CN115160430A - 一种索马鲁肽主链片段的合成方法 - Google Patents
一种索马鲁肽主链片段的合成方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种索马鲁肽主链片段的合成方法，属于化合物合成技术领域。该合成方法包括以下步骤：将化合物F在碱性条件下水解；化合物F和索马鲁肽主链片段的结构式依次如下：
水解过程中所用的碱包括氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾和八水合氢氧化钡中的至少一种；水解过程中所用的有机溶剂包括四氢呋喃、甲醇、乙醇和水中的至少一种；化合物F与碱的摩尔比为1:0.5‑1；水解反应是于0‑40℃的条件下进行6‑10h。该方法工艺简单，反应步骤较少，反应过程易于控制，生产工艺的可重复性强，物质转化率和纯度均较高。
Description
技术领域
本发明涉及化合物合成技术领域，具体而言，涉及一种索马鲁肽主链片段的合成方法。
背景技术
索马鲁肽为GLP-1类似物，与人GLP-1有94％同源性。本品由酵母发酵产生肽链。索马鲁肽的长效机制是基于对结构的修饰，索马鲁肽在第8位修改为α-氨基异丁酸，用来增加稳定作用，避免被DPP-4酶降解。此外，通过结构修饰，把肽链第26位的赖氨酸位置连接上18碳脂肪二酸侧链，相比C16的利拉鲁肽，增长的碳链对白蛋白的亲和力增强5～6倍，与白蛋白结合，增大了本品的分子量，避免快速被肾脏清除并防止代谢性降解，延长体内半衰期。
由于索马鲁肽在合成过程中主要采用生物发酵和固相合成两种合成方式，生物发酵只能发酵出天然氨基酸链，第8位修改为α-氨基异丁酸后剩余主链片段则需要利用液相合成后进行连接。固相合成过程中α-氨基异丁酸由于空间位阻大，将α-氨基异丁酸按顺序连接时会导致整个化合物收率降低，也需通过液相合成带有α-氨基异丁酸片段后进行使用。
现有技术中，部分方案采取将四个氨基酸逐步连接方案，该方法涉及多次氢解操作，大大增加了成本。并且，在第二次氢解处于酸性环境，氢解完成后需要反复调节pH值，叔丁酯和甲酯水解风险变大，导致产物中同系杂质增多。
鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的目的在于提供一种索马鲁肽主链片段的合成方法以解决上述技术问题。
本申请可这样实现：
本申请提供一种索马鲁肽主链片段的合成方法，包括以下步骤：
将化合物F在碱性条件下水解；
化合物F和索马鲁肽主链片段的结构式依次如下：
水解过程中所用的碱包括氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾和八水合氢氧化钡中的至少一种；水解过程中所用的有机溶剂包括四氢呋喃、甲醇、乙醇和水中的至少一种；
化合物F与碱的摩尔比为1:0.5-1；
水解反应是于0-40℃的条件下进行6-10h。
本申请的有益效果包括：
本申请提供的索马鲁肽主链片段的合成方法通过将化合物F在特定碱和有机溶剂存在的条件下，按特定的摩尔比、水解温度和时间进行水解反应而得，该合成工艺简单，反应步骤较少，反应过程易于控制，生产工艺的可重复性强，物质转化率和纯度均较高。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本申请实施例1中化合物G(索马鲁肽主链片段)的高效液相色谱图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本申请提供的索马鲁肽主链片段的合成方法进行具体说明。
本申请提出一种索马鲁肽主链片段的合成方法，包括以下步骤：
将化合物F在碱性条件下水解。
化合物F和索马鲁肽主链片段的结构式依次如下：
该过程对应的反应路线如下：
上述水解过程中所用的碱例如可包括氢氧化锂(LiOH)、氢氧化钠(NaOH)、氢氧化钾(KOH)和八水合氢氧化钡(BaOH·8H2O)中的至少一种；所用的有机溶剂例如可包括四氢呋喃、甲醇、乙醇和水中的至少一种。
作为参考地，上述化合物F与碱的摩尔比为1:0.5-1，如1:0.5、1:0.6、1:0.7、1:0.8、1:0.9或1:1等，也可以为1:0.5-1范围内的其它任意值。
水解反应可以是于0-40℃(如0℃、5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃或40℃等)的条件下进行6-10h(如6h、6.5h、7h、7.5h、8h、8.5h、9h、9.5h或10h等)。
在一些优选的实施方式中，由化合物F合成索马鲁肽主链片段的水解过程中，所用的碱为八水合氢氧化钡，所用的有机溶剂为甲醇。化合物F与八水合氢氧化钡的摩尔比为1:0.75。对应的水解是于30℃的条件下进行8h。
