CN115317485B - 异莲心碱、甲基莲心碱在制备抗肝纤维化药物中的应用 - Google Patents
异莲心碱、甲基莲心碱在制备抗肝纤维化药物中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本专利具体涉及异莲心碱在制备抗肝纤维化药物中的应用。中药莲子心中的生物碱类成分包括莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱等，本发明经动物实验研究表明，异莲心碱、甲基莲心碱能降低CCl4诱导的小鼠肝纤维化模型血清中ALT、AST的浓度，以及血清中HA、LN、PC‑III、IV‑C的浓度，改善肝组织病理症状，具有良好的抗肝纤维化作用，且异莲心碱作用效果优于甲基莲心碱，而莲心碱对肝纤维化没有显著治疗作用。细胞实验表明异莲心碱、甲基莲心碱降低肝星状细胞LX‑2及T6的活力，显著抑制肝星状细胞的活化指标表达，诱导活化型肝星状细胞死亡，且异莲心碱作用效果优于甲基莲心碱。因此可用于制备抗肝纤维化药物。
Description
技术领域
本发明涉及异莲心碱、甲基莲心碱在制备抗肝纤维化药物中的应用，属中药制药领域。
背景技术
肝纤维化是多种病因所致慢性肝损伤后的修复反应，病程迁延而可逆，若无积极有效干预措施可进展为肝硬化，进而引发肝衰竭、肝性脑病、胃食管静脉曲张破裂出血等一系列严重并发症，给患者造成极大痛苦和死亡风险，同时也给社会带来了巨大经济负担。肝纤维化作为慢性肝脏疾病的结局，其中心环节是肝细胞损伤引起的肝星状细胞(Hepaticstellate cell,HSC)的激活。肝星状细胞的激活可破坏肝脏细胞外基质(ExtracellularMembrane,ECM)生成和降解之间的平衡，使ECM蛋白过多沉积于肝脏，从而引起肝纤维化，甚至肝硬化。现代研究表明：肝纤维化患者中有20％～40％的病人最终会发展为肝硬化，甚至肝癌。探讨抑制活化的肝星状细胞以寻找有效的抗肝纤维化药物至关重要，已经成为国内外学者关注的热门话题。
目前临床上对肝纤维化的治疗主要以消除病因包括抗病毒治疗、戒酒减肥及消除致病因子和保肝治疗为主，如扶正化瘀胶囊、鳖甲软肝片、鳖甲煎丸等。但是它们只能延缓疾病的进展，并不能达到治愈肝纤维化的目的。并且，由于复方成分复杂，靶点繁多，作用机制不明的特点，其治疗周期长，且疗效因人而异，容易产生难以评估的副作用。中药单体具有成分明确，开发为专一靶点治疗药物的优点，是未来肝纤维化药物研发的新方向。而临床上用于肝纤维化治疗的中药单体仅有水飞蓟宾。但由于水飞蓟宾口服吸收差，生物利用度较低，限制了其临床应用。因此，亟需寻找安全高效的肝纤维化治疗药物。
中药莲子心始载于《神农本草经》，并被列为上品。莲子心的主要功效是清心安神，交通心肾，涩精止血。莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱是其主要的生物碱类活性成分。现代药理学研究表明，三者具有抗肿瘤、细胞和脏器保护作用、抗氧化、抗病毒及神经***疾病的治疗作用。但对肝纤维化作用极少研究，仅见二例有关甲基莲心碱对肝脏的作用，其中一例对APAP导致的肝脏毒性损伤具有预防和治疗作用的报道，另一例为对CCl4诱导的肝纤维化动物有抗氧化及抗炎症的作用。我们的动物和细胞实验表明莲心碱无抗肝纤维化作用，异莲心碱抗肝纤维化的作用优于甲基莲心碱，以上研究目前尚属首次报道。
发明内容
本发明的目的在于深入解析莲子心中具有抗肝纤维化作用的新的化合物，本发明的另一目的在于提供异莲心碱、甲基莲心碱新的医药用途。
本发明所涉及的抗肝纤维化药物，是从传统中药莲子心中提取的重要生物碱类有效成分，其分子式分别为C37H42N2O6及C38H44N2O6，其结构式如下：
异莲心碱在制备抗肝纤维化药物中的应用。
所述的异莲心碱在制备抗肝纤维化药物中的应用，其特征在于，所述抗肝纤维化药物是由活性成分异莲心碱和药学上可接受的辅料组成的药物组合物。
所述的异莲心碱在制备抗肝纤维化药物中的应用，其特征在于，所述的药物组合物中活性成分异莲心碱占总重量的0.1％-99.9％。
