CN115322920B - 一株植物乳杆菌及其在黄酒酿造中的应用 - Google Patents

一株植物乳杆菌及其在黄酒酿造中的应用 Download PDF

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Abstract

一株植物乳杆菌F25‑4及其在黄酒酿造中的应用，包括步骤1：将植物乳杆菌F25‑4斜面菌种接种于活化液体培养基，36‑38℃下静置培养30‑40h，然后将得到的培养物接种至装有第一种子培养基，36‑38℃下静置培养20‑28h，然后将得到的培养物接种至第二种子培养基，36‑38℃下静置培养20‑28h，获得种子培养物；步骤2：在装有米和水的浸米罐中加入种子培养物，混合搅匀后进行浸米。产生的米浆水添加至发酵醪中进行发酵，发酵结束后经过滤、煎酒、贮存后即得黄酒酒液。本发明的植物乳杆菌F25‑4可以降低大米及醪液酸度值，能抑制杂菌，改善浸泡米的蒸煮特性，减少蒸饭时的蒸汽用量，并资源化利用米浆水，改善黄酒风味。

Description

一株植物乳杆菌及其在黄酒酿造中的应用
技术领域
本发明涉及一株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)及其在黄酒酿造中的应用，属于微生物发酵技术领域。
背景技术
黄酒是中华民族的传统文化遗产，历史悠久，源于中国，与啤酒、葡萄酒并称为世界三大酿造古酒。黄酒是以稻米、小麦等为主要原料，经浸米、蒸煮、加曲、糖化、发酵、压榨、过滤、煎酒、贮存、勾兑而成的酿造酒。在传统的黄酒酿造工艺中，需要对大米进行一段时间的浸泡，米浆水是黄酒生产浸米工序中的副产物。
浸泡大米是中国黄酒发酵的关键步骤，可以使大米吸收水分，便于蒸煮，同时米浆水中细菌产酸使大米酸化，降低发酵液的pH值，保证黄酒的安全发酵。浸泡也是一个发酵过程，其中细菌产生的代谢物可以改善米的质地和感官特性。浸泡过程中微生物产生的酶和有机酸会水解大米的无定形区，改变直链淀粉与支链淀粉的比例，以及大米的糊化特性。浸米也是黄酒生产中生物胺产量最高的阶段。
大米浸泡会产生大量的米浆水，这是黄酒生产的主要废弃物，也是高浓度的有机废水。米浆水含有丰富的氨基酸、蛋白质、淀粉、糖类、脂肪、维生素、矿物质和微量元素等，以及大量的微生物。米浆水的生化需氧量(BOD)和化学需氧量(COD)含量较高，直接排放将对当地环境造成严重的水污染。目前对于米浆水的再利用主要有两个，一是酸化循环浸米，将米浆水重复利用，但此过程中米浆水的酸度随着循环次数增加，会导致黄酒过酸。二是通过对米浆水进行蛋白酶、淀粉酶酶解处理后加入到发酵过程中，但因其中含有多种细菌及其代谢产物，会导致压榨阶段过滤速度降低，影响了生产效率。
浸米过程中微生物大量繁殖并产酸，为后续的发酵过程提供酸性环境，抑制杂菌生长。随着浸米时间的增加，米浆水总酸含量呈上升趋势。传统浸米过程中微生物种类繁多，其中含有的产酸菌会提高米浆水酸度，但酸度上升速率较慢。冬天浸米时间一般需10-14d左右(浸米的时候大米吸水在1-2天能完成，长时间浸泡是将大米进行酸化，保证发酵正常进行)，耗时较长。而在较高温度下(如25-40℃)浸米常引起米浆水发臭，降低黄酒品质。
在自然浸米过程中，米浆水中含有较多种类的微生物，其中一些微生物产生氨基酸脱羧酶，导致米浆水中生物胺含量较高，有研究表明浸米环节产生的生物胺越多，最终黄酒中的生物胺含量就越高。浸米过程中产生的生物胺主要为腐胺、尸胺、组胺和酪胺，其中组胺毒性最大，摄入含有组胺的食物(>100mg)可导致严重的食物中毒，引起偏头痛、头痛、头晕和高血压等症状；酪胺对血管和肌肉有明显的舒张和收缩作用，酪胺含量过高会引发突发性高血压。
使用合适的安全产酸菌种用于浸米不仅能够缩短浸米时间、减少产品生物胺含量，还使浸米环节不受季节的影响。
发明内容
本发明的目的在于提供一株植物乳杆菌及其在黄酒酿造中的应用。
为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供的技术方案是：一株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)F25-4，已于2021年12月9日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC No.M 20211574。
