CN115219471A - 一种检测微囊藻毒素-lr的荧光探针的制备和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及了一种检测微囊藻毒素‑LR的荧光探针的制备和应用。该荧光探针由邻苯二酚和三价铁在pH为3～4的缓冲溶液中混合而制得，可以低成本和高灵敏检测水样中MC‑LR。首先，该探针制备方法简单，能对MC‑LR表现出良好的灵敏度，在0.1～1.8μg/L MC‑LR的范围呈现线性关系(R2＝0.99)，检测限为0.04μg/L；其次，该荧光探针对MC‑LR有良好的选择性，不受其他氨基酸的干扰；再次，该荧光探针响应迅速，光稳定性好。此外，将该探针应用在湖水和自来水中的MC‑LR的检测，获得了令人满意的回收率。
Description
技术领域
本发明属于荧光探针技术领域，具体涉及一种检测微囊藻毒素-LR的荧光探针的制备和应用。
背景技术
微囊藻毒素(MC)是一类具有生物活性的环状七肽化合物，为分布最广泛的肝毒素。主要由淡水藻类铜绿微囊藻产生，具有相当的稳定性。它能够强烈抑制蛋白磷酸酶的活性，还是强烈的肝脏肿瘤促进剂。(D.P.Singh,M.B.Tyagi,A.Kumar,et al.World Journalof Microbiology and Biotechnology,2001,17:15-22；L.Pearson,T.Mihali,M.Moffitt,et al.Marine drugs,2010,8:1650-1680.)在已报道的MC的八十多种异构体中，微囊藻毒素-LR(MC-LR)是最为常见的种类，其毒性也最强。(P.T.Orr,G.J.Jones.Limnology andoceanography,1998,43:1604-1614；L.D.Ma,X.L.Zhao,Z.H.Zhang,et al.Talanta,2022,236:122864)中国生活饮用水标准限制饮用水中该毒素含量为1μg/L。(S.Pouria,A.deAndrade,J.Barbosa,et al.The Lancet,1998,352:21-26；S.G.Bell,G.A.Codd.Reviewsin Medical Microbiology,1994,5:256-264)因此，如何高灵敏度地检测MC-LR成为科学领域的研究热点。
近年来，研究人员已经开发多种分析技术实现对MC-LR的灵敏检测，主要有：液相色谱法、气相色谱法、薄层层析法、免疫检测法等。(M.Dai,P.Xie,G.Liang,et al.Journalof chromatography B,2008,862:43-50；X.Guo,P.Xie,J.Chen,et al.Journal ofChromatography B,2014,963:54-61；S.M.Taghdisi,N.M.Danesh,M.Ramezani,etal.Talanta,2017,166:187-192；Z.L.Xu,S.L.Ye,L.Luo,et al.Science of The TotalEnvironment,2020,708:134614.H.W.Yu,A.Jang,L.H.Kim,et al.Environmentalscience&technology,2011,45:7804-7811；F.S.Chu,X.Huang,R.D.Wei,et al.Appliedand Environmental Microbiology,1989,55:1928-1933)虽然这些方法具有各自的优势，但也有一定的局限性，如：仪器复杂、背景高、灵敏度低等。荧光检测法通过记录荧光强度的变化来实现检测，与其他方法相比，其具有多种优势，包括仪器简单、操作方便和灵敏度高。然而，目前基于MC-LR的荧光探针研究非常少，已经报道的荧光探针成本较高，并且在实际检测中的回收率较低。(Li B,Liu Y,Xie P,et al.Water Research,2022,221:118811)因此，致力于开发一种能简单、低成本、高灵敏检测水样中MC-LR的荧光探针是非常有意义的。
发明内容
根据所提出的要求，本发明人对此进行了深入研究，在付出大量创造性劳动后，提供了一种检测微囊藻毒素-LR的荧光探针。
本发明的技术方案是，一种检测微囊藻毒素-LR荧光探针，其结构是基于邻苯二酚与三价铁组成的探针。
一种检测微囊藻毒素-LR的荧光探针的制备方法。步骤如下：
将1当量的邻苯二酚溶液和6～8当量的三氯化铁溶液充分混合5～15分钟，转移至10mL容量瓶中，用pH为3～4的缓冲溶液定容，即为所述的荧光探针。