所述的异莲心碱在制备抗肝纤维化药物中的应用，其特征在于，所述的药物组合物的剂型为片剂、颗粒剂、丸剂、胶囊剂或注射剂。
本发明的技术方案是采用小鼠肝纤维化模型和肝星状细胞LX-2及T6，比较中药莲子心来源化合物莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱在小鼠整体、体外细胞水平上对肝纤维化指标、肝星状细胞活化指标等的作用效果，探究中药莲子心中具有抗肝纤维化效应的新化合物，为制备抗肝纤维化的药物提供重要的实验依据。
本发明经动物实验证明：异莲心碱、甲基莲心碱能降低CCl4诱导的小鼠肝纤维化模型血清中ALT、AST的浓度，以及HA、LN、PC-III、IV-C的浓度，改善肝组织病理症状，具有良好的抗肝纤维化作用，且异莲心碱作用效果优于甲基莲心碱，而莲心碱对肝纤维化没有显著治疗作用。基于UPLC-MS/MS建立的小鼠药物代谢动力学分析方法，发现异莲心碱相较于甲基莲心碱，具有较好的相对生物利用度，安全性高。细胞实验证明：异莲心碱、甲基莲心碱降低肝星状细胞LX-2及T6的活力，显著抑制肝星状细胞的活化指标表达，诱导活化型肝星状细胞死亡，且异莲心碱作用效果优于甲基莲心碱。本发明提供的异莲心碱、甲基莲心碱作为治疗肝纤维化药物的新的应用，对突破肝纤维化治疗瓶颈具有重大意义。
附图说明
图1是本发明实施例1中CCl4造模给药后HE、Masson染色及α-SMA的IHC染色图，其中1为溶剂对照组，2为肝纤维化模型组，3为莲心碱治疗组，4为异莲心碱治疗组，5为甲基莲心碱治疗组，6为阳性药水飞蓟宾治疗组；
图2是本发明实施例3中不同浓度的异莲心碱或甲基莲心碱对LX-2细胞存活率影响的柱形图；
图3是本发明实施例3中不同浓度的异莲心碱或甲基莲心碱对T6细胞存活率影响的柱形图；
图4是本发明实施例4中不同浓度的异莲心碱或甲基莲心碱对LX-2细胞α-SMA、COL1α1基因的mRNA表达水平影响的柱形图；
图5是本发明实施例4中不同浓度的异莲心碱或甲基莲心碱对T6细胞α-SMA、COL1α1基因的mRNA表达水平影响的柱形图。
图6是本发明实施例5中不同浓度的异莲心碱或甲基莲心碱对LX-2细胞α-SMA、COL1α1的蛋白表达水平影响的柱形图。
图7是本发明实施例5中不同浓度的异莲心碱或甲基莲心碱对T6细胞α-SMA、COL1α1的蛋白表达水平影响的柱形图。
图8是本发明实施例6中不同浓度的异莲心碱或甲基莲心碱对LX-2细胞台盼蓝染色图。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施仅用于说明本发明而非限定本发明的范围。
实施例1(体内实验)：莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱对四氯化碳诱导的肝纤维化模型小鼠中的治疗作用，以及与阳性药物水飞蓟宾的比较。
1.1动物
雄性ICR小鼠48只，购自上海斯莱克实验动物有限公司，许可证号：SCXK(沪)2022-0025。动物自由进食、饮水，给予标准颗粒饲料，于标准光照周期(12小时光照、12小时黑夜)、室温22℃、恒湿环境中适应性饲养1周后开始实验。
1.2药物与主要试剂
四氯化碳(CCl4；分析纯，南京化学试剂有限公司)、橄榄油(山东鲁花集团有限公司)、莲心碱(上海源叶生物有限公司)、异莲心碱(由中国药科大学郭青龙教授惠赠，纯度99.5％)、甲基莲心碱(上海源叶生物有限公司)，水飞蓟宾(上海源叶生物有限公司)，将CCl4与橄榄油按体积比1:9制成10％橄榄油剂，水飞蓟宾、莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱用0.4％羧甲基纤维素钠配置成混悬液。
1.3主要仪器
血清生化仪、组织切片机、组织包埋仪、DM2000莱卡研究级显微镜
1.4动物分组
动物随机分成六组：正常组、模型组、阳性药物水飞蓟宾组(30mg/kg)、莲心碱治疗组(50mg/kg)、异莲心碱治疗组(50mg/kg)、甲基莲心碱治疗组(50mg/kg)，每组8只。
1.5动物模型建立及治疗方法
