CN114668076B - 一种利用复合微生物菌剂制备黄贮饲料的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种利用复合微生物菌剂制备黄贮饲料的方法,首先采用混合溶液对玉米秸秆进行预处理;然后将培养完成的复合微生物菌剂添加到预处理后的玉米秸秆上;最后将添加由复合微生物菌剂的玉米秸秆装袋抽真空进行培养,即可获得黄贮饲料。其中,混合溶液由过氧化氢溶液、尿素以及蒸馏水混合而成;复合微生物菌剂包括植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌以及酿酒酵母。该方法利用复合微生物菌剂对黄贮饲料进行处理,不需添加任何抗生素,能有效提高黄贮饲料的品质,易消化、营养价值较高、适口性好,并能有效减少消化***疾病发生。
Description
技术领域
本发明涉及饲料添加剂技术领域,具体涉及一种利用复合微生物菌剂制备黄贮饲料的方法。
背景技术
发酵饲料在畜牧业生产中发挥着十分重要的作用,特别是如今随着畜牧业的迅速发展、对优质饲草料的需求也越来越大,加之粮食短缺这一世界性的问题日趋严重、逐渐成为社会各界群体关注的焦点。因此,发展微生物饲料生产显得尤为重要。
微生物发酵秸秆是秸秆型饲料有效的贮存手段,在保证(或提升)秸秆营养的基础上,提高适口性,使其更容易被动物消化和吸收;例如,目前市面上常见的青贮与黄贮是分别将新鲜(即青)秸秆或已变杆(即黄)秸秆等物料经过一定粉碎后、再与水及微生物菌剂或酶类混合,经过压实密封,在适宜的湿度条件下,利用微生物进行发酵,从而将秸秆中不易吸收的物质转换为易吸收的乳酸或多糖、进而改善饲料的风味与品质。然而,生育期115d以内的玉米秸秆在收割后,加工过程中会损失30~50%的营养物质,主要包括水分、糖类和蛋白质等物质的流失,造成饲料的营养成分低、适口性差、不易被牛羊等养殖动物消化。
发明内容
针对以上现有技术存在的问题,本发明的目的在于提供一种利用复合微生物菌剂制备黄贮饲料的方法,该方法利用复合微生物菌剂对黄贮饲料进行处理,不需添加任何抗生素,能有效提高黄贮饲料的品质,易消化、营养价值较高、适口性好,并能有效减少养殖动物消化***疾病发生。
本发明的目的通过以下技术方案实现:
一种利用复合微生物菌剂制备黄贮饲料的方法,其特征在于:首先采用混合溶液对玉米秸秆进行预处理;然后将培养完成的复合微生物菌剂添加到预处理后的玉米秸秆上;最后将添加有复合微生物菌剂的玉米秸秆装袋抽真空进行培养,获得黄贮饲料;
所述混合溶液由过氧化氢溶液、尿素以及蒸馏水混合而成;所述复合微生物菌剂包括植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum CGMCC 1.12935,购于中国普通微生物菌种保藏中心)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus CGMCC 1.8882,购于中国普通微生物菌种保藏中心)以及酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae CGMCC 2.3889,购于中国普通微生物菌种保藏中心)。
作进一步优化,所述采用混合溶液对玉米秸秆进行预处理具体为:首先,将玉米秸秆铡短粉碎后,加入由过氧化氢、尿素、蒸馏水组成的混合溶液中;然后,保持温度40~45℃,持续3~5h;最后采用过滤装置对混合溶液预处理后的玉米秸秆进行滤干、备用。
