CN114409758A - Reg4抗菌肽治疗致病性大肠埃希菌感染的应用 - Google Patents

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CN114409758A CN202210081652.7A CN202210081652A CN114409758A CN 114409758 A CN114409758 A CN 114409758A CN 202210081652 A CN202210081652 A CN 202210081652A CN 114409758 A CN114409758 A CN 114409758A
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蔡威
王伟鹏
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Abstract

本发明提供了Reg4抗菌肽治疗致病性大肠埃希菌感染的应用。

Description

Reg4抗菌肽治疗致病性大肠埃希菌感染的应用
技术领域
本发明涉及新药物用途领域，具体地，涉及Reg4抗菌肽治疗致病性大肠埃希菌感染的应用。
背景技术
大肠埃希菌是人和动物肠道正常菌群的主要成员，但其中有些带有致病基因的血清型会引起人类肠道感染、泌尿道感染，并可引发致死性并发症。
在胃肠道感染疾病中，肠致病性大肠埃希菌(Enteropathogenic E.coli，EPEC)为大肠埃希菌性胃肠炎的常见病原体之一，其在儿童中的发病率较高，尤其是3岁以下的幼儿，且疾病的危害性大，在发展中国家的发病率和病死率较高。
由此，研究表明，肠致病性大肠埃希菌(EPEC)是儿童中重度腹泻的主要病原菌之一，严重威胁婴幼儿肠道发育和健康成长。抗生素治疗是治疗EPEC感染的重要手段，但随着抗生素的滥用，越来越多的EPEC临床分离株表现出对青霉素和头胞菌素等多种抗生素耐药。
婴幼儿肠道免疫功能发育不成熟、胃酸及各种消化酶活力较低，且自身免疫力低下。EPEC感染易引起患儿出现中重度急性水样腹泻、发热和呕吐等症状，严重影响患儿身心健康。越来越多的EPEC临床分离株表现出对青霉素和头胞菌素等多种抗生素耐药。因此，目前迫切需要开发不易产生耐药性、活性高、安全可靠的新型抗EPEC感染的药物。
虽然，抗菌肽是抗生素的理想代替品之一。但目前尚未有研究发现Reg4蛋白在治疗EPEC感染中的作用。
发明内容
本发明旨在克服上述缺陷，提供了一种抗生素的理想代替品，即、Reg4抗菌肽。
本发明提供了一种活性成分的用途,其特征在于:
上述活性成分为:Reg4蛋白；
关于Reg4蛋白的序列如SEQ ID NO.1所示；
SEQ ID NO.1
>sp|Q9D8G5|REG4_MOUSE Regenerating islet-derived protein 4 OS＝Musmusculus OX＝10090 GN＝Reg4 PE＝2SV＝1
MetAlaSerLysGlyValArgLeuLeuLeuLeuLeuSerTrpValAlaGlyProGluVal
LeuSerAspIleLeuArgProSerCysAlaProGlyTrpPheTyrTyrArgSerHisCys
TyrGlyTyrPheArgLysLeuArgAsnTrpSerHisAlaGluLeuGluCysGlnSerTyr
GlyAsnGlySerHisLeuAlaSerValLeuAsnGlnLysGluAlaSerValIleSerLys
TyrIleThrGlyTyrGlnArgAsnLeuProValTrpIleGlyLeuHisAspProGlnLys
