CN114929741A - 针对lif的抗体及其用途 - Google Patents

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Abstract

本文披露了可用于治疗癌症的特异性结合IL‑6家族成员LIF并抑制其作用的抗体。本文还披露了所述抗体用于治疗癌症的用途。

Description

针对LIF的抗体及其用途
相关申请的交叉引用
本申请要求2019年12月4日提交的美国临时申请62/943,479的优先权，将其出于所有目的通过引用以其整体特此并入。
序列表的引用
本申请包括创建于2020年11月24日并且大小为12,982字节的以电子方式提交的名为“LIF-104-WO-PCT_ST25”的序列表，将其通过引用以其整体特此并入。
背景技术
白血病抑制因子(LIF)是一种多效性细胞因子，其与LIF受体结合并激活增强细胞增殖和存活的信号传导途径。高LIF表达与几种实体瘤的阴性结局相关，并且假设阻断LIF与其受体的结合可以改善疾病结局。
发明内容
本文描述了阻断LIF与其受体的相互作用的抗体。这些抗体可用于治疗患有癌症的个体的方法。
在一个方面，本文描述了特异性结合白血病抑制因子(LIF)的重组抗体，其包含：(a)含有SEQ ID NO：2(TDYWIC)、3(GFSFSTDYWIC)或33(GFSFSTDY)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区1(VH-CDR1)；(b)含有SEQ ID NO：4(IYVGTSGDT)或5(CIYVGTSGDTYYATWAKG)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区2(VH-CDR2)；(c)含有SEQ ID NO：6(ADNPYDYFNL)或7(AGADNPYDYFNLW)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区3(VH-CDR3)；(d)含有SEQ ID NO∶9(ETISGY)或10(QASETISGYLS)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区1(VL-CDR1)；(e)含有SEQ ID NO：11(RAS)或12(RASTLAS)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区2(VL-CDR2)；以及(f)含有SEQ ID NO：13(QQGYSYS)或14(QQGYSYSDTDNV)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区3(VL-CDR3)。在某些实施例中，该重组抗体是嵌合的或人源化的。在某些实施例中，该重组抗体是IgG抗体。在某些实施例中，该重组抗体包括Fab、F(ab)2、单结构域抗体、单链可变片段(scFv)或纳米抗体。在某些实施例中，本文描述了包含该重组抗体和药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂的药物组合物。在某些实施例中，该药物组合物被配制用于静脉内施用。在某些实施例中，该重组抗体或该药物组合物用于在治疗癌症中使用。在某些实施例中，该癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌、***癌或肺癌。还描述了治疗个体的癌症的方法，其包括将有效量的该重组抗体或该药物组合物施用至被诊断患有或怀疑患有癌症的个体。在某些实施例中，该癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌、***癌或肺癌。还考虑了编码该重组抗体的核酸，和/或包含该核酸的细胞。在某些实施例中，该细胞是真核细胞。在某些实施例中，该细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。还考虑了制备癌症治疗剂的方法，其包括在培养基中在足以将该重组抗体分泌到该培养基中的条件下孵育该细胞。在某些实施例中，该方法进一步包括使该培养基经受至少一个纯化步骤。还考虑了制备癌症治疗剂的方法，其包括将该重组抗体与药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂混合。
在另一个方面，本文描述了特异性结合白血病抑制因子(LIF)的重组抗体，其包含：(a)含有SEQ ID NO：16(TDYWWS)、17(GFSFSTDYWW)或18(GFSFSTDYWWS)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区1(VH-CDR1)；(b)含有SEQ ID NO：4(IYVGTSGDT)或19(YIYVGTSGDTYYNPSLKS)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区2(VH-CDR2)；(c)含有SEQ ID NO：6(ADNPYDYFNL)或7(AGADNPYDYFNLW)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区3(VH-CDR3)；(d)含有SEQ ID NO∶9(ETISGY)或21(RASETISGYLN)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区1(VL-CDR1)；(e)含有SEQ ID NO：11(RAS)或22(RASSLQS)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区2(VL-CDR2)；以及(f)含有SEQ ID NO：13(QQGYSYS)或14(QQGYSYSDTDNV)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区3(VL-CDR3)。在某些实施例中，该重组抗体是嵌合的或人源化的。在某些实施例中，该重组抗体是IgG抗体。在某些实施例中，该重组抗体包括Fab、F(ab)2、单结构域抗体、单链可变片段(scFv)或纳米抗体。在某些实施例中，本文描述了包含该重组抗体和药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂的药物组合物。在某些实施例中，该药物组合物被配制用于静脉内施用。在某些实施例中，该重组抗体或该药物组合物用于在治疗癌症中使用。在某些实施例中，该癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌、***癌或肺癌。还描述了治疗个体的癌症的方法，其包括将有效量的该重组抗体或该药物组合物施用至被诊断患有或怀疑患有癌症的个体。在某些实施例中，该癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌、***癌或肺癌。还考虑了编码该重组抗体的核酸，和/或包含该核酸的细胞。在某些实施例中，该细胞是真核细胞。在某些实施例中，该细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。还考虑了制备癌症治疗剂的方法，其包括在培养基中在足以将该重组抗体分泌到该培养基中的条件下孵育该细胞。在某些实施例中，该方法进一步包括使该培养基经受至少一个纯化步骤。还考虑了制备癌症治疗剂的方法，其包括将该重组抗体与药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂混合。
在另一个方面，本文描述了特异性结合白血病抑制因子(LIF)的重组抗体，其包含：(a)含有SEQ ID NO：16(TDYWWS)、17(GFSFSTDYWW)或18(GFSFSTDYWWS)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区1(VH-CDR1)；(b)含有SEQ ID NO：4(IYVGTSGDT)或19(YIYVGTSGDTYYNPSLKS)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区2(VH-CDR2)；(c)含有SEQ ID NO：6(ADNPYDYFNL)或7(AGADNPYDYFNLW)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区3(VH-CDR3)；(d)含有SEQ ID NO∶9(ETISGY)或24(RASETISGYLA)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区1(VL-CDR1)；(e)含有SEQ ID NO：11(RAS)或25(RASTLQS)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区2(VL-CDR2)；以及(f)含有SEQ ID NO：13(QQGYSYS)或14(QQGYSYSDTDNV)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区3(VL-CDR3)。在某些实施例中，该重组抗体是嵌合的或人源化的。在某些实施例中，该重组抗体是IgG抗体。在某些实施例中，该重组抗体包括Fab、F(ab)2、单结构域抗体、单链可变片段(scFv)或纳米抗体。在某些实施例中，本文描述了包含该重组抗体和药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂的药物组合物。在某些实施例中，该药物组合物被配制用于静脉内施用。在某些实施例中，该重组抗体或该药物组合物用于在治疗癌症中使用。在某些实施例中，该癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌、***癌或肺癌。还描述了治疗个体的癌症的方法，其包括将有效量的该重组抗体或该药物组合物施用至被诊断患有或怀疑患有癌症的个体。在某些实施例中，该癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌、***癌或肺癌。还考虑了编码该重组抗体的核酸，和/或包含该核酸的细胞。在某些实施例中，该细胞是真核细胞。在某些实施例中，该细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。还考虑了制备癌症治疗剂的方法，其包括在培养基中在足以将该重组抗体分泌到该培养基中的条件下孵育该细胞。在某些实施例中，该方法进一步包括使该培养基经受至少一个纯化步骤。还考虑了制备癌症治疗剂的方法，其包括将该重组抗体与药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂混合。