为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供的技术方案是：一株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)F25-4在黄酒酿造中的应用。
优选的技术方案为：包括下列步骤：
步骤1：将植物乳杆菌F25-4斜面菌种接种于活化培养基，36-38℃下静置培养30-40h，然后将得到的培养物按0.3-1％的接种量接种至装有第一种子培养基，36-38℃下静置培养 20-28h，然后将得到的培养物按0.3-1％的接种量接种至第二种子培养基，36-38℃下静置培养 20-28h，获得种子培养物；
步骤2：在装有米和水的浸米罐中按0.3-1％的接种量接入种子培养物，混合搅匀后进行浸米。
优选的技术方案为：种子培养物的浓度为1-9×108CFU/mL。
优选的技术方案为：步骤2中，温度为35-45℃，时间为30-40h。
优选的技术方案为：所述第一种子培养基的原料配方包括：米浆水100mL，粳米1g，酵母粉0.5g，葡萄糖2g，121℃灭菌15min；米浆水的制备方法包括：40℃下按料水比1:1浸泡粳米1h，过10目筛网得米浆水。
优选的技术方案为：所述第二种子培养基的原料配方包括：米浆水100mL，粳米3g，黄酒酒糟1g，酵母粉0.3g，121℃灭菌15min；米浆水的制备方法包括：40℃下按料水比1:1浸泡粳米1h，过10目筛网得米浆水。
优选的技术方案为：还包括如下步骤：浸米完成后，分离得到米浆水与浸泡后的米，然后向浸泡后的米通入0.1～0.2MPa蒸汽，控制温度在102-107℃，蒸煮12-17min，再加水冷却至35-45℃，落罐后加入灭过菌(灭菌方式是煮沸15min)的米浆水，再加入安琪活性干酒曲，搅拌均匀后启动发酵；发酵的0-5天为前酵期，需每4-5小时搅拌一次，温度控制在25-32℃， 6-18天为后酵阶段，温度控制在18-25℃。
优选的技术方案为：加入安琪活性干酵母的同时加入安琪绍酒风味酿酒曲。
优选的技术方案为：活化培养基：胰蛋白胨0.5g，酵母粉0.5g，牛肉膏0.5g，柠檬酸二胺0.2g，氯化钠0.25g，葡萄糖0.05g，Tween 80 0.1g，MnSO40.005g，MgSO40.02g，CaCO30.01g，K2HPO40.2g,FeSO40.004g，蒸馏水100mL，pH5.3-5.5，121℃灭菌20min。
由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有的优点是：
1、本发明的植物乳杆菌F25-4可以降低大米及醪液酸度值，能抑制杂菌，改善浸泡米的蒸煮特性。
2、本发明的菌株代谢中不产氨基酸脱羧酶，米浆水的生物胺含量低。
3、接种本发明的菌株与米浆水，不仅能够资源化利用米浆水，还会改善黄酒的风味。
附图说明
图1菌株F25-4在氨基酸脱羧酶测定培养基中生长情况
图2植物乳杆菌F25-4革兰氏染色显微镜图(放大倍数为10*100)。
图3植物乳杆菌F25-4在糖培养基上的生长(从左至右依次为葡萄糖、半乳糖、乳糖、果糖、纤维二糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇、木糖)。
图4发酵过程加入经植物乳杆菌F25-4浸泡的米浆水对黄酒感官评价的影响。
图5为本发明工艺流程图。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。
请参阅图1-5。须知，本说明书所附图式所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本发明可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本发明所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本发明所揭示的技术内容得能涵盖的范围内。同时，本说明书中所引用的如“上”、“下”、“左”、“右”、“中间”及“一”等的用语，亦仅为便于叙述的明了，而非用以限定本发明可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更技术内容下，当亦视为本发明可实施的范畴。