本发明首先利用过氧化氢与尿素对玉米秸秆进行预处理,将玉米秸秆中的半纤维素与木质素转化为能够利于微生物生长的单糖及促进微生物吸收的脂肪酸,从而利于后续微生物培养时的生长环境;同时,过氧化氢的添加能有效降解木质素、并破坏半纤维素与纤维素之间的化学键,从而打破木质素对纤维素和半纤维素的包裹、将纤维素裸露出来,通过尿素的填充破坏纤维素的非结晶区、提高纤维素的结晶度;并且,采用过氧化氢40~45℃下的缓慢分解实现将氧元素有效填充进玉米秸秆内部(即通过打破木质素包裹的多孔结构进入其内部)、从而增加玉米秸秆内部的氧含量,尿素填充玉米秸秆内部还能有效提供微生物生长必需的氮元素。
然后,通过装袋抽真空的方式、降低玉米秸秆外部的氧含量,本发明特殊的内、外部氧环境特别适合身为兼性厌氧微生物的酿酒酵母的繁殖生长,酿酒酵母利用玉米秸秆内部高含量的氧元素进行好氧繁殖的第一阶段,在该阶段酿酒酵母快速生长繁殖一方面将玉米秸秆外部少量的氧元素利用、从而快速营造厌氧环境,另一方面产生生物热、从而使得整个真空袋快速升温;快速营造的厌氧环境以及升温能够快速启动植物乳杆菌与鼠李糖乳杆菌快速生长,从而产生大量的酸、快速营造酸性环境,以及形成生长优势,进而有效抑制霉菌的生长。同时,厌氧环境下酿酒酵母进入厌氧生长的第二阶段,从而将纤维素中的多糖分解成脂类、醇类物质,利于牛羊等的消化。
作进一步优化,所述混合溶液预处理过程中玉米秸秆、过氧化氢、尿素的重量百分比分别为35%~45%、3%~8%以及1%~3%,其余为蒸馏水。
作进一步优化,所述复合微生物菌剂中植物乳杆菌菌液、鼠李糖乳杆菌菌液、酿酒酵母菌液、蒸馏水按体积比0.9~1.1:0.9~1.1:1.9~2.1:99~101。
作进一步优化,所述复合微生物菌剂中,植物乳杆菌菌液浓度≥5.4×109CFU/mL,鼠李糖乳杆菌菌液浓度≥6.5×109CFU/mL,酿酒酵母菌液浓度≥8.5×108CFU/mL。
作进一步优化,所述复合微生物菌剂的培养方法具体为:
S001、植物乳杆菌单独培养:
S101、一级种子:将在-80℃低温下保存的1mL甘油管接种至100mL MRS液体培养基中,并在36~38℃的厌氧环境中培养22~26h,获得一级种子;
S102、二级种子:以2%接种量将S101中的一级种子转接至100mL MRS液体培养基中,继续在36~38℃的厌氧环境中培养22~26h,获得二级种子;
S103、三级种子:以2%接种量将S102中的二级种子转接至100mL MRS液体培养基中,在36~38℃厌氧环境中培养10~14h,获得三级种子;
S002、鼠李糖乳杆菌培养:
S201、一级种子:将在-80℃低温下保存的1mL甘油管接种至100mL MRS液体培养基中,并在36~38℃的厌氧环境中培养22~26h,获得一级种子;
S202、二级种子:以2%接种量将S201中的一级种子转接至100mL MRS液体培养基中,继续在36~38℃的厌氧环境中培养22~26h,获得二级种子;
S203、三级种子:以2%接种量将S202中的二级种子转接至100mL MRS液体培养基中,在36~38℃厌氧环境中培养16~20h,获得三级种子;
S003、酿酒酵母培养:
S301、一级种子:将在-80℃低温下保存的1mL甘油管接种至100mL YPD液体培养基中,并在29~31℃恒温摇瓶中培养22~26h,获得一级种子;
S302、二级种子:以2%接种量将S301中的一级种子转接至100mL YPD液体培养基中,继续在29~31℃恒温摇瓶中培养46~50h,获得二级种子;
S303、三级种子:以2%接种量将S302中的二级种子转接至100mL YPD液体培养基中,在29~31℃恒温摇瓶中培养46~50h,获得三级种子;
S004、复合微生物菌剂的获得:将步骤S001中的植物乳杆菌、S002中的鼠李糖乳杆菌以及S003中的酿酒酵母均匀混合,即得复合微生物菌剂。
