CN111990260A - 一种酮型广藿香的组培快繁方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其是涉及一种酮型广藿香的组培快繁方法，包括无菌外植体的获取、愈伤组织诱导培养、丛生芽诱导增殖不定芽增殖培养、生根培养和移栽。本发明酮型广藿香的组培快繁方法具有成功率高、诱导率高、繁殖系数高、遗传稳定性高、种苗品质好、成本低、种苗生长一致等特点，具有普遍的适用性。

Description

一种酮型广藿香的组培快繁方法
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其是涉及一种酮型广藿香的组培快繁方法。
背景技术
广藿香(Pogostemon cablin(Blanco)Benth.)为唇形科刺蕊草属植物，以干燥地上部分入药，具有芳香化浊，开胃止呕，发表解暑之功效，是著名的“十大南药”之一，被历代医家视为暑湿时令之要药，是“藿香正气丸”“抗病毒口服液”等的30多种中成药的重要原料。目前广藿香主要分布在广东、海南，按照产地不同可以分为石牌藿香(牌香)、高要藿香(肇香)、湛江藿香(湛香)和海南藿香(琼香)4种，传统经验认为牌香品质最优，为道地药材，药用最佳，肇香与牌香品质相近；而湛香是在20世纪50年代从海南地区引种，其品质与琼香品质相近，主要用于提取广藿香油，药用价值较差。目前主要的药效成分广藿香醇和广藿香酮的含量变化及二者的比值有着显著的差别，据此广藿香被划分为两种化学型，牌香与肇庆高要莲塘广藿香以广藿香酮含量最高，为酮型广藿香，而湛香与琼香以广藿香醇含量最高，为醇型广藿香。
广藿香在广东、海南地区极少见开花，主要通过扦插繁殖。随着城市化发展，道地药材“酮型”石牌广藿香已濒临灭绝，石牌地区几乎已无种植，而与牌香品质最相近的为肇庆高要莲塘产地的广藿香，由于根系少、生长慢、扦插繁殖难度高、市场经济等原因，也越来越少人种植。虽有一些广藿香组织培养的研究，但酮型莲塘广藿香的组织培养研究未见报道。为挽救同样濒临灭绝的优质的药材品种—酮型莲塘广藿香，并为今后的优质品种改良及其学术研究保留种苗，建立酮型广藿香组培快繁方法显得尤为重要。
发明内容
针对现有技术存在的不足，本发明的目的之一是提供一种培养基简单、成功率高，诱导率高，繁殖系数高，遗传稳定性高，种苗品质好、成本低和广藿香酮含量高的酮型广藿香组培快繁方法，应用该方法能满足酮型广藿香人工栽培的规模化种植需求，以解决酮型广藿香资源日渐稀少而市场上供不应求的现状。
本发明的上述发明目的是通过以下技术方案得以实现的：
一种酮型广藿香的组培快繁方法，包括如下步骤：
S1、无菌外植体的获取：摘取健康幼嫩的莲塘广藿香叶片，自来水冲洗1～2min，无菌吸水纸吸干表面水分，置于超净工作台上用75％的酒精漂洗2～5s，无菌水清洗2次，每次1min，再用5％次氯酸钠溶液消毒5～10min，无菌水漂洗4～5次，每次1min，得到消毒的莲塘广藿香叶片；
S2、愈伤组织诱导培养：将步骤S1消毒的莲塘广藿香叶片剪成0.25～1cm2大小的小叶块并接种到诱导培养基中，先置于黑暗中培养7～10天，再给予光照条件培养35～40天，即可诱导得到愈伤组织；
S3、不定芽诱导增殖培养：将步骤S2诱导得到的愈伤组织接种到丛生芽诱导增殖培养基中，培养45～60天，得到增殖培养的不定芽；
S4、生根培养：从步骤S3增殖培养的不定芽的基部剪取1.0～3.0cm不定芽，接种到生根培养基中，培养8～10天不定芽开始生根，继续培养40～45天获得可移载试管苗；
S5、移栽：将步骤S4得到的可移载试管苗取出，冲洗干净根部的培养基后，在自然光下用普通自来水中水培炼苗5～7天，期间用透明塑料薄膜覆盖，移栽至普通土壤中，浇以0.5％多菌灵和0.2％生根粉混合溶液，即得。
优选的，所述步骤S2中的诱导培养基的配方为：MS+1.0～2.0mg/L 6-BA+0.05～0.2mg/L2,4-D+20～50mg/L PVP+10～20mL/L椰子汁，20～40g/L蔗糖和5.0～7.0g/L琼脂，pH为5.8～6.0，所述诱导培养基需在温度115℃下高温湿热灭菌20min冷却后备用。
