CN115015429A - 一种同步检测黄精中晚期糖基化终末产物的方法 - Google Patents
一种同步检测黄精中晚期糖基化终末产物的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115015429A CN115015429A CN202210696789.3A CN202210696789A CN115015429A CN 115015429 A CN115015429 A CN 115015429A CN 202210696789 A CN202210696789 A CN 202210696789A CN 115015429 A CN115015429 A CN 115015429A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- volume ratio
- concentration
- mass
- rhizoma polygonati
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 44
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 title abstract description 15
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 title abstract description 14
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 title abstract description 14
- 241000037831 Polygonatum sibiricum Species 0.000 title abstract description 6
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 claims abstract description 22
- UENLDOJJKXLRJI-ZETCQYMHSA-N (2s)-6-amino-2-(2-carboxyethylamino)hexanoic acid Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NCCC(O)=O UENLDOJJKXLRJI-ZETCQYMHSA-N 0.000 claims abstract description 18
- RRUYWEMUWIRRNB-LURJTMIESA-N (2s)-6-amino-2-[carboxy(methyl)amino]hexanoic acid Chemical compound OC(=O)N(C)[C@H](C(O)=O)CCCCN RRUYWEMUWIRRNB-LURJTMIESA-N 0.000 claims abstract description 18
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 16
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 15
- 108010005094 Advanced Glycation End Products Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000010811 Ultra-Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 92
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 75
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 54
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 32
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 22
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 claims description 17
- UQGFMSUEHSUPRD-UHFFFAOYSA-N disodium;3,7-dioxido-2,4,6,8,9-pentaoxa-1,3,5,7-tetraborabicyclo[3.3.1]nonane Chemical compound [Na+].[Na+].O1B([O-])OB2OB([O-])OB1O2 UQGFMSUEHSUPRD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 17
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 claims description 17
- 239000004328 sodium tetraborate Substances 0.000 claims description 17
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 claims description 15
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 15
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 12
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 12
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 claims description 11
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 9