在另一个方面，本文描述了特异性结合白血病抑制因子(LIF)的重组抗体，其包含：(a)含有SEQ ID NO：27(TDYWMS)、28(GFSFSTDYWM)或29(GFSFSTDYWMS)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区1(VH-CDR1)；(b)含有SEQ ID NO：4(IYVGTSGDT)或30(SIYVGTSGDTYYADSVKG)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区2(VH-CDR2)；(c)含有SEQ ID NO：6(ADNPYDYFNL)或7(AGADNPYDYFNLW)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区3(VH-CDR3)；(d)含有SEQ ID NO∶9(ETISGY)或24(RASETISGYLA)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区1(VL-CDR1)；(e)含有SEQ ID NO：11(RAS)或32(RASSLES)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区2(VL-CDR2)；以及(f)含有SEQ ID NO：13(QQGYSYS)或14(QQGYSYSDTDNV)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区3(VL-CDR3)。在某些实施例中，该重组抗体是嵌合的或人源化的。在某些实施例中，该重组抗体是IgG抗体。在某些实施例中，该重组抗体包括Fab、F(ab)2、单结构域抗体、单链可变片段(scFv)或纳米抗体。在某些实施例中，本文描述了包含该重组抗体和药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂的药物组合物。在某些实施例中，该药物组合物被配制用于静脉内施用。在某些实施例中，该重组抗体或该药物组合物用于在治疗癌症中使用。在某些实施例中，该癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌、***癌或肺癌。还描述了治疗个体的癌症的方法，其包括将有效量的该重组抗体或该药物组合物施用至被诊断患有或怀疑患有癌症的个体。在某些实施例中，该癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌、***癌或肺癌。还考虑了编码该重组抗体的核酸，和/或包含该核酸的细胞。在某些实施例中，该细胞是真核细胞。在某些实施例中，该细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。还考虑了制备癌症治疗剂的方法，其包括在培养基中在足以将该重组抗体分泌到该培养基中的条件下孵育该细胞。在某些实施例中，该方法进一步包括使该培养基经受至少一个纯化步骤。还考虑了制备癌症治疗剂的方法，其包括将该重组抗体与药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂混合。
在另一个方面，本文描述了特异性结合白血病抑制因子(LIF)的重组抗体，其包含：(a)含有SEQ ID NO：27(TDYWMS)、28(GFSFSTDYWM)或29(GFSFSTDYWMS)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区1(VH-CDR1)；(b)含有SEQ ID NO：4(IYVGTSGDT)或30(SIYVGTSGDTYYADSVKG)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区2(VH-CDR2)；(c)含有SEQ ID NO：6(ADNPYDYFNL)或7(AGADNPYDYFNLW)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区3(VH-CDR3)；(d)含有SEQ ID NO：9(ETISGY)或21(RASETISGYLN)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区1(VL-CDR1)；(e)含有SEQ ID NO：11(RAS)或22(RASSLQS)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区2(VL-CDR2)；以及(f)含有SEQ ID NO：13(QQGYSYS)或14(QQGYSYSDTDNV)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区3(VL-CDR3)。在某些实施例中，该重组抗体是嵌合的或人源化的。在某些实施例中，该重组抗体是IgG抗体。在某些实施例中，该重组抗体包括Fab、F(ab)2、单结构域抗体、单链可变片段(scFv)或纳米抗体。在某些实施例中，本文描述了包含该重组抗体和药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂的药物组合物。在某些实施例中，该药物组合物被配制用于静脉内施用。在某些实施例中，该重组抗体或该药物组合物用于在治疗癌症中使用。在某些实施例中，该癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌、***癌或肺癌。还描述了治疗个体的癌症的方法，其包括将有效量的该重组抗体或该药物组合物施用至被诊断患有或怀疑患有癌症的个体。在某些实施例中，该癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌、***癌或肺癌。还考虑了编码该重组抗体的核酸，和/或包含该核酸的细胞。在某些实施例中，该细胞是真核细胞。在某些实施例中，该细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。还考虑了制备癌症治疗剂的方法，其包括在培养基中在足以将该重组抗体分泌到该培养基中的条件下孵育该细胞。在某些实施例中，该方法进一步包括使该培养基经受至少一个纯化步骤。还考虑了制备癌症治疗剂的方法，其包括将该重组抗体与药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂混合。
在另一个方面，本文描述了特异性结合白血病抑制因子(LIF)的重组抗体，其包含：(a)含有SEQ ID NO：33(TDYW)所示的氨基酸序列的重链互补决定区1(VH-CDR1)；(b)含有SEQ ID NO：4(IYVGTSGDT)所示的氨基酸序列的重链互补决定区2(VH-CDR2)；(c)含有SEQID NO：6(ADNPYDYFNL)或7(AGADNPYDYFNLW)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区3(VH-CDR3)；(d)含有SEQ ID NO：9(ETISGY)所示的氨基酸序列的轻链互补决定区1(VL-CDR1)；(e)含有SEQ ID NO：11(RAS)所示的氨基酸序列的轻链互补决定区2(VL-CDR2)；以及(f)含有SEQ ID NO：13(QQGYSYS)或14(QQGYSYSDTDNV)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区3(VL-CDR3)。在某些实施例中，该重组抗体是嵌合的或人源化的。在某些实施例中，该重组抗体是IgG抗体。在某些实施例中，该重组抗体包括Fab、F(ab)2、单结构域抗体、单链可变片段(scFv)或纳米抗体。在某些实施例中，本文描述了包含该重组抗体和药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂的药物组合物。在某些实施例中，该药物组合物被配制用于静脉内施用。在某些实施例中，该重组抗体或该药物组合物用于在治疗癌症中使用。在某些实施例中，该癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌、***癌或肺癌。还描述了治疗个体的癌症的方法，其包括将有效量的该重组抗体或该药物组合物施用至被诊断患有或怀疑患有癌症的个体。在某些实施例中，该癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌、***癌或肺癌。还考虑了编码该重组抗体的核酸，和/或包含该核酸的细胞。在某些实施例中，该细胞是真核细胞。在某些实施例中，该细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。还考虑了制备癌症治疗剂的方法，其包括在培养基中在足以将该重组抗体分泌到该培养基中的条件下孵育该细胞。在某些实施例中，该方法进一步包括使该培养基经受至少一个纯化步骤。还考虑了制备癌症治疗剂的方法，其包括将该重组抗体与药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂混合。
在另一个方面，本文描述了特异性结合白血病抑制因子(LIF)的重组抗体，其包含：具有与SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区(VH)序列；以及具有与SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区(VL)序列。在某些实施例中，该重组抗体是嵌合的或人源化的。在某些实施例中，该重组抗体是IgG抗体。在某些实施例中，该重组抗体包括Fab、F(ab)2、单结构域抗体、单链可变片段(scFv)或纳米抗体。
在另一个方面，本文描述了特异性结合白血病抑制因子(LIF)的重组抗体，其包含：具有与SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区(VH)序列；以及具有与SEQ ID NO：20所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区(VL)序列。在某些实施例中，该重组抗体是嵌合的或人源化的。在某些实施例中，该重组抗体是IgG抗体。在某些实施例中，该重组抗体包括Fab、F(ab)2、单结构域抗体、单链可变片段(scFv)或纳米抗体。在某些实施例中，本文描述了包含该重组抗体和药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂的药物组合物。在某些实施例中，该药物组合物被配制用于静脉内施用。在某些实施例中，该重组抗体或该药物组合物用于在治疗癌症中使用。在某些实施例中，该癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌、***癌或肺癌。还描述了治疗个体的癌症的方法，其包括将有效量的该重组抗体或该药物组合物施用至被诊断患有或怀疑患有癌症的个体。在某些实施例中，该癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌、***癌或肺癌。还考虑了编码该重组抗体的核酸，和/或包含该核酸的细胞。在某些实施例中，该细胞是真核细胞。在某些实施例中，该细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。还考虑了制备癌症治疗剂的方法，其包括在培养基中在足以将该重组抗体分泌到该培养基中的条件下孵育该细胞。在某些实施例中，该方法进一步包括使该培养基经受至少一个纯化步骤。还考虑了制备癌症治疗剂的方法，其包括将该重组抗体与药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂混合。
