CN114467749A - 一种对叶百部种苗快速繁育的培养基和方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种对叶百部种苗快速繁育的培养基和方法，属于对叶百部繁育技术领域。所述对叶百部种苗快速繁育的培养基，由芽诱导培养基、丛生芽增殖培养基以及生根培养基组成，其中，所述芽诱导培养基由MS基本培养基、6‑BA、2,4‑D、琼脂粉和蔗糖组成；所述丛生芽增殖培养基由MS基本培养基、6‑BA、2,4‑D、琼脂粉和蔗糖组成；所述生根培养基由MS基本培养基、6‑BA、琼脂粉和蔗糖组成。本发明还公开了利用上述的对叶百部种苗快速繁育培养基进行对叶百部种苗快速繁育的方法。本发明三种培养基相互作用，具有繁殖时间短、增殖系数高和繁殖周期短的优点，非常适合对叶百部种苗的快速繁育。
Description
技术领域
本发明涉及一种对叶百部种苗快速繁育的培养基和方法，属于对叶百部繁育技术领域。
背景技术
对叶百部(学名：Stemona tuberosa Lour.)是单子叶植物纲百合目百部科百部属的多年生藤本植物，块根纺锤形，茎为攀援状，藤蔓长度可达4米，茎偶有分枝，叶对生，卵形或心形，花单生，花期4-7月，当年移栽延迟花期6-9月，果期7-8月，对叶百部的根能够入药。
对叶百部为2020年版本《中国药典》中收录的百部种，具有润肺下气止咳、杀虫灭虱功效。近年来，百部的需求量越来越大。而野外资源越来越匮乏，必须经人工种植才能满足市场的需求。
对叶百部是多年生植物，用药部位生长缓慢、种植周期长，现有繁殖方法主要为种子发芽繁殖和根部繁殖，各有弊端。种子繁殖常常因为种子表层的蜡质等物质的干扰导致种子自然萌发率极低，获得种苗困难。根部繁殖导致药材浪费，而且根部作为繁殖材料用量巨大，极大地限制了其大面积的推广种植。因此现有种子繁殖和根部繁殖都难以满足对叶百部市场的巨大需求。
现有报道中，对叶百部的快速繁育方法研究多处于实验室试验阶段，很少有在生产上进行应用的。鉴于此，有必要提供一种对叶百部的快速繁育的培养基和方法，以克服现有技术的不足。
发明内容
本发明的目的之一，是提供一种对叶百部种苗快速繁育的培养基。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种对叶百部种苗快速繁育的培养基，由芽诱导培养基、丛生芽增殖培养基以及生根培养基组成，其中，所述芽诱导培养基由MS基本培养基、2.8mg/L-3.2mg/L的6-BA、0.05mg/L-0.15mg/L的2,4-D、7g-8g的琼脂粉和28g-32g的蔗糖组成，pH值为5.5-6；所述丛生芽增殖培养基由MS基本培养基、2.8mg/L-3.2mg/L的6-BA、0.03mg/L-0.08mg/L的2,4-D、6.5g-7.5g的琼脂粉和28g-32g的蔗糖组成，pH值为5.5-6.0；所述生根培养基由MS基本培养基、0.2mg/L-0.4mg/L的6-BA、7.5g-8.0g的琼脂粉和28g-32g的蔗糖组成，pH值为5.8-5.85。
本发明的对叶百部种苗快速繁育的培养基的原理是：
第一点，MS基本培养基，是目前使用最普遍的培养基。其具有较高的无机盐浓度，能够保证组织生长所需的矿质营养还能加速愈伤组织的生长。由于配方中的离子浓度高，在配制、贮存和消毒等过程中，即使有些成分略有出入，也不会影响离子间的平衡。MS固体培养基可用于诱导愈伤组织，也可用于胚、茎段、茎尖及花药的培养，其液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显的成功。MS培养基的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。因此，一般情况下，不用再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。和其它培养基的基本成分相比，MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高，这是它的显著特点。