作进一步优化,所述复合微生物菌剂添加到预处理后的玉米秸秆上的具体步骤为:在每1kg经过混合溶液预处理后的玉米秸秆中添加复合微生物菌剂10mL,然后再采用蒸馏水100mL进行均匀喷洒。
作进一步优化,所述装袋抽真空培养时间为44~46天。
本发明具有如下技术效果:
本申请采用过氧化氢与尿素混合溶液对玉米秸秆进行预处理,能够有效避免木质素与半纤维素的包裹,保证复合微生物菌剂对纤维素的有效接触与发酵,从而能够将木质素与半纤维素转化为脂肪酸与五碳糖等物质、利于复合微生物菌剂的生长;同时采用过氧化氢与尿素的组合,能够有效控制复合微生物菌剂内的微生物的启动,达到快速、高效发酵的目的;通过植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、酿酒酵母组成的复合微生物菌剂,不仅可以补充有益菌,抑制有害菌,维持动物肠道内微生物平衡态,同时有效提高饲料的适口性、提高饲料的营养成分,将纤维物质转化为具有高营养价值的蛋白,提升饲料品质。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚地描述,显然,所描述的实施例是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。若未特别指明,实施例中所用技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例1:
一种利用复合微生物菌剂获得黄贮饲料的制备方法,本领域均知晓黄贮的玉米秸秆为含水量在10-20%的干玉米秸秆,其特征在于:
首先采用由过氧化氢溶液、尿素以及蒸馏水混合而成的混合溶液对玉米秸秆进行预处理,具体为:
将玉米秸秆铡短粉碎后,加入由过氧化氢、尿素、蒸馏水组成的混合溶液中,其中,玉米秸秆、过氧化氢、尿素的重量百分比分别为35%、3%以及1%,其余为蒸馏水;然后,保持温度40℃,持续3h;最后采用过滤装置对混合溶液预处理后的玉米秸秆进行滤干、备用。
然后将培养完成的复合微生物菌剂添加到预处理后的玉米秸秆上,即在每1kg经过混合溶液预处理后的玉米秸秆中添加复合微生物菌剂10mL,然后再采用蒸馏水100mL进行均匀喷洒;
其中,复合微生物菌剂包括植物乳杆菌(Lactobacillus plantarumCGMCC1.12935,购于中国普通微生物菌种保藏中心)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus CGMCC 1.8882,购于中国普通微生物菌种保藏中心)以及酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae CGMCC 2.3889,购于中国普通微生物菌种保藏中心)。在复合微生物菌剂中,植物乳杆菌菌液、鼠李糖乳杆菌菌液、酿酒酵母菌液、蒸馏水按体积比为0.9:0.9:1.9:99,且复合微生物菌剂中,植物乳杆菌菌液浓度为5.5×109CFU/mL,鼠李糖乳杆菌菌液浓度为6.6×109CFU/mL,酿酒酵母菌液浓度为8.6×108CFU/mL。
复合微生物菌剂的具体培养步骤为:
S001、植物乳杆菌单独培养:
S101、一级种子:将在-80℃低温下保存的1mL甘油管接种至100mL MRS液体培养基中,并在36℃的厌氧环境中培养22h,获得一级种子;
S102、二级种子:以2%接种量将S101中的一级种子转接至100mL MRS液体培养基中,继续在36℃的厌氧环境中培养22h,获得二级种子;
S103、三级种子:以2%接种量将S102中的二级种子转接至100mL MRS液体培养基中,在36℃厌氧环境中培养10h,获得三级种子;