- 239000007789 gas Substances 0.000 claims description 9
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 claims description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000002386 leaching Methods 0.000 claims description 8
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 claims description 8
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 8
- 238000010025 steaming Methods 0.000 claims description 8
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 claims description 8
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 7
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 7
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 6
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 6
- XBJFCYDKBDVADW-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;formic acid Chemical compound CC#N.OC=O XBJFCYDKBDVADW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N ammonium formate Chemical compound [NH4+].[O-]C=O VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000002013 hydrophilic interaction chromatography Methods 0.000 claims description 5
- 239000003643 water by type Substances 0.000 claims description 5
- NUXSIDPKKIEIMI-WCEGGVOZSA-N (2s)-2-amino-6-(carboxymethylamino)-4,4,5,5-tetradeuteriohexanoic acid Chemical compound OC(=O)CNCC([2H])([2H])C([2H])([2H])C[C@H](N)C(O)=O NUXSIDPKKIEIMI-WCEGGVOZSA-N 0.000 claims description 4
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 claims description 4
- 238000007664 blowing Methods 0.000 claims description 4
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 4
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 claims description 4
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 claims description 4
- 238000007873 sieving Methods 0.000 claims description 4
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 claims description 4
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 3
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 claims description 3
- 238000001294 liquid chromatography-tandem mass spectrometry Methods 0.000 claims description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 abstract description 8
- 241000756042 Polygonatum Species 0.000 abstract description 4
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 abstract description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 3
- 230000001360 synchronised effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000004807 desolvation Methods 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 2
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 239000012483 derivatization solution Substances 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000003672 processing method Methods 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N30/14—Preparation by elimination of some components