实施例1：一株植物乳杆菌及其在黄酒酿造中的应用
一、筛选过程
1.样品筛选
对1：1.5的粳米水溶液于40℃浸泡1d、2d的米浆水以及黄酒发酵第1d、2d、3d、4d、5d、7d、11d、15d、20d的发酵醪(将浸泡后的粳米与米浆水分离，通入蒸汽进行蒸煮，加水冷却、落罐、加入活化的安琪酿酒曲(绍酒风味)以及安琪活性干酵母启动发酵)从中取样，进行高通量测序分析，发现在浸泡1d、2d的米浆水以及发酵1d、2d、3d中存在大量乳酸菌。
高通量测序方法：采用SDS-CTAB法提取所取样品的基因组DNA，将5mL样品12000r/min离心10min，收集沉淀，加入0.5m L dd H2O混悬后转移至2mL EP管中，加入10μL 溶菌酶(50mg/mL)，37℃条件下放置30min，加入125μL 10％SDS，立即加入5μL蛋白酶 K(20mg/mL)，混均后于65℃水浴1h(每隔10min上下颠倒混均样品)，加入700μL CTAB 缓冲液，混均后于65℃水浴1h；12 000r/min离心10min，取上清液。将提取的基因组DNA 送至浙江谷禾健康有限公司，对其16S V3-V4高变区进行扩增并测序。数据质控后，利用 Blast将代表性操作分类单元(OTU)序列与NCBI中16S r RNA基因序列进行比对，确定 OUT序列的物种信息。
2.乳酸菌的分离纯化及筛选
取1ml米浆水(米：水＝1：1.5)、发酵醪分别稀释至10^7，分别将1ml 10^4、10^5、10^6 稀释液涂布于含轻质碳酸钙的MRS平板上并置于37℃下培养48小时，挑选平板上形成透明圈的菌落，进一步分离纯化。将纯化后菌株接种于MRS液体培养基中，37℃下培养36小时，利用高效液相色谱测定培养液中的乳酸，(色谱条件：色谱柱：PLATISIL ODS 250×4.6mm，流动相：0.0075mol/L硫酸溶液，检测波长：210nm，柱温：30℃，流速： 0.8ml/min，进样量：20μL)，获得28株产乳酸的菌株。分别对各菌进行乳酸菌的生理生化检验以及《伯杰细菌鉴定手册》对其进行基本生理生化性质检测，筛选出革兰氏染色阳性、接触酶阴性、细胞色素氧化酶阴性、硝酸盐还原阴性、产硫化氢阴性、柠檬酸盐阴性、淀粉酶水解阴性、甲基红阳性、酪素水解阴性、明胶液化弱阳性、15℃生长、不溶血(γ溶血) 的菌株10株。将10株乳酸菌分别接种于含酪氨酸、赖氨酸、色氨酸、鸟氨酸、苯丙氨酸、组氨酸的液体脱羧酶培养基中(液体脱羧酶培养基：胰蛋白胨0.5g，酵母粉0.5g，牛肉膏 0.5g，柠檬酸二胺0.2g，氯化钠0.25g，葡萄糖0.05g，Tween 80 0.1g，MnSO40.005g， MgSO40.02g，CaCO30.01g，K2HPO40.2g,FeSO40.004g，溴甲酚紫0.006g，硫胺素 0.001g，5′-磷酸吡哆醛0.005g，组氨酸0.2g，苯丙氨酸0.2g，酪氨酸0.2g，色氨酸0.2g，鸟氨酸盐酸盐0.2g，赖氨酸0.2g，蒸馏水100mL，pH5.3-5.5，121℃，20min)，在37℃下培养36h。若培养液颜色由黄色变为紫色表明该菌产生物胺，若培养液不变色，则表明该菌不产生物胺，经测定发现有5株乳酸菌不产生物胺。菌株F25-4在氨基酸脱羧酶测定培养基的生长情况如图1所示。
按相同接种量将5株菌的MRS液体培养物1ml分别加入到含有40g米和60g水的物料中，37℃下保温36小时，每隔4h取样测定物料中的可滴定酸量(滴定方法：参照GB/T 13662-2018，以1％酚酞为指示剂，用0.1mol/L NaOH标准溶液滴定。总酸(以乳酸计，g/L) ＝M×V×0.090×1000。其中，M-NaOH标准溶液的摩尔浓度，mol/L；V-NaOH标准溶液的滴定体积，mL；0.090-1mmoL乳酸的质量，g)，筛选到产酸最快的菌株F25-4，且接种该菌的米浆水无异味，并有米的清香。
3.菌株鉴定
