CN114990029B - 一种微生物复合菌剂及其制备方法和应用 - Google Patents

一种微生物复合菌剂及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于生物农药技术领域，提供了一种微生物复合菌剂及其制备方法和应用，所述复合菌剂包括暹罗芽孢杆菌Gxun‑36和短短芽孢杆菌Gxun‑20；所述暹罗芽孢杆菌Gxun‑36和短短芽孢杆菌Gxun‑20的活菌数量比例为1～5:1～5。当复合菌剂为液体菌剂时，所述液体菌剂中各菌的浓度独立为2×108～1010个细胞/mL，当复合菌剂为固体菌剂时，所述固体菌剂中各菌的浓度独立为2×109～1011个/g。本发明所述的微生物复合菌剂具有显著的促进生长和抑制枯萎病发生的作用，具有安全、高效、无毒、无污染的特点，可有效减少化肥农药的使用，缓解环境污染压力，助力香蕉可持续发展。

Description

一种微生物复合菌剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及生物农药领域，尤其涉及一种微生物复合菌剂及其制备方法和应用。
背景技术
香蕉是世界上贸易量最大的水果之一，也是许多国家的主粮作物，具有十分重要的地位。病虫害是香蕉产业化生产的制约因素之一，其中香蕉枯萎病对香蕉的危害最为严重。香蕉枯萎病是由尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f.sp.cubense，FOC)引起的真菌土传病害，其发生范围广泛，易于流行且难以防治。香蕉枯萎病病原菌侵染香蕉植株后，会使维管束组织堵塞，严重时植株直接死亡，造成香蕉大量减产，甚至绝产。目前，香蕉枯萎病在我国云南、广西和福建等香蕉主产区大面积发生，给我国香蕉种植业造成毁灭性打击。
目前，国内外学者及香蕉种植户对香蕉枯萎病防治进行了大量的***研究，除实行严格的检疫制度，严格限制从病区调运、繁育、种植香蕉种苗外，主要包括物理防治、化学防治、生物防治及选育抗病品种。但物理防治成本高，化学防治对土壤污染严重，而选育抗病品种周期长、成本高。生物防治具有安全、绿色、高效等优点，是目前公认的最安全、最有效的土传病害防治方法。生物防治在保持生态平衡、环境稳定的同时，也符合农业可持续发展的战略路线和方针。
目前已报道可防控枯萎病的生防菌和菌剂，包括放线菌、芽孢杆菌、假单胞菌、木霉、绿僵菌、耐寒短杆菌和非致病力尖孢镰刀菌等。但目前大部分的报道菌株或菌剂很难兼顾防病和促生作用。使得具有防病促生功能的复合型微生物菌剂的研究尤为迫切。因此，为了克服单一菌剂作用单一的缺陷，提供一种可替代化肥农药，既能促进植物生长发育又能抗菌防病的复合菌剂就成为该技术领域急需解决的技术难题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种微生物复合菌剂及其制备方法和应用，所述复合菌剂对香蕉具有显著促进生长和抑制枯萎病发生的作用，可有效减少化肥农药的使用。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种微生物复合菌剂，所述复合菌剂包括暹罗芽孢杆菌Gxun-36和短短芽孢杆菌Gxun-20；所述暹罗芽孢杆菌Gxun-36和短短芽孢杆菌Gxun-20的活菌数量比例为1～5:1～5；
所述暹罗芽孢杆菌Gxun-36为暹罗芽孢杆菌Bacillus siamensis Gxun-36，于2021年4月23日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为：GDMCC No：61616；
所述短短芽孢杆菌Gxun-20为短芽孢杆菌Brevibacillus parabrevis Gxun-20，于2019年6月13日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为：GDMCC No：60686。
进一步地，当所述微生物复合菌剂为液体菌剂时，所述液体菌剂中各菌的浓度独立为2×108～1010个细胞/mL。
