CN114342734A - 大球盖菇液体还原菌种制备及子实体栽培方法 - Google Patents
大球盖菇液体还原菌种制备及子实体栽培方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114342734A CN114342734A CN202111329002.1A CN202111329002A CN114342734A CN 114342734 A CN114342734 A CN 114342734A CN 202111329002 A CN202111329002 A CN 202111329002A CN 114342734 A CN114342734 A CN 114342734A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- strain
- liquid
- annulata
- stropharia rugoso
- culture
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims abstract description 117
- 241000958510 Stropharia rugosoannulata Species 0.000 title claims abstract description 78
- 230000009467 reduction Effects 0.000 title claims abstract description 29
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 title claims description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 45
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 30
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 25
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 17
- 239000008188 pellet Substances 0.000 claims abstract description 17
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 40
- 241000209094 Oryza Species 0.000 claims description 30
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 claims description 30
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 claims description 30
- 239000010902 straw Substances 0.000 claims description 30
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 25
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 235000008733 Citrus aurantifolia Nutrition 0.000 claims description 22
- 235000011941 Tilia x europaea Nutrition 0.000 claims description 22
- 239000010440 gypsum Substances 0.000 claims description 22
- 229910052602 gypsum Inorganic materials 0.000 claims description 22
- 239000004571 lime Substances 0.000 claims description 22
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 claims description 18
- 238000009331 sowing Methods 0.000 claims description 16
- 238000009736 wetting Methods 0.000 claims description 16
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims description 15
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 15
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 15
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 15
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 15
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 15
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 13
- 239000002023 wood Substances 0.000 claims description 13
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 11
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 11
