CN114349722A - 一种强心苷化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种强心苷化合物及其制备方法和应用，属于药物技术领域。本发明提供了具有式I～V所示的结构的强心苷化合物，可用于抗肿瘤药物的制备，具有选择性抑制人骨肉瘤细胞MG63，可用于抗人骨肉瘤药物专属药物的制备。

Description

一种强心苷化合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及药物技术领域，尤其涉及一种强心苷化合物及其制备方法和应用。
背景技术
骨肉瘤又称为骨瘤，是青少年及儿童中常见的原发性恶性肿瘤之一，也是最常见于骨组织的原发性恶性肿瘤。患者常伴随截肢、肺转移、死亡等后果，其对疗效不敏感，化疗和手术为其主要的治疗手段，而单纯的手术治愈率仅15％～20％。虽然配合化疗药物使用可以有效的提升患者的生存周期，但是骨瘤的高转移病人的治愈率仍然只有30％。其中肿瘤浸润及转移是恶性肿瘤导致患者死亡的主要原因之一。通过调控细胞凋亡，降低骨肉瘤的转移，从而提高骨肉瘤治疗效果，是降低骨肉瘤死亡率，改善患者远期预后的重要途径。现有技术中，缺少能够有效抗人骨肉瘤的药物。所以，寻找更为有效的化疗药物进行治疗以及更为有效的治疗方法以提高骨肉瘤患者的生存率成为当今迫切的要求。
黑骨藤是作为中国特有的民族药物，在贵州、云南等地拥有悠久的用药历史，其传统功效经现代药理学的科学评价正逐渐被证实和挖掘。黑骨藤除具有抗炎、镇痛、抗类风湿性关节炎、抗肿瘤等作用外，还具有神经保护、抑菌的作用，其化学成分的研究涉及范围较广，包括蒽醌类、苯丙素类、黄酮类、三萜类、甾体、皂苷类等。通过二硝基甲苯诱导的小鼠迟发型超敏反应实验，发现黑骨藤提纯得到的醇沉部位对细胞增殖和细胞免疫调节有抑制作用；黑骨藤的多糖部位对T细胞的活化增殖和细胞免疫反应都有抑制作用，而发挥免疫抑制的活性成分可能与多糖成分HP1-3、HP2-2和HP2-4有关；黑骨藤乙酸乙酯提取部位得到的杠柳苷有较好的抗肿瘤活性；黑骨藤皂苷可通过抑制Th1型免疫反应，而产生治疗特应性皮炎。
现有的药理实验大多停留在粗提取物上，对具体药效成分的研究较少，抗肿瘤的具体机制尚不明确，单一化学成分的研究有待深。
发明内容
鉴于此，本发明的目的在于提供一种强心苷化合物及其制备方法和应用。本发明提供的强心苷化合物可用于抗肿瘤药物的制备，具有抗肿瘤活性。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
一种强心苷化合物，具有式I～V所示的结构：
Figure BDA0003484973990000021
本发明还提供了上述技术方案所述的强心苷化合物的制备方法，包括以下步骤：
将黑骨藤与乙醇溶液混合进行提取，得到浸膏固体；
将所述浸膏固体与甲醇-水混合液混合后滴加硫酸溶液，回流后依次进行冷却、调节pH值为7和减压，然后用乙酸乙酯进行萃取，得到乙酸乙酯萃取部分浸膏；
将所述乙酸乙酯萃取部分浸膏与二氯甲烷-甲醇混合液溶解后，得到溶解液；
将所述溶解液通过梯度洗脱进行硅胶柱色谱分离，所述梯度洗脱的程序为：依次使用石油醚、第一石油醚-丙酮混合液、第二石油醚-丙酮混合液、第三石油醚-丙酮混合液、第四石油醚-丙酮混合液和丙酮进行洗脱，获得5个部分的洗脱液，依次命名为Fr1、Fr2、Fr3、Fr4和Fr5；所述第一石油醚-丙酮混合液中石油醚与丙酮的体积比为20:1，所述第二石油醚-丙酮混合液中石油醚与丙酮的体积比为10:1，所述第三石油醚-丙酮混合液中石油醚与丙酮的体积比为5:1，所述第四石油醚-丙酮混合液中石油醚与丙酮的体积比为1:1；
将所述Fr2通过丙酮重结晶，得到具有式V所示结构的化合物，所得滤液依次用甲醇进行凝胶柱色谱Sephadex LH-20洗脱和丙酮重结晶，得到具有式II所示结构的化合物；
将所述Fr.3依次用不同浓度的甲醇/H2O进行MCI洗脱，所述甲醇/H2O中甲醇的体积分数分别为30％、60％和90％，分别得到组分Fr3-1、和Fr3-2Fr3-3，将所述Fr3-3采用石油醚-乙酸乙酯进行硅胶柱色谱分离，得到具有式I和式IV所示结构的化合物，所述石油醚-乙酸乙酯中石油醚与乙酸乙酯的体积比为15:1、10:1、5:1、2:1和1:1；将所述Fr3-2依次用CHCl3/甲醇进行凝胶柱色谱Sephadex LH-20分离，得到具有式III所示结构的化合物，所述CHCl3/甲醇中CHCl3与甲醇的体积比为1:1。
优选地，所述乙醇溶液中乙醇的体积分数为70％。
优选地，所述提取在回流的条件下进行，所述提取的次数为3次，每次提取的时间依次分别为5h、3h和2h。
优选地，所述甲醇-水混合液中甲醇与水的体积比为2:1。
优选地，所述二氯甲烷-甲醇混合液中二氯甲烷与甲醇的体积比为1:1。
本发明还提供了上述技术方案所述的强心苷化合物或上述技术方案所述制备方法制得的强心苷化合物、或式VI、VII、VIII所示结构的化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，
Figure BDA0003484973990000031