进一步地，当所述微生物复合菌剂为固体菌剂时，所述固体菌剂中各菌的浓度独立为2×109～1011个/g。
进一步地，所述固体菌剂还包括载体，所述载体与复合微生物的质量比为100:1～10。
进一步地，所述载体包括麸皮和米糠。
本发明还提供了上述微生物复合菌剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将暹罗芽孢杆菌Gxun-36和短短芽孢杆菌Gxun-20分别活化培养，获得活化菌株；
(2)将步骤(1)得到的活化菌株分别进行扩大培养，获得各菌株发酵液；
(3)将发酵液混合得到微生物复合菌剂。
进一步地，步骤(1)中活化培养的温度为30～40℃，活化培养的时间为14～24h。
进一步地，步骤(2)中扩大培养的温度为30～35℃，当培养基中菌的浓度达到1×108～1×109个细胞/mL时停止培养。
本发明还提供了上述微生物复合菌剂在促进农作物生长、防治农作物疾病中的应用。
进一步地，所述农作物为香蕉。
相比于现有技术，本发明的有益效果为：
本发明的微生物复合菌剂，其活性菌株分离自广西香蕉根际原生环境，能对香蕉种植区潮湿、板结环境有很好的耐受能力，由暹罗芽孢杆菌和短短芽孢杆菌进行复配而成，能够提高香蕉防病、抗病、抗逆、抗重茬的能力，提高香蕉产量和品质。因而更容易在香蕉根际定植和存活，效果稳定可靠，不会造成环境生物安全风险，更加安全、环保。
本发明公开的微生物复合菌剂的工艺路线简单，材料来源广泛，成本低廉、效益突出，具有改良土壤质地、增加土壤养分、分解有害物质、防止土壤板结的重要作用。经2年田间试验，与未施菌剂的对照地块试验结果相比，香蕉枯萎病的发病率降至2％以下，香蕉的茎围和高度明显增加。
附图说明
图1为暹罗芽孢杆菌Gxun-36对香蕉枯萎病致病菌尖胞镰刀菌的拮抗作用；
图2为短短芽孢杆菌Gxun-20溶磷特性图片；
图3为微生物复合菌剂对香蕉枯萎病菌防病图片；
图4为微生物复合菌剂防治香蕉枯萎病的香蕉幼苗纵切效果图；
图5为微生物复合菌剂香蕉盆栽促生实验图；
图6为微生物复合菌剂香蕉田间实验图。
保藏说明
暹罗芽孢杆菌Bacillus siamensis Gxun-36，拉丁文为Bacillus siamensis，该菌株保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏日期为2021年4月23日，保藏编号为GDMCC No：61616。
短短芽孢杆菌Brevibacillusparabrevis Gxun-20，拉丁文为Brevibacillusparabrevis，该菌株保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏日期为2019年6月13日，保藏编号为GDMCC No：60686。
具体实施方式
本发明提供了一种微生物复合菌剂，所述复合菌剂包括暹罗芽孢杆菌Gxun-36和短短芽孢杆菌Gxun-20；所述暹罗芽孢杆菌Gxun-36为暹罗芽孢杆菌Bacillus siamensisGxun-36，于2021年4月23日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为：GDMCC No：61616；所述短短芽孢杆菌Gxun-20为短芽孢杆菌Brevibacillusparabrevis Gxun-20，于2019年6月13日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为：GDMCC No：60686。
在本发明中，所述暹罗芽孢杆菌Gxun-36和短短芽孢杆菌Gxun-20的活菌数量比例为1～5:1～5，优选为2～4:2～3，进一步优选为3～3.5:2.5～2.9。
在本发明中，当所述微生物复合菌剂为液体菌剂时，所述液体菌剂中各菌的浓度独立为2×108～1010个细胞/mL，优选为5×108～5×109个细胞/mL，进一步优选为8×108～2×109个细胞/mL。
在本发明中，当所述微生物复合菌剂为固体菌剂时，所述固体菌剂中各菌的浓度独立为2×109～1011个/g，优选为5×109～5×1010个/g，进一步优选为8×109～2×1010个/g。
