CN114656543B

CN114656543B - 蛋白atndx、编码蛋白atndx的dna分子在调控植物耐盐碱性中的应用

Info

Publication number: CN114656543B
Application number: CN202011542254.8A
Authority: CN
Inventors: 杨永青; 郭岩; 李钦沛
Original assignee: China Agricultural University
Current assignee: China Agricultural University
Priority date: 2020-12-23
Filing date: 2020-12-23
Publication date: 2023-10-20
Anticipated expiration: 2040-12-23
Also published as: CN114656543A

Abstract

本发明公开了蛋白ATNDX、编码蛋白ATNDX的DNA分子在调控植物耐盐碱中的应用。本发明提供的蛋白ATNDX为如下(1)或(2)：(1)由序列表中SEQ ID No.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(2)与序列表中SEQ ID No.2限定的氨基酸序列具有80％或80％以上同一性，来源于玉米且具有相同生物学功能的蛋白质。本发明为阐明蛋白ATNDX在植物盐碱逆境信号应答中的分子机制提供了理论依据，为培育和改良抗逆性植物新品种提供了基因资源。

Description

蛋白ATNDX、编码蛋白ATNDX的DNA分子在调控植物耐盐碱性中的应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及蛋白ATNDX、编码蛋白ATNDX的DNA分子在调控植物耐盐碱中的应用。

背景技术

耕地盐碱化是导致农作物减产的主要非生物逆境，它是由于耕地中含盐量高，且碱性盐(主要是Na₂CO₃和NaHCO₃)比重大所致。盐碱化土地在我国的分布十分广阔，广泛分布于我国华北、西北、东北西部和长江以北沿海等地区，总面积约有1×10⁸hm²。除自然形成的盐碱地外，人们对化肥和杀虫剂的滥用以及不当的耕作方式，也会造成盐分在耕作层的累积从而导致土地次生盐渍化的形成。盐碱胁迫相较盐胁迫对作物的负面影响更严重，其主要原因之一是盐碱胁迫下H⁺跨膜梯度依赖的Na⁺转运体(如SOS1)功能受到抑制，Na⁺毒害加剧。

到目前为止，玉米等作物抗盐碱的分子机制还很不清楚，已成为作物抗盐碱育种的理论瓶颈。

发明内容

本发明提供了蛋白ATNDX在调控植物耐盐碱性或培育高耐盐碱性植物中的应用。

可选地，所述蛋白ATNDX为如下(1)或(2)：

(1)由序列表中SEQ ID No.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(2)与序列表中SEQ ID No.2限定的氨基酸序列具有80％或80％以上同一性，来源于玉米且具有相同生物学功能的蛋白质。

上述蛋白质，均可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。

编码上述蛋白ATNDX的DNA分子命名为ATNDX基因，其应用也属于本发明的保护范围。该应用具体为在调控植物耐盐碱性或培育高耐盐碱性植物中的应用。

可选地，所述编码上述蛋白ATNDX的DNA分子是如下1)-4)中任一种的DNA分子：

1)核苷酸序列为序列表中SEQ ID No.3所示的DNA分子；

2)编码区为序列表中SEQ ID No.1所示的DNA分子；

3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA分子杂交且编码具有相同功能蛋白质的DNA分子；

4)与1)或2)限定的DNA分子具有90％或90％以上同一性，来源于玉米且编码权利要求1或2所述蛋白ATNDX的DNA分子。

本领域普通技术人员可以很容易地采用已知的方法，例如定向进化和点突变的方法，对本发明的ATNDX基因的核苷酸序列进行突变。那些经过人工修饰的，具有与本发明的ATNDX基因的核苷酸序列90％或者更高同一性的核苷酸，只要编码蛋白ATNDX且来源于玉米，均是衍生于本发明的核苷酸序列并且等同于本发明的序列。

这里使用的术语“同一性”指与天然序列的序列相似性。

含有ATNDX基因的表达盒、重组载体、转基因植物细胞系或重组菌在调控植物耐盐碱性或培育高耐盐碱性植物中的应用也属于本发明的保护范围内。

本发明还提供了一种培育转基因植物的方法，包括如下步骤：向出发植物中导入提高所述蛋白ATNDX的含量和/或活性的物质，得到转基因植物的步骤；所述转基因植物与所述出发植物甲相比耐盐碱性更高。

上述方法中，所述“提高所述蛋白ATNDX的含量和/或活性”可通过多拷贝、改变启动子、调控因子、转基因等本领域熟知的方法，达到表达或过量表达所述蛋白质、或提高所述蛋白质的活性的效果。