优选的，所述步骤S2中的诱导培养基的配方为：MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L2,4-D+25mg/L PVP+15mL/L椰子汁，30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂，pH为5.8，所述诱导培养基需在温度115℃下高温湿热灭菌20min冷却后备用。
优选的，所述步骤S3中的诱导增殖培养基的配方为：MS培养基+0.2～1.0mg/L6-BA+0.1～0.2mg/L NAA或0.5～1.0mg/L IBA，20～40g/L蔗糖和5.0～7.0g/L琼脂，pH为5.8～6.0，所述诱导增殖培养基需在温度115℃下高温湿热灭菌20min冷却后备用。
优选的，所述步骤S3中的诱导增殖培养基的配方为：MS+0.2mg/L 6-BA+0.1mg/LNAA，30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂，pH为5.8，所述诱导增殖培养基需在温度115℃下高温湿热灭菌20min冷却后备用。
优选的，所述步骤S4中的生根培养基的的配方为：1/2MS+0.1～0.2mg/L IBA，20～40g/L蔗糖和5.0～7.0g/L琼脂，pH为5.8～6.0，所述生根培养基需在温度115℃下高温湿热灭菌20min冷却后备用。
优选的，所述步骤S4中的生根培养基的的配方为：1/2MS+0.1mg/L IBA，30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂，pH为5.8，所述生根培养基需在温度115℃下高温湿热灭菌20min冷却后备用。
优选的，所述步骤S2愈伤组织诱导培养、步骤S3丛生芽诱导增殖不定芽增殖培养和步骤S4生根培养的培养温度为25～26℃，光照强度为1500～2000lx，光照时间为14～16小时/天。
本发明与现有技术相比，本发明具有以下的优点和效果：
(1)本发明选择莲塘广藿香叶片为外植体，通过筛选和优化愈伤组织诱导、丛生芽增殖、生根培养等过程的培养基配方和培养条件，经诱导、继代、生根以及移栽等步骤，实现了莲塘广藿香的快速繁殖，具有成功率高，诱导率高，繁殖系数高，遗传稳定性高，种苗品质好、成本低，种苗生长一致等特点。
(2)本发明采用植物组织培养技术，添加PVP和椰子汁，建立了莲塘广藿香的组培快繁，能够协同促进莲塘广藿香中广藿香酮的生成，具有普遍的适用性，对于促进莲塘广藿香的推广种植和保护优质的药材品种资源具有重大意义，并有助于今后的莲塘广藿香优质品种改良及其学术研究。
本发明中0.5％多菌灵和0.2％生根粉的浓度分数为质量-体积分数，其余涉及的浓度分数均为体积分数。
附图说明
图1为莲塘广藿香愈伤组织。
图2为莲塘广藿香不定芽。
图3为莲塘广藿香伸长的组培苗。
图4为莲塘广藿香生根的组培苗。
图5为实施例2移栽后的莲塘广藿香种苗。
图6为实施例2移栽后的莲塘广藿香种苗。
具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。
本发明的所有试剂均为市售购得，其中，多菌灵，购于辽宁省营口雷克农药有限公司，批号：PD85150-26；生根粉，购于安徽省无为县花卉肥料厂；PVP，购于上海阿拉丁生化科技股份有限公司，产品编号：P110607。
试验例1生长调节剂组合的筛选
1、不同的植物生长调节剂组合对愈伤组织诱导的影响
以MS为基本培养基、培养基中添加30g/L蔗糖、30mg/L PVP、10ml/L椰子汁，7.0g/L琼脂、pH为5.8，培养温度为25℃，连续光照14h/d，光照强度1500-2000Lx。本发明培养基均需在温度115℃下高温湿热灭菌20min冷却后备用(下同)。各植物生长调节剂组合愈伤组织诱导培养基各接种30瓶，每瓶1块外植体，重复3次，培养40天后记录愈伤组织生长情况和诱导率，不同类型及浓度的植物生长调节剂组合对愈伤组织诱导的影响见表1。
其中椰子汁配置方法为：将购买成熟海南椰子，取椰汁，加热煮沸5min后，过滤取上清液，贮存于的-20℃的低温冰箱内，备用。
表1不同类型及浓度的植物生长调节剂组合对愈伤组织诱导的影响
Figure BDA0002695548630000041