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 11
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 11
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 11
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 11
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 10
- 241000609240 Ambelania acida Species 0.000 claims description 7
- 238000001994 activation Methods 0.000 claims description 7
- 239000010905 bagasse Substances 0.000 claims description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 7
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 claims description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 claims description 4
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 claims description 4
- 239000010828 animal waste Substances 0.000 claims description 3
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 claims description 3
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 abstract description 9
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 10
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 9
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 9
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 8
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 6
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 5
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 5
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 5
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 5
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 5
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 5
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 5
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 4
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 241000958507 Stropharia Species 0.000 description 3
- 241000123672 Strophariaceae Species 0.000 description 3
- 239000010871 livestock manure Substances 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 2
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 2
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002361 compost Substances 0.000 description 2
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 239000010903 husk Substances 0.000 description 2
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 2
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 2
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 241000222485 Agaricales Species 0.000 description 1
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 1
- 240000007263 Pinus koraiensis Species 0.000 description 1
- 235000011615 Pinus koraiensis Nutrition 0.000 description 1
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 description 1
- 241000121219 Tricholoma Species 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N ciprofloxacin Chemical compound C12=CC(N3CCNCC3)=C(F)C=C2C(=O)C(C(=O)O)=CN1C1CC1 MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000009264 composting Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000003967 crop rotation Methods 0.000 description 1
- 239000013530 defoamer Substances 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000009342 intercropping Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 235000019713 millet Nutrition 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000009965 odorless effect Effects 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 1
- 238000004382 potting Methods 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 1
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 238000003828 vacuum filtration Methods 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Mushroom Cultivation (AREA)
Abstract
本发明属于食用菌栽培技术领域，涉及一种大球盖菇(S.rugosoannulata)液体还原菌种的制备方法，包括如下步骤：(1)大球盖菇菌种活化：将大球盖菇菌丝体接种至PDA培养基，20‑28℃培养10‑15d，得到母种；(2)一级液体菌种制备：将所述母种转接到一级液体菌种培养基中，150‑180rpm、20‑28℃避光摇床培养7‑10d，得到一级液体菌种；(3)二级液体菌种制备：将所述一级液体菌种接种到二级液体菌种培养基，20‑28℃发酵3‑5d，得到二级液体菌种；(4)液体还原菌种制备：将所述二级液体菌种的菌丝球与还原菌种培养液混合，得到液体还原菌种。本发明还涉及利用该液体还原菌种栽培大球盖菇子实体的方法。本发明的方法可以大幅缩短大球盖菇菌种的培养周期。
Description
技术领域
本发明属于食用菌栽培技术领域，涉及一种大球盖菇液体还原菌种制备及其子实体栽培方法。
背景技术
大球盖菇(stropharia rugosoannulata Farl.ex Murrill)又名皱环球盖菇、酒红色球盖菇，俗称赤松茸、红松茸，生物分类上隶属于伞菌目(Agaricales)，球盖菇科(Strophariaceae)，球盖菇属(Stropharia)，其口感脆嫩、味道鲜美，富含多种营养成分如蛋白质、牛磺酸和黄酮类等。作为***粮农组织(FAO)向发展中国家推荐栽培的特色食用菌，在国际食用菌市场广泛交易。大球盖菇栽培基质广泛，如各种农林废弃物、秸秆、其他食用菌菌渣等，均可作为栽培基质，室内、露天或林地均可作为栽培场所，亦可与农作物轮作或间作种植。近年来，国内大球盖菇栽培发展迅速，据不完全统计，2019年全国种植面积已超过2万亩，相比2017年近1万亩增加了1倍。
随着种植面积的增加，菌种供应需求不断增加。大球盖菇的菌种从母种培养直至播种需要培养3个月甚至更长时间，为了节省时间、原料成本和方便运输，液体还原菌种的制备引起关注。
现有技术需要明显缩短菌种培养周期且方便运输的大球盖菇液体还原菌种制备及子实体栽培方法。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供大球盖菇液体还原菌种的制备方法以及利用该还原菌种栽培子实体的方法，以解决现有大球盖菇菌种制备周期长，生产效益低下的技术问题。
因此，一方面，本发明提供了大球盖菇液体还原菌种的制备方法，该方法包括以下步骤：
(1)大球盖菇菌种活化：将大球盖菇菌丝体接种至PDA培养基，20-28℃培养10-15d，得到母种；
(2)一级液体菌种制备：将所述母种转接到一级液体菌种培养基中，150-180rpm、20-28℃避光摇床培养7-10d，得到一级液体菌种；
(3)二级液体菌种制备：将所述一级液体菌种接种到二级液体菌种培养基，20-28℃发酵3-5d，得到二级液体菌种；
(4)液体还原菌种制备：将所述二级液体菌种的菌丝球与还原菌种培养液混合，得到液体还原菌种。
在第二方面，本发明提供了利用第一方面的大球盖菇液体还原菌种栽培大球盖菇子实体的方法，包括以下步骤：
(1)栽培种的制备：将第一方面的液体还原菌种接种于栽培种培养基，培养栽培种；和
(2)大田播种及覆土：将培养好的栽培种播种在栽培料中，20-28℃避光培养30-40d，得到大球盖菇子实体。
与现有技术相比，本发明具有有益的技术效果。具体而言，在本发明在第一方面的方法中，通过改进一级液体菌种培养基的成分和培养参数，获得均匀细小的菌丝球，增加一级液体菌种生物量，利于二级液体菌种的扩大培养；通过一级液体菌种、二级液体菌种的培养相比传统制备原种及栽培种的方法，显著缩短菌种培养周期；以及通过制备液体还原菌种相比于运输栽培种栽培大球盖菇，既方便运输，又避免在运输过程中对菌种造成损伤，同时降低生产和运输成本。
附图说明