上述方法中，所述“向出发植物中导入提高蛋白ATNDX的含量和/或活性的物质”具体可为向出发植物中导入编码所述蛋白ATNDX的DNA分子。

上述方法中，所述“向出发植物甲中导入编码所述蛋白ATNDX的DNA分子”通过重组表达载体导入所述出发植物；所述重组表达载体具体可为实施例提及的基因过表达载体。携带有本发明ATNDX基因或其它同源序列的植物表达载体可通过使用原生质体-化学介导法(Ca2+、PEG)、Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、花粉管、微注射、电激、基因枪、农杆菌介导等常规生物学方法中的任一一种或几种方法的组合转化植物细胞、组织或器官，并将转化的植物细胞、组织或器官培育成植株；所述组织和器官可包括宿主植物的果荚、愈伤组织、茎尖、叶片和种子等。

本发明还提供了一种植物育种的方法，包括如下步骤：增加植物中所述蛋白ATNDX的含量和/或活性，从而植物耐盐碱性提高。

上述蛋白ATNDX、编码蛋白ATNDX的DNA分子、含有上述的编码蛋白ATNDX的DNA分子的表达盒、重组载体、转基因植物细胞系或重组菌也属于本发明的保护范围之内。

上文中，所述调控植物耐逆性可为提高植物耐逆性。

上文中，所述高耐盐碱性植物可为其耐盐碱性高于野生型植物。

上文中，所述植物可为双子叶植物或单子叶植物。所述单子叶植物可为禾本科植物，例如为玉米。

本发明将来自ATNDX基因导入玉米B73-329中得到ATNDX的转基因过表达株系；与野生型B73-329相比较，过表达株系表现出显著的盐碱胁迫耐受性，从而证明，蛋白ATNDX的功能为提高植物对高盐碱的耐逆性。本发明为阐明蛋白ATNDX在植物盐碱逆境信号应答中的分子机制提供了理论依据，为培育和改良抗逆性植物新品种提供了基因资源。

附图说明

图1为盐碱胁迫处理植株的生长情况。

图2为ATNDX基因过表达检测结果，其中，M为MARKER，左图为ACTIN1基因表达检测结果，右图为ATNDX基因表达检测结果。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

本申请的发明人在玉米B73-329中发现了一种植物耐盐碱性相关基因，命名为ATNDX基因，其基因组基因核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。该基因编码蛋白命名蛋白ATNDX，其氨基酸序列如序列表SEQ ID No.2所示，蛋白的cDNA基因的CDS如SEQ ID No.1所示。

实施例1、ATNDX基因过表达玉米盐碱胁迫处理检测

实验设置两个处理组，对照组和转基因组，实验重复3次，每次重复每组分别为8盆，每盆3-4粒种子。对照组采用B73-329玉米种子，6个转基因组采用ATNDX过表达转基因植株T₃代种子，分别为15030085、15050256、15070742、15110036、15110112、15121724。采用不含营养土的纯蛭石种植，采用1/2Hoagland’s营养液浇灌。植株生长9天后(三叶期)浇灌含100mM NaHCO₃(盐碱胁迫)的1/2Hoagland’s营养液(向1/2Hoagland’s营养液加入NaHCO₃至NaHCO₃含量为100mM得到的液体)，每10天浇灌一次，每次每盆两升，生长30天观察表型，并测量植株株高。

图1显示盐碱胁迫处理的部分实验结果，左侧图片为植株未进行盐碱胁迫前的生长情况，右侧图片为盐碱胁迫处理30天后植株的生长情况，转基因组的植株(OE-ATNDX)表现出比对照组植株更强的耐盐碱性，叶片较绿，株高更高，转基因组植株株高为对照组植株株高的1.3-1.6倍。

实验说明ATNDX正调控植物抗盐碱性。

其中，ATNDX过表达转基因植株T₃代种子按照如下的方法制备。

一、ATNDX基因过表达载体的构建

将ATNDX蛋白的cDNA基因的CDS(即SEQ ID No.1所示的DNA分子)***pBCXUN中，得到重组质粒pBCXUN-ATNDX。重组质粒pBCXUN-ATNDX中，由Ubi启动子(maize ubiquitin-1promoter)驱动ATNDX蛋白的cDNA基因的CDS表达ATNDX蛋白，并由Nos终止子终止转录。

pBCXUN是将pCXUN(GenBank：FJ905215.1，06-JUL-2009)的HYG基因(hptII，潮霉素抗性基因)替换为Bar基因(编码膦丝菌素乙酰转移酶)(核苷酸序列为SEQ ID No.4)，保持pCXUN的其它核苷酸不变得到的表达载体。

