CN114680045B - 一种内南五味子Kadsura interior A.C.Smith的组培育苗方法 - Google Patents
一种内南五味子Kadsura interior A.C.Smith的组培育苗方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114680045B CN114680045B CN202210396219.2A CN202210396219A CN114680045B CN 114680045 B CN114680045 B CN 114680045B CN 202210396219 A CN202210396219 A CN 202210396219A CN 114680045 B CN114680045 B CN 114680045B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- culture medium
- buds
- changed
- wpm
- kadsura
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 241001506371 Kadsura Species 0.000 title claims abstract description 8
- 241000736078 Schisandra sphenanthera Species 0.000 title 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 24
- 230000000249 desinfective effect Effects 0.000 claims description 16
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 16
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 15
- LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L mercury dichloride Chemical compound Cl[Hg]Cl LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 14
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 claims description 13
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 10
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 8
- ZKQDCIXGCQPQNV-UHFFFAOYSA-N Calcium hypochlorite Chemical class [Ca+2].Cl[O-].Cl[O-] ZKQDCIXGCQPQNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000012883 rooting culture medium Substances 0.000 claims description 7
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 235000020415 coconut juice Nutrition 0.000 claims description 5
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ZNLVAQJGGDVQAU-UHFFFAOYSA-L calcium;dichloride;tetrahydrate Chemical compound O.O.O.O.[Cl-].[Cl-].[Ca+2] ZNLVAQJGGDVQAU-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 3
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 3
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L potassium sulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 229910052939 potassium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000011151 potassium sulphates Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 4
- 241000561703 Kadsura heteroclita Species 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 19
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 15