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/72—Mass spectrometers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/86—Signal analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/86—Signal analysis
- G01N30/8675—Evaluation, i.e. decoding of the signal into analytical information
- G01N30/8679—Target compound analysis, i.e. whereby a limited number of peaks is analysed
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N2030/042—Standards
- G01N2030/045—Standards internal
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Library & Information Science (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
一种同步检测黄精中晚期糖基化终末产物的方法。本发明属于食品检测领域。本发明的目的是为了解决当前缺少针对黄精中糖基化终末产物进行检测的方法,明确了适合黄精产品中糖基化终产物的代表产物羧甲基赖氨酸及羧乙基赖氨酸的同步检测方法。本发明的同步检测黄精中晚期糖基化终末产物的方法包括:黄精产品前处理、衍生化反应、固相萃取、标准曲线绘制以及含量测定,使用UPLC‑MS/MS在一定条件下,对黄精在加工过程中产生的羧甲基赖氨酸及羧乙基赖氨酸进行同步检测。
Description
技术领域
本发明属于食品检测领域,具体涉及一种同步检测黄精中晚期糖基化终末产物的方法。
背景技术
由于黄精具有较强的刺激性,不宜直接服用,通常采用不同的加工方式以去除其刺激性。黄精富含多糖类成分,在高温加工中极容易发生糖基化反应,生成的糖基化终末产物会诱导糖尿病等疾病,与黄精多糖治疗二型糖尿病的功能背道而驰。
目前,针对糖基化终末产物的检测方法多集中在乳制品、水产品以及油炸食品领域,由于检测时针对不同种类的待测物的前处理方法不同,而前处理方法涉及到原始待测物中糖基化终末产物的含量的保留率,进而影响检测方法的准确性,当前,还没有针对黄精中糖基化终末产物进行检测的方法,因此,开发一种同步检测晚期糖基化终末产物的技术手段,用于检测黄精产品中主要的糖基化中末产物羧甲基赖氨酸及羧乙基赖氨酸,解决现有手段检测不精准,效率低的问题显得尤为重要。
发明内容
本发明的目的是为了解决当前缺少针对黄精中糖基化终末产物进行检测的方法,以及现有手段检测不精准,效率低的技术问题,明确了适合黄精产品中糖基化终产物的代表产物羧甲基赖氨酸及羧乙基赖氨酸的同步检测方法。
本发明的一种同步检测黄精中晚期糖基化终末产物的方法按以下步骤进行:
步骤1:将黄精粉碎过筛,然后将黄精粉与正己烷混合,洗脱3-5次,再加入四硼酸钠溶液进行还原反应,然后采用Sevag溶液进行洗脱,向沉淀物中加入盐酸,在100-120℃下孵育20-24h,过滤得到水解液;
步骤2:向水解液中加入CML-d4和CEL-d4的混合同位素内标物混匀,然后调节pH至8.0,纯水稀释5倍后,加入乙腈溶液和与内标物等量的四硼酸钠溶液混匀,混合过程中再次加入乙腈溶液,混匀后静置10min,然后加入甲酸终止反应,得到衍生液;
步骤3:将衍生液经甲醇活化和甲酸溶液平衡,然后通过SPE柱进行固相萃取,得到待测液;
步骤4:绘制标准曲线;
步骤5:采用UPLC-MS/MS对待测液中晚期糖基化终末产物进行检测,根据标准曲线计算实际含量。
进一步限定,步骤1中黄精由鲜黄精除杂、洗净、切片,然后重复隔水蒸制和干燥9次得到,每蒸制2h,100℃干燥3h。
进一步限定,步骤1中黄精粉的质量与正己烷的体积比为3g:(20-30)mL。
进一步限定,步骤1中黄精粉的质量与四硼酸钠溶液的体积比为1g:(10-20)mL,四硼酸钠溶液浓度为0.1-0.3mol/L。
进一步限定,步骤1中Sevag溶液为氯仿和正丁醇按4:1的体积比的混合液。
进一步限定,步骤1中沉淀物的质量与盐酸的体积比为1g:(15-25)mL,盐酸浓度为5-7mol/L。
进一步限定,步骤2中水解液与内标物体积比为1:(0.15-0.25),内标物中CEL-d4的浓度为0.7-0.9μg/mL。
进一步限定,步骤2中第一次加入的乙腈溶液与水解液的体积比为(0.4-0.6):1,四硼酸钠溶液的质量浓度为4-6%,再次加入的乙腈溶液与水解液的体积比为(0.1-0.3):1。
进一步限定,步骤2中甲酸与水解液的体积比为(0.004-0.006):1。
进一步限定,步骤3中甲醇与衍生液的体积比为1:(2-4),甲酸溶液与衍生液的体积比为1:(2-4),甲酸溶液的体积浓度为0.4-0.6%。
进一步限定,步骤3中通过SPE柱进行固相萃取的过程为:以0.8-1.2mL/min的流速通过SPE柱,然后用20%的乙腈溶液淋洗,真空抽干后使用二氯甲烷淋洗,再真空抽干,然后以氨水/甲醇溶液洗脱并收集洗脱液,洗脱液氮吹,浓缩干燥,最后用乙腈溶液重溶,旋涡混匀,氨水/甲醇溶液中氨水、甲醇的体积比5:95。
进一步限定,步骤4绘制标准曲线的具体过程为:(1)将羧甲基赖氨酸和羧乙基赖氨酸标准品各10.0mg用超纯水配成质量浓度为100μg/mL的混合标准品储备液,-20℃条件下储存;(2)用80%的乙腈溶液梯度稀释,分别得到质量浓度为2、4、6、8、10μg/mL的羧甲基赖氨酸和羧乙基赖氨酸标准品溶液,按液相色谱条件进样,每个浓度平行进样三次;(3)以标准品浓度为横坐标,峰面积的平均值为纵坐标,绘制标准曲线,计算回归方程。
进一步限定,步骤5中液相色谱-串联质谱检测条件为:
