CN114848703B - 具有治疗类风湿性关节炎作用的藏药组方、其制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于药物领域,具体涉及一种具有治疗类风湿性关节炎作用的藏药组方,制备方法及应用。具有治疗类风湿性关节炎作用的藏药组方,其特征在于,所述的组方由9‑15份的西藏猫乳、3‑10份的秦艽、3‑10份的小檗皮、3‑10份的诃子经混合、粉碎后加入水回流提取、干燥所得的。本发明所提供的复方药物,结合相关药理学实验研究结果以及动物实验的结果验证,确认了复方组合的合理性和有效性。本发明复方是四味药物的以特定配比的组合,结合了特定的提取工艺,保证了最终复方中的黄酮、生物碱类等活性成分的含量,使得其对RA的治疗作用明显优于复方中各单味药物,具有显著的协同增效作用。
Description
技术领域
本发明属于药物领域,具体涉及一种具有治疗类风湿性关节炎作用的藏药组方,制备方法及应用。
背景技术
类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以关节和关节组织非化脓性炎症为主要特征的自身免疫性疾病。作为以侵蚀性关节炎为主要临床表现的慢性进行性自身免疫疾病,其病程较长且易导致关节畸形和残疾,对患者日常生活和健康产生极大影响。
基于不同的治疗机制,现阶段RA药物治疗途径主要有以下几种:
1)糖皮质激素和非甾体抗炎药物:强的松、氢化可的松、布洛芬、美洛昔康等。该类药物可缓解炎症、疼痛症状,但不能控制病情的发展,且存在消化道损伤、代谢紊乱等不良反应;
2)抗风湿药:甲氨蝶呤、来氟米特等。该类药物可缓解病情发展,但易出现肝肾损伤和免疫抑制;
3)生物制剂:依那西普、英利西单抗、阿达木单抗、托珠单抗、托法替布等。该类药物可改善病情,但可能导致严重的感染或活化阴性结核,且价格昂贵。上述药物可有效缓解和控制RA病情,但存在胃肠功能紊乱、免疫抑制、骨质疏松等副作用或治疗成本高昂等问题,且作用靶点单一,难以全面切中病情。而现代临床治疗提倡联合用药,发挥多成分、多靶点、多途径作用的优势,以达到降低用药剂量、增强疗效和降低副作用的目的。因此,中药、藏药等传统药物在RA的治疗中日益受到重视与青睐,也有望从中找到更有效的药物与治疗方案。
在青藏地区,长期的高原风、寒、湿环境导致该地区RA患病率远高于内地,已给当地民众和社会带来沉重负担。在该地区防治RA过程中,藏医药依靠其特有的理论体系和长期的临床实践,发挥重要作用。藏医认为,RA属于“真布”病范畴,而“黄水病变”是“真布”病的病机。《四部医典》记载:“食物精华经肝化为血,血之浊物入胆化为汁,胆汁之精化为黄水”。藏医理论认为:饮食经胃消化后,其精华化生成血液,血液分精华与浊物,血之浊物化生成胆汁积于胆腑,胆汁之精华化生为黄水,散布于身体肌肤、骨胳与脏腑内外,尤其是肌肤间和机体的关节。在正常情况下,黄水可滋润、濡养身体,保持整个机体富有弹性,保障关节运动自如。然而,当人长期处于寒湿环境,或饮食不当(如:长期过食油脂)时,机体内环境平衡被破坏,致使胃阳衰竭,运化功能紊乱,精华不生,清浊不分,引起黄水在体内的偏盛、紊乱,进而侵袭肌肤、筋骨,引发关节病变。因此,黄水病变是诱发“真布病”即RA的重要致病机制,治疗黄水病变是藏医治疗RA的主要治法。
若是有一种疗效显著的藏药组方,用于缓解或解除病患的痛苦,必将克服上述的西药以及生物制剂的缺陷,避免对人体引起副作用。
发明内容
为了解决上述的技术问题,本发明提供了一种具有显著疗效的中药组方,还提供了上述中药组方的制备方法以及应用。
本发明所提供的具有治疗类风湿性关节炎作用的藏药组方,所述的组方由以下重量份数的原料制备而成:西藏猫乳9~15、秦艽3~10、小檗皮3~10、诃子3~10。
具体的,上述的组方由9~15份的西藏猫乳、3~10份的秦艽、3~10份的小檗皮、3~10份的诃子经混合、粉碎后加入水回流提取、干燥所得。
优选的,西藏猫乳12份、秦艽10份、小檗皮6.5份、诃子3份。