图1为大球盖菇(CGMCC No.52220)在PDA平板培养的菌丝生长状况。
图2为大球盖菇(CGMCC No.52220)菌株接种在3种不同配方的一级液体菌种培养基中的生长状况，A：本发明的复合培养基，B：PDB培养基，C：玉米粉培养基。
图3为大球盖菇(CGMCC No.52220)菌株接种复合料培养基的二级液体菌种生状况。
图4为大球盖菇(CGMCC No.52220)二级液体菌种接种后的发菌状况。
图5为大球盖菇(CGMCC No.52220)菌株实验室出菇情况。
图6为大球盖菇(CGMCC No.52220)菌株在栽培料A中出菇表现。
图7为大球盖菇(CGMCC No.52220)菌株在栽培料B中出菇表现。
图8为大球盖菇(CGMCC No.52220)菌株在栽培料C中出菇表现。
具体实施方式
本发明人惊讶地发现，通过改进大球盖菇一级液体菌种的成分及其比例，优化培养配方，获得均匀细小的大球盖菇菌丝球，增加一级液体菌种生物量，利于二级液体菌种的扩大培养；通过一级液体菌种、二级液体菌种的培养相比传统制备制种方法，明显缩短菌种培养时间，显著减低生产成本。
因此，在本发明的第一方面，提供了一种大球盖菇液体还原菌种的制备方法，该方法包括以下步骤：
(1)大球盖菇菌种活化：将大球盖菇菌丝体接种至PDA培养基，20-28℃培养10-15d，得到母种；
(2)一级液体菌种制备：将所述母种转接到一级液体菌种培养基中，150-180rpm、20-28℃避光摇床培养7-10d，得到一级液体菌种；
(3)二级液体菌种制备：将所述一级液体菌种接种到二级液体菌种培养基，20-28℃发酵3-5d，得到二级液体菌种；
(4)液体还原菌种制备：将所述二级液体菌种的菌丝球与还原菌种培养液混合，得到液体还原菌种。
大球盖菇菌种活化
大球盖菇菌丝体可以为例如野外采集、分离、培养获得，或者可以通过商业渠道购买获得。
在大球盖菇菌种活化过程中，培养时间可以为10-15d，例如10d、13d、15d。培养温度可以为20℃至28℃，例如20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25、26℃、27℃、28℃，优选25℃。
大球盖菇一级液体菌种制备
在本发明第一方面的实施方案中，通过将活化的大球盖菇母种接种到一级液体菌种培养基中，并20-28℃、150-180rpm下避光培养7-10d，来制备大球盖菇一级液体菌种。
在本发明第一方面的实施方案中，一级液体菌种培养基以1000mL计包含：葡萄糖15-30g、麸皮2.0-5.0g、磷酸二氢钾1.0-1.5g、玉米粉2.0-5.0g、黄豆粉5.0-8.0g，加水定容至1000mL。在本发明的具体实施方案中，葡萄糖可以为15g、16g、17g、18g、19g、20g、21g、22g、23g、24g、25g、26g、27g、28g、29g、30g。在本发明的具体实施方案中，麸皮可以为2.0g、2.5g、3.0g、3.5g、4.0g、4.5g、5.0g。在本发明的具体实施方案中，磷酸二氢钾可以为1.0g、1.1g、1.2g、1.3g、1.4g、1.5g。在本发明的具体实施方案中，玉米粉可以为2.0g、2.5g、3.0g、3.5g、4.0g、4.5g、5.0g。在本发明的具体实施方案中，黄豆粉可以为5.0g、5.5g、6.0g、6.5g、7.0g、7.5g、8.0g。
在一级液体菌种制备步骤中，培养温度可以为20℃至28℃，例如20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃，优选25℃，培养时间可以为7-10d，例如7d、7.5d、8d、8.5d、9d、9.5d、10d。
在一级液体菌种制备步骤中，培养可以在150-180rpm下，例如160rpm、170rpm、180rpm。
大球盖菇二级液体菌种制备
在本发明第一方面的实施方案中，通过将大球盖菇一级液体菌种接种到二级液体菌种培养基，并在20℃至28℃下发酵3-5d，来制备二级液体菌种。
在本发明第一方面的实施方案中，二级液体菌种培养基以1000mL计包含：葡萄糖15.0-20.0g、玉米粉2.0-5.0g、黄豆粉5.0-8.0g、麸皮2.0-5.0g、磷酸二氢钾1.0-1.5g、消泡剂0.1-0.3g，加水定容至1000mL。在本发明的具体实施方案中，葡萄糖可以为15.0g、15.5g、16.0g、16.5g、17.0g、17.5g、18.0g、18.5g、19.0g、19.5g、20.0g。在本发明的具体实施方案中，玉米粉可以为2.0g、2.5g、3.0g、3.5g、4.0g、4.5g、5.0g。在本发明的具体实施方案中，黄豆粉可以为5.0g、5.5g、6.0g、6.5g、7.0g、7.5g、8.0g。在本发明的具体实施方案中，麸皮可以为2.0g、2.5g、3.0g、3.5g、4.0g、4.5g、5g。在本发明的具体实施方案中，磷酸二氢钾可以为1.0g、1.1g、1.2g、1.3g、1.4g、1.5g。在本发明的具体实施方案中，消泡剂可以为0.1g、0.15g、0.2g、0.25g、0.3g。
在二级液体菌种制备过程中，发酵温度可以为20℃至28℃，例如20℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃，优选25℃，发酵时间可以为3-5d，例如3d、3.5d、4d、4.5d、5d。
大球盖菇液体还原菌种制备
在本发明第一方面的实施方案中，通过将大球盖菇二级液体菌种制备过程中产生的大球盖菇菌丝球与还原菌种培养液均匀混合，来制备大球盖菇液体还原菌种。
在本发明第一方面的实施方案中，还原菌种培养液以1000mL计包含：蔗糖10.0-15.0g、黄豆粉5.0-8.0g、磷酸二氢钾1.0-1.5g、硫酸镁0.5-1.0g，加水定容至1000mL。在本发明的具体实施方案中，蔗糖可以为10.0g、10.5g、11.0g、11.5g、12.0g、12.5g、13.0g、13.5g、14.0g、14.5g、15.0g。在本发明的具体实施方案中，黄豆粉可以为5.0g、5.5g、6.0g、6.5g、7.0g、7.5g、8.0g。在本发明的具体实施方案中，磷酸二氢钾可以为1.0g、1.1g、1.2g、1.3g、1.4g、1.5g。在本发明的具体实施方案中，硫酸镁可以为0.5g、0.6g、0.7g、0.8g、0.9g、1.0g。