MS基本培养基主要包含以下成分：(1)NH4NO31650 mg/L、(2)KNO31900mg/L、(3)CaCl2﹒2H2O 440mg/L、(4)MgSO4﹒7H2O 370mg/L、(5)KH2PO4170mg/L、(6)Na2-EDTA 37.3mg/L、(7)FeSO4﹒7H2O 27.8mg/L、(8)MnSO4﹒4H2O 22.3mg/L、(9)ZnSO4﹒7H2O 8.6mg/L、(10)H3BO36.2mg/L、(11)KI 0.83mg/L、(12)Na2MoO4﹒2H2O 0.25mg/L、(13)CuSO4﹒5H2O 0.025mg/L、(14)CoCl2﹒6H2O 0.025mg/L、(15)盐酸硫胺素VB10.1mg/L、(16)烟酸0.5mg/L、(17)肌醇100mg/L、(18)甘氨酸2mg/L、(19)盐酸吡哆醇VB60.5 mg/L。
本发明的MS基本培养基可以市售购买，如可以购自北京华越洋生物科技有限公司。
第二点，6-BA，即6-(N-苄基)氨基嘌呤，又称为6-苄基氨基嘌呤。是第一个人工合成的细胞***素。具有抑制植物叶内叶绿素、核酸、蛋白质的分解，保绿防老；将氨基酸、生长素、无机盐等向处理部位调运等多种效能，广泛用在农业、果树和园艺作物从发芽到收获的各个阶段。
本发明的6-BA可以市售购买，如可以购自生工生物。
第三点，2,4-D，即2,4-二氯苯氧基乙酸，属苯氧乙酸类激素型选择除草剂，主要用于苗后茎叶处理。同时，2,4-D酸具有植物激素的作用，低浓度使用时刺激植物生长，具有防止落果，使果实肥大的作用。
本发明的2,4-D可以市售购买，如可以购自生工生物工程(上海)股份有限公司。
本发明的琼脂粉可以市售购买，如可以购自北京索莱宝科技有限公司。
本发明的蔗糖可以市售购买，如可以购自生工生物工程(上海)股份有限公司。
第四点，现有技术中，并没有采用6-BA和2,4-D的组合作为对叶百部种苗快速繁育的培养基的报道。本申请的发明人经过长期大量的试验，意外且惊喜地发现，采用6-BA和2,4-D的组合，可以实现对叶百部的快速繁育。具体而言，本发明的芽诱导培养基中，MS为基础培养基，6-BA和2,4-D为促进种子的萌发的植物激素。本发明的芽诱导培养基可以直接从外植体诱导出无菌芽。
本发明的丛生芽增殖培养基中，MS为基础培养基，6-BA和2,4-D可以促进丛生芽的生长。本发明的丛生芽增殖培养基可以获得大量丛生芽。
本发明的生根培养基中，MS为基础培养基，6-BA和2,4-D可以促进丛生芽的生长以及壮苗生根。本发明的生根培养基可以极大促进生根壮苗。
本发明三种培养基相互作用，具有繁殖时间短、增殖系数高和繁殖周期短的优点，非常适合对叶百部种苗的快速繁育。
本发明的对叶百部种苗快速繁育培养基的有益效果是：
1、本发明的芽诱导培养基可以直接从外植体诱导出无菌芽，丛生芽增殖培养基可以获得大量丛生芽，生根培养基可以极大促进生根壮苗。三种培养基相互作用，具有繁殖时间短、增殖系数高和繁殖周期短的优点，非常适合对叶百部种苗的快速繁育。
2、采用本发明的培养基，通过1个茎段外植体，至少每个月可继代1次，每次可获得10个新芽，增殖系数极高，可获得大量种苗。
3、采用本发明的培养基，有效解决了对叶百部种子繁殖萌发率低，而根繁殖浪费药材的限制，为对叶百部的生产繁殖和规模化种植提供了种苗供应，解决了目前对叶百部种苗不足的问题。
在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
进一步，所述芽诱导培养基由MS基本培养基、3.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的2,4-D、7.5g的琼脂粉和30g的蔗糖组成，pH值为5.8。
采用上述进一步的有益效果是：上述为芽诱导培养基的最佳参数，茎段外植体仅需15d即可诱导出对叶百部无菌芽。
进一步，所述丛生芽增殖培养基由MS为基本培养基、3.0mg/L的6-BA、0.05mg/L的2,4-D、7.0g的琼脂粉和30g的蔗糖组成，pH值为5.8。
采用上述进一步的有益效果是：上述为丛生芽增殖培养基的最佳参数。茎段外植体基部长出极少愈伤组织，但茎段外植体愈伤组织不长出新芽，该茎段外植体长期培养也较难获得丛生芽。将侧芽剪切分离后转移到丛生芽增殖培养基中，从侧芽基部长出新的愈伤组织和新芽，丛生芽数量超出10个，增值系数较大。