二、ATNDX基因过表达植物的构建

将步骤一中构建的pBCXUN-ATNDX(基因过表达载体)通过热激法转化到感受态农杆菌EHA105菌株中，菌落PCR鉴定出阳性克隆，挑选阳性克隆测序，得到含有pBCXUN-ATNDX的阳性克隆即为重组农杆菌，命名为pBCXUN-ATNDX/EHA105。

将pBCXUN-ATNDX/EHA105单菌落接种于2-3mL含有100μg/mL卡那霉素和50μg/mL利福平的液体培养基中，28℃振荡培养过夜。第二天转接大量含有抗生素的液体培养基中震荡培养，转接几次后收集菌体，重新悬浮至OD_600nm在0.8-1.0之间获得重组农杆菌菌悬液。采用获得的重组农杆菌菌悬液侵染B73-329玉米幼胚后，诱导愈伤成苗，然后依次进行共培养、抗性筛选(抗性筛选采用除草剂草丁膦)、然后依次进行预分化、分化、生根，得到T₀代再生植株。从T₀代再生植株中采用PCR鉴定法筛选转基因植株。将T₀代中的转基因植株自交，获得T₁代种子，T₁代种子长成的植株即为T₁代植株；植株自交直至获得T₃代种子，即ATNDX过表达转基因植株T₃代种子，将其中将不同T₀代再生植株自交后获得的T₃代株系分别命名为15030085、15050256、15070742、15110036、15110112、15121724。

提取15030085、15050256、15070742、15110036、15110112、15121724的总RNA，反转录出cDNA，RT-PCR检测ATNDX基因过表达情况，以玉米B73-329作为对照植株，以ACTIN1基因为参照。结果如图2所示，相比于对照植株B73-329，6个独立的ATNDX过表达转基因株系都过表达了该基因，表明ATNDX在转基因植株中过表达。