由表1可知，植物生长调节剂组合为1.0～2.0mg/L 6-BA+0.05～0.2mg/L 2,4-D时，愈伤诱导率大于77％以上，愈伤组织生长较好，质地疏松，呈白色或浅黄色团块状。
2、不同的植物生长调节剂组合对不定芽诱导增殖的影响
以MS为基本培养基、培养基中添加30g/L蔗糖、7.0g/L琼脂、pH为5.8，培养温度为25℃，连续光照14h/d，光照强度1500-2000Lx。各植物生长调节剂组合不定芽增殖诱导培养基各接种30瓶，每瓶1块外植体，重复3次。培养60天后记录不定芽生长情况，统计每瓶高于1cm的不定芽数、最高芽平均长度、玻璃化率、出芽率。不同类型及浓度的植物生长调节剂组合对不定芽诱导增殖的影响见表2。
表2不同类型及浓度的植物生长调节剂组合对不定芽诱导增殖的影响
Figure BDA0002695548630000051
由表2可知，植物生长调节剂为0.2～1.0mg/L 6-BA+0～0.2mg/L NAA或0.2～1.0mg/L6-BA+0.5～1.0mg/L IBA时，不定芽玻璃化率低，出芽率高，高于1cm不定芽数较多，芽平均长度较长，不定芽叶片较宽，呈绿色或浅绿色，茎偏粗，丛芽较多，生长较好。
3、不同的植物生长调节剂组合对生根的影响
以1/2MS为基本培养基，培养基中添加30g/L蔗糖、7.0g/L琼脂、pH为5.8，培养温度为25℃，连续光照14h/d，光照强度1500-2000Lx。各植物生长调节剂组合生根培养基各接种40瓶，每瓶移1个不定芽，重复3次。培养40天后记录不定芽生根生长情况，统计每瓶不定芽的开始生根天数，株高，主根数，平均主根长度及生根率。不同类型及浓度的植物生长调节剂组合对不定芽诱导增殖的影响见表3。
表3不同类型及浓度的植物生长调节剂组合对生根的影响
Figure BDA0002695548630000052
Figure BDA0002695548630000061
注：“—”表示不作记录，由于该培养基的不定芽均无生根，叶片枯萎，难以生长，所以无法统计其株高，根数，故不作统计。同一例不同字母表示差异显著。P＜0.05。
由表3可知，植物生长调节剂为0～0.2mg/L IBA时，莲塘广藿香不定芽生根较快，主根数较多且较长，根系丰富，生根率高，叶片较宽大，茎偏粗，植株生长较好，而植物生长调节剂为0.1～0.2mg/L NAA的不定芽的基部均有小块愈伤细胞团形成，其大部分的根从细胞团长出，水培炼苗时，该细胞团及其根系逐渐变黑死亡，植株逐渐枯萎。综合各项指标，莲塘广藿香生根最佳的植物生长调节剂为0.1～0.2mg/L IBA。
实施例1
一种酮型广藿香的组培快繁方法，包括如下步骤：
S1、无菌外植体的获取：选取在肇庆高要莲塘镇广藿香种植基地中健康无病虫害、幼嫩的广藿香叶片，摘取时间为晴天的14时左右。叶片摘取后迅速装入干净容器中，低温保水保湿处理及时带回实验室。将摘取的幼嫩莲塘广藿香叶片，自来水缓慢冲洗2min，无菌吸水纸吸干表面水分，置于超净工作台中于75％的乙醇溶液漂洗5s，无菌水漂洗2次，每次1min，然后用5％次氯酸钠溶液消毒10min后无菌水漂洗5次，每次1min。
S2、愈伤组织诱导培养：将消毒后的莲塘广藿香叶片剪成0.25～1cm2大小的小叶块并接种到愈伤组织诱导培养基中,置于黑暗中培养10d后给予光照条件，培养17天叶块边缘开始有愈伤细胞形成，培养40d得到疏松白色的愈伤组织，诱导率达93.33％。所述的愈伤组织诱导培养基为:MS培养基、1.0mg/L6-BA、0.1mg/L2,4-D、20mg/L PVP、20mL/L椰子汁、30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂，pH为5.9。
S3、不定芽诱导增殖培养：将已消毒后的莲塘广藿香叶片剪成0.25～1cm2大小的小叶块接种到不定芽诱导增殖培养基中，培养20天开始长出不定芽，继续培养40天实现不定芽的增殖，长芽率达91.67％。所述不定芽诱导增殖培养基为：MS培养基、0.6mg/L 6-BA、1.0mg/LNAA、30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂，pH为5.9。