优选地，所述抗肿瘤药物包含抗人骨肉瘤药物。
优选地，所述抗肿瘤药物包含有效剂量的所述强心苷化合物、其立体异构体、可药用盐和药学上可接受的载体、辅料、赋形剂和稀释剂。
优选地，所述抗肿瘤药物的剂型包括片剂、注射剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂、口服液、缓释制剂、控释制剂或纳米制剂药学上可接受的剂型。
本发明提供了具有式I～V所示的结构的强心苷化合物，可用于抗肿瘤药物的制备，具有选择性抑制人骨肉瘤细胞MG 63，可用于抗人骨肉瘤药物专属药物的制备。
具体实施方式
本发明提供了一种强心苷化合物，具有式I～V所示的结构：
Figure BDA0003484973990000032
本发明还提供了上述技术方案所述的强心苷化合物的制备方法，包括以下步骤：
将黑骨藤与乙醇溶液混合进行提取，得到浸膏固体；
将所述浸膏固体与甲醇-水混合液混合后滴加硫酸溶液，回流后依次进行冷却、调节pH值为7和减压，然后用乙酸乙酯进行萃取，得到乙酸乙酯萃取部分浸膏；
将所述乙酸乙酯萃取部分浸膏与二氯甲烷-甲醇混合液溶解后，得到溶解液；
将所述溶解液通过梯度洗脱进行硅胶柱色谱分离，所述梯度洗脱的程序为：依次使用石油醚、第一石油醚-丙酮混合液、第二石油醚-丙酮混合液、第三石油醚-丙酮混合液、第四石油醚-丙酮混合液和丙酮进行洗脱，获得5个部分的洗脱液，依次命名为Fr1、Fr2、Fr3、Fr4和Fr5；所述第一石油醚-丙酮混合液中石油醚与丙酮的体积比为20:1，所述第二石油醚-丙酮混合液中石油醚与丙酮的体积比为10:1，所述第三石油醚-丙酮混合液中石油醚与丙酮的体积比为5:1，所述第四石油醚-丙酮混合液中石油醚与丙酮的体积比为1:1；
将所述Fr2通过丙酮重结晶，得到具有式V所示结构的化合物，所得滤液依次用甲醇进行凝胶柱色谱Sephadex LH-20洗脱和丙酮重结晶，得到具有式II所示结构的化合物；
将所述Fr.3依次用不同浓度的甲醇/H2O进行MCI洗脱，所述甲醇/H2O中甲醇的体积分数分别为30％、60％和90％，分别得到组分Fr3-1、和Fr3-2Fr3-3，将所述Fr3-3采用石油醚-乙酸乙酯进行硅胶柱色谱分离，得到具有式I和式IV所示结构的化合物，所述石油醚-乙酸乙酯中石油醚与乙酸乙酯的体积比为15:1、10:1、5:1、2:1和1:1；将所述Fr3-2依次用CHCl3/甲醇进行凝胶柱色谱Sephadex LH-20分离，得到具有式III所示结构的化合物，所述CHCl3/甲醇中CHCl3与甲醇的体积比为1:1。
本发明将黑骨藤(Periploca forrestii Schltr.)与乙醇溶液混合进行提取，得到浸膏固体。
本发明优选将所述黑骨藤依次进行晒干和粉粹后，再进行提取。
在本发明中，所述乙醇溶液中乙醇的体积分数优选为70％。
在本发明中，所述提取优选在回流的条件下进行，所述提取的次数优选为3次，每次提取的时间优选依次分别为5h、3h和2h。
本发明优选合并3次滤液，得到所述浸膏固体。
得到浸膏固体后，本发明将所述浸膏固体与甲醇-水混合液混合后滴加硫酸溶液，回流后依次进行冷却、调节pH值为7和减压，然后用乙酸乙酯进行萃取，得到乙酸乙酯萃取部分浸膏；
在本发明中，所述甲醇-水混合液中甲醇与水的体积比优选为2:1。
在本发明中，所述浸膏固体与甲醇-水混合液的用量比优选为10kg:30L。
在本发明中，所述硫酸溶液的质量百分含量优选为7％。
在本发明中，所述冷却优选为自然冷却。
本发明优选使用质量百分含量为10％的NaOH溶液调节pH值为7。
在本发明中，所述减压的作用是蒸出甲醇。
得到乙酸乙酯萃取部分浸膏后，本发明将所述乙酸乙酯萃取部分浸膏与二氯甲烷-甲醇混合液溶解后，得到溶解液。
在本发明中，所述二氯甲烷-甲醇混合液中二氯甲烷与甲醇的体积比优选为1:1。
在本发明中，所述乙酸乙酯萃取部分浸膏与二氯甲烷-甲醇混合液的用量比优选为1.5kg:1L。
得到溶解液后，本发明将所述溶解液通过梯度洗脱进行硅胶柱色谱分离，所述梯度洗脱的程序为：依次使用石油醚、第一石油醚-丙酮混合液、第二石油醚-丙酮混合液、第三石油醚-丙酮混合液、第四石油醚-丙酮混合液和丙酮进行洗脱，获得5个部分的洗脱液，依次命名为Fr1、Fr2、Fr3、Fr4和Fr5；所述第一石油醚-丙酮混合液中石油醚与丙酮的体积比为20:1，所述第二石油醚-丙酮混合液中石油醚与丙酮的体积比为10:1，所述第三石油醚-丙酮混合液中石油醚与丙酮的体积比为5:1，所述第四石油醚-丙酮混合液中石油醚与丙酮的体积比为1:1。
在本发明中，所述硅胶柱色谱分离使用的硅胶的粒径优选为200～300目。
本发明优选将所述溶解液吸附于硅胶(40～80目)上，将吸附于硅胶的样品采用硅胶(200～300目，30Kg)柱层析进行梯度洗脱分离。
在本发明中，所述梯度洗脱优选得到：Fr(fraction)I部分石油醚(100L)，FrII部分石油醚/丙酮(体积比)＝20：1(100L)，FrIII部分石油醚/丙酮(体积比)＝10：1(100L)，FrIV石油醚/丙酮(体积比)＝5：1(100L)，FrV石油醚/丙酮(体积比)＝1：1(100L)，FrVI丙酮(100L)。