S002、鼠李糖乳杆菌培养:
S201、一级种子:将在-80℃低温下保存的1mL甘油管接种至100mL MRS液体培养基中,并在36℃的厌氧环境中培养22h,获得一级种子;
S202、二级种子:以2%接种量将S201中的一级种子转接至100mL MRS液体培养基中,继续在36℃的厌氧环境中培养22h,获得二级种子;
S203、三级种子:以2%接种量将S202中的二级种子转接至100mL MRS液体培养基中,在36℃厌氧环境中培养16h,获得三级种子;
S003、酿酒酵母培养:
S301、一级种子:将在-80℃低温下保存的1mL甘油管接种至100mL YPD液体培养基中,并在29℃恒温摇瓶中培养22h,获得一级种子;
S302、二级种子:以2%接种量将S301中的一级种子转接至100mL YPD液体培养基中,继续在29℃恒温摇瓶中培养46h,获得二级种子;
S303、三级种子:以2%接种量将S302中的二级种子转接至100mL YPD液体培养基中,在29℃恒温摇瓶中培养46h,获得三级种子;
S004、复合微生物菌剂的获得:将步骤S001中的植物乳杆菌、S002中的鼠李糖乳杆菌以及S003中的酿酒酵母均匀混合,即得复合微生物菌剂。
最后,将添加复合微生物菌剂的玉米秸秆装袋抽真空进行培养44天,获得黄贮饲料。
实施例2:
一种利用复合微生物菌剂获得黄贮饲料的制备方法,其特征在于:
首先采用由过氧化氢溶液、尿素以及蒸馏水混合而成的混合溶液对玉米秸秆进行预处理,具体为:
将玉米秸秆铡短粉碎后,加入由过氧化氢、尿素、蒸馏水组成的混合溶液中,其中,玉米秸秆、过氧化氢、尿素的重量百分比分别为40%、6%以及2%,其余为蒸馏水;然后,保持温度43℃,持续4h;最后采用过滤装置对混合溶液预处理后的玉米秸秆进行滤干、备用。
然后将培养完成的复合微生物菌剂添加到预处理后的玉米秸秆上,即在每1kg经过混合溶液预处理后的玉米秸秆中添加复合微生物菌剂10mL,然后再采用蒸馏水100mL进行均匀喷洒;
其中,复合微生物菌剂包括植物乳杆菌(Lactobacillus plantarumCGMCC1.12935,购于中国普通微生物菌种保藏中心)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus CGMCC 1.8882,购于中国普通微生物菌种保藏中心)以及酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae CGMCC 2.3889,购于中国普通微生物菌种保藏中心)。在复合微生物菌剂中,植物乳杆菌菌液、鼠李糖乳杆菌菌液、酿酒酵母菌液、蒸馏水按体积比为1:1:2:100,且复合微生物菌剂中,植物乳杆菌菌液浓度为5.65×109CFU/mL,鼠李糖乳杆菌菌液浓度为6.72×109CFU/mL,酿酒酵母菌液浓度为8.7×108CFU/mL。
复合微生物菌剂的具体培养步骤为:
S001、植物乳杆菌单独培养:
S101、一级种子:将在-80℃低温下保存的1mL甘油管接种至100mL MRS液体培养基中,并在37℃的厌氧环境中培养24h,获得一级种子;
S102、二级种子:以2%接种量将S101中的一级种子转接至100mL MRS液体培养基中,继续在37℃的厌氧环境中培养24h,获得二级种子;
S103、三级种子:以2%接种量将S102中的二级种子转接至100mL MRS液体培养基中,在37℃厌氧环境中培养12h,获得三级种子;
S002、鼠李糖乳杆菌培养:
S201、一级种子:将在-80℃低温下保存的1mL甘油管接种至100mL MRS液体培养基中,并在37℃的厌氧环境中培养24h,获得一级种子;