具有治疗类风湿性关节炎作用的藏药组方的制备方法,包括以下的步骤:
S1:按以下的重量份数比例称取原料:西藏猫乳9~15、秦艽3~10、小檗皮3~10、诃子3~10;
S2:将S1中的原料混合后粉碎,过20目筛,获得粉末原料;
S3:将S2中的粉末原料按料液比1:10~20的重量体积比加入水,回流提取1~3次,每次提取的时间为1~2小时,过滤,将滤液合并,浓缩,得浸膏;
S4:干燥S3中的浸膏,获得成品组方。
将S2中的粉末原料按料液比1:20的重量体积比加入水,回流提取2次,每次提取的时间为1.5小时,过滤,将滤液合并,浓缩,得浸膏。
具体的,S3中:将S2中的粉末原料按料液比1:20的重量体积比加入水,进行第一次回流提取,提取的时间为1.5小时,收集第一提取液;然后过滤,得第一滤液;在滤渣中加入水,进行第二次回流提取,收集第二提取液,过滤,得第二滤液和滤渣,将第一滤液和第二滤液合并,浓缩,得浸膏。
将上述具有治疗类风湿性关节炎作用的藏药组方应用于治疗类风湿性关节炎的药物中,也是本发明所要重点保护的内容。
本发明有益效果在于:
(1)本发明的复方组成比较简单,仅采用了4味药,即西藏猫乳、小檗皮、秦艽、诃子,与藏医常用复方“二十五味猫乳丸”比较,在使用较少药物的情况下,即可达到理想的治疗效果。
二十五味猫乳丸由西藏猫乳、诃子、毛诃子、余甘子、小檗皮、黄精、天冬、蒺藜、秦艽、乳香、决明子、黄葵籽、宽筋藤、荜茇、铁粉、猹驯膏、铁棒锤、麝香、藏菖蒲、广木香、水牛角、珍珠母、榼藤子、扁刺蔷薇、喜马拉雅紫茉莉组成,可用于风湿性和类风湿关节炎的治疗。
上述的复方虽然具有良好的临床效果,但组方过于复杂,使用不方便,也不利于药物质量的控制。此外,上述组方中药物铁棒锤为毒性药物,用量不慎,易导致较为严重的中毒后果;而铁粉为矿物药,易出现重金属超标的问题;猹驯膏中含有动物粪便,易出现微生物含量不合格的问题,而且患者在服用过程中需要作心理建设;麝香为贵重药材,成本高,加重了患者的经济负担。对于上述问题,能否找到更为简单、效果却依然优异、使用更为安全、易于质控的复方,成为对藏医药复杂复方进行二次开发的亟待解决的关键问题,本发明人通过大量的实验,验证了本发明中的配方能克服上述的技术问题,并且还能达到优异的治疗类风湿性关节炎的效果。
西藏猫乳,本发明人一直在进行相关的研究,比如本发明人团队发表过关于西藏猫乳治疗类风湿性关节炎的期刊论文、硕士论文;研究的结果表明,西藏猫乳对于类风湿性关节炎具有一定的治疗功效,但是仅通过这一味药,对于类风湿性关节炎尤其是多年的顽固性类风湿性关节炎患者,其作用效果还是很有限的。
秦艽,具有祛风湿、清湿热、止痹痛的功效,本发明人通过检索,除了上述的藏医药复方,并未见其与西藏猫乳配合使用,虽然两者具有一定的治疗类风湿性关节炎、祛风湿的功效,但是两者配合后是否还能产生协同增效,这是未知的;
小檗皮,清热解毒;主要是用于治疫疠、陈热病、黄水病;中皮熬膏后治眼病;
诃子,其作用是,涩肠止泻、敛肺止咳、降火利咽;从以上的分析可以看出,小檗皮与诃子并不具备治疗类风湿性关节炎和或祛风湿的效果;
本发明所提供的中药组方由西藏猫乳、小檗皮、秦艽、诃子组成,其中西藏猫乳为本方的“主药”,又名松生等,性凉、味微苦,能敛干黄水、凉血消肿。小檗皮、秦艽、诃子均为“仆药”,小檗皮可清热解毒,秦艽可清热消炎,且二者均可干黄水,故二者可辅助西藏猫乳,起到增强干黄水功效的作用;而诃子具有六味、八性、三化味和十七效,可促进黄水正常化生之功效之外,亦起到调和方剂诸药的作用,类似于甘草之于中药。上述诸药组方,具有干涸热性黄水、清热解毒作用,可用于“真布”病,特别是RA的治疗。对于该复方药物的最优配伍比例,也需要进一步确定,以保证对于RA的治疗作用。