得到Fr1、Fr2、Fr3、Fr4和Fr5后，本发明将所述Fr2通过丙酮重结晶，得到具有式V所示结构的化合物，所得滤液依次用甲醇进行凝胶柱色谱Sephadex LH-20洗脱和丙酮重结晶，得到具有式II所示结构的化合物；
将所述Fr.3依次用不同浓度的甲醇/H2O进行MCI洗脱，所述甲醇/H2O中甲醇的体积分数分别为30％、60％和90％，分别得到组分Fr3-1、和Fr3-2Fr3-3，将所述Fr3-3采用石油醚-乙酸乙酯进行硅胶柱色谱分离，得到具有式I和式IV所示结构的化合物，所述石油醚-乙酸乙酯中石油醚与乙酸乙酯的体积比为15:1、10:1、5:1、2:1和1:1；将所述Fr3-2依次用CHCl3/甲醇进行凝胶柱色谱Sephadex LH-20分离，得到具有式III所示结构的化合物，所述CHCl3/甲醇中CHCl3与甲醇的体积比为1:1。
本发明中，所述Fr2通过丙酮重结晶后，优选抽滤得到化合物6，滤液再经过凝胶柱色谱Sephadex LH-20(MeOH)和丙酮重结晶得到化合物2；所述Fr3通过MCI(MeOH/H2O中MeOH的体积百分含量封闭为30％,60％,90％，得到组分Fr3-1～Fr3-3，其中，Fr3-3采用硅胶柱色谱(PE/EA体积比为15:1,10:1,5:1,2:1,1:1分离得到化合物1和5，所述Fr3-2经过凝胶柱色谱Sephadex LH-20(CHCl3/MeOH体积比1:1)、硅胶柱色谱(CHCl3/MeOH体积比100:1,50:1,20:1)和乙醇重结晶，依次得到化合物3、4和7；所述Fr4经过反相硅胶柱色谱(梯度洗脱，MeOH/H2O体积比为50:50→100:0)、凝胶柱色谱Sephadex LH-20(MeOH)及硅胶柱色谱(PE/EA体积比为2:1,1:3)分离得到化合物8。
本发明还提供了上述技术方案所述强心苷化合物或上述技术方案所述制备方法制得的强心苷化合物、或式VI、VII、VIII所示结构的化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，
Figure BDA0003484973990000061
在本发明中，所述式VII所示结构的化合物(杠柳苷元)活性是目前临床药物阿霉素的10倍多，具有作为抗肿瘤候选药物的前景。
在本发明中，所述抗肿瘤药物优选包含抗人骨肉瘤药物。
在本发明中，所述抗肿瘤药物优选包含有效剂量的所述强心苷化合物、其立体异构体、式VI、VII、VIII所示结构的化合物、可药用盐和药学上可接受的载体、辅料、赋形剂和稀释剂。
在本发明中，所述抗肿瘤药物的剂型优选包括片剂、注射剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂、口服液、缓释制剂、控释制剂或纳米制剂药学上可接受的剂型。
下面结合实施例对本发明提供的强心苷化合物及其制备方法和应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
本发明实施例中，强心苷化合物、式VI、VII、VIII所示结构的化合物如下式1～8所示。
Figure BDA0003484973990000071
实施例1
化合物的制备
50kg黑骨藤药材进行晒干，粉粹，70％乙醇回流提取3次(5h、3h、2h)，合并3次滤液，得到浸膏固体10kg。取固体10kg加入甲醇：水＝(2:1,30L)加热溶解，再缓慢滴加20L水中配成质量百分含量为7％H2SO4，加热回流2h，冷却后用质量百分含量10％NaOH溶液调节pH＝7，然后减压蒸出甲醇，然后用乙酸乙酯进行萃取，减压回收萃取溶剂得到乙酸乙酯萃取部分浸膏(1.5kg)。将乙酸乙酯萃取部分浸膏(1.5kg)用二氯甲烷：甲醇体积比1：1(1.0L)溶解后，使其吸附于硅胶(40-80目)上，将吸附于硅胶的样品采用硅胶(200-300目，30Kg)柱层析进行梯度洗脱分离：Fr(fraction)I部分石油醚(100L)，FrII部分石油醚/丙酮(体积比)＝20：1(100L)，FrIII部分石油醚/丙酮(体积比)＝10：1(100L)，FrIV石油醚/丙酮(体积比)＝5：1(100L)，FrV石油醚/丙酮(体积比)＝1：1(100L)，FrVI丙酮(100L)，在以上组分Fr1-Fr5中，Fr2(306.5g)部分通过丙酮重结晶，抽滤得到化合物6(9g)，滤液再经过凝胶柱色谱Sephadex LH-20(MeOH)和丙酮重结晶得到化合物2(91mg)；Fr3(425.8g)部分通过MCI(MeOH/H2O中MeOH的体积含量分别为30％,60％,90％)，得到组分Fr3-1～Fr3-3，其中，Fr3-3采用硅胶柱色谱(PE/EA体积比15:1,10:1,5:1,2:1,1:1)分离得到化合物1(782.2mg)，化合物5(104.8mg)；而Fr3-2经过凝胶柱色谱Sephadex LH-20(CHCl3/MeOH体积比1:1)、硅胶柱色谱(CHCl3/MeOH体积比100:1,50:1,20:1)和乙醇重结晶，依次得到化合物3(42mg),化合物4(21.6mg)和化合物7(137mg)；第Fr4(209.3g)部分经过反相硅胶柱色谱(梯度洗脱，MeOH/H2O体积比为50:50→100:0)、凝胶柱色谱Sephadex LH-20(MeOH)及硅胶柱色谱(PE/EA体积比为2:1,1:3)分离得到化合物8。