在本发明中，所述固体菌剂中还包括载体，所述载体与复合微生物的质量比为100:1～10，优选为100:2～8，进一步优选为100:4～6。
在本发明中，所述载体优选包括麸皮和米糠，所述麸皮和米糠的质量比为1～8:2～7，优选为2～6:3～6，进一步优选为3～5:4～5。
本发明还提供了上述微生物复合菌剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将暹罗芽孢杆菌Gxun-36和短短芽孢杆菌Gxun-20分别活化培养，获得活化菌株；
(2)将步骤(1)得到的活化菌株分别进行扩大培养，获得各菌株发酵液；
(3)将发酵液混合得到微生物复合菌剂。
在本发明中，将暹罗芽孢杆菌Gxun-36和短短芽孢杆菌Gxun-20分别活化培养，获得活化菌株；所述活化培养的温度为30～40℃，优选为32～37℃，进一步优选为34～36℃；所述活化培养的时间为14～24h，优选为16～20h，进一步优选为17～19h。
在本发明中，将步骤(1)得到的活化菌株分别进行扩大培养，获得各菌株发酵液；所述扩大培养的温度为30～35℃，优选为31～34℃，进一步优选为32～33℃；当培养基中菌的浓度达到1×108～1×109个细胞/mL时停止培养，优选为2×108～8×108个细胞/mL，进一步优选为4×108～6×108个细胞/mL。
在本发明中，所述固体菌剂的制备方法具体为：将暹罗芽孢杆菌Gxun-36发酵液和短短芽孢杆菌Gxun-20发酵液按照1～5:1～5的重量比例混合，优选为2～4:2～3，进一步优选为3～3.5:2.5～2.9；然后真空常温烘干使菌剂含水量为20～30％得到固体菌粉，优选为22～28％，进一步优选为24～26％；将固体菌粉与载体按比例混合后获得微生物复合固体菌剂。
本发明还提供了上述微生物复合菌剂在促进农作物生长、防治农作物疾病中的应用。
在本发明中，所述农作物优选为香蕉。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实验例1微生物复合菌剂的分离鉴定
分别剪取香蕉根、茎、叶各5g，用1％的次氯酸钠消毒3min，再用70％酒精消毒1min，然后无菌水清洗5次，保证分离样品表面消毒干净。用灭菌的研砵分别研碎表面消毒好的植株根、茎、叶，并加入5mL无菌水，无菌纱布过滤，无菌水梯度稀释后涂布于LB平板，每个浓度3次重复，35℃培养48h，平板分离纯化后，与尖胞镰刀菌进行平板对峙实验，筛选出1株对尖胞镰刀菌具有显著拮抗效果的菌株(见图1)，经分子和生理生化鉴定后命名为暹罗芽孢杆菌Bacillus siamensis Gxun-36，于2021年4月23日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：61616。
剪取香蕉根5g，根围土称取10g，石英砂5g，然后分别加入到50mL0.85％(m/v)的灭菌生理盐水中，在恒温摇床200rmp振荡30min，灭菌生理盐水进行梯度稀释，涂布溶磷筛选平板，35℃培养48h，选取透明圈大平板进行纯化培养，筛选获得1株溶磷效果较好菌株(见图2)，经分子和生理生化鉴定后命名为短短芽孢杆菌Brevibacillusparabrevis Gxun-20，于2019年6月13日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：60686。
实施例1
本实施例提供了一种微生物复合液体菌剂，包括暹罗芽孢杆菌Gxun-36和短短芽孢杆菌Gxun-20，所述微生物液体复合菌剂的制备方法如下：
将暹罗芽孢杆菌Gxun-36和短短芽孢杆菌Gxun-20分别在LB培养基中35℃活化培养16h，得到活化菌株，然后再在LB培养液中35℃、200rpm振荡培养，当两株菌液浓度达到2×108个细胞/mL时停止培养得到发酵液，将发酵液按照暹罗芽孢杆菌Gxun-36：短短芽孢杆菌Gxun-20＝1:5的体积比例混合后即得微生物复合液体菌剂。
实施例2
本实施例提供了一种微生物复合液体菌剂，包括暹罗芽孢杆菌Gxun-36和短短芽孢杆菌Gxun-20，所述微生物复合液体菌剂的制备方法如下：