在本发明的第一方面的实施方案中，可以通过对大球盖菇二级液体菌种进行抽真空来获得大球盖菇二级液体菌种的菌丝球。与常规方法相比，由本发明第一方面的方法产生的菌丝球更均匀、细小，其直径通常小于或等于3.0mm，例如直径为1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9mm。
在本发明第一方面的实施方案中，大球盖菇二级液体菌种的菌丝球与还原菌种培养液的混合比例可以为1:1～1:2，例如1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9、1:2。
根据常规育种技术，大球盖菇的菌种包括母种、原种、栽培种，培养周期约4个月甚至更长时间，但是采用本发明第一方面的方法可以将此时间大幅缩短至20-30d。
在本发明的第二方面，本发明提供了利用第一方面的大球盖菇液体还原菌种栽培大球盖菇子实体的方法，包括以下步骤：
(1)栽培种的制备：将本发明第一方面制备的大球盖菇液体还原菌种接种于栽培种培养基，培养栽培种；和
(2)大田播种：将培养好的栽培种播种在栽培料中，20-28℃避光培养30-40d，得到球盖菇子实体。
在本发明的第二方面的实施方案中，栽培种培养基通过以下方式制备：木屑40％、玉米芯25％、麸皮13％、稻壳20％、石灰1％、石膏1％，混合前将木屑、玉米芯、稻壳预湿，使其含水量达60-65％，随后加入麸皮、石灰和石膏搅拌均匀，按照500g/袋的规格装袋，高压灭菌1.5-2h，即得到栽培种培养基。在本发明的具体实施方案中，充分预湿后木屑、玉米芯、稻壳的含水量可以为60％、60.5％、61％、61.5％、62％、62.5％、63％、63.5％、64％、64.5％、65％。
在栽培种的制备的过程中，可以将本发明第一方面制备的大球盖菇液体还原菌种稀释5-10倍，然后通过液体接种器接种到栽培种培养基中，接种量为15-30ml/500g，在20-28℃避光培养，空气相对湿度为60-65％左右。
在大田播种阶段，所用的栽培料可以为以下之一：
栽培料A：栽培料：将农作物秸秆60％、稻壳20％预湿至含水量达60-65％后与麸皮18％、石灰1％和石膏1％混合均匀即得；
栽培料B：将甘蔗渣60％、农作物秸秆28％、稻壳10％预湿至含水量达60-65％后与石灰1％和石膏1％混合均匀；或
栽培料C：将木屑40％、农作物秸秆20％、玉米芯20％、稻壳15％、动物粪便3％预湿至含水量达60-65％后与石灰1％、石膏1％混合均匀发酵10-15d即得。
在本发明的具体实施方案中，上述农作物秸秆可以为小米秸秆、玉米秸秆、水稻秸秆等农作物秸秆或其混合物。
在本发明的具体实施方案中，对于栽培料A而言，充分预湿后农作物秸秆稻壳的含水量可以为60％、60.5％、61％、61.5％、62％、62.5％、63％、63.5％、64％、64.5％、65％。
在本发明的具体实施方案中，对于栽培料B而言，充分预湿后甘蔗渣、农作物秸秆、稻壳的含水量可以为60％、60.5％、61％、61.5％、62％、62.5％、63％、63.5％、64％、64.5％、65％。
在本发明的具体实施方案中，对于栽培料C而言，充分预湿后木屑、农作物秸秆、玉米芯、稻壳的含水量可以为60％、60.5％、61％、61.5％、62％、62.5％、63％、63.5％、64％、64.5％、65％。
下面将结合实施例对本发明的优选实施方式进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用来限制本发明的保护范围。本领域的技术人员在不背离本发明的宗旨和精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换，所有这些修改和替换都落入了本发明权利要求书请求保护的范围内。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、大球盖菇(CGMCC No.52220)子实体栽培的方法
一、栽培流程
大球盖菇(CGMCC No.52220)子实体的栽培流程具体如下：母种活化→一级液体菌种制备→二级液体菌种制备→接种→栽培种发菌管理→播种及覆土→出菇管理→子实体采收。
(1)母种的活化：将-80℃或者4℃保藏的大球盖菇(CGMCC No.52220)原始菌种，接种到母种培养基(PDA试管斜面/平板)上，25℃避光培养，培养至菌丝长满培养基，得到的菌丝体作为母种(图1)。
母种PDA培养基：取去皮马铃薯200g切片，放入900mL水中煮沸20-30min，取滤液加入琼脂20g加热使之完全溶化，再加水定容至1000mL，121℃灭菌30min，获得1000mLPDA培养基。
(2)一级液体菌种的制备：将步骤(1)所得的母种转接到一级液体菌种培养基中，其接种量为每200mL体积的液体培养基中均匀接入8-10个直径为1.0cm大小的母种菌丝块，150rpm，25℃避光摇7-10d，得到一级液体菌种。
一级液体菌种培养基为复合培养基：将麸皮2g放入900mL水中煮沸20min，取滤液加入葡萄糖15g、磷酸二氢钾1g、玉米粉2g、黄豆粉5g，加热搅拌均匀，再加水定容至1000mL，获得1000mL所述复合培养基；
(3)二级液体菌种的制备：将步骤(2)所得的液体菌种转接到5000mL的发酵罐中(装液3000mL)，接种200mL的一级液体菌种，25℃发酵3d，得到二级液体菌种。液体培养过程中通过不断震荡，致使菌丝在萌发生长的过程中缠绕成球状，形成均匀、细小的菌丝球(直径为约2-3mm)。
所述二级液体菌种培养基：葡萄糖45g，玉米粉6g，黄豆粉15g，麸皮6g，磷酸二氢钾3g，消泡剂0.3g，自来水3000mL。
(4)纯菌种制备及运输：将步骤(3)所得的二级液体菌种通过真空抽滤的方法分离菌丝球，收集在无菌自封袋内，4-10℃保存运输。
(5)还原菌种的制备：将还原菌种培养液与纯菌种按照1:1体积比混合均匀，稀释5倍后备用。