S4、生根培养：从基部剪取步骤S3增殖得到的长约1.5～3.0cm且生长良好的不定芽并接种到生根培养基中，培养10天时不定芽开始长根，继续培养45天获得可移栽试管苗，生根率达到95％。所述生根培养基为：1/2MS培养基、30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂，pH为6.0。
S5、移栽：将步骤S4根系生长较好的组培苗取出，冲洗干净根部的培养基后，在自然光下在普通自来水中水培炼苗10天，期间用透明塑料薄膜覆盖，然后移栽于普通土壤中，浇以0.5％多菌灵以及0.2％生根粉混合溶液，获得莲塘广藿香种苗。移栽30天后成活率达96.65％。
上述步骤S2～S4培养条件为：培养温度为25℃，光照强度为1500lx，光照时间为14小时/天。培养基高温湿热灭菌，115℃/20min。
实施例2
一种酮型广藿香的组培快繁方法，包括如下步骤：
S1、无菌外植体的获取：选取盆栽的从肇庆高要莲塘镇移栽的已生长半年时间的广藿香植株，摘取其健康无病虫害、幼嫩的叶片，摘取时间为晴天的14时左右。叶片摘取后迅速装入干净容器中，低温保水保湿处理及时带回实验室。将广藿香叶片用自来水缓慢冲洗1min，无菌吸水纸吸干表面水分，置于超净工作台中于75％的乙醇溶液漂洗3s，无菌水漂洗2次，每次1min，然后用5％次氯酸钠溶液消毒8min，无菌水漂洗5次，每次1min。
S2、愈伤组织诱导培养：将消毒后的莲塘广藿香叶片剪成0.25～1cm2大小的小叶块并接种到愈伤组织诱导培养基中，置于黑暗中培养7d后给予光照条件，培养15天叶块边缘开始有愈伤细胞形成，培养40d得到疏松白色的愈伤组织，如图1，诱导率达95.10％。所述的愈伤组织诱导培养基为:MS培养基、1.0mg/L6-BA、0.05mg/L 2,4-D、25mg/L PVP、15mL/L椰子汁、30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂，pH为5.8。
S3、不定芽诱导增殖培养：将已消毒后的莲塘广藿香叶片剪成0.25～1cm2大小的小叶块接种到不定芽诱导增殖培养基中，培养16天左右开始长出不定芽，继续培养40天实现不定芽的增殖，如图2。出芽率达95.11％。所述不定芽诱导增殖培养基为：MS培养基、0.2mg/L6-BA、0.1mg/L IBA、30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂，pH为5.8。
S4、生根培养：从基部剪取步骤S3增殖得到的长约1.5～3.0cm且生长良好的不定芽并接种到生根培养基中，培养9天时不定芽开始长根，其伸长和生根组培苗如图3和图4，继续培养45天左右获得可移栽试管苗。生根率达到100％。所述生根培养基为：1/2MS培养基、0.1mg/L IBA、30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂，pH为5.8。
S5、移栽：将步骤S4根系生长较好的组培苗取出，冲洗干净根部的培养基后，在自然光下在普通自来水中水培炼苗7天，期间用透明塑料薄膜覆盖，然后移栽于普通土壤中，浇以0.5％多菌灵以及0.2％生根粉混合溶液，获得莲塘广藿香种苗。移栽30天后成活率达到97.32％。其移栽25天和移栽120天后的莲塘广藿香种苗如图5和图6。
上述步骤S2～S4培养条件为：培养温度为26℃，光照强度为1500lx，光照时间为15小时/天。培养基高温湿热灭菌，115℃/20min。
实施例3
一种酮型广藿香的组培快繁方法，包括如下步骤：
S1、无菌外植体的获取：选取盆栽的已生长半年时间莲塘广藿香组培苗植株，摘取其健康无病虫害、幼嫩的叶片。摘取时间为晴天的14时左右。叶片摘取后迅速装入干净容器中，低温保水保湿处理及时带回实验室。将广藿香叶片用自来水缓慢冲洗1min，无菌吸水纸吸干表面水分，置于超净工作台中于75％的乙醇溶液漂洗2s，无菌水漂洗2次，每次1min，然后用5％次氯酸钠溶液消毒5min，无菌水漂洗4次，每次1min。