在另一个方面，本文描述了特异性结合白血病抑制因子(LIF)的重组抗体，其包含：具有与SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区(VH)序列；以及具有与SEQ ID NO：23所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区(VL)序列。在某些实施例中，该重组抗体是嵌合的或人源化的。在某些实施例中，该重组抗体是IgG抗体。在某些实施例中，该重组抗体包括Fab、F(ab)2、单结构域抗体、单链可变片段(scFv)或纳米抗体。在某些实施例中，本文描述了包含该重组抗体和药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂的药物组合物。在某些实施例中，该药物组合物被配制用于静脉内施用。在某些实施例中，该重组抗体或该药物组合物用于在治疗癌症中使用。在某些实施例中，该癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌、***癌或肺癌。还描述了治疗个体的癌症的方法，其包括将有效量的该重组抗体或该药物组合物施用至被诊断患有或怀疑患有癌症的个体。在某些实施例中，该癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌、***癌或肺癌。还考虑了编码该重组抗体的核酸，和/或包含该核酸的细胞。在某些实施例中，该细胞是真核细胞。在某些实施例中，该细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。还考虑了制备癌症治疗剂的方法，其包括在培养基中在足以将该重组抗体分泌到该培养基中的条件下孵育该细胞。在某些实施例中，该方法进一步包括使该培养基经受至少一个纯化步骤。还考虑了制备癌症治疗剂的方法，其包括将该重组抗体与药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂混合。
在另一个方面，本文描述了特异性结合白血病抑制因子(LIF)的重组抗体，其包含：具有与SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区(VH)序列；以及具有与SEQ ID NO：31所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区(VL)序列。在某些实施例中，该重组抗体是嵌合的或人源化的。在某些实施例中，该重组抗体是IgG抗体。在某些实施例中，该重组抗体包括Fab、F(ab)2、单结构域抗体、单链可变片段(scFv)或纳米抗体。在某些实施例中，本文描述了包含该重组抗体和药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂的药物组合物。在某些实施例中，该药物组合物被配制用于静脉内施用。在某些实施例中，该重组抗体或该药物组合物用于在治疗癌症中使用。在某些实施例中，该癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌、***癌或肺癌。还描述了治疗个体的癌症的方法，其包括将有效量的该重组抗体或该药物组合物施用至被诊断患有或怀疑患有癌症的个体。在某些实施例中，该癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌、***癌或肺癌。还考虑了编码该重组抗体的核酸，和/或包含该核酸的细胞。在某些实施例中，该细胞是真核细胞。在某些实施例中，该细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。还考虑了制备癌症治疗剂的方法，其包括在培养基中在足以将该重组抗体分泌到该培养基中的条件下孵育该细胞。在某些实施例中，该方法进一步包括使该培养基经受至少一个纯化步骤。还考虑了制备癌症治疗剂的方法，其包括将该重组抗体与药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂混合。
在另一个方面，本文描述了特异性结合白血病抑制因子(LIF)的重组抗体，其包含：具有与SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区(VH)序列；以及具有与SEQ ID NO：20所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区(VL)序列。在某些实施例中，该重组抗体是嵌合的或人源化的。在某些实施例中，该重组抗体是IgG抗体。在某些实施例中，该重组抗体包括Fab、F(ab)2、单结构域抗体、单链可变片段(scFv)或纳米抗体。在某些实施例中，本文描述了包含该重组抗体和药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂的药物组合物。在某些实施例中，该药物组合物被配制用于静脉内施用。在某些实施例中，该重组抗体或该药物组合物用于在治疗癌症中使用。在某些实施例中，该癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌、***癌或肺癌。还描述了治疗个体的癌症的方法，其包括将有效量的该重组抗体或该药物组合物施用至被诊断患有或怀疑患有癌症的个体。在某些实施例中，该癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌、***癌或肺癌。还考虑了编码该重组抗体的核酸，和/或包含该核酸的细胞。在某些实施例中，该细胞是真核细胞。在某些实施例中，该细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。还考虑了制备癌症治疗剂的方法，其包括在培养基中在足以将该重组抗体分泌到该培养基中的条件下孵育该细胞。在某些实施例中，该方法进一步包括使该培养基经受至少一个纯化步骤。还考虑了制备癌症治疗剂的方法，其包括将该重组抗体与药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂混合。
附图说明
图1描绘了15种人源化NB0880变体的单点结合筛选以及NB0919、NB0920、NB0937和NB0938的选择以供进一步研究。
图2描绘了嵌合mAb B7及其人源化变体与重组人LIF的结合。
图3描绘了嵌合mAb B7及其人源化变体在重组人LIF：LIFR结合测定中的阻断活性。
图4描绘了嵌合mAb B7及其人源化变体在基于细胞的功能测定中对pSTAT3信号传导的抑制。
具体实施方式
在以下描述中，阐述了某些具体细节以便提供对各种实施例的透彻理解。然而，本领域技术人员将理解，所提供的实施例可以在没有这些细节的情况下实践。除非上下文另外要求，否则在整个说明书和随后的权利要求中，词语“包含(comprise)”及其变体如“包含(comprises)”和“包含(comprising)”应以开放、包含性的含义解释，即“包括但不限于”。除非上下文另外明确规定，否则如在本说明书和所附权利要求中所用的，单数形式“一种/一个(a)”、“一种/一个(an)”和“该(the)”包括复数指示物。还应当注意，除非内容另外明确规定，否则术语“或”通常以其包括“和/或”的含义使用。进一步地，本文提供的标题仅是为了方便，并且不解释所要求保护的实施例的范围或含义。
如本文所用，术语“约”是指在所述量附近10％或更少的量。
如本文所用，术语“个体”、“患者”或“受试者”是指被诊断患有、怀疑患有或有风险患上所描述的组合物和方法可用于治疗的至少一种疾病的个体。在某些实施例中，个体是哺乳动物。在某些实施例中，哺乳动物是小鼠、大鼠、兔、狗、猫、马、牛、绵羊、猪、山羊、美洲驼、羊驼或牦牛。在某些实施例中，个体是人。
所提供的抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体和多反应性抗体)和抗体片段。抗体包括抗体缀合物和包含抗体的分子(如嵌合分子)。因此，抗体包括但不限于全长和天然抗体，以及保留其结合特异性的其片段和部分，如其任何特异性结合部分，包括具有任何数量的免疫球蛋白类别和/或同种型(例如，IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA、IgD、IgE和IgM)的那些；及其生物学相关(抗原结合)片段或特异性结合部分，包括但不限于Fab、F(ab′)2、Fv和scFv(单链或相关实体)。单克隆抗体通常是基本上同质抗体的组合物内的一种；因此，除了可能以少量存在的可能天然存在的突变之外，单克隆抗体组合物内包含的任何单独抗体都是相同的。多克隆抗体是包括通常针对两种或更多种不同决定簇(表位)的变化序列的不同抗体的制剂。单克隆抗体可以包含人IgG1恒定区。单克隆抗体可以包含人IgG4恒定区。
本文的术语“抗体”是以最广泛的含义使用，并且包括多克隆和单克隆抗体，包括完整抗体及其功能性(抗原结合)抗体片段，包括片段抗原结合(Fab)片段、F(ab′)2片段、Fab′片段、Fv片段、重组IgG(rIgG)片段、单链抗体片段(包括单链可变片段(sFv或scFv))和单结构域抗体(例如，sdAb、sdFv、纳米抗体)片段。该术语涵盖免疫球蛋白的基因工程化和/或以其他方式修饰的形式，如胞内抗体、肽抗体、嵌合抗体、全人抗体、人源化抗体和异源缀合抗体、多特异性(例如，双特异性)抗体、双抗体、三抗体和四抗体、串联二scFv、串联三scFv。除非另外说明，否则术语“抗体”应当理解为涵盖其功能性抗体片段。该术语还涵盖完整或全长抗体，包括任何类别或亚类(包括IgG及其亚类、IgM、IgE、IgA和IgD)的抗体。抗体可以包含人IgG1恒定区。抗体可以包含人IgG4恒定区。
术语“互补决定区”和“CDR”(其与“高变区”或“HVR”同义)在本领域中已知是指抗体可变区内的氨基酸的非连续序列，其赋予抗原特异性和/或结合亲和力。通常，在每个重链可变区中有三个CDR(CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3)，并且在每个轻链可变区中有三个CDR(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3)。“框架区”和“FR”在本领域中已知是指重链和轻链的可变区的非CDR部分。通常，在每个全长重链可变区中有四个FR(FR-H1、FR-H2、FR-H3和FR-H4)，并且在每个全长轻链可变区中有四个FR(FR-L1、FR-L2、FR-L3和FR-L4)。给定CDR或FR的精确氨基酸序列边界可以使用许多熟知方案中的任一种容易地确定，这些方案包括以下文献所述的那些：Kabat等人(1991)，“Sequences of Proteins of Immunological Interest[免疫学感兴趣的蛋白质的序列]，”第5版Public Health Service[公共卫生服务部]，NationalInstitutes of Health[国立卫生研究院]，马里兰州贝塞斯达(“Kabat”编号方案)；Al-Lazikani等人，(1997)JMB 273,927-948(“Chothia”编号方案)；MacCallum等人，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]262∶732-745(1996)，“Antibody-antigen interactions：Contact analysis and binding site topography[抗体-抗原相互作用：接触分析和结合位点拓扑]，”J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]262,732-745.”(“Contact”编号方案)；Lefranc MP等人，“IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptorvariable domains and Ig superfamily V-like domains[免疫球蛋白和T细胞受体可变结构域和Ig超家族V样结构域的IMGT唯一编号]，”Dev Comp Immunol[发育与比较免疫学]，2003年1月；27(1)：55-77(“IMGT”编号方案)；Honegger A和Plückthun A，“Yet anothernumbering scheme for immunoglobulin variable domains：an automatic modelingand analysis tool[免疫球蛋白可变结构域的又另一种编号方案：一种自动建模和分析工具]，”J Mol Biol[分子生物学杂志]，2001年6月8日；309(3)：657-70(“Aho”编号方案)；以及Whitelegg NR和Rees AR，“WAM：an improved algorithm for modelling antibodieson the WEB[WAM：一种用于在WEB上建模抗体的改进算法]，”Protein Eng.[蛋白质工程]2000年12月；13(12)：819-24(“AbM”编号方案)。