进一步，所述生根培养基由MS基本培养基、0.3mg/L的6-BA、7.8g的琼脂粉和30g的蔗糖组成，pH值为5.8。
采用上述进一步的有益效果是：上述为生根培养基的最佳参数。从增殖培养得到的丛生芽剪切得到单个带生长点的不定芽接种于生根培养基，经诱导生根得到生根苗。
本发明的目的之二，是提供一种利用上述对叶百部种苗快速繁育培养基进行对叶百部种苗快速繁育的方法。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种利用上述对叶百部种苗快速繁育培养基进行对叶百部种苗快速繁育的方法，包括如下步骤：
步骤1：制备茎段外植体
取成熟对叶百部的茎，经处理后，得到茎段外植体；
步骤2：制备对叶百部无菌芽
将步骤1得到的茎段外植体接种到芽诱导培养基中，进行诱导培养，得到对叶百部无菌芽；
步骤3：制备增殖培养的丛生芽
将步骤2得到的对叶百部无菌芽剪去老的外植体，保留有1个侧芽的茎段，每个茎段分别接种于丛生芽增殖培养基中，进行增殖培养，得到增殖培养的丛生芽；
步骤4：制备对叶百部生根苗
从步骤3得到的增殖培养的丛生芽中分离单个的不定芽，接种于生根培养基中，进行生根培养，得到对叶百部生根苗；
步骤5：制备对叶百部种苗
将步骤4得到的对叶百部生根苗进行炼苗，然后移植至混合土中进行培养，即得到对叶百部种苗。
本发明的对叶百部种苗快速繁育的方法的原理是：
本发明以对叶百部茎段为外植体，一株成熟的对叶百部可以提供上百个茎段，外植体来源丰富。以增殖培养基诱导，每个茎段又可以诱导出十多个丛生芽，从而实现了对叶百部的快速繁殖，进而可为生产种植提供大量种苗。
本发明的对叶百部种苗快速繁育的方法的有益效果是：
1、采用本发明的芽诱导培养基进行诱导时，一周可见芽长出，经三周即可获得无菌芽，再经丛生芽增殖培养基培养，每个芽可以获得超过十个侧芽，最后经生根培养基培养，极大促进生根壮苗，实现了一个茎段培养多株种苗的目的。
2、采用本发明的方法，无需植株再生过程中脱分化和再分化的过程，通过茎段诱导丛生芽进行组培快繁，有效缩短了组织培养的时间和操作步骤。
3、采用本发明的方法，能在较短时间内获得大量对叶百部种苗，对对叶百部种质资源保护和可持续利用具有重要意义，且操作简单，成本低廉，市场前景广阔，适合规模化推广应用。
在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
进一步，步骤1中，所述处理的方法是：取成熟对叶百部的茎，剪去叶片后，从节间剪断，每段保留一个节，在75％体积浓度的酒精中浸泡消毒10s-20s，然后用灭菌的去离子水清洗2-3次，再在2％质量浓度的次氯酸钠溶液中消毒12min-18min，用灭菌的去离子水清洗5-6次，吸干水分，即得到茎段外植体。
采用上述进一步的有益效果是：将成熟对叶百部的茎依次进行剪切、消毒、清洗和吸干后，可以获得无菌外植体。其中，采用灭菌烘干后的滤纸吸干水分。
更进一步，所述茎段外植体的长度为0.5-2.5cm。
采用上述更进一步的有益效果是：茎段外植体采用上述参数，更有利于后续的操作。
进一步，步骤2中，所述诱导培养的条件为：温度为25±2℃，光照时间16h，黑暗时间8h，光照强度为2000lx，培养时间为15d-30d。
采用上述进一步的有益效果是：采用上述参数，可以从外植体诱导出大量无菌芽。
进一步，步骤3中，所述增殖培养的条件为：温度为25±2℃，光照时间16h，黑暗时间8h，光照强度为2000lx，培养时间为15d-30d。
采用上述进一步的有益效果是：采用上述参数，可以获得大量丛生芽。
进一步，步骤4中，所述生根培养的条件为：温度为25±2℃，光照时间16h，黑暗时间8h，光照强度为2000lx，培养时间为30d-45d。
采用上述进一步的有益效果是：采用上述参数，可以极大促进生根壮苗。
进一步，步骤5中，所述炼苗的条件为：光照强度为2200lx-2800lx,温度为23℃-27℃，湿度为70％-80％，时间为3d-5d。
采用上述进一步的有益效果是：采用上述参数，能使对叶百部生根苗迅速适应陆地的不良环境条件，缩短缓苗时间，增强对低温、大风等的抵抗力。