除正常组外的五组小鼠给予CCl4橄榄油溶液腹腔注射(0.5ml/kg)，每周3次，持续8周，从第5周开始灌胃给予水飞蓟宾、莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱治疗4周，每天给药1次。
1.6指标检测
实验结束后，每只小鼠称重并腹腔注射10％水合氯醛(0.2ml/20g)麻醉，眼眶取血后，剖开腹腔分离完整肝脏并称重，计算肝脏/体重比率。小鼠血液静置2h后，3000转/分钟下离心15min，取上清，-20℃冻存，备用。使用半自动生化仪检测小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)含量，使用ELISA试剂盒检测小鼠血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、III型前胶原(PCIII)的含量。肝脏4％多聚甲醛固定，做组织的HE、Masson染色及α-SMA的IHC染色，观察肝纤维化肝脏病理及胶原沉积的影响。
1.7统计学方法
实验数据均使用SPSS软件(version 20.0)进行分析，所有数据均采用SD或SEM表示。使用Prism 8.0(Graph Pad Software Inc,San Diego,CA)进行组间差异分析。以P<0.05为差别有统计学意义。
1.8结果结论
结果(1)：异莲心碱、甲基莲心碱及阳性药水飞蓟宾可以降低肝纤维化小鼠血清中ALT、AST的含量，异莲心碱作用优于甲基莲心碱，然而莲心碱没有明显作用(表1)。
表1各组小鼠血清指标ALT、AST的检测结果(平均值±标准差)单位:(U/L)
*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，与对照组相比，#p<0.05，##p<0.01，###p<0.001，与肝纤维化模型组对比。
结果(2)：异莲心碱、甲基莲心碱及阳性药水飞蓟宾可以降低肝纤维化小鼠血清中纤维化指标HA、LN、PCIII的含量，异莲心碱作用优于甲基莲心碱，然而莲心碱没有明显作用(表2)。
表2各组小鼠血清肝纤维化指标HA、LN、PC-III、Ⅳ-C的检测结果 单位:(mg/mL)
*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，与对照组相比，#p<0.05，##p<0.01，###p<0.001，与肝纤维化模型组对比。
结果(3)：HE染色、Masson染色及免疫组化α-SMA染色分析表明，CCl4诱导的小鼠肝纤维化模型中肝脏结构紊乱，大量胶原沉积，肝纤维化病变明显，肝星状细胞大量活化。异莲心碱、甲基莲心碱及阳性药水飞蓟宾可以抑制纤维化肝脏中的胶原沉积，并抑制肝星状细胞活化指标，但莲心碱并没有这一作用(图1)。
结论：异莲心碱相较于甲基莲心碱，发挥了较好的抗肝纤维化作用。
实施例2(体内实验)：异莲心碱、甲基莲心碱在小鼠体内的药代动力学研究
2.1动物
雄性ICR小鼠20只，购自上海斯莱克实验动物有限公司，许可证号：SCXK(沪)2022-0025。动物自由进食、饮水，给予标准颗粒饲料，于标准光照周期(12小时光照、12小时黑夜)、室温22℃、恒湿环境中适应性饲养1周后开始实验。
2.2动物分组
动物分为两组，异莲心碱、甲基莲心碱处理组，每组10只。
2.3药物处理
取禁食12h后的小鼠，异莲心碱、甲基莲心碱用0.4％羧甲基纤维素钠配置成混悬液，分别灌胃给予异莲心碱、甲基莲心碱(50mg/kg)。
2.4样本收集
灌胃组小鼠于给药前(0min)、给药后0.083，0.25，0.50，0.75、1.00，2.00，3.00，4.00，5.00，6.00，8.00，12.00，24.00h眼眶取血。以1:2蛋白沉淀法进行血浆样品前处理，选择甲醇作为蛋白沉淀剂。吸取50μL小鼠血浆样品，加入50μL的内标储备液(100ng/mL)于2mL离心管中，涡旋5min，以14000r/min离心10min后取50μL上清液到液相小瓶，2μL用于UPLC-MS/MS分析。
2.5实验方法