所述还原菌种培养液：蔗糖10g，黄豆粉5g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，自来水1000mL。
(6)液体还原菌种接种及发菌管理：将步骤(5)所得的液体还原菌种接入栽培种培养基，其接入比例为15mL/袋，接种方法为液体接种器***栽培料，定量注射液体菌种，20-28℃避光培养，空气相对湿度为60％(图4)。
上述栽培种培养料由木屑40％、玉米芯25％、麸皮20％、稻壳13％、石灰1％、石膏1％组成，其制备方法如下：将木屑、玉米芯、稻壳预湿，使其含水量达60-65％，随后加入麸皮、石灰和石膏搅拌均匀，按照500g/袋的规格装袋，121℃灭菌1.5-2h。
(7)大田播种及覆土：步骤(6)菌丝长满袋料后，将栽培种掰成鸡蛋大小的块状，均匀播种在栽培料表面，料面覆盖一层土壤，最后覆盖一层稻草，25-28℃避光培养5-7d，稻草表面喷水，空气相对湿度为70％-75％，每天通风1次维持空气中二氧化碳相对浓度0.1％-0.5％(体积分数)。
栽培料可以为生料或熟料栽培，其中生料的配方一为：由农作物秸秆45％、稻壳40％、麸皮13％、石灰1％和石膏1％混合而成，混合前将农作物秸秆、稻壳预湿，使其含水量达60-65％，随后加入麸皮、石灰和石膏搅拌均匀，铺料播种；生料的配方二为：由甘蔗渣60％、农作物秸秆25％、稻壳13％、石灰1％和石膏1％混合而成，混合前将甘蔗渣、农作物秸秆、稻壳预湿，使其含水量达60-65％，加入石灰、石膏等辅料搅拌均匀，铺料播种。
熟料可由如下栽培原料混合后经二次发酵即前发酵和后发酵制得：木屑40％、农作物秸秆20％、玉米芯20％、稻壳15％、动物粪便(如干牛粪)3％、石灰1％和石膏1％。前发酵按以下操作：堆制前3-4d将木屑、农作物秸秆、玉米芯、稻壳和牛粪预湿，水分含量为65％左右，料堆宜南北走向，料堆一般宽2m，高1.5～2m，监测堆体温度，堆体内部温度达到60℃以上后开始下降时进行一次翻堆，经过3-4次翻堆后，完成所述前发酵；后发酵按以下操作：将经过前发酵的栽培料进行再次发酵，将堆体内部温度控制在60-62℃并保持12-24h，然后通风将堆体温度降至50℃左右保持5d左右，后发酵一般维持6-8d，再将堆体温度降至常温(25-28℃)。经过所述二次发酵的栽培原料颜色深咖啡色，无臭味，无酸味，草秆有弹性，粪草均匀，料疏松，含水量60％，pH7.5～8，即得到所述栽培料。
(8)出菇管理：步骤(7)培养的菌丝生长到土层表面时，空气温度降至20℃左右，以及光照强度为500-800Lux的弱光刺激，空气相对湿度为75％-85％，每天通风2-3次，使二氧化碳相对浓度下降至0.05％-0.15％(体积分数)，培养5-10d。
(9)采收：待子实体长至八成熟，菌盖尚未展开，即可采收第一潮菇。采摘后进行清理残留菇根、菇穴补土，待菌丝恢复后重新上述操作进行出菇，采收下一潮菇。
二、栽培方式
栽培方式具体可为实验室盆栽和大田畦床栽培。
实验室生料盆栽：盆长1m，宽45cm，按照所述播种方式栽培出菇。
畦床栽培为：畦床长7m，宽50-60cm，畦床间距25-30cm，按照畦床规格将所述栽培料平铺于地表进行栽培出菇。
比较例1、一级液体菌种培养基的比较
本比较例的目的在于，通过对一级液体菌种培养基不同成分的配比，筛选适应大球盖菇生长且明显提高菌丝生物量的培养基，具体试验方案如下：
将相同条件下培养的同一批次的大球盖菇(CGMCC No.52220)的母种，接种于不同液体培养基(配方见下文)500mL锥形瓶中，其接种量为每200mL体积的液体培养基中均匀接入8-10个直径为1.0cm大小的母种菌种块，150rpm，25℃避光摇瓶培养，观察统计菌丝球生长情况。
供试的原种培养基为如下三种：
A.本发明的复合培养基(实施例1)
葡萄糖15g，磷酸二氢钾1g，玉米粉2g，黄豆粉5g，麸皮2-5g，自来水1000mL。
B.PDB培养基
去皮马铃薯200g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾0.5g，硫酸镁0.5g，自来水至1000mL。
C.玉米粉培养基
葡萄糖15g，磷酸二氢钾1.0g，玉米粉2.0g，自来水至1000mL。
结果如图2所示，大球盖菇(CGMCC No.52220)菌株在三种培养基中都可生长形成菌丝球，但在本发明的复合培养基(图2，A)中生物量较多，且菌丝球细小均匀、菌丝粗壮、生长状况较对比例1(图2，B)、2(图2，C)好。
三、还原菌种出菇表现
本发明实施例1所述培养大球盖菇栽培料的区别在于，通过对比例1-3的不同制备方式，比较大球盖菇液体还原菌种的出菇产量，具体实施方案如下：
将液体还原菌种接入栽培种培养基，接种量15mL/袋，25℃避光培养，空气相对湿度为60％(图4)。待菌丝长满菌袋，准备播种。
供试大田栽培的栽培料为如下三种：
栽培料1：农作物秸秆45％、稻壳40％、麸皮13％、石灰1％和石膏1％混合，混合前将农作物秸秆、稻壳预湿至含水量60％，加入石灰和石膏搅拌均匀，铺料播种(图6)。
栽培料2：由甘蔗渣60％、农作物秸秆25％、稻壳13％、石灰1％和石膏1％混合而成，混合前将甘蔗渣、农作物秸秆、稻壳预湿至含水量60％，加入石灰、石膏等辅料搅拌均匀，铺料播种(图7)。
栽培料3：如下栽培原料经二次发酵后得到大田栽培的熟料：由木屑40％、农作物秸秆20％、玉米芯20％、稻壳15％、动物粪便(如干牛粪)3％、石灰1％和石膏1％混合而成(图8)。
结果显示三种不同处理的栽培料均可使用本发明制备的菌种进行大球盖菇栽培，且形成的子实体菌柄粗壮，肉质结实，如图6、7、8所示。
最后应说明的是，以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其进行限制。尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，但本领域的普通技术人员应当理解：在不脱离本发明的概念、精神和范围的情况下，可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换均落入本发明权利要求书请求保护的范围内。