菌株F25-4革兰氏染色后镜检观察，结果如图2，细胞染成紫色，形态为杆状，无芽孢，因此，该菌株初步鉴定为G+杆菌。在已完成的乳酸菌的基本生理生化实验基础上，初步鉴定为乳酸菌。进一步测定菌株F25-4对糖的利用能力，发现该菌在葡萄糖、半乳糖、乳糖、果糖、纤维二糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇、木糖培养基中30℃培养24h后，培养基浑浊，说明菌株能够利用培养基中的各种糖类，通过《伯杰细菌鉴定手册》初步鉴定为植物乳杆菌。提取该菌DNA，测定16srDNA序列，并进入NCBI数据库进行比对，结合生理生化性质，将该菌鉴定为植物乳杆菌，与菌株生理生化实验结果一致。植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)F25-4，已于2021年12月9日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCCNo.M 20211574，中国典型培养物保藏中心地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号。
4.植物乳杆菌在黄酒酿造中的应用
4.1菌株F25-4的扩大培养
将菌株F25-4斜面菌种1环接种于装有15mL活化液体培养基的18*180的试管中，37℃下静置培养36h。将该15mL培养物接种至装有800mL种子培养基1的1L三角瓶中，37℃下静置培养24h。将该培养物接种至装有10L种子培养基2的发酵罐中，37℃下静置培养24h，获得种子培养物。
4.2菌株F25-4在浸米中的应用
在装有1t米和1.5t水的浸米罐中加入上述10L菌株F25-4的培养物(培养物浓度为10^8 CFU/mL，混合搅匀，在40℃浸米36h。
4.3接种菌株F25-4的米浆水在黄酒发酵中的应用
浸米完成后，将米浆水与米经筛板分离，向浸泡后的米通入0.1～0.2MPa蒸汽，控制温度在105℃左右，蒸煮15min左右，再加水冷却40℃左右，落罐，加入灭过菌的米浆水，加入经2％葡糖糖溶液活化的安琪活性干酒曲和酿酒曲(绍酒风味)，搅拌均匀后启动发酵。发酵的0-5天为前酵期，需每4-5小时搅拌一次，温度控制在25-32℃，6-18天为后酵阶段，温度控制在18-25℃，共发酵15-18天。
采用该浸米工艺酿造黄酒，具有以下有益效果。
(1)能快速降低大米及醪液酸度值，能抑制杂菌，改善浸泡米的蒸煮特性，并缩短浸米时间；
(2)该菌株代谢中不产氨基酸脱羧酶，米浆水的生物胺含量低；
(3)将接种该菌株的米浆水添加到发酵过程中，不仅能够资源化利用米浆水，还对黄酒的风味具有改善作用。
接种菌株F25-4降低大米及醪液酸度值，降低米浆水的生物胺含量试验。
米浆水在36h时pH约为3.50，可滴定酸含量为3.79g/L。其中，吸水率与酸度有关，酸度越大吸水量越高。米浆水中生物胺含量也明显降低，组胺与酪胺含量从13mg/L(对照为不加乳酸菌的米浆水)降低到8.5mg/L。浸泡后米的糊化温度从71.49℃(对照为不接种的米浆水)降低到45.51℃。大米最小蒸煮时间从25min(对照为不接菌的米浆水)减少至15min。
表1自然浸泡与接种植物乳杆菌F25-4浸泡对米浆水可滴定酸(g/L)含量的影响
表2自然浸泡与接种植物乳杆菌F25-4浸泡对大米吸水率(％)的影响
浸泡时间 自然浸泡(对照) 接种F25-4浸泡
1h 38.3 38.3
3h 38.8 38.9
5h 38.9 38.6
7h 38.7 39.2
9h 38.6 38.7
12h 38.0 38.3
24h 38.4 38.6
36h 41.2 45.1
48h 41.3 45.6
表3自然浸泡与接种菌株F25-4浸泡对米浆水中组胺和酪胺的影响
添加植物乳杆菌F25-4菌液的浸泡大米蒸煮特性分析如下：
不同方式浸泡后的米经过蒸煮，通过碾米法记录米粒的煮熟时间，以及反映米粒蒸煮特性的吸水性指数、膨胀系数以及水溶性指数，结果如表4，发现接菌株F25-4进行浸米后，大米蒸煮时间显著减少，吸水指数、膨胀系数以及水溶性指数都明显增加，吸水指数表明在蒸煮过程中米粒在相同温度下吸水速度越高越有利于蒸煮，水溶性增加表明米粒中的可溶性物质溶出进入到水溶液中，说明在相同时间中，经植物乳杆菌F25-4浸泡的米蒸煮效果更高。
表4自然浸泡和接植物乳杆菌F25-4浸泡后大米的蒸煮特性比较
差示扫描量热法(DSC)也同样反应了米的糊化特性。与自然浸泡相比，添加植物乳杆菌浸泡后显著降低了米粉的糊化温度，初始温度(To)、峰值温度(Tp)和结论温度(Tc)分别降低了17.9％、11.6％和4.2％。说明加菌浸泡后米所需的蒸煮时间减少。
表5自然浸泡和接植物乳杆菌F25-4浸泡后米的热特性