以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。

序列表

<110> 中国农业大学

<120> 蛋白ATNDX、编码蛋白ATNDX的DNA分子在调控植物耐盐碱性中的应用

<130> 203354

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 2742

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

atggttcgat tgttgcagcc taaacacatg gtacaagctg tgaacgcttt gcattggcga 60

aactctgtgg aatttcataa gctgcttaaa gataatggag atttctctat ttgctttaac 120

tctgagcaag tgttaccaca aaagattagt gttgagaaga tggtgaaaat gttacctcgg 180

cacctcattg cggtggttat gactcctaat aaagatggaa agtctcgtta tatactgtgt 240

gggatcagac tgttgcagac gttgtgtgac ttaacacctc gtaatgctaa actcgagcag 300

gtcttgcttg acgatgtgaa attatcagca cagatgattg atctggtgat ccttgtgata 360

atagctcttg gccgtaacag aaaggaaagc tgtaattcga ataaagaatc gttactagag 420

gctacattgg tggcttcttg tctccacctg tttcacgggt ttatctctcc taactcccaa 480

gatcttgttc tcgtcttgct tgcacaccca agggttgatg tgtttataga cagtgctttt 540

ggagctgttc tcaatgttgt gatatctttg aaagcgaagt tgctgtatag acaaactgac 600

tccccaaaaa agttaggcgc aagttctgta gaggaggtta acttccactg ccaacaagct 660

gaagctgctt tgcagttcct tcattctcta tgccaacaca aaccctttag agaacgtgtc 720

gctaaaaaca aggagctatg tggaaaaggt ggcgttctta ggctagctca atccatacta 780

tcactaacta ttacacctga atttgttgga gcaaccgtaa ctatagcttc cacatctaga 840

atgaaagcaa aagttctttc aattttgcag catctgtttg aagcggaaag tgtctcattc 900

cttgacgagg ttgcaaatgc aggaaacttg catttagcca aaactgttgc ctcagaggtt 960

cttaaattat tgaggcttgg cctttctaaa gcttccatgg ctactgcttc tcctgactac 1020

ccgatgggtt ttgtgctact taacgctatg cgcttggctg acgtgctcac tgatgactca 1080

aattttcgat cttttttcac tgaacatttt agcatggttc tcagcgcggt attttgtctc 1140

tctcatggag atttcttgtc aatgttgtgc tcttctgatc tttcttcaag ggaggatgat 1200

gcgaatgttg attatgatct gtttaagtca gctggatgga ttctaagtgt attttcatct 1260

tctgggcaat cagtcacacc tcaattcaag ctcagtttac aaaataacct taccatgtct 1320

tcatatgcac atcaacgaac atccttattt attaaaatga ttgcgaatct tcactgtttc 1380

gttcccaacg tgtgccaaga acaggatagg aaccgtttca ttcagaatgt tatgagtgga 1440

ttgcgaaaag atccttcaag catattgatt aagatgttac caggctcttc atatactcct 1500

gtggcacaga gaggcactgg tgtttgcaga aacctaggtt ctctgttgcg ccatgcagaa 1560

tccttgatcc ctagttccct caacgaggaa gattttctgc ttttgagggt gttttgtgac 1620

cagttacagc cgttaatcca ttccgagttt gaggaaagtc aagtacaggt gaaggtgaaa 1680

aagctttttg ctctcttata cattggtttt acaattctct ggcttatctg tttagttaca 1740

ctgatacaag atattgaagg taggggcggg aatttatctg gtaagctaaa agagcttctg 1800

aatcttaaca atgaggaagc ttcagaggat tgtgatgtcc gagttgaagg tgtgatgaca 1860

aagcaaggcg tgaacgagga gatagacaca gttgaaaggt tgaaagagag cgatgcagat 1920

gctagcaatc ttgaaaccag tggttcagat acaagctcta acagagggaa gggtctggtt 1980

gaagagggag agttggttca gaatatgagc aagcgattta aaggcagtgc atcaggagag 2040

gtgaaggagg atgagaaatc tgaaaccttc cttgtctttg agaagcagaa gaagaaacgg 2100

aagcgtagta ttatgaatgc tgatcaaatg gggatgattg agaaggcgct tgctgaagaa 2160

cctgatttgc agcggaattc agcttcgaga cagttatggg ctgataaaat aagtcaaaag 2220

ggttcggagg ttattacatc ttcgcagctg aaaaactggc tgaataaccg aaaagcgaaa 2280

ctagctcgag caaacaagca aacggggcca gctcatgata ataacagctc aggggatcta 2340

ccggagagtc ctggagatga aaacacttgg cagcagaaac catcaacacc aattaaagat 2400

caaactgtaa cagaaacccc gaaaacagga gagaatctga tgagaacatc gtcatcatca 2460

gaagaaggga taaagcaagg gcaacaagtg aggcttatgg atgagagagg agacgagatc 2520

gggaagggaa cagtgttgag aacagacggt gaatggaacg gtttaagctt ggagacaaga 2580

cagatatgtg tagttgatgt aatggagctt agtgagtcat atgatgggag caaaaagatg 2640

atcccttatg gatcagatga tgttgggagg actttcacag aggcgaattc aaggtttgga 2700

gttatgagag tggcttggga tgtgaataag cttcagtatt ag 2742

<210> 2

<211> 913

<212> PRT

<213> 玉米(Zea mays)