色谱条件：采用Waters AcquityBEH C18柱(2.1×50mm，1.8μm)；以0.1％甲酸水溶液为流动相A，0.1％甲酸乙睛溶液为流动相B进行梯度洗脱(0-1min：10％B，1-3min：10％-80％B，3.0-3.5min：80％-15％B，3.5-5.0min：15％-10％B)，总运行时间：5min；流速：0.3mL/min，柱温为40℃，进样量为2μL。质谱条件：采用电喷雾离子源(ESI)，负离子模式，扫描方式为多反应检测(MRM)模式，用于检测的离子为：m/z 557.4/203.18(异莲心碱、甲基莲心碱)，m/z 248.2/121(IS)。MS工作参数设置为：喷射电压为3500V，离子源温度350℃，干燥气(N2)流速为10L/min，喷雾器压力40psi，护套气体温度350℃，和护套气体流量，11L/min。AST01和IS的碎裂电压分别为50V和260V，碰撞能分别为34V和44V。使用AgilentMassHunter companion软件(Multiquant 2.1)进行数据采集和分析。
2.6数据处理与统计学分析
用每个分析批次的校准曲线测定血浆中异莲心碱、甲基莲心碱的浓度。药代动力学参数包括消除半衰期(t1/2)、浓度-时间曲线下面积(AUC)、平均停留时间(MRT)、表观分布体积(Vd)和总血浆清除率(CL)，通过DAS(药物与统计，2.0版)软件的非房室模型计算。
2.7结果与结论
结果：通过药物代谢动力学分析得到异莲心碱、甲基莲心碱在小鼠体内的主要药动学参数(表3)。结果表明，异莲心碱相较于甲基莲心碱，呈现出较好的药动学参数。结论：异莲心碱相较于甲基莲心碱，具有较好的相对生物利用度，安全性高，为异莲心碱、甲基莲心碱的早期成药性评估提供了一定的基础。
表3异莲心碱、甲基莲心碱在小鼠体内的主要药动学参数(平均值±标准差)
实施例3(体外实验)：肝星状细胞体外培养，观察异莲心碱、甲基莲心碱对肝星状细胞活力的抑制作用
3.1细胞系
人肝星状细胞细胞系LX-2、大鼠肝星状细胞细胞系T6
3.2药物与试剂
DMEM(上海源培生物科技股份有限公司)、胎牛血清(南京森贝伽生物科技有限公司)、PBS(实验室自制)、Trypsin(BIOFROX，货号1004GR100)、EDTA(BIOSHAP)、MTT(碧云天)。
3.3仪器
超净工作台(ESCO BIOTECH)、CO2培养箱(Thermo Scientific)、全自动高压灭菌锅(美国致微ZEALWAY)、超低温冰箱(Haier)、纯水仪(南京汉隆实验器材有限公司)、电子天平(德国赛多利斯有限公司)、酶标仪(Bio Tek)。
3.4实验方法
采用MTT法检测异莲心碱、甲基莲心碱对LX-2及T6的细胞活力。取对数生长的LX-2及T6细胞，用胰蛋白酶消化后，接种于96孔板中，5000个/孔，培养至细胞密度为60％时，加入0、0.3、0.63、1.25、2.5、5、10、20、40、80、160μM的异莲心碱，或加入0、0.9375、1.875、3.75、7.5、15、30、60、120、240、480μM的甲基莲心碱，每个浓度设置5个复孔，所有孔的体系均为200μl。
24h作用结束后，每孔加入5％浓度的噻唑蓝(MTT)溶液20μl，继续孵育4h。然后吸掉上清，每孔加入200μl DMSO，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶标仪490nm处测定各孔的吸光值。
3.5结果与结论
结果：异莲心碱在10μM抑制LX-2及T6的细胞活力，抑制作用随着剂量的增大而增强，呈现明显的剂量依赖性；甲基莲心碱在30μM抑制LX-2及T6的细胞活力，抑制作用随着剂量的增大而增强，呈现明显的剂量依赖性(图2、3)。
结论：异莲心碱、甲基莲心碱体外均有抑制肝星状细胞活力的作用，且异莲心碱作用效果优于甲基莲心碱。
实施例4(体外实验)：肝星状细胞体外培养，观察异莲心碱、甲基莲心碱对肝星状细胞活化指标mRNA表达的作用
4.1细胞系
人肝星状细胞细胞系LX-2、大鼠肝星状细胞细胞系T6
4.2药物与试剂