液相色谱条件:色谱柱:Waters cortecs HILIC(2.1×100mm,1.6μm),流速0.4mL/min,柱温35℃,进样量3μL,流动相A为0.4%甲酸-乙腈,B为50mmol/L甲酸铵溶液,梯度洗脱程序:0-3min,60-80%A、3-3.5min,50-60%A、3.5-4.5min,50%A、4.5-5min,50-80%A、5-7min,80%A;质谱条件:电离方式为ESI+,扫描方式为MRM,毛细管电压为3.0kV,离子源温度150℃,脱溶剂温度450℃,脱溶剂气流量1000L/h,碰撞气流量0.20mL/min。
质谱条件:电离方式为ESI+,扫描方式为MRM,毛细管电压为3.0kV,离子源温度150℃,脱溶剂温度450℃,脱溶剂气流量1000L/h,碰撞气流量0.20mL/min。
本发明与现有技术相比具有的显著效果:
1)本发明明确了检测黄精产品中羧甲基赖氨酸和羧乙基赖氨酸含量时黄精前处理的手段,其主要目的为洗脱黄精中多余的蛋白质、脂肪及杂质,避免在检测过程中出现过多的杂峰,以减少对检测结果的影响。
2)本发明中衍生化反应的目的是完成同位素内标,这在目前糖基化终产物检测的技术手段中较为少见,利用待测物与内标物的响应丰度比值进行线性回归,通过对同位素丰度的准确测量,做到对待测物的定量测定,此方法能够有效消除基质的干扰,且不需要对待测物进行定量分离,提高了检测的精准性。
附图说明
图1为实施例1中羧甲基赖氨酸标准曲线图;
图2为实施例1中羧乙基赖氨酸标准曲线图;
图3为实施例1中羧甲基赖氨酸标准品(浓度为2μg/mL)的液相色谱图;
图4为实施例1中羧乙基赖氨酸标准品(浓度为2μg/mL)的液相色谱图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明均为常规方法。所用材料、试剂、方法和仪器,未经特殊说明,均为本领域常规材料、试剂、方法和仪器,本领域技术人员均可通过商业渠道获得。
下述实施例中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形,意在覆盖非排它性的包括。例如,包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素,而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时,这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围,而不论该范围是否单独公开了。例如,当公开了范围“1至5”时,所描述的范围应被解释为包括范围“1至4”、“1至3”、“1至2”、“1至2和4至5”、“1至3和5”等。当数值范围在本文中被描述时,除非另外说明,否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。在本申请说明书和权利要求书中,范围限定可以组合和/或互换,如果没有另外说明这些范围包括其间所含有的所有子范围。
本发明要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个,并且单数形式的要素或组分也包括复数形式,除非所述数量明显只指单数形式。
本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
具体实施方式一:本实施方式的一种同步检测黄精中晚期糖基化终末产物的方法按以下步骤进行:
步骤1:将黄精粉碎过筛,然后将黄精粉与正己烷混合,洗脱3-5次,再加入四硼酸钠溶液进行还原反应,然后采用Sevag溶液进行洗脱,向沉淀物中加入盐酸,在100-120℃下孵育20-24h,过滤得到水解液;
步骤2:向水解液中加入CML-d4和CEL-d4的混合同位素内标物混匀,然后调节pH至8.0,纯水稀释5倍后,加入乙腈溶液和与内标物等量的四硼酸钠溶液混匀,混合过程中再次加入乙腈溶液,混匀后静置10min,然后加入甲酸终止反应,得到衍生液;
步骤3:将衍生液经甲醇活化和甲酸溶液平衡,然后通过SPE柱进行固相萃取,得到待测液;
步骤4:绘制标准曲线;
步骤5:采用UPLC-MS/MS对待测液中晚期糖基化终末产物进行检测,根据标准曲线计算实际含量。
具体实施方式二:本实施方式与具体实施方式一不同的是:步骤1中黄精由鲜黄精除杂、洗净、切片,然后重复隔水蒸制和干燥9次得到,每蒸制2h,100℃干燥3h。其他步骤及参数与具体实施方式一相同。
具体实施方式三:本实施方式与具体实施方式一不同的是:步骤1中黄精粉的质量与正己烷的体积比为3g:(20-30)mL,黄精粉的质量与四硼酸钠溶液的体积比为1g:(10-20)mL,四硼酸钠溶液浓度为0.1-0.3mol/L,pH=9.2,Sevag溶液为氯仿和正丁醇按4:1的体积比的混合液,沉淀物的质量与盐酸的体积比为1g:(15-25)mL,盐酸浓度为5-7mol/L。其他步骤及参数与具体实施方式一相同。
具体实施方式四:本实施方式与具体实施方式一不同的是:步骤2中水解液与内标物体积比为1:(0.15-0.25),内标物中CEL-d4的浓度为0.7-0.9μg/mL。其他步骤及参数与具体实施方式一相同。
具体实施方式五:本实施方式与具体实施方式一不同的是:步骤2中第一次加入的乙腈溶液与水解液的体积比为(0.4-0.6):1,四硼酸钠溶液的质量浓度为4-6%,pH=9.0,再次加入的乙腈溶液与水解液的体积比为(0.1-0.3):1。其他步骤及参数与具体实施方式一相同。
具体实施方式六:本实施方式与具体实施方式一不同的是:步骤2中甲酸与水解液的体积比为(0.004-0.006):1。其他步骤及参数与具体实施方式一相同。
具体实施方式七:本实施方式与具体实施方式一不同的是:步骤3中甲醇与衍生液的体积比为1:(2-4),甲酸溶液与衍生液的体积比为1:(2-4),甲酸溶液的体积浓度为0.4-0.6%。其他步骤及参数与具体实施方式一相同。
具体实施方式八:本实施方式与具体实施方式一不同的是:步骤3中通过SPE柱进行固相萃取的过程为:以0.8-1.2mL/min的流速通过SPE柱,然后用20%的乙腈溶液淋洗,真空抽干5min后使用二氯甲烷淋洗,再真空抽干5min,然后以氨水/甲醇溶液洗脱并收集洗脱液,洗脱液氮吹,浓缩干燥,最后用乙腈溶液重溶,旋涡混匀,氨水/甲醇溶液中氨水、甲醇的体积比5:95。其他步骤及参数与具体实施方式一相同。