给定CDR或FR的边界可能根据用于鉴定的方案而变化。例如，Kabat方案是基于结构比对，而Chothia方案是基于结构信息。Kabat和Chothia方案的编号都是基于最常见的抗体区序列长度，其中通过***字母(例如，“30a”)提供***，并且在一些抗体中出现缺失。这两种方案将某些***和缺失(“***缺失(indel)”)放置在不同的位置，从而产生不同的编号。Contact方案是基于对复杂晶体结构的分析，并且在许多方面与Chothia编号方案类似。
术语“可变区”或“可变结构域”是指抗体重链或轻链的参与抗体与抗原的结合的结构域。天然抗体的重链和轻链的可变结构域(分别为VH和VL)通常具有类似的结构，其中每个结构域包含四个保守的框架区(FR)和三个CDR(参见例如，Kindt等人Kuby Immunology[库比免疫学]，第6版，W.H.Freeman and Co.[W.H.弗里曼公司]，第91页(2007))。单个VH或VL结构域可以足以赋予抗原结合特异性。此外，可以使用来自结合特定抗原的抗体的VH或VL结构域分离结合该抗原的抗体，以分别筛选互补的VL或VH结构域的文库(参见例如，Portolano等人，J.Immunol.[免疫学杂志]150：880-887(1993)；Clarkson等人，Nature[自然]352：624-628(1991))。
所提供的抗体包括抗体片段。“抗体片段”是指不同于完整抗体的分子，其包含完整抗体的结合完整抗体所结合的抗原的部分。抗体片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab′、Fab′-SH、F(ab′)2；双抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如，scFv或sFv)；以及从抗体片段形成的多特异性抗体。在特定实施例中，抗体是包含可变重链区和/或可变轻链区的单链抗体片段，如scFv。
抗体片段可以通过各种技术制备，这些技术包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化以及通过重组宿主细胞产生。在一些实施例中，抗体是重组产生的片段，如包含不天然存在的排列的片段(如具有通过合成接头(例如，多肽接头)连接的两个或更多个抗体区或链的那些)，和/或不通过酶消化天然存在的完整抗体产生的那些。在一些方面，抗体片段是scFv。
“人源化”抗体是这样的抗体，其中全部或基本上全部CDR氨基酸残基来源于非人CDR，并且全部或基本上全部FR氨基酸残基来源于人FR。人源化抗体任选地可以包括来源于人抗体的抗体恒定区的至少一部分。非人抗体的“人源化形式”是指非人抗体的变体，其经历人源化以通常降低对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。在一些实施例中，人源化抗体中的一些FR残基被来自非人抗体(例如，CDR残基所来源的抗体)的相应残基取代，例如以恢复或改善抗体特异性或亲和力。
所提供的抗体包括人抗体。“人抗体”是具有与由人或人细胞或者非人来源产生的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列的抗体，该非人来源利用人抗体库或其他人抗体编码序列(包括人抗体文库)。该术语不包括包含非人抗原结合区的非人抗体的人源化形式，如其中全部或基本上全部CDR是非人CDR的那些。
人抗体可以通过将免疫原施用至转基因动物来制备，该转基因动物已经被修饰以响应于抗原激发而产生完整人抗体或具有人可变区的完整抗体。此类动物通常含有全部或部分的人免疫球蛋白基因座，其替代内源免疫球蛋白基因座，或者其在染色体外存在或随机整合到动物的染色体中。在此类转基因动物中，通常已经使内源免疫球蛋白基因座失活。人抗体还可以来源于人抗体文库，包括噬菌体展示和无细胞文库，其含有来源于人库的抗体编码序列。
术语“多肽”和“蛋白质”可互换地用于指代氨基酸残基的聚合物，并且不限于最小长度。多肽(包括所提供的抗体和抗体链以及其他肽(例如，接头和结合肽))可以包括氨基酸残基，包括天然和/或非天然氨基酸残基。这些术语还包括多肽的表达后修饰，例如糖基化、唾液酸化、乙酰化、磷酸化等。在一些方面，多肽可以含有关于原生或天然序列的修饰，只要蛋白质保持所需活性即可。这些修饰可能是故意的(如通过定点诱变)，或者可能是偶然的(如通过产生蛋白质的宿主的突变或由于PCR扩增引起的错误)。
关于参考多肽序列的序列同一性百分比(％)是在用以实现最大序列同一性百分比而比对序列和引入缺口(如果需要)并且不将任何保守取代视为序列同一性的一部分后，候选序列中与参考多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。用于确定氨基酸序列同一性百分比的目的的比对可以以各种已知方式来实现，例如使用可公开获得的计算机软件，如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。能够确定用于比对序列的适当参数，包括在所比较序列的全长上实现最大比对所需的算法。然而，出于本文的目的，使用序列比较计算机程序ALIGN-2产生氨基酸序列同一性％值。ALIGN-2序列比较计算机程序由基因泰克公司(Genentech，Inc.)编写，并且源代码已经以用户文档提交在美国版权局(U.S.Copyright Office)，华盛顿特区，20559中，其中它在美国版权登记号TXU510087下进行了注册。ALIGN-2程序可从加利福尼亚州南旧金山的基因泰克公司公开获得，或者可以从源代码编译。应当编译ALIGN-2程序以在UNIX操作***(包括数字UNIX V4.0D)上使用。所有序列比较参数都由ALIGN-2程序设置，并且不改变。
在采用ALIGN-2进行氨基酸序列比较的情况下，给定氨基酸序列A与(to、with或against)给定氨基酸序列B的氨基酸序列同一性％(其可替代地可以用短语表示为与(to、with或against)给定氨基酸序列B具有或包含一定氨基酸序列同一性％的给定氨基酸序列A)如下计算：100乘以分数X/Y，其中X是通过序列比对程序ALIGN-2在该程序的A和B的比对中作为相同匹配得分的氨基酸残基数，并且其中Y是B中氨基酸残基的总数。将理解的是，在氨基酸序列A的长度不等于氨基酸序列B的长度的情况下，A与B的氨基酸序列同一性％将不等于B与A的氨基酸序列同一性％。除非另外明确说明，否则本文所用的全部氨基酸序列同一性％值都如紧接上一段中所述那样使用ALIGN-2计算机程序获得。
在一些实施例中，考虑了本文提供的抗体的氨基酸序列变体。变体通常与本文明确披露的多肽相差一个或多个取代、缺失、添加和/或***。此类变体可以是天然存在的或者可以是合成产生的，例如通过修饰本发明的以上多肽序列中的一个或多个并且评价如本文所述的多肽的一种或多种生物活性，和/或使用许多已知技术中的任一种。例如，可能需要改善抗体的结合亲和力和/或其他生物特性。可以通过向编码抗体的核苷酸序列中引入适当的修饰或通过肽合成来制备抗体的氨基酸序列变体。此类修饰包括例如抗体的氨基酸序列内的残基的缺失和/或***和/或取代。可以进行缺失、***和取代的任何组合以获得最终的构建体，条件是最终的构建体具有所需特征(例如，抗原结合)。
在一些实施例中，提供了具有一个或多个氨基酸取代的抗体变体。用于通过取代进行诱变的目的位点包括CDR和FR。可以将氨基酸取代引入目的抗体中，并且筛选产物的所需活性，例如保留/改善的抗原结合、降低的免疫原性或改善的ADCC或CDC。
在一些实施例中，取代、***或缺失可以发生在一个或多个CDR内，其中取代、***或缺失基本上不降低抗体与抗原的结合。例如，可以在CDR中进行基本上不降低结合亲和力的保守取代。此类改变可以在CDR“热点”之外。在变体VH和VL，序列的一些实施例中，每个CDR是未改变的。
可以在CDR中进行改变(例如，取代)，例如以改善抗体亲和力。此类改变可以在体细胞成熟期间以较高的突变率在CDR编码密码子中进行(参见例如，Chowdhury，MethodsMol.Biol.[分子生物学方法]207：179-196(2008))，并且可以测试所得变体的结合亲和力。亲和力成熟(例如，使用易错PCR、链改组、CDR的随机化或寡核苷酸定向诱变)可以用于改善抗体亲和力(参见例如，Hoogenboom等人于Methods in Molecular Biology[分子生物学方法]178：1-37(2001))。可以例如使用丙氨酸扫描诱变或建模来特异性地鉴定参与抗原结合的CDR残基(参见例如，Cunningham和Wells Science[科学]，244：1081-1085(1989))。特别地，通常靶向CDR-H3和CDR-L3。可替代地，或另外，抗原-抗体复合物的晶体结构用于鉴定抗体与抗原之间的接触点。可以靶向或消除此类接触残基和邻近残基作为取代候选物。可以筛选变体以确定它们是否含有所需特性。
氨基酸序列***和缺失包括长度范围从一个残基到含有一百个或更多个残基的多肽的氨基和/或羧基末端融合、以及单个或多个氨基酸残基的序列内***和缺失。末端***的实例包括具有N-末端甲硫氨酰基残基的抗体。抗体分子的其他***变体包括将抗体的N-末端或C-末端与酶(例如，用于ADEPT)或增加抗体的血清半衰期的多肽融合。抗体分子的序列内***变体的实例包括在轻链中***3个氨基酸。末端缺失的实例包括在轻链末端具有7个或更少氨基酸缺失的抗体。
在一些实施例中，改变抗体以增加或减少其糖基化(例如，通过改变氨基酸序列，使得产生或去除一个或多个糖基化位点)。可以改变附接至抗体Fc区的碳水化合物。来自哺乳动物细胞的天然抗体通常包含支链二天线寡糖，其通过N-键联附接至Fc区CH2结构域的Asn297(参见例如，Wright等人TIBTECH 15：26-32(1997))。寡糖可以是各种碳水化合物，例如甘露糖、N-乙酰基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖、唾液酸、附接至二天线寡糖结构的茎中的GlcNAc的岩藻糖。例如，可以对抗体中的寡糖进行修饰，以产生具有某些改善的特性的抗体变体。抗体糖基化变体可以具有改善的ADCC和/或CDC功能。在一些实施例中，提供了抗体变体，其具有缺乏(直接或间接)附接至Fc区的岩藻糖的碳水化合物结构。例如，这种抗体中岩藻糖的量可以为从1％至80％、从1％至65％、从5％至65％或从20％至40％。通过以下方式来确定岩藻糖的量：相对于附接至Asn297的所有糖结构的总和，计算在Asn297处糖链内的岩藻糖的平均量(参见例如，WO 08/077546)。Asn297是指位于Fc区中约位置297处的天冬酰胺残基(Fc区残基的EU编号；参见例如，Edelman等人Proc Natl Acad Sci U S A.[美国国家科学院院刊]1969年5月；63(1)：78-85)。然而，由于抗体中的微小序列变异，Asn297也可以位于位置297上游或下游约±3个氨基酸，即在位置294与300之间。此类岩藻糖基化变体可以具有改善的ADCC功能(参见例如，Okazaki等人J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]336：1239-1249(2004)；以及Yamane-Ohnuki等人Biotech.Bioeng.[生物技术与生物工程]87：614(2004))。细胞系(例如，敲除细胞系)及其使用方法可以用于产生去岩藻糖基化抗体，例如缺乏蛋白质岩藻糖基化的Lec13 CHO细胞和α-1，6-岩藻糖基转移酶基因(FUT8)敲除CHO细胞(参见例如，Ripka等人Arch.Biochem.Biophys.[生物化学与生物物理学集刊]249：533-545(1986)；Yamane-Ohnuki等人Biotech.Bioeng.[生物技术与生物工程]87：614(2004)；Kanda，Y.等人，Biotechnol.Bioeng.[生物技术与生物工程]，94(4)：680-688(2006))。还包括其他抗体糖基化变体(参见例如，美国专利号6,602,684)。