LysGlnLeuTrpGlnTrpThrAspGlySerThrAsnLeuTyrArgArgTrpAsnProArgThrLysSerGluAla
ArgHisCysAlaGluMetAsnProLysAspLysPheLeuThrTrp
AsnLysAsnGlyCysAlaAsnArgGlnHisPheLeuCysLysTyrLysThr
上述用途包括:用于制备治疗EPEC感染症状的药物。
本发明提供了一种活性成分的用途,其特征在于:
所述用途还包括:用于制备治疗和缓解由EPEC感染引起的肠道炎症反应的药物；
本发明提供了一种活性成分的用途,其特征在于:
所述用途还包括:用于制备治疗和缓解由EPEC感染引起的病理性损伤的药物。
本发明提供了一种活性成分的用途,其特征在于:
所述用途还包括:用于制备治疗和缓解由EPEC感染导致的体重丢失病症的药物。
本发明提供了一种活性成分的用途,其特征在于:
所述用途还包括:本发明提供了一种活性成分的用途,其特征在于:
所述用途包括:用于制备抑制EPEC生长的药物。
本发明提供了一种活性成分的用途,其特征在于:
所述用途还包括:用于制备减少EPEC在肠道内的定植的药物。
本发明提供了一种活性成分的用途,其特征在于:
所述用途还包括:用于制备能够降低EPEC迁移能力的药物。
本发明提供了一种活性成分的用途,其特征在于:
所述用途还包括:用于制备减少EPEC对肠道外脏器的侵袭的药物。
此外，本发明还提供了一种EPEC急性感染实验模型,其特征在于，由如下步骤建模:
S1.在细菌感染前2天，向目标模型体添加链霉素；
S2.在细菌感染前1天，停止添加链霉素；
S3.采用EPEC菌液进行细菌感染。
本发明的作用和效果：
在本发明的研究中表明，再生基因(regenerating family，Reg)蛋白4(Reg4)是机体表达的分泌性蛋白，经本发明的研究表明Reg4蛋白具有抗菌肽活性。
在本发明的研究中将不同浓度Reg4蛋白与EPEC共孵育，发现Reg4蛋白能显著抑制EPEC生长。定量PCR检测EPEC感染小鼠肠道粘膜中Reg4表达水平，发现EPEC感染导致Reg4表达水平升高。
此外，本发明基于成功建立的EPEC急性感染实验，使用Reg4蛋白治疗EPEC感染小鼠，发现Reg4蛋白能减少EPEC在肠道内的定植及对肠道外脏器的侵袭，改善由EPEC感染引起的肠道炎症和病理性损伤。同时，ELISA实验检测发现Reg4蛋白能与EPEC鞭毛蛋白结合，从而减少EPEC迁移能力。
此外，EPEC致病主要依靠肠上皮细胞脱落基因座(the locus of enterocyteeffacement，LEE)编码效应分子，该效应分子依靠LEE编码的III型分泌***(T3SS)分泌并转位进入宿主细胞，从而引起细胞病变和损伤。典型的改变是细菌紧密粘附在宿主细胞表面，引起肠刷状缘位点破坏和原生质膜扭曲变形，细胞骨架重新排列。细菌粘附处形成基垫，并伴有上皮细胞大量微绒毛脱落，即粘附和脱落损伤(attaching and effacinglesion，A/E lesion)。A/E损伤导致了肠黏膜吸收能力下降，从而破坏机体电解质平衡，导致严重腹泻。鞭毛作为肠致病性大肠埃希菌的运动器官，在细菌运动和致病性上具有重要作用。细菌鞭毛可促进肠致病性大肠埃希菌粘附和侵袭肠上皮细胞。故而，通过本发明的研究表明，Reg4能够与EPEC鞭毛蛋白结合，也就是说在本发明中明确了Reg4蛋白通过结合肠致病性大肠埃希菌鞭毛，从而减少EPEC定植肠道和侵袭肠道外脏器的具体机制。
由此，本发明公开的Reg4蛋白抗菌活性较强，具有分子质量小、抗蛋白酶降解、抗菌谱广、抗菌机制异于传统抗生素，对抗生素产生的超级耐药菌株具有较好的抗菌活性等特性，而Reg4蛋白属于人体抗菌肽中的一种，不会引起机体排异反应，且无药物残留等风险。