进一步，步骤5中，所述混合土是由营养土、蛭石和珍珠岩按体积比为3:1:1混合后，在压力为0.1MPa-0.15MPa、温度为121℃-125℃的条件下灭菌15min-20min而成。
采用上述进一步的有益效果是：混合土经消毒处理后，不含有毒、有害物质。采用上述参数的混合土，移栽成活率超过90％，且长势很好。
上述营养土，可以市售购买，如可以购自史丹利化肥股份有限公司，规格为家庭园艺营养土(有机通用型)。
附图说明
图1为本发明的实施例1的步骤1中，得到的对叶百部外植体的外形照片；
图2为本发明的实施例1的步骤2中，采用芽诱导培养基，得到的对叶百部无菌芽的外形照片；
图3为本发明的实施例1的步骤3中，采用丛生芽增殖培养基，得到的增殖培养的丛生芽的外形照片；
图4为本发明的实施例1的步骤4中，得到的对叶百部生根苗的外形照片；
图5为本发明的实施例1的步骤5中，采用生根培养基诱导产生的对叶百部不定根的外形照片；
图6为本发明的实施例1的步骤5中，得到的对叶百部种苗的外形照片。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1
本实施例对叶百部种苗快速繁育的培养基，由芽诱导培养基、丛生芽增殖培养基以及生根培养基组成，其中，所述芽诱导培养基由MS基本培养基、3.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的2,4-D、7.5g的琼脂粉和30g的蔗糖组成，pH值为5.8；所述丛生芽增殖培养基由MS为基本培养基、3.0mg/L的6-BA、0.05mg/L的2,4-D、7.0g的琼脂粉和30g的蔗糖组成，pH值为5.8；所述生根培养基由MS基本培养基、0.3mg/L的6-BA、7.8g的琼脂粉和30g的蔗糖组成，pH值为5.8。
利用上述的对叶百部种苗快速繁育培养基进行对叶百部种苗快速繁育的方法，包括如下步骤：
步骤1：制备茎段外植体
取6-7月份对叶百部藤蔓，剪去叶片后，从节间剪断，每段保留一个节，在75％体积浓度的酒精中浸泡消毒15s，然后用灭菌的去离子水清洗2次，再在2％质量浓度的次氯酸钠溶液中消毒15min，用灭菌的去离子水清洗5次，吸干水分，即得到茎段外植体，如图1所示。
步骤2：制备对叶百部无菌芽
将步骤1得到的茎段外植体接种到芽诱导培养基中，进行诱导培养，所述诱导培养的条件为：温度为25℃，光照时间16h，黑暗时间8h，光照强度为2000lx，培养时间为22d，得到对叶百部无菌芽，如图2所示。
步骤3：制备增殖培养的丛生芽
将步骤2得到的对叶百部无菌芽剪去老的外植体，保留有1个侧芽的茎段，每个茎段分别接种于丛生芽增殖培养基中，进行增殖培养，所述增殖培养的条件为：温度为25℃，光照时间16h，黑暗时间8h，光照强度为2000lx，培养时间为22d，得到增殖培养的丛生芽，如图3所示。
步骤4：制备对叶百部生根苗
待步骤3得到的增殖培养的丛生芽长大，如图4所示，从中分离单个的不定芽，接种于生根培养基中，进行生根培养，所述生根培养的条件为：温度为25℃，光照时间16h，黑暗时间8h，光照强度为2000lx，培养时间为38d，得到对叶百部生根苗，如图5所示。
步骤5：制备对叶百部种苗
将步骤4得到的对叶百部生根苗进行炼苗，所述炼苗的条件为：光照强度为2500lx,温度为25℃，湿度为75％，时间为4d；然后移植至混合土中进行培养，所述混合土是由营养土、蛭石和珍珠岩按体积比为3:1:1混合后，在压力为0.12MPa、温度为123℃的条件下灭菌18min而成，即得到对叶百部种苗，如图6所示。
采用本实施例的芽诱导培养基进行诱导时，一周可见芽长出，经三周即可获得无菌芽。