将暹罗芽孢杆菌Gxun-36和短短芽孢杆菌Gxun-20分别在LB培养基中32℃活化培养20h，得到活化菌株，然后再在LB培养液中32℃、200rpm振荡培养，当两株菌液浓度达到109个细胞/mL停止培养得到发酵液，将发酵液按照暹罗芽孢杆菌Gxun-36：短短芽孢杆菌Gxun-20＝1:2的体积比例混合后即得微生物复合液体菌剂。
实施例3
本实施例提供了一种微生物复合液体菌剂，包括暹罗芽孢杆菌Gxun-36和短短芽孢杆菌Gxun-20，所述微生物复合液体菌剂的制备方法如下：
将暹罗芽孢杆菌Gxun-36和短短芽孢杆菌Gxun-20分别在LB培养基中30℃活化培养24h，得到活化菌株，然后再在LB培养液中30℃、200rpm振荡培养，当两株菌液浓度达到5×108个细胞/mL停止培养得到发酵液，将发酵液按照暹罗芽孢杆菌Gxun-36：短短芽孢杆菌Gxun-20＝1:1的体积比例混合后即得微生物复合液体菌剂。
实施例4
本实施例提供了一种微生物复合液体菌剂，包括暹罗芽孢杆菌Gxun-36和短短芽孢杆菌Gxun-20，所述微生物复合液体菌剂的制备方法如下：
将暹罗芽孢杆菌Gxun-36和短短芽孢杆菌Gxun-20分别在LB培养基中40℃活化培养16h，得到活化菌株，然后再在LB培养液中32℃、200rpm振荡培养，当两株菌液浓度达到1010个细胞/mL停止培养得到发酵液，将发酵液按照暹罗芽孢杆菌Gxun-36：短短芽孢杆菌Gxun-20＝2:1的体积比例混合后即得微生物复合液体菌剂。
实施例5
本实施例提供了一种微生物复合液体菌剂，包括暹罗芽孢杆菌Gxun-36和短短芽孢杆菌Gxun-20，所述微生物复合液体菌剂的制备方法如下：
将暹罗芽孢杆菌Gxun-36和短短芽孢杆菌Gxun-20分别在LB培养基中35℃活化培养18h，得到活化菌株，然后再在LB培养液中31℃、200rpm振荡培养，当两株菌液浓度达到5×109个细胞/mL停止培养得到发酵液，将发酵液按照暹罗芽孢杆菌Gxun-36：短短芽孢杆菌Gxun-20＝5:1的体积比例混合后即得微生物复合液体菌剂。
实施例6
本实施例提供了一种微生物复合固体菌剂，包括暹罗芽孢杆菌Gxun-36和短短芽孢杆菌Gxun-20，所述微生物复合固体菌剂的制备方法如下：
将暹罗芽孢杆菌Gxun-36和短短芽孢杆菌Gxun-20分别在LB培养基中34℃活化培养28h，得到活化菌株，然后再在LB培养液中35℃、200rpm振荡培养，当两株菌液浓度达到2×108个细胞/mL停止培养得到发酵液，将发酵液按照暹罗芽孢杆菌Gxun-36：短短芽孢杆菌Gxun-20＝1:5的体积比例混合，然后真空常温烘干使菌剂含水量保持在25％，得到固体菌粉，按照载体(麸皮：米糠＝1:1)：菌粉＝20:1的质量比混合后获得微生物复合固体菌剂。
对照例1
本对照例与实施例1的区别在于暹罗芽孢杆菌Gxun-36和短短芽孢杆菌Gxun-20发酵液的体积比为1:9。
对照例2
本对照例与实施例1的区别在于暹罗芽孢杆菌Gxun-36和短短芽孢杆菌Gxun-20发酵液的体积比为9:1。
对照例3
本对照例与实施例1的区别在于只含有暹罗芽孢杆菌Gxun-36发酵液。
对照例4
本对照例与实施例1的区别在于只含有短短芽孢杆菌Gxun-20发酵液。
实验例2
1.病原菌孢子制备
使用PDA培养基培养尖孢镰刀菌古巴专化型热带4号生理小种(购自上海博湖生物科技有限公司)30℃，培养7d，取出菌饼，使用无菌竹签将香蕉枯萎病尖孢镰刀菌菌丝刮取到PDB液体培养基中，30℃，200r/min培养5d，使用灭菌纱布过滤菌丝，滤液称为孢子悬浮液，显微镜下使用血球计数板观察孢子数量，计算孢子悬浮液浓度，再将孢子悬液稀释到1×106CFU/mL，4℃下储藏待使用。
2.香蕉盆栽实验
选用栽种于花盆中3-5片叶子的香蕉幼苗(株高约10cm)，品种为巴西粉蕉威廉斯6号，分为10组，用灭菌刀片进行伤根处理，将实施例1～5和对照例1～4的菌剂稀释50倍，取500mL浇灌于经伤根处理的香蕉幼苗的根际，2d后再浇灌稀释好的50mL尖孢镰刀菌孢子悬液，同时设置一个空白对照，浇灌稀释相同浓度的500mLLB培养液，2d后再浇灌稀释好的50mL病原菌孢子悬液，每组分别处理10株。接种病原菌50d后，进行以下测定：