DMEM(上海源培生物科技股份有限公司)、胎牛血清(南京森贝伽生物科技有限公司)、PBS(实验室自制)、Trypsin(BIOFROX，货号1004GR100)、EDTA(BIOSHAP)、Trizol(ambion)、氯仿(国药接团化学试剂有限公司)、异丙醇(南京化学试剂股份有限公司)、75％乙醇(实验室自制)、DEPC水(Beyotime)、逆转录试剂盒(上海翊圣生物科技有限公司，产品编号11141ES60)、扩增试剂盒(上海翊圣生物科技有限公司，产品编号11201ES60)。
4.3仪器
超净工作台(ESCO BIOTECH)、CO2培养箱(Thermo Scientific)、全自动高压灭菌锅(美国致微ZEALWAY)、超低温冰箱(Haier)、纯水仪(南京汉隆实验器材有限公司)、冰箱(Haier)、电子天平(德国赛多利斯有限公司)、实时荧光定量PCR仪(Bio-Rad)、NanodropOne(ThermoFisher)。
4.4实验方法
取对数生长的LX-2及T6细胞，用胰蛋白酶消化后，接种于10cm大皿中，细胞密度达到60％时，异莲心碱(5、10、20μM)或甲基莲心碱(15、30、60μM)作用24h后，加入1mL Trizol，吹打收集，室温静置5min，于4℃、12000rmp/min·离心15min；离心后吸取0.5mL上层无色水相转移于新的无酶EP管，加入0.5mL异丙醇混匀，静置10min后再于4℃、12000rmp/min离心10min；离心后去除上清，可以看到白色沉淀即为RNA，每孔加入1mL 75％乙醇震荡使RNA沉淀悬浮后，4℃、7500rmp/min离心5min，用枪头吸尽液体，通风橱中干燥15min，加20μL DEPC水溶解即得细胞的mRNA，使用Nanodrop测定浓度及纯度，按照Ⅱ1st Strand cDNASynthesis kit试剂操作说明配制逆转录体系，最后得到组织和细胞的cDNA。所得cDNA按照qPCR SYBR Green Master Mix kit试剂操作说明配制扩增体系，按照说明进行扩增程序，得到基因扩增CT值，结果与大鼠GAPDH或人类GAPDH归一化，采用2-ΔΔCT计算方法进行数据统计分析。
4.5结果与结论
结果：异莲心碱、甲基莲心碱能剂量依赖性地降低肝星状细胞中活化指标α-SMA、COL1α1基因的mRNA表达水平，异莲心碱在低剂量下具有显著性差异(P＜0.01)，甲基莲心碱在其高剂量下具有显著性差异(P＜0.01)(图4，5)。
结论：异莲心碱、甲基莲心碱体外发挥了抑制肝星状细胞活化的作用，且异莲心碱效果优于甲基莲心碱。
实施例5(体外实验)：肝星状细胞体外培养，观察异莲心碱、甲基莲心碱对肝星状细胞活化指标蛋白表达的作用。
5.1细胞系
人肝星状细胞细胞系LX-2、大鼠肝星状细胞细胞系T6
5.2药物与试剂
DMEM(上海源培生物科技股份有限公司)、胎牛血清(南京森贝伽生物科技有限公司)、PBS(实验室自制)、Trypsin(BIOFROX，货号1004GR100)、EDTA(BIOSHAP)、裂解液(碧云天)、电泳液(实验室自制)、电泳液(实验室自制)、曝光液(南京善本生物有限公司)、PVDF膜(GVS North America Sanford,ME)。
5.3仪器
超净工作台(ESCO BIOTECH)、CO2培养箱(Thermo Scientific)、全自动高压灭菌锅(美国致微ZEALWAY)、超低温冰箱(Haier)、纯水仪(南京汉隆实验器材有限公司)、冰箱(Haier)、电子天平(德国赛多利斯有限公司)、曝光仪(Bio-Rad)。
5.4实验方法
取对数生长的LX-2及T6细胞，用胰蛋白酶消化后，接种于10cm大皿中，细胞密度达到60％时，异莲心碱(5、10、20μM)或甲基莲心碱(15、30、60μM)作用24h后，用RIPA裂解缓冲液进行细胞裂解，收集细胞裂解物，-20℃储藏过夜。蛋白混合液融化，于4℃、12000rpm下离心15min，吸取上清以BCA法测定蛋白浓度。蛋白上样量为40μg，进行12％十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳，PVDF转膜，非特异性封闭；加入相应一抗，4℃过夜，加入辣根过氧化物酶标记的二抗进行杂交。加入ECL发光液，以凝胶成像仪(Bio-Rad)进行成像与分析。