化合物理化数据
化合物1白色粉末，[α]25 D+10°(c＝0.004,MeOH)；UV(MeOH)λmax(logε)265nm；IR(KBr)νmax 3396,2937,1748,1627,1407,1391,1088,553cm-1；HRESI-MS(positive)m/z395.21872[M+Na]+(calcd.for C23H32O4Na,395.21928)；1H-NMR(CDCl3,600MHz)δ1.92(1H,dt,J＝2.9,J＝14.3,H-1),1.34(1H,dt,J＝2.9,J＝14.3,H-1),1.90(1H,m,H-2),1.68(1H,m,H-2),4.22(1H,m,H-3),2.33(1H,m,H-4),1.65(1H,m,H-4),1.67(1H,m,H-6),1.44(1H,m,H-6),2.32(1H,m,H-7),1.88(1H,m,H-7),2.34(1H,m,H-9),1.64(1H,m,H-11),1.57(1H,m,H-11),1.77(1H,m,H-12),1.28(1H,m,H-12),1.95(1H,m,H-15),1.72(1H,m,H-15),2.50(1H,m,H-16),2.38(1H,m,H-16),2.35(1H,m,H-17),0.82(3H,s,H-18),0.84(3H,s,H-19),4.85～4.70(2H,br d,J＝17.4,H-21),5.88(1H,m,H-22)；13C-NMR(CDCl3,150MHz)δ24.57(C-1),28.39(C-2),68.16(C-3),36.61(C-4),74.84(C-5),35.37(C-6),26.68(C-7),127.67(C-8),38.91(C-9),41.75(C-10),19.97(C-11),36.28(C-12),43.90(C-13),139.55(C-14),25.63(C-15),25.87(C-16),51.74(C-17),19.45(C-18),16.73(C-19),170.51(C-20),73.46(C-21),116.63(C-22),173.96(C-23)。
化合物2白色粉末,[α]25 D-50°(c＝0.004,MeOH)；UV(MeOH)λmax(logε)265nm；IR(KBr)νmax 3419,2937,2898,1693,1648,1402,1238,1061,593cm-1；HRESI-MS(positive)m/z 375.19260[M+Na]+(calcd.for C23H28O3Na,375.19307)；1H-NMR(CDCl3,600MHz)δ1.85(1H,m,H-1),1.30(1H,m,H-1),2.19(1H,m,H-2),2.09(1H,m,H-2),5.70(1H,brs,H-3),5.99(1H,m,H-4),5.60(dd,J＝3.2,J＝6.2,H-6),2.86(1H,dd,J＝6.8,J＝16.9,H-7),1.77(1H,dd,J＝6.8,J＝16.9,H-7),2.04(1H,m,H-9),1.88(1H,m,H-11),1.33(1H,m,H-11),2.18(1H,m,H-12),1.97(1H,m,H-12),2.09(1H,m,H-15),1.54(1H,m,H-15),2.66(1H,m,H-16),1.51(1H,m,H-16),2.91(1H,m,H-17),1.03(3H,s,H-18),0.81(3H,s,H-19),4.72～4.58(2H,brd,J＝17.4,H-21),5.70(1H,br s,H-22)；13C-NMR(CDCl3,150MHz)δ36.05(C-1),22.61(C-2),126.01(C-3),128.04(C-4),140.65(C-5),122.20(C-6),30.57(C-7),51.39(C-8),53.72(C-9),36.42(C-10),22.32(C-11),39.20(C-12),46.86(C-13),219.33(C-14),40.74(C-15),23.48(C-16),51.66(C-17),23.31(C-18),17.63(C-19),169.45(C-20),73.12(C-21),117.11(C-22),173.51(C-23)。