<400> 2

Met Val Arg Leu Leu Gln Pro Lys His Met Val Gln Ala Val Asn Ala

1 5 10 15

Leu His Trp Arg Asn Ser Val Glu Phe His Lys Leu Leu Lys Asp Asn

20 25 30

Gly Asp Phe Ser Ile Cys Phe Asn Ser Glu Gln Val Leu Pro Gln Lys

35 40 45

Ile Ser Val Glu Lys Met Val Lys Met Leu Pro Arg His Leu Ile Ala

50 55 60

Val Val Met Thr Pro Asn Lys Asp Gly Lys Ser Arg Tyr Ile Leu Cys

65 70 75 80

Gly Ile Arg Leu Leu Gln Thr Leu Cys Asp Leu Thr Pro Arg Asn Ala

85 90 95

Lys Leu Glu Gln Val Leu Leu Asp Asp Val Lys Leu Ser Ala Gln Met

100 105 110

Ile Asp Leu Val Ile Leu Val Ile Ile Ala Leu Gly Arg Asn Arg Lys

115 120 125

Glu Ser Cys Asn Ser Asn Lys Glu Ser Leu Leu Glu Ala Thr Leu Val

130 135 140

Ala Ser Cys Leu His Leu Phe His Gly Phe Ile Ser Pro Asn Ser Gln

145 150 155 160

Asp Leu Val Leu Val Leu Leu Ala His Pro Arg Val Asp Val Phe Ile

165 170 175

Asp Ser Ala Phe Gly Ala Val Leu Asn Val Val Ile Ser Leu Lys Ala

180 185 190

Lys Leu Leu Tyr Arg Gln Thr Asp Ser Pro Lys Lys Leu Gly Ala Ser

195 200 205

Ser Val Glu Glu Val Asn Phe His Cys Gln Gln Ala Glu Ala Ala Leu

210 215 220

Gln Phe Leu His Ser Leu Cys Gln His Lys Pro Phe Arg Glu Arg Val

225 230 235 240

Ala Lys Asn Lys Glu Leu Cys Gly Lys Gly Gly Val Leu Arg Leu Ala

245 250 255

Gln Ser Ile Leu Ser Leu Thr Ile Thr Pro Glu Phe Val Gly Ala Thr

260 265 270

Val Thr Ile Ala Ser Thr Ser Arg Met Lys Ala Lys Val Leu Ser Ile

275 280 285

Leu Gln His Leu Phe Glu Ala Glu Ser Val Ser Phe Leu Asp Glu Val

290 295 300

Ala Asn Ala Gly Asn Leu His Leu Ala Lys Thr Val Ala Ser Glu Val

305 310 315 320

Leu Lys Leu Leu Arg Leu Gly Leu Ser Lys Ala Ser Met Ala Thr Ala

325 330 335

Ser Pro Asp Tyr Pro Met Gly Phe Val Leu Leu Asn Ala Met Arg Leu

340 345 350

Ala Asp Val Leu Thr Asp Asp Ser Asn Phe Arg Ser Phe Phe Thr Glu

355 360 365

His Phe Ser Met Val Leu Ser Ala Val Phe Cys Leu Ser His Gly Asp

370 375 380

Phe Leu Ser Met Leu Cys Ser Ser Asp Leu Ser Ser Arg Glu Asp Asp

385 390 395 400

Ala Asn Val Asp Tyr Asp Leu Phe Lys Ser Ala Gly Trp Ile Leu Ser

405 410 415

Val Phe Ser Ser Ser Gly Gln Ser Val Thr Pro Gln Phe Lys Leu Ser

420 425 430

Leu Gln Asn Asn Leu Thr Met Ser Ser Tyr Ala His Gln Arg Thr Ser

435 440 445

Leu Phe Ile Lys Met Ile Ala Asn Leu His Cys Phe Val Pro Asn Val

450 455 460