鲜重测定：用精准度为0.01g的电子天平对新鲜植株及根系重量进行称量；
茎粗测定：测量距离土壤2cm处香蕉根茎的直径，使用游标卡尺精准测量至0.01mm；
株高测定：用直尺测定香蕉植株种植土壤表面到植株倒数第二片叶子末端处的直线距离，作为香蕉的株高；
病情指数及防治效果：测量过鲜重的植株茎部纵向剖开，观察茎部中心颜色变化。根据球茎黑褐色程度划分病级，统计病情指数，计算防治效果。分级标准采用0～5级，具体判断指标如下：
0级球茎切片根茎生长良好，无黑褐色；
1级球茎出现少量褐化，其面积小于10％；
2级球茎褐化面积为10％-25％；
3级球茎褐化面积为26％-50％；
4级球茎褐化面积为51％-75％；
5级球茎褐化面积达76％以上。
根据分级标准观察香蕉球茎的发病情况结果，以便后续试验判断香蕉枯萎病的发病情况，结果见表1。
表1：香蕉盆栽实验
从表1可以看出，当暹罗芽孢杆菌Gxun-36和短短芽孢杆菌Gxun-20相互混合后有明显的相互促进作用，当两株菌混合比例为1：5～5：1时，相互促进的效果较好，对香蕉幼苗有明显防病促生作用，尤其是混合比例为1：2～2：1时，防治效果可达90％以上。因此，两株菌混合得到复合菌剂有明显促进作用，比单株菌防病促生效果增加明显，原因可能是两株菌分泌的代谢物质相互促进，从而提高香蕉幼苗抗病和促生能力。
实施例3
实验分为三组，空白对照组(只接入病原菌孢子)、实施例1组(先接入液体复合菌剂，再接入病原菌孢子)、实施例6组(先接入固体复合菌剂，再接入病原菌孢子)。主要步骤如下：
1.病原菌孢子制备：同实验例2
2.香蕉盆栽实验
选用栽种于花盆中3-5片叶子的香蕉幼苗(株高约10cm)，品种为巴西粉蕉威廉斯6号。用灭菌刀片进行伤根处理，实施例1组：将液体微生物复合菌剂稀释50倍，取500mL浇灌于经香蕉幼苗的根际，2d后再浇灌稀释好的50mL病原菌孢子悬液；实施例2组：每株香蕉施用固体菌剂20g，2d后再浇灌稀释好的50mL病原菌孢子悬液；空白对照组用稀释相同浓度的500mL LB培养液代替，2d后再浇灌稀释好的50mL病原菌孢子悬液。每组分别处理10株，接种病原菌50d后，进行鲜重、茎粗及防病效果测定。
根据分级标准解剖球茎观察香蕉球茎的发病情况结果，结果见表2和图3～5。
表2：液体菌剂和固体菌剂香蕉盆栽实验
实验例4
2021年11月14日在广西南宁市坛洛镇香蕉园进行田间实验，2022年5月13日实验结束。试验蕉园为红胶土壤，前茬香蕉枯萎病发病率为14.67％，香蕉品种为巴西粉蕉威廉斯6号，每亩栽种香蕉苗160株。实验分为三组，对照组(稀释LB液体培养基灌根)、液体菌剂组(液体复合菌剂灌根)、固体菌剂组(添加固体复合菌剂)，每组香蕉10株。其他按照正常香蕉园进行正常管理，6个月后测定香蕉株高、茎粗及发病率，结果见表3和图6(图6中左侧一列香蕉为对照组，右侧一列香蕉为施加本申请固体菌剂组，图6拍摄于2022年5月27日，星期五，14∶35，拍摄地点为南宁市富良村)。
表3：香蕉田间实验
组别 茎粗(cm) 比对照增加(％) 病情指数(％) 防治效果(％)
对照组 59.23±0.69 0 12.56 0
液体菌剂组 67.46±0.82 13.89 2.13 83.04
固体菌剂组 70.43±0.88 18.90 0.67 94.66
由以上实施例和实验例可知，本发明提供了一种微生物复合菌剂及其制备方法和应用，所述复合菌剂对香蕉具有显著促进生长和抑制枯萎病发生的作用，可有效减少化肥农药的使用。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种微生物复合菌剂在促进香蕉生长、防治香蕉枯萎病中的应用，其特征在于，所述复合菌剂由暹罗芽孢杆菌Gxun-36和短短芽孢杆菌Gxun-20组成；所述暹罗芽孢杆菌Gxun-36和短短芽孢杆菌Gxun-20的活菌数量比例为1~2：1~2；