芽诱导培养基激素梯度筛选试验中，固定2,4-D浓度不变，6-BA浓度在初筛基础上设置了2.0mg/L、3.0mg/L、4.0mg/L、5.0mg/L和6.0mg/L的五个梯度。以3.0mg/L浓度芽诱导率最高，达到84.21％，而以5.0mg/L浓度芽诱导率最低，仅为60.00％，和6.0mg/L浓度芽诱导率61.29％接近。在3.0mg/L浓度6-BA诱导下，芽诱导时间最短仅需7天即可观察到嫩芽，其它浓度诱导出芽时间更长。在此浓度下诱导出的芽生长健壮，叶片宽厚，颜色稍深。以筛选的3.0mg/L 6-BA为基础，进行2,4-D浓度筛选，初步设置为0.1mg/L、0.2mg/L、0.4mg/L、0.6mg/L和0.8mg/L五个梯度，芽诱导率在0.1mg/L时最高为80％，说明设置浓度应适当降低。再次设置2,4-D浓度为0.01mg/L、0.05mg/L、0.10mg/L、0.15mg/L和0.20mg/L五个梯度，0.10mg/L浓度时芽诱导率为100.00％，而且诱导芽茎段粗壮，生长速度最快。
再经丛生芽增殖培养基培养，每个芽可以获得超过十个侧芽，最后经生根培养基培养，极大促进生根壮苗，实现了一个茎段培养多株种苗的目的。
丛生芽增殖培养基在芽诱导培养基的基础上进行调整，6-BA浓度在1.0mg/L、2.0mg/L、3.0mg/L、4.0mg/L和5.0mg/L五个梯度基础上进行筛选，仍然是3.0mg/L浓度时获得的丛生芽最多，生长最好。而2,4-D浓度上0.01mg/L、0.03mg/L、0.05mg/L、0.07mg/L、0.10mg/L、0.15mg/L和0.20mg/L七个梯度基础上剂型筛选，0.05mg/L、0.07mg/L和0.10mg/L时，出芽率接近，但是0.05mg/L浓度时获得的丛生芽最健壮。同时，琼脂粉含量上也进行了浓度筛选，以7.0g/L最优。
生根培养基激素浓度配比设置不同激素，如IBA、2,4-D和6-BA激素种类组合均未获得较高的生根率，最终确定以6-BA单一激素进行生根。从0.05mg/L、0.10mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L和3.00mg/L五个梯度筛选，以0.50mg/L生根较优。进一步设置0.1mg/L、0.3mg/L、0.5mg/L、0.7mg/L和0.9mg/L，以6-BA浓度为0.3mg/L，在30天后进行统计，获得64.30％生根率。随着继代次数增多和培养时间延长，生根率会继续升高，在60天统计时，生根率可达90％以上。
实施例2
本实施例对叶百部种苗快速繁育的培养基，由芽诱导培养基、丛生芽增殖培养基以及生根培养基组成，其中，所述芽诱导培养基由MS基本培养基、2.8mg/L的6-BA、0.05mg/L的2,4-D、7g的琼脂粉和28g的蔗糖组成，pH值为5.5；所述丛生芽增殖培养基由MS基本培养基、2.8mg/L的6-BA、0.03mg/L的2,4-D、6.5g的琼脂粉和28g的蔗糖组成，pH值为5.5；所述生根培养基由MS基本培养基、0.2mg/L的6-BA、7.5g的琼脂粉和28g的蔗糖组成，pH值为5.8。
利用上述的对叶百部种苗快速繁育培养基进行对叶百部种苗快速繁育的方法，包括如下步骤：
步骤1：制备茎段外植体
取7-8月份对叶百部藤蔓，剪去叶片后，从节间剪断，每段保留一个节，在75％体积浓度的酒精中浸泡消毒10s，然后用灭菌的去离子水清洗3次，再在2％质量浓度的次氯酸钠溶液中消毒12min，用灭菌的去离子水清洗5次，吸干水分，即得到茎段外植体。
步骤2：制备对叶百部无菌芽
将步骤1得到的茎段外植体接种到芽诱导培养基中，进行诱导培养，所述诱导培养的条件为：温度为23℃，光照时间16h，黑暗时间8h，光照强度为2000lx，培养时间为15d，得到对叶百部无菌芽。
步骤3：制备增殖培养的丛生芽
将步骤2得到的对叶百部无菌芽剪去老的外植体，保留有1个侧芽的茎段，每个茎段分别接种于丛生芽增殖培养基中，进行增殖培养，所述增殖培养的条件为：温度为23℃，光照时间16h，黑暗时间8h，光照强度为2000lx，培养时间为15d，得到增殖培养的丛生芽。
步骤4：制备对叶百部生根苗
从步骤3得到的增殖培养的丛生芽中分离单个的不定芽，接种于生根培养基中，进行生根培养，所述生根培养的条件为：温度为23℃，光照时间16h，黑暗时间8h，光照强度为2000lx，培养时间为30d，得到对叶百部生根苗。
步骤5：制备对叶百部种苗