化合物3白色粉末,[α]25 D+20°(c＝0.004,MeOH)；UV(MeOH)λmax(logε)265nm；IR(KBr):νmax 3466,2928,1726,1702,1623,1401,1265,1065,1026,856,714cm-1；HRESI-MS(positive)m/z 393.20303[M+Na]+(calcd.for C23H32O4Na,393.20363)；1H-NMR(CDCl3,600MHz)δ2.84(1H,m,H-1),1.60(1H,m,H-1),2.20(1H,m,H-2),1.86(1H,m,H-2),3.50(1H,br s,H-3),2.34(1H,dd,J＝2.1,J＝5.0,H-4),2.30(1H,dd,J＝2.1,J＝5.0,H-4),5.42(1H,m,H-6),2.62(1H,m,H-7),1.52(1H,m,H-7),2.08(1H,m,H-9),2.45(1H,m,H-11),1.81(1H,m,H-11),2.26(1H,m,H-12),2.23(1H,m,H-12),1.88(1H,m,H-15),1.02(1H,m,H-15),2.17(1H,m,H-16),2.05(1H,m,H-16),3.01(1H,d,J＝6.6,H-17),0.98(3H,s,H-18),0.86(3H,s,H-19),4.70～4.56(2H,br d,J＝17.4,H-21),5.67(1H,br s,H-22)；13C-NMR(CDCl3,150MHz)δ26.46(C-1),31.08(C-2),71.30(C-3),41.51(C-4),137.32(C-5),120.39(C-6),32.90(C-7),48.45(C-8),56.90(C-9),38.33(C-10),22.51(C-11),42.17(C-12),47.85(C-13),218.92(C-14),38.62(C-15),41.81(C-16),53.32(C-17),23.18(C-18),19.12(C-19),169.87(C-20),73.05(C-21),116.99(C-22),173.57(C-23)。
化合物4白色粉末,[α]25 D+13.6°(c＝0.003,MeOH)；UV(MeOH)λmax(logε)265nm；IR(KBr)νmax 3401,2950,1763,1689,1402,1401,1200,1015,839,568cm-1；HRESI-MS(positive)m/z 413.22916[M+Na]+(calcd.for C23H34O5Na,393.20363)；1H-NMR(CDCl3,600MHz)δ1.85(1H,m,H-1),1.44(1H,m,H-1),2.02(1H,m,H-2),1.58(1H,m,H-2),4.12(1H,br s,H-3),2.07(1H,m,H-4),1.01(1H,m,H-4),1.96(1H,m,H-6),1.28(1H,m,H-6),1.56(1H,m,H-7),1.64(1H,m,H-7),2.34(1H,m,H-9),2.35(1H,m,H-11),1.82(1H,m,H-11),2.17(1H,m,H-12),2.05(1H,m,H-12),1.66(1H,m,H-15),1.98(1H,m,H-15),2.49(1H,m,H-16),1.36(1H,m,H-16),2.07(1H,m,H-17),1.04(3H,s,H-18),0.76(3H,s,H-19),2.72(1H,m,H-20),4.23(1H,t,H-21),3.83(t,H-21),2.48(1H,m,H-22),2.21(1H,m,H-22)；13C-NMR(CDCl3,150MHz)δ26.09(C-1),36.83(C-2),67.87(C-3),31.49(C-4),74.94(C-5),33.21(C-6),28.11(C-7),47.92(C-8),49.07(C-9),42.59(C-10),20.96(C-11),42.33(C-12),49.09(C-13),220.87(C-14),43.55(C-15),23.77(C-16),56.12(C-17),23.57(C-18),18.99(C-19),36.22(C-20),71.19(C-21),36.25(C-22),176.75(C-23)。
化合物5白色粉末，(+)ESI-MS m/z377.2[M+Na]+；1H-NMR(CDCl3,600MHz)δ1.90(1H,m,H-1),1.10(1H,m,H-1),1.86(1H,m,H-2),1.53(1H,m,H-2),3.54(m,H-3),2.33(1H,m,H-4),2.25(1H,m,H-4),5.42(m,H-6),2.24(1H,m,H-7),1.97(1H,m,H-7),2.17(br s,H-8),1.04(m,H-9),1.68(1H,m,H-11),1.51(1H,m,H-11),1.88(1H,dt,J＝3.4,J＝12.9,H-12),1.38(1H,dt,J＝3.4,J＝12.9,H-12),5.28(1H,br d,J＝2.2,H-15),2.47(1H,m,H-16),1.85(1H,m,H-16),2.78(1H,t,H-17),0.84(3H,s,H-18),1.03(3H,s,H-19),4.84～4.71(2H,br d,J＝17.4,H-21),5.90(1H,br d,J＝1.6,H-22)；13C-NMR(CDCl3,150MHz)δ37.02(C-1),31.45(C-2),71.55(C-3),42.06(C-4),139.96(C-5),121.03(C-6),29.58(C-7),31.21(C-8),49.82(C-9),36.85(C-10),21.48(C-11),40.45(C-12),48.51(C-13),153.18(C-14),118.05(C-15),33.42(C-16),52.42(C-17),17.91(C-18),19.08(C-19),170.55(C-20),73.50(C-21),116.34(C-22),174.01(C-23)。