本发明的有益效果是，一种检测微囊藻毒素-LR的荧光探针良好的光谱响应性能。首先，研究探针的紫外吸收光谱。探针在275nm附近有吸收峰，加入MC-LR后，在275nm附近的吸收峰增强，说明MC-LR的加入使Fe3+-邻苯二酚二元络合物解体，释放出部分与Fe3+结合的邻苯二酚。接着，研究了该探针的荧光光谱性质。加入MC-LR之前，探针本身的荧光较弱；加入MC-LR之后，在330nm左右出现了明显的荧光增强。随着MC-LR浓度的增大，探针分子的荧光强度不断增强。因此该探针可以用来检测MC-LR。该探针的荧光增强变化在0.1μg/L到1.8μg/L检测范围内与MC-LR的浓度呈线性关系(R2＝0.99)，检测限为0.04μg/L，说明探针可以高灵敏地检测MC-LR。随后，研究探针的选择性，考察探针与其他氨基酸(L-色氨酸，L-苯丙氨酸，L-苏氨酸，L-异亮氨酸，L-亮氨酸，L-蛋氨酸，L-缬氨酸，L-赖氨酸)以及检测物(MC-LR)的荧光响应情况。结果发现，只有MC-LR能引起荧光增强，其他检测物则不能引起探针的荧光增强。以上结果表明，此荧光探针可以灵敏地检测MC-LR而不受其他检测物的影响。此外，该荧光探针响应迅速，光稳定性好。
一种检测微囊藻毒素-LR的荧光探针的应用。MC-LR一般存在于水中，湖水和自来水被用来评估荧光探针在实际样品中的应用。为了确保实验的准确性，将取得的湖水和自来水样本先静置2小时，然后取1mL用超纯水稀释至100mL备用。接着分别加入不同浓度的MC-LR，在湖水中获得了95.00％～106.25％的回收率，在自来水中获得了98.75％～105.00％的回收率。这些结果说明，探针能够检测实际样品中的MC-LR，为监控水中的MC-LR提供了一种可靠的手段。
附图说明
图1为荧光探针的制备及其与MC-LR作用示意图。
图2为荧光探针与MC-LR作用前后的紫外可见吸收光谱图。
图3为荧光探针与不同浓度的MC-LR作用后的荧光光谱图。
横坐标为波长，纵坐标为荧光强度。荧光探针的浓度均为1.5×10-6mol/L，MC-LR浓度分别为：0,0.1,0.25,0.5,0.8,1.0,1.2,1.5,1.8μg/L。荧光激发波长为275nm，发射波长范围为285～400nm。
图4为荧光探针对不同MC-LR浓度的荧光线性响应图。
图5为荧光探针的选择性图。
荧光探针的浓度为1.5×10-6mol/L，MC-LR浓度为1.8μg/L，其它分析物浓度为100μg/L。
图6为荧光探针的时间响应图。
荧光探针的浓度为1.5×10-6mol/L，MC-LR浓度为0,0.5,0.8μg/L。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明，但不限于此。
实施例1：
荧光探针的制备
将1当量的邻苯二酚溶液和7.5当量的三氯化铁溶液充分混合10分钟，转移至10mL容量瓶中，用pH为3的缓冲溶液定容，即为所述的荧光探针。探针的制备以及与MC-LR的作用如图1所示。
实施例2：
荧光探针的紫外可见吸收光谱的测定
紫外可见吸收光谱测定用的仪器为安捷伦Cary60紫外可见分光光度计。从图2中可以看出，探针在275nm附近有吸收峰，加入MC-LR后，在275nm附近的吸收峰增强，说明MC-LR的加入使Fe3+-邻苯二酚二元络合物解体，释放出部分与Fe3+结合的邻苯二酚。
实施例3：
荧光探针与MC-LR作用的荧光光谱的测定
如图3所示，浓度为1.5×10-6mol/L，MC-LR的浓度依次为0,0.1,0.25,0.5,0.8,1.0,1.2,1.5,1.8μg/L。激发波长固定为275nm，发射波长范围为285～400nm。狭缝宽度为5.0nm/5.0nm，所用的荧光测定仪器为日立F4600荧光分光光度计。从图3可以看出，加入MC-LR之前，荧光探针荧光强度较弱；加入MC-LR之后，在330nm左右处出现了发射峰。这是因为MC-LR与构成探针的Fe3+竞争性配位结合，导致探针的Fe3+-邻苯二酚二元络合物解体，从而释放出邻苯二酚的荧光。随着MC-LR浓度的增大，探针分子的荧光强度不断增强。图4为探针对不同MC-LR浓度的响应线性图。MC-LR浓度范围在0.1～1.8μg/L时，探针的荧光强度变化与MC-LR浓度呈现线性关系(R2＝0.99)，检测限为0.04μg/L，这些结果说明，探针可以高灵敏地检测MC-LR。
实施例4：
荧光探针对MC-LR测定的选择性
考察在浓度为1.5×10-6mol/L的荧光探针溶液中加入MC-LR及其他氨基酸(L-色氨酸，L-苯丙氨酸，L-苏氨酸，L-异亮氨酸，L-亮氨酸，L-蛋氨酸，L-缬氨酸，L-赖氨酸)的荧光响应情况。从图5中可以看出，只有MC-LR能引起荧光增强，而其他检测物则不能引起探针的荧光增强。这些结果表明，荧光探针对MC-LR有较好的选择性。
实施例5：
荧光探针与MC-LR作用的响应时间的测定
我们研究了荧光探针对MC-LR的响应时间，MC-LR浓度为0,0.5,0.8μg/L，其结果如图6。从图中可以看出，该探针对MC-LR的响应瞬时完成，且在后续保持稳定，这说明其光稳定性好，能够满足在实际样品中进行检测的要求。
实施例6：
荧光探针应用于湖水样品中的检测