Cys Gln Glu Gln Asp Arg Asn Arg Phe Ile Gln Asn Val Met Ser Gly

465 470 475 480

Leu Arg Lys Asp Pro Ser Ser Ile Leu Ile Lys Met Leu Pro Gly Ser

485 490 495

Ser Tyr Thr Pro Val Ala Gln Arg Gly Thr Gly Val Cys Arg Asn Leu

500 505 510

Gly Ser Leu Leu Arg His Ala Glu Ser Leu Ile Pro Ser Ser Leu Asn

515 520 525

Glu Glu Asp Phe Leu Leu Leu Arg Val Phe Cys Asp Gln Leu Gln Pro

530 535 540

Leu Ile His Ser Glu Phe Glu Glu Ser Gln Val Gln Val Lys Val Lys

545 550 555 560

Lys Leu Phe Ala Leu Leu Tyr Ile Gly Phe Thr Ile Leu Trp Leu Ile

565 570 575

Cys Leu Val Thr Leu Ile Gln Asp Ile Glu Gly Arg Gly Gly Asn Leu

580 585 590

Ser Gly Lys Leu Lys Glu Leu Leu Asn Leu Asn Asn Glu Glu Ala Ser

595 600 605

Glu Asp Cys Asp Val Arg Val Glu Gly Val Met Thr Lys Gln Gly Val

610 615 620

Asn Glu Glu Ile Asp Thr Val Glu Arg Leu Lys Glu Ser Asp Ala Asp

625 630 635 640

Ala Ser Asn Leu Glu Thr Ser Gly Ser Asp Thr Ser Ser Asn Arg Gly

645 650 655

Lys Gly Leu Val Glu Glu Gly Glu Leu Val Gln Asn Met Ser Lys Arg

660 665 670

Phe Lys Gly Ser Ala Ser Gly Glu Val Lys Glu Asp Glu Lys Ser Glu

675 680 685

Thr Phe Leu Val Phe Glu Lys Gln Lys Lys Lys Arg Lys Arg Ser Ile

690 695 700

Met Asn Ala Asp Gln Met Gly Met Ile Glu Lys Ala Leu Ala Glu Glu

705 710 715 720

Pro Asp Leu Gln Arg Asn Ser Ala Ser Arg Gln Leu Trp Ala Asp Lys

725 730 735

Ile Ser Gln Lys Gly Ser Glu Val Ile Thr Ser Ser Gln Leu Lys Asn

740 745 750

Trp Leu Asn Asn Arg Lys Ala Lys Leu Ala Arg Ala Asn Lys Gln Thr

755 760 765

Gly Pro Ala His Asp Asn Asn Ser Ser Gly Asp Leu Pro Glu Ser Pro

770 775 780

Gly Asp Glu Asn Thr Trp Gln Gln Lys Pro Ser Thr Pro Ile Lys Asp

785 790 795 800

Gln Thr Val Thr Glu Thr Pro Lys Thr Gly Glu Asn Leu Met Arg Thr

805 810 815

Ser Ser Ser Ser Glu Glu Gly Ile Lys Gln Gly Gln Gln Val Arg Leu

820 825 830

Met Asp Glu Arg Gly Asp Glu Ile Gly Lys Gly Thr Val Leu Arg Thr

835 840 845

Asp Gly Glu Trp Asn Gly Leu Ser Leu Glu Thr Arg Gln Ile Cys Val

850 855 860

Val Asp Val Met Glu Leu Ser Glu Ser Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Met

865 870 875 880

Ile Pro Tyr Gly Ser Asp Asp Val Gly Arg Thr Phe Thr Glu Ala Asn

885 890 895

Ser Arg Phe Gly Val Met Arg Val Ala Trp Asp Val Asn Lys Leu Gln

900 905 910

Tyr

<210> 3

<211> 4934

<212> DNA

<213> 玉米(Zea mays)