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 11
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 8
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 8
- SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N silver(1+) nitrate Chemical compound [Ag+].[O-]N(=O)=O SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 6
- 229960002523 mercuric chloride Drugs 0.000 description 6
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 6
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 5
- 241000913745 Spatholobus Species 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 5
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 5
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 239000008149 soap solution Substances 0.000 description 5
- 229910001961 silver nitrate Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 3
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 239000005648 plant growth regulator Substances 0.000 description 3
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 3
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 3
- 241000221300 Puccinia Species 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- 239000005631 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid Substances 0.000 description 1
- 229930192334 Auxin Natural products 0.000 description 1
- 208000005171 Dysmenorrhea Diseases 0.000 description 1
- 206010013935 Dysmenorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 241000220485 Fabaceae Species 0.000 description 1
- 208000004044 Hypesthesia Diseases 0.000 description 1
- 241000218377 Magnoliaceae Species 0.000 description 1
- 208000019255 Menstrual disease Diseases 0.000 description 1
- 241000122904 Mucuna Species 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 241000736075 Schisandra Species 0.000 description 1
- 235000008422 Schisandra chinensis Nutrition 0.000 description 1
- 241000800405 Spatholobus suberectus Species 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000003064 anti-oxidating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002155 anti-virotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002363 auxin Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000000147 hypnotic effect Effects 0.000 description 1
- 208000034783 hypoesthesia Diseases 0.000 description 1