因此，本发明公开的Reg4蛋白有望减少传统抗生素耐药性，作为一种新型抗菌肽，用于有效治疗EPEC感染，成为今后治疗肠致病性大肠埃希菌感染的最佳药物，为临床治疗EPEC感染提供新的治疗策略。
附图说明
图1.Reg4蛋白抑制EPEC生长
其中，图1A为EPEC细菌生长动力学曲线(****，EPEC+PBS vs.EPEC+10μg/ml,p<0.0001)。
图1B为Reg4蛋白和EPEC细菌共同孵育第4h OD600测量结果。
图1C为Reg4蛋白和EPEC细菌共同孵育第24h细菌平板涂布结果。
图1D为Reg4蛋白和EPEC细菌共同孵育第24h细菌数目测量结果。
图2.EPEC感染小鼠流程图和小鼠体重变化
其中，图2A为EPEC感染小鼠流程图。
图2B为EPEC感染小鼠体重变化。
图3.EPEC感染小鼠肠道病理变化和评分
其中，图3A为回肠和结肠HE染色光镜(各组放大倍数：×100)。
图3B为各组小鼠回肠和结肠炎症病理学评分
图4.小鼠盲肠及粪便中EPEC细菌含量检测结果
其中，图4A为重组鼠Reg4蛋白对盲肠和粪便中EPEC细菌含量的影响。
图4B为各组小鼠盲肠组织和粪便中EPEC细菌含量的比较。
图5.小鼠肝脏、脾脏和肠系膜***中EPEC细菌含量检测结果
其中，图5A为重组鼠Reg4蛋白对肝脏、脾脏和肠系膜***中EPEC细菌含量的影响。
图5B为各组小鼠肝脏中EPEC细菌含量的比较。
图5C为各组小鼠脾脏中EPEC细菌含量的比较。
图5D为各组小鼠肠系膜***中EPEC细菌含量的比较。
图6.小鼠相关炎症因子表达水平检测
其中，图6A为ELISA检测小鼠血清中IL-22含量。
图6B为ELISA检测小鼠血清中IFN-γ含量。
图6C为小鼠结肠粘膜组织中IL-1β的表达水平。
图6D为小鼠结肠粘膜组织中IL-10的表达水平。
图6E为小鼠结肠粘膜组织中IFN-γ的表达水平。
图6F为小鼠结肠粘膜组织中IL-6的表达水平。
图7.Reg4与EPEC鞭毛结合作用
其中，图7A为EPEC在半固体琼脂糖培养板内迁移结果。
图7B为EPEC在半固体琼脂糖培养板内迁移形成的晕圈直径检测结果。
图7C为EPEC鞭毛蛋白提取结果。
图7D为ELISA检测EPEC鞭毛与Reg4蛋白结合作用。
具体实施方式
实施例1.Reg4蛋白在体外抑制EPEC生长实验
1.1主要材料
(1)胰蛋白胨：ST800，上海碧云天生物技术有限公司
(2)酵母膏：ST968，上海碧云天生物技术有限公司
(3)氯化钠：1249KG001，上海兢蔚生物科技有限公司
(4)高纯度低电渗琼脂糖：G5056-100G，武汉塞维尔生物科技有限公司
(5)肠致病性大肠埃希氏菌(Escherichia coli,EPEC)：bio-56094，购自北京百欧博伟生物技术有限公司。
1.2方法
1.2.1 Luria-Bertani(LB)培养基和培养板的配制：
LB培养基：在1000ml去离子水中加入:胰化蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 10g，加入1000ml双蒸水(摇动容器直至溶质溶解，高压下蒸汽灭菌20min。
LB固体培养基及倒板：(1).配制：100ml LB培养基加入1.5g琼脂粉；
(2).抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时加入卡那霉素(终浓度为50μg/ml)，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。