植物乳杆菌25-4对黄酒酿造品质的影响如下。
将经菌株25-4浸泡过的米105℃蒸煮15min，加水冷却后将剩余的米浆水经过灭菌后作为投料水加入到发酵过程中，再加入酒曲、酵母进行发酵，5天后酒精含量达到149.65kg(酒精浓度14.9％，体积2875L)，总酸在第五天达到最大值3.9g/L。残留总糖(以葡萄糖计)含量为10mg/ml，原酒中苯乙醇的含量增加，高级醇含量降低，脂类含量增加。
表6以接种植物乳杆菌F25-4的米浆水为酿造用水对发酵醪酒精含量(V/V,25℃)的影响。
表7添加菌株F25-4浸泡米浆水对黄酒中挥发性高级醇风味物质的影响
表8添加植物乳杆菌F25-4浸泡米浆水对黄酒中挥发性脂类风味物质的影响。
表7反映了添加植物乳杆菌F25-4浸泡的米浆水对黄酒风味中的高级醇的影响，其中发现对照组中高级醇含量相比较含有接菌米浆水组高级醇的含量显著降低，除苯乙醇外总量分别降低14.9％、19.6％，并且高级醇的种类并未增加。其中苯乙醇含量显著增加，相比较对照组分别增加137.1％，苯乙醇β-苯乙醇又称2-苯乙醇，是一种具有玫瑰花香、蜜香的芳香高级醇，是酒精饮料中重要的高沸点香气成分，广泛存在于各种酒精饮料中，是黄酒中重要芳香物质。异丁醇、异戊醇是黄酒导致上头的主要原因，加入接菌米浆水后，异丁醇的含量略有增加，但异戊醇的含量降低，降低了18.2％，2，3-丁二醇可带给黄酒甜味，增加黄酒的口感。因此，接菌米浆水的添加能减少酒中高级醇的含量，增加苯乙醇的含量，有效的减少黄酒产生的上头感。
黄酒中的脂类是黄酒香气的主要来源之一。如表8所示，添加接菌米浆水组的脂类含量明显高于对照组，分别增加50％、72.8％。种类数目也没有减少，相比较对照组，添加接菌米浆水组增加了十六碳烯酸乙酯、己二酸二丁酯、十二烷酸乙酯、9-十八烯酸乙酯、亚油酸乙酯、2-丙烯酸、3-(4-甲氧基苯基)-2-乙基己基酯，减少了丁酸乙酯、辛酸乙酯、苯甲酸-2- 乙基己基酯、棕榈酸异丙酯。其中乙酸异戊酯降低59.3％，但乙酸-2-乙基苯酯增加4.14mg/L，将米浆水作为补料用水加入发酵后，会降低己酸乙酯与乙酸异戊酯，增加苯乙酸乙酯等。
黄酒感官评定由经验丰富的10人组成一个评定小组(5女5男)。对不同的黄酒样品的感官特征进行评价。第一步，小组成员先观察、品尝和嗅闻黄酒，以识别和记录所含的感官属性。第二步中，小组成员讨论并确定属性，然后建立最终描述词。以外观(红度、浊度)、香气(酒香、果香、花香、谷香)、口感(甜、酸、辣、粘、苦)、口感(涩味、持久性、饱和感) 等14个黄酒描述词。最后一步，小组成员通过量化每个感官描述词来表达他们的判断。强度等级从0到5(0：无，1：很弱，2：普通，3：温和，4：强烈，5：最强烈)。将30mL制备的黄酒样品放在同一种不透明的一次性塑料杯中，对其进行了良好的旋流处理，之后对这些样品随机化进行评价。每个样本重复测定三次。
感官评价将评分以感官雷达图表示，结果如图4，添加接菌米浆水组的黄酒发酵其酒香、持久性、色泽、花香、酸度等特性明显高于对照组。对照组黄酒的浊度、谷香、苦味、涩味、浓郁度以及辣味高于添加接菌米浆水组，这可能是由于酒中氨基酸和风味物质共同作用的结果，较多的酸类和比重较大的苦味氨基酸可能影响着黄酒的酸味和苦味呈味品质。添加接菌米浆水组组的黄酒略优于对照组。
加入经植物乳杆菌F25-4浸泡的米浆水的黄酒相比较传统黄酒酿造，可以快速提高米浆水的酸度，缩短浸米时间，并抑制杂菌的生长，提高浸米过程的稳定性，且有效的降低米浆水中生物胺质量浓度，浸米过程中微生物产酸附着在米上可为黄酒发酵提供酸性环境，保证发酵正常进行。植物乳杆菌F25-4浸泡后改善了蒸煮特性，减少了蒸汽用量，降低能耗。将米浆水添加到发酵过程，增加了产品中苯乙醇的含量，降低异戊醇的含量，减少饮酒后的“上头感”，且米浆水的资源化利用减少了废水的的处理量，进一步降低成本。
实施例2：一株植物乳杆菌及其在黄酒酿造中的应用
一株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)F25-4，已于2021年12月9日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC No.M 20211574。
一株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)F25-4在黄酒酿造中的应用。
根据权利要求2所述的应用，其特征在于：包括下列步骤：
步骤1：将植物乳杆菌F25-4斜面菌种接种于活化培养基，36℃下静置培养30h，然后将得到的培养物接种至装有第一种子培养基，36℃下静置培养20h，然后将得到的培养物接种至第二种子培养基，36℃下静置培养20h，获得种子培养物；
步骤2：在装有米和水的浸米罐中加入种子培养物，混合搅匀后进行浸米。
种子培养物的浓度为1×108CFU/mL，按0.3％的接种量将种子培养物加入装有米和水的浸米罐中。
步骤2中，温度为35℃，时间为30h。
所述第一种子培养基的原料配方包括：米浆水100mL，粳米1g，酵母粉0.5g，葡萄糖2g， 121℃灭菌15min；米浆水的制备方法包括：40℃下按料水比1:1浸泡粳米1h，过10目筛网得米浆水。
所述第二种子培养基的原料配方包括：米浆水100mL，粳米3g，黄酒酒糟1g，酵母粉0.3g，121℃灭菌15min；米浆水的制备方法包括：40℃下按料水比1:1浸泡粳米1h，过10 目筛网得米浆水。
还包括如下步骤：浸米完成后，分离得到米浆水与浸泡后的米，然后向浸泡后的米通入 0.1MPa蒸汽，控制温度在102℃，蒸煮12min，再加水冷却至35℃，落罐后加入灭过菌的米浆水，再加入经活化的安琪活性干酵母和绍酒风味酿酒曲，搅拌均匀后启动发酵；发酵的0-5 天为前酵期，需每4小时搅拌一次，温度控制在25℃，6天为后酵阶段，温度控制在18℃。
活化培养基：胰蛋白胨0.5g，酵母粉0.5g，牛肉膏0.5g，柠檬酸二胺0.2g，氯化钠0.25g，葡萄糖0.05g，Tween 80 0.1g，MnSO40.005g，MgSO40.02g，CaCO30.01g，K2HPO40.2g,FeSO40.004g，蒸馏水100mL，pH5.3-5.5，121℃灭菌20min。
实施例3：一株植物乳杆菌及其在黄酒酿造中的应用
一株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)F25-4，已于2021年12月9日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC No.M 20211574。
一株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)F25-4在黄酒酿造中的应用。
优选的技术方案为：包括下列步骤：
步骤1：将植物乳杆菌F25-4斜面菌种接种于活化培养基，38℃下静置培养40h，然后将得到的培养物按1％的接种量接种至装有第一种子培养基，38℃下静置培养28h，然后将得到的培养物按1％的接种量接种至第二种子培养基，38℃下静置培养28h，获得种子培养物；
步骤2：在装有米和水的浸米罐中按1％的接种量接入种子培养物，混合搅匀后进行浸米。
优选的实施方式为：种子培养物的浓度为9×108CFU/mL。
优选的实施方式为：步骤2中，温度为45℃，时间为40h。
优选的实施方式为：所述第一种子培养基的原料配方包括：米浆水100mL，粳米1g，酵母粉0.5g，葡萄糖2g，121℃灭菌15min；米浆水的制备方法包括：40℃下按料水比1:1浸泡粳米1h，过10目筛网得米浆水。
优选的实施方式为：所述第二种子培养基的原料配方包括：米浆水100mL，粳米3g，黄酒酒糟1g，酵母粉0.3g，121℃灭菌15min；米浆水的制备方法包括：40℃下按料水比1:1浸泡粳米1h，过10目筛网得米浆水。
优选的实施方式为：还包括如下步骤：浸米完成后，分离得到米浆水与浸泡后的米，然后向浸泡后的米通入0.2MPa蒸汽，控制温度在107℃，蒸煮17min，再加水冷却至45℃，落罐后加入灭过菌(灭菌方式是煮沸15min)的米浆水，再加入安琪活性干酒曲，搅拌均匀后启动发酵；发酵的5天为前酵期，需每5小时搅拌一次，温度控制在32℃，18天为后酵阶段，温度控制在25℃。
优选的实施方式为：加入安琪活性干酵母的同时加入安琪绍酒风味酿酒曲。
优选的实施方式为：活化培养基：胰蛋白胨0.5g，酵母粉0.5g，牛肉膏0.5g，柠檬酸二胺0.2g，氯化钠0.25g，葡萄糖0.05g，Tween 80 0.1g，MnSO40.005g，MgSO40.02g，CaCO30.01g，K2HPO40.2g,FeSO40.004g，蒸馏水100mL，pH5.3-5.5，121℃灭菌20min。
