CN114671961A - 一种具有抗氧化功效的肉苁蓉组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及功能食品制备技术领域，具体涉及一种具有抗氧化功效的肉苁蓉组合物；组合物中包含有肉苁蓉多糖和蛋白肽；本发明将具有抗氧化功能的肉苁蓉多糖和蛋白肽配合使用，制备的组合物具有抗氧化功能，能够有效的提高肉苁蓉的养殖价值。
Description
技术领域
本发明属于功能食品制备技术领域，具体涉及一种具有抗氧化功效的肉苁蓉组合物。
背景技术
人体与氧气交互的每一次新陈代谢，都会产生氧化还原反应，进而产生自由基。适当的自由基能够在体内发挥重要作用，但如果自由基过多，突破控制时，会对人体中的各种分子，如脂肪酸、蛋白质及DNA等造成破坏。这些受到破坏的分子越来越多，在人体内发生各种缓慢的炎性反应，导致人体功能下降，危害健康。与此同时，自由基会使皮肤弹性纤维受到破坏，刺激色素形成，皮肤干燥松弛，色斑增多，加剧衰老。
肉苁蓉是一种寄生在沙漠树木梭梭根部的寄生植物，从梭梭寄主中吸取养分及水分，肉苁蓉具有补肾阳、益精血、润肠道、抗衰老等价值。随着人们对于肉苁蓉的认识不断了解，对于肉苁蓉的需求逐步扩大，肉苁蓉的深加工也得到发展，如肉苁蓉被深加工成肉苁蓉酒、肉苁蓉养生液等，通过对肉苁蓉进行深加工，从而提高肉苁蓉的养殖价值。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有抗氧化功效的肉苁蓉组合物，所提供的肉苁蓉组合物包含有具有抗氧化能力的肉苁蓉多糖和蛋白肽。
本发明首先提供一种有抗氧化能力的肉苁蓉多糖，其制备方法是将肉苁蓉粉末经过浸泡和煎煮后，再经过浓缩、离心以及干燥所制备的；
所述的浸泡，是将肉苁蓉粉末加入90％的乙醇浸泡；
所述的煎煮，是将浸泡过滤的滤渣加水煎煮；
所述的浓缩，是在合并煎煮滤液后，再将滤液蒸发浓缩至原体积的1/5，再加入4倍体积的95％乙醇，充分搅拌后进行沉淀；
所述的干燥，是将浓缩沉淀在4℃、3000r/min的条件下，离心10min后，再洗涤、冷冻干燥；
一种具有抗氧化功效的组合物，其中包含有肉苁蓉多糖和蛋白肽；
所述的蛋白肽，其制备方法如下：
用打浆机将扇贝肉打成浆，加入胰蛋白酶，搅拌酶解反应2h；然后用12000rpm的管式离心机离心；将离心后的上清液超滤、纯化所制备的；
所述的酶解反应，其酶解温度为酶解温度58℃；
所述的超滤，是将上清液先用孔径为6kDa的陶瓷膜超滤，再用孔径为2kDa的膜二次超滤；
所述的蛋白肽，其氨基酸序列为Ser-Glu-Cys-Val-His-Leu。
本发明将具有抗氧化功能的肉苁蓉多糖和蛋白肽配合使用，制备的组合物具有抗氧化功能，能够有效的提高肉苁蓉的养殖价值。
附图说明
图1：为本发明实施例1中自由基清除能力的统计图；
图2：为本发明实施例2中自由基清除能力的统计图；
图3：为本发明实施例4中自由基清除能力的统计图。
具体实施方式
本发明将具有抗氧化功能的蛋白肽添加到肉苁蓉多糖中，制成的可食用的制品具有抗氧化的功效。
下面结合实施例和附图对本发明进行详细的描述。
实施例1：制备有抗氧化功能的肉苁蓉多糖
1)肉苁蓉多糖的制备：
(1)称取肉苁蓉粉末3g，加入90％的乙醇浸泡2h后，过滤取滤渣；
(2)将滤渣加水煎煮3次，每次2h，用纱布过滤，并合并滤液；
(3)将步骤(2)中的滤液蒸发浓缩至原体积的1/5后，加入4倍体积的95％乙醇，充分搅拌后置于冰箱过夜沉淀；
(4)弃去上清，在4℃、3000r/min的条件下，离心10min，收集沉淀；
(5)将步骤(4)中收集的沉淀用无水乙醇和丙酮各洗涤3次，然后冷冻干燥，研碎得到石灰状粉末，即肉苁蓉多糖粉末。
2)清除自由基能力的检测：
按照10mg/mL、15mg/mL、20mg/mL的浓度将肉苁蓉多糖溶解在蒸馏水中，检测在不同浓度下的自由基清除能力。检测方法如下：