将步骤4得到的对叶百部生根苗进行炼苗，所述炼苗的条件为：光照强度为2200lx,温度为23℃，湿度为70％，时间为3d；然后移植至混合土中进行培养，所述混合土是由营养土、蛭石和珍珠岩按体积比为3:1:1混合后，在压力为0.1MPa、温度为121℃的条件下灭菌20min而成，即得到对叶百部种苗。
采用本实施例的芽诱导培养基进行诱导时，芽诱导率为80.15％。芽诱导时间需7-9天观察到嫩芽。嫩芽长势较弱，茎段长而细，叶片颜色浅，叶面积小。
采用本实施例的丛生芽增殖培养基，丛生芽生长速度稍慢，丛生芽数量上和实施例1接近，但茎段纤细，叶片嫩绿色，叶片薄而窄。
采用本实施例的生根培养基，在30天时统计生根率，达到48.34％，但生根较为缓慢，根的数量较少。
实施例3
本实施例对叶百部种苗快速繁育的培养基，由芽诱导培养基、丛生芽增殖培养基以及生根培养基组成，其中，所述芽诱导培养基由MS基本培养基、3.2mg/L的6-BA、0.15mg/L的2,4-D、8g的琼脂粉和32g的蔗糖组成，pH值为6；所述丛生芽增殖培养基由MS基本培养基、3.2mg/L的6-BA、0.08mg/L的2,4-D、7.5g的琼脂粉和32g的蔗糖组成，pH值为6.0；所述生根培养基由MS基本培养基、0.4mg/L的6-BA、8.0g的琼脂粉和32g的蔗糖组成，pH值为5.85。
利用上述的对叶百部种苗快速繁育培养基进行对叶百部种苗快速繁育的方法，包括如下步骤：
步骤1：制备茎段外植体
取8-9月份对叶百部藤蔓，剪去叶片后，从节间剪断，每段保留一个节，在75％体积浓度的酒精中浸泡消毒20s，然后用灭菌的去离子水清洗2次，再在2％质量浓度的次氯酸钠溶液中消毒18min，用灭菌的去离子水清洗5次，吸干水分，即得到茎段外植体。
步骤2：制备对叶百部无菌芽
将步骤1得到的茎段外植体接种到芽诱导培养基中，进行诱导培养，所述诱导培养的条件为：温度为27℃，光照时间16h，黑暗时间8h，光照强度为2000lx，培养时间为30d，得到对叶百部无菌芽。
步骤3：制备增殖培养的丛生芽
将步骤2得到的对叶百部无菌芽剪去老的外植体，保留有1个侧芽的茎段，每个茎段分别接种于丛生芽增殖培养基中，进行增殖培养，所述增殖培养的条件为：温度为27℃，光照时间16h，黑暗时间8h，光照强度为2000lx，培养时间为30d，得到增殖培养的丛生芽。
步骤4：制备对叶百部生根苗
从步骤3得到的增殖培养的丛生芽中分离单个的不定芽，接种于生根培养基中，进行生根培养，所述生根培养的条件为：温度为27℃，光照时间16h，黑暗时间8h，光照强度为2000lx，培养时间为45d，得到对叶百部生根苗。
步骤5：制备对叶百部种苗
将步骤4得到的对叶百部生根苗进行炼苗，所述炼苗的条件为：光照强度为2800lx,温度为27℃，湿度为80％，时间为5d；然后移植至混合土中进行培养，所述混合土是由营养土、蛭石和珍珠岩按体积比为3:1:1混合后，在压力为0.15MPa、温度为125℃的条件下灭菌20min而成，即得到对叶百部种苗。
采用本实施例的芽诱导培养基进行诱导时，芽诱导率为75.41％。芽诱导时间需9-12天观察到嫩芽。嫩芽长势弱，茎段细长，叶片颜色较浅，叶面积小而窄。
采用本实施例的丛生芽增殖培养基，丛生芽生长速度稍慢，基部膨大出现愈伤组织，丛生芽数量上和实施例1接近，但茎段纤细，叶片嫩绿色，叶片薄而窄。
采用本实施例的生根培养基，在30天时统计生根率，达到52.65％，但生根缓慢，根部颜色较深，侧根少。
对比试验1
本对比例1跟实施例2不同的是，芽诱导培养基由MS基本培养基、1.0mg/L的6-BA、0.05mg/L的2,4-D、7g的琼脂粉和28g的蔗糖组成，pH值为5.5。其它都相同。
本对比试验1的利用上述培养基使对叶百部种苗快速繁殖的培养基和方法，同实施例2。本对比试验1的步骤2中，得到的芽诱导率仅为20％。
由此可见，本发明的对叶百部芽诱导培养基可以极大促进对叶百部芽的诱导。
对比试验2
本对比例2跟实施例2不同的是，丛生芽增殖培养基由MS基本培养基、2.8mg/L的6-BA、2.00mg/L的2,4-D、6.5g的琼脂粉和28g的蔗糖组成，pH值为5.5。其它都相同。
本对比试验2的利用上述培养基使对叶百部种苗快速繁殖的培养基和方法，同实施例2。本对比试验2的步骤3中，得到的芽增殖系数仅为2.5个，丛生芽生长缓慢。