具体实施方式九:本实施方式与具体实施方式一不同的是:步骤4绘制标准曲线的具体过程为:(1)将羧甲基赖氨酸和羧乙基赖氨酸标准品各10.0mg用超纯水配成质量浓度为100μg/mL的混合标准品储备液,-20℃条件下储存;(2)用80%的乙腈溶液梯度稀释,分别得到质量浓度为2、4、6、8、10μg/mL的羧甲基赖氨酸和羧乙基赖氨酸标准品溶液,按液相色谱条件进样,每个浓度平行进样三次;(3)以标准品浓度为横坐标,峰面积的平均值为纵坐标,绘制标准曲线,计算回归方程。其他步骤及参数与具体实施方式一相同。
具体实施方式十:本实施方式与具体实施方式一不同的是:步骤5中液相色谱-串联质谱检测条件为:液相色谱条件:色谱柱:Waters cortecs HILIC色谱柱(2.1×100mm,1.6μm),流速0.4mL/min,柱温35℃,进样量3μL,流动相A为0.4%甲酸-乙腈,B为50mmol/L甲酸铵溶液,梯度洗脱程序:0-3min,60-80%A、3-3.5min,50-60%A、3.5-4.5min,50%A、4.5-5min,50-80%A、5-7min,80%A;质谱条件:电离方式为ESI+,扫描方式为MRM,毛细管电压为3.0kV,离子源温度150℃,脱溶剂温度450℃,脱溶剂气流量1000L/h,碰撞气流量0.20mL/min。质谱条件:电离方式为ESI+,扫描方式为MRM,毛细管电压为3.0kV,离子源温度150℃,脱溶剂温度450℃,脱溶剂气流量1000L/h,碰撞气流量0.20mL/min。其他步骤及参数与具体实施方式一相同。
实施例1、本实施例的一种同步检测黄精中晚期糖基化终末产物的方法按以下步骤进行:
步骤1的具体过程如下:
S1:取鲜黄精除杂、洗净、切片,然后隔水蒸制2h,取出晾干,然后于100℃烘箱中干燥3h,重复隔水蒸制和干燥9次,得到黄精产品;
S2:将黄精用打磨机粉碎,过60目筛,然后取10g黄精粉与100mL正己烷混合,洗脱3次;
S3:取3g步骤S2处理后的黄精粉末,加入45mL浓度为0.2mol/L的四硼酸钠溶液进行还原反应,还原12h;
S4:采用Sevag溶液(氯仿:正丁醇v:v=4:1)对S3还原后黄精粉末进行洗脱,弃去上清液,收集沉淀物,重复洗脱3次,然后向沉淀物中加入15mL浓度为6mol/L的盐酸,在110℃下孵育24h,过滤得到水解液;
步骤2:向4mL水解液中加入800μL CML-d4和CEL-d4的混合同位素内标物混匀,内标物中CEL-d4的浓度为0.8μg/mL,然后用50%氢氧化钾溶液调节pH至8.0,纯水稀释5倍后,加入2mL乙腈溶液和800μL质量浓度为5%的四硼酸钠溶液混匀,混合过程中再次加入800μL乙腈溶液,混匀后静置10min,然后加入20μL甲酸终止衍生反应,得到衍生液;
步骤3:
S1:将1mL衍生液经3mL甲醇活化和3mL体积浓度为0.5%的甲酸溶液平衡;
S2:通过SPE柱进行固相萃取,以1mL/min的流速通过SPE柱,然后用20%的乙腈溶液淋洗,真空抽干5min后使用二氯甲烷淋洗,再真空抽干5min,然后以氨水/甲醇(氨水:甲醇v:v=5:95)溶液洗脱并收集洗脱液,洗脱液氮吹,浓缩干燥,最后按照1:2的体积比用50%乙腈溶液重溶,旋涡混匀,得到待测液;
步骤4:绘制标准曲线的具体过程为:
(1)将羧甲基赖氨酸和羧乙基赖氨酸标准品各10.0mg用超纯水配成质量浓度为100μg/mL的混合标准品储备液,-20℃条件下储存;
(2)用80%的乙腈溶液梯度稀释,分别得到质量浓度为2、4、6、8、10μg/mL的羧甲基赖氨酸和羧乙基赖氨酸标准品溶液,按步骤5中液相色谱条件进行检测,每个浓度平行进样三次;液相色谱条件:色谱柱:Waters cortecs HILIC色谱柱(2.1×100mm,1.6μm),流速0.4mL/min,柱温35℃,进样量3μL,流动相A为0.4%甲酸-乙腈,B为50mmol/L甲酸铵溶液,梯度洗脱程序见表1。
表1梯度洗脱程序
(3)以标准品浓度为横坐标(X),峰面积的平均值为纵坐标(Y),绘制标准曲线(如图1-2所示),计算回归方程,得到羧甲基赖氨酸标准曲线的回归方程为Y=36.7327X-5.17226,R2为0.997,羧乙基赖氨酸的回归方程为Y=65.2657X-5.40813,R2为0.995,浓度为2μg/mL的羧甲基赖氨酸标准品液相色谱图见图3,浓度为2μg/mL的羧乙基赖氨酸标准品液相色谱图见图4。
步骤5:采用UPLC-MS/MS对待测液中晚期糖基化终末产物进行检测,根据标准曲线计算实际含量;
液相色谱条件:色谱柱:Waters cortecs HILIC色谱柱(2.1×100mm,1.6μm),流速0.4mL/min,柱温35℃,进样量3μL,流动相A为0.4%甲酸-乙腈,B为50mmol/L甲酸铵溶液,梯度洗脱程序见表1。
质谱条件:电离方式为ESI+,扫描方式为MRM,毛细管电压为3.0kV,离子源温度150℃,脱溶剂温度450℃,脱溶剂气流量1000L/h,碰撞气流量0.20mL/min,质谱检测参数设定表和待测物性能指标表见表2-3。
表2质谱检测参数设定表
表3性能指标表
根据检测分别得到羧甲基赖氨酸及羧乙基赖氨酸的色谱峰面积为12%、0.2768%,带入回归方程,计算得到黄精中的羧甲基赖氨酸含量为458.59μg/g,羧乙基赖氨酸含量为12.66μg/g。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,鉴于本发明所属领域的技术人员可以对上述实施方式进行适当的变更和修改,因此,本发明并不局限于上面所述的具体实施方式,对本发明的一些修改和变更也应当落入本发明的权利要求的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种同步检测黄精中晚期糖基化终末产物的方法,其特征在于,该方法按以下步骤进行:
步骤1:将黄精粉碎过筛,然后将黄精粉与正己烷混合,洗脱3-5次,再加入四硼酸钠溶液进行还原反应,然后采用Sevag溶液进行洗脱,向沉淀物中加入盐酸,在100-120℃下孵育20-24h,过滤得到水解液;