进一步地，将上述水解反应后的反应产物进行固液分离(如过滤)，分离后的固相物(滤饼)用稀盐酸水溶液调节pH值至4-5，再用乙酸乙酯萃取，萃取后的有机相经水洗涤后，收集有机相，干燥，浓缩后用石油醚析晶，干燥(烘干)。
其中，稀盐酸水溶液的浓度可以为4mol/L，下同。
可参考地，上述化合物F可经以下方法得到：
将化合物B和化合物D在缩合剂、碱以及有机溶剂存在的条件下进行缩合反应。
化合物B和化合物D的结构式依次为：
该过程对应的反应路线如下：
其中，缩合剂可包括N,N'-二异丙基碳二亚胺、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、N,N'-二环己基碳二亚胺、O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)、2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、2-琥珀酰亚胺基-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯(TSTU)、N-羟基琥珀酰亚胺、1-羟基苯并***、对硝基酚和五氟苯酚中的至少2种。也即，在具体使用时，也同时采用上述缩合剂物质中的2种、3种、4种、5种、6种或7种。在一些优选的实施方式中，以HBTU和1-羟基苯并***共同作为缩合剂。
上述缩合反应过程中所用的有机溶剂可包括乙酸乙酯(EA)、二氯甲烷(DCM)、四氢呋喃(THF)、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、二氯甲烷和氯仿中的至少一种，优选为N,N-二甲基甲酰胺。
上述缩合反应过程中所用的碱可包括三乙胺(Et3N)、N,N-二异丙基乙胺(DIEA)、碳酸氢钠、碳酸钠和1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)中的至少一种，优选为三乙胺。
在具体操作时，化合物D、化合物B、1-羟基苯并***与HBTU的摩尔比可依次为1:1-1.3:1-1.3:1-1.5，如1:1:1:1、1:1:1:1.1、1:1:1:1.2、1:1:1:1.3、1:1:1:1.4、1:1:1:1.5、1:1:1.1:1、1:1:1.1:1.1、1:1:1.1:1.2、1:1:1.1:1.3、1:1:1.1:1.4、1:1:1.1:1.5、1:1:1.2:1、1:1:1.2:1.1、1:1:1.2:1.2、1:1:1.2:1.3、1:1:1.2:1.4、1:1:1.2:1.5、1:1:1.3:1、1:1:1.3:1.1、1:1:1.3:1.2、1:1:1.3:1.3、1:1:1.3:1.4、1:1:1.3:1.5、1:1.05:1:1、1:1.1:1.2:1.3、1:1.2:1.2:1.4、1:1.3:1.3:1.5等，优选为1:1.05:1:1.2。
上述缩合反应可于-10℃至30℃(如-10℃、-5℃、0℃、5℃、10℃、15℃、20℃、25℃或30℃等)的条件下进行10-20h(如10h、12h、15h、18h或20h等)，优选于25℃的条件下反应15h。
进一步地，将化合物B和化合物D缩合反应后的反应产物加水析晶，固液分离(过滤)，干燥(烘干)。
可参考地，上述化合物D可经以下方法得到：
将化合物C在碱性条件下水解；
化合物C的结构式为：
该过程对应的反应路线如下：
在上述化合物C合成化合物D的水解过程中，所用的碱可包括氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾和八水合氢氧化钡中的至少一种，优选为氢氧化锂。
在上述化合物C合成化合物D的水解过程中，所用的有机溶剂可包括四氢呋喃、甲醇、乙醇和水中的至少一种，优选为四氢呋喃。
在上述化合物C合成化合物D的水解过程中，水解反应可于0-40℃(如0℃、5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃或40℃等)的条件下进行6-10h(如6h、6.5h、7h、7.5h、8h、8.5h、9h、9.5h或10h等)。优选于30℃的条件下进行8h。
在具体操作时，由化合物C合成化合物D的水解过程中，化合物C与所用的氢氧化锂的摩尔比可以为1:1-1.1(如1:1、1:1.05或1:1.1等)，优选1:1.05。
进一步地，将化合物C水解反应液，用4N盐酸水溶液调节pH值至4-5，再用二氯甲烷萃取，萃取后的有机相经水洗涤后，收集有机相，干燥，浓缩后用乙酸乙酯降温结晶，干燥。
可参考地，上述化合物C可经以下方法得到：
将Boc-His(Trt)OH与α-氨基异丁酸甲酯盐酸盐在缩合剂、碱以及有机溶剂存在的条件下进行缩合反应；
Boc-His(Trt)OH和α-氨基异丁酸甲酯盐酸盐的结构式依次为：
该过程对应的反应路线如下：
上述由Boc-His(Trt)OH与α-氨基异丁酸甲酯盐酸盐合成化合物C的过程中，其中，缩合剂可包括N,N'-二异丙基碳二亚胺、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、N,N'-二环己基碳二亚胺、HBTU、HATU、TSTU、N-羟基琥珀酰亚胺、1-羟基苯并***、对硝基酚和五氟苯酚中的至少2种，优选为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI)和1-羟基苯并***。
上述由Boc-His(Trt)OH与α-氨基异丁酸甲酯盐酸盐合成化合物C的过程中，所用的有机溶剂可包括乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷和氯仿中的至少一种，优选为N,N-二甲基甲酰胺。
上述由Boc-His(Trt)OH与α-氨基异丁酸甲酯盐酸盐合成化合物C的过程中，所用的碱可包括三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、碳酸氢钠、碳酸钠和DBU中的至少一种，优选为三乙胺。
在具体操作时，上述Boc-His(Trt)OH、α-氨基异丁酸甲酯盐酸盐、1-羟基苯并***与1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐的摩尔比可依次为1:1-1.3:1-1.3:1-1.5；如1:1:1:1、1:1:1:1.1、1:1:1:1.2、1:1:1:1.3、1:1:1:1.4、1:1:1:1.5、1:1:1.1:1、1:1:1.1:1.1、1:1:1.1:1.2、1:1:1.1:1.3、1:1:1.1:1.4、1:1:1.1:1.5、1:1:1.2:1、1:1:1.2:1.1、1:1:1.2:1.2、1:1:1.2:1.3、1:1:1.2:1.4、1:1:1.2:1.5、1:1:1.3:1、1:1:1.3:1.1、1:1:1.3:1.2、1:1:1.3:1.3、1:1:1.3:1.4、1:1:1.3:1.5、1:1.05:1:1、1:1.1:1.2:1.3、1:1.2:1.2:1.4、1:1.3:1.3:1.5等，优选为1:1.05:1:1.2。
上述由Boc-His(Trt)OH与α-氨基异丁酸甲酯盐酸盐合成化合物C的过程中，缩合反应是于-10℃至30℃(如-10℃、-5℃、0℃、5℃、10℃、15℃、20℃、25℃或30℃等)的条件下进行10-20h(如10h、12h、15h、18h或20h等)，优选于25℃的条件下反应15h。
进一步地，将Boc-His(Trt)OH与α-氨基异丁酸甲酯盐酸盐缩合反应后的反应产物加水析晶，固液分离，干燥。
可参考地，上述化合物B可经以下方法得到：
将化合物A在钯碳(Pd/C)加氢气条件下进行氢解；
化合物A的结构式如下：
该过程对应的反应路线如下：
上述氢解过程中所用的有机溶剂可包括四氢呋喃、甲醇、乙醇、乙酸乙酯和N,N-二甲基甲酰胺中的至少一种，优选为N,N-二甲基甲酰胺。
在具体操作时，化合物A与钯碳的质量比可以为10:0.5-5，如10:0.5、10:1、10:1.5、10:2、10:2.5、10:3、10:3.5、10:4、10:4.5或10:5等，优选为10:1。
上述氢解反应可以于0-40℃(如0℃、5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃或40℃等)的条件下进行6-10h(如6h、6.5h、7h、7.5h、8h、8.5h、9h、9.5h或10h等)。优选于25℃的条件下进行8h。
进一步地将氢解反应后的反应产物进行固液分离，分离后的液相即为化合物B的N,N-二甲基甲酰胺溶液，直接用于进一步使用。
可参考地，上述化合物A可经以下方法得到：
将Cbz-Glu(Otbu)-OH与H-Gly-OMe.HCl在缩合剂、碱以及有机溶剂存在的条件下进行缩合反应。
Cbz-Glu(Otbu)-OH、H-Gly-OMe.HCl的结构式依次如下：
该过程对应的反应路线如下：
上述由Cbz-Glu(Otbu)-OH与H-Gly-OMe.HCl合成化合物A的过程中，所用的缩合剂可包括N,N'-二异丙基碳二亚胺、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、N,N'-二环己基碳二亚胺、HBTU、HATU、TSTU、N-羟基琥珀酰亚胺、1-羟基苯并***、对硝基酚和五氟苯酚中的至少2种，优选为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和1-羟基苯并***。
上述由Cbz-Glu(Otbu)-OH与H-Gly-OMe.HCl合成化合物A的过程中，所用的有机溶剂可包括乙酸乙酯、四氢呋喃、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷和氯仿中的至少一种，优选为N,N-二甲基甲酰胺。
上述由Cbz-Glu(Otbu)-OH与H-Gly-OMe.HCl合成化合物A的过程中，所用的碱可包括三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、碳酸氢钠、碳酸钠和DBU中的至少一种，优选为三乙胺。
在具体操作时，Cbz-Glu(Otbu)-OH、H-Gly-OMe.HCl、1-羟基苯并***与1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐的摩尔比可依次为1:1-1.3:1-1.3:1-1.5，如1:1:1:1、1:1:1:1.1、1:1:1:1.2、1:1:1:1.3、1:1:1:1.4、1:1:1:1.5、1:1:1.1:1、1:1:1.1:1.1、1:1:1.1:1.2、1:1:1.1:1.3、1:1:1.1:1.4、1:1:1.1:1.5、1:1:1.2:1、1:1:1.2:1.1、1:1:1.2:1.2、1:1:1.2:1.3、1:1:1.2:1.4、1:1:1.2:1.5、1:1:1.3:1、1:1:1.3:1.1、1:1:1.3:1.2、1:1:1.3:1.3、1:1:1.3:1.4、1:1:1.3:1.5、1:1.05:1:1、1:1.1:1.2:1.3、1:1.2:1.2:1.4、1:1.3:1.3:1.5等，优选为1:1.05:1:1.2。
上述由Cbz-Glu(Otbu)-OH与H-Gly-OMe.HCl合成化合物A的过程中，缩合反应可于-10℃至30℃(如-10℃、-5℃、0℃、5℃、10℃、15℃、20℃、25℃或30℃等)的条件下进行10-20h(如10h、12h、15h、18h或20h等)，优选于25℃的条件下反应15h。
进一步地，将Cbz-Glu(Otbu)-OH与H-Gly-OMe.HCl缩合反应后的反应产物加水析晶，固液分离，干燥。
承上，本申请合成索马鲁肽主链片段的整体路线如下：
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
以下实施例中采用的部分缩略语相对应的化学名称如下：
N-苄氧羰基谷氨酸-5-叔丁酯：Cbz-Glu(Otbu)-OH；
甘氨酸甲酯盐酸盐：H-Gly-OMe.HCl；
N-叔丁氧羰基-N'-三苯甲基-L-组氨酸：Boc-His(Trt)OH；
乙酸乙酯：EA；
二氯甲烷：DCM；
四氢呋喃：THF；
水：H2O；
N,N-二甲基甲酰胺：DMF；
N,N'-二异丙基碳二亚胺：DIC；
N,N'-二环己基碳二亚胺：DCC；
L-谷氨酸-5-叔丁酯：L-Glu(OtBu)-OH；
1-羟基苯并三氮唑：HOBT；
N,N-二异丙基乙胺：DIEA；
O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯：HBTU；
2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯：HATU；
2-琥珀酰亚胺基-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯：TSTU；
羟基琥珀酰亚胺：NHS；
1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐：EDCI。
实施例1
本实施例提供了一种索马鲁肽主链片段的合成方法，其步骤如下：
步骤(1)：合成化合物A：
将10g(29.64mmol)Cbz-Glu(Otbu)-OH和4.0g(29.64mmol)HOBT和3.9g(31.12mmol)H-Gly-OMe.HCl溶解于20ml DMF中。降温至零下10℃。加入6.8g(35.57mmol)EDCI和8.99g(89mmol)Et3N。室温反应4小时。反应加水淬灭，用乙酸乙酯萃取，有机相经pH＝3-4盐酸水溶液洗涤、盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到10.44g白色固体，收率83.5％。
步骤(2)：合成化合物C：
将32.25g(0.21mol)AIB-Ome.HCl和60.6g(0.6mol)三乙胺溶解于400mLDMF，搅拌混合搅拌10min。依次加入100g(0.2mol)Boc-His(Trt)-OH和27.03g(0.2mol)HOBT，降温至-10摄氏度，加入EDCI 46.08g(0.24mol)，自然恢复室温反应15h。反应完毕后，将反应液倾倒入4L水中析晶，离心，收集固体，得化合物C(湿品)。
步骤(3)：合成化合物D：
将化合物C(湿)溶解于400mL四氢呋喃，加入5.03g(0.21mol)无水氢氧化锂，30℃反应8h。反应完毕，用4mol/L盐酸调pH至4-5后，用二氯甲烷萃取，收集有机层。有机层用水洗涤，无水硫酸钠干燥。减压浓缩，乙酸乙酯结晶，过滤收集固体34.28g，收率81.8％。
步骤(4)：合成化合物B：
将6.2g(15.18mmol)Z-Glu(OtBu)-Gly-OMe溶解于20mL DMF，加入0.062g钯碳氮气置换后通入氢化。于25℃反应8h，反应完成后过滤钯碳得到滤液，滤液直接用于下一步反应。
步骤(5)：合成化合物F：
将7.19g(14.46mmol)Boc-His(Trt)-Aib-OH和1.95g(14.46mmol)HOBT，溶解于步骤(4)所得滤液。降温至-5℃时加入HBTU 6.58g(17.35)和三乙胺4.38g(43.38mmol)。25℃反应15小时。加水析晶烘干得到10g白色固体，收率95.8％。
步骤(6)：合成化合物G：
8.95g(10.67mmol)Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-OMe溶解于27mL甲醇中，2.48g(8mmol)氢氧化钡。30℃反应8h。过滤固体，固体用水溶解后用稀盐酸调节pH＝4-5，乙酸乙酯萃取，有机相用盐水洗涤后无水硫酸钠干燥。减压浓缩后石油醚析晶。55℃烘干得6.93g白色固体(收率80.1％，纯度99.35％)。
实施例2
步骤(1)：合成化合物A：
将10g(29.64mmol)Cbz-Glu(Otbu)-OH和3.9g(31.12mmol)H-Gly-OMe.HCl溶解于20ml DMF中。降温至零下10℃。加入13.53g(35.57mmol)HATU和8.99g(89mmol)Et3N。室温反应10小时。反应加水淬灭，用乙酸乙酯萃取，有机相经pH＝3-4盐酸水溶液洗涤、盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到10.19g白色固体，收率81.5％。
步骤(2)：合成化合物C：
将32.25g(0.21mol)AIB-Ome.HCl和60.6g(0.6mol)三乙胺溶解于400mLDCM，搅拌混合搅拌10min。依次加入100g(0.2mol)Boc-His(Trt)-OH和27.03g(0.2mol)HOBT，降温至-10摄氏度，加入DCC 49.44g(0.24mol)，自然恢复室温反应15h。反应完毕后，过滤白固体，将滤液用水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩石油醚析晶，过滤，收集固体，得化合物C(湿品)。
步骤(3)：合成化合物D：
将化合物C(湿)溶解于400mL水，加入8.4g(0.21mol)无水氢氧化钠，30℃反应6h。反应完毕，用4mol/L盐酸调pH至4-5后，用二氯甲烷萃取，收集有机层。有机层用水洗涤，无水硫酸钠干燥。减压浓缩，乙酸乙酯结晶，过滤收集固体33.86g，收率80.8％。
步骤(4)：合成化合物B：
将6.2g(15.18mmol)Z-Glu(OtBu)-Gly-OMe溶解于10mL四氢呋喃与20ml DMF，加入0.124g钯碳氮气置换后通入氢化。于25℃反应10h，反应完成后过滤钯碳得到滤液，滤液直接用于下一步反应。
步骤(5)：合成化合物F：
将7.19g(14.46mmol)Boc-His(Trt)-Aib-OH和1.95g(14.46mmol)HOBT，溶解于步骤(4)所得滤液。降温至-5℃时加入EDCI 3.33g(17.35mmol)和DIEA 5.6g(43.38mmol)。25℃反应10小时。加水析晶烘干得到9.9g白色固体，收率95.0％。
步骤(6)：合成化合物G：
8.95g(10.67mmol)Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-OMe溶解于27mL四氢呋喃中，27毫升水，0.32g(8mmol)氢氧化钠。0℃反应10h。反应液用稀盐酸调节pH＝4-5，乙酸乙酯萃取，有机相用盐水洗涤后无水硫酸钠干燥。减压浓缩后石油醚析晶。55℃烘干得6.84g白色固体，收率79.1％。
实施例3
步骤(1)：合成化合物A：
将10g(29.64mmol)Cbz-Glu(Otbu)-OH和4.0g(29.64mmol)HOBT和3.9g(31.12mmol)H-Gly-OMe.HCl溶解于20ml DCM中。降温至零下10℃。加入7.33g(35.57mmol)DCC和8.99g(89mmol)Et3N。室温反应20小时。反应加水淬灭，用乙酸乙酯萃取，有机相经PH＝3-4盐酸水溶液洗涤、盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到9.81g白色固体，收率78.5％。
步骤(2)：合成化合物C：
将32.25g(0.21mol)AIB-Ome.HCl和60.6g(0.6mol)三乙胺溶解于400mL DMF，搅拌混合搅拌10min。依次加入100g(0.2mol)Boc-His(Trt)-OH，降温至0摄氏度，加入HATU91.26g(0.24mol)，自然恢复室温反应20h。反应完毕后，将反应液倾倒入4L水中析晶，离心，收集固体。得化合物C(湿品)。
步骤(3)：合成化合物D：
将化合物C(湿)溶解于400mL甲醇，加入66.25g(0.21mol)八水氢氧化钡，30℃反应8h。反应完毕，过滤固体，固体溶解到400ml水中，用4mol/L盐酸调pH至4-5后，用二氯甲烷萃取，收集有机层。有机层用水洗涤，无水硫酸钠干燥。减压浓缩，乙酸乙酯结晶，过滤收集固体33.70g，收率80.4％。
步骤(4)：合成化合物B：
将6.2g(15.18mmol)Z-Glu(OtBu)-Gly-OMe溶解于40mL乙酸乙酯，加入0.062g钯碳氮气置换后通入氢化。于25℃反应10h，反应完成后过滤钯碳得到滤液，滤液直接用于下一步反应。
步骤(5)：合成化合物F：
将7.19g(14.46mmol)Boc-His(Trt)-Aib-OH和1.95g(14.46mmol)HOBT，溶解于步骤(4)所得滤液。降温至-5℃时加入DCC 3.57g(17.35mmol)和三乙胺4.38g(43.38mmol)。25℃反应10小时。过滤固体，滤液加水洗涤，浓缩乙酸乙酯，石油醚析晶，烘干得到9.47g白色固体，收率90.8％。
步骤(6)：合成化合物G：
8.95g(10.67mmol)Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-OMe溶解于27mL四氢呋喃中，27ml水，0.19g(8mmol)氢氧化锂。0℃反应20h。反应液用稀盐酸调节pH＝4-5，乙酸乙酯萃取，有机相用盐水洗涤后无水硫酸钠干燥。减压浓缩后石油醚析晶。55℃烘干得6.69g白色固体。(收率77.3％，纯度99.35％)。
试验例
对实施例1所得的化合物G进行高效液相色谱检测，其检测条件如下：
检测波长210nm，流动相A：0.1％磷酸。流动相B：乙腈；流动相梯度设置如表1所示。
表1流动相梯度
检测所得的HPLC图谱如图1所示，数据如表2所示。
表2 HPLC图谱数据
进一步地，对所得的化合物G进行核磁检测，其结果如下：
7.933-7.943(J/Hz＝d,J＝6.0Hz,1H)；7.649-7.668(m,2H)；7.577(s,1H)；7.345-7.355(m,9H)；7.091-7.105(m,6H)；6.728(s,1H)；6.393(s,1H)；4.48(s,1H)；4.268(s,1H)；3.952-3.924(d，J＝16.8Hz,1H)；3.814-3.842(d，J＝16.8Hz,1H)；3.111-3.130(d,J＝11.4Hz,1H)；2.905-2.943(m,1H)；2.270-2.311(m,3H)；1.928(m,1H)；1.459-1.467(s,6H)；1.384(s,18H)。
由此证明本申请提供的方法能够有效合成结构式为
的索马鲁肽主链片段，且所得的索马鲁肽主链片段纯度高。
综上所述，本申请提供的合成方法至少具有以下优势：
①在整个生产过程能提高Boc-His(Trt)OH与α-氨基异丁酸甲酯盐酸盐的转化率。
②步骤(6)采用了碱性更弱的八水合氢氧化钡(BaOH·8H2O)进行水解，大大降低Glu(Otbu)上叔丁酯的水解。
③本申请生产工艺简单，大部分是通过结晶手段除去杂质，反应过程易于控制，生产工艺的可重复性强；
④本申请采用步骤(4)与步骤(5)连续操作，通过利用步骤(4)反应液直接用于步骤(5)，缩短反应步骤。
以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种索马鲁肽主链片段的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：
将化合物F在碱性条件下水解；
所述化合物F和所述索马鲁肽主链片段的结构式依次如下：
水解过程中所用的碱包括氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾和八水合氢氧化钡中的至少一种；水解过程中所用的有机溶剂包括四氢呋喃、甲醇、乙醇和水中的至少一种；
所述化合物F与所述碱的摩尔比为1:0.5-1；
水解反应是于0-40℃的条件下进行6-10h。
2.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，由化合物F合成索马鲁肽主链片段的水解过程中，所用的碱为八水合氢氧化钡，所用的有机溶剂为甲醇；
所述化合物F与八水合氢氧化钡的摩尔比为1:0.75。
3.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，由化合物F合成索马鲁肽主链片段的水解过程中，水解是于30℃的条件下进行8h。
4.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，还包括：将水解反应后的反应产物进行固液分离，分离后的固相物用稀盐酸水溶液调节pH值至4-5，再用乙酸乙酯萃取，萃取后的有机相经水洗涤后，收集有机相，干燥，浓缩后用石油醚析晶，干燥。
5.根据权利要求1-4任一项所述的合成方法，其特征在于，所述化合物F经以下方法得到：
将化合物B和化合物D在缩合剂、碱以及有机溶剂存在的条件下进行缩合反应；
所述化合物B和所述化合物D的结构式依次为：
所述缩合剂包括N,N'-二异丙基碳二亚胺、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、N,N'-二环己基碳二亚胺、O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、2-琥珀酰亚胺基-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、N-羟基琥珀酰亚胺、1-羟基苯并***、对硝基酚和五氟苯酚中的至少2种，优选为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和1-羟基苯并***；
缩合反应过程中所用的有机溶剂包括乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷和氯仿中的至少一种，优选为N,N-二甲基甲酰胺；
缩合反应过程中所用的碱包括三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、碳酸氢钠、碳酸钠和DBU中的至少一种，优选为三乙胺；
缩合反应是于-10℃至30℃的条件下进行10-20h，优选于25℃的条件下反应15h；
优选地，所述化合物D、所述化合物B、所述1-羟基苯并***与所述1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐的摩尔比依次为1:1-1.3:1-1.3:1-1.5；更优为1:1.05:1:1.2。
6.根据权利要求5所述的合成方法，其特征在于，还包括：将所述化合物B和所述化合物D缩合反应后的反应产物加水析晶，固液分离，干燥。
7.根据权利要求5所述的合成方法，其特征在于，所述化合物D经以下方法得到：
将化合物C在碱性条件下水解；
所述化合物C的结构式为：
由化合物C合成化合物D的水解过程中，所用的碱包括氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾和八水合氢氧化钡中的至少一种，优选为氢氧化锂；
由化合物C合成化合物D的水解过程中，所用的有机溶剂包括四氢呋喃、甲醇、乙醇和水中的至少一种，优选为四氢呋喃；
由化合物C合成化合物D的水解过程中，水解反应是于0-40℃的条件下进行6-10h；优选于30℃的条件下进行8h；
优选地，由化合物C合成化合物D的水解过程中，所述化合物C与所用的所述氢氧化锂的摩尔比为1:1-1.1；优选1:1.05；
优选地，还包括：将化合物C水解反应液，用稀盐酸水溶液调节pH值至4-5，再用二氯甲烷萃取，萃取后的有机相经水洗涤后，收集有机相，干燥，浓缩后用乙酸乙酯降温结晶，干燥。
8.根据权利要求7所述的合成方法，其特征在于，所述化合物C经以下方法得到：
将Boc-His(Trt)OH与α-氨基异丁酸甲酯盐酸盐在缩合剂、碱以及有机溶剂存在的条件下进行缩合反应；
所述Boc-His(Trt)OH和所述α-氨基异丁酸甲酯盐酸盐的结构式依次为：
由Boc-His(Trt)OH与α-氨基异丁酸甲酯盐酸盐合成所述化合物C的过程中，所述缩合剂包括N,N'-二异丙基碳二亚胺、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、N,N'-二环己基碳二亚胺、O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、2-琥珀酰亚胺基-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、N-羟基琥珀酰亚胺、1-羟基苯并***、对硝基酚和五氟苯酚中的至少2种，优选为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和1-羟基苯并***；
由Boc-His(Trt)OH与α-氨基异丁酸甲酯盐酸盐合成所述化合物C的过程中，所用的有机溶剂包括乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷和氯仿中的至少一种，优选为N,N-二甲基甲酰胺；
由Boc-His(Trt)OH与α-氨基异丁酸甲酯盐酸盐合成所述化合物C的过程中，所用的碱包括三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、碳酸氢钠、碳酸钠和DBU中的至少一种，优选为三乙胺；
由Boc-His(Trt)OH与α-氨基异丁酸甲酯盐酸盐合成所述化合物C的过程中，缩合反应是于-10℃至30℃的条件下进行10-20h，优选于25℃的条件下反应15h；
优选地，所述Boc-His(Trt)OH、所述α-氨基异丁酸甲酯盐酸盐、所述1-羟基苯并***与所述1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐的摩尔比依次为1:1-1.3:1-1.3:1-1.5；更优为1:1.05:1:1.2；
优选地，还包括：将Boc-His(Trt)OH与α-氨基异丁酸甲酯盐酸盐缩合反应后的反应产物加水析晶，固液分离，干燥。
9.根据权利要求5所述的合成方法，其特征在于，所述化合物B经以下方法得到：
将化合物A在钯碳加氢气条件下进行氢解；
所述化合物A的结构式如下：
氢解过程中所用的有机溶剂包括四氢呋喃、甲醇、乙醇、乙酸乙酯和N,N-二甲基甲酰胺中的至少一种，优选为N,N-二甲基甲酰胺；
所述化合物A与所述钯碳的质量比为10:0.5-5，优选为10:1；
氢解反应是于0-40℃的条件下进行6-10h，优选于25℃的条件下进行8h；
优选地，还包括：将氢解反应后的反应产物进行固液分离，收集液相。
10.根据权利要求9所述的合成方法，其特征在于，所述化合物A经以下方法得到：
将Cbz-Glu(Otbu)-OH与H-Gly-OMe.HCl在缩合剂、碱以及有机溶剂存在的条件下进行缩合反应；
所述Cbz-Glu(Otbu)-OH、所述H-Gly-OMe.HCl的结构式依次如下：
由Cbz-Glu(Otbu)-OH与H-Gly-OMe.HCl合成所述化合物A的过程中，所述缩合剂包括N,N'-二异丙基碳二亚胺、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、N,N'-二环己基碳二亚胺、O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、2-琥珀酰亚胺基-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、N-羟基琥珀酰亚胺、1-羟基苯并***、对硝基酚和五氟苯酚中的至少2种，优选为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和1-羟基苯并***；
由Cbz-Glu(Otbu)-OH与H-Gly-OMe.HCl合成所述化合物A的过程中，所用的有机溶剂包括乙酸乙酯、四氢呋喃、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷和氯仿中的至少一种，优选为N,N-二甲基甲酰胺；
由Cbz-Glu(Otbu)-OH与H-Gly-OMe.HCl合成所述化合物A的过程中，所用的碱包括三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、碳酸氢钠、碳酸钠和DBU中的至少一种，优选为三乙胺；
由Cbz-Glu(Otbu)-OH与H-Gly-OMe.HCl合成所述化合物A的过程中，缩合反应是于-10℃至30℃的条件下进行10-20h，优选于25℃的条件下反应15h；
优选地，所述Cbz-Glu(Otbu)-OH、所述H-Gly-OMe.HCl、所述1-羟基苯并***与所述1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐的摩尔比依次为1:1-1.3:1-1.3:1-1.5；更优为1:1.05:1:1.2；
优选地，还包括：将Cbz-Glu(Otbu)-OH与H-Gly-OMe.HCl缩合反应后的反应产物加水析晶，固液分离，干燥。
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