(3).倒板：10ml LB倒1个板子。培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照10-15分钟。
(4).保存：用封口胶封边，并倒置放于4℃保存，一个月内使用。
1.2.2肠致病性大肠埃希氏菌培养
用无菌吸管吸取0.5ml左右LB液体培养基于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的细菌悬液转移至盛有5ml液体培养基的试管中混匀，并取100μl转接到固体培养基上。将液体试管和斜面试管静置培养。取100μl EPEC菌液加至1000ml含50μg/ml卡那霉素的写上全称然后再缩写培养基中，37℃，过夜培养，培养至对数生长期后，4000rpm，20min，离心收集菌体，用PBS缓冲液重悬，使用平板计数法测定菌液菌落总数，-80℃保存菌体备用。
1.2.3 Reg4蛋白浓度调整
用灭菌PBS缓冲液将药物浓度调整为1mg/ml。所有蛋白溶液在使用前均使用0.22μm滤膜过滤除菌，保存于无菌1.5ml EP管。
1.2.4 Reg4蛋白与EPEC共孵育
将10μl复苏的EPEC细菌悬液接种到总共200μl含有不同浓度(0，2或10μg/ml)Reg4蛋白。每2小时通过OD600测量监测细菌的生长。
用灭菌PBS缓冲液将EPEC稀释至终浓度为2×105CFU/ml。取15ml离心管4支，排成一排，第1管加入1980ul LB培养基和20μl稀释好的EPEC菌液(作为对照组)，第2管加入1978μl LB培养基、20μl菌液和2μl重组鼠Reg4蛋白(作为1μg/ml组)，第3管加入1960μl LB培养基、20μl菌液和20μl重组鼠Reg4蛋白(作为10μg/ml组),混匀。盖好盖子，置37℃恒温箱中孵育24小时。
1.2.5细菌菌落总数测定
将孵育好的菌液用灭菌水连续稀释至终浓度为1×107CFU/ml。取100μl孵育好的菌液均匀涂抹于卡那霉素琼脂培养板上。平板平放于超净台上30分钟，使菌液渗入培养基表层内。将平板倒置于37℃恒温箱中培养24h，24h后计算平板菌落数目，乘于稀释倍数即得出各组菌落数目。
1.3结果
1.3.1细菌菌落总数测定
根据GB 4789.2-2016标准进行细菌平板计数。EPEC菌落总数为7.6×109CFU/ml。
1.3.2重组Reg4蛋白抑制EPEC细菌生长
将EPEC分别与不同浓度的重组Reg4蛋白共同孵育，进行OD600测定(图1A-B)。细菌生长动力学曲线结果显示，当Reg4蛋白浓度达到10μg/ml时能有效抑制EPEC的生长。
将EPEC分别与PBS、1μg/ml、5μg/ml和10μg/ml重组鼠Reg4蛋白共同孵育24h，进行细菌菌落总数测定(图1C-D)。结果显示，PBS组细菌总数为8.46×109CFU/ml,给予1μg/ml重组Reg4蛋白后细菌总数减少至3.51×109CFU/ml(p＝0.023)，给予5μg/ml重组Reg4蛋白后细菌总数减少至1.87×109CFU/ml(p＝0.002)，给予10μg/ml重组Reg4蛋白细菌总数则减少约7倍，总数为1.24×109CFU/ml(p＝0.0005)。结果表明，重组Reg4蛋白能有效抑制EPEC生长。
实施例2.Reg4蛋白抵抗EPEC感染小鼠
2.1主要材料
(1)C57BL/6小鼠：上海吉辉实验动物饲养有限公司
(2)灌胃针8号：GWZ-8-45，上海晶旷生物科技有限公司
2.2方法
2.2.1 Reg4蛋白浓度调整
用灭菌PBS缓冲液将药物浓度调整为1mg/ml。所有蛋白在使用前均使用0.22μm滤膜过滤除菌，保存于无菌1.5ml EP管。