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920005610 lignin Polymers 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000005906 menstruation Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 231100000862 numbness Toxicity 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000002633 protecting effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002040 relaxant effect Effects 0.000 description 1
- YEFOAORQXAOVJQ-RZFZLAGVSA-N schisandrol a Chemical compound C1[C@H](C)[C@@](C)(O)CC2=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C2C2=C1C=C(OC)C(OC)=C2OC YEFOAORQXAOVJQ-RZFZLAGVSA-N 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000010008 shearing Methods 0.000 description 1
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 1
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002936 tranquilizing effect Effects 0.000 description 1
- YEFOAORQXAOVJQ-UHFFFAOYSA-N wuweizischun A Natural products C1C(C)C(C)(O)CC2=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C2C2=C1C=C(OC)C(OC)=C2OC YEFOAORQXAOVJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/002—Culture media for tissue culture
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明属于中药材及组织培养领域，特别公开一种内南五味子Kadsura interior A.C.Smith的组培育苗方法，包括选取滇鸡血藤幼嫩枝条为外植体，消毒后接种至初代丛生芽诱导培养基中诱导出丛生芽，后转接至继代增殖培养基中获得更多的丛生芽，丛生芽最后接种于生根培养基中形成生根苗，本发明是利用组培技术进行滇鸡血藤种苗的生产，属于现代生物技术，是在人工可控环境下进行的工厂育苗，不受气候、季节的限制，可在短期内大量提供相关品质稳定的种苗。
Description
技术领域
本发明属于中药材及组织培养领域，特别涉及滇鸡血藤的组培育苗方法。
背景技术
《中国药典》2020版收录的滇鸡血藤植物源为木兰科南五味子属内南五味子（Kadsura interior A.C.Smith），以干燥藤茎入药，生长于海拔1000米以下的山坡、林中，主要分布于云南、江苏、安徽、浙江、江西、福建、湖北、湖南、广东、广西、四川。滇鸡血藤主要有活血补血，调经止痛，舒筋通络的功效，主要用于***，痛经，麻木瘫痪，风湿痹痛，气血虚弱等症。滇鸡血藤内含木质素类化合物以及萜类化合物，其中以异型南五味子丁素为代表的联苯环辛烯型类木脂素是其最具标志性成分，而异型南五味子丁素含量亦是滇鸡血藤药材质量检测的最核心指标。现代医药研究表明，滇鸡血藤具有抗氧化作用、抗衰老作用、抑菌作用、镇静安眠作用、保肝作用、抗癌作用以及抗病毒作用等。
近年来，由于野生资源蕴藏量的减少以及政府对野生环境的保护力度加大，在云南临沧部分地区开始进行滇鸡血藤的人工引种驯化栽培，其主要方式是采用采挖野生的植株人工驯化栽培后，通过种子及扦插繁殖获得种苗，但由于滇鸡血藤为雌雄异株，野生居群雌株极少，使得居群结实率极低，同时其种子亦存在发芽率低的情况，而扦插繁殖繁殖周期长、繁殖率低等缺点。
值得注意的是，滇鸡血藤药材和鸡血藤药材字面上部分人会认为是相同或者相近物种，但其实，鸡血藤的植物源为豆科植物密花豆属植物密花豆Spatholobus suberectusDunn ，与本发明所述的滇鸡血藤不为同科，更不为同属植物，组培时可能对各植物生长调节剂以及培养成分的敏感程度大相径庭。
针对现有技术的不足，本团队通过利用现代生物组培技术，特发明了一种滇鸡血藤的组培育苗方法。
发明内容
本发明的主要目的是提供一种滇鸡血藤的组培育苗方法，以解决滇鸡血藤种质资源紧缺的问题。
为实现以上目的，本发明提供以下技术方案：
一种滇鸡血藤的组培育苗方法，选取滇鸡血藤幼嫩枝条为外植体，消毒后接种至初代丛生芽诱导培养基中诱导出丛生芽，后转接至继代增殖培养基中获得更多的丛生芽，丛生芽最后接种于生根培养基中形成生根苗。
外植体的消毒方法为75%酒精消毒15~20s，饱和漂白粉溶液消毒10~15min，0.1%升汞溶液消毒3~4min，0.05%升汞溶液消毒10~11min。