S202、二级种子:以2%接种量将S201中的一级种子转接至100mL MRS液体培养基中,继续在37℃的厌氧环境中培养24h,获得二级种子;
S203、三级种子:以2%接种量将S202中的二级种子转接至100mL MRS液体培养基中,在37℃厌氧环境中培养18h,获得三级种子;
S003、酿酒酵母培养:
S301、一级种子:将在-80℃低温下保存的1mL甘油管接种至100mL YPD液体培养基中,并在30℃恒温摇瓶中培养24h,获得一级种子;
S302、二级种子:以2%接种量将S301中的一级种子转接至100mL YPD液体培养基中,继续在30℃恒温摇瓶中培养48h,获得二级种子;
S303、三级种子:以2%接种量将S302中的二级种子转接至100mL YPD液体培养基中,在30℃恒温摇瓶中培养48h,获得三级种子;
S004、复合微生物菌剂的获得:将步骤S001中的植物乳杆菌、S002中的鼠李糖乳杆菌以及S003中的酿酒酵母均匀混合,即得复合微生物菌剂。
最后,将添加复合微生物菌剂的玉米秸秆装袋抽真空进行培养45天,获得黄贮饲料。
实施例3:
一种利用复合微生物菌剂获得黄贮饲料的制备方法,其特征在于:
首先采用由过氧化氢溶液、尿素以及蒸馏水混合而成的混合溶液对玉米秸秆进行预处理,具体为:
将玉米秸秆铡短粉碎后,加入由过氧化氢、尿素、蒸馏水组成的混合溶液中,其中,玉米秸秆、过氧化氢、尿素的重量百分比分别为45%、8%以及3%,其余为蒸馏水;然后,保持温度45℃,持续5h;最后采用过滤装置对混合溶液预处理后的玉米秸秆进行滤干、备用。
然后将培养完成的复合微生物菌剂添加到预处理后的玉米秸秆上,即在每1kg经过混合溶液预处理后的玉米秸秆中添加复合微生物菌剂10mL,然后再采用蒸馏水100mL进行均匀喷洒;
其中,复合微生物菌剂包括植物乳杆菌(Lactobacillus plantarumCGMCC1.12935,购于中国普通微生物菌种保藏中心)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus CGMCC 1.8882,购于中国普通微生物菌种保藏中心)以及酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae CGMCC 2.3889,购于中国普通微生物菌种保藏中心)。在复合微生物菌剂中,植物乳杆菌菌液、鼠李糖乳杆菌菌液、酿酒酵母菌液、蒸馏水按体积比为1.1:1.1:2.1:101,且复合微生物菌剂中,植物乳杆菌菌液浓度为5.48×109CFU/mL,鼠李糖乳杆菌菌液浓度为6.62×109CFU/mL,酿酒酵母菌液浓度为8.63×108CFU/mL。
复合微生物菌剂的具体培养步骤为:
S001、植物乳杆菌单独培养:
S101、一级种子:将在-80℃低温下保存的1mL甘油管接种至100mL MRS液体培养基中,并在38℃的厌氧环境中培养26h,获得一级种子;
S102、二级种子:以2%接种量将S101中的一级种子转接至100mL MRS液体培养基中,继续在38℃的厌氧环境中培养26h,获得二级种子;
S103、三级种子:以2%接种量将S102中的二级种子转接至100mL MRS液体培养基中,在38℃厌氧环境中培养14h,获得三级种子;
S002、鼠李糖乳杆菌培养:
S201、一级种子:将在-80℃低温下保存的1mL甘油管接种至100mL MRS液体培养基中,并在38℃的厌氧环境中培养26h,获得一级种子;
S202、二级种子:以2%接种量将S201中的一级种子转接至100mL MRS液体培养基中,继续在38℃的厌氧环境中培养26h,获得二级种子;
S203、三级种子:以2%接种量将S202中的二级种子转接至100mL MRS液体培养基中,在38℃厌氧环境中培养20h,获得三级种子;
S003、酿酒酵母培养:
S301、一级种子:将在-80℃低温下保存的1mL甘油管接种至100mL YPD液体培养基中,并在31℃恒温摇瓶中培养26h,获得一级种子;
S302、二级种子:以2%接种量将S301中的一级种子转接至100mL YPD液体培养基中,继续在31℃恒温摇瓶中培养50h,获得二级种子;
S303、三级种子:以2%接种量将S302中的二级种子转接至100mL YPD液体培养基中,在31℃恒温摇瓶中培养50h,获得三级种子;
S004、复合微生物菌剂的获得:将步骤S001中的植物乳杆菌、S002中的鼠李糖乳杆菌以及S003中的酿酒酵母均匀混合,即得复合微生物菌剂。
最后,将添加复合微生物菌剂的玉米秸秆装袋抽真空进行培养46天,获得黄贮饲料。
对比例:
首先,采用氢氧化钠与尿素的混合溶液对玉米秸秆进行预处理,其中玉米秸秆、氢氧化钠、尿素的重量百分比与实施例2中玉米秸秆、过氧化氢、尿素的重量百分比一致(即玉米秸秆、氢氧化钠、尿素的重量百分比为40%、6%以及2%,其与为蒸馏水);预处理温度保持50℃,持续4h;再采用过滤装置对预处理后的玉米秸秆进行滤干、备用;
然后将实施例2中培养的复合微生物菌剂添加到预处理后的玉米秸秆,即在每1kg经过预处理后的玉米秸秆中添加实施例2中复合微生物菌剂10mL,然后再采用蒸馏水100mL进行均匀喷洒;
最后,将添加复合微生物菌剂的玉米秸秆装袋抽真空进行培养45天,获得黄贮饲料。
实验一:
在实施例2与对比例的抽真空袋均匀设置温度传感器,且温度传感器探头贴近抽真空袋的表面;然后,将设置温度传感器的抽真空袋放置在同等环境的环境试验箱内(避免外界环境温度对温度传感器的影响),环境试验箱体的初始温度均为24℃、即常温,然后记录温度传感器反馈的数据(注:温度数据为同一抽真空袋上的各个温度传感器的平均值),实验数据如下表1所示:
表1:
由上表1能够明显看出,采用过氧化氢与尿素的混合溶液对玉米秸秆进行预处理与采用氢氧化钠与尿素的混合溶液对玉米秸秆进行预处理比较,采用过氧化氢与尿素的混合溶液预处理后能够更快、更高效的启动酿酒酵母进行好氧生长、繁殖的阶段,酿酒酵母生长、繁殖所产生的生物热使真空袋短时间内升温速率快,从而更快的达到植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌等乳酸菌的生长适宜温度,保证植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌等乳酸菌更好的生长、繁殖。
实验二:
分别在实施例2与对比例中的饲料的培养过程中进行阶段性采样(采样后的真空袋中剩余饲料不再进行培养、也不进行后续实验),然后将抽取后的饲料与蒸馏水按质量比1:9进行均匀混合,混合后通过四层纱布以及定性滤纸进行过滤、封装,再在4℃的环境下进行浸提24h,最后用pH计测定浸提液的pH值,测试数据如下表2:
表2:
由上表2能够明显看出:采用过氧化氢与尿素的混合溶液对玉米秸秆进行预处理与采用氢氧化钠与尿素的混合溶液对玉米秸秆进行预处理比较,采用过氧化氢与尿素的混合溶液预处理后植物乳杆菌与鼠李糖乳杆菌能够更快、更高效的产酸,从而更快、更高效的为饲料提供酸性环境,提前阻隔霉菌的生长,避免玉米秸秆变质;这是由于采用过氧化氢与尿素的混合溶液预处理后,一是酿酒酵母能够快速、高效进入好氧繁殖的第一阶段,从而快速制造利于乳酸菌生长的厌氧环境,二是酿酒酵母进行好氧繁殖的第一阶段产生生物热能够提供给乳酸菌生长繁殖的适宜温度,进一步促进植物乳杆菌与鼠李糖乳杆菌等乳酸菌的快速繁殖与生长,从而快速产酸。
实验三:
测试实施例2与对比例中的中性洗涤纤维(NDF)与酸性洗涤纤维(ADF);性洗涤纤维(NDF)是植物材料或含杠物材料的饲料中不溶于中性洗涤剂的那部分物质,包括纤维素、半纤维素、木质素、硅酸盐;酸性洗涤纤维(ADF)植物材料或含有植物材料的饲料中,不溶于酸性洗涤剂的碳水化合物,包括纯纤维素和酸性纤维素两部分。
中性洗涤纤维(NDF)测试方法如下:
首先,中性洗涤剂(3%十二烷基硫酸钠溶液)配置:称取18.6g乙二胺四乙酸二钠和6.8g四硼酸钠,放入100mL.烧杯中,加适量蒸馏水溶解(可加热),再加入30g十二烷基硫酸钠和10mL乙二醇***;称取4.56g无水磷酸氢二钠置于另一烧杯中,加蒸馏水加热恪解,冷却后将上述两溶液转入1000mL容量瓶并用水定容;此溶液pH值6.9~7.1(一般不用调整)。
然后,对实施例2与对比例中培养的饲料进行间隔时间采样,将采样的样品用四分法缩分至200g左右看,风干或65℃烘干,用植物粉碎机或研钵将样品粉至过孔径0.42mm试验筛(40目),封入样品袋,作为试样。精密称取0.4g~1.0g试样(准确至0.0002g)于600mL高型烧杯中,用量筒加入100ml中性洗涤剂和2滴~3滴正辛醇(消泡剂)。将烧杯放在消煮器上,盖上冷凝球,开冷却水,快速加热至沸消煮,并调节功率保持微沸状态,从开始沸腾计时,消煮1h。G2玻璃砂漏斗预先放在105℃烘箱中烘干至恒量,将消煮好的试样趁热倒入并抽滤;用热水(90℃~100℃)冲洗烧杯和剩余物,直至滤出液清澈无泡沫为止;抽干后用丙酮冲洗剩余物3次,确保剩余物与丙酮充分混合,至滤出液无色为止。将玻璃砂漏斗和剩余物放入105℃烘箱内烘干3~4h至恒量,在干燥器内冷却后称量;再烘干30min,冷却、称量,直至两次称量之差小于0.0002g为恒量。
最后计算:
中性洗涤纤维(NDF)的质量分数%=(m1-m2/m)×100;
式中:
m1—玻璃砂漏斗和剩余物质的总质量,单位为g;
m2—玻璃砂漏斗质量,单位为g;
m—试样质量,单位为g。
酸性洗涤纤维(ADF)测定方法:
酸性洗涤剂(2%十六烷基三甲基溴化铵溶液):称取20g CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)溶解于1000mL 1.00mol/L硫酸溶液中,搅拌溶解。
除添加的洗涤剂不同以外,后续制备布置、测定步骤均与中性洗涤纤维(NDF)步骤相同。
测试数据如下表3:
表3:
实施例2:
对比例:
由表3能够明显看出,采用过氧化氢与尿素的混合溶液对玉米秸秆进行预处理后的饲料在黄贮发酵的第28天发酵效果就与与采用氢氧化钠与尿素的混合溶液对玉米秸秆进行预处理的饲料在黄贮发酵的第45天发酵效果相当,表明过氧化氢与尿素的混合溶液对玉米秸秆进行预处理为前中期玉米秸秆饲料发酵提供的氧元素显著加快了酿酒酵母的生长、以及提高了降解玉米秸秆中的NDF和ADF的速率。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例,对于本领域的普通技术人员而言,可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型,本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (5)
1.一种利用复合微生物菌剂制备黄贮饲料的方法,其特征在于:首先采用混合溶液对玉米秸秆进行预处理;然后将培养完成的复合微生物菌剂添加到预处理后的玉米秸秆上;最后将添加有复合微生物菌剂的玉米秸秆装袋抽真空进行培养,获得黄贮饲料;
所述混合溶液由过氧化氢溶液、尿素以及蒸馏水混合而成;所述复合微生物菌剂包括植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌以及酿酒酵母;
所述采用混合溶液对玉米秸秆进行预处理具体为:首先,将玉米秸秆铡短粉碎后,加入由过氧化氢、尿素、蒸馏水组成的混合溶液中;然后,保持温度40~45℃,持续3~5h;最后采用过滤装置对混合溶液预处理后的玉米秸秆进行滤干、备用;
所述混合溶液预处理过程中玉米秸秆、过氧化氢、尿素的重量百分比分别为35%~45%、3%~8%以及1%~3%,其余为蒸馏水。
2.根据权利要求1所述的一种利用复合微生物菌剂制备黄贮饲料的方法,其特征在于:所述复合微生物菌剂中,植物乳杆菌菌液浓度≥5.4×109 CFU/mL,鼠李糖乳杆菌菌液浓度≥6.5×109 CFU/mL,酿酒酵母菌液浓度≥8.5×108 CFU/mL。
3.根据权利要求1或2所述的一种利用复合微生物菌剂制备黄贮饲料的方法,其特征在于:所述复合微生物菌剂的培养方法具体为:
S001、植物乳杆菌单独培养:
S101、一级种子:将在-80℃低温下保存的1mL甘油管接种至100 mL MRS液体培养基中,并在36~38℃的厌氧环境中培养22~26 h,获得一级种子;
S102、二级种子:以2 %接种量将S101中的一级种子转接至100 mL MRS液体培养基中,继续在36~38 ℃的厌氧环境中培养22~26 h,获得二级种子;
S103、三级种子:以2 %接种量将S102中的二级种子转接至100 mL MRS液体培养基中,在36~38 ℃厌氧环境中培养10~14 h,获得三级种子;
S002、鼠李糖乳杆菌培养:
S201、一级种子:将在-80℃低温下保存的1mL甘油管接种至100 mL MRS液体培养基中,并在36~38℃的厌氧环境中培养22~26 h,获得一级种子;
S202、二级种子:以2 %接种量将S201中的一级种子转接至100 mL MRS液体培养基中,继续在36~38 ℃的厌氧环境中培养22~26 h,获得二级种子;
S203、三级种子:以2 %接种量将S202中的二级种子转接至100 mL MRS液体培养基中,在36~38 ℃厌氧环境中培养16~20 h,获得三级种子;
S003、酿酒酵母培养:
S301、一级种子:将在-80℃低温下保存的1mL甘油管接种至100 mL YPD液体培养基中,并在29~31℃恒温摇瓶中培养22~26 h,获得一级种子;
S302、二级种子:以2 %接种量将S301中的一级种子转接至100 mL YPD液体培养基中,继续在29~31℃恒温摇瓶中培养46~50 h,获得二级种子;
S303、三级种子:以2 %接种量将S302中的二级种子转接至100 mL YPD液体培养基中,在29~31℃恒温摇瓶中培养46~50 h,获得三级种子;
S004、复合微生物菌剂的获得:将步骤S001中的植物乳杆菌、S002中的鼠李糖乳杆菌以及S003中的酿酒酵母均匀混合,即得复合微生物菌剂。
4.根据权利要求1所述的一种利用复合微生物菌剂制备黄贮饲料的方法,其特征在于:所述复合微生物菌剂添加到预处理后的玉米秸秆上的具体步骤为:在每1kg经过混合溶液预处理后的玉米秸秆中添加复合微生物菌剂10mL,然后再采用蒸馏水100mL进行均匀喷洒。
5.根据权利要求1所述的一种利用复合微生物菌剂制备黄贮饲料的方法,其特征在于:所述装袋抽真空培养时间为44~46天。
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