2.2.2 EPEC菌液稀释
用灭菌PBS缓冲液将EPEC稀释至终浓度为2×109CFU/ml。
2.2.3小鼠急性感染实验
取35日龄野生型(wide type,WT)雄性C57BL/6小鼠作为感染对象，随机分成6组，分组如下：包括Con组(n＝10)，EPEC+PBS组和EPEC+Reg4组(n＝10)。
实验操作如图2A所示，在细菌感染前2天在小鼠饮用水中添加5g/L链霉素以引起肠道菌群絮乱，感染前1天改用正常饮用水。给予每只小鼠灌胃100μl EPEC菌液(细菌总量为2×109CFU)。从感染后第1天起，EPEC+Reg4组小每日经腹腔注射给予100μl 10μg/ml鼠Reg4蛋白，Con组和EPEC+PBS组给予腹腔注射等量灭菌PBS。
每日定时记录小鼠体重，在感染第4天进行取材。小鼠麻醉之后眼球取血，脱颈处死，开腹取材。取部分回肠和结肠置于4％多聚甲醛中固定。收集肝脏、脾脏、肠系膜***、部分盲肠和小鼠粪便用于细菌总数测定。刮取回肠末端和结肠肠粘膜。
2.2.4脏器细菌负荷量测定
用无菌剪刀、镊子取小鼠肝脏、脾脏、肠系膜***、盲肠和粪便，根据重量加入无菌PBS溶液，无菌环境中进行匀浆处理。后对匀浆液进行连续梯度稀释，分别吸取100μl匀浆液涂布在含有卡那霉素的LB培养板上，过夜培养，观察菌落状态并计数。
2.2.6肠道组织病理学评分
取小鼠回肠和结肠置于4％多聚甲醛中固定，常规脱水、包埋、切片、HE染色，显微镜下观察肠上皮组织完整性、粘膜下水肿程度和炎症细胞浸润等病理变化。
2.2.7检测肠道炎症反应
根据试剂商提供的实验方案，检测小鼠血清中IL-22和IFN-γ含量。使用RNA提取试剂盒提取小鼠结肠粘膜组织，定量PER检测小鼠结肠粘膜相关炎症基因的表达水平，包括IL-1β、IL-10、IFN-γ和IL-6。
2.3结果
2.3.1 Reg4蛋白能改善EPEC感染小鼠体重丢失
各组小鼠体重丢失情况如图2B所示，未给予EPEC感染的Con组小鼠体重缓慢上升，感染后第3天体重增长初始体重的107.8％，而EPEC感染的各组小鼠均出现不同程度的体重丢失。在感染后第1天，EPEC+PBS组和EPEC+Reg4组小鼠体重分别为初始体重的96.1％和96.4％，显著低于Con组(p均<0.0001)。在感染后第3天，EPEC+Reg4组小鼠体重增长初始体重的102.8％，而EPEC+Reg4组小鼠体重为初始体重的98.6％，两组小鼠体重增长速率具有统计学差异(p＝0.0069)。结果表明，Reg4蛋白治疗能改善EPEC感染小鼠体重丢失情况。
2.3.2 Reg4蛋白能缓解EPEC引起的肠道损伤
病理检测结果如图3A-B显示，相比于Con组小鼠回肠和结肠组织，EPEC+PBS组小鼠回肠和结肠均可见肠绒毛均发生严重的破损、脱落，粘膜脱落至肠腔内，肠腔内可见纤维素渗出，大部分腺体被破坏，粘膜下层水肿严重，粘膜肌层和粘膜下层可见有大量中性粒细胞浸润。而EPEC+Reg4组小鼠回肠和结肠损伤均有所改善，肠粘膜脱落减轻，固有层炎症细胞浸润减少。肠道病理评分也显示，EPEC+PBS组小鼠回肠和结肠发生严重的炎症，而给予Reg4蛋白后肠道炎症明显减轻。结果表明Reg4蛋白可以有效缓解EPEC造成的肠道病理损伤。
2.3.3 Reg4蛋白能减少EPEC在肠道内定植
对各组小鼠粪便和盲肠中的EPEC细菌数量进行检测，结果如图4A-C。未感染对照组小鼠盲肠和粪便中均未检测到EPEC，而EPEC+PBS组小鼠盲肠和粪便均检测到大量EPEC。在给予Reg4蛋白治疗后，EPEC+Reg4组小鼠盲肠和粪便中的EPEC数目明显减少(p<0.01)。
2.3.4 Reg4蛋白能减轻EPEC对小鼠脏器组织的侵袭情况