<400> 3

ggtcgctgga atcaaataat ccgataagcc atagctgagt tttcccttct actacaaaga 60

gcgaggctca gtgtcaatat atttagaaat taacctcatt ctttttactc atttaccgtt 120

atgccaccat accctgaagt agatttcact gcttttgatt ttcgtatctt cttctctgtc 180

acataaccta acactataac tcacggcgag acaaaattct agtcgctctt cattcaccgg 240

aaactagatt cagtcactgt tgcatattag tgacagtcat ggttcgattg ttgcagccta 300

aacacatggt acaagctgtg aacgctttgc attggcgaaa ctctgtggaa tttcataagc 360

tgcttaaaga taatggagat ttctctattt gctttaactc tgagcaagtg ttaccacaaa 420

aggtgcattt ttaaacttga tttgcttttt cagttttttg ctattcattt gtagtaagta 480

ctgatgttta ggtttctttc agattagtgt tgagaagatg gtgaaaatgt tacctcggca 540

cctcattgcg gtggttatga ctcctaataa agatggaaag tctcgttata tactgtgtgg 600

gatcagactg ttgcagacgt tgtgtgactt aacacctcgt aatgctaaac tcgagcaggt 660

tgttccatct tcatatgtgg ttttgagctt ttaaagaatt ggactttatg cctccatgga 720

acataatgtt tgattctttt ttttgtttgc atattgtgat aggtcttgct tgacgatgtg 780

aaattatcag cacagatgat tgatctggtg atccttgtga taatagctct tggccgtaac 840

agaaaggttc ttttctgtag aatccttttt ttgtctcttc ctgtttcttt ttagagctgt 900

ataattcatg tccgttgctt gtttccagga aagctgtaat tcgaataaag aatcgttact 960

agaggctaca ttggtggctt cttgtctcca cctgtttcac gggtttatct ctcctaactc 1020

ccaagatctt gttctcgtct tgcttgcaca cccaagggta tgaaactatg accttatcat 1080

aatgtgtttg aaatgccaat gtgaggaaaa tatattaaga aaattacgct tatgctttgg 1140

gatctgggtt tctgctgcct tgggattagt ttgatctgat tctttttttt ttttcatcta 1200

ggttgatgtg tttatagaca gtgcttttgg agctgttctc aatgttgtga tatctttgaa 1260

agcgaagttg ctgtatagac aaactgactc cccaaaaaag ttaggcgcaa gttctgtaga 1320

ggaggttaac ttccactgcc aacaagctga agctgctttg cagttccttc attctctatg 1380

ccaacacaaa ccctttagag aacgtgtcgc taaaaacaag gtttctctat tgcttggtgt 1440

ttgtacatta atcacgagtt gttaataatt tgttttgctt aattgatgat tttatggagg 1500

acgaatctca gaattatgtt ttctggtatt ttctctcagg agctatgtgg aaaaggtggc 1560

gttcttaggc tagctcaatc catactatca ctaactatta cacctgaatt tgttggagca 1620

accgtaacta tagcttccac atctagaatg aaagcaaaag ttctttcaat tgtaagtcta 1680

ttgaaattta gcaatttttt tctctattta ctatctgcaa ctcataccaa agttcatgtg 1740

cctgcagttg cagcatctgt ttgaagcgga aagtgtctca ttccttgacg aggttgcaaa 1800

tgcaggaaac ttgcatttag ccaaaactgt tgcctcagag gttagtccta attagggtct 1860

ctgctctaaa atcgatagga cgttttcctt cttgattcga aaggtttacc actgagtgac 1920

gcttctattt ataaagattc catacaaatt gacaatctta tttgttttga tacgttgtaa 1980

ctagtcatag aacaaacctc actgcaaaaa gctcgtgttg gctaagtgat aatcagctct 2040

gctctagagt ctaaacctac agtttcctaa atggcatatg ttgttaaatt gacattttgt 2100

acttttctgt tcctcatttc tctccaggat agtttatcca tgtgaagtta agtgttgacc 2160

tattcagtga tgatatatct gtaatatagg ttcttaaatt attgaggctt ggcctttcta 2220

aagcttccat ggctactgct tctcctgact acccgatggg ttttgtgcta cttaacgcta 2280

tgcgcttggc tgacgtgctc actgatgact caaattttcg atcttttttc actgaacatt 2340

ttgtaagtat caagttattc ctgcctctgc caaagtctct tgttttattt attgttttgg 2400

cacatatgat tcatacaatt tatgagctgt cgtcggtatg gttataaatt aattgcgtta 2460

ctgaaattct gtaatttgtt gtgtgacgga tgttaaatct ttctccagag catggttctc 2520

agcgcggtat tttgtctctc tcatggagat ttcttgtcaa tgttgtgctc ttctgatctt 2580

tcttcaaggg aggatgatgc gaatgttgat tatgatctgt ttaagtcagc tggatggatt 2640

ctaagtgtat tttcatcttc tgggcaatca gtcacacctc aattcaagct cagtttacaa 2700

aataacctta ccatgtcttc atatgcacat caacgaacat ccttatttat taaaatgatt 2760

gcgaatcttc actgtttcgt tcccaacgtg tgccaaggtg atttttttgc ccgccactat 2820

cttctgcatt tccctgtatc atattgttgg tttgccttcg tttgttagtt actaagtgta 2880

ttcgctgtta atatctgcag aacaggatag gaaccgtttc attcagaatg ttatgagtgg 2940

attgcgaaaa gatccttcaa gcatattgat taagatgtta ccaggctctt catatactcc 3000