16S rDNA基因序列：
以上所述者仅为用以解释本发明之较佳实施例，并非企图具以对本发明做任何形式上之限制，是以，凡有在相同之发明精神下所作有关本发明之任何修饰或变更，皆仍应包括在本发明意图保护之范畴。
SEQUENCE LISTING
<110> 合肥工业大学
<120> 一株植物乳杆菌及其在黄酒酿造中的应用
<140> 2022102751442
<141> 2022-03-21
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1468
<212> DNA
<213> 16S rDNA基因序列
<400> 1
cgtacctgtg ctataatgca gtcgaacgaa ctctggtatt gattggtgct tgcatcatga 60
tttacatttg agtgagtggc gaactggtga gtaacacgtg ggaaacctgc ccagaagcgg 120
gggataacac ctggaaacag atgctaatac cgcataacaa cttggaccgc atggtccgag 180
cttgaaagat ggcttcggct atcacttttg gatggtcccg cggcgtatta gctagatggt 240
ggggtaacgg ctcaccatgg caatgatacg tagccgacct gagagggtaa tcggccacat 300
tgggactgag acacggccca aactcctacg ggaggcagca gtagggaatc ttccacaatg 360
gacgaaagtc tgatggagca acgccgcgtg agtgaagaag ggtttcggct cgtaaaactc 420
tgttgttaaa gaagaacata tctgagagta actgttcagg tattgacggt atttaaccag 480
aaagccacgg ctaactacgt gccagcagcc gcggtaatac gtaggtggca agcgttgtcc 540
ggatttattg ggcgtaaagc gagcgcaggc ggttttttaa gtctgatgtg aaagccttcg 600
gctcaaccga agaagtgcat cggaaactgg gaaacttgag tgcagaagag gacagtggaa 660
ctccatgtgt agcggtgaaa tgcgtagata tatggaagaa caccagtggc gaaggcggct 720
gtctggtctg taactgacgc tgaggctcga aagtatgggt agcaaacagg attagatacc 780
ctggtagtcc ataccgtaaa cgatgaatgc taagtgttgg agggtttccg cccttcagtg 840
ctgcagctaa cgcattaagc attccgcctg gggagtacgg ccgcaaggct gaaactcaaa 900
ggaattgacg ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgaa gctacgcgaa 960
gaaccttacc aggtcttgac atactatgca aatctaagag attagacgtt cccttcgggg 1020
acatggatac aggtggtgca tggttgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt 1080
cccgcaacga gcgcaaccct tattatcagt tgccagcatt aagttgggca ctctggtgag 1140
actgccggtg acaaaccgga ggaaggtggg gatgacgtca aatcatcatg ccccttatga 1200
cctgggctac acacgtgcta caatggatgg tacaacgagt tgcgaactcg cgagagtaag 1260
ctaatctctt aaagccattc tcagttcgga ttgtaggctg caactcgcct acatgaagtc 1320