对各组小鼠肠系膜***、脾脏和肝脏中的EPEC细菌数量进行检测，结果如图5A-D。未感染对照组小鼠肠道外脏器中未检测到EPEC，EPEC感染小鼠各脏器均可见EPEC定植分布。与EPEC+PBS组小鼠相比，EPEC+Reg4组小鼠肝脏、脾脏和肠系膜***中的EPEC数量明显减少。结果表明Reg4蛋白能有效抑制EPEC侵袭其他肠道外器官组织。
2.3.5 Reg4蛋白能改善EPEC诱导的肠道炎症反应
使用ELISA试剂盒检测各组小鼠血清中IL-22和IFN-γ含量。结果如图6A-B显示，EPEC感染小鼠血清IL-22和IFN-γ含量较未感染组小鼠明显增加，给予Reg4蛋白干预可明显减少血清中IL-22和IFN-γ含量。使用定量PER检测小鼠结肠粘膜相关炎症基因的表达水平，结果如图6C-F。EPEC感染小鼠结肠粘膜组织中IL-1β、IL-10、IFN-γ和IL-6的表达水平均较未感染组小鼠明显升高，给予Reg4蛋白干预可明显减低小鼠结肠粘膜组织中IL-1β、IL-10、IFN-γ和IL-6的表达水平。以上结果表明Reg4蛋白能改善EPEC诱导的肠道炎症反应。
实施例3.Reg4抑制EPEC迁移作用机制
3.1主要材料
(1)96孔EIA/RIA板：9018，上海宇进生物科技有限公司
(2)Reg4抗体：bs-10036R，上海科雅生物科技有限公司
(3)TMB显色液：P0209-100ml，上海碧云天生物技术有限公司
3.2方法
3.2.1 Reg4蛋白对EPEC迁移的影响
将处于对数生长期的EPEC与Reg4蛋白共孵育1h。取10ul培养物接种在含有0.3％琼脂的半固体琼脂平板上，37℃孵育10h后细菌运动形成晕圈，检测晕圈直径大小。
3.2.2提取伤EPEC鞭毛
EPEC培养至对数生长期，用PBS重悬细菌沉淀，300次/min振荡分离鞭毛和菌体。离心(4000g，20min)，获取上清和沉淀。将上清进一步超速离心(80000g,60min),获取上清和沉淀，沉淀即为EPEC鞭毛。SDS-PAGE鉴定EPEC鞭毛蛋白纯度。
3.2.3 ELISA实验检测EPEC鞭毛与Reg4蛋白结合
将ELISA板用100ug/ml鞭毛或BSA包被过夜(4℃，16h)。使用PBS洗板3次，用含1％BSA的PBS配制不同浓度的Reg4蛋白和突变型Reg4蛋白(0、2、4、6、8和10ug/ml)，将含蛋白溶液与ELISA板共孵育2h(37℃)。PBS洗板3次，加入Reg4抗体(1:1000)，孵育2h。PBS洗板3次，加入二抗(1:5000)，在37℃孵育2h。PBS洗板3次，加入TMB显色，测量OD450值。
3.3结果
3.3.1 Reg4蛋白能减少EPEC迁移
对比EPEC在半固体琼脂平板的迁移情况，结果如图7A-B。PBS组EPEC在半固体琼脂平板迁移，形成直径为(12.8±0.4)cm的晕圈，而给予Reg4蛋白之后，Reg4+EPEC组细菌晕圈直径减小为(8.8±0.6)cm，提示Reg4蛋白能抑制EPEC迁移。
3.3.2提取EPEC鞭毛
提取鞭毛蛋白并行SDS-PAGE电泳，考马斯亮蓝染色分析。结果如图7C，考马斯亮蓝结果显示在沉淀中检测到相对分子质量约为60kDa的条带，其大小均与预期蛋白大小相符。鞭毛蛋白浓度为1.1mg/ml。
3.3.3 EPEC鞭毛与Reg4蛋白结合
使用ELISA实验检测EPEC鞭毛与Reg4结合情况，结果如图7D.EPEC+BSA值OD450值未见明显变化，而EPEC+Reg4组OD450值随着Reg4蛋白剂量的增加而增加，提示Reg4蛋白与EPEC鞭毛蛋白相互结合。
Figure BDA0003486141940000141
Figure BDA0003486141940000151
序列表