初代丛生芽诱导培养基为WPM+NAA 0.02~0.05mg/L+6-BA 2.0~3.0mg/L+PVP（聚乙烯吡咯烷酮）0.6~0.8g/L+活性炭1.0g/L。
丛生芽继代增殖培养基为改良WPM+NAA 0.1~0.2mg/L+IAA 0.02~0.05mg/L+TDZ2.0~2.5mg/L+BR 0.1~0.2mg/L+活性炭0.4g/L。
丛生芽生根培养基为1/2WPM+NAA 0.5~0.6mg/L+IBA 1.0~1.5mg/L+椰汁 50~70ml/L+活性炭0.7g/L。
所述的改良WPM培养基为在原WPM培养基的基础上，将硝酸铵改为800mg/L，磷酸二氢钾改为210mg/L，硫酸镁改为370mg/L，硫酸钾改为800mg/L，四水氯化钙改为400mg/L，其余元素不变。
本发明的有益效果在于：
1、本发明是利用组培技术进行滇鸡血藤种苗的生产，属于现代生物技术，是在人工可控环境下进行的工厂育苗，不受气候、季节的限制，可在短期内大量提供相关品质稳定的种苗。
2、滇鸡血藤药材以异型南五味子丁素含量为其检测的核心指标，且其含量愈高，价格亦愈高，而滇鸡血藤各产区其含量参差不齐，即使同一产区甚至同一居群，其含量亦存在较大差异。本发明是利用滇鸡血藤茎段为外植体进行组培快繁，属于无性繁殖范畴，其能最大程度的保证母本性状的稳定遗传，可以异型南五味子丁素含量高的优质种质为母本，生产出遗传性状稳定的优质种苗。
3、本发明在消毒时采用了75%酒精、饱和漂白粉溶液与高浓度升汞溶液短时消毒和低浓度升汞溶液长时消毒的消毒方法，能最大程度的降低消毒污染率和消毒死亡率，是目前滇鸡血藤组培最适宜的消毒技术。
4、滇鸡血藤在初代丛生芽诱导时，由于消毒剂的影响，极易产生褐化现象，本发明在初代诱导时添加了一定浓度的PVP，可将褐化抑制在不影响生长的范围内，同时，此浓度的添加，亦不影响滇鸡血藤的初代丛生芽诱导率。
5、滇鸡血藤在丛生芽继代增殖时，存在生长速度慢、丛生芽率低、丛生芽节间短、长时间培养易导致枯稍等情况，本发明在丛生芽继代增殖培养时，采用了一定浓度的NAA、IAA、TDZ以及BR的组合，可使短期内产生大量丛生芽，提高了增殖系数，亦能使丛生芽节间增长，更加利于实际生产操作，简介提高了生产增殖系数，同时，改良WPM基本培养基，更加利于滇鸡血藤的生长，几乎杜绝了枯稍情况的发生，具体枯稍情况，如图1和图2所示。
6、滇鸡血藤采用NAA、IBA、IAA、2,4-D各个类别以及各个浓度的生长素组合时，其生根率均表现较低，后经过壮苗培养时，能提高一定的生根率，但仍存在生根率不高的情况，本发明采用了一定浓度的IAA和NAA组合，同时添加50~70ml/L的椰汁，可减少壮苗培养环节，同时使生根率提高至95%左右。
附图说明
图1实施例1技术方案下使用改良WPM培养基后的滇鸡血藤丛生芽增殖情况图；
图2实施例1技术方案下使用WPM培养基后的滇鸡血藤丛生芽增殖情况图。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明进行进一步的说明。
实施例1
1、外植体的选择与清洁：选择滇鸡血藤顶端幼嫩未木质化的茎段为外植体，去叶后剪成长约2~3cm的具芽小段，用饱和肥皂溶液涮洗10min，自来水洗净表面残留肥皂液后，滴加3滴吐温-80，震摇5min，自来水冲淋50min。
2、外植体的消毒：将洗净的外植体转移至超净工作台，用75%酒精溶液消毒15s，无菌水涮洗2次，又用饱和漂白粉溶液消毒10min，无菌水涮洗3次，再用0.1%升汞溶液消毒3min，无菌水涮洗3次，最后用0.05%升汞溶液消毒10min，无菌水涮洗8次，消毒污染率为21.7%，消毒死亡率为28.7%。
3、初代丛生芽诱导：将消毒完成的外植体，用无菌纸吸去表面水分，剪去两端伤口，并将其剪成1~2cm具芽小段，按极性接种于WPM+NAA 0.04mg/L+6-BA 2.0mg/L+PVP0.6g/L+活性炭1.0g/L的初代丛生芽诱导培养基中，在温度25±2℃下暗培养7天，后温度不变，每日照光12h，光强2000～3000lx的光暗交替下培养50天，褐化率为34.1%，但褐化未影响丛生芽的诱导及生长，丛生芽诱导率为67.4%。
4、丛生芽继代增殖培养：将诱导出的丛生芽，剪成单芽，按极性接种于改良WPM+NAA 0.1mg/L+IAA 0.02mg/L+TDZ 2.0mg/L+BR 0.1mg/L+活性炭0.4g/L的丛生芽继代增殖培养基中，在温度25±2℃下，每日照光12h，光强2000～3000lx的光暗交替下培养40天，增殖系数为4.6，培养过程中无枯稍现象发生，改良WPM培养基为在原WPM培养基的基础上，将硝酸铵改为800mg/L，磷酸二氢钾改为210mg/L，硫酸镁改为370mg/L，硫酸钾改为800mg/L，四水氯化钙改为400mg/L，其余元素不变。
5、丛生芽生根培养：将继代增殖的丛生芽，剪成具2个及以上芽的小段，按极性接种于1/2WPM+NAA 0.5mg/L+IBA 1.2mg/L+椰汁 50ml/L+活性炭0.7g/L的生根培养基中，在温度25±2℃下，每日照光12h，光强2000~3000lx的光暗交替下培养30天，生根率为89.3%。
实施例2
1、外植体的选择与清洁：选择滇鸡血藤顶端幼嫩未木质化的茎段为外植体，去叶后剪成长约2~3cm的具芽小段，用饱和肥皂溶液涮洗13min，自来水洗净表面残留肥皂液后，滴加3滴吐温-80，震摇8min，自来水冲淋55min。