所述暹罗芽孢杆菌Gxun-36为暹罗芽孢杆菌Bacillus siamensis Gxun-36，于2021年4月23日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为：GDMCCNo： 61616；
所述短短芽孢杆菌Gxun-20为短芽孢杆菌Brevibacillus parabrevis Gxun-20，于2019年6月13日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为：GDMCC NO：60686；
当所述微生物复合菌剂为液体菌剂时，所述液体菌剂中各菌的浓度独立为2×108~1010个细胞/mL；
当所述微生物复合菌剂为固体菌剂时，所述固体菌剂中各菌的浓度独立为2×109~1011个/g。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述固体菌剂还包括载体，所述载体与复合微生物的质量比为100：1~10。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述载体包括麸皮和米糠。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述微生物复合菌剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将暹罗芽孢杆菌Gxun-36和短短芽孢杆菌Gxun-20分别活化培养，获得活化菌株；
(2)将步骤(1)得到的活化菌株分别进行扩大培养，获得各菌株发酵液；
(3) 将发酵液混合得到微生物复合菌剂。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤(1)中活化培养的温度为30~40℃，活化培养的时间为14~24h。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤(2)中扩大培养的温度为30~35°C。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019023555A1 (en) * 2017-07-28 2019-01-31 Evelo Biosciences, Inc. POLYMER COMPOSITIONS
CN111849815A (zh) * 2020-07-21 2020-10-30 广西民族大学 一种植物根际促生菌株Gxun-20及其在植物促生中的应用
CN113201478A (zh) * 2021-05-27 2021-08-03 广西民族大学 一株分泌铁载体的暹罗芽孢杆菌Gxun-36及其应用
CN113278565A (zh) * 2021-07-09 2021-08-20 广西民族大学 一株副短短芽孢杆菌Gxun-20及其应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019023555A1 (en) * 2017-07-28 2019-01-31 Evelo Biosciences, Inc. POLYMER COMPOSITIONS
CN111849815A (zh) * 2020-07-21 2020-10-30 广西民族大学 一种植物根际促生菌株Gxun-20及其在植物促生中的应用
CN113201478A (zh) * 2021-05-27 2021-08-03 广西民族大学 一株分泌铁载体的暹罗芽孢杆菌Gxun-36及其应用
CN113278565A (zh) * 2021-07-09 2021-08-20 广西民族大学 一株副短短芽孢杆菌Gxun-20及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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海洋来源羽毛降解菌株的筛选、鉴定及酶学性质研究;张红岩等;应用海洋学学报;第41卷(第2期);第338-346页 *

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