(2)藏医药复方在使用过程中,与中药复方比较,还存在一个关键的、难以解决的技术问题,即:上述的复方中并未明确复方中药味数的配伍比例,这使得藏医药复方在使用中配伍比例和剂量往往难以掌握,而中药领域内所公知的,当某一味或者是几味药物用量不当时,对于某种疾病的治疗难以达到理想的效果。且复方的配伍比例不确定,也不利于藏医药复方的标准化和质量控制,同时还不利于藏医药的进一步研究与开发,制约了藏药产业水平的跨越式提升。本发明针对这一实际问题,在参考藏医药组方原则的基础上,采用现代药理学研究方法与手段,通过标准化的动物实验研究,以及可量化的多种检测指标,从病理学指标到血清抗氧、抗炎等指标的改善,通过科学的综合加权评分评价,确定了本发明复方最佳的配伍比例。这也为本发明复方在临床上的使用打下了良好的研究基础,也有利于本发明复方产品质量的稳定与可控。
(3)本发明所提供的复方与单方相比,具有协同增效的效果;其对于类风湿性关节炎的治疗效果优异,通过小鼠足趾及关节肿胀度的测定、血清氧化应激指标测定、血清炎症因子及类风湿因子(RF)测定,结果证明,本发明中所提供的组方对关节炎指数、足趾肿胀度、关节肿胀度、抗炎指标、抗氧化指标等与模型组相比,均有显著性差异;
见实验结果5中的比较,尤其是仅将西藏猫乳、秦艽这两味药用于实验和将其它配方用于小鼠关节炎指数实验中,经比较,本发明的配方与单方相比,作用效果要远远优于单方。
(4)此外,本发明所采用的工艺条件比如料液比、提取时间、提取次数等也会影响到最终复方中总黄酮和总生物碱提取率,从而影响到药物的功效,采用本发明的工艺条件提取获得的复方中浸膏得率、总黄酮和总生物碱含量均处于较高水平,保证了药物的活性成分含量高。
附图说明
图1为RA小鼠足趾肿胀度测定结果(与模型组比较,#P<0.05,##P<0.01);
图2为RA小鼠关节肿胀度测定结果(与模型组比较,#P<0.05,##P<0.01);
图3为RA小鼠血清氧化应激指标测定结果;(与空白组比较,*P<0.05,**P<0.01;与模型组比较,#P<0.05,##P<0.01);
图4为RA小鼠血清炎症因子及类风湿因子(RF)测定结果;(与空白组比较,*P<0.05,**P<0.01;与模型组比较,#P<0.05,##P<0.01);
图5为验证实验RA小鼠足趾肿胀度的图片(与模型组比较,#P<0.05,##P<0.01);
图6为验证实验RA小鼠关节肿胀度(与模型组比较,#P<0.05,##P<0.01);
图7为验证实验RA小鼠血清氧化应激指标测定结果(与空白组比较,*P<0.05,**P<0.01;与模型组比较,#P<0.05,##P<0.01);
图8为验证实验RA小鼠血清炎症因子及类风湿因子(RF)测定结果;(与空白组比较,*P<0.05,**P<0.01;与模型组比较,#P<0.05,##P<0.01)。
具体实施方式
为了能使本领域技术人员更好的理解本发明,现结合具体实施方式对本发明进行更进一步的阐述。
实施例1
本发明中,采用了西藏猫乳、秦艽、小檗皮、诃子这四味药材,并且以这四味药物的单方和不同比例的复方进行了不同的实验,具体如下:
1.分别以西藏猫乳、秦艽、小檗皮、诃子四味药材作为因素,选取L9(34)正交设计表,设计正交实验,得到9组不同配伍样品,作为实验给药组。
表1本发明复方配伍比例正交实验因素水平表
表2L9(34)正交实验表
实验样品号 | A西藏猫乳(g) | B秦艽(g) | C小檗皮(g) | D诃子(g) |
1 | 9 | 3 | 3 | 3 |
2 | 9 | 6.5 | 6.5 | 6.5 |
3 | 9 | 10 | 10 | 10 |
4 | 12 | 3 | 6.5 | 10 |
5 | 12 | 6.5 | 10 | 3 |
6 | 12 | 10 | 3 | 6.5 |
7 | 15 | 3 | 10 | 6.5 |
8 | 15 | 6.5 | 3 | 10 |
9 | 15 | 10 | 6.5 | 3 |
2.实验样品制备
各样品按照体积质量比加入20倍量水,回流提取2次,每次提取1.5小时,滤过,滤液合并,常压浓缩成清膏,喷雾干燥,即得。
3.实验方法
建立RA小鼠模型:取健康雄性昆明种小鼠,每只小鼠左后足趾皮下注射50μL完全弗氏佐剂;再取空白对照组小鼠,于左后足趾皮下注射50μL生理盐水。造模1周后,对造模成功小鼠进行分组(n=10):模型组、阳性药组(***)、西藏猫乳组、秦艽组、小檗皮组、诃子组、本发明正交实验样品包括配方1-9组。各组灌胃给药30d,期间每周测量一次足趾和关节肿胀度。末次给药24h后,处死小鼠,取血清、足部关节等样本,测定相应指标。