步骤2:向水解液中加入CML-d4和CEL-d4的混合同位素内标物混匀,然后调节pH至8.0,纯水稀释5倍后,加入乙腈溶液和与内标物等量的四硼酸钠溶液混匀,混合过程中再次加入乙腈溶液,混匀后静置10min,然后加入甲酸终止反应,得到衍生液;
步骤3:将衍生液经甲醇活化和甲酸溶液平衡,然后通过SPE柱进行固相萃取,得到待测液;
步骤4:绘制标准曲线;
步骤5:采用UPLC-MS/MS对待测液中晚期糖基化终末产物进行检测,根据标准曲线计算实际含量。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤1中黄精由鲜黄精除杂、洗净、切片,然后重复隔水蒸制和干燥9次得到,每蒸制2h,100℃干燥3h。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤1中黄精粉的质量与正己烷的体积比为3g:(20-30)mL,黄精粉的质量与四硼酸钠溶液的体积比为1g:(10-20)mL,四硼酸钠溶液浓度为0.1-0.3mol/L,Sevag溶液为氯仿和正丁醇按4:1的体积比的混合液,沉淀物的质量与盐酸的体积比为1g:(15-25)mL,盐酸浓度为5-7mol/L。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤2中水解液与内标物体积比为1:(0.15-0.25),内标物中CEL-d4的浓度为0.7-0.9μg/mL。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤2中第一次加入的乙腈溶液与水解液的体积比为(0.4-0.6):1,四硼酸钠溶液的质量浓度为4-6%,再次加入的乙腈溶液与水解液的体积比为(0.1-0.3):1。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤2中甲酸与水解液的体积比为(0.004-0.006):1。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤3中甲醇与衍生液的体积比为1:(2-4),甲酸溶液与衍生液的体积比为1:(2-4),甲酸溶液的体积浓度为0.4-0.6%。
8.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤3中通过SPE柱进行固相萃取的过程为:以0.8-1.2mL/min的流速通过SPE柱,然后用20%的乙腈溶液淋洗,真空抽干后使用二氯甲烷淋洗,再真空抽干,然后以氨水/甲醇溶液洗脱并收集洗脱液,洗脱液氮吹,浓缩干燥,最后用乙腈溶液重溶,旋涡混匀,氨水/甲醇溶液中氨水、甲醇的体积比5:95。
9.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤4绘制标准曲线的具体过程为:(1)将羧甲基赖氨酸和羧乙基赖氨酸标准品各10.0mg用超纯水配成质量浓度为100μg/mL的混合标准品储备液,-20℃条件下储存;(2)用80%的乙腈溶液梯度稀释,分别得到质量浓度为2、4、6、8、10μg/mL的羧甲基赖氨酸和羧乙基赖氨酸标准品溶液,按液相色谱条件进样,每个浓度平行进样三次;(3)以标准品浓度为横坐标,峰面积的平均值为纵坐标,绘制标准曲线,计算回归方程。
10.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤5中液相色谱-串联质谱检测条件为:液相色谱条件:色谱柱:Waters cortecs HILIC,流速0.4mL/min,柱温35℃,进样量3μL,流动相A为0.4%甲酸-乙腈,B为50mmol/L甲酸铵溶液,梯度洗脱程序:0-3min,60-80%A、3-3.5min,50-60%A、3.5-4.5min,50%A、4.5-5min,50-80%A、5-7min,80%A;质谱条件:电离方式为ESI+,扫描方式为MRM,毛细管电压为3.0kV,离子源温度150℃,脱溶剂温度450℃,脱溶剂气流量1000L/h,碰撞气流量0.20mL/min。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210696789.3A CN115015429A (zh) | 2022-06-20 | 2022-06-20 | 一种同步检测黄精中晚期糖基化终末产物的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210696789.3A CN115015429A (zh) | 2022-06-20 | 2022-06-20 | 一种同步检测黄精中晚期糖基化终末产物的方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN115015429A true CN115015429A (zh) | 2022-09-06 |
Family
ID=83075756
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202210696789.3A Pending CN115015429A (zh) | 2022-06-20 | 2022-06-20 | 一种同步检测黄精中晚期糖基化终末产物的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN115015429A (zh) |
Citations (18)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2000304737A (ja) * | 1999-04-21 | 2000-11-02 | Tokuyama Corp | カルボキシメチル化アミノ酸の定量方法 |
JP2012225762A (ja) * | 2011-04-19 | 2012-11-15 | Toyo Univ | 糖化タンパク質の検出方法および糖化タンパク質の検出のためのバイオセンサーチップ |
CN103293243A (zh) * | 2013-06-03 | 2013-09-11 | 福建省产品质量检验研究院 | 食品中羧甲基赖氨酸成分的检测方法及应用 |