化合物6滇杠柳苷元A(periforgenin A)白色粉末，(+)ESI-MS m/z 401.2[M+Na]+；1H-NMR(CDCl3,600MHz)δ4.14(1H,br.s,H-3),0.96(3H,s,H-18),0.78(3H,s,H-19),4.70-4.55(2H,br.d,J＝17.2,H-21),5.68(1H,s,H-22)；13C-NMR(CDCl3,150MHz)δ26.59(C-1),28.11(C-2),67.84(C-3),36.74(C-4),74.87(C-5),31.43(C-6),26.07(C-7),47.35(C-8),49.32(C-9),42.78(C-10),21.66(C-11),43.62(C-12),48.14(C-13),220.4(C-14),42.48(C-15),33.07(C-16),53.13(C-17),23.29(C-18),18.87(C-19),170.25(C-20),72.85(C-21),116.68(C-22),173.56(C-23)。
化合物7杠柳苷元(periplogenin)白色晶体，(+)ESI-MS m/z413.2[M+Na]+；1H-NMR(CDCl3,600MHz)δ1.92(1H,m,H-1),1.34(1H,m,H-1),1.90(1H,m,H-2),1.68(1H,m,H-2),4.18(m,H-3),2.33(1H,m,H-4),1.65(1H,m,H-4),1.67(1H,m,H-6),1.44(1H,m,H-6),2.32(1H,m,H-7),1.88(1H,m,H-7),2.34(1H,m,H-9),1.64(1H,m,H-11),1.57(1H,m,H-11),1.77(1H,m,H-12),1.28(1H,m,H-12),1.95(1H,m,H-15),1.72(1H,m,H-15),2.50(1H,m,H-16),2.38(1H,m,H-16),2.35(1H,H-17),0.88(3H,s,H-18),0.95(3H,s,H-19),5.00-4.80(2H,br.d；J＝18,H-21),5.88(1H,s,H-22),2.79(1H,s,3-OH),3.46(1H,s,5-OH),3.15(1H,s,14-OH)；13C-NMR(CDCl3,150MHz)δ24.84(C-1),27.93(C-2),68.02(C-3),36.88(C-4),74.67(C-5),35.21(C-6),23.75(C-7),40.70(C-8),39.02(C-9),40.82(C-10),21.53(C-11),40.03(C-12),49.51(C-13),85.46(C-14),33.03(C-15),26.84(C-16),50.69(C-17),15.74(C-18),16.74(C-19),174.62(C-20),73.54(C-21),117.72(C-22),174.59(C-23)。
化合物8白色粉末，(+)ESI-MS m/z 395.2[M+Na]+；1H-NMR(600MHz,CDCl3)δH 5.89(1H,m,H-22)；4.82-4.70(2H,br.d,J＝18,H-21)；0.97(3H,s,H-19),0.81(3H,s,H-18)；13C-NMR(150MHz,CDCl3)δC 36.84(C-1),27.96(C-2),68.11(C-3),33.58(C-4),74.83(C-5),26.27(C-6),22.24(C-7),40.69(C-8),34.35(C-9),35.00(C-10),24.88(C-11),42.99(C-12),48.58(C-13),153.72(C-14),117.13(C-15),41.24(C-16),52.58(C-17),16.55(C-18),18.28(C-19),170.56(C-20),73.51(C-21),116.37(C-22),174.06(C-23)。
人成骨肉瘤细胞株MG-63
筛选方法：四氮唑盐还原法(MTT法)。模型原理：活细胞的线粒体中存在与NADP相关的脱氢酶，可将黄色的MTT还原为不溶性的蓝紫色Formanzan，死细胞此酶消失，MTT不被还原。本模型根据MTT的还原程度，来检测样品对肿瘤细胞的作用情况。
计算公式：抑制率(％)＝[(对照组OD值-样品组OD值)/对照组OD值]×100
表1化合物对四种肿瘤细胞初步筛选结果
Figure BDA0003484973990000121
Figure BDA0003484973990000131
人白血病细胞株K562评价：化合物7对K562细胞有一定的抑制作用，化合物1、2、3、4、8对K562细胞有弱或较弱的抑制作用，化合物5、6号对K562细胞无抑制或无明确的抑制作用。