2、外植体的消毒：将洗净的外植体转移至超净工作台，用75%酒精溶液消毒20s，无菌水涮洗3次，又用饱和漂白粉溶液消毒13min，无菌水涮洗4次，再用0.1%升汞溶液消毒4min，无菌水涮洗4次，最后用0.05%升汞溶液消毒10min，无菌水涮洗8次，消毒污染率为20.6%，消毒死亡率为30.2%。
3、初代丛生芽诱导：将消毒完成的外植体，用无菌纸吸去表面水分，剪去两端伤口，并将其剪成1~2cm具芽小段，按极性接种于WPM+NAA 0.05mg/L+6-BA 2.5mg/L+PVP0.7g/L+活性炭1.0g/L的初代丛生芽诱导培养基中，在温度25±2℃下暗培养7天，后温度不变，每日照光12h，光强2000~3000lx的光暗交替下培养60天，褐化率为38.7%，但褐化未影响丛生芽的诱导及生长，丛生芽诱导率为69.3%。
4、丛生芽继代增殖培养：将诱导出的丛生芽，剪成单芽，按极性接种于改良WPM+NAA 0.2mg/L+IAA 0.04mg/L+TDZ 2.3mg/L+BR 0.2mg/L+活性炭0.4g/L的丛生芽继代增殖培养基中，在温度25±2℃下，每日照光12h，光强2000~3000lx的光暗交替下培养45天，增殖系数为4.8，改良WPM培养基的配置方法同实施例1。
5、丛生芽生根培养：将继代增殖的丛生芽，剪成具2个及以上芽的小段，按极性接种于1/2WPM+NAA 0.6mg/L+IBA 1.5mg/L+椰汁 60ml/L+活性炭0.7g/L的生根培养基中，在温度25±2℃下，每日照光12h，光强2000~3000lx的光暗交替下培养35天，生根率为93.2%。
实施例3
1、外植体的选择与清洁：选择滇鸡血藤顶端幼嫩未木质化的茎段为外植体，去叶后剪成长约2~3cm的具芽小段，用饱和肥皂溶液涮洗15min，自来水洗净表面残留肥皂液后，滴加3滴吐温-80，震摇10min，自来水冲淋60min。
2、外植体的消毒：将洗净的外植体转移至超净工作台，用75%酒精溶液消毒20s，无菌水涮洗3次，又用饱和漂白粉溶液消毒15min，无菌水涮洗4次，再用0.1%升汞溶液消毒4min，无菌水涮洗4次，最后用0.05%升汞溶液消毒11min，无菌水涮洗8次，消毒污染率为19.8%，消毒死亡率为29.3%。
3、初代丛生芽诱导：将消毒完成的外植体，用无菌纸吸去表面水分，剪去两端伤口，并将其剪成1~2cm具芽小段，按极性接种于WPM+NAA 0.02mg/L+6-BA 3.0mg/L+PVP0.8g/L+活性炭1.0g/L的初代丛生芽诱导培养基中，在温度25±2℃下暗培养7~10天，后温度不变，每日照光12h，光强2000~3000lx的光暗交替下培养60天，褐化率为36.6%，但褐化未影响丛生芽的诱导及生长，丛生芽诱导率为67.0%。
4、丛生芽继代增殖培养：将诱导出的丛生芽，剪成单芽，按极性接种于改良WPM+NAA 0.2mg/L+IAA 0.05mg/L+TDZ 2.5mg/L+BR 0.2mg/L+活性炭0.4g/L的丛生芽继代增殖培养基中，在温度25±2℃下，每日照光12h，光强2000～3000lx的光暗交替下培养50天，增殖系数为5.2，改良WPM培养基的配置方法同实施例1
5、丛生芽生根培养：将继代增殖的丛生芽，剪成具2个及以上芽的小段，按极性接种于1/2WPM+NAA 0.6mg/L+IBA 1.0mg/L+椰汁 70ml/L+活性炭0.7g/L的生根培养基中，在温度25±2℃下，每日照光12h，光强2000～3000lx的光暗交替下培养40天，生根率为91.9%。
滇鸡血藤部分实验记录
1、消毒处理对消毒污染率、消毒死亡率及褐化率的影响
进行以下消毒处理后接种于WPM+NAA 0.04mg/L+6-BA 2.5mg/L+PVP0.7g/L+活性炭1.0g/L中，统计消毒污染率、消毒死亡率以及褐化率。
2、培养基添加剂对褐化的影响
按75%酒精15s+饱和漂白粉溶液15min0.1%升汞3min+0.05%升汞10min消毒后接种到添加一定浓度褐化抑制剂的WPM+NAA 0.02~0.05mg/L+6-BA 2.0~3.0mg/L培养基中，
前期进行了Vc、硝酸银等褐化抑制剂的筛选，发现Vc对滇鸡血藤褐化无明显改观，后采用硝酸银进行试验，发现较低浓度对滇鸡血藤褐化无明显抑制，而高浓度硝酸银对滇鸡血藤褐化有一定的抑制作用，但其对滇鸡血藤有毒害作用。最后筛选出适宜浓度的PVP+活性炭对滇鸡血藤褐化有明显抑制作用，且不影响生长。
3、各激素对增殖系数的影响
单纯采用NAA或IBA与6-BA、KT等常规植物生长调节剂进行使用时，可使丛生芽有缓慢的生长，但短期内几乎没有增殖，后发现滇鸡血藤对TDZ以及BR极其敏感，适宜浓度单独与NAA搭配时均可有一定的增长及增殖，后NAA再与两者进行组合发现，其增殖和增长明显速度加快，而添加一定浓度的IAA后，可使增殖系数达到最佳。
Claims (1)
1.一种内南五味子Kadsura interior A.C.Smith的组培育苗方法，其特征在于，选取内南五味子幼嫩茎段为外植体，去叶后剪成长2~3cm的具芽小段；消毒后接种至初代丛生芽诱导培养基中诱导出丛生芽，后转接至丛生芽继代增殖培养基中获得更多的丛生芽，最后接种于丛生芽生根培养基中形成生根苗，
外植体的消毒方法为75%酒精消毒15～20s，饱和漂白粉溶液消毒10～15min，0.1%升汞溶液消毒3～4min，0.05%升汞溶液消毒10～11min；