由此可见，本发明的对叶百部丛生芽增殖培养基可以极大促进对叶百部丛生芽的增殖和生长。
对比试验3
本对比例3跟实施例2不同的是，生根培养基由MS基本培养基、3.0mg/L的6-BA、7.5g的琼脂粉和28g的蔗糖组成，pH值为5.8。其它都相同。
本对比试验3的利用上述培养基使对叶百部种苗快速繁殖的培养基和方法，同实施例2。本对比试验3的步骤4中，得到的对叶百部根诱导率在30天时为零，未见不定根的产生。
由此可见，本发明的对叶百部生根培养基可以极大促进对叶百部不定根的诱导和生长。
综上，本发明的芽诱导培养基可以直接从外植体诱导出无菌芽，丛生芽增殖培养基可以获得大量丛生芽，生根培养基可以极大促进生根壮苗。三种培养基相互作用，具有繁殖时间短、增殖系数高和繁殖周期短的优点，非常适合对叶百部种苗的快速繁育。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种对叶百部种苗快速繁育的培养基，其特征在于，由芽诱导培养基、丛生芽增殖培养基以及生根培养基组成，其中，所述芽诱导培养基由MS基本培养基、2.8mg/L-3.2mg/L的6-BA、0.05mg/L-0.15mg/L的2,4-D、7g-8g的琼脂粉和28g-32g的蔗糖组成，pH值为5.5-6；所述丛生芽增殖培养基由MS基本培养基、2.8mg/L-3.2mg/L的6-BA、0.03mg/L-0.08mg/L的2,4-D、6.5g-7.5g的琼脂粉和28g-32g的蔗糖组成，pH值为5.5-6.0；所述生根培养基由MS基本培养基、0.2mg/L-0.4mg/L的6-BA、7.5g-8.0g的琼脂粉和28g-32g的蔗糖组成，pH值为5.8-5.85。
2.根据权利要求1所述的对叶百部种苗快速繁育的培养基，其特征在于，所述芽诱导培养基由MS基本培养基、3.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的2,4-D、7.5g的琼脂粉和30g的蔗糖组成，pH值为5.8。
3.根据权利要求1所述的对叶百部种苗快速繁育的培养基，其特征在于，所述丛生芽增殖培养基由MS为基本培养基、3.0mg/L的6-BA、0.05mg/L的2,4-D、7.0g的琼脂粉和30g的蔗糖组成，pH值为5.8。
4.根据权利要求1所述的对叶百部种苗快速繁育的培养基，其特征在于，所述生根培养基由MS基本培养基、0.3mg/L的6-BA、7.8g的琼脂粉和30g的蔗糖组成，pH值为5.8。
5.一种利用权利要求1-4任一项所述的对叶百部种苗快速繁育培养基进行对叶百部种苗快速繁育的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：制备茎段外植体
取成熟对叶百部的茎，经处理后，得到茎段外植体；
步骤2：制备对叶百部无菌芽
将步骤1得到的茎段外植体接种到芽诱导培养基中，进行诱导培养，得到对叶百部无菌芽；
步骤3：制备增殖培养的丛生芽
将步骤2得到的对叶百部无菌芽剪去老的外植体，保留有1个侧芽的茎段，每个茎段分别接种于丛生芽增殖培养基中，进行增殖培养，得到增殖培养的丛生芽；
步骤4：制备对叶百部生根苗
从步骤3得到的增殖培养的丛生芽中分离单个的不定芽，接种于生根培养基中，进行生根培养，得到对叶百部生根苗；
步骤5：制备对叶百部种苗
将步骤4得到的对叶百部生根苗进行炼苗，然后移植至混合土中进行培养，即得到对叶百部种苗。
6.根据权利要求5所述的对叶百部种苗快速繁育的方法，其特征在于，步骤1中，所述处理的方法是：取成熟对叶百部的茎，剪去叶片后，从节间剪断，每段保留一个节，在75％体积浓度的酒精中浸泡消毒10s-20s，然后用灭菌的去离子水清洗2-3次，再在2％质量浓度的次氯酸钠溶液中消毒12min-18min，用灭菌的去离子水清洗5-6次，吸干水分，即得到茎段外植体。
7.根据权利要求5所述的对叶百部种苗快速繁育的方法，其特征在于，步骤2中，所述诱导培养的条件为：温度为25±2℃，光照时间16h，黑暗时间8h，光照强度为2000lx，培养时间为15d-30d。