ggaatcgcta gtaatcgcgg atcagcatgc cgcggtgaat acgttcccgg gccttgtaca 1380
caccgcccgt cacaccatga gagtttgtaa cacccaaagt cggtggggta accttttagg 1440
aaccagccgc ctaaggtcac aggagatg 1468

Claims (9)

1.一株植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）F25-4，已于2021年12月9日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏编号为CCTCC No. M 20211574。
2.一株植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）F25-4在黄酒酿造中的应用，其特征在于：所述植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）F25-4，已于2021年12月9日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏编号为CCTCC No. M 20211574。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：包括下列步骤：
步骤1：将植物乳杆菌F25-4斜面菌种接种于活化培养基，36-38℃下静置培养30-40h，然后将得到的培养物接种至装有第一种子培养基，36-38℃下静置培养20-28h，然后将得到的培养物接种至第二种子培养基，36-38℃下静置培养20-28h，获得种子培养物；
步骤2：在装有米和水的浸米罐中加入种子培养物，混合搅匀后进行浸米。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：种子培养物的浓度为1-9×108 CFU/mL，按0.3-1%的接种量将种子培养物加入装有米和水的浸米罐中。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：步骤2中，温度为35-45℃，时间为30-40h。
6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述第一种子培养基的原料配方包括：米浆水100mL，粳米1g，酵母粉0.5g，葡萄糖2g，121℃灭菌15min；米浆水的制备方法包括：40℃下按料水比1:1浸泡粳米1h，过10目筛网得米浆水。
7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述第二种子培养基的原料配方包括：米浆水100mL，粳米3g，黄酒酒糟1g，酵母粉0.3g，121℃灭菌15min；米浆水的制备方法包括：40℃下按料水比1:1浸泡粳米1h，过10目筛网得米浆水。
8.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：还包括如下步骤：浸米完成后，分离得到米浆水与浸泡后的米，然后向浸泡后的米通入0.1~0.2 MPa蒸汽，控制温度在102-107℃，蒸煮12-17min，再加水冷却至35-45℃，落罐后加入灭过菌的米浆水，再加入经活化的安琪活性干酵母和绍酒风味酿酒曲，搅拌均匀后启动发酵；发酵的0-5天为前酵期，需每4-5小时搅拌一次，温度控制在25-32℃，6-18天为后酵阶段，温度控制在18-25℃。
9.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：活化培养基：胰蛋白胨0.5g，酵母粉0.5g，牛肉膏0.5g，柠檬酸二胺0.2g，氯化钠0.25g，葡萄糖0.05g，Tween 80 0.1g，MnSO4 0.005g，MgSO4 0.02g，CaCO3 0.01g，K2HPO4 0.2g, FeSO40.004g，蒸馏水100 mL，pH5.3-5.5，121℃灭菌20min。
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