<110> 上海市儿科医学研究所
<120> Reg4抗菌肽治疗致病性大肠埃希菌感染的应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 157
<212> PRT
<213> Artificial
<400> 1
Met Ala Ser Lys Gly Val Arg Leu Leu Leu Leu Leu Ser Trp Val Ala
1 5 10 15
Gly Pro Glu Val Leu Ser Asp Ile Leu Arg Pro Ser Cys Ala Pro Gly
20 25 30
Trp Phe Tyr Tyr Arg Ser His Cys Tyr Gly Tyr Phe Arg Lys Leu Arg
35 40 45
Asn Trp Ser His Ala Glu Leu Glu Cys Gln Ser Tyr Gly Asn Gly Ser
50 55 60
His Leu Ala Ser Val Leu Asn Gln Lys Glu Ala Ser Val Ile Ser Lys
65 70 75 80
Tyr Ile Thr Gly Tyr Gln Arg Asn Leu Pro Val Trp Ile Gly Leu His
85 90 95
Asp Pro Gln Lys Lys Gln Leu Trp Gln Trp Thr Asp Gly Ser Thr Asn
100 105 110
Leu Tyr Arg Arg Trp Asn Pro Arg Thr Lys Ser Glu Ala Arg His Cys
115 120 125
Ala Glu Met Asn Pro Lys Asp Lys Phe Leu Thr Trp Asn Lys Asn Gly
130 135 140
Cys Ala Asn Arg Gln His Phe Leu Cys Lys Tyr Lys Thr
145 150 155

Claims (10)

1.一种活性成分的用途,其特征在于:
所述活性成分为:Reg4蛋白；
所述用途包括:用于制备治疗EPEC感染症状的药物。
2.如权利要求1所述的一种活性成分的用途,其特征在于:
所述用途还包括:用于制备治疗和缓解由EPEC感染引起的肠道炎症反应的药物。
3.如权利要求1所述的一种活性成分的用途,其特征在于:
所述用途还包括:用于制备治疗和缓解由EPEC感染引起的病理性损伤的药物。
4.如权利要求1所述的一种活性成分的用途,其特征在于:
所述用途还包括:用于制备治疗和缓解由EPEC感染导致的体重丢失病症的药物。
5.如权利要求1所述的一种活性成分的用途,其特征在于:
所述用途还包括:用于制备能与EPEC鞭毛蛋白结合的药物。
6.如权利要求1所述的一种活性成分的用途,其特征在于:
所述用途包括:用于制备抑制EPEC生长的药物。
7.如权利要求1所述的一种活性成分的用途,其特征在于:
所述用途还包括:用于制备减少EPEC在肠道内的定植的药物。
8.如权利要求1所述的一种活性成分的用途,其特征在于:
所述用途还包括:用于制备能够降低EPEC迁移能力的药物。
9.如权利要求1所述的一种活性成分的用途,其特征在于:
所述用途还包括:用于制备减少EPEC对肠道外脏器的侵袭的药物。
10.一种EPEC急性感染实验模型,其特征在于，由如下步骤建模:
S1.在细菌感染前2天，向目标模型体添加链霉素；
S2.在细菌感染前1天，停止添加链霉素；
S3.采用EPEC菌液进行细菌感染。
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