人白血病细胞HL-60评价：化合物3、8对HL-60细胞有弱或微弱的抑制作用，化合物7对HL-60细胞有较好的抑制作用，其余化合物对HL-60细胞无抑制或无明确的抑制作用。
人肺癌细胞A549评价：化合物2、8对A549细胞无抑制或无明确的抑制作用，化合物1、3、4、5、6对A549细胞有弱或微弱的抑制作用，样品7对A549细胞有一定的抑制作用。
人成骨肉瘤细胞株MG-63评价：化合物1、2、3、6、8对MG-63细胞有弱或微弱的抑制作用，化合物4、5对MG-63细胞有一定的抑制作用，化合物7对MG-63细胞有较好的抑制作用。
表2为化合物5和7对人成骨肉瘤细胞株MG-63的IC50测试结果，可知，化合物7的对所测4个肿瘤细胞具有一定抑制作用，其中对人成骨肉瘤细胞株MG-63的抑制作用比阿霉素高出一个数量级，是阿霉素的10倍多，因此具有作为抗人成骨肉瘤候选药物前景。
表2化合物5和7对人成骨肉瘤细胞株MG-63的IC50测试结果
Figure BDA0003484973990000132
Figure BDA0003484973990000141
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种强心苷化合物，具有式I～V所示的结构：
Figure FDA0003484973980000011
2.权利要求1所述的强心苷化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将黑骨藤与乙醇溶液混合进行提取，得到浸膏固体；
将所述浸膏固体与甲醇-水混合液混合后滴加硫酸溶液，回流后依次进行冷却、调节pH值为7和减压，然后用乙酸乙酯进行萃取，得到乙酸乙酯萃取部分浸膏；
将所述乙酸乙酯萃取部分浸膏与二氯甲烷-甲醇混合液溶解后，得到溶解液；
将所述溶解液通过梯度洗脱进行硅胶柱色谱分离，所述梯度洗脱的程序为：依次使用石油醚、第一石油醚-丙酮混合液、第二石油醚-丙酮混合液、第三石油醚-丙酮混合液、第四石油醚-丙酮混合液和丙酮进行洗脱，获得5个部分的洗脱液，依次命名为Fr1、Fr2、Fr3、Fr4和Fr5；所述第一石油醚-丙酮混合液中石油醚与丙酮的体积比为20:1，所述第二石油醚-丙酮混合液中石油醚与丙酮的体积比为10:1，所述第三石油醚-丙酮混合液中石油醚与丙酮的体积比为5:1，所述第四石油醚-丙酮混合液中石油醚与丙酮的体积比为1:1；
将所述Fr2通过丙酮重结晶，得到具有式V所示结构的化合物，所得滤液依次用甲醇进行凝胶柱色谱Sephadex LH-20洗脱和丙酮重结晶，得到具有式II所示结构的化合物；
将所述Fr.3依次用不同浓度的甲醇/H2O进行MCI洗脱，所述甲醇/H2O中甲醇的体积分数分别为30％、60％和90％，分别得到组分Fr3-1、和Fr3-2Fr3-3，将所述Fr3-3采用石油醚-乙酸乙酯进行硅胶柱色谱分离，得到具有式I和式IV所示结构的化合物，所述石油醚-乙酸乙酯中石油醚与乙酸乙酯的体积比为15:1、10:1、5:1、2:1和1:1；将所述Fr3-2依次用CHCl3/甲醇进行凝胶柱色谱Sephadex LH-20分离，得到具有式III所示结构的化合物，所述CHCl3/甲醇中CHCl3与甲醇的体积比为1:1。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述乙醇溶液中乙醇的体积分数为70％。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述提取在回流的条件下进行，所述提取的次数为3次，每次提取的时间依次分别为5h、3h和2h。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述甲醇-水混合液中甲醇与水的体积比为2:1。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述二氯甲烷-甲醇混合液中二氯甲烷与甲醇的体积比为1:1。
7.权利要求1所述的强心苷化合物或权利要求2～6任一项所述制备方法制得的强心苷化合物、或式VI、VII、VIII所示结构的化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，
Figure FDA0003484973980000021
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物包含抗人骨肉瘤药物。
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物包含有效剂量的所述强心苷化合物、其立体异构体、可药用盐和药学上可接受的载体、辅料、赋形剂和稀释剂。
10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物的剂型包括片剂、注射剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂、口服液、缓释制剂、控释制剂或纳米制剂药学上可接受的剂型。