Claims (8)
1.大球盖菇(S.rugosoannulata)液体还原菌种的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)大球盖菇菌种活化：将大球盖菇菌丝体接种至PDA培养基，20-28℃培养10-15d，得到母种；
(2)一级液体菌种制备：将所述母种转接到一级液体菌种培养基中，150-180rpm、20-28℃避光摇床培养7-10d，得到一级液体菌种；
(3)二级液体菌种制备：将所述一级液体菌种接种到二级液体菌种培养基，20-28℃发酵3-5d，得到二级液体菌种；
(4)液体还原菌种制备：将所述二级液体菌种的菌丝球与还原菌种培养液混合，得到液体还原菌种。
2.如权利要求1所述的大球盖菇液体还原菌种的制备方法，其特征在于，所述一级液体菌种培养基以1000mL计包含：葡萄糖15-30g、麸皮2.0-5.0g、玉米粉2.0-5.0g、黄豆粉5.0-8.0g、磷酸二氢钾1.0-1.5g，加水定容至1000mL。
3.如权利要求1所述的大球盖菇液体还原菌种的制备方法，其特征在于，所述二级液体菌种培养基以1000mL计包含：葡萄糖15-20g、麸皮2.0-5.0g、玉米粉2.0-5.0g、黄豆粉5.0-8.0g、磷酸二氢钾1.0-1.5g、消泡剂0.1-0.3g，加水定容至1000mL。
4.如权利要求1所述的大球盖菇液体还原菌种的制备方法，其特征在于，所述还原菌种培养液以1000mL计包含：蔗糖10-15g、黄豆粉5.0-8.0g、磷酸二氢钾1.0-1.5g、硫酸镁0.5-1.0g，加水定容至1000mL。
5.如权利要求1所述的大球盖菇液体还原菌种的制备方法，其特征在于，所述二级液体菌种的菌丝球与所述还原菌种培养液的混合比例为1:1～1:2。
6.大球盖菇子实体栽培方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)栽培种的制备：将权利要求1-5所述液体还原菌种接种于栽培种培养基，培养栽培种；和
(2)大田播种：将培养好的栽培种播种在栽培料中，20-28℃避光培养30-40d，得到大球盖菇子实体。
7.如权利要求6所述的大球盖菇子实体栽培方法，其特征在于，所述栽培种培养基通过以下方式制备：木屑40％、玉米芯25％、麸皮13％、稻壳20％、石灰1％、石膏1％混合，混合前将木屑、玉米芯、稻壳预湿至含水量达60-65％，随后加入麸皮、石灰和石膏搅拌均匀装袋，高压灭菌1.5-2.0h，即得到栽培种培养基。
8.如权利要求6所述的大球盖菇子实体栽培方法，其特征在于，所述栽培料选自：
A.栽培料：将农作物秸秆60％、稻壳20％预湿至含水量达60-65％后与麸皮18％、石灰1％和石膏1％混合均匀即得；
B.栽培料：将甘蔗渣60％、农作物秸秆28％、稻壳10％预湿至含水量达60％后与石灰1％和石膏1％混合均匀；或
C.栽培料：将木屑40％、农作物秸秆20％、玉米芯20％、稻壳15％、动物粪便3％预湿至含水量达60％后与石灰1％、石膏1％混合均匀发酵10-15d即得。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111329002.1A CN114342734A (zh) | 2021-11-10 | 2021-11-10 | 大球盖菇液体还原菌种制备及子实体栽培方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111329002.1A CN114342734A (zh) | 2021-11-10 | 2021-11-10 | 大球盖菇液体还原菌种制备及子实体栽培方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114342734A true CN114342734A (zh) | 2022-04-15 |
Family
ID=81095968
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111329002.1A Pending CN114342734A (zh) | 2021-11-10 | 2021-11-10 | 大球盖菇液体还原菌种制备及子实体栽培方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114342734A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114766284A (zh) * | 2022-04-27 | 2022-07-22 | 成都市农林科学院 | 一种大球盖菇高产栽培配方及其应用 |
| CN115316193A (zh) * | 2022-05-11 | 2022-11-11 | 山东昌龙农业科技有限公司 | 利用留兰香秸秆及构树茎叶制作大球盖菇栽培料的方法 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101228830A (zh) * | 2008-02-22 | 2008-07-30 | 江南大学 | 一种液体发酵培养富硒、锌元素的金针菇菌丝体的方法 |
| CN101699969A (zh) * | 2009-11-05 | 2010-05-05 | 张纪明 | 草菇液体菌种的深层发酵培养方法及其培养基 |
| CN107455141A (zh) * | 2017-07-20 | 2017-12-12 | 南阳市农业科学院 | 一种大球盖菇的栽培方法 |
| CN109234169A (zh) * | 2018-08-17 | 2019-01-18 | 蔡树威 | 一种牛肝菌液体菌种的制作方法 |
| CN109220559A (zh) * | 2018-09-30 | 2019-01-18 | 上海市农业科学院 | 一种大球盖菇还原菌种的制作方法及栽培应用 |
| CN111903432A (zh) * | 2020-08-06 | 2020-11-10 | 贵州珍稀食用菌科技有限公司 | 一种红托竹荪菌种快速繁殖方法及其应用 |