S2、愈伤组织诱导培养：将消毒后的莲塘广藿香叶片剪成0.25～1cm2大小的小叶块并接种到愈伤组织诱导培养基中，置于黑暗中培养7d后给予光照条件，培养15天叶块边缘开始有愈伤细胞形成，培养37d得到疏松白色的愈伤组织，诱导率达93.33％。所述的愈伤组织诱导培养基为:MS培养基、2.0mg/L6-BA、0.1mg/L 2,4-D、50mg/L PVP、10mL/L椰子汁、30g/L蔗糖、7.0g/L琼脂、pH为6.0。
S3、不定芽诱导增殖培养：将步骤S2得到的疏松白色的愈伤组织接种到不定芽诱导增殖培养基中，培养12天左右开始长出不定芽，继续培养35天实现不定芽的增殖。出芽率达94.92％。所述不定芽诱导增殖培养基为：MS培养基、0.5mg/L 6-BA、0.1mg/LNAA、30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂，pH为5.8。
S4、生根培养：从基部剪取步骤S3增殖得到的长约1.5～3.0cm且生长良好的不定芽并接种到生根培养基中，培养10天时不定芽开始长根，继续培养40天左右获得可移栽试管苗。生根率达到100％。所述生根培养基为：1/2MS培养基、0.2mg/LIBA、30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂，pH为5.8。
S5、移栽：将步骤S4根系生长较好的组培苗取出，冲洗干净根部的培养基后，在自然光下在普通自来水中水培炼苗5天，期间用透明塑料薄膜覆盖，然后移栽于普通土壤中，浇以0.5％多菌灵以及0.2％生根粉混合溶液，获得莲塘广藿香种苗。移栽30天后成活率达到95.80％。
上述步骤S2～S4培养条件为：培养温度为25℃，光照强度为2000lx，光照时间为16小时/天。培养基高温湿热灭菌，115℃/20min。
对比例1
选取盆栽的从肇庆高要莲塘镇移栽的已生长半年时间的广藿香植株的健壮枝条为外植体，其余与实施例2相同，结果显示，愈伤组织诱导培养诱导率为67.22％，出芽率仅为71.11％，生根培养的生根率为80.31％，移栽30天后成活率，仅为72.32％。猜测原因是由于腋芽处不容易彻底清洗，外植体的褐化率高，导致诱导率和萌发率低，不能快速组培快繁出藿香幼苗。
对比例2
未在诱导培养基中添加PVP，其余与实施例2相同，结果显示，愈伤组织诱导培养诱导率为77.22％，不定芽诱导出芽率仅为79.64％，生根培养的生根率为82.14％，移栽30天后成活率，仅为75.39％。
对比例3
未在诱导培养基中添加椰子汁，其余与实施例2相同，结果显示，愈伤组织诱导培养诱导率为71.23％，不定芽诱导出芽率仅为75.11％，生根培养的生根率为84.57％，移栽30天后成活率为78.14％。
试验例2广藿香酮含量测定
参考吴卓娜.GC-FID法测定不同产地广藿香药材中3种挥发性成分[J].数理医药学杂志,2017,30(08):1189-1192测定实施例1-3和对比例1-3中广藿香移栽120天后的广藿香酮含量。进样口温度为230℃；检测器温度为250℃；分流进样(50∶1)；程序升温:初始70℃,2℃/min升至230℃,保持11min；流速1mL/min。测定结果如表4。
表4广藿香酮含量测定结果
组别 广藿香酮含量(mg/g)
实施例1 3.6
实施例2 4.5
实施例3 3.9
对比例1 1.2
对比例2 1.7
对比例3 1.6
由上表4可知，本发明采用植物组织培养技术，选择莲塘广藿香叶片为外植体，添加PVP和椰子汁，能够协同促进莲塘广藿香中广藿香酮的生成，有效增加莲塘广藿香中广藿香酮的含量。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims (8)

1.一种酮型广藿香的组培快繁方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、无菌外植体的获取：摘取健康幼嫩的莲塘广藿香叶片，自来水冲洗1～2min，无菌吸水纸吸干表面水分，置于超净工作台上用75％的酒精漂洗2～5s，无菌水清洗2次，每次1min，再用5％次氯酸钠溶液消毒5～10min，无菌水漂洗4～5次，每次1min，得到消毒的莲塘广藿香叶片；