初代丛生芽诱导培养基为WPM+NAA 0.02～0.05mg/L+6-BA 2.0～3.0mg/L+PVP0.6～0.8g/L+活性炭1.0g/L；
丛生芽继代增殖培养基为改良WPM+NAA0.1～0.2mg/L+IAA0.02～0.05mg/L+TDZ 2.0～2.5mg/L+BR 0.1～0.2mg/L+活性炭0.4g/L；
所述的改良WPM培养基为在原WPM培养基的基础上，将硝酸铵改为800mg/L，磷酸二氢钾改为210mg/L，硫酸镁改为370mg/L，硫酸钾改为800mg/L，四水氯化钙改为400mg/L，其余元素不变；
丛生芽生根培养基为1/2WPM+NAA 0.5～0.6mg/L+IBA 1.0～1.5mg/L+椰汁 50～70ml/L+活性炭0.7g/L。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210396219.2A CN114680045B (zh) | 2022-04-15 | 2022-04-15 | 一种内南五味子Kadsura interior A.C.Smith的组培育苗方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210396219.2A CN114680045B (zh) | 2022-04-15 | 2022-04-15 | 一种内南五味子Kadsura interior A.C.Smith的组培育苗方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114680045A CN114680045A (zh) | 2022-07-01 |
| CN114680045B true CN114680045B (zh) | 2022-10-04 |
Family
ID=82143320
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210396219.2A Active CN114680045B (zh) | 2022-04-15 | 2022-04-15 | 一种内南五味子Kadsura interior A.C.Smith的组培育苗方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114680045B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115250923B (zh) * | 2022-09-26 | 2022-12-06 | 云南省农业科学院园艺作物研究所 | 一种八角茴香的组培快繁方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106258994A (zh) * | 2016-10-19 | 2017-01-04 | 中国长江三峡集团公司 | 一种蓝莓带芽茎段诱导丛生芽再生的方法 |
| CN108184673A (zh) * | 2018-03-08 | 2018-06-22 | 贵州省山地资源研究所 | 一种冷饭团带芽嫩茎的组培育苗方法 |
| CN108834894A (zh) * | 2018-07-10 | 2018-11-20 | 云南省农业科学院药用植物研究所 | 一种钩藤的组织培养方法 |
| CN110558233A (zh) * | 2019-10-23 | 2019-12-13 | 中南林业科技大学 | 一种黑老虎带芽茎段外植体消毒方法及其直接诱导无菌芽快速增殖的方法 |
| CN112021089A (zh) * | 2020-09-03 | 2020-12-04 | 临沧道地中药材种植科技有限公司 | 滇鸡血藤的育苗方法 |
-
2022
- 2022-04-15 CN CN202210396219.2A patent/CN114680045B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106258994A (zh) * | 2016-10-19 | 2017-01-04 | 中国长江三峡集团公司 | 一种蓝莓带芽茎段诱导丛生芽再生的方法 |
| CN108184673A (zh) * | 2018-03-08 | 2018-06-22 | 贵州省山地资源研究所 | 一种冷饭团带芽嫩茎的组培育苗方法 |
| CN108834894A (zh) * | 2018-07-10 | 2018-11-20 | 云南省农业科学院药用植物研究所 | 一种钩藤的组织培养方法 |
| CN110558233A (zh) * | 2019-10-23 | 2019-12-13 | 中南林业科技大学 | 一种黑老虎带芽茎段外植体消毒方法及其直接诱导无菌芽快速增殖的方法 |
| CN112021089A (zh) * | 2020-09-03 | 2020-12-04 | 临沧道地中药材种植科技有限公司 | 滇鸡血藤的育苗方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Induction of shoot and root from nodes of Kadsura heteroclita;Jedoroh, N.等;《International Journal of Agricultural Technology》;20181231;第14卷(第7期);第1287-1292页 * |