CA2818328A1 (en) * | 2012-06-11 | 2013-12-11 | Preventage Healthcare Llc | Methods for improving diabetes management |
CN103616466A (zh) * | 2013-11-27 | 2014-03-05 | 上海海洋大学 | 一种羧甲基赖氨酸的检测方法及应用 |
JP2014119370A (ja) * | 2012-12-18 | 2014-06-30 | Tokai Univ | 試料前処理方法 |
CN104634897A (zh) * | 2015-02-14 | 2015-05-20 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 一种检测卷烟主流烟气中晚期糖基化终末产物的方法 |
US20150191501A1 (en) * | 2012-06-26 | 2015-07-09 | Phytoquest Limited | Advanced glycation end product analogues |
CN106124641A (zh) * | 2016-05-13 | 2016-11-16 | 中华全国供销合作总社杭州茶叶研究所 | 一种同步检测绿茶中羧甲基赖氨酸和羧乙基赖氨酸的方法 |
JP2017049024A (ja) * | 2015-08-31 | 2017-03-09 | 学校法人東海大学 | 最終糖化産物分析のための試料の調製方法及び最終糖化産物の分析方法 |
CN108982700A (zh) * | 2018-08-15 | 2018-12-11 | 江苏省原子医学研究所 | PQQ对AGEs的抑制作用的研究方法 |
CN110243952A (zh) * | 2019-03-14 | 2019-09-17 | 南京市产品质量监督检验院 | 一种采用HPLC-MS/MS法定量测定奶粉中AGEs各成分含量的方法 |
CN110412197A (zh) * | 2019-09-04 | 2019-11-05 | 湖南新汇制药股份有限公司 | 一种黄精药材的hplc指纹图谱的构建方法 |
CN110988193A (zh) * | 2019-12-24 | 2020-04-10 | 中国海洋大学 | 一种检测水产品中晚期糖基化终末产物的方法 |
CN111122733A (zh) * | 2019-12-27 | 2020-05-08 | 江南大学 | 一种同步测定三种晚期糖基化产物的方法 |
CN112155204A (zh) * | 2020-08-25 | 2021-01-01 | 磐安县青之舟农产品开发有限公司 | 一种即食黄精及黄精养身茶制作工艺 |
CN113702546A (zh) * | 2021-09-09 | 2021-11-26 | 浙江工商大学 | 一种检测乳制品中多种晚期糖基化终末产物的方法 |
CN114601898A (zh) * | 2022-03-15 | 2022-06-10 | 华南农业大学 | 一种黄精酶解糖化的炮制工艺 |
-
2022
- 2022-06-20 CN CN202210696789.3A patent/CN115015429A/zh active Pending
Patent Citations (18)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2000304737A (ja) * | 1999-04-21 | 2000-11-02 | Tokuyama Corp | カルボキシメチル化アミノ酸の定量方法 |
JP2012225762A (ja) * | 2011-04-19 | 2012-11-15 | Toyo Univ | 糖化タンパク質の検出方法および糖化タンパク質の検出のためのバイオセンサーチップ |
CA2818328A1 (en) * | 2012-06-11 | 2013-12-11 | Preventage Healthcare Llc | Methods for improving diabetes management |
US20150191501A1 (en) * | 2012-06-26 | 2015-07-09 | Phytoquest Limited | Advanced glycation end product analogues |
JP2014119370A (ja) * | 2012-12-18 | 2014-06-30 | Tokai Univ | 試料前処理方法 |
CN103293243A (zh) * | 2013-06-03 | 2013-09-11 | 福建省产品质量检验研究院 | 食品中羧甲基赖氨酸成分的检测方法及应用 |
CN103616466A (zh) * | 2013-11-27 | 2014-03-05 | 上海海洋大学 | 一种羧甲基赖氨酸的检测方法及应用 |
CN104634897A (zh) * | 2015-02-14 | 2015-05-20 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 一种检测卷烟主流烟气中晚期糖基化终末产物的方法 |
JP2017049024A (ja) * | 2015-08-31 | 2017-03-09 | 学校法人東海大学 | 最終糖化産物分析のための試料の調製方法及び最終糖化産物の分析方法 |
CN106124641A (zh) * | 2016-05-13 | 2016-11-16 | 中华全国供销合作总社杭州茶叶研究所 | 一种同步检测绿茶中羧甲基赖氨酸和羧乙基赖氨酸的方法 |
CN108982700A (zh) * | 2018-08-15 | 2018-12-11 | 江苏省原子医学研究所 | PQQ对AGEs的抑制作用的研究方法 |
CN110243952A (zh) * | 2019-03-14 | 2019-09-17 | 南京市产品质量监督检验院 | 一种采用HPLC-MS/MS法定量测定奶粉中AGEs各成分含量的方法 |
CN110412197A (zh) * | 2019-09-04 | 2019-11-05 | 湖南新汇制药股份有限公司 | 一种黄精药材的hplc指纹图谱的构建方法 |