在一些实施例中，本文提供的抗体对抗体靶标具有约1μM、100nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、5nM、2nM、1nM、0.5nM、0.1nM的解离常数(KD)(例如，亲和力)。在某些实施例中，亲和力在约0.1nM至约100nM、从约0.1nM至约50nM、从约0.1nM至约25nM、从约0.1nM至约10nM、从约0.1nM至约5nM、从约0.5nM至约5nM、从约0.5nM至约2nM或从约0.5nM至约1nM之间。抗体靶标可以是LIF。可以通过任何合适的测定来测量KD。在某些实施例中，可以使用表面等离子体共振测定(例如，使用
Figure BDA0003672309720000201
或
Figure BDA0003672309720000202
)来测量KD。
在一些实施例中，可以将一个或多个氨基酸修饰引入本文提供的抗体的Fc区中，从而产生Fc区变体。本文的Fc区是免疫球蛋白重链的含有恒定区的至少一部分的C-末端区。Fc区包括天然序列Fc区和变体Fc区。Fc区变体可以包含在一个或多个氨基酸位置处含有氨基酸修饰(例如，取代)的人Fc区序列(例如，人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc区)。
在一些实施例中，本披露的抗体是具有一些但不是所有效应子功能的变体，这使其成为以下应用的理想候选物，在这些应用中抗体体内半衰期是重要的，但某些效应子功能(如补体和ADCC)是不必要的或有害的。可以进行体外和/或体内细胞毒性测定以确认CDC和/或ADCC活性的降低/消耗。例如，可以进行Fc受体(FcR)结合测定以确保抗体缺乏FcγR结合(因此可能缺乏ADCC活性)，但是保留FcRn结合能力。用于评估目的分子的ADCC活性的体外测定的非限制性实例描述于美国专利号5,500,362和5,821,337中。可替代地，可以采用非放射性测定方法(例如，ACTITM和CytoTox
Figure BDA0003672309720000211
非放射性细胞毒性测定)。用于此类测定的有用效应细胞包括外周血单个核细胞(PBMC)、单核细胞、巨噬细胞和自然杀伤(NK)细胞。
抗体可以具有增加的半衰期和改善的与新生儿Fc受体(FcRn)的结合(参见例如，US 2005/0014934)。此类抗体可以包含在其中具有改善Fc区与FcRn的结合的一个或多个取代的Fc区，并且包括在以下Fc区残基中的一个或多个处具有取代的那些：根据EU编号***的238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434(参见例如，美国专利号7,371,826)。还考虑了Fc区变体的其他实例(参见例如，Duncan和Winter，Nature[自然]322：738-40(1988)；美国专利号5,648,260和5,624,821；以及WO 94/29351)。
在一些实施例中，可能需要产生半胱氨酸工程化的抗体，例如“thioMAb”，其中抗体的一个或多个残基被半胱氨酸残基取代。在一些实施例中，被取代的残基存在于抗体的可及位点处。反应性硫醇基团可以定位于用于与其他部分(如药物部分或接头药物部分)缀合以产生免疫缀合物的位点处。在一些实施例中，可以用半胱氨酸取代以下残基中的任何一个或多个：轻链的V205(Kabat编号)；重链的A118(EU编号)；以及重链Fc区的S400(EU编号)。
在一些实施例中，本文提供的抗体可以进一步被修饰以含有已知且可用的另外的非蛋白质部分。适合于衍生化抗体的部分包括但不限于水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性实例包括但不限于聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇的共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1，3-二氧戊环、聚-1，3，6-三噁烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或无规共聚物)、和葡聚糖或聚(n-乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、聚环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙基化多元醇(例如，甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛由于其在水中的稳定性而可以在制造中具有优势。聚合物可以具有任何分子量，并且可以是有支链的或无支链的。附接至抗体的聚合物的数量可以变化，并且如果附接两种或更多种聚合物，则它们可以是相同或不同的分子。
本文所述的抗体可以由核酸编码。核酸是一种类型的包含两个或更多个核苷酸碱基的多核苷酸。在某些实施例中，核酸是可以用于将多肽编码多核苷酸转移到细胞中的载体的组分。如本文所用，术语“载体”是指能够转运与已经它连接的另一个核酸的核酸分子。一种类型的载体是基因组整合载体或“整合载体”，其可以被整合到宿主细胞的染色体DNA中。另一种类型的载体是“附加型”载体，例如能够进行染色体外复制的核酸。能够指导它们可操作地连接的基因的表达的载体在本文中称为“表达载体”。合适的载体包括质粒、细菌人工染色体、酵母人工染色体、病毒载体等。在表达载体中，用于在控制转录中使用的调节元件(如启动子、增强子、多腺苷酸化信号)可以来源于哺乳动物、微生物、病毒或昆虫基因。可以另外掺入在宿主中复制的能力(通常由复制起点赋予)以及有利于转化体识别的选择基因。可以采用来源于病毒(如慢病毒、逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒等)的载体。可以将质粒载体线性化以整合到染色***置中。载体可以包含将位点特异性整合指导到基因组中的限定位置或一组受限制位点的序列(例如，AttP-AttB重组)。另外，载体可以包含来源于可转座元件的序列。
编码本文所述的抗体的核酸可以用于感染、转染、转化合适的细胞或以其他方式使合适的细胞是核酸转基因的，从而使得能够产生用于商业或治疗用途的抗体。用于从大规模细胞培养中产生抗体的标准细胞系和方法是本领域已知的。参见例如，Li等人，“Cellculture processes for monoclonal antibody production[用于产生单克隆抗体的细胞培养过程].”Mabs.2010年9月-10月；2(5)：466-477。在某些实施例中，细胞是真核细胞。在某些实施例中，真核细胞是哺乳动物细胞。在某些实施例中，哺乳动物细胞是可用于产生抗体的细胞系，是中国仓鼠卵巢细胞(CHO)细胞、NS0鼠骨髓瘤细胞或PER.
Figure BDA0003672309720000231
细胞。在某些实施例中，将编码抗体的核酸整合到可用于产生抗体的细胞的基因组基因座中。在某些实施例中，本文描述了制备抗体的方法，其包括将包含编码抗体的核酸的细胞在足以允许产生和分泌所述抗体的条件下在体外培养。
在某些实施例中，本文描述了主细胞库，其包含：(a)哺乳动物细胞系，该哺乳动物细胞系包含整合在基因组位置处的编码本文所述抗体的核酸；以及(b)冷冻保护剂。在某些实施例中，冷冻保护剂包括甘油。在某些实施例中，主细胞库包含：(a)CHO细胞系，其包含整合在基因组位置处的编码抗体的核酸，该抗体具有(i)由SEQ ID NO：1、15或26中任一个所示的重链氨基酸序列；和(ii)由SEQ ID NO：8、20、23或31中任一个所示的轻链氨基酸序列；以及(b)冷冻保护剂。在某些实施例中，冷冻保护剂包括甘油。在某些实施例中，将主细胞库包含在能够承受液氮冷冻的合适的小瓶中。
LIF结合抗体
本文所述的LIF抗体是已经人源化的单克隆兔抗LIF抗体。在一个方面，本文描述了特异性结合白血病抑制因子(LIF)的重组抗体，其包含：(a)含有SEQ ID NO：33(TDYW)所示的氨基酸序列的重链互补决定区1(VH-CDR1)；(b)含有SEQ ID NO：4(IYVGTSGDT)所示的氨基酸序列的重链互补决定区2(VH-CDR2)；(c)含有SEQ ID NO：6(ADNPYDYFNL)或7(AGADNPYDYFNLW)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区3(VH-CDR3)；(d)含有SEQID NO：9(ETISGY)所示的氨基酸序列的轻链互补决定区1(VL-CDR1)；(e)含有SEQ ID NO：11(RAS)所示的氨基酸序列的轻链互补决定区2(VL-CDR2)；以及(f)含有SEQ ID NO：13(QQGYSYS)或14(QQGYSYSDTDNV)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区3(VL-CDR3)，其中重组抗体与LIF特异性结合。
克隆880
在另一个方面，本文描述了特异性结合白血病抑制因子(LIF)的重组抗体，其包含：(a)含有SEQ ID NO：2(TDYWIC)、3(GFSFSTDYWIC)或33(GFSFSTDY)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区1(VH-CDR1)；(b)含有SEQ ID NO：4(IYVGTSGDT)或5(CIYVGTSGDTYYATWAKG)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区2(VH-CDR2)；(c)含有SEQ ID NO：6(ADNPYDYFNL)或7(AGADNPYDYFNLW)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区3(VH-CDR3)；(d)含有SEQ ID NO：9(ETISGY)或10(QASETISGYLS)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区1(VL-CDR1)；(e)含有SEQ ID NO：11(RAS)或12(RASTLAS)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区2(VL-CDR2)；以及(f)含有SEQ ID NO：13(QQGYSYS)或14(QQGYSYSDTDNV)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区3(VL-CDR3)，其中重组抗体与LIF特异性结合。在某些实施例中，重组抗体包含：(a)具有与SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区(VH)序列；以及(b)具有与SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区(VL)序列。
克隆919