湖水样本取自湘潭大学画眉潭，样品静置2小时，取1mL用超纯水稀释100倍备用。测量时取1mL样本，分别加入不同浓度的MC-LR，结果列于表1。从表中可以看出，探针对湖水中MC-LR的回收率为95.00％～106.25％。
表1湖水中MC-LR加标回收率的测定
实施例7：
荧光探针应用于自来水水样品中的检测
自来水样本取自湘潭大学化学实验室水龙头，样品静置2小时，取1mL用超纯水稀释100倍备用。测量时取1mL样本，分别加入不同浓度的MC-LR，结果列于表2。从表中可以看出，探针对自来水中MC-LR的回收率为98.75％～105.00％。由此可见，该探针可有效地应用于实际样品中MC-LR的测定。
表2自来水中MC-LR加标回收率的测定
Claims (3)
1.一种检测微囊藻毒素-LR的荧光探针，其特征在于，结构是由邻苯二酚与三价铁构成的。
2.根据权利要求1所述的一种检测微囊藻毒素-LR的荧光探针的制备方法，其特征在于，反应步骤如下：
将1当量的邻苯二酚溶液和6～8当量的三氯化铁溶液充分混合5～15分钟，转移至10mL容量瓶中，用pH为3～4的缓冲溶液定容，即为所述的荧光探针。
3.根据权利要求1所述的一种检测微囊藻毒素-LR的荧光探针的应用，其特征在于，所述荧光探针应用于水样中微囊藻毒素-LR含量的检测。
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| CN202210954550.1A CN115219471A (zh) | 2022-08-10 | 2022-08-10 | 一种检测微囊藻毒素-lr的荧光探针的制备和应用 |
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|---|---|---|---|
| CN202210954550.1A CN115219471A (zh) | 2022-08-10 | 2022-08-10 | 一种检测微囊藻毒素-lr的荧光探针的制备和应用 |
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| CN202210954550.1A Pending CN115219471A (zh) | 2022-08-10 | 2022-08-10 | 一种检测微囊藻毒素-lr的荧光探针的制备和应用 |
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Citations (3)
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|---|---|---|---|---|
| CN110186886A (zh) * | 2019-05-29 | 2019-08-30 | 扬州大学 | 水体中微囊藻毒素mc-lr浓度的反演方法 |
| CN112525873A (zh) * | 2020-11-12 | 2021-03-19 | 滨州医学院 | 一种用于检测微囊藻毒素-lr的荧光化学传感器及制备方法 |
| CN113604213A (zh) * | 2021-05-18 | 2021-11-05 | 深圳先进技术研究院 | 纳米荧光探针及其制备方法和应用 |
-
2022
- 2022-08-10 CN CN202210954550.1A patent/CN115219471A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110186886A (zh) * | 2019-05-29 | 2019-08-30 | 扬州大学 | 水体中微囊藻毒素mc-lr浓度的反演方法 |
| CN112525873A (zh) * | 2020-11-12 | 2021-03-19 | 滨州医学院 | 一种用于检测微囊藻毒素-lr的荧光化学传感器及制备方法 |
| CN113604213A (zh) * | 2021-05-18 | 2021-11-05 | 深圳先进技术研究院 | 纳米荧光探针及其制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| LI CHUN-YAN等: "a new rhodamine-based fluorescent chemosensor for Fe3+ and its application in living cell imaging", DYES AND PIGMENTS, 1 May 2014 (2014-05-01) * |
| 赵硕;申晴;崔莉凤;: "分子印迹电化学法测定微囊藻毒素", 湘潭大学自然科学学报, no. 01, 15 March 2011 (2011-03-15) * |
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