tgtggcacag agaggcactg gtgtttgcag aaacctaggt atgtatctct atcccgagac 3060

acatatatta tttcttatat acacatgttt tgctgatttg gttttaatgg atatttgtat 3120

atgtaggttc tctgttgcgc catgcagaat ccttgatccc tagttccctc aacgaggaag 3180

attttctgct tttgaggtaa cataaagcct cttcagtcat tctacttttc acctatgact 3240

acattaaagt tttgtagttc tcgagctgta ctattttatg tagccgttga tattattttt 3300

ttccggtata ttgtcttctg cagggtgttt tgtgaccagt tacagccgtt aatccattcc 3360

gagtttgagg aaagtcaagt acaggtgaag gtgaaaaagc tttttgctct cttatacatt 3420

ggttttacaa ttctctggct tatctgttta gttacactga tacaagtagg tgtaacaagg 3480

ttttactcat gtccatcgta tgttaaattt ctacgtaaga cagatctttt gctaaccttc 3540

aaatgttatg ttgtactagg atattgaagg taggggcggg aatttatctg gtaagctaaa 3600

agagcttctg aatcttaaca atgaggaagc ttcagaggat tgtgatgtcc gagttgaagg 3660

tgtgatgaca aagcaaggcg tgaacgagga gatagacaca gttgaaaggt tgaaagagag 3720

cgatgcagat gctagcaatc ttgaaaccag tggttcagat acaagctcta acagagggaa 3780

gggtctggtt gaagagggag agttggttca gaatatgagc aagcgattta aaggcagtgc 3840

atcaggagag gtgaaggagg atgagaaatc tgaaaccttc cttgtctttg agaagcagaa 3900

gaagaaacgg aagcgtagta ttatgaatgc tgatcaaatg gggatgattg agaaggcgct 3960

tgctgaagaa cctgatttgc agcggaattc agcttcgaga cagttatggg ctgataaaat 4020

aagtcaaaag gtgagttcaa gaattctact ctttttaatt tccaaccacg tattacgaac 4080

gatgcgctcg ttgattacat gattttgcag ggttcggagg ttattacatc ttcgcagctg 4140

aaaaactggt acttgctttt atttgttcct cttcgtcagc tgcaaagaga atctcgtaat 4200

cactattcat tatctgacat tgaaagttta ttatcaggct gaataaccga aaagcgaaac 4260

tagctcgagc aaacaagcaa acggggccag ctcatgataa taacagctca ggggatctac 4320

cggagagtcc tggagatgaa aacacttggc agcagaaacc atcaacacca attaaagatc 4380

aaactgtaac agaaaccccg aaaacaggag agaatctgat gagaacatcg tcatcatcag 4440

aagaagggat aaagcaaggg caacaagtga ggcttatgga tgagagagga gacgagatcg 4500

ggaagggaac agtgttgaga acagacggtg aatggaacgg tttaagcttg gagacaagac 4560

agatatgtgt agttgatgta atggagctta gtgagtcata tgatgggagc aaaaagatga 4620

tcccttatgg atcagatgat gttgggagga ctttcacaga ggcgaattca aggtttggag 4680

ttatgagagt ggcttgggat gtgaataagc ttcagtatta gactcagttg cattgaattt 4740

gaccagtagg tttttgattt ttgtttattt ttaactgttt agagattctc ctctgttttg 4800

tgagctttgt ctctctctct ctgtggttat ttacaggcaa aggttgagac tttgagagga 4860

aggtaataac agaaggaata gtttgacttt tttaatctca gttagttgac tttacagcta 4920

tttaaagaaa caaa 4934

<210> 4

<211> 552

<212> DNA

<213> 吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)

<400> 4

atgagcccag aacgacgccc ggccgacatc cgccgtgcca ccgaggcgga catgccggcg 60

gtctgcacca tcgtcaacca ctacatcgag acaagcacgg tcaacttccg taccgagccg 120

caggaaccgc aggagtggac ggacgacctc gtccgtctgc gggagcgcta tccctggctc 180

gtcgccgagg tggacggcga ggtcgccggc atcgcctacg cgggcccctg gaaggcacgc 240

aacgcctacg actggacggc cgagtcgacc gtgtacgtct ccccccgcca ccagcggacg 300

ggactgggct ccacgctcta cacccacctg ctgaagtccc tggaggcaca gggcttcaag 360

agcgtggtcg ctgtcatcgg gctgcccaac gacccgagcg tgcgcatgca cgaggcgctc 420

ggatatgccc cccgcggcat gctgcgggcg gccggcttca agcacgggaa ctggcatgac 480

gtgggtttct ggcagctgga cttcagcctg ccggtaccgc cccgtccggt cctgcccgtc 540

accgagattt ga 552

Claims

1.蛋白ATNDX在提高玉米耐盐碱性或培育高耐盐碱性玉米中的应用；

所述蛋白ATNDX为由序列表中SEQ ID No.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质。

2.编码权利要求1中所述蛋白ATNDX的DNA分子在提高玉米耐盐碱性或培育高耐盐碱性玉米中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，所述编码权利要求1中所述蛋白ATNDX的DNA分子是如下1）或2）：

1）核苷酸序列为序列表中SEQ ID No.3所示的DNA分子；

2）编码区为序列表中SEQ ID No.1所示的DNA分子。

4.含有权利要求2或3所述的DNA分子的表达盒、重组载体、转基因植物细胞系或重组菌在提高玉米耐盐碱性或培育高耐盐碱性玉米中的应用。

5.一种培育转基因植物的方法，其特征在于：包括如下步骤：向出发植物中导入权利要求1中所述蛋白ATNDX的编码基因，得到转基因植物的步骤；所述转基因植物与所述出发植物相比耐盐碱性更高；所述植物为玉米。

6.一种植物育种的方法，其特征在于：包括如下步骤：增加植物中权利要求1中所述蛋白ATNDX的含量，从而植物耐盐碱性提高；所述植物为玉米。