| 中药鸡血藤组织培养及内源激素变化的研究;张亚芳;《CNKI》;20180115(第1期);摘要 * |
| 滇鸡血藤药材基原植物的探讨;高石曼等;《中药材》;20151231;第38卷(第12期);第2644-2650页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114680045A (zh) | 2022-07-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN115362940B (zh) | 猪笼草组培快速育苗方法及其应用 | |
| CN111990260A (zh) | 一种酮型广藿香的组培快繁方法 | |
| CN114680045B (zh) | 一种内南五味子Kadsura interior A.C.Smith的组培育苗方法 | |
| CN104855294B (zh) | 一种白木通快速繁殖的方法 | |
| Liu et al. | Establishment of a Rapid and Efficient Micropropagation System for Succulent Plant Haworthia turgida Haw. | |
| Beyene et al. | Protocol optimization for in vitro propagation of Kulfo, orange flesh sweet potato (Ipomoea batatas) variety using shoot tip culture | |
| CN111616049B (zh) | 一种草果组培育苗方法 | |
| CN1771796A (zh) | 一种蚕豆离体培养方法 | |
| CN110663555B (zh) | 一种重瓣臭茉莉快速繁殖方法 | |
| CN114680044B (zh) | 一种鹿蹄草的组培快繁育苗方法 | |
| CN110024688B (zh) | 一种锦鸡儿芽增殖与植株再生的方法及其培养基 | |
| CN104170734A (zh) | 一种阴香的快速繁殖方法 | |
| Wang et al. | Efficient somatic embryogenesis and plant regeneration from immature embryos of Tapiscia sinensis Oliv., an endemic and endangered species in China | |
| CN106386484A (zh) | 午香草培育繁殖方法 | |
| CN108243951B (zh) | 一种白花蛇舌草的组织培养方法 | |
| Naidu et al. | Conservation of an endangered medicinal plant Centella asiatica through plant tissue culture | |
| CN100441091C (zh) | 植物组织培养生产驱蚊草的方法 | |
| CN115250923B (zh) | 一种八角茴香的组培快繁方法 | |
| CN115644067B (zh) | 一种生产滇黄精双单倍体的方法 | |
| CN108651283A (zh) | 一种互叶白千层组培苗生根培养方法 | |
| CN110192528B (zh) | 一种青钱柳不定芽诱导及继代增殖培养方法 | |
| CN103704132A (zh) | 广藿香多倍体的诱导方法 | |
| CN115997683B (zh) | 一种四倍体裂叶桦的高效创制方法 | |
| CN113575334B (zh) | 基于器官直接发生途径的半夏快速繁殖方法 | |
| CN114190276B (zh) | 一种利用叶片生产盘龙参种苗的组培快繁的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20240111 Address after: 673200 CCCC Green Spice Industrial Park, Shangjiang Town, Lushui City, Nujiang Lisu Autonomous Prefecture, Yunnan Province Patentee after: Nujiang Angda Biotechnology Development Co.,Ltd. Address before: 2 / F, scientific research office building, Yunnan Academy of Agricultural Sciences, 2238 Beijing Road, Kunming, Yunnan 650000 Patentee before: INSTITUTE OF MEDICINAL PLANTS, YUNNAN ACADEMY OF AGRICULTURAL SCIENCES Patentee before: Yunnan plant insect Medicine Biotechnology Co.,Ltd. |
|
| TR01 | Transfer of patent right |