4.指标检测
4.1小鼠关节炎指数评分
末次给药24h后,对小鼠造模关节进行关节炎指数(Arthritis Index,AI)评分,空白组无评分,四个关节得分累积之和为最终得分,每只小鼠最高分为16分,AI评分表如下:
表3小鼠关节炎指数(AI)评分标准
得分 | 关节病变程度 |
0 | 关节足趾正常无炎症 |
1 | 仅小趾关节有轻度红肿 |
2 | 踝关节以下均轻度红肿 |
3 | 踝关节以下全部明显红肿 |
4 | 整个踝关节到足趾红肿严重 |
4.2小鼠足趾、关节肿胀度的测定
末次给药24h后,使用游标卡尺测量小鼠造模关节和足趾厚度,测量3次,取平均值为最终厚度,肿胀度(mm)=给药后足趾厚度(mm)-给药前足趾厚度(mm)。
4.3标本的采集及处理
测定完上述指标后,各组小鼠采集血液样品,离心,即得到血清样品,保存于-80℃冰箱中。取左后肢,固定后,用于后续分析。
4.4血清氧化应激指标的测定
取血清样品,采用相应试剂盒,检测SOD、MDA、CAT和GSH-Px水平,评价各样品抗氧化作用。
4.5血清炎症因子及类风湿因子(Rheumatoid Factor,RF)指标的测定
取血清样品,采用相应ELISA试剂盒,检测血清中IL-1β、TNF-α、IL-6、RF水平,评价各样品抗炎作用。
5.实验结果
5.1小鼠关节炎指数(AI)评分结果,结果见表4。
与模型组比较,#P<0.05,##P<0.01
在给药前,各组的AI评分均在13分左右,说明关节炎模型造模成功。给药两周后,与模型组比较,阳性药组、秦艽组的AI值有一定降低(P<0.05);但配方二和配方五AI值降低显著,具有明显的统计学差异(P<0.01),而配方四和配方六的AI值也有下降(P<0.05)。给药4周后,西藏猫乳、秦艽组的AI值均显著小于模型组(P<0.05);配方中,二、四、五、六、八和九的AI值均显著下降,与模型组比较,均有显著性差异(P<0.05,P<0.01),其中以配方二、四、五、六和九降低显著,其作用也明显优于各单味药物。
5.2小鼠足趾、关节肿胀度测定结果见附图1所示。
足趾、关节肿胀度是评价动物关节炎症程度最为直观的指标之一。如图1所示,给药1周后,各配方样品组对足趾肿胀,已有较好的抑制作用,与模型组比较,有显著性差异(P<0.05,P<0.01),而西藏猫乳、秦艽、小檗皮和诃子对足趾肿胀也有较好的抑制作用,与模型组比较,有统计学意义(P<0.01)。给药2周后,所有组别小鼠足趾肿胀度均有一定程度下降,这是弗氏佐剂造模后出现的正常现象,即造模后第2周,小鼠足趾肿胀会出现减轻恢复的情况。给药第2周至第4周,西藏猫乳、秦艽、小檗皮、诃子的抑制足趾肿胀作用均有所降低,如:西藏猫乳组在第2周时,与模型组比较,足趾肿胀度有显著性差异(P<0.05);但第3周的足趾肿胀度有所上升,与模型组比较,无显著性差异;在第4周时,随着用药时间的延长,足趾肿胀度有一定下降,与模型组比较,有统计学意义(P<0.05)。而配方样品组则与四个单味药物完全不同,特别是配方二、四、五、六和九,其对足趾肿胀度的抑制效果均优于单味药材,且与模型组比较,具有显著性差异(P<0.01)。
图2结果显示,给药四周后,各配方组小鼠关节肿胀度均有降低,其中,配方二、五和六对关节肿胀度的抑制效果尤为明显,与模型组比较,有着极显著性差异(P<0.01),治疗作用也优于各单味药物组;配方九的治疗作用,与西藏猫乳、秦艽、小檗皮和诃子效果接近,与模型组比较,有显著性差异(P<0.05)。
5.3血清氧化应激指标测定结果如附图3所示;
图3结果显示,与空白组比较,RA模型组小鼠血清CAT、SOD、GSH-Px水平均显著降低(P<0.01),而MDA含量则显著升高(P<0.01),说明在RA病程发生过程中,其血清氧化应激水平明显增加。各给药组小鼠治疗4周后,配方二、配方四、配方五、配方六的血清CAT、SOD、GSH-Px水平均显著升高;而血清MDA水平,配方二、配方四、配方五、配方九则显著下降,与模型组比较,有显著性差异(P<0.01)。西藏猫乳、秦艽、小檗皮、诃子组小鼠血清CAT、SOD、GSH-Px及MDA等氧化应激指标尽管也有改善,但四个药物的四个氧化应激指标并未同步改善。相对于配方二、配方四、配方五三个配方组,单味药对RA小鼠模型体内氧化应激反应并未进行全面抑制。
5.4血清炎症因子及类风湿因子(RF)测定结果如附图4所示;
如图4所示,RA模型小鼠血清IL-6、IL-1β、TNF-α等炎症因子水平升高显著,与空白组比较,有统计学意义(P<0.01)。各给药组中,配方二、配方四、配方五、配方九的血清IL-6、IL-1β、TNF-α等炎症因子水平均明显下降,与模型组比较,有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。对于血清类风湿因子水平,与空白组比较,模型组血清类风湿因子水平上升显著,有统计学意义(P<0.01);给药组中,配方二、配方三、配方四、配方五、配方九血清类风湿因子水平下降明显,与模型组比较,均有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。综合血清炎症因子、类风湿因子测定结果,配方二、配方四、配方五、配方九对上述指标的改善明显,效果优于四种单味药物,也优于其他各组配方。
6.正交数据分析
为了筛选出本发明复方的最佳配伍比例,保证结果的准确性,本实验对上述检测指标采用加权计算方法进行综合评分,以各指标的综合评分为最终筛选指标,确定本发明复方的最佳配伍。
关节炎指数、足趾和关节肿胀度评分,均以第4周各配方组的平均数值为最终得分。结果见表5。
表5关节炎指数、足趾和关节肿胀度评分结果
氧化应激指标主要测定了血清CAT、SOD、MDA和GSH-Px,考虑到这几个指标在氧化应激检测中的重要程度无差别,因此每项指标加权比为1:1:1:1,计算公式如下(由于MDA结果为数值越低抗氧化效果越好,与另三项指标相反,故对MDA得分作减法运算),计算结果见表6。
表6抗氧化指标加权评分表
组别 | CAT(U/mL) | SOD(U/mL) | MDA(ng/mL) | GSH-Px(μmol/L) | 抗氧化评分 |
配方一 | 0.195 | 1.517 | 14.542 | 220.492 | 2.743 |
配方二 | 0.404 | 1.325 | 9.232 | 220.345 | 4.902 |
配方三 | 0.196 | 1.203 | 15.344 | 158.293 | 1.987 |
配方四 | 0.244 | 1.193 | 10.234 | 210.234 | 3.293 |
配方五 | 0.436 | 1.437 | 9.232 | 239.431 | 5.391 |
配方六 | 0.413 | 1.355 | 14.013 | 220.981 | 4.481 |
配方七 | 0.196 | 1.206 | 15.499 | 149.855 | 1.913 |
配方八 | 0.121 | 1.210 | 16.019 | 164.924 | 1.337 |
配方九 | 0.139 | 1.402 | 9.012 | 237.935 | 2.915 |
血清炎症因子以及类风湿因子水平的升高,是RA病情发展的重要指标。为了综合评判本发明配方对这几个指标的抑制作用,对血清IL-6、IL-1β、TNF-α和RF水平加权计算影响因素综合得分,考虑到这几种因素之间重要程度无差别,因此每项因变量加权比为1:1:1:1,计算公式如下,计算结果见表7。
表7抗炎指标加权评分表
组别 | IL-6(pg/mL) | IL-1β(ng/mL) | TNF-α(ng/mL) | RF(ng/mL) | 抗炎评分 |
配方一 | 16.627 | 142.382 | 193.348 | 12.218 | 7.940 |
配方二 | 7.788 | 66.183 | 123.829 | 9.945 | 4.432 |
配方三 | 14.273 | 121.839 | 179.392 | 10.775 | 6.948 |
配方四 | 5.968 | 74.164 | 134.298 | 11.032 | 4.456 |
配方五 | 6.672 | 62.392 | 151.297 | 9.519 | 4.360 |
配方六 | 21.429 | 89.282 | 169.018 | 9.327 | 7.387 |
配方七 | 19.826 | 139.828 | 183.973 | 12.760 | 8.417 |
配方八 | 6.427 | 130.284 | 172.917 | 12.462 | 5.898 |
配方九 | 6.779 | 81.237 | 143.927 | 9.710 | 4.641 |
为了优选出本发明的最佳配方比例,对上述检测指标进行综合加权评分,以加权总分为指标,对正交实验结果进行分析,确定最佳配方比例。加权评分公式如下,计算结果见表8:
表8综合加权评分表
以表8加权评分总分为指标,对正交实验配方结果进行分析,结果见表9:
表9配方比例正交结果分析表
实验样品号 | A西藏猫乳(g) | B秦艽(g) | C小檗皮(g) | D诃子(g) | 总分 |
1 | 9 | 3 | 3 | 3 | 2.54 |
2 | 9 | 6.5 | 6.5 | 6.5 | 4.24 |
3 | 9 | 10 | 10 | 10 | 2.58 |
4 | 12 | 3 | 6.5 | 10 | 4.02 |
5 | 12 | 6.5 | 10 | 3 | 4.27 |
6 | 12 | 10 | 3 | 6.5 | 4.32 |
7 | 15 | 3 | 10 | 6.5 | 1.99 |
8 | 15 | 6.5 | 3 | 10 | 2.40 |
9 | 15 | 10 | 6.5 | 3 | 3.82 |
K1 | 9.36 | 8.55 | 9.26 | 10.63 | |
K2 | 12.61 | 10.91 | 12.08 | 10.55 | |
K3 | 8.21 | 10.72 | 8.84 | 9.00 | |
R | 4.40 | 2.36 | 3.24 | 1.63 |
表9结果显示,因素A在A2水平最佳,因素B在B3水平最佳,因素C在C2水平最佳,因素D在D1水平最佳,因此本配方最佳配伍为A2B3C2D1,即西藏猫乳:秦艽:小檗皮:诃子=12:10:6.5:3,该配伍对于RA模型小鼠的综合治疗效果最好。
7.最佳配伍比例验证实验结果
为了确证本发明最佳配伍对RA的治疗作用,采用RA小鼠模型,通过测定相关指标,对最佳配伍样品的疗效进行评价。按照西藏猫乳:秦艽:小檗皮:诃子=12:10:6.5:3,称取药材,按照体积质量比加入20倍量水,回流提取2次,每次提取1.5小时,滤过,滤液合并,常压浓缩成清膏,喷雾干燥,即得最佳配伍样品。按照上述造模方法建立小鼠RA模型,给药后,测定相关关节、血清指标。关节炎指数结果见表10,小鼠足趾肿胀度及关节肿胀度结果见图5和图6,小鼠血清氧化应激指标测定结果见图7,小鼠血清炎症因子及类风湿因子测定结果见图8,综合加权评分表见表11。
组别 | 第0周 | 第2周 | 第4周 |
模型 | 14.005±1.625 | 14.739±1.265 | 15.638±1.552 |
阳性 | 12.627±1.118 | 9.391±0.683# | 8.183±1.031## |
最佳配伍 | 12.733±1.102 | 8.602±0.377## | 8.064±0.781## |
与模型组比较,#P<0.05,##P<0.01。
表11验证实验综合加权评分表
综合表10、图5-8结果,本发明实施例所确定的最佳配伍比例对于RA小鼠具有显著的治疗作用。与模型组比较,关节炎指数、足趾肿胀度、关节肿胀度、抗炎指标、抗氧化指标等指标均有显著性能差异(P<0.05,P<0.01),且各指标的改善均优于正交实验各配方比例组。表11结果显示,通过综合加权评分,最佳配伍组的评分为4.99,高于正交实验各组,说明本发明通过正交实验,得到了本发明的最佳配方,即:西藏猫乳12g、秦艽10g、小檗皮6.5g、诃子3g。
实施例2
关于本发明最佳提取工艺条件的选择,本发明人也进行了大量的实验,提取工艺会影响到复方产品中黄酮、生物碱等活性成分的含量,故而也会进一步的影响到其对类风湿性关节炎的药效。
1.提取工艺的正交设计
如表12所示,以水为溶剂对本发明复方进行提取,采用料液比、提取时间和提取次数作为正交实验的影响因素,设计L9(34)正交实验表。以浸膏得率、总黄酮和总生物碱提取率为考查指标,确定最佳提取工艺条件。
表12本发明提取工艺因素水平表
因素 | A料液比 | B提取时间(h) | C提取次数 |
1 | 1:10 | 1.0 | 1 |
2 | 1:15 | 1.5 | 2 |
3 | 1:20 | 2.0 | 3 |
表13L9(34)正交实验表
实验号 | A料液比 | B提取时间(h) | C提取次数 |
1 | 1:10 | 1.0 | 1 |
2 | 1:10 | 1.5 | 2 |
3 | 1:10 | 2.0 | 3 |
4 | 1:15 | 1.0 | 2 |
5 | 1:15 | 1.5 | 3 |
6 | 1:15 | 2.0 | 1 |
7 | 1:20 | 1.0 | 3 |
8 | 1:20 | 1.5 | 1 |
9 | 1:20 | 2.0 | 2 |
2.提取工艺实验结果
为筛选得到最佳提取工艺,通过对浸膏得率、总黄酮和总生物碱含量实验结果进行加权计算总分,以总分为筛选指标,确定最优工艺条件,结果见表14。
加权计算公式如下:
表14提取工艺实验正交结果分析表
表14结果显示,根据极差分析结果,本发明提取工艺的最佳条件为A3B2C2,即料液比1:20,提取2次,每次提取1.5h。
3.验证实验
为了验证正交设计实验确定的最佳提取工艺条件,按照该条件即料液比1:20、提取2次、每次提取1.5h,进行5次实验,结果见表15。
表15提取工艺验证实验结果
实验号 | 浸膏得率(%) | 总黄酮(mg/g) | 总生物碱(mg/g) |
1 | 39.82 | 17.03 | 1.44 |
2 | 40.12 | 16.93 | 1.41 |
3 | 41.01 | 16.81 | 1.47 |
4 | 40.21 | 17.22 | 1.45 |
5 | 39.49 | 17.05 | 1.44 |
平均值 | 40.13 | 17.01 | 1.44 |
RSD | 1.413% | 0.894% | 1.503% |
表15结果显示,采用正交实验优选的最佳条件进行复方提取,浸膏得率、总黄酮和总生物碱含量均处于较高水平,可用于本发明复方的提取。
通过以上的实验,本发明的最佳配方为:西藏猫乳:秦艽:小檗皮:诃子=12:10:6.5:3;最佳提取工艺条件为:按照体积质量比加入20倍量水,回流提取2次,每次提取1.5小时,滤过,滤液合并,常压浓缩成清膏,喷雾干燥,即得。
上述实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (2)
1.具有治疗类风湿性关节炎作用的藏药,其特征在于,所述的藏药由以下重量份数的原料制备而成:西藏猫乳12份、秦艽10份、小檗皮6.5份、诃子3份;
所述的藏药的制备方法如下:
S1:按上述的重量份称取原料;
S2:将S1中的原料混合后粉碎,过20目筛,获得粉末原料;
S3:将S2中的粉末原料按料液比1:20的重量体积比加入水,回流提取2次,每次提取的时间为1.5小时,过滤,将滤液合并,浓缩,得浸膏;
S4:干燥S3中的浸膏,获得成品藏药。
2.如权利要求1所述的藏药在制备治疗类风湿性关节炎的药物中的应用。
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