| CN113348968A (zh) * | 2021-07-13 | 2021-09-07 | 石忠斌 | 一种大球盖菇综合培养基配制及大球盖菇栽培方法 |
-
2021
- 2021-11-10 CN CN202111329002.1A patent/CN114342734A/zh active Pending
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101228830A (zh) * | 2008-02-22 | 2008-07-30 | 江南大学 | 一种液体发酵培养富硒、锌元素的金针菇菌丝体的方法 |
| CN101699969A (zh) * | 2009-11-05 | 2010-05-05 | 张纪明 | 草菇液体菌种的深层发酵培养方法及其培养基 |
| CN107455141A (zh) * | 2017-07-20 | 2017-12-12 | 南阳市农业科学院 | 一种大球盖菇的栽培方法 |
| CN109234169A (zh) * | 2018-08-17 | 2019-01-18 | 蔡树威 | 一种牛肝菌液体菌种的制作方法 |
| CN109220559A (zh) * | 2018-09-30 | 2019-01-18 | 上海市农业科学院 | 一种大球盖菇还原菌种的制作方法及栽培应用 |
| CN111903432A (zh) * | 2020-08-06 | 2020-11-10 | 贵州珍稀食用菌科技有限公司 | 一种红托竹荪菌种快速繁殖方法及其应用 |
| CN113348968A (zh) * | 2021-07-13 | 2021-09-07 | 石忠斌 | 一种大球盖菇综合培养基配制及大球盖菇栽培方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 丁亚通等: "我国中原地区大棚栽培大球盖菇技术", 《食药用菌》 * |
| 于延申等: "大球盖菇菌种生产技术", 《吉林蔬菜》 * |
| 刘金力等: "大球盖菇液体菌种培养基碳氮源及培养条件的优化", 《黑龙江农业科学》 * |
| 龚赛等: "不同栽培条件下大球盖菇的经济效益", 《中国食用菌》 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114766284A (zh) * | 2022-04-27 | 2022-07-22 | 成都市农林科学院 | 一种大球盖菇高产栽培配方及其应用 |
| CN115316193A (zh) * | 2022-05-11 | 2022-11-11 | 山东昌龙农业科技有限公司 | 利用留兰香秸秆及构树茎叶制作大球盖菇栽培料的方法 |
| CN115316193B (zh) * | 2022-05-11 | 2023-08-18 | 山东昌龙农业科技有限公司 | 利用留兰香秸秆及构树茎叶制作大球盖菇栽培料的方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101696390B (zh) | 连作黄瓜、西瓜枯萎病的生物防治菌株及其微生物有机肥料 | |
| CN105900692B (zh) | 一种利用玉米芯栽培猴头菇的方法 | |
| CN103396954B (zh) | 一种防控水稻纹枯病的生物防治菌株、生物有机肥及其制备方法 | |
| CN106187515B (zh) | 利用食用菌菌渣制作的羊肚菌营养袋及其制备方法 | |
| CN101696395B (zh) | 防除连作烟草黑胫病的拮抗菌及其微生物有机肥料 | |
| CN103382134A (zh) | 一种双孢菇培养基质的发酵方法 | |
| CN103382139A (zh) | 一种双孢菇培养基质 | |
| CN114342734A (zh) | 大球盖菇液体还原菌种制备及子实体栽培方法 | |
| CN104641942A (zh) | 一种桑枝栽培平菇的方法 | |
| CN1212292C (zh) | 一种微生物多抗菌肥及其制备方法和应用 | |
| CN108863550A (zh) | 一种茶树专用防病促生复合微生物菌肥及其制备方法 | |
| CN112021073A (zh) | 一种羊肚菌外援营养袋配料、营养袋及其制备方法 | |
| CN112369276A (zh) | 一种用杏鲍菇菌渣栽培大球盖菇的培养基及其制备方法和应用 | |
| CN106495808A (zh) | 土豆基肥及土豆基肥制作方法 | |
| CN108990702B (zh) | 一种大球盖菇与豇豆轮作的设施化栽培方法 | |
| CN104844285B (zh) | 一种提高樱桃番茄免疫力的生物有机肥的制备方法 | |
| CN106977245A (zh) | 一种富硒秀珍菇的培养料及富硒秀珍菇的培养方法 | |
| CN111357612B (zh) | 一种西瓜种植用复合微生物基质及其制备方法与应用 | |
| CN116439071A (zh) | 林下仿野生赤松茸种植技术 | |
| CN112243815A (zh) | 水稻的生态种植方法 | |
| CN110583367A (zh) | 一种食用菌生产工艺方法 | |
| CN110592052A (zh) | 蚓酶多肽抑菌营养液的生产方法及其应用 | |
| JPH11255572A (ja) | 微生物応用資材 | |
| JP6967315B1 (ja) | 土壌改良資材及び堆肥の製造方法並びに土壌改良資材及び堆肥 | |
| CN114946531A (zh) | 一种花脸香蘑栽培营养液及应用其的花脸香蘑栽培方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20220415 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |