CN115029278A - 一株巨大芽孢杆菌及其促作物生长的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一株巨大芽孢杆菌RL‑126及其促作物生长的应用，该菌株已于2022年03月31日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No.24619；保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。该巨大芽孢杆菌RL‑126菌株溶磷、解钾能力较强，并具有较强的产生IAA和嗜铁素的能力，一方面有利于作物从土壤中吸收磷、钾、氮，从而减少化肥的使用并进而减轻化肥过度使用所产生的一系列副作用，另一方面能促进作物生长，提高作物产量。

Description

一株巨大芽孢杆菌及其促作物生长的应用

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，特别是涉及一株巨大芽孢杆菌RL-126及其促作物生长的应用。

背景技术

化肥，即化学肥料，是用化学和(或)物理方法制成的含有一种或几种农作物生长需要的营养元素的肥料，养分含量高，肥效快，肥劲猛，在农业生产过程中常被大量使用。然而，化肥的大量使用会造成土壤营养结构失调、农产品品质下降以及生态环境严重污染等副作用。与化学肥料相比，微生物肥料中特定的微生物通过自身的生命活动分解土壤中难以利用的物质，促进植物对营养元素的吸收，分泌各种生长激素或合成利于植物生长发育的物质，抑制病原菌的生长，间接或直接提高植物的质量和产量。微生物肥料的上述优点弥补了化学肥料的不足，逐渐成为肥料研究的热点。

植物根际促生菌(plant growth promoting rhizobacteria，PGPR)生活在植物体内、附生于根系或根周土壤中，是一类促进植物生长的有益菌株。有些PGPR能够向胞外释放有机酸溶解难溶性无机磷，即无机磷的酸解作用；有些PGPR合成的磷酸酶能够催化磷酸酯的水解使其转变为可溶性磷，即有机磷的矿化作用。有些PGPR可以同时进行酸解和矿化作用，以提高植物对磷的利用率。同时，有些PGPR能借助自身荚膜包围岩石矿物颗粒，使长石、云母及磷灰石中的磷钾营养元素分解为植物可直接吸收利用的形式。有些PGPR菌株可通过合成和利用铁载体来改善植物的铁营养。铁载体是PGPR分泌的一类小分子量铁离子螯合物，能与环境中的Fe³⁺结合并转化为Fe²⁺。Fe³⁺-铁载体复合物不仅可以改善自身的营养状况，还可以供给植物铁营养。有些PGPR可以分泌IAA，通过改变植物的内源IAA库干扰植物的各种生理过程，如促进植物细胞的***、延伸和分化，控制营养生长进程，促进种子和块茎萌发，提高木质部和根的生长速度，刺激侧根和不定根的形成等。但是并非所有PGPR都具有上述各方面的功能，或在上述各方面都表现理想。

发明内容

针对上述技术问题，本发明提供一株巨大芽孢杆菌RL-126及其促作物生长的应用。该巨大芽孢杆菌RL-126菌株具有较强的溶磷、解钾能力，并具有较强的产生3-吲哚乙酸(IAA)和嗜铁素的能力，既能够减少化肥的使用从而减轻化肥带来的各种不良影响，又能促进作物生长。

为解决上述技术问题，本发明实施例采用了如下的技术方案：

一方面，本发明实施例提供一种巨大芽孢杆菌RL-126菌株，其分类名称为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)，于2022年03月31日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No.24619；保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

本发明所提供的巨大芽孢杆菌RL-126菌株从小麦产区健壮麦苗根际土壤中分离得到，属于芽孢杆菌属，溶磷、解钾能力较强，并具有较强的产生IAA和嗜铁素的能力，可制成微生物肥料，一方面有利于作物从土壤中吸收磷、钾、氮，从而减少化肥的使用，并进而减轻化肥过度使用所产生的一系列副作用，另一方面，该菌株能促进作物生长，提高作物产量。该菌株的16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示。

该巨大芽孢杆菌RL-126菌株的筛选方法具体包括以下步骤：

①从小麦产区健壮麦苗根际土壤分离单菌落，然后从中筛选具有明显溶磷解钾能力的菌株；

②将步骤①得到的菌株分别进行溶磷能力、解钾能力的定量测定，从中筛选出溶磷、解钾综合能力最好的菌株；

③将步骤②得到的菌株进行合成IAA和嗜铁素能力的检测；

④将步骤②得到的菌株应用于田间，考察其对农作物生长和产量的影响。

通过以上实验步骤，筛选得到巨大芽孢杆菌RL-126菌株。

第二方面，本发明实施例还提供上述巨大芽孢杆菌RL-126菌株在促作物生长中的应用。

本发明提供的巨大芽孢杆菌RL-126菌株具有较强的溶磷、解钾能力以及合成IAA和嗜铁素的能力，能够有效促进作物生长，提高作物产量。田间试验数据证明，将巨大芽孢杆菌RL-126菌株用于小麦拌种、浇灌后，小麦出苗时叶色浓绿，麦苗粗壮健壮，过冬返青后植株长势较好，叶色绿，拔节期植株健壮、稠密，叶片浓绿、肥厚，株高明显增高，乳熟期小麦的株高和产量均显著增加。

第三方面，本发明实施例还提供一种促作物生长的方法，用上述巨大芽孢杆菌RL-126菌株的发酵菌液对作物种子拌种后再进行播种。

优选地，所述作物为小麦。

优选地，所述发酵菌液中所述巨大芽孢杆菌RL-126菌株的含量为0.5×10¹⁰～1.5×10¹⁰cfu/mL。在该浓度下，拌种时菌种的接种量优选为15～25mL/kg种子。

优选地，所述方法还包括在返青期以浇灌的方式施用所述巨大芽孢杆菌RL-126菌株的发酵菌液。

优选地，浇灌所用的所述发酵菌液中巨大芽孢杆菌RL-126菌株的含量为0.5×10⁸～1.5×10⁸cfu/mL。在该浓度下，浇灌的接种剂量以1000mL/m²为宜。

优选地，所述巨大芽孢杆菌RL-126菌株的发酵菌液的制备方法包括：将所述巨大芽孢杆菌RL-126菌株接种到NA培养基，37℃恒温培养12～24h进行活化，挑取单菌落接入NB培养基中，37℃恒温振荡培养12～24h，以10％的接种量将培养物接种到新鲜NB培养基，37℃恒温振荡培养48～60h，离心回收菌体，用无菌水调节芽孢浓度至0.5×10⁸～1.5×10¹⁰cfu/mL，即得所述发酵菌液。

第四方面，本发明实施例还提供一种菌剂，所述菌剂包括上述巨大芽孢杆菌RL-126菌株的发酵物。

该菌剂可用于对作物进行拌种、灌溉，以改善作物的长势、促进作物的生长、提高作物的产量。

优选地，所述巨大芽孢杆菌RL-126菌株的发酵物的制备方法包括：将所述巨大芽孢杆菌RL-126菌株接种到NA培养基，37℃恒温培养12～24h进行活化，挑取单菌落接入NB培养基中，37℃恒温振荡培养12～24h，以10％的接种量将培养物接种到新鲜NB培养基，37℃恒温振荡培养48～60h。

附图说明

图1为实施例1中RL-126菌株产生IAA能力检测结果；

图2为实施例1中RL-126菌株产生嗜铁素能力检测结果；

图3为实施例1中RL-126菌株菌落形态；

图4为实施例1中RL-126菌株菌体形态；

图5为实施例1中RL-126菌株的***发育树。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

以下实施例中所采用的实验方法如无特殊说明，均为本领域的常规方法。

以下实施例中所采用的原料、试剂等，如无特殊说明，均从商业途径获得。

以下实施例中试验数据采用SPSS13.0软件进行分析，用单因素ANOVA进行方差分析，结果均以平均数±标准差表示，并用Duncan法进行多重比较。

实施例1

本发明实施例提供了一种巨大芽孢杆菌RL-126菌株，该菌株通过以下步骤筛选得到：

1、试验方法

1.1培养基及试剂配制

NB培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，蒸馏水1000mL，pH 7.2～7.4。

NA培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂粉20g，蒸馏水1000mL，pH 7.2～7.4。

PKO无机磷培养基：葡萄糖10.0g，Ca₃(PO₄)₂ 5g，(NH₄)₂SO₄ 0.5g，NaCl 0.2g，KCl0.2g，MgSO₄·7H₂O 0.3g，MnSO₄·H₂O 0.03g，FeSO₄·7H₂O 0.03g，酵母浸粉0.5g，加水补充至1000mL，pH 6.8～7.0，115℃灭菌20min。

蒙金娜有机磷培养基：葡萄糖10.0g，(NH₄)₂SO₄ 0.5g，NaCl 0.3g，KCl 0.3g，FeSO₄·7H₂O 0.03g，MnSO₄·H₂O 0.03g，CaCO₃ 5.0g，酵母浸粉0.4g，蛋黄卵磷脂0.2g，去离子水1 000mL，pH 7.0，115℃灭菌20min。

解钾培养基：蔗糖10.0g，七水硫酸镁0.5g，碳酸钙1.0g，硫酸铵1.0g，氯化钠0.lg，酵母膏0.5g，磷酸氢二钠2.0g，钾长石粉10.0g，去离子水1 000mL，pH 7.2～7.4，115℃灭菌20min。

固体培养基为上述培养基中加入20g琼脂制成。

YMA培养基：称取磷酸二氢钾0.5g、酵母粉1.0g、甘露醇10.0g、硫酸镁0.2g、氯化钠0.1g、色氨酸100mg、蒸馏水1000mL，pH 6.8～7.2。

CAS蓝色定性检测培养基：取0.012g CAS(铬天青)溶于10mL蒸馏水中，并与1mmol/L三氯化铁溶液混匀，得溶液a。称取0.015g的十六烷基三甲基溴化铵溶于8mL蒸馏水中，得到溶液b。将溶液a缓慢加入溶液b中，充分混匀即得染液c。将pH 6.8磷酸缓冲液10mL加入盛有75mL蒸馏水的三角瓶中，混匀后用0.2mol/L NaOH调节pH至6.8，再加入1.6g琼脂粉，得培养基d。分别将染液c、培养基d及1mmol/L氯化钙溶液、1mmol/L七水硫酸镁溶液、20％葡萄糖、10％的酸水解酪蛋白溶液于121℃灭菌15min，置于50℃水浴锅内保温待用。分别取0.1mL 1mmol/LCaCl₂溶液、2mL 1mmol/L七水硫酸镁溶液、3mL 10％酪蛋白氨基酸、1mL20％葡萄糖溶液加入培养基d再沿瓶壁加入10mL染液c，充分摇匀(但勿产生气泡)，即得蓝色定性检测培养基。

所有培养基均用121℃高压蒸汽灭菌30min。

钼锑贮存液：将126mL浓硫酸缓慢加入400mL水中，搅拌冷却后称取10g钼酸铵加入约60℃的300mL水中，搅拌至完全溶解并冷却。将稀释后的硫酸溶液缓慢加入钼酸铵溶液中，边加边搅拌。加入100mL的0.5％酒石酸锑钾溶液，蒸馏水定容至1L，避光保存。

钼锑抗显色剂：1.50g抗坏血酸完全溶于100mL钼锑贮存液中。

2,4-二硝基苯酚溶液：称取2,4-二硝基苯酚0.25g溶于100mL蒸馏水。

磷标准溶液：称取经45℃干燥6h的KH₂PO₄ 0.4394g，溶于400mL蒸馏水中，加入5mL浓硫酸，用蒸馏水定容到1000mL，此溶液浓度为100mg/L，继续稀释可以得到5.0mg/L的磷标准溶液。

钾标准溶液：准确称取经105℃烘干4～6h的分析纯KCl 1.5830g，溶于蒸馏水中，定容到1000mL，即为含K₂O 1000mg/L的钾标准溶液。将此溶液进一步稀释得到100mg/L的钾标准溶液。

PC比色液的配制：称取12g FeCl₃溶于300mL蒸馏水中，缓缓加入429.7mL浓硫酸，冷却后定容至1000mL。

1.2筛选方法

1.2.1土样采集

选取河北省保定市清苑区大张庄村小麦产区健壮麦苗根际土壤，称取10g放入含有90mL无菌水和玻璃珠的灭菌三角瓶中，摇床振荡1h，将悬浊液80℃水浴加热5min，用无菌水进行10倍系列梯度稀释，选取合适梯度的稀释液100μL涂布NA平板，37℃恒温倒置培养过夜。共分离获得芽孢杆菌菌株1256株，

1.2.2溶磷解钾芽孢杆菌的分离培养

将1.2.1分离的芽孢杆菌菌株点接于蒙金娜有机磷培养基、PKO无机磷培养基、解钾培养基平板上，37℃培养5～7d，观察平板中菌株的生长情况，有无分解圈出现，并根据分解圈的直径初步判断菌株溶磷解钾能力，共筛选得到在3种固体培养基中透明圈较大的菌株24株，将这24株具有解磷解钾能力的菌株进一步纯化后保存，用于进行溶磷解钾能力定量检测。

1.2.3芽孢杆菌溶磷能力的定量测定

芽孢杆菌溶解无机磷的检测采用钼锑抗比色法进行。将1.2.2保存的具有解磷解钾能力的菌株在NB培养基中于37℃摇床振荡培养过夜进行活化，按1％接种量接种于50mLPKO液体培养基中，37℃摇床培养7d。将发酵液于10 000r/min离心10min，吸取5mL上清液于50mL容量瓶中，滴加两滴2,6-二硝基苯酚溶液之后再滴加稀盐酸调至溶液无色，填加钼锑抗显色液5mL并定容，以空白培养基为对照，在室温下反应30min后在720nm测定吸光度。芽孢杆菌溶解有机磷的检测采用蒙金娜有机磷培养基，检测方法同上。分别吸取0、0.5、1.0、1.5、3、5、10和15mL的5mg/L的磷标准溶液于50mL容量瓶中，添加双蒸水至刻度后混匀，检测方法同上，以吸光值为纵坐标，标准磷浓度为横坐标绘制标准曲线。

1.2.4芽孢杆菌溶钾能力的定量测定

将1.2.2保存的具有解磷解钾能力的菌株在NB培养基中于37℃摇床振荡培养过夜进行活化，按1％接种量接种于50mL解钾液体培养基中，37℃摇床培养7d。将发酵液10000r/min离心15min，回收上清液，以无菌培养基为空白对照，使用原子吸收分光光度计检测钾离子含量。向50mL容量瓶分别加入适量的钾标准液，用蒸馏水定容，得到0、10、20、30、40、50、60、70mg/L的钾离子浓度梯度溶液，使用原子吸收分光光度计进行检测，以钾离子浓度为横坐标，检测读数为纵坐标，绘制钾标准曲线。

上述1.2.3～1.2.4的实验结果如表1所示。

表1溶磷解钾能力检测

综合分析3个检测指标可见，编号为RL-126的菌株溶磷解钾能力最强，对无机磷的溶解能力达63.41μg/mL，对有机磷的溶解能力为44.58μg/mL，对钾的释放量为75.37μg/mL。所以选择该菌株进行后续试验检测。

1.2.5RL-126菌株合成3-吲哚乙酸(IAA)检测

配制IAA标准溶液，浓度依次为2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0、17.5和20.0mg/L，分别取上述各3-吲哚乙酸标准溶液4mL加入PC比色液4mL，黑暗中静置0.5h，取出立即测定OD₅₃₀，另取4mL蒸馏水加入PC比色液4mL用于调零，重复测定3次，获得的数据分别取平均值绘制标准曲线。

将筛选出的RL-126菌株转接到NB培养基中，37℃摇床振荡培养24h，按照1％接种量转接到YMA培养基中，37℃摇床振荡培养4d。将培养菌液于10000r/min离心15min，取上清液4mL加入等量PC比色液，在黑暗中静置0.5h，取出后立即用紫外—分光光度计测定OD₅₃₀，用离心并加入PC比色液的YMA培养基作为对照调零，测得各处理样品的OD₅₃₀值并记录，根据标准曲线计算出各菌株产3-吲哚乙酸的量。

结果表明RL-126菌株合成IAA的浓度为108.75μg/mL(如图1所示)。

1.2.6RL-126菌株产嗜铁素能力检测

将CAS蓝色定性检测培养基倒板凝固后，采用十字划线法将平板平均分为4个区，用灭菌的竹签挑取筛选出的RL-126菌株单菌落点接在每个区的中间，37℃恒温培养箱中倒置培养5～7d。检测并记录芽孢杆菌生长情况和菌苔周围是否有橙红色晕圈。

结果表明RL-126菌株具有显著的嗜铁素合成能力(如图2所示)。

1.2.7巨大芽孢杆菌RL-126菌株促生效果田间试验

将RL-126菌株划线接种于NA培养基，37℃恒温培养过夜进行活化，挑取单菌落于NB培养基中37℃振荡培养过夜，按照10％接种量接种于新鲜NB培养基，37℃振荡培养48h。将发酵液10 000×g离心10min回收菌体，用无菌水悬浮稀释成RL-126菌株活菌浓度约为1×10⁸cfu/mL或1×10¹⁰cfu/mL的菌悬液，细菌计数采用细菌计数板进行。

在河北农业大学实验农场选取小麦种植地块，地块面积约666.7m²，分为3小块，每小块约222.2m²，分别设为对照组，处理1组和处理2组。对照组不接种菌剂；处理1组和处理2组均采用RL-126菌株活菌浓度约为1.0×10¹⁰cfu/mL的菌悬液拌种，接种量为20mL/kg种子；在返青期，处理2组采用以HB-02菌株活菌浓度约为1.0×10⁸cfu/mL的菌悬液浇灌的方式接种促生菌，接种剂量为1000mL/m²。对照组和处理组均不施肥，采用机械播种，管理方式同一般大田。

在小麦拔节期，采取5点取样法，每点连续选取10株，每个处理选取50株，选取最上部完全伸展开的叶片中部同一位置，使用便携式叶绿素含量测定仪测量叶绿素相对含量(SPAD值)，计算平均值。测量株高并计算平均值。将小麦植株地上部分带回实验室烘干称量，测定地上部干重。在小麦乳熟期，采取5点取样法进行取样，每点取连续3行，每行取0.4m，调查统计株高、平均穗粒数(每个随机取样点30株，每组取样150株)，种子晾干后称千粒重，并单打单收测定每平方米的产量。

经对小麦生长效果进行调查可见，小麦播种后7d开始出苗，10d后基本上全部出苗。对试验小区麦田的出苗情况调查结果发现，菌剂处理组出苗情况较好，叶色浓绿，麦苗粗壮健壮。小麦过冬返青后，处理组小麦植株长势较好，叶色绿；对照组小麦长势较弱，叶尖泛黄。在拔节期对小麦植株的生长情况进行调查发现，处理组麦苗长势较好，植株健壮、稠密，叶片浓绿、肥厚，株高较对照组明显增高。处理1组株高比对照组高9.15％，处理2组比对照组高10.67％，两个处理组和对照组相比差异显著。处理1组叶绿素相对含量比对照组高8.02％，处理2组比对照组高10.06％，两处理组和对照组相比差异显著。处理1组干重比对照组高8.74％，处理2组比对照组高10.47％，两个处理组和对照组相比差异显著。在株高、叶绿素相对含量和干重等指标检测中，处理2组均高于处理1组，但差异不显著，表明两次接种促生菌有利于促进小麦的生长(如表2所示)。

表2巨大芽孢杆菌RL-126菌株在小麦拔节期促生长效果检测

注：表中数据为平均数±标准差。同列数据后不同字母表示同一检测指标、不同组别的数据经LSD法检验在P<0.05水平差异显著。

在小麦乳熟期，通过对株高、穗数、穗粒数、千粒重和产量等指标进行调查，分析了促生菌对小麦的促生效果。和对照组相比，处理1组和处理2组小麦的上述指标均有增加，其中穗数、穗粒数和千粒重增加不显著，株高和产量增加显著，小麦产量由713.28g/m²增加到815.86g/m²，促生效果显著。在株高、穗粒数、千粒重和产量等指标检测中，处理2组均优于处理1组，但两组之间差异不显著(如表3所示)。表明接种RL-126菌株能显著提高小麦产量，接种两次的效果更优。

表3巨大芽孢杆菌RL-126菌株在小麦乳熟期促生长效果检测

注：表中数据为平均数±标准差。同列数据后不同字母表示同一检测指标、不同组别的数据经LSD法检验在P<0.05水平差异显著。

2、RL-126菌株的种属鉴定

将各方面性能较为良好的RL-126菌株进行种属的鉴定。

2.1菌落和菌体形态观察

将RL-126菌株在NA培养基划线接种，37℃恒温培养过夜，观察菌落形态。菌体形态观察利用结晶紫染色，在100×物镜显微镜下观察菌体形态。

在NA培养基上，芽孢杆菌RL-126菌株菌落呈圆形或者椭圆形，乳白色不透明，边缘不整齐，菌落***呈馒头状，表面湿润粘稠(如图3所示)。菌体呈杆状，染色均匀，可形成内生芽孢，芽孢中生，椭圆形(如图4所示)。

2.216S rDNA基因序列***发育分析

提取细菌基因组DNA为模板，16S rDNA序列扩增采用通用引物27f：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG和1495r：CTACGGCTACCTT GTTACGA。引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。根据设计的引物的退火温度和扩增片段大小设计PCR反应程序。反应体系为5μL 10×PCR Buffer，4μL dNTP，引物各2μL，0.25μL DNA聚合酶，1μL DNA模板，加ddH₂O至50μL。PCR反应条件：95℃预变性5min；95℃变性45s，50℃退火30s，72℃延伸1min 30s，35个循环；72℃饱和延伸10min。反应结束后，用1％琼脂糖凝胶电泳检测PCR结果。PCR产物由北京华大基因有限公司进行测序。将测序的16S rDNA序列在GenBank核酸数据库中进行Blast比对及同源性比较，用MegAlign软件中的Clustal算法进行序列排序，Kimura双参数模型计算进化距离，Neighbor-Joining法构建***进化树(如图5所示)。

根据16S rDNA序列相似性分析，确定RL-126菌株为巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)。

将该巨大芽孢杆菌RL-126菌株于2022年03月31日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No.24619；保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

实施例2

本实施例提供了一种菌剂，该菌剂为巨大芽孢杆菌RL-126菌株的发酵物，该发酵物的制备方法为：将实施例1所得巨大芽孢杆菌RL-126菌株接种到NA培养基，37℃恒温培养过夜(16h)进行活化，挑取单菌落接种于NB培养基，37℃恒温振荡培养过夜(16h)，以10％接种量将菌液接种于新鲜NB培养基中，37℃恒温振荡培养48h，将发酵液10 000×g离心10min回收菌体，用无菌水调节发酵液中芽孢浓度至所需浓度，如0.5×10⁸～1.5×10⁸cfu/mL或0.5×10¹⁰～1.5×10¹⁰cfu/mL，灌封，即得。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

SEQUENCE LISTING

<110> 河北农业大学

<120> 一株巨大芽孢杆菌及其促作物生长的应用

<130> 20220511

<160> 1

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1408

<212> DNA

<213> 16SrDNA

<400> 1

gcaagtcgag cgaactgatt agaagcttgc ttctatgacg ttagcggcgg acgggtgagt 60

aacacgtggg caacctgcct gtaagactgg gataacttcg ggaaaccgaa gctaataccg 120

gataggatct tctccttcat gggagatgat tgaaagatgg tttcggctat cacttacaga 180

tgggcccgcg gtgcattagc tagttggtga ggtaacggct caccaaggca acgatgcata 240

gccgacctga gagggtgatc ggccacactg ggactgagac acggcccaga ctcctacggg 300

aggcagcagt agggaatctt ccgcaatgga cgaaagtctg acggagcaac gccgcgtgag 360

tgatgaaggc tttcgggtcg taaaactctg ttgttaggga agaacaagta caagagtaac 420

tgcttgtacc ttgacggtac ctaaccagaa agccacggct aactacgtgc cagcagccgc 480

ggtaatacgt aggtggcaag cgttatccgg aattattggg cgtaaagcgc gcgcaggcgg 540

tttcttaagt ctgatgtgaa agcccacggc tcaaccgtgg agggtcattg gaaactgggg 600

aacttgagtg cagaagagaa aagcggaatt ccacgtgtag cggtgaaatg cgtagagatg 660

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gcgtggggag caaacaggat tagataccct ggtagtccac gccgtaaacg atgagtgcta 780

agtgttagag ggtttccgcc ctttagtgct gcagctaacg cattaagcac tccgcctggg 840

gagtacggtc gcaagactga aactcaaagg aattgacggg ggcccgcaca agcggtggag 900

catgtggttt aattcgaagc aacgcgaaga accttaccag gtcttgacat cctctgacaa 960

ctctagagat agagcgttcc ccttcggggg acagagtgac aggtggtgca tggttgtcgt 1020

cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cccgcaacga gcgcaaccct tgatcttagt 1080

tgccagcatt tagttgggca ctctaaggtg actgccggtg acaaaccgga ggaaggtggg 1140

gatgacgtca aatcatcatg ccccttatga cctgggctac acacgtgcta caatggatgg 1200

tacaaagggc tgcaagaccg cgaggtcaag ccaatcccat aaaaccattc tcagttcgga 1260

ttgtaggctg caactcgcct acatgaagct ggaatcgcta gtaatcgcgg atcagcatgc 1320

cgcggtgaat acgttcccgg gccttgtaca caccgcccgt cacaccacga gagtttgtaa 1380

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Claims (10)

1.一种巨大芽孢杆菌RL-126菌株，其特征在于，其分类名称为巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)，于2022年03月31日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No.24619；保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

2.权利要求1所述的巨大芽孢杆菌RL-126菌株在促作物生长中的应用。

3.一种促作物生长的方法，其特征在于，用权利要求1所述的巨大芽孢杆菌RL-126菌株的发酵菌液对作物种子拌种后再进行播种。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述作物为小麦。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述发酵菌液中所述巨大芽孢杆菌RL-126菌株的含量为0.5×10¹⁰～1.5×10¹⁰cfu/mL。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法还包括在返青期以浇灌的方式施用所述巨大芽孢杆菌RL-126菌株的发酵菌液。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，浇灌所用的所述发酵菌液中巨大芽孢杆菌RL-126菌株的含量为0.5×10⁸～1.5×10⁸cfu/mL。

8.根据权利要求3、4或6所述的方法，其特征在于，所述巨大芽孢杆菌RL-126菌株的发酵菌液的制备方法包括：将所述巨大芽孢杆菌RL-126菌株接种到NA培养基，37℃恒温培养12～24h进行活化，挑取单菌落接入NB培养基中，37℃恒温振荡培养12～24h，以10％的接种量将培养物接种到新鲜NB培养基，37℃恒温振荡培养48～60h，离心回收菌体，用无菌水调节芽孢浓度至0.5×10⁸～1.5×10¹⁰cfu/mL，即得所述发酵菌液。

9.一种菌剂，其特征在于，所述菌剂包括权利要求1所述的巨大芽孢杆菌RL-126菌株的发酵物。

10.根据权利要求9所述的菌剂，其特征在于，所述巨大芽孢杆菌RL-126菌株的发酵物的制备方法包括：

将所述巨大芽孢杆菌RL-126菌株接种到NA培养基，37℃恒温培养12～24h进行活化，挑取单菌落接入NB培养基中，37℃恒温振荡培养12～24h，以10％的接种量将培养物接种到新鲜NB培养基，37℃恒温振荡培养48～60h。

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