在另一个方面，本文描述了特异性结合白血病抑制因子(LIF)的重组抗体，其包含：(a)含有SEQ ID NO：16(TDYWWS)、17(GFSFSTDYWW)或18(GFSFSTDYWWS)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区1(VH-CDR1)；(b)含有SEQ ID NO：4(IYVGTSGDT)或19(YIYVGTSGDTYYNPSLKS)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区2(VH-CDR2)；(c)含有SEQ ID NO：6(ADNPYDYFNL)或7(AGADNPYDYFNLW)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区3(VH-CDR3)；(d)含有SEQ ID NO∶9(ETISGY)或21(RASETISGYLN)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区1(VL-CDR1)；(e)含有SEQ ID NO：11(RAS)或22(RASSLQS)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区2(VL-CDR2)；以及(f)含有SEQ ID NO：13(QQGYSYS)或14(QQGYSYSDTDNV)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区3(VL-CDR3)，其中重组抗体与LIF特异性结合。在某些实施例中，特异性结合白血病抑制因子(LIF)的重组抗体包含：(a)具有与SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区(VH)序列；以及(b)具有与SEQ ID NO：20所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区(VL)序列。
克隆920
在另一个方面，本文描述了特异性结合白血病抑制因子(LIF)的重组抗体，其包含：(a)含有SEQ ID NO：16(TDYWWS)、17(GFSFSTDYWW)或18(GFSFSTDYWWS)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区1(VH-CDR1)；(b)含有SEQ ID NO：4(IYVGTSGDT)或19(YIYVGTSGDTYYNPSLKS)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区2(VH-CDR2)；(c)含有SEQ ID NO：6(ADNPYDYFNL)或7(AGADNPYDYFNLW)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区3(VH-CDR3)；(d)含有SEQ ID NO：9(ETISGY)或24(RASETISGYLA)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区1(VL-CDR1)；(e)含有SEQ ID NO：11(RAS)或25(RASTLQS)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区2(VL-CDR2)；以及(f)含有SEQ ID NO∶13(QQGYSYS)或14(QQGYSYSDTDNV)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区3(VL-CDR3)，其中重组抗体与LIF特异性结合。在某些实施例中，特异性结合白血病抑制因子(LIF)的重组抗体包含：(a)具有与SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区(VH)序列；以及(b)具有与SEQ ID NO：23所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区(VL)序列。
克隆937
在另一个方面，本文描述了重组抗体，其包含：(a)含有SEQ ID NO：27(TDYWMS)、28(GFSFSTDYWM)或29(GFSFSTDYWMS)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区1(VH-CDR1)；(b)含有SEQ ID NO：4(IYVGTSGDT)或30(SIYVGTSGDTYYADSVKG)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区2(VH-CDR2)；(c)含有SEQ ID NO：6(ADNPYDYFNL)或7(AGADNPYDYFNLW)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区3(VH-CDR3)；(d)含有SEQID NO：9(ETISGY)或24(RASETISGYLA)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区1(VL-CDR1)；(e)含有SEQ ID NO：11(RAS)或32(RASSLES)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区2(VL-CDR2)；以及(5)含有SEQ ID NO：13(QQGYSYS)或14(QQGYSYSDTDNV)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区3(VL-CDR3)，其中重组抗体与LIF特异性结合。特异性结合白血病抑制因子(LIF)的重组抗体包含(a)具有与SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区(VH)序列；以及(b)具有与SEQ ID NO：31所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区(VL)序列。
克隆938
在另一个方面，本文描述了重组抗体，其包含：(a)含有SEQ ID NO：27(TDYWMS)、28(GFSFSTDYWM)或29(GFSFSTDYWMS)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区1(VH-CDR1)；(b)含有SEQ ID NO：4(IYVGTSGDT)或30(SIYVGTSGDTYYADSVKG)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区2(VH-CDR2)；(c)含有SEQ ID NO：6(ADNPYDYFNL)或7(AGADNPYDYFNLW)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区3(VH-CDR3)；(d)含有SEQID NO：9(ETISGY)或21(RASETISGYLN)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区1(VL-CDR1)；(e)含有SEQ ID NO：11(RAS)或22(RASSLQS)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区2(VL-CDR2)；以及(f)含有SEQ ID NO：13(QQGYSYS)或14(QQGYSYSDTDNV)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区3(VL-CDR3)，其中重组抗体与LIF特异性结合。在某些实施例中，特异性结合白血病抑制因子(LIF)的重组抗体重组抗体包含：(a)具有与SEQ IDNO：26所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区(VH)序列；以及(b)具有与SEQ ID NO：20所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区(VL)序列。
治疗适应证
在某些实施例中，本文披露的抗体抑制细胞中的LIF信号传导，如通过抑制响应于LIF治疗的磷酸化STAT3所确定的。在某些实施例中，用于在血清饥饿条件下在U-251细胞中生物抑制抗体的IC50小于或等于约100、75、50、40、30、20、10、5或1纳摩尔。在某些实施例中，用于在血清饥饿条件下在U-251细胞中生物抑制抗体的IC50小于或等于约900、800、700、600、500、400、300、200或100纳摩尔。
在某些实施例中，本文披露的抗体可用于治疗表达LIF的肿瘤和癌症。在某些实施例中，已经将用本披露的抗体治疗的个体选择为患有LIF阳性肿瘤/癌症进行治疗。在某些实施例中，肿瘤呈LIF阳性或者产生升高水平的LIF。在某些实施例中，与参考值或一组病理学标准相比，确定LIF阳性。在某些实施例中，LIF阳性肿瘤表达肿瘤所来源的非转化细胞的2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或更多的LIF。在某些实施例中，肿瘤已经获得LIF的异位表达。LIF阳性肿瘤可以使用例如抗LIF抗体的免疫组织化学在组织学上确定；通过常用的分子生物学方法，诸如像通过实时PCR或RNA-seq进行mRNA定量；或者例如通过蛋白质印迹、流式细胞术、ELISA或同质蛋白质定量测定(例如，alphaLISA)进行蛋白质定量。在某些实施例中，抗体可以用于治疗被诊断患有癌症的患者。在某些实施例中，癌症包括一种或多种癌症干细胞，或者是一种或多种癌症干细胞。人LIF的多肽序列可见于NCBI登录号NP_002300.1。虽然此序列示出了亚型一，但将认识到，与NCBI登录号NP_002300.1所示的具有高序列同一性的某些天然存在的LIF变体也可以被本文所述的抗体识别。
在某些实施例中，本文披露的抗体可用于治疗表达LIF受体(CD118)的癌症中的肿瘤。LIF受体阳性肿瘤可以通过组织病理学或流式细胞术来确定，并且在某些实施例中，其包含以同种型对照的2倍、3倍、3倍、4倍、5倍、10倍或更多结合LIF受体抗体的细胞。在某些实施例中，肿瘤已经获得LIF受体的异位表达。在某个实施例中，癌症是癌症干细胞。在某个实施例中，可以使用抗LIF抗LIF抗体通过免疫组织化学来确定LIF阳性肿瘤或癌症。在某个实施例中，通过IHC分析确定LIF阳性肿瘤，其中LIF水平在肿瘤的前10％、20％、30％、40％或前50％中。