8.根据权利要求5所述的对叶百部种苗快速繁育的方法，其特征在于，步骤3中，所述增殖培养的条件为：温度为25±2℃，光照时间16h，黑暗时间8h，光照强度为2000lx，培养时间为15d-30d。
9.根据权利要求5所述的对叶百部种苗快速繁育的方法，其特征在于，步骤4中，所述生根培养的条件为：温度为25±2℃，光照时间16h，黑暗时间8h，光照强度为2000lx，培养时间为30d-45d。
10.根据权利要求5所述的对叶百部种苗快速繁育的方法，其特征在于，步骤5中，所述炼苗的条件为：光照强度为2200lx-2800lx,温度为23℃-27℃，湿度为70％-80％，时间为3d-5d；所述混合土是由营养土、蛭石和珍珠岩按体积比为3:1:1混合后，在压力为0.1MPa-0.15MPa、温度为121℃-125℃的条件下灭菌15min-20min而成。
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Cited By (1)
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|---|---|---|---|---|
| CN115735771A (zh) * | 2022-11-30 | 2023-03-07 | 上海世泽生物科技有限公司 | 一种百部高效离体繁殖方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105340741A (zh) * | 2015-11-16 | 2016-02-24 | 桂林亦元生现代生物技术有限公司 | 一种提高对叶百部组培苗生根率的方法 |
| CN106577291A (zh) * | 2016-12-23 | 2017-04-26 | 广西中医药大学 | 直立百部愈伤组织高效诱导成苗的方法 |
| WO2019006470A1 (en) * | 2017-06-30 | 2019-01-03 | Booshoot Llc | MEDIA FOR RAPID AND RELIABLE TISSUE CULTURE OF PLANTS |
-
2022
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105340741A (zh) * | 2015-11-16 | 2016-02-24 | 桂林亦元生现代生物技术有限公司 | 一种提高对叶百部组培苗生根率的方法 |
| CN106577291A (zh) * | 2016-12-23 | 2017-04-26 | 广西中医药大学 | 直立百部愈伤组织高效诱导成苗的方法 |
| WO2019006470A1 (en) * | 2017-06-30 | 2019-01-03 | Booshoot Llc | MEDIA FOR RAPID AND RELIABLE TISSUE CULTURE OF PLANTS |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| ANIMESH BISWAS ET AL.: "In vitro Propagation of Stemona tuberosa Lour. ‐ A Rare Medicinal Plant through High Frequency Shoot Multiplication using Nodal Explants", 《PLANT TISSUE CULT.& BIOTECH》 * |
| 杨振德等: "对叶百部组织培养快繁技术研究", 《现代农业科技》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115735771A (zh) * | 2022-11-30 | 2023-03-07 | 上海世泽生物科技有限公司 | 一种百部高效离体繁殖方法 |
| CN115735771B (zh) * | 2022-11-30 | 2023-08-04 | 上海世泽生物科技有限公司 | 一种百部高效离体繁殖方法 |
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