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Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007016656A2 (en) * 2005-08-02 2007-02-08 Btg International Limited Modulators of hypoxia inducible factor-1 and related uses for the treatment of ocular disorders
CN101537027A (zh) * 2008-03-18 2009-09-23 沈阳药科大学 暗消藤抗肺癌活性提取物及其化合物的制备工艺
CN102030796A (zh) * 2010-10-22 2011-04-27 贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室 从夹竹桃中分离出的几种强心苷化合物及其应用
CN102631390A (zh) * 2012-04-12 2012-08-15 贵州师范大学 黑骨藤提取物的制备方法及其产品和用途
CN103191143A (zh) * 2013-04-11 2013-07-10 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所 一种强心苷化合物的新用途
CN103254263A (zh) * 2013-05-31 2013-08-21 贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室 一种强心苷类化合物及其制备方法和应用
CN104324043A (zh) * 2013-04-11 2015-02-04 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所 一种强心苷化合物的用途
CN104398532A (zh) * 2013-04-11 2015-03-11 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所 一种强心苷化合物的用途

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007016656A2 (en) * 2005-08-02 2007-02-08 Btg International Limited Modulators of hypoxia inducible factor-1 and related uses for the treatment of ocular disorders
CN101537027A (zh) * 2008-03-18 2009-09-23 沈阳药科大学 暗消藤抗肺癌活性提取物及其化合物的制备工艺
CN102030796A (zh) * 2010-10-22 2011-04-27 贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室 从夹竹桃中分离出的几种强心苷化合物及其应用
CN102631390A (zh) * 2012-04-12 2012-08-15 贵州师范大学 黑骨藤提取物的制备方法及其产品和用途
CN103191143A (zh) * 2013-04-11 2013-07-10 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所 一种强心苷化合物的新用途
CN104324043A (zh) * 2013-04-11 2015-02-04 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所 一种强心苷化合物的用途
CN104398532A (zh) * 2013-04-11 2015-03-11 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所 一种强心苷化合物的用途
CN103254263A (zh) * 2013-05-31 2013-08-21 贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室 一种强心苷类化合物及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PAVEL KOCOVSKY ET AL.: "A Modified Route to Intermediates in Partial Syntheses of Digitoxigenin and Xysmalogenin" *
YONG LI ET AL.: "Cytotoxic cardenolides from the stems of Periploca forrestii" *
梅文莉 等: "见血封喉乳汁中的化学成分" *
梅文莉 等: "见血封喉乳汁中的化学成分研究" *

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