DPPH·自由基清除能力测定：加入2mL x10-4 mol/L DPPH溶液，混匀后在室温下避光反应20min，4000r/min离心10min，以95％乙醇调零，在517nm处测其吸光度Ai；同时测定2mL 95％乙醇与2mL样品溶液混合后的吸光度Aj；以及2mLDPPH溶液与2m以去离子水混合后的吸光度A0；其清除率(％)＝[1-(Ai-Aj)/Ao]×100％。
02 -·自由基清除能力测定：取4.5mL 50mmol/L pH 8.2的Tris-HCl缓冲溶液，加入0.1mL不同浓度的样品溶液，于25℃保温10min，然后加入0.3mL25℃预温的5mmol/L邻苯三酚，混匀后迅速加入干燥的比色皿中，在波长320nm处，从吸光度值达到0.2起，每隔20mm测定1次吸光度值。以等量的10mmol/L HCl代替邻苯三酚调零。空白组以等量的去离子水代替样液，其它步骤同前，作出样品溶液与邻苯三酚，去离子水与邻苯三酚混合液在320nm处吸光度值随时间的变化曲线，其回归方程的斜率作为邻苯三酚的自氧化速率V样品、V空白(ΔOD/min)；其清除率(％)＝(V空白-V样品)/V空白×100％。
表1：自由基清除能力记录表
| 浓度 | O<sub>2</sub><sup>-</sup>·自由基清除率(％) | DPPH·自由基清除率(％) |
| 10mg/mL | 45.6 | 32.7 |
| 15mg/mL | 56.2 | 45.3 |
| 20mg/mL | 68.6 | 63.8 |
由表1和图1所示，制备的肉苁蓉多糖具有抗氧化活性，随着浓度的增加，其抗氧化活性得到增强，可清除所测试的不同自由基种类。
实施例2：制备具有抗疲劳功能的蛋白肽
1、制备蛋白肽
将新鲜扇贝清洗后，扇贝肉加入3L纯化水，用打浆机将扇贝肉打成浆，加入胰蛋白酶，酶解温度58℃；搅拌酶解反应2h；然后用12000rpm的管式离心机离心，得到酶解产物。
将酶解产物离心后的上清液利用孔径为6kDa的陶瓷膜超滤；再用孔径为2kDa的膜二次超滤；分别得到分子量小于2KDa(AB-1)、2kDa-6kDa(AB-2)和大于6kDa(AB-3)的三种不同分子质量范围的酶解液组分；然后将三种酶解液进分别行冷冻干燥获得多肽粉。
2、清除自由基能力的检测
分别按照5mg/mL、10mg/mL、15mg/mL、20mg/mL的浓度将多肽粉溶解在蒸馏水中，其中超滤前AB样品、AB-1、AB-2和AB-3在不同浓度下的自由基清除能力。
表2：O2 -·自由基清除能力记录表
表3：DPPH·自由基清除能力记录表
由表2和表3、图2所示，制备的四种酶解液都具有抗氧化活性，可清除所测试的不同自由基种类。且水解产物的抗氧化能力随着剂量增加而提高。且AB-2的自由基清除能力在四种酶解液中最高。
实施例3：蛋白肽的纯化
1)蛋白肽提纯
将超滤后抗氧化活性最高的多肽(AB-2)的蛋白肽配置成100mg/ml溶液，通过大孔吸附树脂进行吸附，分别用纯水，25％乙醇，45％乙醇，65％乙醇，85％乙醇和95％乙醇洗脱，得到5个洗脱组分。对5个洗脱组分分别进行一氧化氮合酶活性检测(Nitric OxideSynthase Activity Assay试剂盒，Colorimetric)。检测结果表明65％乙醇洗脱组分具有最好的活性。
将65％乙醇洗脱组分再次利用HPLC进行分离，分离条件如下：仪器：Agilent1260型高效液相色谱仪，色谱柱：依利特SimoChrom ODS-BP5μm(4.6mm×250mm)，流动相：甲醇和0.1％TFA水，流速：1ml/min，检测波长：220nm，收集不同时段的洗脱液，经过一氧化氮合酶活性检测，发现30-32min洗脱液的活性最好。
2)功能蛋白肽的HPLC分析
将30-32min洗脱液用高效液相色谱C18分析柱对具有最好的效果的30％甲醇洗脱峰再次进行纯化，得到更纯的单一峰，使分离的样品达到可以测序的纯度。
3)蛋白肽结构鉴定
对纯化的蛋白肽进行进行多肽结构鉴定，色谱条件如下所示：仪器类型：LCMS-9030Q-TOF四极杆-飞行时间质谱仪，色谱柱：Inertsil HILIC C18反相色谱柱150mm×3.0mm，3μm，岛津，日本)，柱温：30℃，进样体积：1.0μL；流动相：A为0.1％(v/v)甲酸水溶液，流动相B为0.1％(v/v)甲酸乙腈溶液，梯度洗脱程序：0-5.0min，5％，5.0-10.0min，10％，10.0-15.0min，20％，15.0-20.0min，40％；流速为0.3mL/min，质谱离子模式：ESI源，采用正离子模式，离子源接口电压：4.0kV，气体流速：10.0L/min，干燥气体流速：10.0L/min，加热气体流速：10.0L/min；加热模块温度：400℃，接口温度：300℃，扫描模式：全扫描模式(m/z50-2000)。
测序获得的蛋白肽的氨基酸序列为Ser-Glu-Cys-Val-His-Leu，其分子量为3568Da，该多肽命名为PA502。
实施例4：抗氧化肽氨基酸序列的抗氧化效果检测
利用固相合成法，按照多肽的氨基酸序列进行合成，得到了合成肽。
分别配制浓度为20mg/mL的合成肽(PA502)和AB-2蛋白肽，检测合成肽和AB-2蛋白肽的抗氧化活性(重复4次，取平均值)见表3所示。
表4：抗氧化活性记录表
由表3和图3可知，合成肽(PA502)的DPPH·自由基清除率和O2 -·自由基清除率均明显优于AB-2(＜0.05)，合成肽具有优异的抗氧化活性。
实施例5：制备肉苁蓉组合物
将实施例3中制备的蛋白肽添加到肉苁蓉多糖溶剂中；
其中一种具体的制品的制备过程如下：
1)取肉苁蓉多糖3份、水20份进行混合后搅拌制成溶剂；
2)将蛋白肽添加到溶剂中，添加浓度为12-32μg/ml。
本发明将具有抗氧化功能的蛋白肽添加到肉苁蓉多糖溶剂中，使制成的可食用的制品具有抗氧化的效果。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不会使相应技术方案的本质脱离本发明技术方案的保护范围。
Claims (10)
1.一种有抗氧化能力的肉苁蓉多糖，其特征在于，其制备方法是将肉苁蓉粉末经过浸泡和煎煮后，再经过浓缩、离心以及干燥所制备的。
2.根据权利要求1所述的肉苁蓉多糖，其特征在于，所述的浸泡，是将肉苁蓉粉末加入90％的乙醇浸泡2h。
3.根据权利要求1所述的肉苁蓉多糖，其特征在于，所述的煎煮，是将浸泡过滤的滤渣加水煎煮3次，每次2h。
4.根据权利要求1所述的肉苁蓉多糖，其特征在于，所述的浓缩，是在合并煎煮滤液后，再将滤液蒸发浓缩至原体积的1/5，再加入4倍体积的95％乙醇，充分搅拌后进行沉淀。
5.根据权利要求1所述的肉苁蓉多糖，其特征在于，所述的干燥，是将浓缩沉淀在4℃、3000r/min的条件下，离心10min后，再洗涤、冷冻干燥。
6.一种具有抗氧化功效的组合物，其特征在于，其中包含有肉苁蓉多糖和蛋白肽。
7.根据权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述的蛋白肽，是用打浆机将扇贝肉打成浆，加入胰蛋白酶，搅拌酶解反应2h；然后用12000rpm的管式离心机离心；将离心后的上清液超滤、纯化所制备的。
8.根据权利要求7所述的组合物，其特征在于，所述的酶解反应，其酶解温度为58℃。
9.根据权利要求7所述的组合物，其特征在于，所述的超滤，是将上清液先用孔径为6kDa的陶瓷膜超滤，再用孔径为2kDa的膜二次超滤。
10.根据权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述的蛋白肽，其氨基酸序列为Ser-Glu-Cys-Val-His-Leu。
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