S2、愈伤组织诱导培养：将步骤S1消毒的莲塘广藿香叶片剪成0.25～1cm2大小的小叶块并接种到诱导培养基中，先置于黑暗中培养7～10天，再给予光照条件培养35～40天，即可诱导得到愈伤组织；
S3、不定芽诱导增殖培养：将步骤S2诱导得到的愈伤组织接种到丛生芽诱导增殖培养基中，培养45～60天，得到增殖培养的不定芽；
S4、生根培养：从步骤S3增殖培养的不定芽的基部剪取1.0～3.0cm不定芽，接种到生根培养基中，培养8～10天不定芽开始生根，继续培养40～45天获得可移载试管苗；
S5、移栽：将步骤S4得到的可移载试管苗取出，冲洗干净根部的培养基后，在自然光下用普通自来水中水培炼苗5～7天，期间用透明塑料薄膜覆盖，移栽至普通土壤中，浇以0.5％多菌灵和0.2％生根粉混合溶液，即得。
2.根据权利要求1所述的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤S2中的诱导培养基的配方为：MS+1.0～2.0mg/L 6-BA+0.05～0.2mg/L 2,4-D+20～50mg/L PVP+10～20mL/L椰子汁，20～40g/L蔗糖和5.0～7.0g/L琼脂，pH为5.8～6.0，所述诱导培养基需在温度115℃下高温湿热灭菌20min冷却后备用。
3.根据权利要求2所述的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤S2中的诱导培养基的配方为：MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L 2,4-D+25mg/L PVP+15mL/L椰子汁，30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂，pH为5.8，所述诱导培养基需在温度115℃下高温湿热灭菌20min冷却后备用。
4.根据权利要求1所述的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤S3中的诱导增殖培养基的配方为：MS+0.2～1.0mg/L 6-BA+0.1～0.2mg/L NAA或0.5～1.0mg/L IBA，20～40g/L蔗糖和5.0～7.0g/L琼脂，pH为5.8～6.0，所述诱导增殖培养基需在温度115℃下高温湿热灭菌20min冷却后备用。
5.根据权利要求4所述的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤S3中的诱导增殖培养基的配方为：MS+0.2mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA，30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂，pH为5.8，所述诱导增殖培养基需在温度115℃下高温湿热灭菌20min冷却后备用。
6.根据权利要求1所述的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤S4中的生根培养基的的配方为：1/2MS+0.1～0.2mg/L IBA，20～40g/L蔗糖和5.0～7.0g/L琼脂，pH为5.8～6.0，所述生根培养基需在温度115℃下高温湿热灭菌20min冷却后备用。
7.根据权利要求6所述的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤S4中的生根培养基的的配方为：1/2MS+0.1mg/L IBA，30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂，pH为5.8，所述生根培养基需在温度115℃下高温湿热灭菌20min冷却后备用。
8.根据权利要求1所述的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤S2愈伤组织诱导培养、步骤S3丛生芽诱导增殖不定芽增殖培养和步骤S4生根培养的培养温度为25～26℃，光照强度为1500～2000lx，光照时间为14～16小时/天。
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