在某些实施例中，本文披露了可用于治疗癌症或肿瘤的抗体。在某些实施例中，癌症包括乳腺肿瘤、心脏肿瘤、肺部肿瘤、小肠肿瘤、结肠肿瘤、脾脏肿瘤、肾脏肿瘤、***、头部肿瘤、颈部肿瘤、卵巢肿瘤、***肿瘤、脑肿瘤、胰腺肿瘤、皮肤肿瘤、骨肿瘤、骨髓肿瘤、血液肿瘤、胸腺肿瘤、子宫肿瘤、睾丸肿瘤和肝脏肿瘤。在某些实施例中，可以用本发明的抗体治疗的肿瘤包括腺瘤、腺癌、血管肉瘤、星形细胞瘤、上皮癌、生殖细胞瘤、胶质母细胞瘤、神经胶质瘤、血管内皮瘤、血管肉瘤、血肿、肝母细胞瘤、白血病、淋巴瘤、髓母细胞瘤、黑色素瘤、神经母细胞瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肉瘤和/或畸胎瘤。在某些实施例中，肿瘤/癌症选自以下的组：肢端雀斑样黑色素瘤、光化性角化病、腺癌、腺样囊性癌、腺瘤、腺肉瘤、腺鳞癌、星形细胞肿瘤、***癌、基底细胞癌、支气管腺癌、毛细血管类癌、癌、癌肉瘤、胆管癌、软骨肉瘤、囊腺瘤、内胚窦瘤、子宫内膜增生、子宫内膜间质肉瘤、子宫内膜样腺癌、室管膜肉瘤、斯温肉瘤(Swing′s sarcoma)、局灶性结节性增生、胃泌素瘤(gastronoma)、生殖细胞系肿瘤、胶质母细胞瘤、胰高血糖素瘤、血管母细胞瘤、血管内皮瘤、血管瘤、肝腺瘤、肝腺瘤病、肝细胞癌、胰岛素瘤(insulinite)、上皮内瘤样病变、上皮内鳞状细胞瘤样病变、侵袭性鳞状细胞癌、大细胞癌、脂肪肉瘤、肺癌、成淋巴细胞性白血病、淋巴细胞性白血病、平滑肌肉瘤、黑色素瘤、恶性黑色素瘤、恶性间皮肿瘤、神经鞘瘤、髓母细胞瘤、髓上皮瘤、间皮瘤、粘液表皮样癌、髓性白血病、神经母细胞瘤、神经上皮腺癌、结节性黑色素瘤、骨肉瘤、卵巢癌、***状浆液性腺癌、垂体瘤、浆细胞瘤、假性肉瘤、***癌、肺母细胞瘤、肾细胞癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肉瘤、浆液性癌、鳞状细胞癌、小细胞癌、软组织癌、生长抑素分泌肿瘤、鳞癌、鳞状细胞癌、未分化癌、葡萄膜黑色素瘤、疣状癌、***/外阴癌、舒血管肠肽瘤(VIPpoma)和肾母细胞瘤(Wilm′s tumor)。在某些实施例中，待用本发明的一种或多种抗体治疗的肿瘤/癌症包括脑癌、头颈癌、结直肠癌、急性髓性白血病、前B细胞急性成淋巴细胞性白血病、膀胱癌、星形细胞瘤(优选II、III或IV级星形细胞瘤)、胶质母细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、小细胞癌和非小细胞癌(优选非小细胞肺癌)、肺腺癌、转移性黑色素瘤、非雄激素依赖性转移性***癌、雄激素依赖性转移性***癌、***腺癌和乳腺癌(优选乳腺导管癌和/或乳腺癌)。在某些实施例中，用本披露的抗体治疗的癌症包括胶质母细胞瘤。在某些实施例中，用本披露的一种或多种抗体治疗的癌症包括胰腺癌。在某些实施例中，用本披露的一种或多种抗体治疗的癌症包括卵巢癌。在某些实施例中，用本披露的一种或多种抗体治疗的癌症包括肺癌。在某些实施例中，用本披露的一种或多种抗体治疗的癌症包括***癌。在某些实施例中，用本披露的一种或多种抗体治疗的癌症包括结肠癌。在某些实施例中，所治疗的癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌、***癌或肺癌。在某个实施例中，癌症对于其他治疗是难治性的。在某个实施例中，所治疗的癌症是复发性的。在某个实施例中，癌症是复发性/难治性胶质母细胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌、***癌或肺癌。
治疗方法
在某些实施例中，抗体可以通过适合于施用含抗体的药物组合物的任何途径施用至有需要的受试者，该任何途径诸如像皮下、腹膜内、静脉内、肌内、瘤内或脑内等。在某些实施例中，静脉内施用抗体。
在某些实施例中，按合适的剂量时间表(例如，每周、每周两次、每月、每月两次、每两周一次、每三周一次或每月一次等)施用抗体。
在某些实施例中，每三周一次施用抗体。可以按任何治疗有效量施用抗体。在某些实施例中，治疗上可接受的量在约0.1mg/kg与约50mg/kg之间。在某些实施例中，治疗上可接受的量在约1mg/kg与约40mg/kg之间。在某些实施例中，治疗上可接受的量在约5mg/kg与约30mg/kg之间。
药学上可接受的赋形剂、载体和稀释剂
在某些实施例中，将本披露的抗LIF抗体包括在药物组合物中，该药物组合物包含一种或多种药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。在某些实施例中，将本披露的抗体悬浮于无菌溶液中来施用。在某些实施例中，溶液包含约0.9％NaCl。在某些实施例中，溶液包含约5％葡萄糖或右旋糖。在某些实施例中，溶液进一步包含以下中的一种或多种：缓冲剂，例如乙酸盐、柠檬酸盐、组氨酸、琥珀酸盐、磷酸盐、碳酸氢盐和羟甲基氨基甲烷(Tris)；表面活性剂，例如聚山梨醇酯80(Tween 80)、聚山梨醇酯20(Tween 20)和泊洛沙姆188；多元醇/二糖/多糖，例如葡萄糖、右旋糖、甘露糖、甘露醇、山梨醇、蔗糖、海藻糖和葡聚糖40；氨基酸，例如甘氨酸、组氨酸或精氨酸；抗氧化剂，例如抗坏血酸、甲硫氨酸；或螯合剂，例如EGTA或EGTA。在某些实施例中，将本披露的抗体冻干运输/储存并在施用前重构。在某些实施例中，冻干抗体配制品包含填充剂，如甘露醇、山梨醇、蔗糖、海藻糖和葡聚糖40。可以将冻干配制品包含在由玻璃构成的小瓶中。抗体在配制时(无论是否重构)可以在一定pH(通常小于7.0)下缓冲。在某些实施例中，pH可以在4.5与6.5、4.5与6.0、4.5与5.5、4.5与5.0或5.0与6.0之间。
在某些实施例中，本文描述了制备癌症治疗剂的方法，其包括将一种或多种药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂与本披露的抗体混合。在某些实施例中，本文描述了制备癌症治疗剂以供储存或运输的方法，其包括冻干本披露的一种或多种抗体。
实例
以下说明性实例代表本文所述的组合物和方法的实施例，并不意味着以任何方式进行限制。
实例1-LIF结合抗体的产生
为了鉴定阻断LIF：LIFR相互作用的抗体，我们开始在兔中进行免疫活动。在此活动中，发现单克隆抗体(mAb)克隆B7，其以高亲和力阻断人LIF：LIFR相互作用。下面的方法和结果描述了鉴定B7的筛选以及对mAb B7及其人源化变体的功能表征。
用重组人LIF免疫两只兔。在第三次加强后一周，收集血液，并且测试血清滴度以确认免疫反应。向滴度最高的兔给予最后一次加强，并且收集血液。使用来自从此免疫兔中分离的PBMC的扩增V区产生酵母展示文库，然后将文库针对荧光标记的重组人LIF进行FACS分选。使用已知抑制LIF：LIFR结合的商业抗体筛选96个克隆的结合(表1)和竞争(表2)。在此筛选中，鉴定出克隆B7，其阻断人LIF：LIFR，但是不与小鼠LIF交叉反应。
Figure BDA0003672309720000321
Figure BDA0003672309720000322
实例2-克隆B7的人源化形式的产生和测试
对克隆B7进行测序，并且鉴定其重链和轻链V区。轻链可变区在位置80中从半胱氨酸突变为脯氨酸，以避免在具有恒定区的完整抗体构建体中产生游离半胱氨酸。然后将所得V区嫁接到人IgG1重链恒定区和人κ恒定区以产生兔/人嵌合mAb，从而产生克隆NB0880。还通过CDR嫁接产生人源化变体，其中将兔mAb B7 V区与IMGT数据库进行blast比对，并且选择最接近的相关VH和VL人种系框架区作为用于CDR嫁接的模板。CDR是基于IMGT编号方案来鉴定的。总共产生15种人源化变体，并且通过ELISA测试其与LIF的结合(图1)。选择四种抗体(NB0919、NB0920、NB0937和NB0938)进行进一步测试，并且评估它们的结合和功能特性，并且将其总结于表3中。
结合EC50
将重组人LIF在4℃下在maxisorp板上包被过夜。第二天，将板在37℃下用酪蛋白封闭缓冲液封闭1小时。将每种抗体的滴定物添加到板中，并且允许在室温下结合1小时。将板用PBST洗涤4次，之后在室温下与HRP缀合的抗人Fc二抗一起孵育30分钟。然后将板再次用PBST洗涤4次，然后使用TMB底物和1M HCl进行显色。结合EC50曲线示于图2中，并且各自的值列于表3中。
亲和力测量
在Octet平台上使用生物膜层干涉法确定亲和力。使用抗人Fc生物传感器来加载嵌合B7和人源化变体，并且使重组人LIF的滴定物(200nM→0nM)缔合180秒，之后是300秒的解离步骤。亲和力测量值记录于表3中。
重组LIF：LIFR阻断测定
将重组人LIFR在4C下在maxisorp板上包被过夜。第二天，将板在37C下用酪蛋白封闭缓冲液封闭1h。在此阶段期间，将每种抗体的滴定物与生物素化的重组人LIF混合。在封闭后，将抗体/抗原预混物添加到板中，并且允许在室温下孵育1h。然后将板用PBST洗涤4次，并且在室温下添加HRP缀合的抗生物素蛋白二级试剂持续30min。将板再次用PBST洗涤4次，然后使用TMB底物和1M HCl进行显色。阻断IC50曲线示于图3中，并且各自的值列于表3中。
pSTAT3抑制测定
将U251细胞在组织培养物处理过的板上培养48小时，之后用与每种抗体的滴定物预混合的重组人LIF处理。在处理10分钟后，裂解细胞，并且将裂解物添加到测量总STAT3或pSTAT3的板中。在MSD平台上分析板，并且绘制pSTAT3/总STAT3的归一化比率以获得每种抗体的剂量反应曲线。阻断IC50曲线示于图4中，并且各自的值列于表3中。
Figure BDA0003672309720000341
虽然在本文中已经显示和描述了本发明的优选实施例，但对于本领域技术人员而言将明显的是，此类实施例仅通过举例的方式来提供。在不背离本发明的情况下，本领域技术人员现在将想到许多改变、变化和替换。应当理解本文所述的本发明的实施例的各种替代方案都可以用于实践本发明。
将本说明书中提及的所有出版物、专利申请、授权专利和其他文件都通过引用并入本文，如同具体且单独地指示将每个单独的出版物、专利申请、授权专利或其他文件通过引用以其整体并入一样。在通过引用并入的文本中包含的定义与本披露中的定义相抵触的程度上，将其排除。
本文披露的序列
Figure BDA0003672309720000351
Figure BDA0003672309720000361
Figure IDA0003672309770000011
Figure IDA0003672309770000021
Figure IDA0003672309770000031
Figure IDA0003672309770000041
Figure IDA0003672309770000051
Figure IDA0003672309770000061
Figure IDA0003672309770000071
Figure IDA0003672309770000081
Figure IDA0003672309770000091
Figure IDA0003672309770000101
Figure IDA0003672309770000111
Figure IDA0003672309770000121

Claims (30)

1.一种特异性结合白血病抑制因子(LIF)的重组抗体，其包含：
a)含有SEQ ID NO：2(TDYWIC)、3(GFSFSTDYWIC)或33(GFSFSTDY)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区1(VH-CDR1)；
b)含有SEQ ID NO：4(IYVGTSGDT)或5(CIYVGTSGDTYY ATWAKG)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区2(VH-CDR2)；
c)含有SEQ ID NO：6(ADNPYDYFNL)或7(AGADNPYDY FNLW)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区3(VH-CDR3)；
d)含有SEQ ID NO：9(ETISGY)或10(QASETISGYLS)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区1(VL-CDR1)；
e)含有SEQ ID NO∶11(RAS)或12(RASTLAS)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区2(VL-CDR2)；以及
f)含有SEQ ID NO：13(QQGYSYS)或14(QQGYSYSDTDN V)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区3(VL-CDR3)。
2.一种特异性结合白血病抑制因子(LIF)的重组抗体，其包含：
a)含有SEQ ID NO：16(TDYWWS)、17(GFSFSTDYWW)或18(GFSFSTDYWWS)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区1(VH-CDR1)；
b)含有SEQ ID NO：4(IYVGTSGDT)或19(YIYVGTSGDTY YNPSLKS)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区2(VH-CDR2)；
c)含有SEQ ID NO：6(ADNPYDYFNL)或7(AGADNPYDY FNLW)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区3(VH-CDR3)；
d)含有SEQ ID NO：9(ETISGY)或21(RASETISGYLN)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区1(VL-CDR1)；
e)含有SEQ ID NO：11(RAS)或22(RASSLQS)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区2(VL-CDR2)；以及
f)含有SEQ ID NO：13(QQGYSYS)或14(QQGYSYSDTDN V)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区3(VL-CDR3)。
3.一种特异性结合白血病抑制因子(LIF)的重组抗体，其包含：
a)含有SEQ ID NO：16(TDYWWS)、17(GFSFSTDYWW)或18(GFSFSTDYWWS)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区1(VH-CDR1)；
b)含有SEQ ID NO：4(IYVGTSGDT)或19(YIYVGTSGDTY YNPSLKS)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区2(VH-CDR2)；
c)含有SEQ ID NO：6(ADNPYDYFNL)或7(AGADNPYDY FNLW)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区3(VH-CDR3)；
d)含有SEQ ID NO：9(ETISGY)或24(RASETISGYLA)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区1(VL-CDR1)；
e)含有SEQ ID NO：11(RAS)或25(RASTLQS)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区2(VL-CDR2)；以及
f)含有SEQ ID NO：13(QQGYSYS)或14(QQGYSYSDTDN V)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区3(VL-CDR3)。
4.一种特异性结合白血病抑制因子(LIF)的重组抗体，其包含：
a)含有SEQ ID NO：27(TDYWMS)、28(GFSFSTDYWM)或29(GFSFSTDYWMS)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区1(VH-CDR1)；
b)含有SEQ ID NO：4(IYVGTSGDT)或30(SIYVGTSGDTY YADSVKG)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区2(VH-CDR2)；
c)含有SEQ ID NO：6(ADNPYDYFNL)或7(AGADNPYDY FNLW)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区3(VH-CDR3)；
d)含有SEQ ID NO：9(ETISGY)或24(RASETISGYLA)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区1(VL-CDR1)；
e)含有SEQ ID NO：11(RAS)或32(RASSLES)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区2(VL-CDR2)；以及
f)含有SEQ ID NO：13(QQGYSYS)或14(QQGYSYSDTDN V)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区3(VL-CDR3)。
5.一种特异性结合白血病抑制因子(LIF)的重组抗体，其包含：
a)含有SEQ ID NO：27(TDYWMS)、28(GFSFSTDYWM)或29(GFSFSTDYWMS)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区1(VH-CDR1)；
b)含有SEQ ID NO：4(IYVGTSGDT)或30(SIYVGTSGDTY YADSVKG)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区2(VH-CDR2)；
c)含有SEQ ID NO：6(ADNPYDYFNL)或7(AGADNPYDY FNLW)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区3(VH-CDR3)；
d)含有SEQ ID NO：9(ETISGY)或21(RASETISGYLN)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区1(VL-CDR1)；
e)含有SEQ ID NO：11(RAS)或22(RASSLQS)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区2(VL-CDR2)；以及
f)含有SEQ ID NO：13(QQGYSYS)或14(QQGYSYSDTDN V)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区3(VL-CDR3)。
6.一种特异性结合白血病抑制因子(LIF)的重组抗体，其包含：
a)含有SEQ ID NO：33(TDYW)所示的氨基酸序列的重链互补决定区1(VH-CDR1)；
b)含有SEQ ID NO：4(IYVGTSGDT)所示的氨基酸序列的重链互补决定区2(VH-CDR2)；
c)含有SEQ ID NO：6(ADNPYDYFNL)或7(AGADNPYDY FNLW)中任一个所示的氨基酸序列的重链互补决定区3(VH-CDR3)；
d)含有SEQ ID NO：9(ETISGY)所示的氨基酸序列的轻链互补决定区1(VL-CDR1)；
e)含有SEQ ID NO∶11(RAS)所示的氨基酸序列的轻链互补决定区2(VL-CDR2)；以及
f)含有SEQ ID NO：13(QQGYSYS)或14(QQGYSYSDTDN V)中任一个所示的氨基酸序列的轻链互补决定区3(VL-CDR3)。
7.如权利要求1至6中任一项所述的重组抗体，其中该重组抗体是嵌合的或人源化的。
8.如权利要求1至6中任一项所述的重组抗体，其中该重组抗体是IgG抗体。
9.如权利要求1至6中任一项所述的重组抗体，其中该重组抗体包括Fab、F(ab)2、单结构域抗体、单链可变片段(scFv)或纳米抗体。
10.一种特异性结合白血病抑制因子(LIF)的重组抗体，其包含：
a)具有与SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区(VH)序列；以及
b)具有与SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区(VL)序列。
11.一种特异性结合白血病抑制因子(LIF)的重组抗体，其包含：
a)具有与SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区(VH)序列；以及
b)具有与SEQ ID NO：20所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区(VL)序列。
12.一种特异性结合白血病抑制因子(LIF)的重组抗体，其包含：
a)具有与SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区(VH)序列；以及
b)具有与SEQ ID NO：23所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区(VL)序列。
13.一种特异性结合白血病抑制因子(LIF)的重组抗体，其包含：
a)具有与SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区(VH)序列；以及
b)具有与SEQ ID NO：31所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区(VL)序列。
14.一种特异性结合白血病抑制因子(LIF)的重组抗体，其包含：
a)具有与SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区(VH)序列；以及
b)具有与SEQ ID NO：20所示的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区(VL)序列。
15.如权利要求10至14中任一项所述的重组抗体，其中该重组抗体是嵌合的或人源化的。
16.如权利要求10至14中任一项所述的重组抗体，其中该重组抗体是IgG抗体。
17.如权利要求10至14中任一项所述的重组抗体，其中该重组抗体包括Fab、F(ab)2、单结构域抗体、单链可变片段(scFv)或纳米抗体。
18.一种药物组合物，其包含如权利要求1至17中任一项所述的重组抗体以及药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。
19.如权利要求18所述的药物组合物，其被配制用于静脉内施用。
20.如权利要求1至17中任一项所述的重组抗体或如权利要求18或19所述的药物组合物，用于在治疗癌症中使用。
21.如权利要求20所述的重组抗体，其中该癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌、***癌或肺癌。
22.一种治疗个体的癌症的方法，其包括将有效量的如权利要求1至17中任一项所述的重组抗体或如权利要求18或19所述的药物组合物施用至被诊断患有或怀疑患有癌症的个体。
23.如权利要求22所述的方法，其中该癌症包括胶质母细胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌、***癌或肺癌。
24.一种核酸，其编码如权利要求1至17中任一项所述的重组抗体。
25.一种细胞，其包含如权利要求24所述的核酸。
26.如权利要求25所述的细胞，其中该细胞是真核细胞。
27.如权利要求25所述的细胞，其中该细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。
28.一种制备癌症治疗剂的方法，其包括将如权利要求24至27中任一项所述的细胞在培养基中在足以将如权利要求1至17中任一项所述的重组抗体分泌到该培养基中的条件下孵育。
29.如权利要求28所述的方法，其进一步包括使该培养基经受至少一个纯化步骤。
30.一种制备癌症治疗剂的方法，其包括将如权利要求1至17中任一项所述的重组抗体与药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂混合。
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