05)。
实施例4：长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269、CCFM1270、CCFM1272对雌幼鼠Th1/Th2相关细胞因子及免疫球蛋白的影响
取雌幼鼠结肠置于磷酸缓冲盐溶液中并匀浆，通过ELISA试剂盒测定每组小鼠结肠匀浆，测定结肠Th1/Th2相关细胞因子及免疫球蛋白，测定结果分别见图4～8。
IFN-γ含量、IgG2a含量、分别为Th1免疫类型主要的细胞因子和免疫球蛋白。IgA含量、sIgA含量主要为粘膜免疫的免疫球蛋白。由图4可知，CCFM1269组雌幼鼠结肠中IFN-γ含量显著高于正常组(p<0.05)，正常组结肠匀浆IFN-γ浓度为2.60ng/mg蛋白，CCFM1269组为3.56ng/mg蛋白；
由图5可知，CCFM1269组雌幼鼠结肠中IgG2a含量显著高于正常组(p<0.05)，正常组结肠匀浆IgG2a浓度为1.89μg/mg蛋白，CCFM1269组为2.70μg/mg蛋白；
由图6可知，CCFM1269、CCFM1270、CCFM1272组雌幼鼠结肠中IgA含量显著高于正常组(p<0.05)，正常组结肠匀浆IgA浓度为4.29μg/mg蛋白，CCFM1269组为7.66μg/mg蛋白，CCFM1270组为6.21μg/mg蛋白、CCFM1272组为6.98μg/mg蛋白；
由图7可知，CCFM1269、CCFM1272组雌幼鼠结肠中sIgA含量显著高于正常组(p<0.05)，正常组结肠匀浆sIgA浓度为0.43μg/mg蛋白，CCFM1269为0.84μg/mg蛋白，CCFM1272组为0.68μg/mg蛋白；
IgG2a/IgE比值增高说明个体的免疫类型从Th2型向Th1型过渡并逐渐达到平衡。由图8可知，CCFM1269组雌幼鼠结肠中IgG2a/IgE显著高于正常组(p<0.05),正常组结肠匀浆IgG2a与IgE的比值为0.89μg/mg蛋白，CCFM1269组为1.42μg/mg蛋白。
实施例5：长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269、CCFM1270、CCFM1272对雌幼鼠血清Th1/Th2相关细胞因子及免疫球蛋白的影响
小鼠的分组及处理同实施例3。实验结束后，取血并处死小鼠，通过ELISA试剂盒测定每组小鼠血清中Th1/Th2相关细胞因子及免疫球蛋白含量，检测结果见图9-10。
如图9所示，CCFM1269组雌幼鼠血清中IFN-γ含量显著高于正常组(p<0.05)，正常组血清IFN-γ浓度为0.74ng/mL，CCFM1269组为0.92ng/mL；
如图10所示，CCFM1269组雌幼鼠血清中IgG2a/IgE显著高于正常组(p<0.05)，正常组血清IgG2a与IgE的比值为0.60，CCFM1269组为0.81。
实施例6：长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269、CCFM1270、CCFM1272对雌幼鼠结肠T-bet表达水平的影响
小鼠的分组和造模同实施例3。实验结束后，取血并处死小鼠，取小鼠结肠提取RNA，并用试剂盒进行反转录，测定每组小鼠结肠中T-bet的表达水平，检测结果见图11。
由图11可知，CCFM1269可显著提高雌幼鼠结肠T-bet相对表达量(p<0.01)，CCFM1269组为正常组的1.45倍。
实施例7：长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271对雄幼鼠肠系膜***淋巴细胞含量的影响
取6周龄的雄性无病原体(SPF)BALB/C雌鼠8只，雄鼠4只，于饲养室温为22～24℃，湿度为40～60％，12h/12h昼夜交替，自由进食及饮水的条件下饲养1周后，按照雌雄2：1合笼，待雌鼠怀孕后，拿出雄鼠，妊娠期3周，幼鼠出生1周龄开始灌胃，分为Control组(灌胃生理盐水)，CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271(分别灌胃长双歧杆菌婴儿亚种Bifidobacteriumlongum subsp.infantis CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271菌悬液)。
动物适应性饲养1周后开始实验，实验共8周。具体处理如下：
对照组：出生后1周开始灌胃200μL生理盐水作为对照；
长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271组：出生后1周开始灌胃10μL菌悬液，使灌胃剂量为1×109CFU/只/天。
灌胃至3周龄，实验结束后，取雌幼鼠肠系膜***，置于D-PBS中，制备单细胞悬液，通过流式细胞术测定，测定肠系膜***T细胞、B细胞，测定结果分别见图12～14。
由图12可知，CCFM1270、CCFM1271组雄幼鼠肠系膜***中B细胞百分含量显著高于正常组(p<0.05)，正常组肠系膜***中B细胞含量为13.50％，CCFM1270组为20.20％，CCFM1271组为18.27％；
由图13可知，CCFM1270、CCFM1271及CCFM1269组雌幼鼠肠系膜***中T细胞百分含量显著高于正常组(p<0.05，p<0.05)，正常组肠系膜***中T细胞含量为41.9％，CCFM1270组为61.2％，CCFM1271组为66.8％；CCFM1269组为67.3％；
由图14可知，CCFM1269组雌幼鼠肠系膜***中Th细胞百分含量显著高于正常组(p<0.05)，正常组肠系膜***中Th细胞含量为63.24％，CCFM1270为72.21％，CCFM1269组为70.11％。
实施例8：长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271对雄幼鼠结肠Th1/Th2平衡及IgA含量的影响
小鼠的分组同实施例3。实验结束后，取小鼠结肠置于磷酸缓冲盐溶液中并匀浆，通过ELISA试剂盒测定每组小鼠结肠匀浆，检测结果见图15-18。
如图15所示，CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271组显著提高了雄幼鼠结肠中IgA含量(p<0.01)，正常组结肠匀浆IgA浓度为1.03μg/mg蛋白，CCFM1269组为1.78μg/mg蛋白，CCFM1270组为1.90μg/mg蛋白、CCFM1271组为2.03μg/mg蛋白；
如图16所示，CCFM1269、CCFM1271显著降低了雄幼鼠结肠中IgE含量(p<0.05)，正常组结肠匀浆IgE浓度为2.43μg/mg蛋白，CCFM1269组为1.81μg/mg蛋白，CCFM1271组为1.78μg/mg蛋白；
如图17所示，CCFM1270组显著降低了雄幼鼠结肠中IL-4含量(p<0.05)，正常组结肠中IL-4的含量为390.56pg/mg蛋白，CCFM1270组为309.58pg/mg蛋白。
如图18所示，CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271显著提高了雄幼鼠IgG2a/IgE(p<0.05)，正常组结肠匀浆IgG2a与IgE比值为0.76，CCFM1269组为1.07，CCFM1270组为1.07，CCFM1271组为0.98。
实施例9：长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271对雄幼鼠血清Th1/Th2平衡影响
小鼠的分组及处理同实施例3。实验结束后，取血并处死小鼠，通过ELISA试剂盒测定每组小鼠血清中Th1/Th2相关细胞因子，检测结果见图19-20。
如图19所示，CCFM1269组显著提高了雄幼鼠血清中IgG2a含量(p<0.05)，正常组血清IgG2a浓度为0.58ng/mL，CCFM1269组为0.72ng/mL；
如图20所示，CCFM1269组显著提高了血清中IgG2a/IgE(p<0.05)，正常组血清IgG2a与IgE比值为0.60，CCFM1269组为0.79。
实施例10：长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271对雄幼鼠结肠T-bet表达水平的影响
小鼠的分组和造模同实施例3。实验结束后，取血并处死小鼠，取小鼠结肠提取RNA，并用试剂盒进行反转录，测定每组小鼠结肠中T-bet的表达水平，检测结果见图21。
转录因子T-bet是特异性调控Th0分化、起着Th1/Th2转换开关作用的关键因子。T-bet转录只出现于Th1细胞系，因此，认为T-bet选择性表达于Th1细胞，T-bet作为Th1特异的转录因子，选择性表达于Th1细胞，通过启动Th1遗传程序在Th1细胞的发育中起重要作用，并且抑制Th2细胞因子的合成。
由图21可知，CCFM1269可显著提高雄幼鼠结肠T-bet相对表达量(p<0.05)，CCFM1269组为正常组的1.41倍。
实施例11：长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271对雄幼鼠粪便IgA结合菌构成影响
小鼠的分组和造模同实施例3。实验结束后，收集小鼠粪便，富集粪便IgA结合菌，通过FastDNA Spin Kit(美国MP生物医药公司)提取粪便中的基因组DNA，对提取得到的基因组DNA的V3-V4区进行特异性PCR扩增，16S rDNA测序，分析粪便菌群变化，分析结果见图22。
由图22可知，雄幼鼠Control组的IgA结合Alistipes相对丰度为0.018，CCFM1269组为0.11，CCFM1270组为0.039，CCFM1271为0.052，显著提高了IgA结合Alistipes的相对丰度。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
Claims (10)
1.长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp.infantis)，其特征在于，所述长双歧杆菌婴儿亚种为长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269、长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1270、长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1271或长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1272；
所述长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269，分类学命名为Bifidobacterium longumsubsp.infantis，已于2022年9月26日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：62839，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼；
所述长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1270，分类学命名为Bifidobacterium longumsubsp.infantis，已于2022年9月26日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：62840，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼；
所述长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1271，分类学命名为Bifidobacterium longumsubsp.infantis，已于2022年9月26日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：62841，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼；
所述长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1272，分类学命名为Bifidobacterium longumsubsp.infantis，已于2022年9月26日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：62842，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
2.含有权利要求1所述长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271、CCFM1272中一种或多种的益生菌剂。
3.根据权利要求2所述的益生菌剂，其特征在于，所述益生菌剂中长双歧杆菌婴儿亚种的活菌数不低于1×109CFU/mL或1×109CFU/g。
4.含有权利要求1所述长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271或CCFM1272的发酵剂。
5.含有权利要求1所述长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271或CCFM1272中至少一种菌株的药物。
6.权利要求1所述的长双歧杆菌婴儿亚种在制备有助于增强免疫力的保健品中的应用。
7.权利要求1所述的长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271、CCFM1272中的一种或多种在制备有助于调节肠道菌群的保健品中的应用。
8.权利要求1所述的长双歧杆菌婴儿亚种CCFM1269、CCFM1270、CCFM1271、CCFM1272中的一种或多种在制备调节Th1/Th2平衡及IgA合成的益生菌产品的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述产品用于提高生命早期哺乳动物结肠Th1/Th2相关细胞因子及免疫球蛋白水平。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述调节Th1/Th2平衡及IgA合成包括如下至少一种作用：
(1)提高生命早期哺乳动物肠系膜***中B细胞、T细胞、Th细胞百分含量；
(2)提高生命早期哺乳动物结肠中IFN-γ、IgG2a、IgA、sIgA的含量，IgG2a/IgE的比值；
(3)提高生命早期哺乳动物血清中IFN-γ的含量，IgG2a/IgE的比值；
(4)降低生命早期雄性哺乳动物结肠IL-4、IgE含量；
(5)提高生命早期哺乳动物结肠中T-bet mRNA表达水平；
(6)提高生命早期雄性哺乳动物粪便IgA结合态Alistipes相对丰度。
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