CN110988193A (zh) * | 2019-12-24 | 2020-04-10 | 中国海洋大学 | 一种检测水产品中晚期糖基化终末产物的方法 |
CN111122733A (zh) * | 2019-12-27 | 2020-05-08 | 江南大学 | 一种同步测定三种晚期糖基化产物的方法 |
CN112155204A (zh) * | 2020-08-25 | 2021-01-01 | 磐安县青之舟农产品开发有限公司 | 一种即食黄精及黄精养身茶制作工艺 |
CN113702546A (zh) * | 2021-09-09 | 2021-11-26 | 浙江工商大学 | 一种检测乳制品中多种晚期糖基化终末产物的方法 |
CN114601898A (zh) * | 2022-03-15 | 2022-06-10 | 华南农业大学 | 一种黄精酶解糖化的炮制工艺 |
Non-Patent Citations (7)
Title |
---|
刘婧;王彬;罗劲松;田野;刘青茹;蒋玉兰;: "绿茶中两种晚期糖基化终末产物同步检测研究", no. 01 * |
宫瑞泽;刘松鑫;邵紫君;夏蕴实;张磊;王玉方;孙印石;刘畅;: "煮炸鹿茸加工过程中晚期糖基化终产物生成规律及动力学分析", 中草药, vol. 51, no. 07, pages 2 * |
宫瑞泽等: "煮炸鹿茸加工过程中晚期糖基化终产物生成规律及动力学分析" * |
林钦;郑小严;陈纯;戴明;周燕琼;张英;: "UPLC-Q-TOF/MS在烘焙食品中羧甲基赖氨酸和羧乙基赖氨酸检测中的应用" * |
林钦;郑小严;陈纯;戴明;周燕琼;张英;: "UPLC-Q-TOF/MS在烘焙食品中羧甲基赖氨酸和羧乙基赖氨酸检测中的应用", 分析测试学报, no. 03, pages 1 * |
程威威等: "基于UPLC-QqQ-MS/MS同步检测热加工食品中 典型晚期糖基化终末产物", 《食品科学》, vol. 42, no. 10, pages 1 * |
高畅;何志勇;曾茂茂;陈洁;: "食品中晚期糖基化终产物的研究进展", no. 04 * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU2020102328A4 (en) | Method for determination of heterocyclic aromatic amine in oil | |
CN110988193B (zh) | 一种检测水产品中晚期糖基化终末产物的方法 | |
CN109001335B (zh) | 用于测定南极磷虾中17种类固醇激素的方法 | |
CN107759644B (zh) | 一种大孔树脂法回收苦杏仁脱苦水中苦杏仁苷的方法 | |
CN113785963A (zh) | 一种鲜味增强剂及其制法和应用 | |
Jie et al. | Progress in the pretreatment and analysis of carbohydrates in food: An update since 2013 | |
CN115015429A (zh) | 一种同步检测黄精中晚期糖基化终末产物的方法 | |
CN108008060B (zh) | 一种饲料中羟脯氨酸的测定方法及试剂 | |
CN107153103B (zh) | 一种测定生鲜乳样品中的多种霉菌毒素含量的方法 | |
Infante et al. | Simultaneous identification of selenium-containing glutathione species in selenised yeast by on-line HPLC with ICP-MS and electrospray ionisation quadrupole time of flight (QTOF)-MS/MS | |
CN111257438B (zh) | 西洋参多肽的富集和表征方法 | |
Xia et al. | A sensitive analytical method for the component monosaccharides of the polysaccharides from a Tibetan herb Potentilla anserine L. by capillary zone electrophoresis with UV detector | |
CN106831896A (zh) | 含糖醛酸二糖基于还原胺衍生化的分析方法及制备方法 | |
CN107607654B (zh) | 一种核桃花中黄酮类化学成分的分析方法 | |
KR100926223B1 (ko) | 이온크로마토그래피를 이용한 2종 이상의 아마도리 화합물동시분석법 | |
CN111896670B (zh) | 一种郁金的微提取方法 | |
Jian-Li et al. | Separation and purification of sialylglycopeptide from egg yolk based on cotton hydrophilic chromatography | |
CN104761674B (zh) | 一种酰肼化pH敏感型聚合物及其制备方法 | |
Zhang et al. | Mass spectral reconstruction of LC/MS data with entropy minimization | |
CN112646051A (zh) | 一种广东紫珠多糖的提取方法 | |
CN111721884B (zh) | 热毒宁注射液及其中间体中的痕量植物蛋白质成分的检测方法 | |
CN111024835A (zh) | 一种山茱萸中多糖成分的检测方法 | |
CN113121489A (zh) | 芸香苷-丙酮醛加合物、制备方法及应用 | |
CN111879865B (zh) | 甜叶菊糖甙分离鉴定方法 | |
CN117659102B (zh) | 一种从百合中同时分离纯化10种王百合苷类化合物的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |