CN114699513A - 一种含有酵母重组胶原蛋白的疤痕凝胶制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种含有酵母重组胶原蛋白的疤痕凝胶制备方法，由以下质量份数的原辅料组成：酵母重组胶原蛋白5‑30份、苦参碱3‑15份、姜黄素3‑14份、芦荟苷1‑10份、甘草酸铵1‑10份、昆布素1‑10份、紫草素1‑10份、卡波姆0.1‑2份、三乙醇胺0.1‑1份、乳化剂1‑10份、防腐剂0.1‑0.5份、甘油10‑20份、75％的乙醇10‑20份、纯净水20‑30份。本发明含有多种中药活性成分，可以多组分、多靶点、多途径地协同增效，影响成纤维细胞的增殖、改善局部微循环、影响生长因子的分泌，促使疤痕表皮恢复稳定的内环境。减轻毛细血管充血和胶原纤维增生，预防和改善因外伤或者手术造成的增生性疤痕。

Description

一种含有酵母重组胶原蛋白的疤痕凝胶制备方法
技术领域
本发明涉及医药领域，具体涉及一种含有酵母重组胶原蛋白的疤痕凝胶制备方法。
背景技术
疤痕是外伤累及真皮***层后遗留的痕迹，大小、深浅不一，形状各异。位于面部的疤痕影响美观，处理难度较大，虽然疤痕的临床治疗方案有很多，但总体疗效有限，并存在副作用大，成本高等缺点，并且目前国际上尚未有完全公认的完全治疗病理性疤痕的药物、器械、方法等。而外用的凝胶剂相对于临床的治疗方案来说，其对于疤痕的修复具有安全有效的优势。
酵母重组胶原蛋白对皮肤表面的蛋白质分子有较大的亲和力，具有抵抗原性、可生物降解性和生物相容性。由于酵母重组胶原蛋白及其水解物与人体皮肤胶原的结构相似，相容性好，可以迅速扩散到皮肤深层，且重组胶原蛋白分子外侧存在大量的羧基和羟基，同时存在大量的甘氨酸等天然保湿因子，能提高组织细胞的贮水能力，使皮肤保湿，有效改善疤痕因为皮肤干燥而令患者感到瘙痒。
中药活性成分对于疤痕的修复有其独特的优势，如副作用小、可以弥补激素等药物长期运用带来的不良影响等，而且与单一活性成分的药物相比，中药活性成分组合物具有多组分、多靶点、多途径地协同增效的优点，如苦参素、姜黄素、芦荟苷、甘草酸胺、昆布素、紫草素的复合组方体外研究均显示其对疤痕治疗都有确切的疗效。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种含有酵母重组胶原蛋白的疤痕凝胶的制备方法。
为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案予以实现的：
一种含有酵母重组胶原蛋白的疤痕凝胶制备方法，其特征在于，由以下质量份数的原辅料组成：酵母重组胶原蛋白5-30份、苦参碱3-15份、姜黄素3-14份、芦荟苷1-10份、甘草酸铵1-10份、昆布素1-10份、紫草素1-10份、卡波姆0.1-2份、三乙醇胺0.1-1份、乳化剂1-10份、防腐剂0.1-0.5份、甘油10-20份、75％的乙醇10-20份、纯净水20-30份。
优选的，由以下质量份数的原辅料组成：酵母重组胶原蛋白20份、苦参碱8份、姜黄素7份、芦荟苷5份、甘草酸铵5份、昆布素5份、紫草素5份、卡波姆1份、三乙醇胺1份、乳化剂5份、防腐剂0.3份、甘油15份、75％的乙醇15份、纯净水25份。
优选的，所述的防腐剂为对羟基苯甲酸乙酯、叔丁醇一种或两种任意比例的混合物。
优选的，所述乳化剂为聚山梨酯-80、单硬脂酸甘油酯一种或两种任意比例的混合物。
优选的，本发明的一种含有酵母重组胶原蛋白的疤痕凝胶的制备方法，包括：
(1)将卡波姆加入纯净水中，室温下放置6h，充分溶胀；
(2)将苦参碱、姜黄素、芦荟苷、甘草酸胺、昆布素、紫草素加入75％的乙醇，搅拌至完全溶解，得到中药单体混合液；
(3)将步骤(2)的制得中药单体混合液、酵母重组胶原蛋白、乳化剂、甘油、纯净水、防腐剂加入溶胀好的卡波姆中，搅拌均匀，再加入三乙醇胺调节pH至6.0-7.0，得到一种含有酵母重组胶原蛋白的疤痕凝胶。
一种含有酵母重组胶原蛋白的疤痕凝胶在辅助治疗因烧烫伤、创伤和外科手术所引起的疤痕中的应用。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
酵母重组胶原蛋白具有抵抗原型，可生物降解性和生物相容性，疤痕作为如今的医学难题，胶原经酵母菌发酵重组后，结构更加接近人体的胶原蛋白，低免疫排斥，容易透过皮肤屏障，直达肌底，能迅速地抑制因外伤或者手术引起的疤痕增生。
苦参碱对疤痕的治疗有一定的生物活性，可以抑制疤痕的成纤维细胞增生和促进其凋亡，主要表现为：①苦参碱可增长细胞周期的S期，抑制形成纤维细胞增生，促进其凋亡；②苦参碱可降低Smad3和ERK1蛋白的表达。
芦荟苷不仅可以增强含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)凋亡蛋白的表达，促进成纤维细胞的凋亡；而且还可阻断成纤维细胞从天NA合成前期进入天NA合成后期，抑制成纤维细胞的生长增殖，进而减缓疤痕的生成表达，抑制Smad3磷酸化和Smad3的核转录。
姜黄素的主要药理作用有抗氧化、抗炎、抗凝、降脂、抗动脉粥样硬化、抗衰老消除自由基及抑制肿瘤生长等，从而抑制疤痕的增生。
甘草甘缓平和，有解毒调和之性，能“长肌肉”、治“金疮肿”，所含的甘草酸铵能有效地影响皮下肉芽囊肿炎症的渗出期及增生期，起到抗炎作用。
昆布素有软坚散结、消肿利水、润下消痰之功,临床上可用于甲状腺肿、颈***肿、支气管炎、肺结核、咳嗽和老年性白内障等,所以能够软化增生的疤痕，降低色素沉淀，改善疤痕的红肿程度。
紫草素具有抗癌、抗炎、抗菌等作用。临床用于治疗急、慢性肝炎、肝硬化。皮肝科用于治疗扁平疣、银屑病，局部应用治疗烧伤和促进伤口愈合。具有抑制炎症，防止因外伤或者手术后的伤口发生炎症反应而刺激疤痕增生。
本发明加入上述中药单体制得的含有酵母重组胶原蛋白的疤痕凝胶比市面上的疤痕治疗产品防治疤痕的效果更为显著，从预防善后两方面来改善疤痕的红肿和增生程度，且具有副作用小、易吸收的独特优势。
附图说明
图1为本发明实施例5的增生疤痕回归过程图。
图2为本发明实施例5的大鼠疤痕转归比图。
图3为本发明实施例5的大鼠疤痕面积比较图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
实施例1
一种含有酵母重组胶原蛋白疤痕凝胶的制备方法，包括以下步骤：
(1)将0.1份的卡波姆加入纯净水中，室温下放置6h，充分溶胀；
(2)将苦参碱3份、姜黄素3份、芦荟苷1份、甘草酸胺1份、昆布素1份、紫草素1份，加入10份的75％乙醇，搅拌至完全溶解，得到中药单体混合液；
(3)将步骤(2)的制得中药单体混合液、5份酵母重组胶原蛋白、1份乳化剂、10份甘油、20份纯净水、0.1份的防腐剂加入溶胀好的卡波姆中，搅拌均匀；再加入0.1份的三乙醇胺调节pH至6.0，得到一种含有酵母重组胶原蛋白的疤痕凝胶。
实施例2
一种含有酵母重组胶原蛋白疤痕凝胶的制备方法，包括以下步骤：
(1)将0.3份的卡波姆加入纯净水中，室温下放置6h，充分溶胀；
(2)将苦参碱5份、姜黄素5份、芦荟苷3份、甘草酸胺3份、昆布素3份、紫草素3份，加入12份的75％乙醇，搅拌至完全溶解，得到中药单体混合液；
(3)将步骤(2)的制得中药单体混合液、10份酵母重组胶原蛋白、2份乳化剂、12份甘油、22份纯净水、0.2份防腐剂加入溶胀好的卡波姆中，搅拌均匀；再加入0.3份的三乙醇胺调节pH至6，得到一种含有酵母重组胶原蛋白的疤痕凝胶。
实施例3
一种含有酵母重组胶原蛋白疤痕凝胶的制备方法，包括以下步骤：
(1)将0.5份的卡波姆加入纯净水中，室温下放置6h，充分溶胀；
(2)将苦参碱7份、姜黄素7份、芦荟苷4份、甘草酸胺4份、昆布素4份、紫草素4份，加入13份的75％乙醇，搅拌至完全溶解，得到中药单体混合液；
(3)将步骤(2)的制得中药单体混合液、13份酵母重组胶原蛋白、3份乳化剂、13份甘油、23份纯净水、0.2份防腐剂加入溶胀好的卡波姆中，搅拌均匀；再加入0.5份的三乙醇胺调节pH至6，得到一种含有酵母重组胶原蛋白的疤痕凝胶。
实施例4
一种含有酵母重组胶原蛋白疤痕凝胶的制备方法，包括以下步骤：
(1)将0.7份的卡波姆加入纯净水中，室温下放置6h，充分溶胀；
(2)将苦参碱8份、姜黄素8份、芦荟苷4份、甘草酸胺4份、昆布素4份、紫草素4份，加入14份的75％乙醇，搅拌至完全溶解，得到中药单体混合液；
(3)将步骤(2)的制得中药单体混合液、18份酵母重组胶原蛋白、4份乳化剂、14份甘油、24份纯净水、0.3份防腐剂加入溶胀好的卡波姆中，搅拌均匀；再加入0.8份的三乙醇胺调节pH至6.5，得到一种含有酵母重组胶原蛋白的疤痕凝胶。
实施例5
一种含有酵母重组胶原蛋白疤痕凝胶的制备方法，包括以下步骤：
(1)将1份的卡波姆加入纯净水中，室温下放置6h，充分溶胀；
(2)将苦参碱10份、姜黄素10份、芦荟苷5份、甘草酸胺5份、昆布素5份、紫草素5份，加入15份的75％乙醇，搅拌至完全溶解，得到中药单体混合液；
(3)将步骤(2)的制得中药单体混合液、22份酵母重组胶原蛋白、5份乳化剂、15份甘油、25份纯净水、0.3份防腐剂加入溶胀好的卡波姆中，搅拌均匀；再加入1份的三乙醇胺调节pH至6.5，得到一种含有酵母重组胶原蛋白的疤痕凝胶。
实施例6
一种含有酵母重组胶原蛋白疤痕凝胶的制备方法，包括以下步骤：
(1)将1.3份的卡波姆加入纯净水中，室温下放置6h，充分溶胀；
(2)将苦参碱11份、姜黄素11份、芦荟苷7份、甘草酸胺7份、昆布素7份、紫草素7份，加入17份的75％乙醇，搅拌至完全溶解，得到中药单体混合液；
(3)将步骤(2)的制得中药单体混合液、25份酵母重组胶原蛋白、7份乳化剂、16份甘油、26份纯净水、0.4份防腐剂加入溶胀好的卡波姆中，搅拌均匀；再加入1.3份的三乙醇胺调节pH至7，得到一种含有酵母重组胶原蛋白的疤痕凝胶。
实施例7
一种含有酵母重组胶原蛋白疤痕凝胶的制备方法，包括以下步骤：
(1)将1.5份的卡波姆加入纯净水中，室温下放置6h，充分溶胀；
(2)将苦参碱13份、姜黄素12份、芦荟苷8份、甘草酸胺8份、昆布素8份、紫草素8份，加入18份的75％乙醇，搅拌至完全溶解，得到中药单体混合液；
(3)将步骤(2)的制得中药单体混合液、27份酵母重组胶原蛋白、8份乳化剂、18份甘油、28份纯净水、0.4份防腐剂加入溶胀好的卡波姆中，搅拌均匀；再加入1.7份的三乙醇胺调节pH至7，得到一种含有酵母重组胶原蛋白的疤痕凝胶。
实施例8
一种含有酵母重组胶原蛋白疤痕凝胶的制备方法，包括以下步骤：
(1)将2份的卡波姆加入纯净水中，室温下放置6h，充分溶胀；
(2)将苦参碱15份、姜黄素14份、芦荟苷10份、甘草酸胺10份、昆布素10份、紫草素10份，加入20份的75％乙醇，搅拌至完全溶解，得到中药单体混合液；
(3)将步骤(2)的制得中药单体混合液、30份酵母重组胶原蛋白、10份乳化剂、20份甘油、30份纯净水、0.5份防腐剂加入溶胀好的卡波姆中，搅拌均匀；再加入1份的三乙醇胺调节pH至7.0，得到一种含有酵母重组胶原蛋白的疤痕凝胶。
为了验证本发明的有益效果，用实施例5制备得到的疤痕凝胶做了以下药理实验：
1、方法
把36只增生性疤痕模型的SD大鼠(广东省医学实验动物中心，动物质量符合一级标准，重约250g)作为研究对象，按随机数字表法分为模型组12只、空白对照组12只与阳性对照组12只。
模型组大鼠的疤痕处贴上含有实施例2制得的疤痕凝胶，阳性对照组大鼠的疤痕处涂抹复方积雪草苷凝胶，每个创面先用呋喃西林棉球局部消毒清洗，再外敷给药，消毒纱布包扎。复方积雪草苷凝胶和疤痕凝胶分别每天给药3次，连续给药30天，空白对照组常规饲养不作任何处理。
2、观测指标
(1)增生性疤痕的形成与转归：记录并比较各组愈合时间、上皮化时间及疤痕痊愈时间。
(2)疤痕面积：于创面愈合后第4、8、12、20天，用游标卡尺对疤痕进行测量，每个疤痕分别找到最大边R1、最小边R2，得出疤痕面积S＝R1×R2。
3、统计分析：用数理统计学方法对上述数据进行处理，计算出标准差，组间比较采用两样本t检验，检验水准均设计为α＝0.05，P<α视为有统计学意义。
4、结果
(1)三组大鼠伤口愈合时间、上皮化时间及疤痕痊愈时间
模型组大鼠创口手术后的4天左右伤口开始愈合，8天左右增生性疤痕高度达最大值，12天左右上皮化完成，20天左右疤痕基本消失，其整个过程如图1所示。
增生性疤痕转归比较，3组大鼠在创面愈合时间、上皮化时间及疤痕愈合时间上的差异性见图2。
3组大鼠的伤口愈合时间无显著差异(P>0.05)，说明3组大鼠增生性疤痕模型均造模成功，且伤口无显著差异。3组大鼠上皮化时间无显著差异(P>0.05)，表明所给阳性对照组的复方积雪草苷凝胶和模型组的含有酵母重组胶原蛋白的疤痕凝胶均不能非常明显的促进伤口再上皮化。在疤痕愈合时间的差异性比较上，空白与模型组相比，差异显著(p＜0.05)；空白对照组与阳性对照组相比，均差异显著(p＜0.05)；模型组与阳性对照组相比，无显著差异(P＜0.05)。
(2)疤痕面积
3组大鼠在伤口愈合后4、8、12、18天的疤痕面积比较结果，见图3。
由上图可知，在伤口愈合后的第4、8天，3组大鼠的疤痕面积均无显著性差异(p＞0.05)；此现象说明，在疤痕产生的前期，4组给药组对疤痕的抑制性不明显。伤口愈合后的第12天，阳性对照组与模型组相比，疤痕面积差异显著(p＜0.05)；空白对照组与模型组相比，疤痕面积差异显著(p＜0.05)；伤口愈合的第18天，空白组与模型组相比，疤痕面积差异极显著(p＜0.01)；阳性对照组与模型组相比，疤痕面积差异显著(p＜0.05)。通过伤口愈合后第12天、18天各组之间疤痕面积的比较，模型组对于疤痕的愈合是有明显疗效的，且含有酵母重组胶原蛋白的疤痕凝胶对疤痕的愈合效果优于市售阳性药物复方积雪草苷凝胶。

Claims (6)

1.一种含有酵母重组胶原蛋白的疤痕凝胶制备方法，其特征在于，由以下质量份数的原辅料组成：酵母重组胶原蛋白5-30份、苦参碱3-15份、姜黄素3-14份、芦荟苷1-10份、甘草酸铵1-10份、昆布素1-10份、紫草素1-10份、卡波姆0.1-2份、三乙醇胺0.1-1份、乳化剂1-10份、防腐剂0.1-0.5份、甘油10-20份、75％的乙醇10-20份、纯净水20-30份。
2.根据权利要求1所述含有酵母重组胶原蛋白的疤痕凝胶，其特征在于，由以下质量份数的原辅料组成：酵母重组胶原蛋白20份、苦参碱8份、姜黄素7份、芦荟苷5份、甘草酸铵5份、昆布素5份、紫草素5份、卡波姆1份、三乙醇胺0.5份、乳化剂5份、防腐剂0.3份、甘油15份、75％的乙醇15份、纯净水25份。
3.根据权利要求1所述含有酵母重组胶原蛋白的疤痕凝胶，其特征在于：所述的防腐剂为对羟基苯甲酸乙酯、叔丁醇一种或两种任意比例的混合物。
4.根据权利要求1所述含有酵母重组胶原蛋白的疤痕凝胶，其特征在于：所述乳化剂为聚山梨酯-80、单硬脂酸甘油酯一种或两种任意比例的混合物。
5.根据权利要求1所述一种含有酵母重组胶原蛋白的疤痕凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将卡波姆加入纯净水中，室温下放置6h，充分溶胀；
(2)将苦参碱、姜黄素、芦荟苷、甘草酸胺、昆布素、紫草素加入75％的乙醇，搅拌至完全溶解，得到中药单体混合液；
(3)将步骤(2)制得的中药单体混合液、酵母重组胶原蛋白、乳化剂、甘油、纯净水、防腐剂加入溶胀好的卡波姆中，搅拌均匀，再加入三乙醇胺调节pH至6.0-7.0，得到一种含有酵母重组胶原蛋白的疤痕凝胶。
6.根据权利要求1所述的一种含有酵母重组胶原蛋白的疤痕凝胶在辅助治疗因烧烫伤、创伤和外科手术所引起的疤痕中的应用。
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