5.5结果与结论
结果：异莲心碱、甲基莲心碱能剂量依赖性地降低肝星状细胞中活化指标COL1A1、ACTA2基因的mRNA表达水平，异莲心碱在低剂量下具有显著性差异(P＜0.01)，甲基莲心碱在其高剂量下具有显著性差异(P＜0.01)(图6，7)。
结论：异莲心碱、甲基莲心碱体外发挥了抑制肝星状细胞活化的作用，且异莲心碱效果优于甲基莲心碱。
实施例6(体外实验)：肝星状细胞体外培养，观察异莲心碱、甲基莲心碱对肝星状细胞死亡的作用。
6.1细胞系
人肝星状细胞细胞系LX-2、大鼠肝星状细胞细胞系T6
6.2药物与试剂
DMEM(上海源培生物科技股份有限公司)、胎牛血清(南京森贝伽生物科技有限公司)、PBS(实验室自制)、Trypsin(BIOFROX，货号1004GR100)、EDTA(BIOSHAP)、台盼蓝试剂盒(碧云天)。
6.3仪器
超净工作台(ESCO BIOTECH)、CO2培养箱(Thermo Scientific)、全自动高压灭菌锅(美国致微ZEALWAY)、超低温冰箱(Haier)、纯水仪(南京汉隆实验器材有限公司)、冰箱(Haier)、电子天平(德国赛多利斯有限公司)、显微镜(ZEISS)。
6.4实验方法
取对数生长的LX-2及T6细胞，用胰蛋白酶消化后，接种于六孔板中，细胞密度达到60％时，异莲心碱(5、10、20μM)或甲基莲心碱(15、30、60μM)作用24h后，使用不含EDTA的胰蛋白酶消化细胞并离心收集，然后使用PBS洗涤收集的细胞两次并重悬细胞。吸取90μL重悬细胞于塑料离心管中，加入10μL台盼蓝染色液，轻轻混匀，染色1min。用血细胞计数器对细胞进行计数，并在随机视野中采集图像。染色的蓝色细胞代表死细胞。
6.5结果与结论
结果：台盼蓝结果显示异莲心碱、甲基莲心碱能剂量依赖性地诱导活化型肝星状细胞死亡(图8)。
结论：异莲心碱、甲基莲心碱体外发挥了诱导活化型肝星状细胞死亡的作用，且异莲心碱效果优于甲基莲心碱。
以上对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明，但本发明创造并不限于所述实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可作出种种的等同的变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。
Claims (4)
1.异莲心碱在制备抗肝纤维化药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的异莲心碱在制备抗肝纤维化药物中的应用，其特征在于，所述抗肝纤维化药物是由活性成分异莲心碱和药学上可接受的辅料组成的药物组合物。
3.根据权利要求1或2所述的异莲心碱在制备抗肝纤维化药物中的应用，其特征在于，所述的药物组合物中活性成分异莲心碱占总重量的0.1％-99.9％。
4.根据权利要求1或2所述的异莲心碱在制备抗肝纤维化药物中的应用，其特征在于，所述的药物组合物的剂型为片剂、颗粒剂、丸剂、胶囊剂或注射剂。
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Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 莲子心对肝纤维化大鼠的抗脂质过氧化作用研究;施京红等;《中药材》;第39卷(第8期);第1869-1872页 * |
| 莲子心醇提物抗四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的实验研究;高天娇等;《中国中西医结合杂志》;第34卷(第12期);第1476-1480页 * |
| 莲子的养生保健作用;单玉刚;《中国药膳研究会首届药膳大会》;第368-371页 * |
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